CN109837332A - 一种酵母菌菌落快速pcr扩增试剂盒及利用此试剂盒pcr扩增酵母菌菌落的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒及利用此试剂盒PCR扩增酵母菌菌落的方法。所示试剂盒包括：10×细胞裂解液、10×PCR反应液、dNTP、热启动Taq酶。与目前现有技术相比，该试剂盒无需经过加热煮沸，酚/氯仿抽提提取基因组等步骤，减少有毒物质的对实验人员的毒害；本发明操作快速、简便，节省了大量的时间；本发明直接裂解单克隆菌落，降低交叉污染，无假阳性；通过使用高PH的细胞壁裂解液，可以在短时间内对酵母菌细胞壁进行有效的裂解，充分释放酵母基因组，释放后的上清液与配套的PCR反应液混合后其PH值在PCR扩增的适宜范围内，可实现PCR快速扩增。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒及利用此试剂盒PCR扩增酵母菌菌落的方法。
背景技术
酵母菌是一种真菌微生物，其在自然界中分布广泛，属于典型的兼性厌氧微生物，可以将糖发酵成酒精和二氧化塘，广泛应用于食品领域，其次作为一种重要的工程菌，其在分子领域应用广泛，例如分子克隆领域作为真核生物受体细胞。在酵母分子克隆中，在对酵母菌进行外源基因的转化后需要进行PCR 以验证外源基因是否成功转化。传统的细菌进行菌落PCR时，可以直接挑取细菌的单菌落或者菌液进行，但是酵母菌不同于细菌，其细胞壁破壁困难，处理不当基因组释放不充分就会造成PCR扩增失败。
在对酵母菌基因进行PCR扩增时，传统的方法是对酵母菌总基因组进行提取之后再进行PCR扩增，这种方法可以获取纯度相对较高的基因组进行PCR扩增且扩增效果理想，但是针对酵母菌的转化率，研究人员可能需要对较多的菌落进行筛选鉴定，提取基因组不仅会耗费大量的时间，增加实验成本，且在基因组提取的过程中，由于样本较多，操作稍微不慎就会造成样本间的交叉污染，给后续实验带来困扰。
目前，酵母菌落PCR技术应用较为广泛，其免去了提取基因组的繁琐步骤，主要是预先对酵母菌进行细胞壁的处理，包括反复冻融破壁法，酶消化处理法，高温蒸煮法，延伸PCR预变性时间等，这些方法处理后的酵母菌虽可以有效的进行PCR扩增，但是预处理的时间也相对较长，操作繁琐，稳定性与扩增也有待进一步的提升。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒及利用此试剂盒PCR扩增酵母菌菌落的方法。开发出一种可以快速进行酵母菌菌落PCR扩增，且操作简单，结果稳定性好的方法。
本发明采取的技术方案为：
一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，所述试剂盒包括：10×细胞裂解液、 10×PCR反应液、dNTP、热启动Taq酶。
所述10×细胞裂解液成分为：1L 10×细胞裂解液中含有：10-50mM KOH， 0.5-2.5％(w/v)的十二烷基硫酸钠，20-60％聚乙二醇200(v/v)
进一步地，所述10X细胞裂解液成分优选为：1L 10×细胞裂解液中含有： 20mM的KOH，1.5％(w/v)十二烷基硫酸钠60％聚乙二醇200(v/v)。
所述10×PCR反应液成分为：1L 10×PCR反应液中含有：：100mM Tris-HCl， 500mMKCl，15mM MgCl2，0.01％(w/v)明胶，0.1％(v/v)聚乙二醇辛基苯基醚；所述10X PCR反应液的pH为8.3。
本发明还提供了利用所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒PCR扩增酵母菌菌落的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)取酵母菌单菌落培养液；
(2)裂解酵母菌细胞；
(3)酵母菌基因组DNA进行PCR扩增；
(4)PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳，观测扩增结果。
进一步地，所述步骤(3)中，PCR扩增反应体系为：10×PCR反应液2.5 μL，2.5mMdNTP 2.5μL，10μmol上下游引物1μL，2.5μL上清液，1μL 热启动Taq酶，使用双蒸水补至25μL。
进一步地，所述步骤(3)中，PCR反应条件为：
所述步骤(4)中具体包括：配制1％琼脂糖凝胶，将PCR扩增液加至加样孔内，接通电泳仪电源，电泳参数：70V，30min，然后在紫外显影仪上观测扩增结果。
与目前现有技术相比，该试剂盒在使用过程中无需经过加热煮沸，酚/氯仿抽提等抽提基因组的步骤，减少有毒物质对实验人员的毒害；本发明操作快速、简便，节省了大量的时间；本发明直接裂解单克隆菌落，降低交叉污染，无假阳性；通过使用高PH的细胞壁裂解液，可以在短时间内对酵母菌细胞壁进行有效的裂解，充分释放酵母基因组，释放后的上清液与配套的PCR反应液混合后其 PH值在PCR扩增的适宜范围内，可实现PCR快速扩增。具体如下：
(1)操作快速、简便，节省了大量的时间，易推广使用。
(2)无需经过加热煮沸，酚/氯仿抽提等基因组提取步骤，减少有毒物质的对实验人员的毒害，提取液的上清液可以直接用作PCR反应的模板，简单快速的制备大批量PCR检测的模板，只需要微量的样本；
(3)直接裂解单克隆菌落，降低交叉污染，无假阳性；
(4)通过使用高PH的细胞壁裂解液，可以在短时间内对酵母菌细胞壁进行有效的裂解，充分释放酵母基因组，释放后的上清液与配套的PCR反应液混合后其PH值在PCR扩增的适宜范围内，可实现PCR快速扩增。
附图说明
图1为实施例2中毕赤酵母GS115菌落GAP基因的PCR扩增结果；
图2为实施例3中毕赤酵母GS115外源pYES2-GFP载体PCR扩增结果。
图3为本发明与经加热煮沸处理基因组后进行常规PCR的扩增结果对比
具体实施方式
实施例1
一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，包括：10×裂解液、10×PCR反应液、 dNTP、热启动Taq酶；
每升10×裂解液中含有的成分为：20mM的KOH，1.5％(w/v)的十二烷基硫酸钠，60％(v/v)的聚乙二醇；
每升10×PCR反应液中含有的成分为：100mM Tris-HCl，500mM KCl，15 mM MgCl2，0.01％(w/v)明胶，0.1％(v/v)聚乙二醇辛基苯基醚，25℃时pH 8.3。
实施例2
利用实施例1中的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒PCR扩增毕赤酵母 GS115菌落GAP基因的方法，包括以下步骤：
(1)取毕赤酵母GS115单克隆菌落培养后的新鲜菌液500ul，13000转离心 20s，弃上清，向离心管中加入200μL细胞裂解液，使用微型涡旋仪涡旋15s使菌体与裂解液充分混匀后，室温静置3min，4℃、13000转离心30s，上清备用。
(2)制备PCR反应体系包含：10×PCR反应液2.5μL，2.5mM dNTP，2.5 μL，10umol上下游引物1μL，2.5μL裂解上清液，1μL热启动Taq酶，使用双蒸水补至25μL；
所述上游引物序列为：TTCAAGCAGCGTCACTCCTC；
所述下游引物TGTTCTGATTGCGCTTGCAC，PCR扩增产物片段大小为 740bp。
所述的PCR反应条件：
(3)PCR反应结束后，使用1％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，检测结果如图1所示，扩增稳定，产物条带清晰，扩增效果理想。
实施例3
利用实施例1中的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒PCR扩增毕赤酵母 GS115菌落外源pYES2-GFP载体的方法，包括以下步骤：
(1)取毕赤酵母GS115单克隆菌落培养后的新鲜菌液500ul，13000转离心20s，弃上清，向离心管中加入200μL细胞裂解液，涡旋15s使菌体与裂解液充分混匀后，室温静置3min，4℃、13000转离心30s，上清备用。
(2)制备PCR反应体系包含：10×PCR反应液2.5μL，2.5mM的dNTP 2.5 μL，10umol的上下游引物1μL，2.5μL裂解上清液，1μL的热启动Taq酶，使用双蒸水补至25μL；
本实施例所扩增的片段使用pYES2-GFP通用测序引物，上游引物序列为：TAATACGACTCACTATAGGG；下游引物GTGACATAACTAATTACATGATG， PCR扩增产物片段大小为700bp；
所述的PCR反应条件：
(3)PCR反应结束后，使用1％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，检测结果如图2所示，扩增稳定，产物条带清晰，扩增效果理想。
实施例4
利用实施例1中的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒PCR扩增毕赤酵母 GS115菌落GAP基因，所述方法与实施例1中方法相同。同时使用煮沸的方法处理酵母基因组，使用常规PCR扩增试剂盒进行扩增，具体方法如下：
(1)取毕赤酵母GS115单克隆菌落培养后的新鲜菌液500ul，13000转离心20s，弃上清，使用灭菌水洗涤一次，13000转离心20s，沉淀悬浮于200ul 的TE(10mmol的Tris-hcl，0.5mmol的EDTA)缓冲液中，在沸水中煮10min，冰浴10min，13000转离心5min，将上清液转移至新的1.5ml离心管中备用。
(2)制备PCR反应体系包含：10×常规PCR反应液2.5μL，2.5mM的 dNTP，2.5μL，10umol的上下游引物1μL，2.5μL步骤1中上清液，1μL 的Taq酶，使用双蒸水补至25μL。
所述上游引物序列为：TTCAAGCAGCGTCACTCCTC；
所述下游引物TGTTCTGATTGCGCTTGCAC，PCR扩增产物片段大小为 740bp。
所述的PCR反应条件：
(3)PCR反应结束后，使用1％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，检测结果如图3所示，本发明扩增结果稳定，产物条带清晰，扩增效果理想，而使用常规的PCR扩增试剂盒扩增结果不稳定，条带也较暗，且较为耗费时间。
上述参照实施例对一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒及利用此试剂盒 PCR扩增酵母菌菌落的方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：10×细胞裂解液、10×PCR反应液、dNTP、热启动Taq酶。
2.根据权利要求1所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述10×细胞裂解液成分为：1L 10×细胞裂解液中含有：10-50mM KOH，0.5-2.5％的十二烷基硫酸钠，20-60％聚乙二醇200。
3.根据权利要求1或2所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述10×细胞裂解液成分优选为：1L 10×细胞裂解液中含有：20mM的KOH，1.5％十二烷基硫酸钠，60％聚乙二醇200。
4.根据权利要求1或2所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述10×PCR反应液成分为：1L 10×PCR反应液中含有：100mM Tris-HCl，500mM KCl，15mM MgCl2，0.01％明胶，0.1％聚乙二醇辛基苯基醚；所述10×PCR反应液的pH为8.3。
5.利用权利要求1-4任意一项所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒PCR扩增酵母菌菌落的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)取酵母菌单菌落培养液；
(2)裂解酵母菌细胞；
(3)酵母菌基因组DNA进行PCR扩增；
(4)PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳，观测扩增结果。
6.根据权利要求5所述的PCR扩增酵母菌菌落的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，PCR扩增反应体系为：10×PCR反应液2.5μL，2.5mM dNTP 2.5μL，10μmol上下游引物1μL，2.5μL上清液，1μL热启动Taq酶，使用双蒸水补至25μL。
7.根据权利要求5所述的PCR扩增酵母菌菌落的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，PCR反应条件为：
8.根据权利要求5所述的PCR扩增酵母菌菌落的方法，其特征在于，所述步骤(4)中具体包括：配制1％琼脂糖凝胶，将PCR扩增液加至加样孔内，接通电泳仪电源，电泳参数：70V，30min，然后在紫外显影仪上观测扩增结果。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5652102A (en) * | 1994-12-05 | 1997-07-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Assay for enterohemorrhagic Escherichia coli 0157:H7 by the polymerase chain reaction |
| WO2006073497A1 (en) * | 2005-01-04 | 2006-07-13 | Molecular Research Center, Inc. | Reagents and methods for storage and processing of biological samples for dna analysis |
| CN102321618A (zh) * | 2011-09-30 | 2012-01-18 | 生工生物工程(上海)有限公司 | 一种用于从生物材料中直接扩增dna片段的方法及试剂盒 |
| US20140256558A1 (en) * | 2013-03-11 | 2014-09-11 | Kailos Genetics, Inc. | Capture Methodologies for Circulating Cell Free DNA |
-
2019
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5652102A (en) * | 1994-12-05 | 1997-07-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Assay for enterohemorrhagic Escherichia coli 0157:H7 by the polymerase chain reaction |
| WO2006073497A1 (en) * | 2005-01-04 | 2006-07-13 | Molecular Research Center, Inc. | Reagents and methods for storage and processing of biological samples for dna analysis |
| CN102321618A (zh) * | 2011-09-30 | 2012-01-18 | 生工生物工程(上海)有限公司 | 一种用于从生物材料中直接扩增dna片段的方法及试剂盒 |
| US20140256558A1 (en) * | 2013-03-11 | 2014-09-11 | Kailos Genetics, Inc. | Capture Methodologies for Circulating Cell Free DNA |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| LAURIE VINGATARAMIN & ERIC H FROST: "A single protocol for extraction of gDNA from bacteria and yeast", 《BIOTECHNIQUES》 * |
| PIOTR CHOMCZYNSKI ET AL.: "Alkaline polyethylene glycol-based method for direct PCR from bacteria, eukaryotic tissue samples, and whole blood", 《BIOTECHNIQUES》 * |
| 崔春编著: "《食物蛋白质控制酶解技术》", 30 June 2018, 中国轻工业出版社 * |
| 王会文 等: "SDS一步法制备PCR模板", 《河北大学学报（自然科学版）》 * |
| 陈源源: "基于分子标识的工业微生物资源快捷分类与鉴定", 《中国博士学位论文全文数据库 基础科学辑》 * |
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