CN109640687A - 家畜用饲料效率改善剂、家畜用促增重饲料、家畜的饲养方法以及抑制甲烷产生的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供能够提高饲料的功能性的家畜用饲料效率改善剂、家畜用促增重饲料、家畜的饲养方法以及抑制甲烷产生的方法。本发明的家畜用饲料效率改善剂包含咖啡成分并利用产生细菌素的乳酸菌进行了发酵处理。咖啡成分可以包含选自羟基肉桂酸及其酯体中的至少一种。产生细菌素的乳酸菌可以为选自德氏乳杆菌乳酸亚种以及短乳杆菌中的至少一种。家畜可以为反刍动物。

Description

家畜用饲料效率改善剂、家畜用促增重饲料、家畜的饲养方法 以及抑制甲烷产生的方法

技术领域

本发明涉及包含咖啡成分的家畜用饲料效率改善剂和家畜用促增重饲料以及家畜的饲养方法和抑制甲烷产生的方法。

背景技术

目前，在例如食品、餐饮业中废弃了大量的诸如食品制造副产物等的食品残渣。该食品残渣在目前多经焚烧或填埋进行处理。因此，一直以来，从有效利用资源的方面出发对于将食品残渣作为食品循环资源并将其饲料化的方法进行了研究。食品残渣的有效利用从实现环境负荷的降低的方面出发也是有效的。

近年来，随着全世界咖啡消耗的增加，其制造废弃物的处理成为问题。由于咖啡豆粕的水分和纤维质的含量高，因而难以直接进行焚烧处理或在饲料中进行再利用。例如，在专利文献1中，作为有效利用咖啡的制造废弃物的尝试，公开了一种利用咖啡豆粕的家畜用饲料。该家畜用饲料是将咖啡豆粕与杆菌属等活菌剂混合、之后在好氧状态下进行发酵而得到的饲料，其咖啡碱含量比发酵前降低，对家畜的适口性得到改善。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2013-179917号公报

发明内容

发明所要解决的课题

但是，专利文献1所公开的家畜用饲料对于改善咖啡豆粕的适口性等、咖啡豆粕向饲料的转用进行了研究，但对于提高饲料的功能性并未进行充分研究。

本发明的目的在于提供能够提高饲料的功能性的家畜用饲料效率改善剂、家畜用促增重饲料、家畜的饲养方法以及抑制甲烷产生的方法。

用于解决课题的手段

本发明中发现，通过使用产生细菌素的乳酸菌进行了发酵处理的咖啡豆粕等，能够提高饲料的功能性，并基于此完成了本发明。

为了实现上述目的，本发明的一个方式的家畜用饲料效率改善剂的特征在于，其包含咖啡成分并利用产生细菌素的乳酸菌进行了发酵处理。

上述咖啡成分优选包含选自羟基肉桂酸及其酯体中的至少一种。上述产生细菌素的乳酸菌优选为选自德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis)以及短乳杆菌(Lactobacillus brevis)中的至少一种。上述家畜优选为反刍动物。

本发明的另一方式的家畜用促增重饲料的特征在于，其含有包含咖啡成分且利用产生细菌素的乳酸菌进行发酵处理而得到的发酵成分。优选上述咖啡成分包含选自羟基肉桂酸及其酯体中的至少一种，上述产生细菌素的乳酸菌为选自德氏乳杆菌乳酸亚种以及短乳杆菌中的至少一种。

本发明的另一方式的家畜的饲养方法的特征在于，将上述家畜用饲料效率改善剂混合在饲料中，提供给或喂食给家畜。

本发明的又一方式的抑制甲烷产生的方法的特征在于，将上述家畜用饲料效率改善剂混合在饲料中，提供给或喂食给家畜，对家畜进行饲养。

发明的效果

根据本发明，能够对家畜用饲料赋予优异的功能性的提高效果。

附图说明

图1是试验例5中的改性剂浓度梯度凝胶电泳的照片。

具体实施方式

(第1实施方式)

下面对实现本发明的家畜用饲料效率改善剂(下面简称为“饲料效率改善剂”)的第1实施方式进行详细说明。本实施方式的包含咖啡成分且利用特定的乳酸菌进行了发酵处理的饲料效率改善剂通过应用于家畜用饲料来改善饲料效率。咖啡成分是咖啡生豆或经焙煎的咖啡豆中所含有的成分，其代表例为咖啡多酚。作为咖啡多酚，可以举出例如羟基肉桂酸、其酯体等。作为羟基肉桂酸的具体例，可以举出例如咖啡酸、肉桂酸、绿原酸等。饲料效率改善剂中所含有的咖啡成分可以仅为一种，也可以为两种以上的组合。

饲料效率改善剂中的咖啡成分来源于含有咖啡成分的材料。作为含有咖啡成分的材料，从获得容易性的方面出发优选使用咖啡豆。作为咖啡豆的种类没有特别限定，可以使用公知的咖啡豆。具体地说，可以举出小种咖啡(Coffea arabica)种、卡尼福拉种罗巴斯塔咖啡(canephora var.robusta)、科尼伦(Conilon)或大果咖啡(Coffea liberica)种、这些的杂种等。咖啡豆可以为生豆的状态，也可以以进行了焙煎等热处理的状态使用。另外，作为含有咖啡成分的材料，可以使用按照公知的提取方法从焙煎咖啡豆中得到的咖啡提取物以及从焙煎咖啡豆中提取了咖啡提取物之后的残渣(咖啡豆粕)等。咖啡提取物的提取方法没有特别限定，可以举出例如水(热水)提取、醇提取和含水醇提取等溶剂提取、蒸气提取以及超临界提取等。分别可以采用公知的提取方法。含有这些咖啡成分的材料可以单独使用一种，也可以组合使用两种以上。在含有这些咖啡成分的材料中，从有效利用资源的方面出发，优选使用咖啡豆粕。

饲料效率改善剂是通过利用产生细菌素的乳酸菌对含有咖啡成分的材料进行发酵处理而得到的。乳酸菌中存在可产生被称为细菌素的抗菌肽的菌种。例如，作为细菌素，广泛已知由乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus.lactis subsp.lactis)产生的乳酸链球菌素A。本实施方式中使用的产生细菌素的乳酸菌只要为在咖啡成分的存在下可产生细菌素的乳酸菌即可以为任一种，优选细菌素的产生能力优异的乳杆菌属。更具体地说，可以举出嗜酸乳杆菌(Lactobacillus.acidophilus)、嗜淀粉乳杆菌(Lactobacillus.amylovorus)、短乳杆菌(Lactobacillus.brevis)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus.crispahtus)、德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus.delbrueckii subsp.lactis)、发酵乳杆菌(Lactobacillus.fermenturm)、加氏乳杆菌(Lactobacillus.gasseri)、戊糖乳杆菌(Lactobacillus.pentosus)等。这些产生细菌素的乳酸菌可以单独使用一种，也可以组合使用两种以上。这些乳杆菌属乳酸菌中，更优选使用在酸性条件下的细菌素的产生能力优异、进而在包含咖啡多酚的环境下的增殖特性也优异的德氏乳杆菌乳酸亚种以及短乳杆菌。

在含有咖啡成分的材料中混合产生细菌素的乳酸菌来制备混合物，之后进行发酵处理。发酵处理优选在厌氧条件下进行。发酵处理可以在静置的状态下进行，也可以在搅拌的同时进行。另外，从缩短处理时间和降低处理劳力的方面出发，优选可以使用公知的家畜用饲料的原料处理装置。另外，也可以根据需要在混合物中混配作为其他成分的有机质材料、作为pH调节剂的有机酸等。可以为了在混合物中赋予糖分、促进发酵而混配有机质材料。作为有机质材料的具体例，可以举出例如豆浆粕、油粕、米糠、麦糠、玉米浆、黑砂糖、大豆油粕、酵母提取粕、啤酒粕等。这些有机质材料可以仅使用一种，也可以组合使用两种以上。有机酸是用于将pH降低至酸性侧、抑制发酵处理中的腐败菌的产生而混配的。作为有机酸的具体例，可以举出例如柠檬酸、乙醇酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、苹果酸、乙酸、草酸、马来酸、富马酸、丙酸、这些有机酸的盐等。这些有机酸可以仅使用一种，也可以组合使用两种以上。

发酵条件可以根据乳酸菌的种类适宜地设定，发酵温度只要为乳酸菌能够增殖的温度就没有特别限定，优选为10～45℃、更优选为25～40℃。发酵时间可以根据乳酸菌的种类和发酵温度适宜地设定，优选为1～14天、更优选为2～4天的程度。若发酵时间短则乳酸菌无法充分增殖，若发酵时间长则乳酸菌的增殖进入衰退期，发酵处理速度减小。

如上所述得到的饲料效率改善剂可以直接提供给或喂食给家畜，也可以混合在家畜用饲料中进行提供或喂食。作为家畜，可以举出例如牛、猪、马、绵羊、山羊、鸟等。另外，作为家畜的用途没有特别限定，可以为食肉用、挤奶用、采毛/皮用等中的任一种。这些之中，优选作为牛、山羊、绵羊等反刍动物用的饲料使用。饲料效率改善剂可改善因反刍动物的胃、特别是第1胃(胃腔)中存在的微生物所致的发酵作用，其结果能够使所摄取的饲料在家畜体内更有效地进行利用。

本实施方式的饲料效率改善剂通过被摄取而发挥出提高所摄取的饲料的功能性的作用、即发挥出优异的饲料效率的改善作用。将本实施方式的饲料效率改善剂应用于挤奶用家畜的情况下，通过饲料效率的改善可期待挤奶量的增加、乳质的改善等效果。另外，在应用于食肉用家畜的情况下，可抑制因氧化所致的肉质的降低并期待维持、改善肉质等效果。另外，还期待被提供或喂食的家畜的增重、体质和健康状态的改善等效果。

根据本实施方式的饲料效率改善剂，能够得到以下的效果。

(1)本实施方式的饲料效率改善剂包含咖啡成分并利用产生细菌素的乳酸菌进行了发酵处理。因此，作为饲料效率的改善效果，在应用于挤奶用的家畜的情况下，可期待挤奶量的增加、乳质的改善等效果；在应用于食肉用家畜的情况下，可抑制因氧化所致的肉质的降低并期待维持、改善肉质等效果。另外，作为饲料效率的改善效果，还可期待被提供或喂食的家畜的增重、体质和健康状态的改善等效果。

(2)作为产生细菌素的乳酸菌使用德氏乳杆菌乳酸亚种或者短乳杆菌的情况下，即使在应用包含作为咖啡多酚的羟基肉桂酸或/和其酯体的材料作为发酵原料的情况下，也可促进发酵处理而不会抑制由产生细菌素的乳酸菌所引起的发酵。由此，例如咖啡豆粕等含有咖啡成分的材料可变化为饲料的功能性进一步提高的材料。

(3)在将本实施方式的饲料效率改善剂提供或喂食给反刍动物的情况下，由存在于反刍动物的胃中的微生物所引起的发酵作用得到改善，其结果，所摄取的饲料更为有效地在家畜体内得到利用。

(4)在使用咖啡豆粕作为含有咖啡成分的材料的情况下，刚用热水提取后的咖啡残渣的水分高，直接以该状态下用作饲料时，在长期保存下可能会发生腐败。但是，通过由产生细菌素的乳酸菌所引起的乳酸发酵处理，发酵材料的pH降低，其结果，由于能够进行长期保存并且利用了咖啡豆粕，因而能够低成本地提供饲料效率改善剂，能够实现资源的有效利用。

(5)例如，作为含有大量多酚的食品残渣，可以举出茶饮料的制造残渣。茶叶中包含的多酚、例如儿茶素、表儿茶素等根据其化学性质被称为丹宁。已知丹宁与蛋白质和金属离子形成强结合的不溶性物质。已知丹宁在胃腔内与例如在反刍动物的消化管内作为饲料的营养成分给予的蛋白质形成丹宁-蛋白质复合体，起到消化抑制作用。因此，茶难以被动物摄取。另一方面，已知在咖啡豆中也含有作为咖啡多酚的绿原酸或绿原酸的分解物，例如含有奎尼酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸等。但是，由于咖啡多酚并不像丹宁那样与蛋白质形成复合体，因而能够容易地应用于家畜等动物。

需要说明的是，上述第1实施方式可以如下进行变更。

·可以将包含咖啡成分并利用产生细菌素的乳酸菌进行了发酵处理的发酵成分构成为家畜用促增重饲料、挤奶家畜用的挤奶量增加剂或乳质改善剂来利用。

·上述实施方式的饲料效率改善剂可以在不妨碍本发明的效果和使用目的的范围内适宜地混配其他添加剂，例如赋形剂、各种维生素、各种矿物质、营养辅助成分等。

(第2实施方式)

下面对实现本发明的家畜的饲养方法的第2实施方式进行详细说明。下面以与第1实施方式的区别技术特征为中心进行说明。

本实施方式的家畜的饲养方法包括将上述第1实施方式的饲料效率改善剂混合在饲料中并提供给或喂食给家畜的方法。作为饲料没有特别限定，可以根据家畜的种类适宜地采用公知的家畜用饲料。

从提高饲料效率改善作用的方面、经济性的方面以及适口性的方面出发，家畜用饲料与饲料效率改善剂的混合比例以质量比计优选为100：0.1～10、更优选为100：1～5。

本实施方式的家畜的饲养方法通过将饲料效率改善剂与家畜用饲料一起提供给或喂食给家畜而发挥出更优异的饲料效率的改善作用。特别是可改善由存在于反刍动物的胃中的微生物所引起的发酵作用、抑制甲烷的产生。更具体地说，可通过减少反刍动物的胃的胃腔内的古菌、增加丙酸、减少氨等而显著地改善胃内的环境。

本实施方式的家畜的饲养方法除了第1实施方式的效果以外还具有以下的优点。

(6)根据本实施方式的家畜的饲养方法，由于将饲料效率改善剂与饲料一起提供给或喂食给家畜，因而发挥出更优异的饲料效率的改善作用。

(7)将本实施方式的家畜的饲养方法应用于反刍动物的情况下，通过使饲料效率改善剂与家畜用饲料一起被摄取，可改善由存在于反刍动物的胃中的微生物所引起的发酵作用，抑制甲烷的产生。由此，能够更有效地发挥出挤奶量的增加、乳质的改善等效果、家畜的增重效果等饲料效率的改善效果。

(8)即使将饲料效率改善剂混合在饲料中，饲料的可消化养分总量(TDN)也不会降低。即，含有咖啡成分的材料通过利用产生细菌素的乳酸菌进行发酵处理而能够提高含有咖啡成分的材料作为饲料成分的价值。

需要说明的是，上述第2实施方式也可以如下进行变更。

·可以构成为下述的抑制甲烷产生的方法：将上述第1实施方式的饲料效率改善剂混合在饲料中，提供给或喂食给家畜，对家畜进行饲养。

实施例

接着举出实施例对上述实施方式更具体地进行说明。需要说明的是，本发明并不限于实施例栏中记载的构成。

<试验例1：产生细菌素的乳酸菌的选定>

通过下述实验1-1,2-1在规定环境下对各种乳酸菌进行培养，对有无增殖进行评价。通过下述实验1-2,2-2对有无产生细菌素样物质进行评价。

(实验1-1)

首先将下表1所示的各种乳酸菌分别利用MRS培养液(DIFCO公司制造)在37℃下预培养16小时。接着重新制备添加有0.1质量％作为咖啡多酚的绿原酸0.5水合物(NacalaiTesque公司制造)的MRS培养液。在加入有绿原酸的MRS培养液中分别接种1％(v/v)进行了预培养的各种乳酸菌，在37℃培养18～24小时。有无乳酸菌的增殖通过测定培养液的浊度(吸光度660nm)来进行判断。将浊度示于表1中的实验1-1栏中。

(实验1-2)

首先对上述实验1-1中进行了浊度测定的培养液进行离心，采集上清。将所得到的上清用蛋白胨食盐缓冲液(pH7.2)稀释至100倍。在培养作为乳酸菌的乳杆菌属而得到的培养液的情况下，在涂抹了枯草杆菌(Bacillus.subtilis PCI 216)的普通琼脂培养基上点样50μL经稀释的上清，在37℃培养24小时，观察有无形成因细菌素样物质的产生所致的阻碍区域(晕轮形成)。在培养作为乳酸菌的乳球菌属而得到的培养液的情况下，在涂抹了胚芽乳酸菌(Lactobacillus.plantarumATCC14917T)的普通琼脂培养基上点样50μL经稀释的上清，在37℃培养24小时，观察有无晕轮的形成。将各乳酸菌有无晕轮形成(+,-)示于表1中的实验1-2栏中。

(实验2-1)

对于MRS培养液，使用乳酸调整为pH3.8，接种1％(v/v)的实验1-1栏中进行了预培养的各种乳酸菌，除此以外通过与实验1-1相同的方法进行实验，判断有无乳酸菌的增殖。将浊度示于表1中的实验2-1栏中。

(实验2-2)

对上述实验2-1中进行了浊度测定的培养液进行离心，采集上清。将所得到的上清用蛋白胨食盐缓冲液(pH7.2)稀释至100倍。有无晕轮的形成通过与实验1-2相同的方法进行实验并判断。将各乳酸菌有无晕轮的形成示于表1中的实验2-2栏中。

[表1]

如表1的实验2-1栏所示，在包含作为咖啡多酚的绿原酸的培养液中，在8种乳酸菌中确认到了晕轮的形成。如实验2-2栏所示，在培养环境为酸性条件下的情况下，在德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis)和短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)这2种乳酸菌中确认到了晕轮的形成。

<试验例2：使用了咖啡豆粕的饲料效率改善剂的制备>

作为含有咖啡成分的原料材料使用咖啡豆粕，制备饲料效率改善剂。除了咖啡豆粕以外，为了促进乳酸菌的发酵，还添加作为糖分的榨出豆浆后的豆粕(豆浆粕)以及麸皮。将原料混合物调整为酸性，为了防止发酵时的腐败，添加食醋作为pH调节剂。使用通过德氏乳杆菌乳酸亚种和短乳杆菌这2种作为产生细菌素的乳酸菌来进行发酵处理而成的乳酸菌混合饲料。将下表2所示的各原料混合、进行脱气，在37℃利用暗室在不搅拌的情况下进行14天的发酵处理，由此得到饲料效率改善剂。

[表2]

原料	含量(质量％)
		咖啡豆粕	80
豆浆粕	7.5
		麸皮	7.5
食醋	4.99
		乳酸菌混合饲料	0.01
合计	100

(含有成分)

作为通过发酵处理得到的饲料效率改善剂的含有成分，对可消化养分总量(TDN)和粗蛋白质(CP)进行了测定。TDN表示饲料中所含有的被家畜消化吸收的养分量的合计值，TDN值越高，表示饲料的能量含量越高。为了进行比较，对于发酵处理前的混合物也同样地对TDN和CP进行了测定。将结果示于表3中。

[表3]

如表3所示确认到，通过使用细菌素乳酸菌的发酵处理提高了咖啡豆粕的TDN和CP。

(抗菌活性)

对于通过发酵处理得到的饲料效率改善剂进行了抗菌活性的测定。将饲料效率改善剂1g和作为比较对照的发酵处理前的混合物1g分别用PBS进行10倍稀释，采集上清。利用日本化学疗法学会标准法测定最小发育阻止浓度(MIC)。作为测试菌使用枯草杆菌(Bacillus.subtilis PCI 219)。另外，作为阳性对照使用已知为大环内脂系抗生素的红霉素。

其结果确认到，将饲料效率改善剂用PBS稀释后的上清的MIC与红霉素1.56μg/mL具有同等的抗菌活性。需要说明的是，发酵处理前的混合物未确认到抗菌活性。

<试验例3：使用了饲料效率改善剂的饲料的喂食试验>

使用试验例2中得到的饲料效率改善剂，制备加入有饲料效率改善剂的饲料(下文称为“含有咖啡的饲料”)。含有咖啡的饲料通过将表4所示的各原料混合来制备。作为比较对照，将表4所示的原料混合，制备不含饲料效率改善剂的饲料(对照饲料)。作为所得到的各饲料中所含有的成分，分别求出干物中的TDN和CP。将各饲料的原料的含量和作为所含有的成分的TDN和CP值分别示于表4中。

[表4]

(喂食试验1)

将所得到的各饲料喂食给奶牛(荷斯坦种：经产数2～3)，作为饲料效率改善作用，对挤奶量进行评价。各喂食组的个体数分别为4头，喂食1个月。分别求出喂食期间1个月中每一头牛的平均饲料摄取量(kg/day)和平均挤奶量(kg/day)。分别测定经过喂食期间后的平均体重以及挤出的牛奶的乳成分的含量。将结果示于表5中。

[表5]

如表5所示确认到，与对照饲料喂食组相比，含有咖啡的饲料喂食组中，每单位体重的挤奶量大幅增加。因而确认到因摄取含有咖啡的饲料所致的饲料效率的改善作用。需要说明的是，在含有咖啡的饲料喂食组中，未确认到会对牛乳品质带来影响的乳成分的变化。

(喂食试验2)

将含有咖啡的饲料喂食给北海道牧场中饲养的奶牛(约1750头、荷斯坦种：经产数2～3)，作为饲料效率改善作用，对挤奶量进行评价。从2013年12月起开始喂食，到2015年4月为止的期间内，分别求出每月中每一头奶牛的平均挤奶量(kg/day)以及挤出的牛乳的乳成分的含量。需要说明的是，为了更容易进行比较，一并示出上一年同月的各评价项目的变化率(上一年同月比)。另外，按照在各月中奶牛的平均体重大致相同来进行调整。将结果示于表6中。

[表6]

如表6所示确认到，从喂食开始月(2013年12月)起挤奶量增加。另外，由上一年同月比确认到，随着喂食期间延长，挤奶量显示出增加倾向。因此确认到了通过含有咖啡的饲料的摄取所致的饲料效率的改善作用。另外确认到，了通过含有咖啡的饲料的长期持续摄取，饲料效率的改善作用进一步提高。需要说明的是，在含有咖啡的饲料喂食组中，未确认到对牛乳的品质带来影响的乳成分的变化。

(喂食试验3)

将含有咖啡的饲料或对照饲料喂食给熊本县内的牧场中饲养的奶牛(荷斯坦种：经产数2～3)，作为饲料效率改善作用，对挤奶量进行比较评价。从2015年7月起开始喂食，到同年8月为止的期间内，分别求出每月中每一头奶牛的平均挤奶量(kg/day)。作为熊本县内的牧场，由牧场A(鹿本地区约200头)、牧场B(鹿本地区约100头)、牧场C(玉名地区约80头)、牧场D(玉名地区约40头)、牧场E(熊本地区约50头)、牧场F(熊本地区约50头)、牧场G(菊池地区约60头)、牧场H(菊池地区约80头)合作。含有咖啡的饲料喂食给牧场A、C、E、G中的各奶牛。对照饲料喂食给牧场B、D、F、H的各奶牛。需要说明的是，为了进行比较，一并示出了即将开始喂食前的6月的平均挤奶量、2013年、2014年的同月的各平均挤奶量。需要说明的是，按照在各月中奶牛的平均体重大致相同的方式进行调整。将结果分别示于表7～10中。

另外，对于由喂食了含有咖啡的饲料的牧场A、C、E、G的各奶牛得到的牛乳，求出2015年8月的各乳成分的含量。将结果示于表11中。需要说明的是，为了进行比较，还一并示出了上一年同月的各乳成分的含量。

[表7]

[表8]

[表9]

[表10]

[表11]

如表7～10所示确认到，喂食了含有咖啡的饲料的各牧场的平均挤奶量与同地区的喂食了对照饲料的各牧场同月的平均挤奶量相比增加。另外确认到与同牧场的上一年或再上一年同月的平均挤奶量相比也增加。需要说明的是，如表11所示，在含有咖啡的饲料喂食组中，未确认到对牛乳的品质带来影响的乳成分的变化。

(喂食试验4)

将试验例2中得到的饲料效率改善剂喂食给育成牛(F1雄性)，作为饲料效率改善作用，对增重进行了评价。按表12所示的组成分成下述组：喂食在配方饲料中添加饲料效率改善剂而制备出的饲料的组(含有咖啡的饲料喂食组)；以及喂食不添加饲料效率改善剂的配方饲料的组(对照饲料喂食组)。各组的个体数为5头。本试验中使用的配方饲料中的CP的含量为16质量％、TDN为72质量％。求出3、5、7、9月龄的育成牛的平均体重。将结果示于表12中。

[表12]

如表12所示确认到，与对照饲料喂食组相比，含有咖啡的饲料喂食组中，肥育牛的增重量更大。因此确认到了由含有咖啡的饲料的摄取所带来的饲料效率的改善作用。

<试验例4：饲料效率改善剂对胃腔内的影响1>

对于将由试验例3得到的含有咖啡的饲料喂食给奶牛(荷斯坦种：经产数2～3)时对胃腔内的影响进行评价。作为比较对照，使用试验例3中记载的比较饲料。各喂食组的个体数分别为4头，设定1个月的喂食期间。1个月的喂食期间完成后，取出各喂食组的胃腔内的胃液，对胃液中的各挥发性脂肪酸(VFA)的含量和氨浓度进行测定。分别求出作为VFA的乙酸、丙酸以及丁酸的含量。将结果示于表13中。

[表13]

如表13所示确认到，通过含有咖啡的饲料的摄取，胃腔中的丙酸量增加、氨浓度降低。丙酸的增加被认为是由于甲烷的能量转变成丙酸所致的。因此提示了所摄取的饲料能量以甲烷形式被放出的量减少。另外，由氨浓度的减少也提示了肝·肾功能的负荷减轻、身体的应力减轻。

<试验例5：饲料效率改善剂对胃腔内的影响2>

(菌体的增殖试验(DGGE分析试验))

制备相对于基础饲料30kg/天混合1.5kg/天的通过试验例3得到的含有咖啡的饲料而成的饲料。将该饲料喂食给奶牛(荷斯坦种：经产数2～3)3头(A、B、C)。喂食1周后通过DGGE分析胃腔内菌群的变化。

通过DGGE(改性剂浓度梯度凝胶电泳)测定对于喂食前的各个体(A、B、C)、喂食1周后的各个体(A’、B’、C’)的菌群的经时变化进行评价。DGGE为下述的试验：通过将具有浓度梯度的DNA改性剂、例如含有脲等的凝胶用于电泳，基于菌种固有的GC比和AT比来进行DNA的分离。对于由电泳得到的DNA条带进行碱基分析，由此推测作为各条带来源的菌株的归属分类组。

在本分析试验中采用的公知的DGGE和碱基分析。即，在本试验中，在电泳中使用10％聚丙烯酰胺凝胶和作为DNA改性剂的脲(具有30～60％的浓度梯度)，在200V进行4小时电泳。电泳后，将凝胶用SYBER Green(Takara Bio公司制造)染色，在UV(310nm)照射下对发光的条带进行拍照。将电泳的结果示于图1。需要说明的是，图1中，为了容易目视确认条带的位置，将电泳结果的照片进行黑白反转来表示。

如图1所示，未确认到因含有咖啡的饲料所致的胃腔中菌群的显著变化。

(古菌的测定)

利用古菌探针对喂食前的各个体(A、B、C)、喂食1周后的各个体(A’、B’、C’)的胃腔内的古菌的量进行PCR定量。作为古菌探针应用古菌用16SrDNA V3区域(约175bp)。

将利用喂食前和喂食后的各3头奶牛的胃腔液进行了样品制备的DNA作为模板，反复进行1/3稀释，对于所得到的稀释液实施PCR定量。若从稀释倍率高的稀释液中检测出DNA，则提示存在有大量的古菌。将结果示于表14中。表中，在各稀释液中，将发现了古菌的情况表示为+、将未发现古菌的情况表示为－。。

[表14]

由表14所示的结果确认到，包括甲烷菌在内的古菌通过含有咖啡的饲料的喂食从1/9减少至1/243。需要说明的是，甲烷菌的减少被认为是由氢离子浓度的降低所致的甲烷菌的饵食不足等所致的。

Claims (8)

1.一种家畜用饲料效率改善剂，其包含咖啡成分并利用产生细菌素的乳酸菌进行了发酵处理。

2.如权利要求1所述的家畜用饲料效率改善剂，其中，所述咖啡成分包含选自羟基肉桂酸及其酯体中的至少一种。

3.如权利要求1或2所述的家畜用饲料效率改善剂，其中，所述产生细菌素的乳酸菌为选自德氏乳杆菌乳酸亚种以及短乳杆菌中的至少一种。

4.如权利要求1～3中任一项所述的家畜用饲料效率改善剂，其中，所述家畜为反刍动物。

5.一种家畜用促增重饲料，其含有包含咖啡成分且利用产生细菌素的乳酸菌进行发酵处理而得到的发酵成分。

6.如权利要求5所述的家畜用促增重饲料，其中，

所述咖啡成分包含选自羟基肉桂酸及其酯体中的至少一种，

所述产生细菌素的乳酸菌为选自德氏乳杆菌乳酸亚种以及短乳杆菌中的至少一种。

7.一种家畜的饲养方法，其中，将权利要求1～4中任一项所述的家畜用饲料效率改善剂混合在饲料中，提供给或喂食给家畜。

8.一种抑制甲烷产生的方法，其中，将权利要求1～4中任一项所述的家畜用饲料效率改善剂混合在饲料中，提供给或喂食给家畜，对家畜进行饲养。