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CN109354612B - 烟草akt2/3基因及应用 - Google Patents

烟草akt2/3基因及应用 Download PDF

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CN109354612B
CN109354612B CN201811339759.7A CN201811339759A CN109354612B CN 109354612 B CN109354612 B CN 109354612B CN 201811339759 A CN201811339759 A CN 201811339759A CN 109354612 B CN109354612 B CN 109354612B
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CN
China
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gene
tobacco
leu
akt2
ile
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余婧
任学良
李立芹
鲁黎明
张洁
王仁刚
郭玉双
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Guizhou Institute of Tobacco Science
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Guizhou Institute of Tobacco Science
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Publication date
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine

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Abstract

本发明涉及烟草AKT2/3基因及应用。所述烟草AKT2/3基因及其编码蛋白质的序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。本发明首次从烟草中克隆得到AKT2/3基因并通过酵母功能互补实验验证了该基因的生物学功能，烟草AKT2/3基因具有促进钾离子吸收和转运的功能。

Description

烟草AKT2/3基因及应用
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，具体地说，涉及烟草AKT2/3基因及应用。
背景技术
钾离子通道是允许钾离子特异通透质膜的离子通道，而阻碍其他离子通透，特别是钠离子。这些通道一般由两部分组成：一部分是通道区，选择并允许钾离子通过，而阻碍钠离子；另一部分是门控开关，根据环境中的信号而开关通道。
现有技术对于钾离子通道基因的研究在模式植物拟南芥中比较广泛，例如，植物的Shaker离子通道，在结构上由4个亚基环绕着一个中心域排列而成。每个亚基的疏水区，由6个跨膜区(Trans-membrane segments TMS)组成，其中，第4个是基础残基的重复序列，在功能上是电压的感应区。处于第5和第6TMS之间的高度保守的膜loop(membranar loop)部分，称为P域(pore domain)，构成了离子介导中心的部分选择性过滤区域。Shaker通道的一个重要特点是，它们能形成异源四聚体结构，允许植物调节不同细胞中的K+转运活性，这种调节在每个器官或组织中是独立的，并与环境条件相关。
烟草是一种耗钾量很大的作物，烟叶钾含量是衡量烟叶品质的的重要指标，目前，对于烟草中钾离子通道的研究较少，烟草Shaker的功能未知。
发明内容
本发明的目的是提供烟草AKT2/3基因及其编码的蛋白质。
本发明的另一目的是提供烟草AKT2/3基因的应用。
为了实现本发明目的，本发明提供的烟草AKT2/3基因，其为编码如下蛋白质(a)或(b)的基因：
(a)由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)SEQ ID NO:2所示序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(a)衍生的蛋白质。
本发明烟草AKT2/3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，基因全长2355bp。本发明采用如下方法克隆得到烟草AKT2/3基因：
①在进行AKT2/3基因PCR扩增之前，提取烟草细胞总RNA，并将提取得到的总RNA反转录为cDNA。在本发明中，所述的烟草细胞总RNA的提取采用本领域常用的提取细胞总RNA的技术方案即可，本发明的实施例中具体的可采用Trizol法。在本发明中，所述的烟草细胞总RNA提取的原料为烟草的新鲜叶片，所述烟草采用为本领域常规的烟草品种，如K326。
②在提取得到烟草细胞总RNA后，将所述烟草细胞总RNA反转录合成cDNA。在本发明中，所述的cDNA的合成采用本领域常规的cDNA的合成方法即可，无其他特殊要求；具体的本发明实施例中采用TaKaRa公司的cDNA合成试剂盒完成cDNA的合成。
③在得到cDNA之后，进行AKT2/3基因PCR扩增，得到目的片段。在本发明中，所述AKT2/3基因PCR扩增的体系优选为20μL体系，包括Premix ExTaq 10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，烟草细胞cDNA 1μL，ddH2O 8μL。在本发明中，所述AKT2/3基因的PCR扩增的反应程序优选为：95℃预变性5min；95℃变性30s；55℃退火30s；72℃延伸2min；35个循环。
④在AKT2/3基因PCR扩增得到目的片段后，将所述目的片段进行测序，得到AKT2/3基因。本发明在所述的PCR扩增后优选的对目的片段进行纯化，本发明对所述纯化的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的DNA纯化试剂盒进行即可。
⑤纯化完成后，优选将所述纯化后的目的片段导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行菌落PCR，验证为阳性克隆后进行测序。本发明在得到阳性克隆后，优选采用菌落PCR的方法来验证阳性克隆。在本发明中，所述菌落PCR的所述的正向引物核苷酸序列为：5'-ATGCAAATGAGCCATTCATC-3'(SEQ ID NO:3)；所述反向引物的核苷酸序列为5'-CTACAAGCAATTTGGATCT-3'(SEQ ID NO:4)，所述菌落PCR的体系为10μL，包括Premix ExTaq5μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，ddH2O 4μL。在本发明中，所述的将纯化后的目的片段导入大肠杆菌DH5α感受态细胞所采用的方法为本领域常规的转化大肠杆菌感受态细胞的方法，具体如下：将所述目的片段与pMD19-T载体在16℃的条件下连接10～14h，得到连接产物；将所述连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，得到转化后的大肠杆菌DH5α；将所述的转化后的大肠杆菌DH5α接种于涂有氨苄青霉素的LB平板上进行筛选培养，得到阳性克隆。
⑥在菌落PCR验证阳性克隆后，优选的，从已验证的阳性克隆中随机选取2～4个独立的阳性克隆进行测序，得到所述烟草AKT2/3基因的序列。
本发明还提供含有所述烟草AKT2/3基因的生物材料，所述生物材料为表达盒、表达载体、克隆载体、工程菌或转基因细胞系。
本发明还提供所述烟草AKT2/3基因或含有该基因的生物材料在促进植物或微生物钾离子吸收和转运中的应用。
本发明所述植物包括但不限于烟草、拟南芥。所述微生物包括但不限于酵母。
本发明还提供所述烟草AKT2/3基因或含有该基因的生物材料在制备转基因植物中的应用。
本发明还提供所述烟草AKT2/3基因或含有该基因的生物材料在植物育种中的应用。所述育种的目的为促进植物钾离子吸收和转运。
优选地，将所述烟草AKT2/3基因转入到烟草植株中，使烟草AKT2/3基因超量表达以提高烟草植株的烟叶中钾离子的含量。更优选地，采用农杆菌介导法将烟草AKT2/3基因转入到烟草植株中，获得AKT2/3基因过表达的转基因植株。
本发明还提供用于扩增烟草AKT2/3基因的特异性PCR引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:3-4所示。该引物对是以NCBI Reference Sequence:LOC107761957为参考序列，使用软件primer 5设计得到的。
本发明还提供一种促进植物钾离子吸收和转运的方法，所述方法为:
1)使植物包含所述烟草AKT2/3基因；或者，
2)使植物过表达所述烟草AKT2/3基因。
所述方法包括但不限于转基因、杂交、回交、自交或无性繁殖。
本发明首次从烟草中克隆得到AKT2/3基因并通过酵母功能互补实验验证了该基因的生物学功能，将烟草AKT2/3基因转入钾吸收缺陷型酵母突变株R5421后的重组酵母具有钾离子吸收，转运功能。因此，本发明提供的烟草AKT2/3基因具有促进钾离子吸收和转运的功能。
附图说明
图1为本发明实施例2中酵母功能互补实验结果。其中，A：培养基中钾离子浓度为20uM，B：培养基中钾离子浓度为2mM。图中，1为转入烟草AKT2/3基因的重组酵母，2为阴性对照组(转入空载体)，3为阳性对照组(转入拟南芥AtAKT1基因)的重组酵母；从左到右依次为菌原液、10倍稀释液、100倍稀释液、1000倍稀释液在培养基上的生长结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。
实施例1烟草AKT2/3基因的克隆
取0.5g烟草(烟草品种为K326)新鲜叶片，采用Trizol法提取烟草细胞的总RNA，然后采用TaKaRa公司的cDNA合成试剂盒合成cDNA，进一步采用Primer5.0软件设计并经过人工优化得到引物，所述引物包括正向引物和反向引物，所述的正向引物核苷酸序列为：5'-ATGCAAATGAGCCATTCATC-3'；所述反向引物的核苷酸序列为5'-CTACAAGCAATTTGGATCT-3'，以合成的cDNA为模板，进行PCR扩增，PCR扩增体系为为20μL体系，包括Premix ExTaq 10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，烟草细胞cDNA 1μL，ddH2O 8μL；所述的PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s；55℃退火30s；72℃延伸2min；35个循环。
PCR扩增完成后，使用DNA纯化试剂盒进行目的片段的纯化，将纯化后的目的片段与pMD19-T载体16℃连接12h得到连接产物，将所述得到的连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞得到转化后的大肠杆菌DH5α，将所述的转化后的大肠杆菌DH5α接种于涂有氨苄青霉素的LB平板上进行筛选培养得到阳性克隆。在得到阳性克隆后，采用菌落PCR的方法来验证阳性克隆，所述菌落PCR的正向引物为：5'-ATGCAAATGAGCCATTCATC-3'；反向引物为5'-CTACAAGCAATTTGGATCT-3'；所述菌落PCR的体系为10μL，包括Premix ExTaq 5μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，ddH2O 4μL。然后从已验证的阳性克隆中随机选取3个独立的阳性克隆送到生物技术公司进行测序，经测序得到烟草AKT2/3基因的序列如SEQ IDNO:1所示。
实施例2烟草AKT2/3基因的生物学功能分析
1、实验目的
通过酵母功能互补实验验证烟草AKT2/3基因的生物学功能。
2、实验方法
以钾吸收缺陷型酵母突变株R5421作为受体菌。菌株R5421可参见Maathuis F J Mand Sanders D 1996Mechanisms of potassium absorption by higher plantroots.Physiol.Plant.96,158–168.
将连接有实施例1烟草AKT2/3基因的T-载体与表达载体P416(酵母游离型穿梭表达载体，TEF组成型启动子，CYC1终止子，CEN6 ARSH4复制起点，酵母中筛选标记为URA3，大肠杆菌中筛选标记为Amp。载体P416可参见Functional Expression of aω-3Fatty AcidDesaturase Gene from Glycine max in Saccharomyces cerevisiae)分别进行双酶切(酶切位点为Xba Ⅰ和Xho Ⅰ)，回收目的基因和表达载体P416，然后用连接酶连接，将连接后的重组酵母表达载体转入大肠杆菌DH5α的感受态细胞，对转化后的大肠杆菌单菌落进行PCR扩增、酶切来验证是否构建成功。
将构建成功的重组酵母表达载体转入到酵母R5421中具体步骤如下：用接菌环取保存的R5421酵母菌划线于固体培养基YPDA上，28℃培养12h；挑取R5421酵母单菌落于Ep管中，加1mL YPDA培养液涡旋；将上述菌液全部转入装有YPDA培养液的三角瓶中，于30℃，250rpm摇菌至OD600＝1.2，16h；按1:10体积比转接，摇至OD600＝1.0～1.2；于28℃，1000rpm离心5min集菌，用1/2体积的灭菌超纯水重悬；于28℃，1000rpm离心5min集菌，吸干上清；依次加入下列成分(每5mL原始菌液)：
Figure BDA0001862224560000061
涡旋1min，使转化体系完全混匀；置于30℃的水浴中温育30min；再放入42℃的水浴中热击28min，冰上冷却10min；7000rpm离心15s，弃上清；用1mL的无菌水轻轻重悬沉淀；取200μL转化混合物铺于营养缺陷型平板上；30℃培养3天。提取酵母质粒并鉴定转化结果。
挑取鉴定过的酵母单菌落在营养缺陷平板上划线，30℃培养3天；用牙签在营养缺陷平板上蘸取少量菌体于2mL营养缺陷液(Ura Minus Media 8g，葡萄糖20g，氯化钾7.5g，用NaOH调pH值至5.8，定容至1000mL)中培养12h；8000rpm离心1min收集菌体；弃上清，用1mL双蒸水悬浮菌体，8000rpm离心1min；弃上清，用1ml双蒸水重悬浮，调OD600为0.8；将未稀释菌液及分别稀释10倍、100倍的菌液，分别取5uL在钾离子浓度为0、2mM的培养基上，30℃培养3天后观察结果。
3、实验结果
实验结果如图1所示，在钾离子浓度为20uM、2mM培养基(AP培养基(1L)：磷酸546μL，L-精氨酸1.742g，1000×维生素溶液1mL，1000×微量元素溶液1mL，尿嘧啶0.77g，100×Ura 10mL，葡萄糖20g，琼脂粉15g)上，阴性对照组酵母菌(转入P416空载体)几乎不生长，转入烟草AKT2/3基因的重组酵母和阳性对照组(转入拟南芥AtAKT1基因)的重组酵母菌均可以生长。随着稀释倍数的增加，转入烟草AKT2/3基因的重组酵母和阳性对照组的重组酵母菌仍然可以生长。以上结果证明，本发明的烟草AKT2/3基因具有钾吸收和转运功能。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 贵州省烟草科学研究院
<120> 烟草AKT2/3基因及应用
<130> KHP171117871.4
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2355
<212> DNA
<213> 烟草(Nicotiana tabacum)
<400> 1
atgcaaatga gccattcatc ttatagtgtg tacaatagct ctacaaaaaa catgataatt 60
gaagatagcc aaattaaaga ccaacatgtg caagataata gccatgggag tagcaataat 120
tcagatgagc tcagttttcg aaacctgtca aagctcattc tacctcctct tggttccaat 180
ggttacaacc agaatcaaac tcaacagaaa ggcaagacca tcacccctat ggattcaaga 240
tacaggtgtt gggagacgct aatggtaata atggtggcgt attctgcatg ggtatgtcca 300
tttgagatag cattcatgca ctctaaccca aatagagtgc tatacatcgc agacaacgtt 360
gttgatctct tctttgcgat tgatatcatc ttgactttct ttgttgccta tattgatact 420
actactcagc ttctcgtacg tgacaggaaa agaattgcta caagacttga aaaggacatg 480
agattcagct atttttgggt cagatgtgcc aggcttctat ttgtaacact attgacagtg 540
cactgtgctg gatgcctcta ctatttgcta gctgatagat atccacacca aggagatact 600
tggttaggag ctatgaatcc aaattacaag gagacaagtc ttcttattag gtatattgca 660
gctttatatt ggtccattac taccatgaca acagttggct atggtgatct ccatgctgtc 720
aacactttgg aaatggtctt catcattttc tatatgctct tcaatcttgg tctcactgct 780
tatattattg gtaatatgac caatttagtt gtcgaaggaa ctcgtcgcac aatggaattc 840
agaaatagca tcgaagcagc atcaaatttc gtgtgtcgaa acaggttgcc tccaagatta 900
aaagagcaaa tattggctta catgtgttta agattcaggg cagagagcct aaaccaacag 960
caattgattg aacaacttcc caagacaatc tgcaaaagca ttaggcacca tttgtttttg 1020
ccaacagtag agaaggttta tcttttcaag ggtgtctcaa gggaaattct gttacttttg 1080
gttgcagata cgaaggctga gtacataccc ccaagagagg atgtaataat gcagaacgaa 1140
tcgccagatg aggtttacat catagtgtca ggggaggtgg aaatgattga gtctgagatg 1200
gaaaatgagc aggttgtttg gacattcaaa tctggagata tgttaggaga agtcggggca 1260
ttttgccgta ggcctcagag ctacacgtat cgaaccaaga cactttcaca actcctgaag 1320
ataagaacaa cttctttgat tgaagcaatg aaaaccagac aagaagataa tatcataatg 1380
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catgcagttg gggaagaaaa tggtgatcca aacatgtctg ttaatttgct aactgttgct 1500
agtacaggta atgctacttt tcttgaggaa cttctcaagg caagatttga tcctgatatc 1560
ggagatgccc aaggaagaac cccactgcac atagcagcat cgaaagggca cgaagagtgt 1620
gtgatggtac ttcttagaca tggatgtaac atatacctcc cagatgtaaa tggtaacacc 1680
gcgttgtggg aagctatagc agcaaaacaa cattcaacat ttcggatatt ataccattgg 1740
gcttctgtct ccgatcctta tgttgctggt gaactcttat gcaccgcagc taagagaaat 1800
gacataacag tgatgaaaga actcctaaaa catggattaa cagttgactc aaaagatcgc 1860
cacggatcaa ctgctattga tgttgcattg ggagaaaatc atgaggacat ggtaaagcta 1920
cttctaatga atggagccga gataaatgat aaatttaagc acaagctttc ttcgatgaac 1980
ctaagagaga ttctacaaaa acgagaagta gggcacaggg ttatagttcc cgacacaatg 2040
gatgaagttg ctcaaaagtg gcgcgaacaa gagcaaaagt acaactcggg aagtactagg 2100
gatcaatcgt cttttagagt tagcatatac aaaggccatc cggtgatcag gaaaagaact 2160
cattgctgtg aaccagggaa attaataatg cttccaaatt cacttgcaga gctcaagatc 2220
attgcaggtc agaaatttgg atttgatgca acaaaagcat tggtgacaga tcaagaagga 2280
tcagaaattg actctattga agtgataaga gataatgata agctgtatat agttgaagat 2340
ccaaattgct tgtag 2355
<210> 2
<211> 784
<212> PRT
<213> 烟草(Nicotiana tabacum)
<400> 2
Met Gln Met Ser His Ser Ser Tyr Ser Val Tyr Asn Ser Ser Thr Lys
1 5 10 15
Asn Met Ile Ile Glu Asp Ser Gln Ile Lys Asp Gln His Val Gln Asp
20 25 30
Asn Ser His Gly Ser Ser Asn Asn Ser Asp Glu Leu Ser Phe Arg Asn
35 40 45
Leu Ser Lys Leu Ile Leu Pro Pro Leu Gly Ser Asn Gly Tyr Asn Gln
50 55 60
Asn Gln Thr Gln Gln Lys Gly Lys Thr Ile Thr Pro Met Asp Ser Arg
65 70 75 80
Tyr Arg Cys Trp Glu Thr Leu Met Val Ile Met Val Ala Tyr Ser Ala
85 90 95
Trp Val Cys Pro Phe Glu Ile Ala Phe Met His Ser Asn Pro Asn Arg
100 105 110
Val Leu Tyr Ile Ala Asp Asn Val Val Asp Leu Phe Phe Ala Ile Asp
115 120 125
Ile Ile Leu Thr Phe Phe Val Ala Tyr Ile Asp Thr Thr Thr Gln Leu
130 135 140
Leu Val Arg Asp Arg Lys Arg Ile Ala Thr Arg Leu Glu Lys Asp Met
145 150 155 160
Arg Phe Ser Tyr Phe Trp Val Arg Cys Ala Arg Leu Leu Phe Val Thr
165 170 175
Leu Leu Thr Val His Cys Ala Gly Cys Leu Tyr Tyr Leu Leu Ala Asp
180 185 190
Arg Tyr Pro His Gln Gly Asp Thr Trp Leu Gly Ala Met Asn Pro Asn
195 200 205
Tyr Lys Glu Thr Ser Leu Leu Ile Arg Tyr Ile Ala Ala Leu Tyr Trp
210 215 220
Ser Ile Thr Thr Met Thr Thr Val Gly Tyr Gly Asp Leu His Ala Val
225 230 235 240
Asn Thr Leu Glu Met Val Phe Ile Ile Phe Tyr Met Leu Phe Asn Leu
245 250 255
Gly Leu Thr Ala Tyr Ile Ile Gly Asn Met Thr Asn Leu Val Val Glu
260 265 270
Gly Thr Arg Arg Thr Met Glu Phe Arg Asn Ser Ile Glu Ala Ala Ser
275 280 285
Asn Phe Val Cys Arg Asn Arg Leu Pro Pro Arg Leu Lys Glu Gln Ile
290 295 300
Leu Ala Tyr Met Cys Leu Arg Phe Arg Ala Glu Ser Leu Asn Gln Gln
305 310 315 320
Gln Leu Ile Glu Gln Leu Pro Lys Thr Ile Cys Lys Ser Ile Arg His
325 330 335
His Leu Phe Leu Pro Thr Val Glu Lys Val Tyr Leu Phe Lys Gly Val
340 345 350
Ser Arg Glu Ile Leu Leu Leu Leu Val Ala Asp Thr Lys Ala Glu Tyr
355 360 365
Ile Pro Pro Arg Glu Asp Val Ile Met Gln Asn Glu Ser Pro Asp Glu
370 375 380
Val Tyr Ile Ile Val Ser Gly Glu Val Glu Met Ile Glu Ser Glu Met
385 390 395 400
Glu Asn Glu Gln Val Val Trp Thr Phe Lys Ser Gly Asp Met Leu Gly
405 410 415
Glu Val Gly Ala Phe Cys Arg Arg Pro Gln Ser Tyr Thr Tyr Arg Thr
420 425 430
Lys Thr Leu Ser Gln Leu Leu Lys Ile Arg Thr Thr Ser Leu Ile Glu
435 440 445
Ala Met Lys Thr Arg Gln Glu Asp Asn Ile Ile Met Ile Lys Asn Phe
450 455 460
Leu Gln His His Lys Lys Leu Arg Asp Leu Lys Leu Gly Asp Leu Phe
465 470 475 480
His Ala Val Gly Glu Glu Asn Gly Asp Pro Asn Met Ser Val Asn Leu
485 490 495
Leu Thr Val Ala Ser Thr Gly Asn Ala Thr Phe Leu Glu Glu Leu Leu
500 505 510
Lys Ala Arg Phe Asp Pro Asp Ile Gly Asp Ala Gln Gly Arg Thr Pro
515 520 525
Leu His Ile Ala Ala Ser Lys Gly His Glu Glu Cys Val Met Val Leu
530 535 540
Leu Arg His Gly Cys Asn Ile Tyr Leu Pro Asp Val Asn Gly Asn Thr
545 550 555 560
Ala Leu Trp Glu Ala Ile Ala Ala Lys Gln His Ser Thr Phe Arg Ile
565 570 575
Leu Tyr His Trp Ala Ser Val Ser Asp Pro Tyr Val Ala Gly Glu Leu
580 585 590
Leu Cys Thr Ala Ala Lys Arg Asn Asp Ile Thr Val Met Lys Glu Leu
595 600 605
Leu Lys His Gly Leu Thr Val Asp Ser Lys Asp Arg His Gly Ser Thr
610 615 620
Ala Ile Asp Val Ala Leu Gly Glu Asn His Glu Asp Met Val Lys Leu
625 630 635 640
Leu Leu Met Asn Gly Ala Glu Ile Asn Asp Lys Phe Lys His Lys Leu
645 650 655
Ser Ser Met Asn Leu Arg Glu Ile Leu Gln Lys Arg Glu Val Gly His
660 665 670
Arg Val Ile Val Pro Asp Thr Met Asp Glu Val Ala Gln Lys Trp Arg
675 680 685
Glu Gln Glu Gln Lys Tyr Asn Ser Gly Ser Thr Arg Asp Gln Ser Ser
690 695 700
Phe Arg Val Ser Ile Tyr Lys Gly His Pro Val Ile Arg Lys Arg Thr
705 710 715 720
His Cys Cys Glu Pro Gly Lys Leu Ile Met Leu Pro Asn Ser Leu Ala
725 730 735
Glu Leu Lys Ile Ile Ala Gly Gln Lys Phe Gly Phe Asp Ala Thr Lys
740 745 750
Ala Leu Val Thr Asp Gln Glu Gly Ser Glu Ile Asp Ser Ile Glu Val
755 760 765
Ile Arg Asp Asn Asp Lys Leu Tyr Ile Val Glu Asp Pro Asn Cys Leu
770 775 780
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atgcaaatga gccattcatc 20
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ctacaagcaa tttggatct 19

Claims (4)

1.烟草AKT2/3基因，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.含有权利要求1或2所述基因的生物材料，所述生物材料为表达盒、表达载体、克隆载体或工程菌。
4.权利要求1或2所述基因或权利要求3所述生物材料在促进酵母钾离子吸收和转运中的应用。
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