CN109663125A - 一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种禽用沙门氏菌疫苗，还涉及所述沙门氏菌的应用。一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗,所述疫苗组合物包括鸡肠炎沙门氏菌液和佐剂，其中所述佐剂由以下重量份数的原料组成：水性油佐剂50份，司盘‑80 1.5‑3.5份，吐温‑80 1.5‑2.5份，小肽0.1份，蜂胶1.5‑2.5份。本发明的提供的沙门氏菌灭活疫苗针对性强，对当地流行的沙门氏菌菌株免疫效果好，制备工艺操作简单，成本较低，易于储存，适用于有实验室的规模性养殖场。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种禽用沙门氏菌疫苗，还涉及所述沙门氏菌的应用。
背景技术
随着我国养殖业向集约化、规模化发展，畜禽疾病的发病率逐年上升，新的疾病不断增加，尤其是危害畜禽安全的常见疾病具有迅速蔓延的趋势，成为困扰我国养殖业的重要问题。到目前为止，家禽沙门氏菌感染比较普遍，多为白痢型和肠炎型，抗生素是防治沙门氏菌最有效的手段，但随着沙门氏菌对抗生素的抗药性逐渐升高，抗生素的临床效果逐渐下降，从而影响了抗生素对沙门氏菌感染的预防与治疗效果。为提高疗效，临床抗生素使用剂量高于指导剂量，从而导致畜产品中抗生素残留问题，因此临床上防治沙门氏菌感染急需新的抗生素替代方法或产品。
疫苗的研制技术已发展的很成熟，疫苗常用的佐剂主要有铝胶、蜂胶、白油、中药提取物等。沙门氏菌灭活疫苗能够通过种禽母源抗体，在雏鸡早期做为一种防控沙门氏菌感染的手段，也可以通过早期免疫接种沙门氏菌灭活疫苗，激发雏鸡产生抗体保护机体不受沙门氏菌感染。因此沙门氏菌灭活疫苗的推广应用及产业化前景十分广阔。
沙门氏菌菌株的血清型和免疫原性决定着疫苗的特异性和应答免疫反应。筛选临床常发沙门氏菌感染的血清型菌株，并检测其安全性和免疫原性等生物指标，是研制该疫苗的基础工作。临床上多发的沙门氏菌感染菌株血清型多为肠炎型、鸡白痢、伤寒型等，根据相关规定，鸡白痢需要净化措施，不能研发疫苗，伤寒型临床相对较少，因此针对临床多发的鸡肠炎沙门氏菌感染研制相应的疫苗势在必须。近20年来随着免疫学、分子生物学技术的发展，细菌疫苗的研制与应用更为迅速、广泛。
发明内容
为了解决现有养鸡业中无有效灭活疫苗预防肠炎沙门氏菌感染的问题，本发明提供了一种鸡沙门氏菌灭活疫苗组合物。
本发明的另一目的是提供了上述鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗的应用。
本发明是通过以下措施实现的：
一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗所述疫苗组合物包括鸡肠炎沙门氏菌液和佐剂，其中所述佐剂由以下重量份数的原料组成：水性油佐剂50份，司盘-80 1.5-3.5份，吐温-80 1.5-2.5份，小肽0.1份，蜂胶1.5-2.5份。
优选地，所述沙门氏菌液的制备方法为：选取感染肠炎沙门氏菌的肉鸡，分离出沙门氏菌；将沙门氏菌纯化，将沙门氏菌进行扩大培养，灭活，将灭活的沙门氏菌稀释至其浓度大于5×109CFU/mL，4℃保存备用。
上述鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗的制备方法，采用以下步骤：
（1）配制油相佐剂：将水性油佐剂，司盘-80加热至固体物全溶，混合均匀得油相佐剂；
（2）配制水相：将佐剂吐温-80，蜂胶，小肽，加入到菌液中，混合均匀得水相；
（3）将步骤（1）制备的油相佐剂和步骤（2）制备的水相按质量比1：1乳化均匀即可得到灭活沙门氏菌疫苗。
上述鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗在制备预防或治疗鸡肠炎药物中的应用。
有益效果
本发明的提供的沙门氏菌灭活疫苗针对性强，对当地流行的沙门氏菌菌株免疫效果好，制备工艺操作简单，成本较低，易于储存，适用于有实验室的规模性养殖场。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。
以下实施例和对比例中所用的水性油佐剂购买自北京博奥龙免疫技术有限公司。
实施例1：
一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，通过以下步骤得到的：
佐剂由以下重量份数的原料组成：水性油佐剂50份，司盘-80 1.5份，吐温-80 2.5份，小肽0.1份，蜂胶1.5份。
将沙门氏菌进行扩大培养，灭活，4℃保存备用；配制油相佐剂：按重量配比称取水性油佐剂、司盘-80，加热至固体物全溶，混合均匀；配制水相：将灭活的沙门氏菌稀释至其浓度大于5×109CFU/mL，再将佐剂吐温-80，蜂胶、小肽，加入到菌液中，混合均匀。将油相和水相按1：1乳化均匀即可得到灭活沙门氏菌疫苗。
实施例2：
一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，通过以下步骤得到的：
佐剂由以下重量份数的原料组成：水性油佐剂50份，司盘-80 3份，吐温-80 2.0份，小肽0.1份，蜂胶1.5份。
将沙门氏菌进行扩大培养，灭活，4℃保存备用；配制油相佐剂：按重量配比称取水性油佐剂50份，司盘-80，加热至固体物全溶，混合均匀；配制水相：将灭活的沙门氏菌稀释至其浓度大于5×109CFU/mL，再将佐剂吐温-80、蜂胶、小肽，加入到菌液中，混合均匀。将油相和水相按1：1乳化均匀即可得到灭活沙门氏菌疫苗。
实施例3：
一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，通过以下步骤得到的：
佐剂由以下重量份数的原料组成：水性油佐剂50份，司盘-80 3.5份，吐温-80 1.5份，小肽0.1份，蜂胶2.5份。
将沙门氏菌进行扩大培养，灭活，4℃保存备用；配制油相佐剂：按重量配比称取水性油佐剂50份，司盘-80，加热至固体物全溶，混合均匀；配制水相：将灭活的沙门氏菌稀释至其浓度大于5×109CFU/mL，再将佐剂吐温-80、蜂胶、小肽，加入到菌液中，混合均匀。将油相和水相按1：1乳化均匀即可得到灭活沙门氏菌疫苗。
对比例1
一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，通过以下步骤得到的：
佐剂由以下重量份数的原料组成：水性油佐剂50份，司盘-80 3份，吐温-80 2.0份，蜂胶1.5份。
将沙门氏菌进行扩大培养，灭活，4℃保存备用；配制油相佐剂：按重量配比称取水性油佐剂50份，司盘-80，加热至固体物全溶，混合均匀；配制水相：将灭活的沙门氏菌稀释至其浓度大于5×109CFU/mL，再将佐剂吐温-80、蜂胶，加入到菌液中，混合均匀。将油相和水相按1：1乳化均匀即可得到灭活沙门氏菌疫苗。
对比例2
一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，通过以下步骤得到的：
佐剂由以下重量份数的原料组成：油佐剂50份，司盘-80 3份，吐温-80 2.0份，蜂胶1.5份。
将沙门氏菌进行扩大培养，灭活，4℃保存备用；配制油相佐剂：按重量配比称取油佐剂50份，司盘-80，加热至固体物全溶，混合均匀；配制水相：将灭活的沙门氏菌稀释至其浓度大于5×109CFU/mL，再将佐剂吐温-80、蜂胶，加入到菌液中，混合均匀。将油相和水相按1：1乳化均匀即可得到灭活沙门氏菌疫苗。
效果试验
通过实验数据说明本发明的性能特点：
1.试验方案
选择健康3日龄雏鸡120只，随机分为6组：A组，20只，按照实施例1制备的鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，0.5ml/只，颈部皮下注射免疫；B组，20只，按照实施例2制备的鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，0.5ml/只，颈部皮下注射免疫；C组，20只，按照实施例3制备的鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，0.5ml/只，颈部皮下注射免疫；D组，20只，按照对比例1制备的鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，0.5ml/只，颈部皮下注射免疫；E组，20只，按照对比例2制备的鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，0.5ml/只，颈部皮下注射免疫；F组，20只，空白实验对照，不免疫只攻毒。
2. 评价指标
2.1 临床症状 每天定时观察并记录鸡只的临床症状，如食欲、呼吸、精神状态等。
2.2 病理检查 对死亡鸡只进行解剖，观察病理变化。
2.3 疗效判定 治愈、好转、有效、死亡。
2.4血清学方法 A、B、C、D、E组免疫后7、14、21d，连同对照F组，采通过玻片凝集法血测定血清中抗肠炎型鸡沙门氏菌抗体凝集效价。
2.5免疫攻毒法 疫苗免疫21d后，分别取A、B、C、D、E、F组各10只鸡，胸部肌肉注射相应疫苗制造用沙门氏菌毒株10亿/只；观察10日，剖检所有鸡只。
3结果
3.1 临床症状
健康雏鸡免疫后，精神症状、采食状况均无明显变化。感染沙门氏菌后发病鸡主要表现为精神沉郁、羽毛松乱、食欲不振、饮水增加、肛门粘有色稀粪，严重感染者出现死亡现象。
3.2 病理变化
发病雏鸡剖检可见，肝脏肿大、边缘钝圆有细小的灰白色坏死点，肠道粘膜充血、出血，表面有白色坏死点，部分盲肠肿大。
3.3抗体效价测定（采用玻片凝集测定）
疫苗免疫试验鸡后21天采血，采用玻片凝集方法测定鸡血清抗肠炎型鸡沙门氏菌抗体凝集效价，检测结果见表1。
表1 免疫后沙门氏菌抗体检测结果
3.4免疫攻毒法
5种疫苗免疫后21日攻毒，分别肌肉注射一个最小发病剂量的鸡沙门氏菌菌液，观察记录试验鸡发病死亡情况。试验结果见表2。
表2 三种疫苗免疫鸡攻毒沙门氏菌S2株免疫效力试验结果
按照实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2分别制备的疫苗对鸡沙门氏菌攻毒的免疫保护率（根据临床症状）分别为6/10、6/10、7/10、4/10、2/10保护，对照鸡10/10发病；根据死亡和临床症状来看，免疫保护率分别为6/10、6/10、7/10、4/10、6/10保护，对照鸡10/10发病、4/10死亡。以上结果说明使用本发明制备的疫苗(按照实施例1、实施例2、实施例3)免疫，对控制当地鸡肠炎沙门氏菌感染有很好的效果，均优于按照对比例1和对比例2制备的疫苗。
Claims (4)
1.一种鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗,其特征在于，所述疫苗组合物包括鸡肠炎沙门氏菌液和佐剂，其中所述佐剂由以下重量份数的原料组成：水性油佐剂50份，司盘-80 1.5-3.5份，吐温-80 1.5-2.5份，小肽0.1份，蜂胶1.5-2.5份。
2.根据权利要求1所述的鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗，其特征在于，所述沙门氏菌液的制备方法为：选取感染肠炎沙门氏菌的肉鸡，分离出沙门氏菌；将沙门氏菌纯化，将沙门氏菌进行扩大培养，灭活，将灭活的沙门氏菌稀释至其浓度大于5×109CFU/mL，4℃保存备用。
3.一种权利要求1或2所述的鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗的制备方法，其特征在于，采用以下步骤：
（1）配制油相佐剂：将水性油佐剂，司盘-80加热至固体物全溶，混合均匀得油相佐剂；
（2）配制水相：将佐剂吐温-80，蜂胶，小肽，加入到菌液中，混合均匀得水相；
（3）将步骤（1）制备的油相佐剂和步骤（2）制备的水相按质量比1：1乳化均匀即可得到灭活沙门氏菌疫苗。
4.根据权利要求1-3任一项所述的鸡肠炎沙门氏菌灭活疫苗在制备预防或治疗鸡肠炎药物中的应用。
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