CN109827821A - 一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂及其制备方法，使用场景包括但不限于免疫组化、组织化学等适合加热脱蜡场景，按体积份数计，脱蜡修复剂包括脂肪酸衍生物13‑31份、渗透剂2‑6份、表面活性剂3‑12份、消沫剂0.5‑2份和抗原修复液60‑100份。该脱蜡修复剂所用试剂均无毒、无挥发性、无刺激性气味，与二甲苯脱蜡效果相同，对操作人员身体健康无影响，是病理组织实验中用于替代二甲苯脱蜡的理想试剂。该脱蜡修复剂用于石蜡切片的脱蜡及修复过程，不会对组织细胞结构和组织细胞内其他成分以及组织抗原造成破坏，符合临床病理诊断和优质染色片的要求，也符合实验室环保要求；本发明的脱蜡修复剂实现了脱蜡‑水化‑修复一步完成，节约大量实验时间。
Description
技术领域
本发明涉及病理检测试剂领域，更具体地，涉及一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂及其制备方法。
背景技术
据报道，中国每年新增癌症患者占到全球新增数量的20％以上，其中肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、宫颈癌、乳腺癌和鼻咽癌这8种癌症死亡人数约占中国癌症总死亡人数的80％以上。癌症患者的早期诊断和早期治疗是提高患者存活率的关键。目前癌症的早期诊断主要依靠病理切片的染色结果进行判断，所以病理切片染色技术的快速高效就显的非常重要。病理检测的基本步骤包括脱蜡、水化、修复、染色、再脱水、再透明和封片处理。在上述步骤中，切片必须经过脱蜡后才能进行相关染色，而切片最终的质量好坏，取决于其脱蜡修复程度的高低，同时，脱蜡修复程度也关系到肿瘤判断及病理诊断准确率。所以在病理检测过程中，脱蜡、修复以及染色三个步骤至关重要。
现有技术中，本领域技术人员基本上都在使用二甲苯作为脱蜡用试剂。这是由于二甲苯具有渗透力强、作用时间短，溶解石蜡量大且易挥发，而且对组织的脱蜡效果好，价格便宜的优点。但是二甲苯也存在致命的缺点：二甲苯等传统透明剂易挥发、有毒性，而且医护人员长期吸入或皮肤接触二甲苯等传统透明剂时将直接危害身体健康。因此，世界卫生组织已宣告二甲苯有多重毒性，并建议尽可能避免使用。
发明内容
针对现有技术中存在的技术问题，本发明提出了一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂及其制备方法，此脱蜡修复剂无毒、不易挥发、无刺激性气味、生物降解性好，脱蜡效果与二甲苯相同；使用本发明所述脱蜡剂，可同时完成脱蜡、修复、水化步骤，操作更简单、环境更友好。
为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明的第一个目的在于提出一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，包括如下体积份的组分：
脂肪酸衍生物13-31份；
渗透剂2-6份；
表面活性剂3-12份；
消沫剂0.5-2份；
抗原修复液60-100份。
进一步地，所述脂肪酸衍生物包括C50-60脂肪酸衍生物混合物和C8-12脂肪酸衍生物混合物；按体积份数计，所述C50-60脂肪酸衍生物混合物为10-25份，所述C8-12脂肪酸衍生物混合物为3-6份。
更进一步地，包括如下体积份的组分：
C50-60脂肪酸衍生物混合物15份；
C8-12脂肪酸衍生物混合物3份；
渗透剂3份；
表面活性剂6份；
消沫剂1份；
抗原修复液80份。
更进一步地，所述C50-60脂肪酸衍生物混合物为长支链脂肪酸中的至少一种物质组成的混合物。
更进一步地，所述C8-12脂肪酸衍生物混合物为中链脂肪酸中的至少一种物质组成的混合物。
更进一步地，所述C50-60脂肪酸衍生物为长支链脂肪酸混合物的环氧化合物。
更进一步地，所述C8-12脂肪酸衍生物为中链脂肪酸混合物的饱和氢化物。
进一步地，所述抗原修复液选自柠檬酸、EDTA/EGTA、Tris、Tris-hcl、Tris-EDTA、柠康酐、金属盐(微波维持)抗原修复液，所述抗原修复液pH6.0-10.0。
本发明的第二个目的在于提出一种制备上述任一所述用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂的方法，包括按照选定的体积份取所述脂肪酸衍生物、渗透剂、表面活性剂、消沫剂、抗原修复液搅拌混合，磁力搅拌器设置为温度45-55℃、转速200-600r/min，搅拌30-50min，调节pH 6.0-10.0。
本发明的第三个目的在于提出一种石蜡组织切片的脱蜡-水化-修复的一体化方法，包括烤片、脱蜡、水化、抗原修复、孵育抗体、染色、脱水、透明和封片步骤，所述脱蜡、水化和抗原修复是通过将烤好的组织切片放入已预热的上述任一所述的非二甲苯脱蜡修复剂中水浴/微波维持85-95℃17min，或者煮沸3分钟后高压1.5-2min后室温冷却一步完成。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明的脱蜡修复剂所用试剂均无毒、无挥发性、无刺激性气味，与二甲苯脱蜡效果相同，且对操作人员身体健康无影响，是病理组织实验中用于替代二甲苯脱蜡的理想试剂；本发明的脱蜡修复剂用于病理检测技术，使用过程不会对组织细胞结构和组织细胞内其他成分以及组织抗原造成破坏，符合临床病理诊断和研究所要求优质染色片的要求，同时也符合实验室环保的要求。
(2)本发明的脱蜡修复剂用于病理检测，在脱蜡的同时进行抗原修复，并且无需专门水化操作，节约大量实验时间。
附图说明
图1为实施例1中苏木素和her-2在乳腺癌组织的染色结果示意图。
图2为实施例2中苏木素和CK5在肺鳞癌组织的染色结果示意图。
图3为实施例3中苏木素和P40在肺鳞癌组织的染色结果示意图。
图4为实施例4中苏木精和伊红在胃组织上的HE染色结果示意图。
具体实施方式
展示一下实例来具体说明本发明的某些实施例，且不应解释为限制本发明的范围。对本发明公开的内容可以同时从材料、方法和反应条件进行改进，所有这些改进，均应落入本发明的的精神和范围之内。本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。
实施例1：
一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：C50-60支链脂肪酸环氧化合物15份、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物3份、渗透剂2份、表面活性剂3份、消沫剂0.5份、抗原修复液80份。
本实施例一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂的制备方法，包括以下步骤：
1.按规定体积份数依次量取C50-60支链脂肪酸环氧化合物、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物、聚乙二醇辛基苯基醚、表面活性剂、消沫剂、柠檬酸抗原修复液。
2.将步骤1中量取的C50-60支链脂肪酸环氧化合物、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物、渗透剂聚乙二醇辛基苯基醚、表面活性剂、消沫剂、柠檬酸抗原修复液，磁力搅拌器设置为温度45℃、转速400r/min，搅拌30min，调节PH6.0即可。
本实施例一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂在免疫组化实验中充当脱蜡剂、抗原修复液应用，所述免疫组化实验包括烤片、脱蜡、水化、抗原修复、孵育抗体、染色、脱水、透明和封片步骤，其中：
脱蜡、水化、抗原修复步骤中，将烘烤之后的切片组织放入本实施例中所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂中，水浴维持85-95摄氏度17min，室温冷却即可。
图1为采用本实施例的脱蜡修复剂，苏木素和her-2在乳腺癌组织上的染色情况，结果表明组织细胞形态完整，细胞核苏木素染色清楚、明显，her-2细胞膜信号清晰、明确，说明该试剂具有较好的脱蜡水化修复效果并且不会对组织及抗原造成破坏。所示，本实施例中处理的石蜡切片组织完整、染色鲜艳、结构清晰符合免疫组化的脱蜡修复的要求。
实施例2：
一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：C50-60支链脂肪酸环氧化合物10份、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物6份、聚乙二醇辛基苯基醚4份、表面活性剂8份、消沫剂1.2份、柠檬酸抗原修复液100份。
本实施例一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂的制备方法，包括以下步骤：
1.按规定体积份数依次量取C50-60支链脂肪酸环氧化合物、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物、渗透剂聚乙二醇辛基苯基醚、表面活性剂、消沫剂、抗原修复液。
2.将步骤1中量取的C50-60支链脂肪酸环氧化合物、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物、聚乙二醇辛基苯基醚、表面活性剂、消沫剂、EGTA原修复液,磁力搅拌器设置为温度50℃、转速400r/min，搅拌40min，调节PH9.0即可。
本实施例一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂在免疫组化实验中充当脱蜡剂、抗原修复液应用，所述免疫组化实验包括烤片、脱蜡、水化、抗原修复、孵育抗体、染色、脱水、透明和封片步骤，其中：
脱蜡、水化、抗原修复步骤中，将烘烤之后的切片组织放入本实施例中所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂中，微波维持85-95摄氏度17min，室温冷却即可。
图2为采用本实施例的脱蜡修复剂，苏木素和CK5在肺鳞癌组织上的染色情况，结果表明，组织细胞形态完整，细胞核苏木素染色清楚、明显，CK5细胞质膜信号清晰、明确，说明该试剂具有较好的脱蜡水化修复效果并且不会对组织及抗原造成破坏。本实施例中处理的石蜡切片组织完整、染色鲜艳、结构清晰符合免疫组化的脱蜡修复的要求。
实施例3：
一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：C50-60支链脂肪酸环氧化合物25份、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物4份、渗透剂聚乙二醇辛基苯基醚6份、表面活性剂12份、消沫剂2份、EDTA抗原修复液90份。
本实施例一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂的制备方法，包括以下步骤：
1.按规定体积份数依次量取C50-60支链脂肪酸环氧化合物、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物、聚乙二醇辛基苯基醚、表面活性剂、消沫剂、EDTA抗原修复液。
2.将步骤1中量取的C50-60支链脂肪酸环氧化合物、C8-12中链脂肪酸饱和氢化物、聚乙二醇辛基苯基醚、表面活性剂、消沫剂、EDTA抗原修复液,磁力搅拌器设置为温度55℃、转速400r/min，搅拌50min，调节PH10.0即可。
本实施例一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂在免疫组化实验中充当脱蜡剂、抗原修复液应用，所述免疫组化实验包括烤片、脱蜡、水化、抗原修复、孵育抗体、染色、脱水、透明和封片步骤，其中：
脱蜡、水化、抗原修复步骤中，将烘烤之后的切片组织放入本实施例中所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂中，煮沸3分钟高压1.5-2min，室温冷却即可。
图3为采用本实施例的脱蜡修复剂，苏木素和CP40在肺鳞癌组织上的染色情况，结果表明，组织细胞形态完整，细胞核苏木素染色清楚、明显，P40细胞核信号清晰、明确，说明该试剂具有较好的脱蜡水化修复效果并且不会对组织及抗原造成破坏。本实施例中处理的石蜡切片组织完整、染色鲜艳、结构清晰符合免疫组化的脱蜡修复的要求。
实施例4：
本实施例采用实施例1制备的脱蜡修复液进行组织化学的加热脱蜡，具体操作步骤为：烤片-脱蜡(水浴85-95℃5-10分钟或煮沸3-5min)冷却至室温—苏木素染色3-8min自来水洗—伊红染色1-3min脱水封片镜检。
图4为本实施例中苏木精和伊红在胃组织上的HE染色情况，苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色，该结果显示苏木素染色细胞核呈蓝色(点状染色)，伊红染色细胞质及细胞外基质呈(圆形或片状)红色。说明该试剂具有较好的脱蜡效果并且不会对组织结构及细胞形态造成影响。本实施例中处理的石蜡切片组织完整、染色鲜艳、结构清晰符合组织化学的脱蜡要求。
综合以上说明本发明的脱蜡修复剂具有较好的脱蜡水化修复效果，并且不会对组织细胞质、膜、核及细胞外基质任意位置抗原造成破坏。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，其特征在于，包括如下体积份的组分：
脂肪酸衍生物13-31份；
渗透剂2-6份；
表面活性剂3-12份；
消沫剂0.5-2份；
抗原修复液60-100份。
2.根据权利要求1所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，其特征在于，所述脂肪酸衍生物包括C50-60脂肪酸衍生物混合物和C8-12脂肪酸衍生物混合物；按体积份数计，所述C50-60脂肪酸衍生物混合物为10-25份，所述C8-12脂肪酸衍生物混合物为3-6份。
3.根据权利要求2所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，其特征在于，包括如下体积份的组分：
C50-60脂肪酸衍生物混合物15份；
C8-12脂肪酸衍生物混合物3份；
渗透剂3份；
表面活性剂6份；
消沫剂1份；
抗原修复液80份。
4.根据权利要求2所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，其特征在于，所述C50-60脂肪酸衍生物混合物为长支链脂肪酸中的至少一种物质组成的混合物。
5.根据权利要求2所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，其特征在于，所述C8-12脂肪酸衍生物混合物为中链脂肪酸中的至少一种物质组成的混合物。
6.根据权利要求2所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，其特征在于，所述C50-60脂肪酸衍生物为长支链脂肪酸混合物的环氧化合物。
7.根据权利要求2所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，其特征在于，所述C8-12脂肪酸衍生物为中链脂肪酸混合物的饱和氢化物。
8.根据权利要求1或3所述的一种用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂，其特征在于，所述抗原修复液选自柠檬酸、EDTA/EGTA、Tris、Tris-hcl、Tris-EDTA、柠康酐、金属盐(微波维持)抗原修复液，所述抗原修复液pH6.0-10.0。
9.一种制备如权利要求1-8任一所述用于石蜡切片的非二甲苯脱蜡修复剂的方法，其特征在于，包括按照选定的体积份取所述脂肪酸衍生物、渗透剂、表面活性剂、消沫剂、抗原修复液搅拌混合，磁力搅拌器设置为温度45-55℃、转速200-600r/min，搅拌30-50min，调节pH 6.0-10.0。
10.一种石蜡组织切片的脱蜡-水化-修复一体化方法，包括烤片、脱蜡、水化、抗原修复、孵育抗体、染色、脱水、透明和封片步骤，其特征在于，所述脱蜡、水化和抗原修复是通过将烤好的组织切片放入已预热的权利要求1-8任一所述的非二甲苯脱蜡修复剂中水浴/微波维持85-95℃17min，或者煮沸3分钟后高压1.5-2min后室温冷却一步完成。
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