CN109856403A - 一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒 - Google Patents
一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种S100‑β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域。本发明采用镧系元素螯合物标记荧光微球后，进而标记S100‑β单克隆抗体。因镧系元素螯合物stoke位移大，易区分激发光和发射光，可以排除激发光及待测样本中物质产生的荧光等的干扰；另外，镧系元素螯合物的激发光谱宽，而发射光谱窄，这更能进一步降低本地荧光，提高灵敏度；进一步地采用时间分辨荧光免疫层析技术，可有效得排除非特异性荧光的干扰，极大得提高了灵敏度；并且，本试剂盒具备操作简便快速、检测成本较低等优点，可弥补市场现有产品的不足。
Description
技术领域
本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，具体涉及一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒。
背景技术
S100-β蛋白又叫中枢神经特异蛋白，也有学者将S100-β蛋白描述为脑的“C反应蛋白”。S100蛋白是一种酸性钙结合蛋白，分子量10000-12000，主要存在于中枢神经系统各部的星状神经胶质细胞的胞液中，因其在饱和硫酸铵中能够100％溶解而得名。S100蛋白由α和β两种亚基组成三种不同的形式：S100β主要存在于神经胶质细胞和外周神经系统的Schwann细胞内，某些神经元细胞以及黑色素细胞、脂肪细胞中。中枢星型胶质细胞、少突胶质细胞，外周的Schwann及卫星细胞含有丰厚的S100β蛋白。其基因表达水平与细胞增殖和分化状态有关，S100β由脑内活化的胶质细胞分泌，是星型胶质细胞激活的标志之一，是S100β蛋白家族中最具活性的成分。S100β由胶质细胞产生，作用于神经元及其周围的环境，是神经胶质细胞和神经元相互联系的中介物质之一，在脑的发育过程中和脑损伤时，S100β是一种神经营养因子，适当表达对脑组织起到了营养保护作用。神经胶质细胞表达过量时，加速神经系统炎症的恶化，并导致神经系统功能紊乱。S100β的表达与脑损伤严重程度有密切关系，因此它具有多种生理功能：1)促进轴突向外生长；2) 增强ATP酶的活性，影响微管、微丝的解聚；3)作为细胞内的正常成分参与细胞内外钙离子水平的调节；4)在体外可诱导神经元和神经胶质细胞凋亡；5)具有神经营养作用，神经胶质细胞可以旁分泌和自分泌S100β蛋白，作用于神经元和神经胶质细胞，从而促进神经的生长和损伤的修复，但高水平的S100β蛋白却可以产生神经毒性。
测定S100-β可用于辅助判断与如下相关神经系统的疾病：
1)Alzheimer病；S100β蛋白在脑组织中的表达水平随着年龄增加而增加；S100β表达水平高低与患者脑损伤范围有密切的联系； Alzheimer患者在发生了脑萎缩后其脑脊液中S100β水平与脑萎缩程度成正相关；
2)脑血管疾病；大量研究证明，脑血管疾病可以导致血脑屏障通透性增加，使脑脊液和血清中S100β含量升高；
3)脑缺血性损伤的血清标志物；缺血性脑损伤可导致神经细胞水肿、变性、坏死，神经胶质细胞分泌S100β对损伤神经元进行修复、营养。缺血又导致血脑屏障的通透性增加，使S100β蛋白通过血脑屏障进入脑脊液和血清，使S100β在血液和脑脊液中水平升高；血清中S100β蛋白的水平可作为急性缺血性脑损伤的外周标志，有助于急性缺血性脑损伤的诊断和治疗。
目前，市场用于检测S100-β蛋白的试剂盒主要基于免疫层析法、胶体金法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、胶乳增强免疫比浊法等。其中，免疫层析法及胶体金法操作简便快捷，但灵敏度较低，易受杂散光干扰；ELISA法试剂盒具有操作流程繁琐，检测时间长，产生较多具有样本污染的废液等缺点；胶乳增强免疫比浊法成本较高，且需要价格昂贵的配套全自动分析系统进行检测。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，旨在采用镧系元素螯合物标记荧光微球后，进而标记S100-β单克隆抗体。因镧系元素螯合物stoke位移大，易区分激发光和发射光，可以排除激发光及待测样本中物质产生的荧光等的干扰；另外，镧系元素螯合物的激发光谱宽，而发射光谱窄，这更能进一步降低本地荧光，提高灵敏度；进一步地采用时间分辨荧光免疫层析技术，可有效得排除非特异性荧光的干扰，极大得提高了灵敏度；并且，本试剂盒具备操作简便快速、检测成本较低等优点，可弥补市场现有产品的不足。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，包括检测试纸条，所述检测试纸条包括PVC板、样品垫、结合垫、NC膜以及吸水垫；其特征在于，所述检测试纸条以PVC板为固相支撑底板；所述样品垫、结合垫、NC膜以及吸水垫按此顺序使相邻两者之间紧密接触，然后黏贴于PVC板上；所述结合垫喷涂有时间分辨荧光微球标记的S100-β单克隆抗体Ⅱ；所述时间分辨荧光微球粒径为 200nm-300nm，其标记有镧系元素；
所述NC膜上设置检测线和质控线；检测线为喷涂在NC膜上的 S100-β单克隆抗体Ⅰ；质控线为喷涂在NC膜上的羊抗鼠抗体；所述检测线和质控线相互平行且设有间隙。
进一步的技术方案在于，所述样品垫、结合垫、NC膜以及吸水垫按顺序使相邻两者之间边缘搭接。
进一步的技术方案在于，所述检测试纸条尺寸为80mm×4mm；其中PVC板尺寸为80mm×4mm；样品垫尺寸为25mm×4mm；结合垫尺寸为20mm×4mm；NC膜尺寸为20mm×4mm；吸水垫尺寸为21mm×4mm；所述样品垫与结合垫边缘搭接；所述NC膜与吸水垫搭接；所述结合垫与NC膜搭接；搭接部位长度为2mm。
进一步的技术方案在于，所述样品垫、结合垫、NC膜以及吸水垫按顺序由上到下或由下到上依次黏贴于PVC板上。
进一步的技术方案在于，还包括设有腔体的壳体；所述壳体内部的空腔放置检测试纸条；所述壳体上设置观察窗和加样孔。
进一步的技术方案在于，所述壳体包括上壳体和下壳体；所述上壳体与下壳体扣合，且内部形成腔体；所述观察窗和加样孔位于上壳体上。
进一步的技术方案在于，所述镧系元素为铕。
进一步的技术方案在于，所述NC膜上的检测线和质控线间距6mm±0.1mm；所述检测线靠近于结合垫；所述质控线靠近于吸水垫。
进一步的技术方案在于，还包括含有校准曲线的ID卡。
进一步的技术方案在于，所述S100-β单克隆抗体Ⅰ喷液量为 0.8ul/cm，浓度0.5-2mg/ml；羊抗鼠抗体喷液量为0.8ul/cm，浓度 0.1-0.5mg/ml。
进一步的技术方案在于，所述ID卡为被移动设备识别的标识码；所述标识码为二维码或条形码；其设置在壳体上。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：旨在采用镧系元素螯合物标记荧光微球后，进而标记S100-β单克隆抗体。因镧系元素螯合物stoke位移大，易区分激发光和发射光，可以排除激发光及待测样本中物质产生的荧光等的干扰；另外，镧系元素螯合物的激发光谱宽，而发射光谱窄，这更能进一步降低本地荧光，提高灵敏度；进一步地采用时间分辨荧光免疫层析技术，可有效得排除非特异性荧光的干扰，极大得提高了灵敏度；并且，本试剂盒具备操作简便快速、检测成本较低等优点，可弥补市场现有产品的不足。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒实施例一中检测卡内试纸条的结构示意图：
图2为本发明的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒实施例二中检测卡内试纸条的结构示意图：
图3为本发明的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒实施例三中检测卡内试纸条的结构示意图；
图4为本发明时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒中壳体结构示意图；
图5为本发明实例一所制备的试剂盒校准曲线图；
图6为本发明实例一线性相关性分析结果图；
图7为本发明实例一所制备的试剂盒与武汉明德生物科技股份有限公司生产的S100-β蛋白(S100-β)检测试剂盒(免疫层析法)检测结果的相关关系分析图；
其中：1、PVC板；2、样品垫；3、结合垫；4、NC膜；5、检测线；6、质控线；7、吸水垫；8、标识码；9、加样孔；10、观察窗； 11、上壳体；12、下壳体。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
本发明公开了一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，包括检测试纸条，所述检测试纸条包括PVC板1、样品垫2、结合垫3、NC膜4以及吸水垫7；其特征在于，所述检测试纸条以 PVC板1为固相支撑底板；所述样品垫2、结合垫3、NC膜4以及吸水垫7按此顺序使相邻两者之间紧密接触，然后黏贴于PVC板1上；所述结合垫3喷涂有时间分辨荧光微球标记的S100-β单克隆抗体Ⅱ；所述时间分辨荧光微球粒径为200nm-300nm，其标记有镧系元素；
所述NC膜4上设置检测线5和质控线6；检测线(T线)5为喷涂在NC膜4上的S100-β单克隆抗体Ⅰ；质控线(C线)6为喷涂在NC膜4上的羊抗鼠抗体；所述检测线5和质控线6相互平行且设有间隙。
本发明优选实施例中，如图1所示，所述样品垫2、结合垫3、 NC膜4以及吸水垫7按顺序使相邻两者之间边缘搭接。
本发明优选实施例中，如图1所示，所述检测试纸条尺寸为80mm ×4mm；其中PVC板1尺寸为80mm×4mm；样品垫2尺寸为25mm×4mm；结合垫3尺寸为20mm×4mm；NC膜4尺寸为20mm×4mm；吸水垫7 尺寸为21mm×4mm；所述样品垫2与结合垫3边缘搭接；所述NC膜 4与吸水垫7搭接；所述结合垫3与NC膜4搭接；搭接部位长度为 2mm。
本发明优选实施例中，如图2所示，所述样品垫2、结合垫3、 NC膜4以及吸水垫7按顺序由上到下依次黏贴于PVC板上。
本发明优选实施例中，如图3所示，所述样品垫2、结合垫3、 NC膜4以及吸水垫7按顺序由下到上依次黏贴于PVC板上。
本发明优选实施例中，如图4所示，还包括设有腔体的壳体；所述壳体内部的空腔放置检测试纸条；所述壳体上设置观察窗10 和加样孔9。
本发明优选实施例中，如图4所示，所述壳体包括上壳体11 和下壳体12；所述上壳体11与下壳体12扣合，且内部形成腔体；所述观察窗10和加样孔9位于上壳体上。
本发明优选实施例中，所述镧系元素为铕。
本发明优选实施例中，如图1所示，所述NC膜4上的检测线5 和质控线6间距6mm±0.1mm；所述检测线5靠近于结合垫；所述质控线6靠近于吸水垫。
本发明优选实施例中，如图4所示，还包括含有校准曲线的ID 卡。
本发明优选实施例中，所述S100-β单克隆抗体Ⅰ喷液量为 0.8ul/cm，浓度0.5-2mg/ml；羊抗鼠抗体喷液量为0.8ul/cm，浓度0.1-0.5mg/ml。
本发明优选实施例中，如图4所示，所述ID卡为被移动设备识别的标识码；所述标识码8为二维码或条形码；其设置在壳体上。
实施例一
本实施例中试剂盒包括检测卡、含有校准曲线的ID卡；检测卡包括壳体和设置在壳体内的检测试纸条；检测试纸条的制备方法如下：
1.配制所需溶液
1)10％BSA溶液
2)20mg/ml EDC溶液
3)20mg/ml NHS溶液
4)0.02mol/L MES溶液，pH5.6
5)0.02mol/L磷酸盐溶液，pH7.4
6)0.01mol/L PB溶液，pH7.4
7)复溶液
8)0.01mol/L，PBS pH7.4溶液(需要现用现配)
9)包被液(需要现用现配)
2.时间分辨荧光微球的活化
洗球：取100ul的荧光微球加入900ul的pH＝5.6MES缓冲液中，混匀，4℃离心(11000g，15min)弃上清，加入pH＝5.6MES缓冲液复溶至原体积，用混匀器振荡混匀。
活化微球：分别加入浓度20mg/ml的EDC和浓度20mg/ml的NHS， EDC和NHS终浓度均为0.5mg/ml，室温活化15分钟，4℃离心 (11000g，15min)弃上清，用0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液复溶至500ul。
3.时间分辨荧光微球标记S100-β单克隆抗体Ⅱ
加入抗体：S100-β单克隆抗体Ⅱ用0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液稀释，使其终浓度为1.0mg/ml，将用0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液复溶后微球与稀释后抗体溶液1:1混合，室温孵育2h。
封闭：孵育时间到后，用移液枪量取适量10％BSA溶液，使BSA 的终浓度到1％，室温封闭30min。
离心：封闭结束后，以离心力11000g，在4℃下高速离心15min。离心结束后，轻轻取出试管，观察试管是否有挂壁现象，试管壁是否有亮点。用移液枪吸取上清并弃掉，吸取时应不接触试管底部的沉淀。
复溶：加入复溶液定容至1ml，并定义此为原球液。将已复溶好的S100-β单克隆抗体Ⅱ原球液与复溶液按1:0.6的比例混合，并混匀。
4.结合垫的制备
用三维划膜喷金仪将所述时间分辨荧光微球标记的S100-β单克隆抗体Ⅱ溶液，以喷量为6ul/cm，喷嘴移动速度为80mm/s的标准在结合垫上进行喷涂。制备好的结合垫按如下方法烘干：烘干温度为：37℃，湿度＜30％，时间：60±5min，干燥后的结合垫放于含有干燥剂的铝箔袋中，封口。
5.NC膜划膜
贴NC膜(硝酸纤维素膜)：将NC膜按工艺需求量裁成20mm× 300mm，贴在距PVC板上沿2.6cm处。将PVC底板平铺于工作台面上；揭开PVC底板NC膜黏贴处的保护膜，将裁好的NC膜从左向右均匀推进，使其牢固黏贴在PVC板上。
抗体配制：抗体配制各组份用量的确定方法为：1)抗体用量(V) ＝配制体积×配制浓度/抗体标示浓度；2)包被液用量(V)＝配制体积×0.1；3)0.01mol/L PBS PH7.4用量(V)＝配制量-抗体-包被液用量。C线羊抗鼠抗体配制浓度应为0.2mg/ml,T线S100-β单克隆抗体Ⅰ配制浓度为1.0mg/ml。
NC膜划膜：使用三维划膜喷金仪，在NC膜上喷涂T线抗体及C 线抗体。所述T线抗体，喷液量为0.8ul/cm，划线速度为100mm/s，浓度1mg/ml；所述C线抗体，喷液量为0.8ul/cm，划线速度为 100mm/s，浓度0.2mg/ml。T线划在距NC膜顶端7.0mm±0.1mm处， C线划在距NC膜顶端7.0mm±0.1mm处，T线和C线相距6mm±0.1mm。
制备好的NC膜的烘干：烘干温度为：37℃，湿度＜30％，时间： 60±5min，干燥后的大卡于含有干燥剂的铝箔袋中，封口。
6.组装切条
吸水垫粘贴：揭开PVC底板吸水垫黏贴处的保护膜，轻微滚动推进吸水垫，使其均匀黏附于PVC板上，且吸水垫覆盖NC膜2mm；
结合垫粘贴：揭开PVC底板标记物垫黏贴处的保护膜，将裁切好的结合垫黏附在PVC板上，方法同吸水垫。结合垫覆盖NC膜2mm；
样品垫粘贴揭开PVC板最下端的样品垫保护膜，将样品垫粘附于PVC板上，方法同吸水垫，样品垫覆盖结合垫2mm。
7.切条
使用微电脑自动斩切机，将组装好的检测大卡切割成宽度为 4.0mm±0.1mm的试纸条。所述检测试纸条尺寸为80mm×4mm；其中PVC板尺寸为80mm×4mm；样品垫尺寸为25mm×4mm；结合垫尺寸为 20mm×4mm；NC膜尺寸为20mm×4mm；吸水垫尺寸为21mm×4mm。
8.对S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析试剂盒的性能测试：
8.1校准曲线的绘制
校准品的制备：校准品为不同浓度S100-β蛋白抗原，用小牛血清稀释得到10ng/mL的校准品母液，再用小牛血清稀释得到不同浓度的校准品。各浓度校准品采用公司内部校准品溯源及赋值流程，对校准品进行赋值。
使用本实施例制备的S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测卡，以广州蓝勃生物科技有限公司生产的AFS-1000干式荧光免疫分析仪为测试平台，测试所述不同浓度的校准品，每个浓度重复测试 3次。读取C线、T线的荧光信号及T/C值，实验结果如下表1：
表1校准品测试结果
以校准品浓度和荧光信号T/C比值的平均值为坐标轴，绘制校准曲线。校准曲线图如图5所示，其中R2值为0.9999。通过校准曲线实现对样本中S100-β蛋白浓度进行定量测定。
8.2时间分辨荧光检测卡性能测试
最低检出限：用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果，计算其平均值(M)和标准差(SD)，得出M+2SD，即为最低检出限，结果为0.08ng/mL。
线性范围：取0.08-10.0ng/mL浓度范围内的6个浓度的校准品，每个浓度校准品重复测试三次，将测定浓度平均值与理论浓度进行线性分析，分析结果如图6，线性方程为y＝0.9999x+0.1489，R2值为 0.9999，表明本发明试剂盒在0.08-10.0ng/mL区间线性相关性良好。
重复性：取同一批号实施例1中制备的检测卡，分别检测浓度在0.5±0.05ng/ml和5±0.5ng/ml的质控品各10次,分别计算测量值的平均值(M)和标准差(S)，计算变异系数(CV)，CV值≤15％。测试两个浓度的质控品，测试结果分别为：低浓度质控品平均值为0.05ng/mL，CV值为5.2％；高浓度质控品平均值为4.98，CV值为 3.7％，测试结果均满足要求，表明实施例1方案制备的检测卡重复性良好。
准确度：将低浓度人血清样本进行检测，分别重复测定3次，计算其平均值C0；取高值样本1份，分别重复测定3次，计算其平均值Cs；将高值样本分别加入到9份的人血清中，混匀后，作为检测样本按照说明书的步骤进行检测，分别重复测定3次，计算其平均值C，计算回收率。其中，V0为人血清体积；Vs为高值样本加入体积。回收样本8.2ng/mL的回收率为101.5％；5.88ng/mL的回收率为96.2％；回收率在90％-110％之间，说明实施例方案制备的检测卡准确度良好。
批间差：取3批不同批号的按照实施例方案制备的试剂盒，每批各取3条检测卡，测试浓度在0.5±0.05ng/ml和5±0.5ng/ml 的质控品各3次，分别计算每批3次检测结果的均值。其中三批试剂盒检测0.5±0.05ng/ml浓度质控品，批间相对偏差R为8.22％；三批试剂盒检测5±0.5ng/ml浓度质控品，批间相对偏差R为4.97％；批间相对偏差R均小于10％，表明按照实施例1及实施例2 方案制备的试剂盒，批间差符合要求。
8.3临床样本检测
采集临床血清样本200份，利用本发明及武汉明德生物科技股份有限公司生产的S100-β蛋白(S100-β)检测试剂盒(免疫层析法)，在广州蓝勃生物科技有限公司生产的AFS-1000干式荧光免疫分析仪测试平台上进行样本的检测。将同一样本，不同试剂盒的检测结果进行线性分析，如图5所示，R2值为0.9997，表明本发明与上市产品检测结果具有一致性，适用于临床检测。
Claims (10)
1.一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，包括检测试纸条，所述检测试纸条包括PVC板、样品垫、结合垫、NC膜以及吸水垫；其特征在于，所述检测试纸条以PVC板为固相支撑底板；所述样品垫、结合垫、NC膜以及吸水垫按此顺序使相邻两者之间紧密接触，然后黏贴于PVC板上；所述结合垫喷涂有时间分辨荧光微球标记的S100-β单克隆抗体Ⅱ；所述时间分辨荧光微球粒径为200nm-300nm，其标记有镧系元素；
所述NC膜上设置检测线和质控线；检测线为喷涂在NC膜上的S100-β单克隆抗体Ⅰ；质控线为喷涂在NC膜上的羊抗鼠抗体；所述检测线和质控线相互平行且设有间隙。
2.根据权利要求1所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫、结合垫、NC膜以及吸水垫按顺序使相邻两者之间边缘搭接。
3.根据权利要求1或2所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述检测试纸条尺寸为80mm×4mm；其中PVC板尺寸为80mm×4mm；样品垫尺寸为25mm×4mm；结合垫尺寸为20mm×4mm；NC膜尺寸为20mm×4mm；吸水垫尺寸为21mm×4mm；所述样品垫与结合垫边缘搭接；所述NC膜与吸水垫搭接；所述结合垫与NC膜搭接；搭接部位长度为2mm。
4.根据权利要求1-3任一项权利要求所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，还包括设有腔体的壳体；所述壳体内部的空腔放置检测试纸条；所述壳体上设置观察窗和加样孔。
5.根据权利要求1所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述壳体包括上壳体和下壳体；所述上壳体与下壳体扣合，且内部形成腔体；所述观察窗和加样孔位于上壳体上。
6.根据权利要求1所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述镧系元素为铕。
7.根据权利要求2所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述NC膜上的检测线和质控线间距6mm±0.1mm；所述检测线靠近于结合垫；所述质控线靠近于吸水垫。
8.根据权利要求1或4所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，还包括含有校准曲线的ID卡。
9.根据权利要求1或4所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述S100-β单克隆抗体Ⅰ喷液量为0.8ul/cm，浓度0.5-2mg/ml；羊抗鼠抗体喷液量为0.8ul/cm，浓度0.1-0.5mg/ml。
10.根据权利要求8所述的一种S100-β蛋白时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述ID卡为被移动设备识别的标识码；所述标识码为二维码或条形码；其设置在壳体上。
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| CN (1) | CN109856403A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113721034A (zh) * | 2021-11-02 | 2021-11-30 | 瑞博奥(广州)生物科技股份有限公司 | 一种检测s100b蛋白的时间分辨免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN120352632A (zh) * | 2025-06-18 | 2025-07-22 | 浙江格物致知生物科技有限公司 | 一种帕金森联合检测早诊早筛试剂盒及其应用 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000026668A2 (en) * | 1998-11-05 | 2000-05-11 | The Regents Of The University Of Michigan | S100 proteins and autoantibodies as serum markers for cancer |
| WO2013132347A2 (en) * | 2012-03-06 | 2013-09-12 | Calpro As | Improved elisa immunoassay for calprotectin |
| CN104459134A (zh) * | 2013-09-18 | 2015-03-25 | 刘宏飞 | 脑损伤早期诊断s100胶体金免疫测试盒及其制备方法 |
| CN106370849A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-02-01 | 北京康思润业生物技术有限公司 | 免疫侧向层析检测系统及其制备方法 |
| CN106872420A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-06-20 | 厦门奥德生物科技有限公司 | 一种时间分辨荧光定量检测尿微量白蛋白的试剂盒及方法 |
| CN207248894U (zh) * | 2017-10-20 | 2018-04-17 | 厦门稀土材料研究所 | 胱抑素c时间分辨检测卡及试剂盒 |
| CN108398562A (zh) * | 2018-02-09 | 2018-08-14 | 河南省生物工程技术研究中心有限公司 | 胱抑素c荧光微球免疫层析定量检测试纸条及试纸卡 |
| CN108398557A (zh) * | 2018-02-09 | 2018-08-14 | 河南省生物工程技术研究中心有限公司 | 一种髓过氧化物酶荧光免疫层析试纸条及试纸卡 |
| CN109633162A (zh) * | 2018-11-28 | 2019-04-16 | 浙江聚康生物工程有限公司 | S-100β蛋白检测试剂盒 |
-
2018
- 2018-12-21 CN CN201811572355.2A patent/CN109856403A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000026668A2 (en) * | 1998-11-05 | 2000-05-11 | The Regents Of The University Of Michigan | S100 proteins and autoantibodies as serum markers for cancer |
| WO2013132347A2 (en) * | 2012-03-06 | 2013-09-12 | Calpro As | Improved elisa immunoassay for calprotectin |
| CN104459134A (zh) * | 2013-09-18 | 2015-03-25 | 刘宏飞 | 脑损伤早期诊断s100胶体金免疫测试盒及其制备方法 |
| CN106370849A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-02-01 | 北京康思润业生物技术有限公司 | 免疫侧向层析检测系统及其制备方法 |
| CN106872420A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-06-20 | 厦门奥德生物科技有限公司 | 一种时间分辨荧光定量检测尿微量白蛋白的试剂盒及方法 |
| CN207248894U (zh) * | 2017-10-20 | 2018-04-17 | 厦门稀土材料研究所 | 胱抑素c时间分辨检测卡及试剂盒 |
| CN108398562A (zh) * | 2018-02-09 | 2018-08-14 | 河南省生物工程技术研究中心有限公司 | 胱抑素c荧光微球免疫层析定量检测试纸条及试纸卡 |
| CN108398557A (zh) * | 2018-02-09 | 2018-08-14 | 河南省生物工程技术研究中心有限公司 | 一种髓过氧化物酶荧光免疫层析试纸条及试纸卡 |
| CN109633162A (zh) * | 2018-11-28 | 2019-04-16 | 浙江聚康生物工程有限公司 | S-100β蛋白检测试剂盒 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113721034A (zh) * | 2021-11-02 | 2021-11-30 | 瑞博奥(广州)生物科技股份有限公司 | 一种检测s100b蛋白的时间分辨免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN120352632A (zh) * | 2025-06-18 | 2025-07-22 | 浙江格物致知生物科技有限公司 | 一种帕金森联合检测早诊早筛试剂盒及其应用 |
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| CB02 | Change of applicant information | ||
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Address after: No.219, Yuquan Road, Luquan District, Shijiazhuang City, Hebei Province Applicant after: Hebei Institute for drug and medical device inspection (Hebei cosmetic inspection and Research Center) Applicant after: SHIJIAZHUANG BOYANG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: No.219, Yuquan Road, Luquan District, Shijiazhuang City, Hebei Province Applicant before: Hebei Institute of drug and medical device inspection Applicant before: SHIJIAZHUANG BOYANG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190607 |