CN109568328A - 一种用于预防和治疗hiv感染的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种替诺福韦艾拉酚胺(tenofovir alafenamide)和cabotegravir(CAB)的药物组合物，具有协同抗HIV活性，可用于预防和治疗HIV感染，组合物具有抑制HIV作用强，不易产生耐药性的优点。

Description

一种用于预防和治疗HIV感染的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种替诺福韦艾拉酚胺（tenofovir alafenamide)和cabotegravir(CAB，GSK744, GSK1265744)的药物组合物，以及该组合物用于制备预防和治疗HIV感染的药物中的用途，属于医药技术领域。

背景技术

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）是一种逆转录病毒，可以引起获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS），又名艾滋病。从1981年发现首例艾滋病患者开始，人类经过长达36年艰难探索，目前可以实现功能性治愈，但存在复发的风险。HIV病毒具有高变异性和传染性，在治疗过程中容易产生获得耐药性（acquired drug resistance），获得性耐药病毒株可传播给未接受抗逆转录病毒治疗的患者，从而导致HIV传播耐药（transmitted drug resistance）。HIV获得耐药性和传播耐药是导致抗逆转录病毒治疗（HAART）疗效的下降或者失败的主要原因，严重限制了首次用药患者的治疗选择。耐药性HIV在人群中的传播已经成为非常严重的公共卫生问题,在局部地区，未接受治疗的HIV感染者中所检测到的HIV耐药突变，绝大多数（84.8%）来源于其他已经过治疗的HIV感染者。

高效抗逆转录病毒治疗（highly active anti-retroviral therapy, HAART）是一种新兴方法，在抑制HIV复制方面显示出协同效应，能够明显改善HIV感染者的预后（AnnIntern Med. 2001; 135: 17-26）。目前临床最常用的抗逆转录病毒药物超过25种，根据作用机制的不同，抗逆转录病毒药物可分为逆转录酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、整合酶抑制剂、融合抑制剂等；然而，HIV病毒对核苷酸逆转录酶抑制剂（NtTRIs）、核苷逆转录酶抑制剂（NRTIs）、非核苷逆转录酶抑制剂（NNRTIs）、蛋白酶抑制剂甚至是更新型的融合抑制剂的耐药是影响HAART结局的重要因素。治疗方案不够优化或者患者依从性较差等原因容易导致获得性耐药（acquired drug resistance），获得性耐药病毒株可传播给未接受HAART的患者，从而导致HIV传播耐药（transmitted drug resistance），HIV传播耐药可导致HAART疗效的下降或者失败，严重限制了首次用药患者的治疗选择（J Infect Dis. 2015; 212: 5-7）。在临床上，对于耐药患者的治疗常采取提高活性药物血浆水平的方式，使抗逆转录病毒药物达到抗变异HIV病毒的有效浓度，结果导致药量负担更大，处方治疗的不顺应性和副作用进一步增加。因此，对于HIV的一线治疗来说，需要设计出一种药量负荷更低，疗效更好，毒性更低和给药方案更简化的治疗组合物，该组合物对野生型HIV病毒以及越来越普遍的耐药性HIV病毒均有显著效果，能抑制耐药病毒的再现，且能长期有效。

替诺福韦（tenofovir）是一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂，其二吡呋酯富马酸盐（TDF）是艾滋病的一线治疗药物，能有效抑制逆转录病毒的复制和转染，但仍然会出现耐药问题，据The TenoRes Study Group等2016年5月发表于《Lancet Infectious Diseases》第572页的研究结果显示，在南非，TDF联合依法韦仑和胞嘧啶治疗1年的耐药率约为7.5~17.5%。替诺福韦艾拉酚胺是替诺福韦的另一种前药，在临床试验中，该药已被证实在低于TDF十分之一剂量时，就具有非常好的抗病毒效果，同时可显著改善肾功能和骨骼参数。每天给予单剂量（约5mg）半富马酸替诺福韦艾拉酚胺（替诺福韦艾拉酚胺的一种药用盐形式，简称TAF）就可以显著抑制HIV，大大降低了给药频率。在临床耐药性方面，一些文献重点比较研究了TDF和TAF的耐药性差异，据Nicolas等2015年10月发表于《Antimicrobial Agentsand Chemotherapy》第5921页表2中数据显示，TAF和TDF在各耐药位点的EC₅₀ FC值基本相同，推测TAF与TDF具有相当的耐药性。随着临床使用时间的推移，TAF的耐药性将成为一个不可回避的问题。

Cabotegravir（CAB，GSK744, GSK1265744）是一种整合酶抑制剂，可以口服，也可以肌肉或皮下注射。每天口服一次剂量为30mg的CAB，可以有效地抑制HIV。

替诺福韦艾拉酚胺 Cabotegravir

本发明人研究发现，通过将替诺福韦艾拉酚胺和CAB组合使用，可以获得显著的协同抗HIV作用，在较低用量下就可发挥良好的抗HIV作用，能更长期地抑制病毒、限制耐药HIV变异体的出现，且具有较低的毒副作用。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种包含替诺福韦艾拉酚胺和CAB的药物组合物，该组合物能首次用于HIV患者的长期治疗。

本发明的目的之一是提供一种包含替诺福韦艾拉酚胺和CAB的药物组合物，每天仅需给药一次即可达到较好的HIV治疗效果。组合物的化合物可以按照下述方式给药：（1）组合物中的各化合物同时给药；（2）组合物中的各化合物分开给药。

本发明产品中的活性成分用量以治疗有效量为基础，治疗有效量意为在每次摄入制剂之间的时间内足以施加充分HIV抑制效果的量。

本发明的目的之一是提供一种包含替诺福韦艾拉酚胺和CAB的药物组合物，该组合物不仅在化学上是稳定的，并且还具有协同作用和/或可以降低单独活性药物或者两者的副作用。

本发明的目的之一是提供一种包含替诺福韦艾拉酚胺和CAB药物组合物，具有与目前市售抗HIV活性药物截然不同的耐药曲线，能更彻底地长期抑制病毒，限制耐药HIV变异体的出现。

本发明的目的之一是提供一种包含替诺福韦艾拉酚胺和CAB的药物组合物，其中组合中的每个活性药物可以单独使用或被联合配制成组合物的单位制剂。该组合物单元制剂可供口服或其他途径给药，且所述单位制剂具有良好的化学稳定性。

本发明目的之一是提供一种包含替诺福韦艾拉酚胺和CAB的药物组合物及其制剂，其可用于野生型HIV病毒和耐药性HIV病毒传播和感染治疗。

本发明目的之一是提供一种制备前述组合物和制剂的方法，包括将替诺福韦艾拉酚胺和CAB组合成为药物组合物或制备成制剂，以获得更好的抗病毒效果。

本发明提供的抗HIV药物组合物中，所述替诺福韦艾拉酚胺进一步包括替诺福韦艾拉酚胺的药学上可接受的盐，例如延胡索酸盐、半富马酸盐、富马酸盐、钠盐等，优选半富马酸盐，即TAF。

本发明提供的抗HIV药物组合物中，所述CAB进一步包括CAB的药学上可接受的盐，例如钠盐、钾盐等，优选钠盐；所述CAB进一步包括CAB的对映体、非对映体、非对映体混合物、对映体混合物及其对映体和非对映体的混合物，及其药学上可接受的盐。

本发明提供的抗HIV药物组合物产品可以是包含替诺福韦艾拉酚胺和CAB的单位制剂，还可以进一步包含一个或者多个其他抗HIV药物活性成分或治疗药物。

其中，其他抗HIV药物活性成分包含HIV蛋白酶抑制剂，HIV非核苷酸抑制剂或HIV反转录酶非核苷酸抑制剂，HIV核苷酸抑制剂或HIV反转录酶核苷酸抑制剂，HIV整合酶抑制剂，HIV非催化部位（或变构）整合酶抑制剂，HIV进入抑制剂（如CCR5抑制剂，gp41抑制剂,CD4连接抑制剂等），CXCR4抑制剂，gp120抑制剂，G6PD和NADH氧化抑制剂，HIV疫苗，HIV成熟抑制剂，潜在的逆转药物（如组蛋白去乙酰化酶抑制剂，蛋白酶小体抑制剂，蛋白激酶C激活剂以及BRD4抑制剂），靶向于HIV衣壳的药物（衣壳抑制剂，如衣壳聚合抑制剂或破坏衣壳的药物，HIV核衣壳蛋白p7抑制剂，HIV p24衣壳蛋白抑制剂），药代动力学促进剂，免疫相关治疗药物（如Pd-1调节剂，Pd-L1调节剂等），CTLA4调节剂，Toll样受体调剂剂，IL-15调剂剂，HIV基因，HIV抗体，双特异性抗体，抗体样治疗蛋白（如DARTs，Duobodies，Bites，XmAbs，TandAbs，Fab derivatives等），HIV p17基质蛋白抑制剂，IL-13解抗剂，肽基脯氨酸顺反异构酶A调节剂，蛋白质二硫化物异构酶，c5a受体补体拮抗剂，DNA甲基转移酶抑制剂，HIVvif基因调节剂，Vif二聚物解抗剂，HIV-1病毒感染因子抑制剂，TAT蛋白抑制剂，HIV-1 nef调节剂，造血细胞激酶酪氨酸激酶调节剂，混合系列蛋白激酶-3（MLK-3）抑制剂，HIV-1剪切抑制剂，Rev蛋白抑制剂，整合素解抗剂，核蛋白抑制剂，剪切因子调节剂，COMM结构域包括蛋白1调节剂，HIV核糖核酸酶H抑制剂，四环素调节剂，CDK-9抑制剂，树突状细胞表面特异性非整联蛋白1抑制剂，HIV GAG 蛋白抑制剂，HIV POL蛋白抑制剂，补体因子H调节剂，泛素连接酶抑制剂，脱氧胞苷激酶抑制剂，周期素依赖性蛋白激酶抑制剂，原蛋白转化酶PC9刺激剂，ATP依赖的RNA解旋酶DDX3X抑制剂，逆转录酶启动复合物抑制剂，P13K抑制剂，以及在以下专利中提到的药物：WO 2013/006738（吉利德科学公司），US 2013/0165489（宾夕法尼亚大学），WO 2013/091096A1（勃林格殷格翰公司），WO2009/062285（勃林格殷格翰公司），US20140221380（日本烟草产业公司），US20140221378（日本烟草产业公司），WO2010/130034（勃林格殷格翰公司），还有其他治疗HIV的药物，和它们的任意组合。

优选为HIV蛋白酶抑制剂，HIV非核苷酸或逆转录酶非核苷酸抑制剂，HIV核苷酸或逆转录酶核苷酸抑制剂，HIV整合酶抑制剂，HIV非催化位点（或变构体）整合酶抑制剂，药代动力学促进剂，以及它们的任意组合。

其他的HIV治疗药物包括：依法韦仑+恩曲他滨，利匹韦林+恩曲他滨，埃替格韦+cobicistat +恩曲他滨，拉米夫定+奈韦拉平+齐多夫定，硫酸阿扎那韦+ cobicistat，地瑞纳韦+ cobicistat，依法韦仑+拉米夫定，Vacc-4x疫苗+罗米地辛，APH-0812，雷特格韦+拉米夫定，KALETRA（ALUVIA，洛匹那韦+利托那韦），硫酸阿扎那韦+利托那韦，COMBIVIR（齐多夫定+拉米夫定，AZT+3TC），EPZICOM（Livexa, 硫酸阿扎那韦+拉米夫定，ABC+3TC），TRIZIVIR（硫酸阿扎那韦+齐多夫定+拉米夫定，ABC+AZT+3TC），恩曲他滨，拉米夫定，阿扎那韦+ cobicistat，doravirine+拉米夫定。

上述HIV蛋白酶抑制剂包括安普那韦，阿扎那韦，福沙那韦，福沙那韦钙，茚地那韦，硫酸茚地那韦，洛匹那韦，利托那韦，奈非那韦，甲磺酸奈非那韦，沙奎那韦，甲磺酸沙奎那韦，替拉那韦，brecanavir，地瑞纳韦，DG-17，TMB-657（PPL-100），TMC-310911和TMB-657；

上述HIV非核苷酸或逆转录酶非核苷酸抑制剂包括地拉夫定，甲磺酸地拉夫定，奈韦拉平（+），依曲韦林，dapivirine，doravirine，利匹韦林，依法韦仑，KM023，VM-1500，香菇多糖，AIC-292；

上述HIV核苷酸或逆转录酶核苷酸抑制剂的筛选包括VIDEX和VIDEX EC（地达诺新，ddl），齐多夫定，恩曲他滨，地达诺新，司他夫定，扎西他滨，拉米夫定，censavudine，阿巴卡韦，硫酸阿巴卡韦，氨多索韦，elvucitabine，阿洛夫定，phosphazid，福齐夫定替酯， 阿普瑞西他滨，氨多索韦，KP-1461，fosalvudine tidoxil，阿德福韦，阿德福韦酯，festinavir；

上述HIV整合酶抑制剂（除度鲁特韦）包括姜黄素，姜黄素衍生物，菊苣酸，菊苣酸衍生物，3，5-二咖啡酰奎宁酸，3，5-二咖啡酰奎宁酸衍生物，金精三羧酸，金精三羧酸衍生物，咖啡酸苯酯，咖啡酸苯酯衍生物，酪氨酸磷酸化抑制剂，酪氨酸磷酸化抑制剂衍生物，槲皮黄酮，槲皮黄酮衍生物，雷特格韦和埃替格韦；

上述HIV非催化位点或变构整合素酶抑制剂（NCINI）包括CX-05168和CX-1442；

上述HIV gp41抑制剂包括恩夫韦地，西夫韦肽和艾博卫泰；

上述HIV进入抑制剂包括cenicriviroc；

上述HIV gp120抑制剂包括Radha-108（Receptol）和BMS-663068；

上述CCR5 抑制剂包括aplaviroc，Vicriviroc，马拉韦罗，Cenicriviroc，PRO-140，Adaptavir（RAP-101），尼非韦罗（TD-0232），TD-0680，TBR-220（TAK-220）和vMI（Haimipu）；

上述CD4附着抑制剂包括Ibalizumab；

上述CXCR4抑制剂包括普乐沙福，ALT-1188，vMIP和Haimipu；

上述药代动力学促进剂包括cobicistat和利托那韦；

上述免疫依赖性药物包括derma Vir，白介素-7，lexgenleucel-T（VRX-496），羟氯喹（羟化氯喹），阿地白介素（阿地白介素，IL-2），α干扰素，α干扰素-2b，α干扰素-n3，聚乙二醇α干扰素，γ干扰素，羟基脲，霉酚酸酯（MPA）及其衍生物吗替麦考酚酯（MMF），WF-10，三唑核苷，IL-2，IL-2 XL，IL-12，聚合物/聚乙烯亚胺（PEI），聚氯乙烯树脂，VGV-1，MOR-22，toll样受体调节剂（TLRl，TLR2，TLR3，TLR5，TLR6，TLR7，TLR8，TLR9，TLR10，TLR11，TLR12，TLR13），BMS-936559，rintatolimod和IR-103；

上述HIV基因包括多肽疫苗，重组亚单位蛋白疫苗，活载体疫苗，DNA疫苗，病毒样粒子疫苗（伪病毒疫苗），源于CD4肽的疫苗，重组疫苗，rgp120（AIDSVAX），ALVAC HIV（Vcp1521）/AIDSVAXB/E（gp120）（RV144），Remune，ITV-1，Contre Vir，Ad5-ENVA-48，DCVax-001（CDX-2401），PEP-6409，vacc-4x，Vacc-C5，VAC-3S，多级DNA重组腺病毒-5（rAd5），Pennvax-G，VRC-HIV，MAB060-AB，AVX-101，Tat Oyi 疫苗，AVX-201，HIV-LAMP-vax，Ad35，Ad35-GRIN，NAcGM3/VSSP ISA-51,聚ICLC疫苗佐剂，TatImmune，GTU-multiHIV（FIT-06），AGS-004，pg140[delta]V2.TV1+MF-59，rVSVIN HIV-1，HIV-1空白疫苗，SeV-Gag疫苗，AT-20，DNK-4，Ad35-GRIN/ENV，TBC-M4，HIVAX，HIVAX-2，NYVAC-HIV-PT1，GOVX-B21，ThV-01，TUTI-16，VGX-3300，TVI-HIV-1，Ad-4（Ad4-env Clade C+Ad4-mGag，EN41-FPA2，PreVaxTat，TL-01，SAV-001，AE-H，MYM-V101，CombiHIVvac，ADVAX,MYM-V201，单体gp120 HIV亚型C疫苗（Novartis），MVA-CMDR，MVATG-17401，ETV-01，CDX-1401，rcAd26 MOS1，HIV-Env和DNA-Ad5gap/pol/nef/nev（HVTN505）；

上述HIV抗体，双特异性抗体和类抗体治疗蛋白（如DARTs,Duobodies,Bites,XmAbs,TandAbs，Fab衍生物）包括BMS-936559，TMB-360和那些靶向于HIV gp120或gp41的药物包括巴维昔单抗，UB-421，C2F5，C2G12,C4E10,C2F5+C2G12+C4E10，3-BNC-117，KD-247，PGT145，PGT121，MDX010（Ipilimumab），VRC01，A32，7B2，10E8，VRC-07-523和VRC07；

上述潜在的逆转药物包括脱乙酰化酶抑制如罗咪酯肽，伏立诺他，帕比司他；蛋白酶小体抑制剂如万珂；蛋白激酶C激活剂（PKC）如Indolactam，Prostratin，巨大戟醇B和DAG-类酯，离子霉素，GSK-343，PMA，SAHA，BRD4抑制剂，IL-15，JQ1，两性霉素B和disulfram；

上述HIV核蛋白壳p7（NCp7）抑制剂包括偶氮二甲酰胺；

上述HIV成熟抑制剂包括BMS-955176和GSK-2838232；

上述PI3K抑制剂包括idelalisib，AZD-8186，buparlisib，CLR-457，pictilisib，来那替尼，XL-765，gedatolisib，VS-5584，copanlisib，CAI乳清酸，哌立福辛，RG-7666,GSK-2636772，DS-7423，panulisib，GSK-2269557，GSK-2126458，CUDC-907，PQR-309，INCB-040093，Pilaralisib，BY-1082439，puquitinib 甲磺酸，SAR-245409，AMG-319，RP-6530，ZSTK-474，MLN-1117，SF-1126，RV-1729，sonolisib，LY-3023414，SAR-260301和CLR-1401；

其他治疗药物活性成分还包括WO 2004/096286（吉利德科学公司），WO2006/110157（吉利德科学公司）；WO2006/015261（吉利德科学公司），WO 2013/006738（吉利德科学公司）；US2013/0165489（宾西法尼压大学），US20140221380（日本烟草公司），US20140221378日本烟草公司），WO2013/006792（Pharma Resources），WO2009、062285（勃林格殷格翰公司），WO2010/130034勃林格殷格翰公司），WO2013/091096A1（勃林格殷格翰公司），WO2012/003497（吉利德科学公司），WO2014/100323（勃林格殷格翰公司），WO2012/145728（勃林格殷格翰公司），WO2012/003497（勃林格殷格翰公司），WO2014/100323（勃林格殷格翰公司），WO2012/145728（勃林格殷格翰公司），WO2013/159064（勃林格殷格翰公司）和WO2012/003498（勃林格殷格翰公司）中已经公开的药物；

其他治疗HIV的药物还包括REP 9，Cytolin，CYT-107，阿拉泊韦，凝集素，MK-9507，AG-1105，TR-452，MK-8591，REP 9，NOV-205，IND-02，metenkefalin，PGN-007，乙酰吗喃，gamimune，SCY-635，催乳激素，1，5-二咖啡酰奎宁酸，BIT-225，RPI-MN，VSSP，Hlviral，IMO-3100，SB-728-T，RPI-MN，VIR-576，HGTV-43，MK-1376，rHIV7-shl-TRA-CCR5RZ，MzaF 基因治疗，blockAaide，ABX-464，SCY-635，naltrexone，AAV-eCD4-Ig基因治疗，TEV-90110，TEV-90112，去铁酮和PA-1050040（PA-040）。

替诺福韦艾拉酚胺和CAB，或者他们与一种或多种药物的随意组合，这些一种或多种药物可以是同一类药物，也可以是不同类药物。

替诺福韦艾拉酚胺和CAB，或者他们与一种或多种其他药物的组合如雷特格韦，恩曲他滨，马拉维若，恩夫韦地，硫酸阿巴卡韦+拉米夫定（ABC+3TC），Trizivir（硫酸阿巴卡韦+齐多夫定+拉米夫定，ABC+ACT+3TC），阿德福韦，阿德福韦酯，埃替格韦+ cobicistat +恩曲他滨），利匹韦林，盐酸利匹韦林，雷特格韦+拉米夫定， Eviplera+ ripivirine +恩曲他滨），Cobicisstat，依法韦仑+恩曲他滨，硫酸阿扎那韦+cobicistat，阿扎那韦+cobicistat，地瑞纳韦+ cobicistat，阿扎那韦，硫酸阿扎那韦，埃替格韦，Aluvia/Kaletra(洛匹那韦+利托那韦），利托那韦，硫酸阿扎那韦+利托那韦，地瑞纳韦，催乳激素，膦沙那韦，膦沙那韦钙，依法韦仑，Combivir（齐多夫定+拉米夫定，AZT+3TC），依曲韦林，奈非那韦，甲磺酸奈非那韦，干扰素，地达诺新，司他夫定，茚地那韦，硫酸茚地那韦，齐多夫定，奈韦拉平，沙奎那韦，甲磺酸沙奎拉韦，阿地白介素，扎西他滨，替拉那韦，安普那韦，地拉夫定，甲磺酸地拉夫定，Radha-108（Receptol），依法韦仑+拉米夫定，phosphazid，拉米夫定+奈韦拉平+齐多夫定，阿巴卡韦，硫酸阿巴卡韦。

替诺福韦艾拉酚胺和CAB 可与上述活性成分或治疗药物同时给药或分开/逐步给药。当逐步给药时，该药物组合物可以1次，2次或者多次给药。

在组合物中所使用的各化合物适宜的量为：当单独使用时表现出抗病毒活性的量，作为抗HIV药物组合物，所需要的替诺福韦艾拉酚胺及CAB组合物的量是可变的，需要考虑的因素包括给药途径和制剂的性质，体重，年龄和一般情况以及所治疗疾病的性质和严重性。

通常，将替诺福韦艾拉酚胺给予人类用于治疗HIV感染时，在口服给药的情况下，每个成人每日给予剂量为1 mg~50 mg，可给予1次、2次或3次，优选剂量5~25mg/天，一天1-2次。

通常，在口服给药的情况下，CAB适宜的剂量为每个成人每日给予剂量为0.05~3000 mg，优选剂量约0.1~1000 mg，更优选的，剂量为0.05~500 mg。

CAB也可用于肌注给药，成人HIV感染治疗的剂量为50-3000mg，优选100-1000mg。

除另外说明，所有活性组分的重量都根据药物原型来计算，在使用TAF和CAB或其衍生物及其他药学上可接受的盐时，活性组分重量应按比例调整。

在常规方法中，可以将组合物的成分，也称作活性组分，给予动物，例如哺乳动物，包括人，用于治疗疾病。

尽管可以将组合物中活性组分以原化学药品形式给予，但优选以药物制剂形式存在。本发明药物制剂包含本发明组合物和一种或多种可药用载体或赋形剂。载体必须是与制剂中其它组分相容的并且是对受试者无害的。

本发明的药物制剂可以被配制成各种用于不同给药类型的形式。本发明的药物制剂优选被配制成适于，特别是适于口服、直肠、经皮、鼻内或吸入给药或通过非胃肠注射给药的单位剂型。优选为口服给药。

在制备口服剂型的制剂时，任何常规的药学介质都可以被使用，例如就口服液体制剂（如混悬液、糖浆剂、酏剂、乳剂和溶液）来说，溶剂包含水、油、醇等；就粉末、丸剂、胶囊和片剂来说，固体载体包含淀粉、糖、高岭土、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。由于其给药方便，因此片剂和胶囊代表最有利的口服剂量单位形式，优选为片剂。对于胃肠外组合物，载体将通常包含无菌水，至少占大部分，尽管可以包括其它成分，例如用于助溶的成分。例如可以制备可注射的溶液，其中载体包含生理盐水、葡萄糖溶液或生理盐水和葡萄糖溶液的混合物。也可以制备可注射的混悬液，就其而言可以使用适宜的液态载体、混悬剂等。还可以与长效缓释载体制备成长效注射剂。

本发明的组合物能够被制成口服片的形式，其进一步包含药学上可接受的赋形剂，其重量为150mg到600mg之间，适宜的是200mg到400mg。根据本发明包含活性成分的适宜口服片片重为200mg到1500mg，适宜的是500mg到1250mg，更适宜的是600mg到1100mg。

医师根据患者病情的严重程度以及患者的体重、性别或者可能的其它参数例如每个药物的吸收、生物分布、代谢和排泄速率的个体差异以及本领域技术人员已知的其它因素，确定给药的确切剂量。

发明益处

本发明的联合抗HIV组合物具有协同抗HIV作用，有着与市售组合物截然不同的耐药曲线，效果更好；应用剂量较低，日服一次均有效，能显著降低患者药量负荷；能更彻底地长期抑制病毒，限制耐药HIV变异体的出现，且具有较低的与药物相关的毒副作用；能长时间用作首次用药患者的一线治疗；可以做为单位制剂使用，也可以联合配制添加一个或者多个其他抗HIV药物活性成分或治疗药物；可以制备成多种剂型，满足不同病人的需求。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，但不是对本发明范围的限制，本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1：片剂制剂

通过将组分与聚乙烯吡咯烷酮的溶液湿法制粒，然后加入硬脂酸镁并压片来制备A、B和C，以下是1000片的处方用量。

制剂A：

TAF 5 g

CAB 45 g

乳糖 B.P. 378 g

聚乙烯吡咯酮 B.P. 27 g

羧乙酸淀粉钠 36 g

硬脂酸镁 9 g

500 g

制剂B：

TAF 30 g

CAB 20 g

乳糖 B.P. 270 g

微晶纤维素 PH101 108 g

聚乙烯吡咯酮 B.P. 27 g

羧乙酸淀粉钠 36 g

硬脂酸镁 9 g

500 g

制剂C：

TAF 25g

CAB 25g

乳糖 B.P. 270g

淀粉 90g

聚乙烯吡咯酮 B.P. 9g

硬脂酸镁 8g

427g

通过将混合的组分直接压片来制备下列制剂D和E。制剂E中的乳糖属于直接压片类型（Dairy Crest “Zeparox”），以下是2000片的处方量。

制剂D：

TAF 40g

CAB 60g

预胶化淀粉 300g

400g

制剂E：

TAF 20g

CAB 80g

乳糖 B.P. 300g

微晶纤维素 200g

600g

制剂F：缓释制剂

通过将组分与聚乙烯吡咯烷酮溶液湿法制粒，然后加入硬脂酸镁并压片来制备制剂，以下是2000片的处方量

制剂FTAF 30g

CAB 70g

羟丙基甲基纤维素 （Methocel K4M Premium） 224g

乳糖 B.P. 106g

聚乙烯吡咯酮 B.P. 56g

硬脂酸镁 14g

500g

药物经过大约6~8小时开始释放并在12小时结束释放。

实施例2：胶囊剂制剂

通过将上述实施例1中制剂D的组分混合并填充到两部分硬明胶胶囊中制备胶囊制剂。用类似方法制备制剂G，以下是2000粒胶囊的处方量；

制剂G：

TAF 50g

CAB 50g

乳糖 B.P. 286g

羟乙酸淀粉钠 50g

硬脂酸镁 4g

440g

实施例3：可注射制剂

以下是1000只注射剂的处方量

TAF 15g

CAB 25g

盐酸溶液 0.1M或氢氧化钠溶液0.1M适量至pH 4.0~7.0

注射用水适量至 10 L

实施例4：肌注用制剂

以下是1000支注射剂的处方量

TAF 10g

CAB 5g

苯甲醇 1g

Glycofurol 75 1.45 g

注射用水适量至 3L

将活性组分溶解在Glycofurol中，加入苯甲醇并溶解，加注射用水至3L。然后，将混合物通过无菌微孔滤膜过滤并封装。

实施例5：糖浆剂，以下是50支的处方量

TAF 40 g

CAB 60 g

山梨糖醇溶液 1.5 g

甘油 2.0 g

苯甲酸钠 5 g

香料，Peach 17.42.3169 12.5 mL

净化水适量至 5.00 L

将活性组分溶解在甘油和大部分净化水的混合物中，将苯甲酸钠的水溶液加入后，再加入山梨糖醇溶液，最后加香料。用净化水加至需要的体积并充分混合。

实施例6：阴道栓

以下是200粒的处方量

TAF 6g

CAB 4g

硬脂肪B.P.（Witepsol H15-Dynamit Nobel） 394g

404g

将1/5的Witepsol H15在最高温度为45℃下的蒸汽夹套锅中加热熔化，将活性组分通过200μm筛筛选并加到熔化的基质中，同时通过使用安装有切割头的Siverson混合，直至均匀分散。加入剩余基质搅拌至混合均匀。搅拌冷却至40℃。在38~40℃下，将混合物填充到适宜的2mL塑料模具中。将栓剂冷却至室温。

实施例7：体外试验研究

为了研究TAF+CAB组合物与单独用药和市售其他组合物的抗HIV效果的差异，本发明设置了对比实验组，选取替诺福韦酯+恩曲他滨（TDF+FTC）和齐多夫定+拉米夫定（AZT+3TC）组合物作为对照实验组，探究同等实验条件下的不同药物对HIV的作用效果，其中组合物TDF+FTC（TDF与FTC的质量比为3：2）和AZT+3TC（AZT与3TC的质量比为2:1）的配比与市售产品一致，TAF与CAB的重量比为5:6。

实验例1：抗HIV活性研究

抗病毒测定，除非另有说明，在10倍于引起50%减少MT4细胞生长所必需量下（10×TCID₅₀, 2×10⁴个空斑形成单位/细胞），使Ⅰ型人T细胞亲淋巴病毒转化细胞系MT4生长并感染HIV-1菌株3B或菌株MN（Advanced biotechnologies Inc. Columbia, Maryland）,同时制备Mock感染细胞。经过1h培养后，将细胞以1×10⁴细胞/孔的量转移至96孔板中。实验组分别加入适当浓度的TAF、CAB、TAF+CAB，对照组加入适当浓度的TDF+FTC、AZT+3TC。将被感染的T淋巴细胞恒温培养5天，以实现HIV-1介导的生长抑制。然后，将培养板用28μLNonidet P-40 (sigma)的磷酸盐缓冲液（PBS）处理，并将60μL样品转移至96孔板中，加入Propidium iodide，洗涤后用化学发光仪测定荧光值（E）。荧光值的大小与细胞数量的多少直接相关，以此测定HIV-1介导的细胞病作用（CPE）。所测得的未感染细胞的CPE为0%，并且被感染但未处理细胞的CPE为100%，测定HIV-1诱导的CPE的抑制百分数，确定药物对于CPE的半数抑制量（IC₅₀）。结果如下表所示。

结果表明，在体外试验中，TAF+CAB的组合物对CPE的抑制效果明显优于单独使用TAF或CAB，且比TDF+FTC和AZT+3TC的抑制效果更强，有更好的抗HIV活性。

实验例2：HIV整合酶抑制活性测定

（1）DNA溶液的制备

使用专利WO2004/024693 实验实施例1中所述的方法，制备底物DNA溶液（2pmol/μl）和目标DNA溶液（5pmol/μl）。

（2）抑制率（IC₅₀）的测定

将链霉素溶于0.1M碳酸盐缓冲溶液（组成：90mM Na₂CO₃、10mM NaHCO₃），配制成浓度为40μg/ml的链霉素溶液。将50μl的链霉素溶液加入到免疫测定板中，4℃静置过夜以便吸附。用磷酸盐缓冲液（组成：13.7mM NaCl 、0.27mM KCl、0.43mM Na₂HPO₄、0.14mM KH₂PO₄）洗涤各孔两次，用含1%脱脂乳的300μl磷酸盐缓冲液封闭30min。用磷酸盐缓冲液洗涤各孔两次，于室温、振荡下加入50μl底物DNA溶液（2pmol/μl），吸附30min，用磷酸盐缓冲液洗涤两次，再用蒸馏水洗涤一次。

然后，向如上所述制备的各孔中加入12μl缓冲液（组成：150mM MOPS（pH7.2）、75mMMnCl₂、50mM 2-巯基乙醇、25%甘油、500μg/ml牛血清白蛋白-成分V），及由39μl蒸馏水制备的51μl反应溶液。然后，加入9μl稀释的溶液（组成：20mM MOPS（pH7.2）、400mM或谷氨酸钾、1mM EDTA、0.1%NP-40、20%甘油、1mM DTT、4M脲），将其用板混合器充分混合。

将该板于30℃下温育60min，丢弃反应液，然后用250μl洗涤缓冲液（组成：150mMMOPS（pH7.2）、50mM 2-巯基乙醇、25%甘油、500μg/ml牛血清白蛋白-成分V）洗涤3次。向各孔中加入12μl缓冲液（组成：150mM MOPS（pH7.2）、75mM MgCl₂、50mM 2-巯基乙醇、25%甘油、500μg/ml牛血清白蛋白-成分V），及41μl蒸馏水制备的53μl反应溶液。

此外，将6μl 适当浓度的TAF、CAB和TAF+CAB混合物的DMSO溶液分别加入各孔中，加入适当浓度TDF+FTC、AZT+3TC的DMSO溶液加入孔中做对照组，将6μl DMSO加入作为阴性对照的孔中，接着用板混合器充分混合。

将各板于30℃下孵育10min后，丢弃反应液，接着用磷酸盐缓冲液洗涤两次。用抗体稀释液将碱性磷酸酶标记的抗-地高辛配基抗体稀释2000倍，于30℃下加入100μl的该稀释液，结合1h，将其用含有0.05% Tween20 的磷酸盐缓冲液洗涤两次，接着用磷酸盐缓冲液洗涤1次。然后，于30℃下加入150μl碱性磷酸酶染色缓冲液(组成：10mM对硝基苯基磷酸酯、5mM MgCl₂、100mM NaCl、100mM Tris-HCl（pH9.5）)，反应2h，加入50μl 1N NaOH 溶液以停止该反应，测定各孔的吸光度（OD405nm），计算抑制率及其抑制IC₅₀：

抑制率（%）=100[1-[(A_sample-A^-)/( A⁺- A^-)]]

A_sample：待测样品的吸光度

A^-：阴性对照的吸光度

A⁺：阳性对照的吸光度

结果如下表所示。

结果表明，TAF+CAB的组合物对HIV整合酶的抑制作用比单独使用TAF或CAB强，且TAF+CAB的整合酶抑制效果也优于TDF+FTC和AZT+3TC的组合，TAF+CAB组合物有更好的HIV整合酶抑制效果。

实验例3：体外抗HIV耐药性研究

（1）含药物溶液的MT4-CNHN24培养系统的建立

用含10％胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液调整MT4细胞浓度为(5-8)×10⁴/ml，每个50ml细胞培养瓶中加入10ml该浓度细胞悬液。在培养耐药株的细胞瓶中各接种终浓度为100 TCID₅₀的病毒。按结果中表3设定的TAF，CAB和TAF+CAB组合物的浓度，将药物溶液分别加入到MT4-HIV-1CNHN24培养系统中。药物起始浓度为0.008μmol/L，加入适当浓度的TDF+FTC和AZT+3TC作为阳性对照，以后每代浓度以2倍递增，共传代培养10代，第10代药物浓度为4.096μmol/L，为第1代的512倍。将细胞瓶放入37°C，5%CO₂培养箱中培养，第4天吸出5ml培养上清，补充5ml新鲜培养液。第4天后每天在倒置显微镜下观察细胞病变。每代培养时间如表3所示。之后分装冻存于-80°C冰箱。并将冻融后的病毒接种于药物浓度提高后的下一代培养系统中。同时设置病毒对照和细胞对照。病毒对照为不含药物的MT4-CNHN24培养物。细胞对照为不加病毒但加有相应浓度药物的MT4-3TC培养物。病毒对照和细胞对照与耐药株培养系统平行传代培养。每代耐药株培养系统设2个平行样品。

（2）表型耐药性测定

将5×10⁴/ml的MT4细胞接种于96孔板中，每孔50μl；将药物溶液用RPMI 1640培养液依次2倍稀释共12个浓度加至96孔板内，每浓度4个重复孔，每孔50μl；将终浓度为100 TCID₅₀的待测病毒加入细胞孔，每孔100μl，放入37°C，5%CO₂培养箱中培养。每天用倒置显微镜观察细胞病变(CPE)，7天后记录细胞病变程度，用Reed-Muench法计算病毒的IC₅₀。结果如下表所示。

结果表明，整个药物耐药株的培养过程中，病毒的IC₅₀呈逐代增加的趋势。从TAF、CAB给药组的IC₅₀数据可以看出，5代以前IC₅₀增加速度相对平缓，第6代突然有了大幅提高，显示其对TAF、CAB已经产生了高度耐药性；而TAF+CAB组的病毒的IC₅₀明显低于单独使用TAF或CAB，且在第9代才出现明显耐药。对比TAF+CAB、TDF+FTC和AZT+3TC的数据，TAF+CAB不论在耐药时间还是耐药程度都优于TDF+FTC和AZT+3TC。TAF+CAB有着出色的抗HIV耐药的能力。

实验例4：安全性评价

组合物在大于/等于人体内目标血浆水平的血浆水平下，以及在体外大于/等于体外抗病毒浓度的浓度下，对主要器官尤其是心血管、肾脏和骨骼的参数几乎没有影响。

实验例5：组合物预防通过性交或伴侣间相关亲密接触感染HIV能力的测定

在一个模型中，源自单核细胞的树突状细胞（MO-DC）被单变HIV菌株Ba-L以10^-3感染复数（MOI）感染2h。感染后，洗涤细胞6次并且以每毫升4×10⁵个的细胞量重悬于10% BCS中。从与MO-DC相同洗脱液的淋巴细胞中分离纯化出同源CD4(+)T细胞，并以2×10⁶细胞/ml的浓度使用（MO-DC/CD4(+)T的比例为1/5）。

将连续稀释的适当浓度的TAF、CAB和TAF+CAB、TDF+FTC、AZT+3TC组合物加入到MO-DC/CD4(+)T细胞的联合培养物中。每个实验都在96孔板上进行，其中每个孔包含50ul MO-DC、50ul CD4(+)T细胞和100ul实验药物。每周更换两次含有药物的培养基。培养14天后在ELISA中分析上清液。为了确定抗病毒活性，测定能在原代培养末尾抑制50%病毒复制的实验药物浓度（EC₅₀）。结果如下表所示。

结果表明，TAF和CAB的组合物的抗感染能力明显优于单独使用TAF或CAB，且TAF+CAB的预防能力优于市售的组合物TDF+FTC，TAF+CAB的预防HIV感染的能力更强。

Claims (9)

1.一种药物组合物，其包含

1）治疗有效量的替诺福韦艾拉酚胺或其药学上可接受的盐；

2）治疗有效量的Cabotegravir或其药学上可接受的盐；

和药学可接受的载体。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中替诺福韦艾拉酚胺药学上可接受的盐选自延胡索酸盐、钠盐、半富马酸盐和富马酸盐。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中替诺福韦艾拉酚胺药学上可接受的盐是半富马酸盐。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中Cabotegravir药学上可接受的盐是钠盐、钾盐。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中替诺福韦艾拉酚胺和Cabotegravir可以分开或同时给药。

6.权利要求1所述药物组合物，还可以包第三种活性成分。

7.根据权利要求7所述药物组合物，其中第三种活性成分是恩曲他滨。

8.根据权利要求7所述药物组合物，其中第三种活性成分是利匹韦林。

9.权利要求1-9所述组合物用于制备预防和治疗HIV感染的药物中的用途。