CN109310528A - 检测伤口中的微生物感染 - Google Patents

Abstract

本文提供微生物感染指示装置，其包括具有指示剂的敷料、可以自由放置在伤口部位或敷料上的独立指示剂插入件或盘，以及其用于在检测到指示感染的分析物或生物标志物时向使用者显示如颜色变化的可见或可检测信号的应用。

Description

检测伤口中的微生物感染

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年3月30日提交的美国临时申请第62/315,565号的权益，所述申请中的公开内容以全文引用的方式并入本文中并且成为本申请的一部分。

技术领域

本文中所描述的实施例大体上涉及伤口愈合，并且尤其涉及用于检测和治疗伤口的组合物、装置和方法。

背景技术

在哺乳动物中，皮肤损伤引发细胞和生化事件的有组织的复杂级联，使得伤口愈合。伤口愈合是引起解剖学连续性和功能的恢复的复杂动态过程：理想的愈合伤口是返回到正常解剖结构、功能和外观的伤口。典型的伤口通过由四个阶段组成的模型愈合：‘渗出’阶段、增殖阶段、修复阶段和上皮成熟(Hatz等人，《愈合和伤口处理(Wound Healing andWound Management)》，施普林格出版社(Springer-Verlag)，慕尼黑(Munich)，1994)或止血、发炎、增殖和重塑阶段(Nwomeh等人，《临床整形外科(Clin.Plast.Surg.)》1998，25，341)。发炎阶段对伤口愈合过程特别重要，其中伤口部位的生化反应促进愈合，但也由于产生过量的蛋白酶而导致组织破坏。

伤口感染导致愈合过程变慢或停止。举例来说，伤口中的病原体可以产生毒素(例如梭菌属(Clostridium)物种)，产生有害的代谢物(如使pH升高的氨)(例如变形杆菌属(Proteus)物种)，激活或产生组织裂解酶(如蛋白酶)，或促进组织侵入，从而导致伤口大小或严重程度的增加。在最坏的情况下，病原体可能会离开伤口并且导致败血症。

为了防止伤口的慢性，在临床和兽医环境中采用各种评估技术和/或工具。目前评估感染伤口的方法主要基于测定与伤口相关的各种参数。举例来说，可以在视觉上评估伤口，可以进行长度和深度测量，可以在可用的情况下使用数字摄影来跟踪伤口的视觉状况和大小(Krasner等人，同上)。在临床实践中，感染的诊断基于次要参数的测量，如气味、局部疼痛的存在、发热、肿胀、排放物和发红。许多这些临床指标，如发炎和排放物，对伤口中的感染具有较低预测值。在其它情况下，可以使用实验室和/或临床诊断程序确定伤口部位的致病菌群的数量和类型。在医院实验室擦拭伤口然后进行微生物学检测是确认细菌定殖和鉴定与感染相关的菌株的一种选择，从而允许得到正确的抗生素疗程的处方。然而，这种方法耗时并且劳动强度大。对感染的诊断的延迟可能延迟抗生素的施用，并且可能增加罹患败血症的风险。

与现有临床诊断相关的最大缺点之一是与感染发作和检测时序相关的滞后。举例来说，使用擦拭程序对感染的阳性鉴定通常取决于在伤口部位获得微生物的“临界质量”，并且因此在达到可检测水平之前无法进行早期检测。而且，拭子可能被周围组织的菌群污染，从而使诊断程序变复杂。其它缺点包括例如取样误差、拭子传输的延迟、分析程序中的误差和/或报告中的误差。参看Bowler等人的评论《临床微生物学评论(Clin MicrobiolRev.)》14(2)：244-269，2001。

因此，对于能够早期诊断临床感染的诊断反应剂和方法存在迫切但未满足的需求，优选地，所述诊断反应剂和方法允许在表现出感染的临床症状之前进行临床诊断。还需要将有助于在表现出临床症状之前预测伤口的临床感染的组合物和方法。这样的预后辅助将允许在伤口恶化并且需要手术或其它剧烈干预来预防进一步感染之前通过适合治疗(例如抗微生物治疗)进行早期干预。此外，如果临床医生能够尽早对伤口感染做出反应，那么感染也可以用最少的抗生素用量来治疗。这将降低住院治疗的需要并且降低例如由于与其它患病个体接触而导致的继发感染的风险。

发明内容

本文中所公开的技术提供检测感染和/或慢性伤口的组合物和方法。所公开技术在离开测定后通过以下改进：增加对感染伤口检测的灵敏度、精确度和特异性；提供定性和定量测量的能力；以及，提高对感染伤口的原位和实时检测的速度。本文中所描述的测定和方法部分基于使用检测存在于感染或慢性伤口中的生物标志物和/或探针的特异性反应剂。检测过程可能涉及使用对感染伤口而非非感染或非慢性伤口中存在的标志物具有特异性的反应剂，并且检测步骤可能涉及对探针受到标志物作用时产生的信号的定性或定量测量。在其中检测方法涉及检测伤口中存在的酶的实施例中，探针包含对酶具有特异性的修饰酶底物，其产生可以任选地放大的信号。这极大地提高了检测的效率和特异性。此外，可以使用多种检测探针，每种检测探针特异于一种或多种靶标，例如对伤口具有特异性的酶。这极大地有助于最大化诊断测定的效率和准确性，同时最小化假阳性的发生率(例如由于非特异性相互作用和/或目标冗余)。此外，本文中所公开的实验结果证实，新型探针和基于其的测定技术能够检测并且表征各种类型的伤口。最后，所公开技术的反应剂可以与治疗性分子(如抗生素、抗真菌剂等)一起使用，以监测并且评估慢性伤口的治疗和处理。

本文中所描述的实施例部分基于以下发现：免疫系统的细胞，包括由此产生的酶，可以在伤口的早期诊断中用作标志物。这些细胞，例如嗜中性粒细胞，在伤口部位募集以对抗感染，通过吞噬细菌(和其它病原体)和/或用酶中和它们来进行。一些酶对蛋白质具有特异性(例如弹性蛋白酶、组织蛋白酶G)，其它酶对细胞壁成分具有特异性(例如溶菌酶)，而其它酶则介导蛋白质变性(例如NADPH氧化酶、黄嘌呤氧化酶、髓过氧化物酶(MPO)和其它过氧化物酶)。这些细胞，例如嗜中性粒细胞，通常只是短时间存活的，当其在感染区域溶解时，其释放其溶酶体的内容物(包括酶)，然后可以检测这些内容物以提供对伤口状态的可靠测量。

因此，本文中所描述的各种实施例利用酶标记物的检测，所述酶标记物指示在所关注的生物样品(例如伤口组织)中骨髓细胞并且尤其嗜中性粒细胞的存在。因此，在伤口流体中此类酶的水平提高或活性增强对应于增强的细菌攻击和有利于侵入性细菌的受干扰的宿主/细菌平衡的表现。

本文提供了用于检测伤口或样品中的感染的伤口敷料、装置和方法的实施例。一个实施例是伤口敷料，其包含伤口接触层、包含一个或多个测试区的反应剂层，其中反应剂层与伤口接触层流体连通，以及覆盖反应剂层的外层。在一些实施例中，伤口接触层包含凝胶形成聚合物。在另外的实施例中，一个或多个测试区中的每一个包含以下中的一个或多个：回流捕集器、反应剂垫、过滤垫、指示剂捕集器和吸收区域，其中一个或多个观察窗位于反应剂垫或指示剂捕集器上方。在另外的实施例中，反应剂垫与过滤垫流体连通；过滤垫与指示剂捕集器流体连通；并且指示剂捕集器与吸收区域流体连通。

在其它实施例中，一个或多个测试区包含一种或多种选自由以下组成的组的反应剂：酶反应性指示剂、作为过氧化物源的反应剂、产生有色产物的酶、pH指示剂、蛋白质反应反应剂和水分检测反应剂。酶反应性指示剂包括印刷、喷涂或以其它方式沉积在反应剂垫中或反应剂垫上的蛋白质指示剂缀合物。在一些实施例中，蛋白质指示剂缀合物具有式(I)的结构：A-B，其中A是有助于将酶反应性区与反应剂垫结合的锚定区或部分，并且B是所述酶反应性区。

在一些实施例中，酶反应性区包含肽和/或指示剂区。在另外的实施例中，伤口敷料包含指示剂区，其在被样品中的靶酶剪切后通过选自以下的辅助酶转化成染色物种：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、过氧化物酶、氧化酶、半乳糖苷酶、糖苷酶、葡糖苷酶和漆酶，或其中两种或更多种的组合。在一些实施例中，酶反应性指示剂与弹性蛋白酶、溶菌酶、组织蛋白酶G、髓过氧化物酶或其任何组合相互作用。在另外的实施例中，酶反应性指示剂包含在酶不稳定或酶反应性区与一种或多种酶相互作用时能够产生可见颜色或可检测的电子变化的部分，其中所述部分选自由以下组成的组：过氧化物酶底物、芳胺、氨基酚、中性染料、带电染料、纳米粒子、胶体金粒子或其类似物。锚定区可以以共价、非共价或离子方式附接到反应剂垫。在一些实施例中，pH敏感性反应剂产生可见颜色，包含溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料。

在一些实施例中，伤口敷料还包含除了外层之外的伤口敷料的所有层中的一行或多行芯吸缝合或芯吸簇绒，其中芯吸缝合或芯吸簇绒在反应剂层与伤口接触层之间提供流体连通。可润湿并且展现毛细作用的纤维可以用于芯吸缝合或芯吸簇绒，以在样品或伤口与反应剂之间形成流体连通。在一些实施例中，芯吸纤维是实心的或中空的。芯吸纤维的实例包括但不限于棉、人造丝、粘胶纤维、羊毛、蚕丝、聚酯、聚酰胺、CMC和聚丙烯。

在另外的实施例中，伤口敷料包含一个或多个测试区，所述测试区包含与反应剂垫流体连通的反浸出捕集器(leach-back trap)和仅在所述反浸出捕集器处穿过一个或多个测试区的一行或多行芯吸缝合或芯吸簇绒。在一些实施例中，在伤口接触层与反应剂层之间添加泡沫层。可以在伤口接触层中或在泡沫层和伤口接触层中添加一个或多个穿孔。在另外的实施例中，一个或多个测试区中的每一个还包含与反应剂垫流体连通的反浸出捕集器和与反浸出捕集器对准的一个或多个穿孔。

在一些实施例中，测试区包含多通道测试区，其中所述多通道测试区内的每个通道通过一个或多个不可渗透的隔板或边界与相邻通道分离。此类多通道测试区可以包含1到10个测试区，优选3、4或5个测试区，其中测试区以线性或径向构型布置。可以将多通道测试区的阵列组合以覆盖更宽区域的伤口或伤口敷料。在另外的实施例中，伤口敷料的外层包含一个或多个窗，其允许观测来自反应剂层的信号，其中所述信号是颜色变化。

此类伤口敷料或装置提供了检测哺乳动物伤口中一种或多种酶的水平的方法，包含使哺乳动物伤口与伤口敷料接触；观察反应剂层中的一个或多个信号，其中所述信号是颜色变化；和将信号与参考物或对照物进行比较以确定酶的水平。在另一实施例中，伤口敷料可以用于检测哺乳动物伤口中一种或多种酶的存在和/或pH，包含使哺乳动物伤口与伤口敷料接触并且观察反应剂层中的一个或多个信号，其中所述信号是颜色变化。在另一实施例中，伤口敷料可以用于治疗哺乳动物伤口中的感染或确定何时需要此类治疗，包含使伤口与本文中所描述的的伤口敷料接触，观察反应剂层中的一个或多个信号，其中所述信号是颜色变化并且指示感染的存在，和对哺乳动物进行药物治疗。

在一些实施例中，用于检测伤口中的感染的装置包含：伤口接触层；包含一种或多种反应剂的反应层，所述反应剂可以指示与感染相关的一种或多种分析物的存在，其中所述反应剂固定到固相并且在报告器区域产生可检测信号；在反应层顶部上的盖，其中盖包含一个或多个窗或透明区域，以允许观测可检测信号，如颜色变化，和伤口接触层与反应层之间的流体连通。反应剂包括酶反应性指示剂，其与选自由以下组成的组的一种或多种酶相互作用：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶、酯酶和其任何组合，至少一种针对pH或pH变化的指示剂，其中所述指示剂可以印刷、喷涂或沉积在固相或载体材料上，所述固相或载体材料包括纸、粘胶纤维、再生纤维素、玻璃纤维或类似材料。在另外的实施例中，酶反应性指示剂包含在酶不稳定或酶反应性区与一种或多种酶相互作用时能够产生可见颜色或可检测的电子变化的部分，其中所述部分选自由以下组成的组：过氧化物酶底物、芳胺、氨基酚、中性染料、带电染料、纳米粒子、胶体金粒子和其类似物。在另外的实施例中，装置包含吸收性材料的芯吸缝合或芯吸簇绒，以在伤口接触层与反应层之间形成流体连通。

一种用于检测感染相关酶的装置，其作为独立实体提供并且可以放置到任何敷料或绷带系统中，包含与反应剂池流体连通的样品入口，其中反应剂池包含样品递送和/或pH变化的指示剂(可以是同一种)和一种或多种感染的生物标志物的指示剂，所述感染的生物标志物包括溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶、酯酶和其任何组合。流体连通包含至少一个指示剂通道、通路或臂，如一到十个指示剂通道，或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个独立指示剂通道，其中指示剂被印刷、喷涂或沉积在载体材料或固相上的反应区域或区中，并且以径向构型布置以形成盘，并且其中反应区域或区由不可渗透的隔板或通路隔开。载体材料可以包含非织造材料。在一些实施例中，盘包含印刷、喷涂或沉积在盘的顶表面上的反应剂，底表面上具有捕集材料和底物材料，其中所述底物可以被样品中的一种或多种酶消化以释放一个或多个向捕集器迁移的产物。在另外的实施例中，一种或多种产物着色或产生能够在盘的顶表面上观测到的颜色变化。

在另外的实施例中，用于检测伤口中的感染的诊断盘包含反应层，所述反应层包含一种或多种与指示感染的酶相互作用的反应剂，其中所述反应剂固定在固相上；每种反应剂喷涂、印刷或沉积在由不可渗透的分离器隔开的反应剂区域；每个通路包含报告器区域，其中可以观察到颜色变化；以及包含用于观测报告区域中的颜色变化的窗的盖。诊断盘可以进一步包含至少一种反应剂，其回应于pH的变化而产生颜色变化。诊断盘中的多个通路，其中每个通路含有不同的指示剂/反应剂，可以围绕切割入口、穿孔或芯吸材料以线性或径向构型布置，其允许样品或伤口接触材料与反应层中的反应剂之间的流体连通。反应剂包括如上文所描述的指示剂，即与溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶或酯酶相互作用的反应剂。在一些实施例中，诊断盘包含选自由以下组成的组的固相材料：纸、粘胶纤维、再生纤维素、玻璃纤维和类似材料。在另外的实施例中，盘连接到伤口敷料中的非织造载体，其中用于这种连接的装置包括但不限于连续粘合剂、环形或环状粘合剂、用UV印刷边界熔接以及用聚乙烯组分或非织造载体熔接。

在另外的实施例中，可以施加本文中所描述的反应剂以形成用于检测伤口中的感染的侧流或量杆装置，包含以线性构型布置的一个或多个反应剂盘，其中每个反应剂盘浸渍有与酶相互作用以产生颜色变化或类似的可检测信号的反应剂，其中盘中的一个产生基于pH的颜色变化，并且其中盘固定到包含纸、粘胶纤维、再生纤维素、玻璃纤维或类似材料的固相上。反应剂包括酶反应性指示剂，其在溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶或酯酶存在下产生颜色信号。在一个实施例中，每个盘由不可渗透的边界或通路分隔。

在另一实施例中，用于检测伤口或样品中的感染的独立装置包含壳体，所述壳体包含：用于收集样品的取样组件；与反应室流体连通的样品制备室，其中所述样品制备室接收样品；所述反应室包含一个或多个反应池，所述反应池含有与样品中的一种或多种酶相互作用的反应剂以指示感染的存在和/或样品的pH；用于观测可检测信号的窗或透明区域，其中所述信号是颜色变化或电子输出。一种或多种反应剂与选自由以下组成的组的酶相互作用：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶和酯酶，以产生可检测信号，其中所述信号是颜色变化。一种或多种反应剂回应于pH的变化、碱性pH或酸性pH而产生颜色变化。在另外的实施例中，反应剂在主要是液体的介质中进行反应，其中反应剂可以以片剂形式提供以用于反应池。在一些实施例中，可以将反应剂印刷、喷涂或沉积在载体材料上的独立反应剂区中，以形成用于反应池的测试板，如测试条。载体材料包括纸张、粘胶纤维、再生纤维素和玻璃纤维。反应剂区可以沿塑料或纸载体条排成一行，其能够吸收反应室中的样品，使样品与反应室中的反应剂相互作用。在一些实施例中，取样组件包含拭子装置或钩或针装置，其适于在不干扰敷料的情况下从伤口敷料移除取样线以对伤口流体进行取样。

在另外的实施例中，用于检测样品中感染的试剂盒包含用于收集样品的取样组件；测试装置，其包含围绕管的壳体以在壳体中限定用于接收取样组件的开口，壳体包含：盛装液体稀释剂的稀释剂室；与管或样品液体连通的反应孔，反应孔容纳一种或多种与一种或多种分析物相互作用以产生颜色变化或类似的可检测信号的反应剂；观察窗或报告器区域，其中可以观察到颜色变化或类似的可检测信号；并且其中液体稀释剂从样品组件流入反应孔，以使样品与反应孔中的反应剂混合。如上文所描述，反应剂包含一种或多种酶反应性指示剂和/或pH指示剂。样品可以从伤口、伤口敷料或手术部位获得。在一些实施例中，取样组件是拭子装置或钩或针装置。反应剂可以以片剂形式提供，其在与液体稀释剂和样品接触时溶解。反应剂也可以沉积在测试条上的独立区中以形成测试板，其可以应用于反应孔中。

在另一实施例中，反应剂以液体形式提供以用于反应孔中。反应孔的数量基于待分析的分析物的数量，在一到十的范围内，包括回应于pH或下列酶之一的存在而产生可检测信号的指示剂：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶和酯酶。反应孔可以以各种构型布置，包括线性或径向构型。

在另一实施例中，公开了一种伤口敷料，其包含：伤口接触层；包含一个或多个测试区的反应剂层，其中反应剂层与伤口接触层流体连通；和覆盖反应剂层的外层。

在另一实施例中，公开了一种伤口敷料，其中一个或多个测试区中的每一个包含每个回流捕集器、反应剂垫、过滤垫、指示剂捕集器和吸收区域中的一个或多个，并且其中一个或多个观察窗位于反应剂垫或指示剂捕集器上方。

在另一实施例中，公开了一种检测哺乳动物伤口中一种或多种酶的水平的方法，所述方法包含：使哺乳动物伤口与伤口敷料接触；观察反应剂层中的一个或多个信号，其中信号是颜色变化、荧光信号、发光信号或电性变化；和将信号与参考物或对照物进行比较以确定酶的水平。

在另一实施例中，公开了一种检测哺乳动物伤口中一种或多种酶的存在的方法，所述方法包含：使哺乳动物伤口与伤口敷料接触；并且观察反应剂层中的一个或多个信号，其中信号是颜色变化、荧光信号、发光信号或电性变化。

在另一实施例中，公开了一种检测哺乳动物伤口中的感染的方法，所述方法包含：使伤口与伤口敷料接触；和，观察反应剂层中的一个或多个信号，其中信号是颜色变化、荧光信号、发光信号或电性变化。

在另一实施例中，公开了一种用于检测伤口中的感染的装置，其包含：伤口接触层；反应层，其包含一种或多种反应剂，所述反应剂可以指示与感染相关的一种或多种分析物的存在，其中所述反应剂固定在固相上并且在报告器区域产生可检测信号；位于反应层的顶部上的盖，其中盖包含一个或多个窗或透明区域，以允许观测可检测信号；以及，伤口接触层与反应层之间的流体连通。

在另一实施例中，公开了一种伤口敷料，其中反应剂垫与过滤垫流体连通；过滤垫与指示剂捕集器流体连通；并且指示剂捕集器与吸收区域流体连通。

在另一实施例中，公开了一种用于检测伤口中的感染的诊断盘，其包含：反应层，所述反应层包含一种或多种与指示感染的靶酶相互作用的反应剂，其中所述反应剂固定在固相上；每种反应剂喷涂、印刷或沉积在通过不可渗透的隔板与相邻通路分开的通路中的反应剂区域中；每个通路包含报告器区域，其中观察到颜色、颜色变化或其它可检测信号；以及包含用于观测报告器区域中的信号的窗的盖。

在另一实施例中，公开了一种用于检测伤口中的感染的侧流或量杆装置，其包含：一个或多个以线性构型布置的反应剂盘，其中每个反应剂盘浸渍有与酶相互作用以产生颜色变化和/或对pH敏感的反应剂，所述颜色包含溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料，并且其中盘固定在固相上。

在另一实施例中，公开了一种用于检测伤口或样品中感染的装置，其包含壳体，其中所述壳体包含：用于收集样品的取样组件；与反应室流体连通的样品制备室，其中样品制备室接收样品；所述反应室包含一个或多个反应池，所述反应池含有与样品中的一种或多种酶相互作用的反应剂，以指示感染的存在和/或样品的pH；用于观测可检测信号的窗或透明区域，其中信号是颜色变化。

在另一实施例中，公开了一种用于检测样品中感染的试剂盒，其包含：用于收集样品的取样组件；测试装置，所述测试装置包含围绕管的壳体，以在壳体中限定用于接收取样组件的开口，所述壳体包含：容纳液体稀释剂的稀释剂室；与管液体连通的反应孔，其中所述反应孔容纳一种或多种与一种或多种分析物相互作用以产生颜色变化或可检测信号的反应剂；观察窗或报告器区域，其中可以观察到颜色变化或可检测信号；并且其中液体稀释剂从样品组件流入反应孔，以使样品与反应孔中的反应剂混合。

应理解，所属领域技术人员根据以下详细描述将显而易知本发明技术的其它实施例和配置，其中通过实例或图示的方式展示并且描述本发明技术的各种配置。如将认识到，本发明技术能够具有其它和不同的配置，并且其若干细节能够在各种其它方面中进行修改，全都不脱离本发明技术的范围。因此，附图和详细描述应被视为在本质上是说明性而非限制性的。

以引用的方式并入

本说明书中提及的所有公开、专利和专利申请都以引用的方式并入本文中，其引用的程度如每个单独的公开、专利或专利申请经特定并且单独地指示以引用的方式并入一般。

附图说明

为了理解本公开，现将通过实例参考附图描述，附图中示出了本公开的实施例和实例，并且与以下说明书一起用于解释本公开的原理。

图1：工程化三维织物结构的实例，如波纹。

图2：具有AQUACEL的敷料的实例，其展示不同层的敷料和将流体从伤口抽吸到敷料的反应层的缝合。

图3：反应池的示意图，其展示具有(A)中的缝合(21)和(B)中的切割入口(27)反应池的不同组件。在一些实施例中，每个反应池可以是不同的报告器或染料系统。

图4：反应池中的指示剂在暴露于流体时的移动，所述流体从切割入口和反应剂(22)流向吸收或蒸发区域(25)。随着时间的推移，反应产物扩散并且向吸收或蒸发区域迁移。以径向方式布置的指示剂的移动在(B)中示出。在一些实施例中，每个通路或反应池可以是不同的报告器或颜色系统。可以使用多个反应池，如(C)中所示。可以以阵列或组合方式使用多反应池以在一个区域上提供指示器功能。可以使用反浸出捕集器来防止回流。

图5：指示剂可以以环状或径向方式布置以形成指示剂盘(A)。在一些实施例中，每个通路或反应池(45-48)可以是不同的报告器或颜色系统，如溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料。(B)展示从上方和下方观察的径向指示剂盘。

图6：用于MPO检测的印刷敷料。在一个实施例中，用淀粉酶、淀粉和葡萄糖氧化酶喷涂或印刷伤口接触材料，随后印刷在每个喷涂区域的中心印刷的MPO的底物。

图7：展示测试条上的MPO和弹性蛋白酶底物的就地显色。这些测试条代表用于检测样品中MPO和弹性蛋白酶存在的可视化方法的原型，其中颜色(例如蓝色)的强度随着底物浓度的增加而增加。

图8：展示底物的实例，包括MPO底物(坚牢蓝(Fast Blue)衍生物)、弹性蛋白酶底物和吲哚酚氧化成蓝色靛蓝。

图9：径向布置的不同指示剂的就地显色。(A)和(B)代表用于检测某些分析物的指示剂的原型，包括pH变化、MPO、溶菌酶和弹性蛋白酶。在一个实施例中，pH变化可以报告为从黄色到绿色的颜色变化；MPO报告为蓝色外观；溶菌酶报告为粉红色或红色外观；弹性蛋白酶报告为绿色或蓝色外观；并且液体对照物报告为蓝色或紫色外观。

图10：径向指示剂插入件或盘的示意图。

图11：具有用于检测的窗的径向指示剂插入件或盘的示意图。

图12：具有用于检测的窗的径向指示剂插入件或盘的另一实施例的示意图。

图13：Remazol亮蓝的运输，展示液体运输后指示剂向报告器区域的迁移。

图14：pH指示剂的实例。在一个实施例中，随着pH的增加，颜色可以从绿色变为蓝色。

图15：溶菌酶测试条的示意图。流体流动导致染色肽聚糖粒子向上移动到捕集层。

图16：指示剂底物和反应的实例。

图17：自由放置在敷料中的指示剂盘的实例。

图18：敷料中的非织造层中的诊断盘的实施例。

图19：敷料中的非织造层中的诊断盘的实施例。

图20：以片材的形式制造诊断盘的实例。

图21：印刷并且涂覆的纸盘的实施例。在一些实施例中，每个盘可以是不同的报告器或颜色系统。

图22：将诊断盘附接或施加到敷料中的非织造层的方法。

图23：展示具有以不同阵列和组合布置的指示剂插入件或盘的量杆装置。在一些实施例中，每个插入件、盘或通路可以是不同的报告器或颜色系统。

图24：取样线和在敷料中的使用。取样线可以结合在伤口敷料中或手术部位处，其中在诊断装置中可以在不干扰敷料的情况下拉出线以测试微生物感染的存在或手术部位或伤口的状况。

图25：用于制造指示剂插入件的组合件。

图26：独立装置试剂盒的横截面

图27：插入独立装置试剂盒的壳体中的取样尖端

图28：独立装置试剂盒的平面视图

图29：独立装置试剂盒的另一视图

图30：独立装置试剂盒的平面视图，其中壳体滑动分开

图31：独立装置试剂盒中的稀释剂室、管和反应室

图32：测试溶液向独立装置试剂盒中的每个反应室的分配

图33：具有壳体的诊断拭子装置，其中可以从壳体中的观察窗观察到与指示剂盘或插入件的反应。

图34：线钩诊断装置，其适于从敷料中拉出取样线用于分析。

图35：拭子诊断装置，其中拭子用于获得用于利用诊断装置进行测试的样品，其进一步包含稀释剂室、气体出口和柱塞。

图36：用于样品制备的稀释室。包含稀释剂的稀释剂室适用于拭子装置、线钩装置和类似的样品制备装置，其包含可重复密封的顶部和底部处的密封件或膜，其中破坏密封件或膜(402)允许样品与稀释剂溶液混合，稀释剂溶液流出稀释剂室并且进入包含反应室或孔的测试装置中。

图37：具有取样室和反应孔的诊断装置的实施例。具有反应室(502)的诊断装置的一个实施例适于连接到用于从样品制备装置(300)(如拭子装置)接收样品的取样室或稀释室(202)。

图38：诊断装置或转移系统的实施例，其中样品室或稀释剂室使用鲁尔锁(Luer-lock)连接器连接到反应室以测试样品流体。在一个实施例中，柱塞或活塞包含气体出口，用于保持样品的钩，以及当柱塞被压入稀释剂室时释放气体的膜。

图39：分析或诊断系统的另外实施例，其中反应室布置成径向布置。

具体实施方式

在下文中将更全面地描述所公开技术的各种方面。不过，这些方面可以按许多不同形式实施，并且不应被解释为限于本文中阐述的实施例；实际上，提供这些实施例是为了使本公开透彻和完整，并且这些实施例将把本公开的范围完整地传达给本领域的技术人员。

贯穿本公开内容，引用各种专利、专利申请和公开案。这些专利、专利申请和公开案的公开内容以其全文引用的方式并入本公开中，以便更充分地描述截至本公开的如本领域技术人员所已知的现有技术水平。在所引用的专利、专利申请和公开案与本公开之间存在任何不一致的情况下，将以本公开为准。

本文提供了检测伤口中的感染的方法。在一些实施例中，这些是伤口敷料，其能够在感染以其它方式显而易见之前检测一种或多种体液中的感染。在一些实施例中，伤口敷料与伤口渗出物或伤口流体反应，以通过敷料中的可见或以其它方式可检测的变化来检测伤口中的感染。在一些实施例中，伤口渗出物或伤口流体在无需移除敷料的情况下通过伤口敷料被吸取到反应剂层以评估可能的感染。在一些实施例中，伤口渗出物或伤口流体与反应剂层反应以产生颜色或其它可见的或可观察标志物。在一些实施例中，颜色易于与伤口或体液中常见的那些颜色区分开。在一些实施例中，伤口渗出物或伤口流体与伤口敷料的反应剂层之间的反应发生在环境温度下和足够短以允许及时响应的一段时间内，及时响应如在清洁伤口并且检查测试结果后决定改变敷料和/或施用抗菌剂或局部或全身抗生素。在一些实施例中，颜色或其它可见的或可观察标记和/或颜色或其它可见的或可观察到的标记的位置指示值得更密切的关注和/或抗菌的伤口的一个或多个区域。在一些实施例中，颜色改变功能嵌入在敷料的部分中，仅在更换敷料时可见。在另外的实施例中，产生了颜色变化或其它可见的或可观察标记的反应剂层是独立装置、盘或插入件，能够应用于任何伤口敷料的情况下，在手术或创伤部位，或通过本身作为量杆型装置。在另外的实施例中，将指示剂反应剂应用于“拭子样品制备装置”或注入伤口流体的独立装置中。在一些实施例中，指示剂反应剂直接印刷在载体材料上，如伤口敷料内的各种层。

在本文中所公开的一些实施例中，伤口敷料包含伤口接触层；包含一个或多个测试区或指示反应剂的反应剂层；和覆盖反应剂层的外层。伤口敷料可以包含一个或多个测试区，其进一步包含回流捕集器、反应剂垫、过滤垫、指示剂捕集器和吸收区域中的一个或多个，其中观察窗位于反应剂垫或指示剂捕集器上方并且反应剂垫与过滤垫流体连通；过滤垫与指示剂捕集器流体连通；并且指示剂捕集器与吸收区域流体连通。

在一些实施例中，检测区包含一种或多种选自由以下组成的组的组分：酶反应性指示剂、作为氧化物源的反应剂、能够转化颜色反应的酶、pH指示剂、蛋白质反应反应剂和水分检测反应剂。酶反应性指示剂可以包含蛋白质指示剂缀合物。

在一些实施方式中，蛋白质缀合物指示剂沉积在反应剂垫中或反应剂垫上。在一些实施例中，蛋白质指示剂缀合物具有式(I)的结构：A-B，其中：A是用于附连到测试区的锚定区；B是酶反应性区。在另外的实施例中，酶反应性区包含肽或指示剂区。锚定区可以共价或非共价地连接到反应剂垫。

在另外的实施例中，伤口敷料包含除了外层的伤口敷料的所有层中的芯吸缝合或芯吸簇绒线。一个或多个测试区进一步包含与反应剂垫流体连通的反浸出捕集器，一行或多行芯吸缝合或芯吸簇绒仅在反浸出捕集器处穿过一个或多个测试区中的每一个。在另外的实施例中，伤口敷料包含在伤口接触层与反应剂层之间的泡沫层。在一些实施例中，伤口敷料进一步包含伤口接触层的一个或多个穿孔。

在一些实施例中，酶不稳定或酶反应性区可以与靶酶相互作用，靶酶包括弹性蛋白酶、溶菌酶、组织蛋白酶G和髓过氧化物酶。在另外的实施例中，酶不稳定或酶反应性区包含在酶不稳定或酶反应性区与一种或多种靶酶相互作用时能够产生可见颜色或可检测的电子变化的部分，所述部分选自过氧化物酶底物、芳胺、氨基酚、吲哚酚、中性染料、带电染料、纳米粒子和胶体金粒子和其类似物。在一些实施例中，在靶酶已从底物上剪切指示剂后，其通过选自以下的辅助酶进一步反应：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、过氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酸酶、葡糖苷酶和漆酶的或其中一种或多种的组合。

反应性区的应用可以包括用于检测感染相关的酶的装置，在固相上，固相如纸、粘胶纤维、再生纤维素、玻璃纤维，相同或相似的材料的混合物，或沿塑料或纸质载带布置在线上。

在一些实施例中，用于检测与某些酶相关的感染的反应剂或指示剂插入件或盘可以作为独立的实体提供，并且放入任何敷料系统，敷料系统包含样品入口，朝向含有反应剂的不同区域的扩散通道，用于样品递送的指示剂和/或pH指示剂(可以是同一个)，以及针对选自以下的标志物的一种或多种指示剂：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶、酯酶。

在一些实施例中，酶不稳定区对蛋白酶是不稳定的，并且聚合物结合域选自纤维素结合域或是疏水性结合域。

在一些实施例中，酶不稳定区对组织蛋白酶或弹性蛋白酶是不稳定的。

在一些实施例中，化学实体选自小分子实体、改性寡聚物和改性聚合物。

另一方面，本文提供用于检测伤口中的感染的化学实体，所述化学实体包含指示剂区，所述指示剂区包含呈现可见颜色变化的pH敏感性部分。

在一些实施例中，化学实体进一步包含锚定区，其中所述锚定区使得化学实体能够结合到载体材料。

在一些实施例中，pH敏感性部分会在碱性pH下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分会在中性pH下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分会在酸性pH下呈现可见的颜色变化。

在一些情况下，伤口的pH可以影响伤口愈合的许多因素，如血管生成、蛋白酶活性、氧释放和细菌毒性。慢性不愈合伤口可能具有较高碱性环境。随着伤口进展到愈合，伤口的pH移动到中性，并且然后变为酸性。监测伤口的pH可以提供评估伤口状况(例如感染或无感染)的方法，并且有助于确定伤口对治疗的反应。

因此，在所公开技术的一些方面，用于检测伤口中的感染的化学实体包含指示剂区，所述指示剂区包含呈现可见颜色变化的pH敏感性部分。在一些实施例中，化学实体进一步包含锚定区，其中所述锚定区使得化学实体能够结合到载体材料。在一些实施例中，pH敏感性部分在碱性pH下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝7.2-9.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝7.2-9.0下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝7.2-8.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝7.2-8.0下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝7.5-8.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝7.5-9.0下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝8.0-9.0下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝7.2，7.3，7.4，7.5，7.6，7.7，7.8，7.9，8.0，8.1，8.2，8.3，8.4，8.5，8.6，8.7，8.8，8.9，9.0，9.1，9.2，9.3，9.4或9.5或其增量下呈现可见的颜色变化。

在一些实施例中，pH敏感性部分在中性pH下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝6.9，7.0或7.1或其增量下呈现可见的颜色变化。

在一些实施例中，pH敏感性部分在酸性pH下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝4.5-6.8下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝4.5-6.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝5.0-6.8下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝5.4-6.8下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝5.4-6.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH敏感性部分在pH＝4.5，4.6，4.7，4.8，4.9，5.0，5.1，5.2，5.3，5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.1，6.2，6.3，6.4，6.5，6.6，6.7，6.8或6.9或其增量下呈现可见的颜色变化。

在一些实施例中，pH敏感性部分是溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料。

其它实施例包括印刷在敷料或固体载体材料上的反应剂，具有布置成不同阵列的指示剂盘的量杆装置和具有独立样品制备室的装置，独立样品制备室将体液或伤口流体的样品转移到在反应室中使用反应剂丸、溶液或盘以检测与微生物检测相关的生物标志物的独立诊断装置。在另外的实施例中，指示剂被印刷、喷涂或覆盖在载体材料上，载体材料如敷料、伤口敷料、绷带、滤纸以及测试条。

一般来说，当病原体遇到人体内部时，细胞通过对损伤或毒素或细菌细胞壁的先天受体系统反应。所有这些识别事件都导致先天性免疫细胞的募集。这些细胞由病原体如细菌刺激以激活在多形核白血球(PMN)中通常存在的并且特征为主要酶促的细菌杀灭系统。细胞吞噬细菌并且用水解蛋白质的酶(例如蛋白酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G)和水解细胞壁的酶(溶菌酶)，或介导蛋白质变性的酶(NADPH氧化酶、黄嘌呤氧化酶、髓过氧化物酶(MPO))溶解它们。这些PMN通常只是短时间存活的，并且它们自身会在感染区域溶解。当其溶解时，其释放其溶酶体的内容物，包括酶。

因此这些酶是髓样细胞，并且尤其PMN的存在的生物标志物。因此，伤口流体中这些酶的升高水平对应于增强的细菌攻击和天生防御未充分满足的那种。与临床感染关联的这些酶水平的已经使用临床试验方法验证(Blokhuis-Arkes等人，2015)。

另外，伤口的pH可以影响伤口愈合的许多因素，如血管生成、蛋白酶活、氧释放和细菌毒性。慢性不愈合伤口和感染或有感染风险的伤口通常具有较高碱性环境。随着伤口进展到愈合，伤口的pH移动到中性，并且然后变为酸性。监测伤口的pH可以提供评估伤口状况(例如感染或无感染)的方法，并且有助于确定伤口对治疗的反应。

典型的侧流装置利用侧液体流的概念以便将给定的样品运送到测试。侧流测试的好处包括快速结果、长期稳定性和低制造成本。这些特征使侧流测试非常适合涉及尿液中药物测试的应用，特别是在医院和医生办公室进行快速护理测试，是一个优势。可以将测试条直接浸入样品中，所述样品以液体形式取得。样品沿侧流条向上移动并且与可用的抗体结合，这导致可以在带上以肉眼检测到的反应。然而，将这一技术应用于除尿液或血液之外的样品是有问题的。

对伤口中的感染的标志物的早期检测具有这样的优点：在感染确定并且其它感染迹象变得明显，例如伤口的排放物、发红、疼痛和令人不愉快的气味之前开始对感染进行治疗。在伤口流体中测试标志物的困难在于伤口流体的稠度和数量差异很大。举例来说，它可能很少但粘稠，因此难以使用侧流测试。

因此期望的是具有用于收集并且检测来自伤口的流体的单个试剂盒，其易于操作，并且不受来自伤口的渗出物的类型或量限制。本文中所描述的独立装置试剂盒的一个实施例减轻了试剂盒中的上述问题，所述试剂盒包含取样组件和测试装置，其中测试装置不依赖于侧流带来使样品移动通过装置并且实现诊断。

伤口敷料

在一些实施例中，伤口敷料包含伤口接触层；包含一个或多个测试区的反应剂层；和覆盖反应剂层的外层。在一些实施例中，伤口敷料进一步包含在伤口接触层与反应剂层之间的保护缓冲层(例如泡沫或非织造层)。在一些实施例中，伤口敷料进一步包含除外层之外的伤口敷料的所有层中的一行或多行芯吸缝合或芯吸簇绒。在一些实施例中，伤口敷料包含穿过伤口接触层、保护性缓冲层或两者的组合的穿孔。在一些实施例中，这种穿孔允许伤口流体从伤口转移到反应剂层。

伤口接触层

在使用时，伤口敷料的伤口接触层吸收伤口渗出物和/或伤口流体。在一些实施例中，伤口接触层包含凝胶形成聚合物或水纤维(hydrofiber)。凝胶形成聚合物包括但不限于纤维素、羧甲基纤维素(CMC)、羧乙基纤维素、氧化纤维素(或其衍生物)、乙基磺酸纤维素、其它化学改性纤维素、果胶、藻酸盐、壳聚糖、改性壳聚糖、透明质酸、多糖或胶衍生的聚合物，或其任何组合。在一些实施例中，伤口接触层可以包含聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、胶原、明胶或其混合物。在一些实施例中，伤口接触层包含凝胶形成聚合物的纤维。在一些实施例中，伤口接触层包含凝胶形成纤维的非织造层。

在一些实施例中，伤口接触层进一步包含非凝胶形成聚合物。在一些实施例中，伤口接触层包含纤维素(例如莱赛尔(Lyocell))、改性纤维素(例如粘胶纤维或人造丝)、聚酯、蚕丝、羊毛、尼龙、聚丙烯、氨纶或其混合物。

在一个实施例中，伤口接触层的厚度是0.1mm到10mm，在优选的实施例中，其为0.1mm到5mm，并且在更优选的实施例中，其为0.3mm到3.5mm。

保护性缓冲层

在一些实施例中，保护性缓冲层提供伤口的机械保护，并且还通过作为蒸发的大表面积有助于过量渗出液的处理。在一些实施例中，保护性缓冲层也可以作为接受流体离开反应剂层或装置的材料，并且可以通过经由反应剂层或装置拉动或导向流体添加功能。适合材料包括泡沫、(非胶凝)纤维毛、(非胶凝)非织造织物和工程化三维织物结构，如波纹。工程化三维织物结构的实例在图1处展示。优选地，用于保护性缓冲层的材料具有不受与伤口渗出物接触影响或最低限度地受影响的机械缓冲性。在一些实施例中，保护性缓冲层包含基于烯烃或烯烃衍生的聚合物塑料，如聚乙烯、聚丙烯、尼龙、聚氨基甲酸酯、聚苯乙烯和聚氯乙烯。在一些实施例中，这些材料可以进一步包含如表面活性剂或以提高其可润湿性的吸收剂的剂。

在一些实施例中，亲水性聚氨基甲酸酯泡沫有2.5mm(+/-0.5mm)厚，具有90kg/m³到150kg/m³的密度，吸收率≥12g/g。

芯吸缝合和/或芯吸簇绒

在一些实施例中，伤口流体转移到反应剂层由从伤口接触层到反应剂层的纤维簇优化。在一些实施例中，来自伤口接触层的凝胶形成聚合物可以用作流体从伤口到反应剂层的输送机构。在一些实施例中，相比于敷料的交替层之内的材料，凝胶形成聚合物的增加的亲水性允许到反应剂层的增强的芯吸作用。

在一些实施例中，纱线可以用于提供从伤口接触层到反应剂层的流体的毛细作用。这可以通过使用一层或多层敷料的缝合或使用纱线簇绒穿过一个或多个敷料层来实现。

在一些实施例中，芯吸缝合和/或芯吸簇绒选自可润湿并且展现毛细作用的各种纤维。此类纤维包括但不限于棉、人造丝、粘胶纤维、羊毛、蚕丝、聚酯、聚酰胺和CMC纤维、实心和空心纤维。在一些实施例中，芯吸缝合包含棉、聚酯、聚酰胺、聚丙烯或其组合。在一些实施例中，使用数量增加的帘布层或复丝纱，增加线性密度的纱和/或降低线性密度的纤维可以增强毛细作用。在一些实施例中，芯吸缝合包含棉。在一些实施例中，芯吸缝合包含聚酯。在一些实施例中，芯吸缝合包含聚酰胺。在一些实施例中，芯吸簇绒包含CMC纤维。在一些实施例中，芯吸发生在敷料层的所有区域上。在一些实施例中，芯吸在反应剂层下方或邻近于反应剂层立即集中，以提供集中的增强芯吸作用和/或与反应剂层的反应。

在一些实施例中，通过使用亲水性纱线的水纤维和/或泡沫层的纱线的缝合提供芯吸容量。伤口流体可以在到印刷的底物或反应层的更直接的路线上通过纱线芯吸。纱线线性密度的增加可以允许更多地减少所需的芯吸时间和/或流体量。

在一些实施例中，在伤口敷料中水纤维泡沫层压材料的针刺在敷料的泡沫侧产生水纤维的簇。针刺的可变参数包括针刺密度和穿透深度，如在1-10mm的穿透下的10-100针/厘米²、在2-9mm的穿透下的20-90针/厘米²、在3-8mm的穿透下的30-80针/厘米²、在4-8mm的穿透下的40-80针/厘米²、在5-8mm的穿透下的50-80针/厘米²、在6-8mm的穿透下的60-80针/厘米²、在6mm的穿透下的70针/厘米²。通过泡沫产生水纤维的通道，引起流体的垂直芯吸。水纤维簇可以实现更快的流体和酶转移。用于簇绒的针的类型包括毡(冠)、毡(规则)和叉。在一些实施例中，使用刺针使得在不会对泡沫或胶凝纤维造成不利影响的情况下，通过泡沫层产生胶凝纤维簇。穿透深度可以是1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm或12mm，或小于6mm、或小于7mm、小于8mm、小于9mm或小于10mm。优选地，穿透深度为6mm，这使得在70p/cm²的针刺密度下在垂直芯吸时间降低18％。随着针刺密度的增加，在泡沫层上产生更多的水纤维簇。在6mm穿透深度的所有针刺密度下都观察到增强的流体转移。

在一些实施例中，使用亲水性纱线将纱线通过水纤维和/或泡沫层缝合提供了芯吸能力。缝线可以是约1mm、约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm、约10mm、约11mm、约12mm、约13mm、约14mm、约15mm、至少约5mm、小于约6mm、小于约7mm、小于约8mm、小于约9mm或小于约10mm。伤口流体可以通过纱线以更直接的方式芯吸到印刷的底物或反应层。纱线密度的增加允许更多地减少所需的芯吸时间和/或流体量。短缝线(小于3.5mm)不会减少通过泡沫层所需的芯吸时间/体积。缝线可以是5mm，以使芯吸时间减少约45％。在一些实施例中，对于两种类型的纱线缝合，测试组合厚度为4.3mm的水纤维-泡沫层压材料：高芯吸聚酯(连续长丝)和标准聚酯线。测试了三个缝线长度，包括2.5mm、3.5mm和5.0mm。将缝线并入增强流体转移，而增加缝线长度可以减少垂直芯吸时间。

穿孔

在一些实施例中，敷料的不同层，如凝胶形成伤口接触层和泡沫的毛细作用在工厂的孔隙率和未进行进一步的处理的情况下是足够的。在其它实施例中，毛细作用可以通过精细的针刺产生具有毛细作用的通道来增强。在一些实施例中，针刺可以在敷料层的所有区域上进行，以提供总体上增强的毛细作用。在一些实施例中，针刺在到反应剂层的公共入口的正下方或邻近处集中，以提供集中、增强的毛细作用。在一些实施例中，穿孔在敷料的所有层中存在。在另外的实施例中，穿孔在伤口接触层和反应剂层之间的一个或多个层中存在。在一些实施例中，可以通过增加针刺的针刺密度，以产生更高的每单位面积的穿孔量增强毛细管作用。

穿孔允许流体通过水纤维和/或泡沫层直接转移到印刷底物层。孔越大，可以转移的流体越多，减少了流体与印刷底物层相互作用所需的芯吸时间/体积。但是，如果孔太大，则可能影响敷料的流体处理能力。胶凝纤维在水合时膨胀并且可能阻塞胶凝织物的穿孔通道。可以使用皮下注射针形成穿孔。在更高的密度下，垂直芯吸时间可以减少约28％。在一些实施例中，垂直芯吸时间减少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％。

反应性或反应剂层

在一些实施例中，伤口接触层，或支持它的层包含与伤口渗出物反应以指示潜在感染的材料，或反应性层。反应性层可以包含支持这些反应需要的一种或多种染料和/或反应剂。在一个实施例中，这些染料包含氨基酸、肽或与染料缀合的蛋白，所述染料具有强离子作用、强对比颜色，或能够形成颜色，如吲哚/靛蓝。在一个优选的实施例中，处理包括用固定的捕集材料印刷的敷料内的层，所述染料与其结合。这一层是任选在敷料的外部部分或以各种水平在敷料内，使得其可以在不更换敷料的情况下或更换敷料时观察到。

在另一优选实施例中，反应性层由MPO底物、葡萄糖氧化酶和能量源(如葡萄糖或淀粉)和γ-淀粉酶构成。在另一实施例中，敷料含有由壳聚糖或在通过溶菌酶水解时释放染料的衍生物的粒子构成。这些染料可以是高度带电的或其它功能性的，以允许它们在信号解释的位置积累。在另外其它实施例中，反应性层包含化合物，如对氨基酚、ABTS(2，2inophenol、ABTS(strate.在一些实施例中，酸)二铵盐)、3，3′-二氨基联苯胺、3，4二氨基苯甲酸、DCPIP、N，N-二甲基对苯二胺、邻联茴香胺、对苯二胺、4-氯-1-萘酚、邻苯二胺N-4-(氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺、3-氨基-9-乙基咔唑、4-氨基邻苯二甲酰肼、5-氨基水杨酸、2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)、吲哚酚、靛蓝、坚牢蓝RR、4-氯-7-硝基苯并呋咱。在一些实施例中，反应性层包含芳胺。在一些实施例中，反应性层包含氨基酚。在一些实施例中，反应性层包含氨基酚和氨基酚醚。在一些实施例中，反应性层包含吲哚酚。在一些实施例中，反应性层包含中性染料。在一些实施例中，反应性层包含带电染料，例如选自以下的染料：remazole亮蓝、甲苯胺蓝、反应性黑5、remazol亮蓝、反应性紫5和反应性橙16，或其水解或氨解衍生物、甲苯胺蓝、反应性黑5，或其水解或氨解衍生物；反应性紫5，或其水解或氨解衍生物；反应性橙16，或其水解或氨解衍生物；基于二氯三嗪的反应性染料，如反应性蓝4、反应性红120、反应性蓝2、反应性绿19和反应性棕10。在一些实施例中，基于二氯三嗪的反应性染料呈现黑色。

在特定的实施例中，反应性层包含化合物，如含有磺酰基乙基-硫酸氢盐反应性基团的反应性染料。在一些实施例中，反应性染料是反应性黑5、remazol亮蓝、反应性紫5或反应性橙16。在一些实施例中，反应性染料是反应性黑5。在一些实施例中，反应性染料是remazol亮蓝。在一些实施例中，反应性染料是反应性紫5。在一些实施例中，反应性染料是反应性橙16。在一些实施例中，反应性染料是反应性黑5、remazol亮蓝或反应性紫5。在一些实施例中，反应性染料是反应性黑5或remazol亮蓝。

在一些实施例中，反应性层包含纳米粒子。在一些实施例中，反应性层包含胶体金粒子。在一些实施例中，反应性层包含带电染料，吲哚衍生物或鲁米诺衍生物。特别地，反应性层包含含有磺基乙基-硫酸氢盐反应性基团的染料，例如反应性黑5、remazol亮蓝、反应性紫5或反应性橙16，或其组合；或含有二氯三嗪反应性基团的染料，例如反应性蓝4、反应性红120、反应性蓝2、反应性绿19和反应性棕10，或其组合。

图3展示反应单元的两个实施例，包含指示剂单元或测试区。在图3的(A)中，使用芯吸纤维缝合(21)有助于将伤口或体液从伤口吸取到反应剂垫(22)，然后通过测试区(23和24)并朝向吸收或蒸发区域(25)。在图3的(B)中，制作穿孔或切割入口(27)，如在反应剂垫(22)中，以允许伤口流体通过毛细作用从伤口流到反应剂垫。反应剂垫(22)可以包含与伤口流体中的微生物生物标志物反应的反应剂，如与伤口流体中的MPO(29)、弹性蛋白酶(30)和溶菌酶(31)反应的底物。在一些实施例中，一个或多个测试区可以包含磺酸过滤垫(23)和季铵捕集器(24)。在一些实施例中，一个或多个测试区包含反浸出捕集器(28)和胺回流捕集器或过滤器(29)。一些实施例含有允许使用者检测在伤口流体中微生物生物标志物与反应剂垫(22)中的反应剂之间的反应产生的可见信号的pH指示剂(32)和蛋白质指示剂(33)和。吸收或蒸发区域(25)有助于将流体从反应剂垫(22)向(25)吸取。在优选实施例中，不可渗透的隔板(26)使相邻的测试区保持分离。

在一些实施例中，指示剂捕集器捕获伤口流体与选自由以下组成的组的一种或多种组分之间的反应产物：酶反应性指示剂、作为过氧化物源的反应剂、能够转化颜色反应的酶、pH指示剂和水分检测反应剂。在一些实施例中，指示剂捕集器包含反应产物的带正电或带负电的捕集器。在一些实施例中，带正电的捕集器包含季铵聚合物、仲胺与叔胺的混合物、其它含胺聚合物或其组合。在一些实施例中，带正电的捕集器包含聚DADMAC或其类似物。在一些实施例中，带负电的捕集器包含含有羧基、硫酸根、磺酸根或其它酸性化学基团的聚合物或反应剂。在一些实施例中，带负电的捕集器包含苯乙烯磺酸盐。在一些实施例中，指示剂捕集器包含总蛋白质指示剂，其由伤口流体洗脱以指示测试区的总体流和容量。在一些实施例中，对照区含有普遍存在的酶(如酯酶或碳酸酐酶)的底物，或普遍存在的代谢物(如乳酸、葡萄糖、氨或脂质)的指示剂。在一些实施例中，一个或多个测试区包含磺酸过滤垫和季铵捕集器。在一些实施例中，一个或多个测试区包含反浸出捕集器、磺酸过滤垫和季铵捕集器。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个用于评估一种或多种分析物和一种或多种阳性或阴性对照指示剂的存在。在另外的实施例中，一种或多种分析物与酶活性相关。在一些实施例中，酶选自由以下组成的组的一种或多种：弹性蛋白酶、溶菌酶、组织蛋白酶G、髓过氧化物酶和白细胞过氧化物酶。在一些实施例中，酶是弹性蛋白酶。在一些实施例中，酶是溶菌酶。在一些实施例中，酶是组织蛋白酶G。在一些实施例中，酶是髓过氧化物酶。在一些实施例中，酶是白细胞过氧化物酶。

在一些实施例中，伤口敷料包含含有一个或多个测试区的反应剂层。在一些实施例中，反应剂层包含载体材料。在一些实施例中，载体材料包含织造或非织造材料，其能够被伤口流体润湿并且显示毛细作用。在优选实施例中，毛细作用在材料的平面中是均一的。在优选实施例中，测试区被布置成圆，使得当施加液体时扩散径向发生。载体材料包括但不限于纸、纤维素、纤维素衍生物、粘胶纤维、聚酰胺、聚酯、聚丙烯酸酯和适用作纤维的其它类似聚合物以及其任何组合。在一些实施例中，载体材料基于纤维素，如精制纸，或含有结合纤维素纤维的非织造材料。在一些实施例中，载体材料是聚酰胺。在一些实施例中，载体材料是聚酯。在一些实施例中，载体材料是聚丙烯酸酯。在一些实施例中，固体载体的作用是粘合底物，并且提供分析物酶可以向其行进并且与检测剂相互作用的区。在一些实施例中，纤维素含量有助于酶底物的粘着，并且大的纤维素或纤维素类含量是优选的。

在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个印刷在载体材料上或载体材料中。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个包含伤口流体的入口、伤口流体与反应剂反应的区域(例如反应剂垫)、用以观察一个或多个反应的各产物的区域和过量伤口流体积聚的区域(例如吸收区域)，然后将伤口流体从一个区域蒸发，所述区域足够大，从而不因积聚溶质阻塞。在一些实施例中，蒸发区有助于驱动更多的伤口流体的拉通。

图4展示各种反应池中指示剂移动的多个实施例。当图4的(A)的实施例中的测试区暴露于伤口流体时，伤口流体从反应剂垫(22)流向吸收或蒸发区域(25)，如图4(A)的右图所示。图4的(B)的实施例展示反应池的一个实施例，其中指示剂布置成径向布置，并且其中流体在遇到反应剂垫时从中心向外流动。图4的(C)的实施例示出如何使用多个反应池来覆盖更宽的区域，其中捕集器反浸出(41)防止回流。在一些实施例中，反应剂垫(22)的每一反应剂池或通路可以是不同的报告器或颜色系统，如溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料。在伤口流体存在下，在一个实施例中，反应剂与伤口流体中的分析物相互作用并且向吸收或蒸发区域(25)迁移或扩散。

在一些实施例中，使用需要捕获反应产物的反应剂，并且为此，一个或多个测试区中的每一个包含反应剂垫或反应剂单元(22)、过滤垫(23)、指示剂捕集器(24)和吸收/蒸发区域(25)。在包含颜色变化反应剂的实施例中，一个或多个测试区中的每一个包含也在观察窗下的反应剂垫和吸收/蒸发区域。在一些另外的实施例中，一个或多个测试区中的每一个包含反浸出捕集器，反浸出捕集器是含有吸收反应剂并且阻止其回流到下方的敷料的捕集器区。在一些实施例中，外层覆盖反应剂层以便调节伤口流体的蒸发，外层含有一个或多个窗以观测来自一个或多个测试区的下面的指示剂捕集器和/或反应剂垫。

在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测至少一种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个包含一个或多个不可渗透的隔板，其中一个或多个测试区中的每一个检测一种以上的生物标志物。在一些实施例中，一个或多个不可渗透的隔板是疏水性非渗透性材料的印刷条。在一些实施例中，一个或多个不可渗透的隔板布置在平行的通路中。在一些实施例中，一个或多个不可渗透的隔板以径向图案布置。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测两种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测三种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测四种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测五种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测六种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测七种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测八种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测九种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测十种生物标志物。在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个检测一种或多种生物标志物。

图5展示指示器的径向布置或或径向指示器贴片。如图5的(A)所示，测试区或反应剂可以以环形或径向方向布置。指示器包括反应剂(22)、季铵捕集器(24)和吸收或蒸发区域(25)。指示器中间的孔或切割入口(27)有助于将伤口的流体吸入指示器。流体通常将从入口(27)向外流到蒸发区域(25)。当反应剂(22)暴露于伤口流体并且与微生物生物标志物反应时，所得产物迁移到胺捕集器(24)，允许由使用者检测。指示器还可以具有不可渗透的隔板或通路(26)。如图5的(B)所示，对于径向指示器贴片，提供顶部或“上方”视图，并且提供底部或“下方”视图。在一个实施例中，底物可以印刷为点，以允许更大的印刷自由度。两侧带有粘合剂的不透湿膜允许径向指示器贴片附着到泡沫或其它载体材料上。在一些实施例中，每个反应池或通路(45-48)可以是不同的报告器或颜色系统，允许分析一个指示剂贴片上的多种分析物。

在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个包含选自由以下组成的组的一种或多种组分：酶反应性指示剂、作为过氧化物源的反应剂、能够转化颜色反应的酶、pH指示剂、总蛋白检测反应剂和水分检测反应剂。在一些实施例中，作为过氧化源的反应剂选自过氧酸、过碳酸钠和生成过氧化物的氧化酶，如葡萄糖氧化酶或乳酸氧化酶。在一些实施例中，能够辅助颜色反应转化的酶选自过氧化物酶和漆酶。在一些实施例中，一种或多种组分固定在一个或多个测试区内。在一些实施例中，一种或多种组分通过一个或多个测试区内的伤口流体移动。在一些实施例中，由于与伤口流体的相互作用，一种或多种组分与一个或多个测试区结合。在另外的实施例中，一个或多个测试区中的每一个进一步包含由以下组成的组的一种或多种：缓冲剂、粘合剂和溶解度增强剂。在一些实施例中，一种或多种缓冲剂、粘合剂和/或溶解度增强剂改善印刷或稳定性。

在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个包含酶反应性指示剂，进一步包含酶不稳定或酶反应性部分，将反应性指示剂保持在适当位置的固定部分，和在反应性指示剂与靶酶相互作用后产生可见的变化的部分。在一些实施例中，每个部分明显不同于另一个。在一些实施例中，一个部分部分地或完全并入另一部分。在一些实施例中，反应剂垫包含一种或多种酶反应性指示剂。

在一些实施例中，酶反应性指示剂是蛋白质指示剂缀合物，如包含蛋白质和染料材料的蛋白酶底物。在优选实施例中，蛋白质-指示剂缀合物是与具有与固相的结合作用的蛋白质，固相如与蛋白酶识别位点缀合的纤维素结合结构域和蛋白质水解时释放的染料。

在一些实施例中，pH指示剂在碱性pH下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝7.2-9.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝7.2-9.0下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝7.2-8.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝7.2-8.0下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝7.5-8.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝7.5-9.0下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝8.0-9.0下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝7.2，7.3，7.4，7.5，7.6，7.7，7.8，7.9，8.0，8.1，8.2，8.3，8.4，8.5，8.6，8.7，8.8，8.9，9.0，9.1，9.2，9.3，9.4或9.5，或其增量下呈现可见的颜色变化。

在一些实施例中，pH指示剂在中性pH下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝6.9，7.0或7.1或其增量下呈现可见的颜色变化。

在一些实施例中，pH指示剂在酸性pH下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝4.5-6.8下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝4.5-6.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝5.0-6.8下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝5.4-6.8下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝5.4-6.5下呈现可见的颜色变化。在一些实施例中，pH指示剂在pH＝4.5，4.6，4.7，4.8，4.9，5.0，5.1，5.2，5.3，5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.1，6.2，6.3，6.4，6.5，6.6，6.7，6.8或6.9，或其增量下呈现可见的颜色变化。。

在一些实施例中，pH指示剂是硝嗪黄、溴甲酚紫或溴百里酚蓝或其类似物。

在一些实施例中，过滤器垫去除伤口流体的不需要的组分，如纤维蛋白原、白蛋白或球蛋白，和细胞组分或非细胞残渣，即，敷料组件、药物、代谢物、微生物、微生物残渣、微生物代谢物等。在一些实施例中，反浸出捕集器防止反应剂垫或反应剂池中的反应剂的回流进入测试区中的伤口流体的入口。在一些实施例中，过滤垫和/或反浸出捕集器包含季铵聚合物、仲胺与叔胺的混合物、其它含胺聚合物或其组合。在一些实施例中，过滤垫和/或反浸出捕集器包含季铵聚合物。在一些实施例中，过滤垫和/或反浸出捕集器包含仲胺与叔胺的混合物。在一些实施例中，季铵聚合物是聚氯化二烯丙基二甲基铵(聚DADMAC或聚DDA)。在一些实施例中，仲胺与叔胺的混合物是聚乙烯亚胺(PEI)。在一些实施例中，过滤器垫和/或反浸出捕集器通过与双官能反应剂交联保持在适当位置，双官能反应剂如表氯醇、二缩水甘油醚、二-环氧化物或芳基叠氮异硫氰酸酯。在一些实施例中，当与反应性含胺聚合物混合时，此类反应剂连接不同的聚合物链并且将较长的聚DADMAC链捕集在基质内。在一些实施例中，捕集器由使用自由基引发剂(如二苯基甲酮)原位聚合的丙烯酸胆碱衍生物构成。在一些实施例中，过滤垫和/或反浸出捕集器包含含有羧基、硫酸根、磺酸根或其它酸性化学基团的聚合物或反应剂。在一些实施例中，过滤垫和/或反浸出捕集器包含苯乙烯磺酸盐。

在一些实施例中，指示剂捕集器捕获伤口流体与选自由以下组成的组的一种或多种组分之间的反应产物：酶反应性指示剂、作为过氧化物源的反应剂、能够转化颜色反应的酶、pH指示剂和水分检测反应剂。在一些实施例中，指示剂捕集器包含反应产物的带正电或带负电的捕集器。在一些实施例中，带正电的捕集器包含季铵聚合物、仲胺与叔胺的混合物、其它含胺聚合物或其组合。在一些实施例中，带正电的捕集器包含聚DADMAC或其类似物。在一些实施例中，带负电的捕集器包含含有羧基、硫酸根、磺酸根或其它酸性化学基团的聚合物或反应剂。在一些实施例中，带负电的捕集器包含苯乙烯磺酸盐。在一些实施例中，将苯乙烯磺酸盐在水中稀释到0.02％到0.8％并且以这种形式印刷到载体材料。在另外其它实施例中，将苯乙烯磺酸盐稀释到约0.01％到2.0％、约0.01％到1.5％、约0.01％到1％、约0.05％到1％、约0.1％到1％或约0.5％到1％。

在一些实施例中，指示剂捕集器包含总蛋白质指示剂，其由伤口流体洗脱以指示测试区的总体流和容量。这一区与湿度指示器不同。在一个实施例中，蓝色聚磺酸染料，如伊文思(Evans)或台盼(Trypan)蓝，弱结合到叔胺捕集器。蛋白质到达后，染料被置换并且作为蛋白质复合物重新捕获在季铵捕集器上。在另一实施例中，考马斯(Coomassie)蓝G250弱结合到苯乙烯磺酸盐区并且被蛋白质置换以重新捕获在季铵捕集器上。染料经历从磺酸酸性环境到增加效果的胺环境的轻度颜色变化。在另一实施例中，观测区是用丽春红(Ponceau)S复合物预印刷的季铵捕集器，使得为红色时指示非作用。捕集器转化为蓝色形式指示蛋白质洗脱的进展。

在流体到达系统的指示剂的实施例中，将亮黑或类似的深色四磺酸盐以没有任何聚合物络合的游离反应剂的形式印刷到反应剂垫中。由于是水溶性的，其很容易被伤口流体移动并且迁移到窗，在那里其被季铵捕集器亲合地捕获。高度多磺化增加了对胺的亲合力并且抵抗由蛋白质进一步洗脱。在高分泌的条件下，最终从捕集器中去除染料也可以用于指示装置的耗尽或需要改变装置。

在一些实施例中，一个或多个测试区包含磺酸过滤垫和季铵捕集器。在一些实施例中，一个或多个测试区包含反浸出捕集器、磺酸过滤垫和季铵捕集器。

在一些实施例中，一个或多个测试区中的每一个用于评估一种或多种分析物和一种或多种阳性或阴性对照指示剂的存在。在一些实施例中，一种或多种分析物与酶活性相关。在一些实施例中，酶选自由以下组成的组的一种或多种：弹性蛋白酶、溶菌酶、组织蛋白酶G、髓过氧化物酶和白细胞过氧化物酶。在一些实施例中，酶是弹性蛋白酶。在一些实施例中，酶是溶菌酶。在一些实施例中，酶是组织蛋白酶G。在一些实施例中，酶是髓过氧化物酶。在一些实施例中，酶是白细胞过氧化物酶。

在一些实施例中，来自一个或多个测试区的阳性结果(例如感染的指示)呈可见变化的形式。在一些实施例中，可见变化是颜色。在一些实施例中，颜色选自深蓝色、深绿色和黑色。所属领域技术人员清楚颜色变化的信号的效果取决于环境和伤口本身的干扰颜色的实际考虑。因此，红色是指示有问题，或指示停止或未准备好的适用信号，但它容易与与伤口流体相关联的颜色混淆。因此，不太可能从伤口出现的颜色提供潜在更少的误差源。在一些实施例中，可见变化是荧光、发光或由物理手段介导，如电、折射、气体逸出或聚合物状态变化。一些荧光系统的缺点是其需要光源并且可能需要用于观察的暗室或腔，然而，其它荧光系统没有这样的缺点。传统颜色正常处理条件下可见。鉴于颜色可以被稀释或由流体(如血液)覆盖，仍然存在在其中使用双指示剂的实施例，其中荧光指示剂与常规颜色指示剂混合。因此，如果区被血液覆盖，则可以任选地用黑光探询结果以确定是否存在信号。

外层

在一些实施例中，外层包含不易被伤口流体渗透的聚合物。此类聚合物包括但不限于聚烯烃、聚丙烯、聚乙烯、聚氨基甲酸酯、聚酰胺、乙烯-乙烯醇(EVOH)、丙烯腈(PAN)、聚氯乙烯(PVC)、聚偏二氯乙烯(PVDC)、聚丙烯酸酯(例如(1-甲基-1，2-乙烷二基)双[氧基(甲基-2，1-乙烷二基)二丙烯酸酯)或其它类似的疏水性不可渗透聚合物，其在一些实施例中，通过印刷、喷涂或吹膜铺设成膜。在一些实施例中，外层是水蒸气可渗透的。在一些实施例中，外层防止特定区域(例如观察到指示感染的可见变化的地方)中的水分损失并且促进其它特定区域(例如过量伤口流体积聚的地方)的水分损失。

在一些实施例中，反应层由两层保护：顶层和底层。底层通常具有允许流体样品流入的开口。顶层一般防止样品过早蒸发并且可以迫使其通过装置迁移到蒸发区。顶层还可以含有一个或多个窗，其允许观察或检测反应剂的反应。

装置

在另外其它实施例中，本文的公开内容提供了包含取样组件和测试装置的装置，其包含：

(a)围绕管的壳体，以在壳体中限定开口以接收取样组件，壳体也安置在其内：

(b)密封稀释剂室，其连接到管并且保持液体稀释剂，以从取样尖端移出样品，形成液体测试样品；

(c)与管液体连通的反应孔，反应孔中装有能够指示测试液体中分析物存在的反应剂；和

(d)强制机构，其能够使稀释剂从室移出，在样品尖端上并且进入反应孔。

在一些实施例中，装置通过驱动稀释剂在样品尖端上并且进入反应孔操作，并且测试溶液通过稀释剂在样品上的流制成。优选地，不必首先将样品与稀释剂混合以制备测试溶液，并且随后通过侧流条将溶液移动到反应孔中。稀释剂移动通过样品并且移动到反应孔意指试剂盒可以以最少的步骤使用，例如取样，将取样组件插入壳体中并且启动移动或驱动机构。这一程序使使用者误差减到最少并且因此使假阴性结果和误诊减到最少。

在一些实施例中，迫使稀释剂在一步法或多步法中通过装置。举例来说，在一步法中，迫使稀释剂是通过产生测试液体的装置，测试液体被迫进入反应孔。在多步法(如两步法)中，可以首先迫使稀释剂通过装置到在其中制备测试液体的混合室。然后可以在另一步骤中迫使液体从混合室到反应孔。

在另一实施例中，混合和装载样品的装置可以在一个单独的步骤，以对其进行分析来实现。在一个实施例中，首先将样品拭子插入接收流体容器，然后将同轴柱塞推过拭子以将稀释的样品喷射进入分析装置。在一个优选的实施例中，如通过使用Goretex膜去除气体，Goretex膜是气体和蒸气可渗透的但不透过液态水。所述膜可以用于在注入时使样品脱气，并且在进行测定的地方使流体室排气。

在一个实施例中，优选稀释样品通过微通道均等地分配给每个分析室。然而，当腔室的每个出口含有Goretex膜时，背压确保每个室仅被填充一次。在更优选的实施例中，通过最后出口与装置的外部之间的吸收剂防止组合件的液体样品的损失。

在再其它实施例中，本文的公开内容提供一种试剂盒，其用于检测样品中的分析物或生物标志物或靶，其包含：

(i)取样组件，其包含用于收集样品的取样尖端，和

(ii)测试装置，其包含：壳体，其围绕管以在壳体中限定开口来接收所述取样组件，所述壳体还具有安置在其内的：密封稀释剂室，其连接到管并且保持液体稀释剂，用于从取样尖端移出样品以形成测试液体；与管液体连通的反应孔，反应孔保持能够指示测试液体中分析物存在的反应剂；和能够将稀释剂通过装置从腔室在样品尖端上移动并且进入反应孔的强制机构。

密封稀释剂室可以含有指定体积的稀释剂，使得预期体积的测试溶液到达一个或多个反应孔。此外，稀释剂室与反应孔之间的路径优选在反应孔端排出，使得截留的空气不会影响测试溶液通过装置的流动或阻碍测试溶液到达反应孔或阻碍测试液体正确填充反应孔。

壳体优选具有两个部分，其能够相对于彼此移动，同时保持相互连接。移动部分的动作可以提供强制机构，稀释剂通过强制机构移动通过装置。稀释剂可以通过稀释剂室的压缩而被驱动通过装置，稀释剂室迫使稀释剂通过样品尖端并且到排空压缩室的一个或多个反应孔中。当壳体的各部分相对于彼此移动，如使一个部分滑过另一个部分时，可能发生稀释剂室的压缩。或者，可以例如通过使壳体的部件相对于彼此移动来将稀释剂再次拉动通过装置。

取样组件优选包含手柄和取样尖端，所述手柄优选包含与壳体中的开口啮合的密封件，以在取样组件完全插入管中时将管密封。密封件防止样品和稀释剂从装置中逸出，减少了伤口流体交叉污染的可能性。优选地，密封件与管啮合以将取样组件锁定在装置中并且一旦使用取样组件就防止移除取样组件。这进一步降低了来自取样组件交叉污染的可能性。取样组件优选激活稀释剂从稀释剂室中的释放。

壳体可以包含锁定机构，一旦驱动机构已被激活，锁定机构将壳体锁定在适当位置上，并且防止装置的再使用。以这种方式，显而易知装置已被使用并且不能再次使用。这样可以最大限度地减少来自例如在运输过程中被错误激活的装置或重复使用其反应剂已耗尽的装置的错误结果。

优选地，取样组件插入装置中释放稀释剂室上的密封件。优选地，密封件是球阀或可以是膜(film)或膜(membrane)密封件或鸭嘴阀或本领域中已知的其它止回阀，其在取样组件插入装置中时被激活。取样组件优选地破裂、刺穿或移动稀释剂腔室上的密封件。

优选地，管与取样组件的取样尖端的尺寸相同或相似，使得将取样尖端插入管中的动作使其沿着管的壁刮擦，有助于在稀释剂从稀释剂室中释放出来并且冲洗通过装置时样品在稀释剂中的分散。稀释剂可以沿管的整个长度或仅其一部分冲洗。当稀释剂从稀释剂室驱动时，取样尖端的尺寸与管匹配也迫使稀释剂冲洗通过尖端。优选地，管在其嘴部较宽以帮助插入。

优选地，稀释剂室的形状像波纹管以帮助腔室的压缩，或者腔室可以是柱塞和管的组合，类似于在注射器或样品制备装置中所见的，或可以是由使用者用手压缩的填充的柔性小袋或在密封件释放时收缩的气球。

使用方法

在一个方面，本文提供使用本文中所描述的的伤口敷料诊断慢性伤口和指示需要治疗慢性伤口的方法。

在一些实施例中，本文中所公开的方法和装置从体液中检测生物标志物或靶标。在一些实施例中，体液是血液、血浆、血清、脑脊髓液、痰液、尿液或伤口渗出液。在优选实施例中，体液是伤口渗出物。

在另一方面，本文提供使用本文中所描述的伤口敷料诊断慢性伤口的方法。

在另一方面，本文提供使用本文中所描述的伤口敷料指示需要治疗慢性伤口的方法。

在另一方面，本文提供使用本文中所描述的伤口敷料指示需要治疗手术或急性伤口的方法。

另一方面，本文提供使用本文中所描述的伤口敷料检测伤口中感染的生物标志物的方法。

在另一方面，本文提供使用本文中所描述的伤口敷料检测pH和/或伤口中感染的生物标志物的方法。在一些实施例中，感染的生物标志物是白细胞酶。在一些实施例中，伤口中的碱性pH指示伤口中的感染。

在另一方面，本文提供使用本文中所描述的伤口敷料检测蛋白酶活性的方法。

在另一方面，本文提供监测伤口或手术部位的状态和其愈合过程或状况的方法。

实例

实例1：伤口敷料

并入装置的伤口敷料的结构一个实例在图2中所展示。此实例中的伤口接触层是以“AQUACEL”出售的羧甲基纤维素，并且AQUACEL由聚氨基甲酸酯泡沫体支持。反应剂层之下的不可渗透区域在装置的感染指示区域中。连接到这个区域是一种材料，如聚酯线、甲基纤维素纤维或类似的芯吸亲水性毛细管或类似的材料，或毛细管通道。这种流体连接使伤口渗出物或流体与反应剂层接触，在那里它可以与指示剂反应剂反应并且将指示剂反应剂移动到可见产物中，所述可见产物在适当位置可见或截留在从敷料的外部可见的窗中。此实例还演示了AQUACEL的使用。

在伤口敷料的一个实施例中，伤口敷料在图2中以横截面展示。在所述伤口敷料中，伤口接触层(4)包含以“AQUACEL”出售的羧甲基纤维素。在图2中，伤口接触层(4)由聚氨基甲酸酯泡沫(3)支持。在敷料的感染指示区域中，在反应剂层(2)下方和聚氨基甲酸酯泡沫(3)上方是不可渗透区域。因此，在此实施例中，感染指示区域设置在反应剂层(2)与聚氨基甲酸酯泡沫(3)之间。流体连接(1)组件连接到感染指示区域，所述组件如聚酯线、甲基纤维素纤维或类似芯吸、亲水性、毛细的材料或类似材料或毛细管通道(1)。此流体连接部件(1)使伤口流体与反应剂层(2)接触，在那里它可以与指示剂反应剂反应并且将指示剂反应剂移动到可见产物中，所述可见产物在适当位置可见或截留在从敷料的外部可见的窗(6)中，如图2的(C)中的伤口敷料的顶视图所示。如上文所解释，图2的视图(A)和(B)展示伤口敷料(7)的侧视图。图2的视图(B)展示伤口流体(5)从底部的伤口接触层(4)经由毛细管通道(1)向上流动，毛细管通道可以通过使用芯吸纤维缝合而形成。伤口流体与反应剂层(2)中的反应剂反应，反应剂层可以包含窗(6)，允许用户观察由伤口流体和伤口敷料中的反应剂之间的反应产生的可见信号。图2的视图(C)展示伤口敷料(7)的顶视图，其中在反应剂层(2)顶部的不透明膜含有窗或透明区域(6)，其允许观察指示剂或与与分析物相互作用的反应剂相关的变化。在一些实施例中，可见信号可以是指示在伤口中微生物感染的颜色变化。

实例2：印刷有图案化的反应性墨以报告MPO活性的敷料材料。

敷料伤口接触层具有上表面和下表面，其中下表面是伤口接触层。可以将反应剂喷涂或印刷在伤口敷料材料上。这种敷料的一个实施例在图6中所展示，其中(A)描绘伤口敷料材料表面的视图，并且示出伤口接触材料的顶侧；(B)表示喷涂有淀粉酶、淀粉和葡萄糖氧化酶的伤口材料；并且(C)表示在喷涂区域的中心印刷的底物。

在替代实施例中，在上表面上印刷多层，如三层，以报告MPO活动。在一个实施例中，第一层是印刷在伤口敷料材料的上表面上的底物，如在乙醇/庚烷中以为30mg/mL的浓度，使用0.8mm线宽和1μL/cm印刷密度。或者，坚牢蓝底物印刷每个直径为3mm的圆的网格(图6)。在一个实施例中，下一层是γ淀粉酶和固定在羟丙基纤维素的葡萄糖氧化酶的溶液喷雾施加。可以将材料用水缓冲溶液喷涂，使得沉积约3μg/cm²葡萄糖氧化酶，同时0.5μg/cm²的γ淀粉酶以缀合物形式涂覆。一旦干燥，则可以以150μg/cm²的密度喷涂淀粉悬浮液。一旦印刷，则伤口接触层优选粘合到上保护层。相同的印刷方案可以在上保护层的上侧的进行印刷。当暴露于含有酶的人造伤口流体时，网格随着时间的推移变成蓝色。

实例3：印刷有图案化反应性墨以报告弹性蛋白酶活性的吸收材料。

在此实例中敷料具有吸收和保护层，其具有上表面和下表面，其中下表面与伤口接触层接触。在上表面上印刷有1cm网格间距的网格图案。在一个实施例中，如图8所示，使用1mm线宽和1.3μL/cm印刷密度用30mg/mLAAPV-吲哚酚酯的庚烷/丁醇溶液进行印刷。图7示出MPO和弹性蛋白酶底物的就地显色的实施例。

实例4：多生物标志物装置插入件

观测方法是优选由物质的疏水性特性和与载体材料的非共价化学相互作用引起的直接印刷在报告器区域的窗的不动的酶底物的颜色变化，或固定基板的外观的颜色变化。涂覆底物和用于改进颜色的可能浸渍混合物的量在如下文所描述的本实例中进行测试。

报告器区域和颜色信号优化：在载体材料，在这种情况下滤纸中冲压出圆(直径5mm)。用不同的缓冲液混合物浸渍圆圈(参看具体反应剂：在含有氯化钾、尿素pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水中的人造伤口流体2％牛血清白蛋白)。参看图8，水溶液中的底物的实例，然后是干燥步骤。干燥后，将通常在有机溶液中的不同量的底物移液管移取到测试圆上。

与伤口流体的反应性测试如下：具有或不具有酶的10μL的测试液体(缓冲液或人造伤口流体2％白蛋白)用移液管移取到干燥测试盘上。将盘在露天或封闭系统中培养。在启动之后在不同时间目测评价显色。所有观察均在室温下，以模拟敷料外部的预期状况。

在两种观测方法的优化之后，以实验室规模制备原型以测试不同的酶底物的相互作用/其显色。如图7和图9中所描述设计并且组装原型。

图7和图9展示不同指示器的就地显色的实施例。图9展示构建具有溶菌酶、弹性蛋白酶和MPO检测的报告器区域，pH指示剂和液体对照物原型。在(A)的左侧部分展示诊断材料。在(A)的右侧部分展示报告器区域的放大。(B)展示液体施加后的诊断区域(人造伤口流体0.5％白蛋白，1U/mL弹性蛋白酶，10μg/mL MPO，30000U/mL溶菌酶)。实验在2小时内进行，前10分钟的流动速率为100μL/min，然后是10μL/min。以n＝10重复实验。

诊断插入件或盘的实施例在图10、11和12中所展示。图10(A)展示诊断插入件的顶视图，其包含报告器区域(60)、反应区域(61)和蒸发区域(62)。图10(B)展示底层，其包含直径为约40mm的白色或透明的不可渗透的塑料膜层。中间的孔允许液体输送并且具有约4mm的直径。底层覆盖有粘合剂并且在下面具有相同形状，以便在敷料上精确固定。图10展示包含粘合剂层(C)和反应层(D)的反应材料的实施例，其中每个臂具有不同的底物/指示剂和/或pH系统。图10(E)展示盖，其包含直径为20mm的不可渗透的白色塑料箔。外环可以具有25mm的内径和31mm的外径。顶层可以在下面用粘合剂覆盖，以便在反应材料上精确固定。

装配好的诊断插入件的顶视图。参看图10(A)。报告器区域被设计为被灰白色层包围的窗，以实现与颜色信号的最大对比度。在此实施例中，有五个径向臂，其中每一个含有不同的报告器和颜色系统。在一个实施例中，三个用于酶并且两个用于对照。

蒸发面积确保酶反应和报告器区域中显色所必需的通过诊断材料连续液体输送。

底层作为敷料与诊断材料之间的液体屏障。液体将优选仅通过层中间的孔，这引起导向径向分布到反应材料(诊断材料)的臂中。

取决于有利的酶底物和将被包括的对照物的数目，诊断材料设计有四个或五个径向“臂”。用医用粘合剂将反应材料固定在底层上。或者，用较不可渗透的底层代替粘合剂印刷或涂布反应臂(一种材料可以用于两种目的)。

在一些实施例中，装置插入件包含至少一个臂或少于十个臂。在适当时，臂的数量可以取决于样品和对照物中待测定的分析物的数量。在另外的实施例中，装置插入件包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个臂。

反应材料按照上文所描述的组装检测材料之前优化条件用浸渍混合物和底物来制备。

如图10(E)中所展示，盖具有几个功能。首先，其优选通过优选防止过早干燥来保持反应区湿润。流体应传送通过反应区域进入报告器区域，其中存在允许观察颜色变化的透明窗。第二功能是优选避免液体流动停止，以覆盖化学区域，使得着色反应剂不在输送到窗之前被看见。盖是不透水的，并且包括用于信号观测的窗。

检测材料优选地用医用粘合剂固定到水纤维敷料的泡沫背衬层。

第一观测方法(积累和捕获)的优化确定了以下条件：

捕集混合物：每10mm2体积为1.5μL，增稠剂甲基纤维素(Methocel A4C)最大1.25％。在室温下干燥至少1小时。

在含有氨基捕集剂(一式三份)的捕集剂涂布报告器区域进行Remazol亮蓝(图13)的输送和观测，测试液体是人造伤口流体2％白蛋白。这一观测方法用于溶菌酶底物(由QZY得到结果)；酶裂解后释放并且捕获的染料：Remazol亮黑)和液体对照物(染料：亮黑BN)。

图13显示了在将反应区域(C)暴露于人造伤口流体后，报告器区域(D)中染料的可视化。流体流动的方向是从反应区域(C)到报告区域(D)，进一步包含氨基捕集剂。实验一式三份进行。

第二观测方法的优化(就地颜色变化)产生MPO底物、弹性蛋白酶底物和pH指示剂的清楚着色信号。

MPO底物：在此实例中的MPO底物是坚牢蓝衍生物。底物可溶于50℃乙醇。在报告器区域用移液管移取1.5μL饱和溶液，随后进行干燥步骤(20分钟，室温)后，人工伤口流体2％白蛋白无法使底物移动。在报告器区域中，略微米色的MPO底物由MPO在显影下转换为深蓝色到黑色。由于MPO反应是H₂O₂依赖性的，基于葡萄糖/葡萄糖氧化酶的H₂O₂产生系统被印刷在反应区域中。

优化条件引起图7中所展示的结果。测试圆含有如上文所描述的1.5μLMPO底物、10μg葡萄糖和1μL 0.1％葡萄糖氧化酶(1μg)的水溶液。在测试圆干燥后，施加5μL测试液体(人造伤口流体2％白蛋白，pH 7，不具有/具有MPO)。在2分钟孵育时间后取得图7的图片。

弹性蛋白酶底物：弹性蛋白酶底物由酯化成吲哚酚部分的Fmoc保护AAPV酶识别基序(氨基酸序列AAPV)组成。它可溶于有机溶剂，但完全不溶于水溶液。酶裂解后，吲哚酚被释放并且立即氧化成在报告器区域中可见的固定的蓝色靛蓝染料(图8)。

优化条件引起图7中所展示的结果。在第一步骤中，用浸渍混合物(0.25％(w/w)Nonidet，2％(w/w)癸醇的0.05M硼酸盐缓冲液pH 8)浸渍测试圆。因此，将两相溶液混合直到形成乳白色分散体。将分散体转移到玻璃容器中。将测试圆在浸渍混合物中洗涤1-2分钟。然后将滤纸放在玻璃板上并且在54℃下干燥1-2小时。

在下一步骤中，将弹性蛋白酶底物(在丙酮中10mg/mL)以2.5μL步骤用移液管移取到圆上2次，直到施加每个测试圆(20mm2)50μg的最终量(图7)。在室温下干燥后，通过加入10μL测试液体(人工伤口流体2％白蛋白，pH7，具有/不具有蛋白酶)进行弹性蛋白酶测定。在室温下在15分钟的温育之后观察并且记录显色。

pH指示剂是在壳聚糖中的溴百里酚蓝的制剂，含有戊二醛。将混合物用移液管移取到报告器区域中，干燥后得到暗黄色并且固定的指示剂系统。在30分钟内液体流(人造伤口流体2％白蛋白)的颜色从微绿色(pH 7)中改变为深绿色(pH 8)。参看图14获得pH指示剂的实例。

使用具有不同pH值的约300μL人工伤口流体2％白蛋白运行后，固定溴百里酚蓝衍生的pH指示剂。在0.5μL的三个用移液管移取的步骤中，pH指示剂以每10mm2中1.5μL的量施加。

原型中报告器区域的生产和功能。在用于溶菌酶检测和液体对照物的诊断材料的臂的报告器区域中，印刷1.5μL捕获混合物。在用于弹性蛋白酶和MPO检测以及pH指示剂的报告器区域中，施加底物(图7、9)。

图9展示具有溶菌酶、弹性蛋白酶和MPO检测，pH指示剂和液体对照物的报告器区域的原型。在左侧展示诊断材料，在右侧展示报告器区域的放大。图9(A)展示具有液体施加前的具有报告器区域的原型的实例。

图9显示液体施加(阴性对照物，不含酶的人工伤口流体0.5％白蛋白)后的诊断区域。图9(C)展示液体施加后的诊断区域(人造伤口流体的0.5％白蛋白，1U/mL的弹性蛋白酶，10μg/mL MPO，30000U/mL溶菌酶)。实验在2小时内进行，前10分钟的流动速率为100μL/min，然后是10μL/min。以n＝10重复实验。

图9展示具有溶菌酶、弹性蛋白酶和MPO检测，pH指示剂和液体对照物的报告器区域的原型。在左侧展示诊断材料，在右侧展示报告器区域的放大。用于液体流对照的颜色信号是可见的，所以相信，通过捕获和积累的观测方法起作用。反应的顺序一般是MPO，然后弹性蛋白酶，然后溶菌酶。pH指示剂的颜色变化以及MPO和弹性蛋白酶底物的显色在报告器区域中可见。就地颜色改变建立了这些反应和功能被证明。

插入件可以以多种形式制成，包括径向设计(图10-12)、线性设计和单点方法。这些在形成哪些层和图案方面不同。一般来说目标是使插入件尽可能小并且不闭塞。

减少闭塞性的一个手段是减少膜层的面积。在图10-12中所展示的实施例中，唯一的闭塞层是通路本身。在这一形式中，仅由粘合剂替换圆底层。圆底层的优点是倾向于支持被取样到装置中的更宽的敷料区域。减小的底部层具有允许更多蒸气转移的优点。

实例4：溶菌酶反应性测试条

在检测溶菌酶活性的方法的一个实施例中，用染色肽聚糖(图15(D)，a)和捕集剂材料(用交联PEI固定的季铵)(图15(D)，b)印刷芯吸物质如滤纸条。将伤口流体施加到基部并且使载体芯吸到C点，在那里其蒸发。如果存在，溶菌酶降解染色肽聚糖并且将阴离子片段转运到捕集器(图15(D)，b)，在那里它们形成线。

在图15中，溶菌酶测试条(50)的一个实施例包含Whatman滤纸1001/85，其被切成0.5cm×4cm的片，所述片具有固定区域(51)、蒸发区域(52)、3％交联、氨基捕集器(53)、底物区域(54)和用于从伤口芯吸流体的缝合区域(21)。侧视图(B)展示伤口敷料，其包含测试条(50)、基层(55)和缝合(21)。顶视图(C)展示粘附到伤口敷料(56)上的测试条(50)。

染色肽聚糖的集成到溶菌酶反应性测试条(图15)。在一些实施例中，测试条包含切成0.5cm×4cm的片的Whatman滤纸1001/85。2μl季铵捕集溶液用移液管移取到条的上端的下方1.5cm处的纤维素滤纸。将2μl含有4mg染色肽聚糖的240μl 0.5％PEG6000H₂O溶液中的底物配制物用移液管移取到条的下端的上方1cm处。修改后的条在90℃下温育30分钟。测试条然后准备使用。或者，可以将其它染色溶菌酶底物(例如染色壳聚糖衍生物)并入测试系统中。在一些实施例中，测试条包含底物点、季氨基捕集器和纤维素基质。

在一些实施例中，将溶菌酶反应性测试条集成到用于早期伤口感染的在线检测的敷料。

从敷料底侧到测试条的液体输送系统通过穿过敷料层和第一不透水粘合剂层的缝合聚丙烯纱线进行。虽然缝合有助于所述过程，但它并不是必需的，并且在没有缝合的情况下获得相同的结果，尽管更慢。测试条嵌入两个不透水的粘合剂层之间。蒸发区域包括在条的上部区中。检测单元释放区‘a’中的偶联染料，然后将其捕获在测试条的区‘b’中，并且在溶菌酶活动时给出清晰的可见信号。

测试条的材料选择：不同的纤维素基材料可以用作测试条的固体基质。可以替代地使用含有规定量的纤维素的非织造物。溶菌酶测试条的示意图。检测系统与敷料的附接(图15)。基层含有到检测单元的液体转移系统。组合的基层和检测单元的俯视图。

实例5：指示剂反应

图16展示指示剂反应的实例，包括具有至少两个结构域A和B或A和C的底物，其通过切割位点(X)连接，其被伤口流体中的酶，如弹性蛋白酶(E或E2)识别。在一些实施例中，肽聚糖锚(S)与酶底物连接，需要通过溶菌酶(E1)消化或分解肽聚糖锚(S)，然后可以通过伤口流体中的酶接近底物上的切割位点(X)。反应的产物(P)是有色的，产生用户可检测的颜色变化。在实例I中，在暴露于伤口流体中的弹性蛋白酶(E)后，底物在切割位点X处裂解，释放MPO底物(B)，其可以与伤口流体中的MPO反应并且氧化底物(B)以形成有色产物(P)。在实例II中，溶菌酶(E1)分解肽聚糖锚(S)以暴露切割位点(X)。在暴露于伤口流体中的弹性蛋白酶(E2)后，弹性蛋白酶在切割位点(X)处裂解底物并且释放吲哚(C)，其可以在氧气存在下转化为靛蓝，引起颜色变化。在实例III中，可以使用MPO底物(B)代替吲哚(C)以产生有色产物(P)。

实例6：指示剂盘

图10-12展示指示器插入件或磁的示意图。图10(A)展示诊断插入件的顶视图，其包含报告器区域(60)、反应区域(61)和蒸发区域(62)。图10(B)展示底层，其包含不可渗透的塑料膜层，优选白色或透明，直径为约40mm。中间的孔允许液体输送并且具有约4mm的直径。底层在下面用相同形状的粘合剂覆盖，以便在敷料上精确固定。图10展示包含粘合剂层(C)和反应层(D)的反应材料，其中每个臂可以是不同的底物和/或pH系统，并且其中每层中的臂重叠以允许精确固定。指示剂盘可以具有任何数量或指示剂臂，如4或5个如图10中径向布置的指示剂臂。在一些实施例中，指示剂盘包含1到10个臂，或优选4或5个臂。图10(E)展示盖，其优选包含直径为20mm的不可渗透的白色塑料箔。外环可以具有25mm的内径和31mm的外径。顶层可以在下面用粘合剂覆盖，以精确固定在反应材料上。

在图11中所展示的实施例中，(A)展示底层，包含直径为40mm的双面疏水膜(65)。中间切出的孔的直径约为5-6mm。参考物(66)展示在非织造物或纸上的疏水性通路，所述非织造物或纸是整片或切出的，放置在粘合剂膜上。参考物(67)展示印刷在非织造物或纸上的捕集器，其利用回流捕集器(68)粘附到底层。在(B)中，反应层包含臂，每个臂可以具有不同的指示剂和颜色系统，如(70)中所展示。蒸发盖(71)可以是印刷、喷涂或覆盖膜。参考物(72)展示固定在敷料上的指示剂盘，其中外敷料具有窗(显示为虚线)，用于观察指示剂的变化。

在如图12中所展示的指示盘的另一实施例中，底层(A)优选包含直径为40mm的白色或透明的不可渗透的塑料膜(73)。底层中间的孔包含4mm的直径，允许伤口流体输送。底层可以在下面用与反应材料(77)呈相同形状(73)的粘合剂覆盖，以精确固定在伤口敷料上，双面粘合剂和疏水性。在底部，反应层(77)被放置于粘合剂层(73)的顶部。反应层的每个臂的长度可以是离中心13mm或15mm，并且宽约5mm。在盘的中心处的切割入口还可以包含回流捕集器(75)，以确保流体从中心向外流到插入件周边的蒸发区域。参考物(74)展示放置在粘合剂上的非织造物或纸、填充片或切出的疏水性通道。参考物(76)展示在非织造物或纸上印刷的捕集器，其中中间有回流捕集器(75)。在一些实施例中，反应材料(77)包含在指示剂盘的臂上的亮黑印记、pH指示剂、MPO底物、弹性蛋白酶-肽-吲哚酚和溶菌酶-肽聚糖指示符和其任何组合。此类底物可以印刷在反应材料或固体载体材料上。蒸发盖可以以在(78)上的膜的形式印刷、喷涂或覆盖，如(78)中的灰色框所展示。反应材料可以由透明或半透明膜覆盖，具有窗(79，虚线框)以允许检测反应。

在一些实施例中，盖如图10(E)中所展示，包含一个直径为20mm的不透性白色塑料薄膜的中间盖，一个内径为25mm并且外径为31mm的外环，以及用于对反应材料进行精确固定的在下面覆盖有相同形状粘合剂的顶层。

如图10(A)所展示，一个实施例包含外径为31mm的不可渗透的白色塑料薄膜，直径为25mm的内部诊断圆(60，报告器区域)，以及在使用底物盖的实施例中的直径为20mm的底物盖(61)。蒸发区域(62)位于指示剂插入件的周边。较小的蒸发区域(如2×5mm)可能对于7天运行来说太小，但对于较小的运行(如一天运行)来说足够。可以在诊断区域(60)或窗报告器区域(图11或图12)中检测由反应产生的可见信号。此类报告器区域可以被灰白色层包围，以实现与彩色信号的最大对比度。

在另一实施例中，诊断反应可以在其中液体样品中被吸收到固相上的染料的附近扩散的固相上进行。样品中携带的酶可以通过固相材料的孔中的接触来转化染料。这些变化作为颜色变化是可见的。由于所使用的低体积和染料的高浓度，颜色变化可以是一个敏感的指标。

在优选实施例中，指示剂盘通过用反应剂浸渍滤纸，然后冲压盘，之后将其粘着到载体以形成具体涂布到其上的反应性染料的“棒”来制备。可以将此棒与样品接触并且观察到颜色变化。

在更优选的实施例中，多于一个类型的指示剂盘被放置在棒载体上，使得多种酶或参数可以在一次测试中检测。可以确定的参数包括pH、溶菌酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、MPO、过氧化氢酶和脂肪酶。这种棒还应含有阳性对照物以指示足够的样品润湿，和/或样品应用除了润湿外还包括蛋白质的存在。

在一个优选实施例中，指示剂盘在细“棒”上在一条上线对齐，并且使用拭子、纱布按顺序施加样品或通过将棒按压到样品(例如用过的敷料)中或之上。

在另一实施例中，指示剂盘在宽载体上紧靠彼此对齐，并且其在一侧边缘对齐被切割，使得棒可以在切割边缘的情况下被按压到样品源(即，用过的敷料或稀释伤口流体，或清洁拭子或纱布的边缘)，以使得液体的在宽棒的前部被吸收到每个盘中(“叉”格式)。

在另一优选实施例的指示器盘置于载体盒内，使得样品拭子可以插入盒，然后通过关闭盒密封的内部。在关闭之后，样品拭子可以移动并且在此过程中，依次接触每个样品盘以适当地润湿它们，使得可以通过适当地放置在每个指示盘上方的窗观察所得到的反应。这样的布置可以保留拭子用于随后的微生物检查并且在敷料更换期间或期间简化材料的处理。

指示器盘优选与能够的颜色变化的反应剂制备。这些反应剂可以选自化合物，例如对氨基酚、ABTS(2，2inophenol、ABTS(strate.在一些实施例中，酸)二铵盐)、3，3′-二氨基联苯胺、3，4二氨基苯甲酸、DCPIP、N，N-二甲基对苯二胺、邻联茴香胺、对苯二胺、4-氯-1-萘酚、邻苯二胺N-4-(氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺、3-氨基-9-乙基咔唑、4-氨基邻苯二甲酰肼、5-氨基水杨酸、2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)、吲哚酚、靛蓝、坚牢蓝RR、4-氯-7-硝基苯并呋咱。在一些实施例中，反应性层包含芳胺。在一些实施例中，反应性层包含氨基酚。在一些实施例中，反应性层包含氨基酚和氨基酚醚。在一些实施例中，反应性层包含吲哚酚。在一些实施例中，反应性层包含中性染料。在一些实施例中，反应性层包含带电染料，例如选自以下的染料：remazole亮蓝、甲苯胺蓝、反应性黑5、remazol亮蓝、反应性紫5和反应性橙16，或其水解或氨解衍生物、甲苯胺蓝、反应性黑5，或其水解或氨解衍生物；反应性紫5，或其水解或氨解衍生物；反应性橙16，或其水解或氨解衍生物；基于二氯三嗪的反应性染料，如反应性蓝4、反应性红120、反应性蓝2、反应性绿19和反应性棕10。在一些实施例中，基于二氯三嗪的反应性染料呈现黑色。在特定的实施例中，反应性层包含化合物，如含有磺酰基乙基-硫酸氢盐反应性基团的反应性染料。在一些实施例中，反应性染料是反应性黑5、remazol亮蓝、反应性紫5或反应性橙16，尤其反应性黑5。在一些实施例中，反应性染料是remazol亮蓝、反应性紫5、反应性橙16、反应性黑5或remazol亮蓝。特别地，反应性层包含含有磺基乙基-硫酸氢盐反应性基团的染料，例如反应性黑5、remazol亮蓝、反应性紫5或反应性橙16，或其组合；或含有二氯三嗪反应性基团的染料，例如反应性蓝4、反应性红120、反应性蓝2、反应性绿19和反应性棕10，或其组合。

在其它实施例中，指示剂盘优选用能够物理改变的反应剂制备，例如纳米粒子、胶体金粒子或鲁米诺衍生物。

在优选实施例中，使用坚牢蓝的类似物，或二氨基酚作为颜色产生反应剂检测MPO；使用肽衍生的指示剂，包括萘酚、吲哚酚或硝基酚检测弹性蛋白酶；使用缀合到染料或颜色产生剂的寡糖，或含有带电染料的寡糖粒子检测溶菌酶，所述寡糖尤其可以选自肽聚糖或壳聚糖衍生物。纯粹作为代表性实例，溶菌酶可以通过观测以下检测：反应性黑5、remazol亮蓝、反应性紫5或反应性橙16、反应性蓝4、反应性红120、反应性蓝2、反应性绿19和反应性棕10，或其组合，其与基质如壳聚糖、N-乙酰基壳聚糖结合；寡-β-d-1，4葡糖胺；乙酰基-D-吡喃葡萄糖苷；N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)；葡糖胺二聚体(GlcNAc)₂；乙酰基壳聚糖；壳二糖八乙酸酯；包含结构(GlcNAc)_n的壳寡糖，其中n＝4、5或6；壳寡糖；2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖苷；2-脱氧-3，4，6-三-O-乙酰基-D-吡喃葡萄糖苷；或其组合。蛋白酶，如人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶或HNE)可以通过使用包含核苷酸序列丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-缬氨酸(AAPV)的肽底物来检测，所述核苷酸序列与一种或多种上述染料缀合。

在另一实施例中，检测这些分析物的反应剂经历裂解以产生捕获在固定部分上的化合物。

实例7.在伤口治疗的情况下指示剂敷料的使用。

制备含有如上文所描述的指示剂盘敷料，其中印刷的盘被插入敷料的吸收性外层与外膜或膜之间，使得反应区可见。敷料施加到慢性或手术伤口，使得在伤口分泌的位点(较深部位，缝合线)位于盘的中心的下方或尽可能接近。参看图17。施加敷料后，敷料将开始吸收分泌物。在实施例中，可以在“流量控制”变为蓝色之后进行伤口状态的第一次观察。这是有足够的液体进入敷料以使反应剂垫饱和的事实的指示剂。如果在此阶段一个或多个生物标志物指示剂已经反应，则这将为在更换敷料时伤口中存在一定程度的炎症或潜在感染的事实的指示。在存在或不存在pH高于中性以上的迹象的情况下，一种生物标志物反应可能足以证明在下一变化时具体伤口卫生步骤。在存在或不存在pH值高于中性的情况下，两种生物标志物作出反应可能表明在理想情况下，伤口会立即重新敷料，并且开始采用抗微生物方法。在存在或不存在pH的情况下，三种生物标志物响应可能表明在理想情况下应立即更换敷料，并且应启动抗微生物卫生、伤口敷料和实验室微生物学。

广义上，指示剂可以在更换敷料后立即作出反应、1-2天之后和2-5天之后作出反应。由于流的动力学，反应剂旨在在暴露于酶活性阈值(例如0.5U/mL弹性蛋白酶)的2-6小时内作出反应，然而，长期暴露于低酶水平，即5天，也可能最终产生信号。因此，使用者可以将低水平的活性与急性标志区分，因为报告器面积非常缓慢地累积信号，即在3或4天时非常淡，在4或5天之后仅略微较多显色。这将表明伤口需要密切观察和卫生，但不一定是急性感染的伤口。特定患者的经验也会告知治疗师。如果相同的图案在多次更换敷料时明显，则表明情况稳定，但应将反应程度的任何变化视为伤口状态潜在变化的指示。

相反，在其中一个强烈的信号突然出现的情况可能指示急性感染的发作。鉴于一旦超过阈值，指示剂可以在1-2小时内发生变化，表明任何突然发展都反映了伤口的现状。

在多个感染指示剂盘被放置在伤口敷料内时的地方，那些反应的指示剂的位置是伤口潜在问题出现的地方的指示。因此，5天后没有明确的信号将表明在时段内没有超过阈值并且当前治疗可能是足够的。缓慢发展的微弱信号可能表明可以改善卫生状况。在5天后逐渐呈现的中等信号可能是表明感染在发展并且应得到更复杂的治疗的第一征兆。发展超过5天的强烈信号将相应地更加强烈地表明需要改善治疗，例如通过使用银敷料。反过来，清楚信号的快速开始是一个值得立即关注的急性问题的指示。

如图4(C)中所展示，在一些实施例中，可以将多个反应池应用于伤口敷料，用于检测区域上的微生物感染。胺回流捕集器或过滤器或反浸出捕集器(41)可以用于分隔测试区。

实例8.可以应用于任何敷料的敷料插入件。

在一些实施例中，指示器插入件可以自由地放置在可能分泌的位点或在放置在伤口敷料或外科敷料中的任何地方。

诊断盘，如上文所描述，可以在其制造期间并入到敷料中。这些插入件可以被放置在外部吸收剂与外膜之间并且等距隔开，并且在制造期间在适当位置胶合。然而，固定间距可能不适合于特定伤口。在此实例中，报告器盘作为可以置于任何外膜下方的吸收性敷料的独立材料制备。举例来说，将插入件制备成切割并且密封在无菌外膜中的独立圆盘。治疗师使用敷料，参看图17中的参考物(92)，在没有报告器的情况下仍然可以将这些报告器(90)到插入此类敷料，只要这些是模块化的并且需要治疗师从以下组装敷料：伤口接触材料、吸收剂和外膜或盖。报告器盘可以以多种方式实现其功能，包括只要其与伤口流体(91)流体接触，并且以其它方式在适当外敷料下。粘合剂透明外盘是固定并且固持报告器盘的一种方法。同样，盘本身可以具有粘合剂底部涂层。

在诊断插入件的另一实施例中，如图18中所展示，敷料中的非织造层承载或含有诊断盘(705)，其中敷料进一步包含膜覆盖层(701)、指示剂的非织造载体(702)、聚氨基甲酸酯泡沫(703)和纤维素接触层(704)。如图18(A)中的箭头所示，伤口流体向上流动到嵌入这种敷料中的诊断盘(705)。图18(B)展示具有嵌入式诊断盘的伤口敷料的侧视图，其中泡沫表面上的季铵涂层(显示为虚线)充当阻止诊断物质返回的捕集器，并且伤口流体向上流到诊断盘。

在伤口敷料中的诊断盘的另一实施例中，如图19(A)中所展示，侧视图图像(A)展示用于检测MPO的示例盘，其中(720)是通过浸渍或喷涂浸渍有MPO底物的纸盘。参考物(721)是充当载体的纸或非织造材料。参考物(722)展示粘合剂层。参考物(723)代表含有葡萄糖氧化酶和/或淀粉和淀粉酶(如γ淀粉酶)的圆盘。图19(D)展示伤口流体将淀粉移动到葡萄糖中，葡萄糖又被葡萄糖氧化酶氧化以产生H₂O₂。MPO在伤口流体中使用它将底物转化为可检测的蓝色形式。图19(B)展示用于检测溶菌酶的盘的侧视图，其中使用水可渗透的粘合剂层将壳聚糖或肽聚糖的粒子嵌入纸盘下侧中，所述水可渗透的粘合剂层还用于将盘粘附到下面的泡沫层。酶活性将粒子溶解并且释放被捕获并且可以在顶层检测到的染料。在图19(B)中，纸盘(730)是捕集剂浸渍的顶层。在存在伤口流体的情况下，如由图19中的向上箭头所展示，纸/非织造物盘充当载体(721)，使得伤口流体在过程中通过染色肽聚糖粒子(731)移动到顶层。参考物(722)展示粘合剂层。参考物(732)展示将盘固定到非织造载体层(721)的粘合剂环或热焊接。图19(C)中的虚线表示在诊断条下面的泡沫表面上的季铵涂层，其充当阻止诊断物质返回的捕集器。图19(E)展示被伤口流体缓慢溶解的染色肽聚糖粒子，然后释放的染料被捕获在捕集材料中，而过量的伤口流体流向侧面，如由箭头指示。在图19(E)中，纸盘在顶层浸渍有捕集材料。

在图20中，描述了盘构造的生产的按比例扩大。在连续过程中，盘由包含密封膜、粘合剂、纸或无纺载体的片材冲压而成，所述片材由顶盖片保护。

图21展示纸盘的不同实施例。图21(A)展示在这些实施例中涉及的不同层，即顶部的膜盖、非织造载体、聚氨基甲酸酯泡沫和纤维素接触层。图21(B)到21(E)展示具有指示剂盘的此类分析系统的不同变体。图21(B)展示附接有诊断盘的指示剂的非织造载体，包括纸上的pH指示剂，印刷有淀粉、淀粉酶和葡萄糖氧化酶的纸盘，以及捕集剂浸渍的纸盘。图21(C)展示部分印刷的非织造物和涂覆的纸盘，包括印刷的捕集剂和UV边界或捕集剂边界(910)。图21(D)展示指示剂盘的部分印刷的非织造物和梯度(911)应用。通过印刷不同浓度的底物的同心环或用不同的pH介体形成梯度。完全转化后，不同的底物浓度产生不同的颜色强度。或者，在每个环中使用聚合缓冲剂可以调节需要更高活性以产生相同颜色的反应程度。适合缓冲剂包括聚碳酸酯和聚磺酸酯。同心的彩色环的数量提供了整体活性的指示，并且因此参考比色卡可以帮助评估严重程度。图21(E)展示具有印刷指示剂(912)和施加在粘附纸盘上的反应剂的诊断盘的一个实施例。在这些实施例中，非织造物用作指示剂的载体。

图22展示诊断盘(800)可以附接到敷料的不同方式。举例来说，图22(A)展示连续粘合剂，其允许伤口流体穿透粘合剂。图22(B)展示环形或环状粘合剂，其允许伤口流体通过粘合剂层中间的孔渗透。图22(C)展示用UV印刷边界焊接。图22(D)展示用非织造的聚乙烯组分焊接。

实例9：量杆-交通灯格式。

某些反应剂对纸或类似的固相具有足够的亲和力，并且仍然是所关注的生物标志物酶的底物。其中这些底物展现颜色改变，酶的活性可以通过简单地使含有标志物的流体与浸渍纸接触观察。毛细作用确保了流体向底物的分布。每一浸渍盘可以分别地添加到组合“量杆”，其允许待用于测试的所有盘(图23)。一种格式是线性阵列的盘，尽管布局可以容易地改变。

图23展示对各种酶或微生物生物标志物特异的指示剂插入件或盘(820)，并且对照物可以以各种组合或布置放置以形成各种量量杆装置。每个浸渍盘(820)可以分别地添加到组合量杆中，所述量杆允许待用于测试的所有指示剂盘。一种格式是线性阵列的盘，尽管布局可以容易地改变。指示盘可以由通路或边界(821)分隔。

在此实例中，制备下列盘：

1.流体控制：双面粘合的5mm的圆盘被冲压，并且50μg的微粉化坚牢绿粉末在放置在粘合剂中心处。将纸盘同心地放置在粘合剂盘上，使得粉末状染料被纸覆盖。然后将所得盘通过粘合剂的另一侧放置在载体棒上的第一位置。

2.pH控制。如上文所报告，将滤纸浸泡在含有溴百里酚蓝、壳聚糖和戊二醛的乙醇混合物中。将滤纸浸在混合物中，允许其滴干，并且然后在54℃下在玻璃上干燥。然后冲出5mm的圆盘，并且用粘合剂将圆盘附接到载体上。

3.MPO指示剂。依序用1.5μL如上文所描述用于敷料指示剂的MPO坚牢蓝底物浸渍5mm纸盘。一旦干燥，一半的盘用10μg葡萄糖浸渍，并且另一半盘用1μg葡萄糖氧化酶在缓冲液(PBS)中浸渍。

4.弹性蛋白酶指示剂。将滤纸用混合物(0.25％(w/w)Nonidet，2％(w/w)癸醇，在0.05M硼酸盐缓冲液中pH 8)浸渍，并且在54℃下干燥1-2小时。从缓冲液处理过的纸上冲压5mm纸盘，并且依序用2.5μL的AAPV吲哚底物(10μg/μL，在丙酮中)浸渍2次，如上文对于敷料指示剂所描述。

5.溶菌酶指示剂。用含有3％W/V季铵捕集剂的捕集溶液轻度喷涂滤纸(1.5μL/cm2)，并且允许顶表面确定的情况下干燥。冲压双面粘合剂的5mm的盘，并且将40μg亮黑染色肽聚糖放置在粘合剂中心并且使其干燥。将纸盘同心地放置在粘合剂盘上，使得PG染料沉积物由纸覆盖。然后将所得盘通过粘合剂的另一侧放置在载体棒上的第五位置。所得量杆可以通过拭子或纱布将样品施加到其上。

实例10：量杆-“叉”格式。

在一个实施例中，量杆基本上如上述实例制备，除了反应剂盘被定向到一个较厚的承载卡或棒的底部。反应剂盘的末端在生产的最后阶段修整，使得它们与装置的底部边缘齐平。这允许将它们压在待取样的表面上。然后样品扩散到盘的切割端以进行反应。这种格式可能更方便用于对表面，如使用过的敷料进行取样。

实例11：量杆-框格式。

在某些情况下，疑似感染，或患者之间通过消费品和其处置的污染风险需要更安全的系统。在一个实施例中，其中取样经由拭子完成，拭子用于随后的细菌学评价的保留可以是期望的。类似地，可能希望保留结果并且在更换敷料后将其显示给同事。在这种情况下，需要一种保持结果而没有污染风险的方法。为此，在一个实施例中，可密封容器或外壳可用于用于容纳多个盘，如6个盘，其中可以放置湿拭子，并且然后关闭，使得其可以将样品施加到纸盘但不会污染任何其它物体。示出一种这样的设计以及其工作原理(图23)。设计的关键要素是：用于润湿拭子的孔；其封闭的可密封形式；拭子杆周围的密封环；将拭子推向盘同时也使其单向运动的压力翅片；盘的窗；在所述情况下用于参考颜色的空间，在微生物实验室中重新打开的可能性。

实例12：手术部位检测

在另一实施例中，敷料打算用于外科伤口的治疗并且含有打算放置在缝合线的线上的不同的线性区。这些线性区含有特别高浓度的报告染料，使得即使在感染的最早阶段，信号也是明显的。在另一实施例中，敷料含有可移除组件，如线，或类似吸收物，其可以在不去除敷料的情况下取出并且测试(图24)。所述可移除组件以这样的方式放置，使得位于手术伤口的边缘处或附近。在另一实施例中，手术部位敷料是在线性区中基本上透明的，以允许对缝合线和报告染料的观察。在优选实施例中，透明区域由不透明膜覆盖，所述膜可以容易地剥离以检查伤口。在另一实施例中，覆盖和吸收性材料含有捕集材料，如聚合阳离子或阴离子，其能够结合并且浓缩被释放的染料。

举例来说，在图24中，取样线(100)内置或添加到用于伤口或手术部位(92)的敷料中。AQUACEL(4)在一些敷料(92)的实施例中使用。取样线在吸收伤口流体或手术部位处的流体(D)。可以从敷料中拉出或抽出线(E)，而不必使用如镊子、钩或线钩装置的仪器或装置(101)来移除或干扰敷料。然后可以使用本文中所描述的的一种或多种指示剂反应剂或指示剂盘将线溶解在用于诊断装置(102)的缓冲液中。

在一些实施例中，伤口敷料包含内置取样线。在一些实施例中，取样线吸收伤口流体并且可以在不干扰伤口敷料的情况下移除以检测伤口流体中的分析物。

在一些实施例中，样品线可以在缓冲液中稀释，以将用于诊断手术部位或伤口的状态的标志物溶解。

在一些实施例中，一个线钩装置可以用于从伤口敷料移除线。

实例13：敷料插入件的制造

报告器插入件将通过各种材料依序放置在固体载体上制造。这种载体可以是纤维素、粘胶纤维、聚乙烯、聚酰胺或其它适合聚合物或这些组分的混合物。

图25展示指示剂插入件可以以片材或卷的形式制造或印刷。图25还展示印刷的顺序、通路的印刷、铺设反应剂的顺序以及用于在片材或卷轴中印刷盘的反应剂的放置，包含如图25(A)中的粘合剂或背衬膜，涂覆如图25(B)中的非织造材料，和在如图25(C)中的非织造材料上印刷反应剂和通路。如图25(D)中所展示的完成或组装的插入件可以在粘附到敷料或类似载体材料之前分离或切割。

在一个实施例中，材料以卷到卷格式制备。首先印刷固体，且具有穿透膜到全厚度的导向通路。接下来，印刷位于聚合物下方并且不穿透其的底膜，这包括在中心的孔，样品流体通过所述孔进入。接下来，在入口部位(回流捕集器)周围以半密度并且在流动控制和溶菌酶底物的捕集位点以全密度印刷捕集材料。接下来，将流动控制墨水施加到盘的径向臂的第一位置，在1％甲基纤维素中的10到50μg亮黑是典型的。接下来，将如上文所描述的pH报告器印刷在位置2。接下来，依次用如上文所提及的底物、葡萄糖和葡萄糖氧化酶印刷MPO区域。接下来，将弹性蛋白酶底物以依序印刷涂覆以达到适当装载。接下来，将溶菌酶底物以反应剂水平(与捕集水平不同)印刷到位置5。最后，在构造的顶部印刷膜，但不渗透固体载体。膜仅阻塞径向臂从中心到报告器窗的端。

所得卷含有均匀间隔报告器区的连续图案。这些连续印刷的区可以直接轧制成吸收剂与外膜之间敷料夹层，或其可以被冲压切割并且包装用于独立使用。

图20展示制造纸盘的另一实施例。图20(A)展示连续片材的侧视图，其包含顶部的覆盖膜，中间的纸和底部的背衬膜。可以在覆盖膜/背衬膜与纸层(900)之间施加粘合剂/粒子基质(901)。图20(B)展示切片的俯视图，其被制备成通过在放置在非织造物载体上之前去除盘间材料而施加到非织造物载体上。

实例14：用于液基装置的反应剂的制备

在某些实施例中，期望将反应剂以这样的方式放置在装置中，使得其稳定，但是易于溶解以获得注入的酶。一种方法是在纸盘上干燥反应剂并且将盘包括在装置中。

使用浸渍、喷涂或印刷的连续纸或类似材料或织物，或使用浸渍或混合在反应剂中并且随后干燥的预切割盘来制备盘。参看图20、图25。

每20mm2的反应剂密度为：

MPO底物(烷基-坚牢蓝)0.6μg

葡萄糖10μg，葡萄糖氧化酶1μg

对于弹性蛋白酶，首先用浸渍混合物(0.25％(w/w)Nonidet，2％(w/w)癸醇的0.05M硼酸盐缓冲液pH 8)浸渍纸。

其后用对应于2.5μg/mm2的弹性蛋白酶底物溶液喷涂纸。

如此印刷的纸可以被冲压以产生含有反应剂的盘。

然后可以将这些盘并入到装置中。

实例15：用于液基装置的反应剂的制造

替代性地，可以将反应剂压制成水溶性“球粒”，然后将其包括在装置的孔中。除了在纸上使用的那些之外，球粒还可以含有一系列材料。

液基诊断装置使用预配制的反应剂以产生响应样品中的酶活性的颜色。样品可以含有所需液体中的全部或仅仅一部分。在样品待稀释的情况下，装置优选含有适于稀释或使样品均质的水或缓冲液。将所得混合物分配到孔中，每个孔含有不同的反应剂组。如果不包含在底物中，反应剂是缓冲盐、能量源、底物和相关生色团的混合物。这些反应剂理想地以可以置于孔中的片剂或类似物等分散实体递送。在这里，我们描述了弹性蛋白酶、溶菌酶、MPO和蛋白质标准作为内标的酶测定的片剂的制备。在添加伤口流体并且释放测定组分后片剂溶解以启动酶反应，在阳性的情况下引起颜色变化。

使用珀金埃尔默(Perkin Elmer)电动液压压片机如下形成片剂：

每片剂的压制时间约为10秒。

压制工具的填充部分的直径为5mm

片剂为：20mg，5mm直径，1mm深

首先施加真空约15秒。

保持施加的真空直到移除压制工具。

压制压力调节到2t。

表1：用于液基诊断装置的片剂反应剂列表。

实例16：用于液基测定的独立装置和试剂盒

本文中描述用于使用组合物和装置检测和测量伤口感染的独立装置和试剂盒。这些装置和试剂盒优选包含用于收集样品的取样组件和测试装置。在一些实施例中，测试装置包含壳体，其围绕管以限定在所述壳体中的开口以接收取样组件，所述壳体在其内具有连接到管的相对端并且保持液体的稀释剂的密封稀释室，用于从取样尖端去除样品形成测试液体。管与反应孔液体连通，反应孔保持能够指示分析物存在的反应剂。驱动机构将稀释剂从室驱动通过取样尖端，进入管中，并且最后到反应孔。

在一些实施例中，用于检测样品中的分析物的试剂盒包含：(i)取样组件，其包含用于收集样品的取样尖端和(ii)测试装置，其进一步包含：壳体，其围绕管以限定壳体中的开口以接收取样组件，壳体还具有设置在其内的：密封稀释剂室，其连接到管并且保持液体稀释剂，用于从取样尖端移除样品以形成测试液体；反应孔，其与管液体连通，反应孔中保持能够指示测试液体中分析物存在的反应剂；以及驱动机构，其能够驱使稀释剂从腔室通过装置，通过样品尖端上方并且进入反应孔。

试剂盒由驱使稀释剂通过样品并且进入反应孔中操作，测试溶液由稀释剂流动通过样品制备。没有必要首先将样品与稀释剂混合以制备测试溶液，并且然后通过侧流条将溶液移到反应孔中。驱使稀释剂通过样品并且到反应孔是指试剂盒可以以最小步骤数使用，例如取得样品，将取样组件插入到壳体和激活驱动机制。这个简单的程序可以将使用者错误，从而将假阴性结果和误诊减到最少。

密封稀释剂室可以含有指定体积的稀释剂，使得预期体积的测试溶液到达一个或多个反应孔。此外，稀释剂室和反应孔之间的路径被排出，使得截留的空气不会影响测试溶液通过装置的流动或阻止测试溶液到达反应孔。

壳体优选具有两个部分，其能够相对于彼此移动，同时保持相互连接。移动部分的动作可以提供驱动机构，稀释剂通过驱动机构移动通过装置。稀释剂可以通过稀释剂室的压缩而被驱动通过装置，这迫使稀释剂通过样品尖端并且进入一个或多个反应孔。当壳体的部分相对于彼此移动，如使一个部分滑过另一个部分时，可能发生稀释剂室的压缩。

在一些实施例中，壳体包含锁定机构，一旦驱动机构已被激活，锁定机构将壳体锁定在适当位置上，并且防止装置的再使用。以这种方式，显而易知装置已被使用并且不能再次使用。这样可以最大限度地减少来自例如在运输过程中被错误激活的装置或重复使用其反应剂已耗尽的装置的错误结果。

在一些实施例中，取样组件优选包含手柄和取样尖端，所述手柄优选包含与壳体中的开口啮合的密封件，以在取样组件完全插入管中时将管密封。密封件一般防止样品和稀释剂从装置中逸出，减少了伤口流体交叉污染的可能性。优选地，密封件与管啮合以将取样组件锁定在装置中并且一旦使用取样组件就防止移除取样组件。这进一步减少来自取样组件的交叉污染的可能性。

优选地，取样组件插入装置中释放稀释剂室上的密封件。优选地，密封件是球阀或可以是膜(film)或膜(membrane)密封件或鸭嘴阀或本领域中已知的其它止回阀，其在取样组件插入装置中时被激活。当取样组件插入装置中时，取样组件优选地破裂、刺穿或移动稀释剂腔室上的密封件。

优选地，管与取样组件的取样尖端的尺寸相同或相似，使得将取样尖端插入管中的动作使其沿着管的壁刮擦，有助于在稀释剂从稀释剂室中释放出来并且冲洗通过装置时样品在稀释剂中的分散。当稀释剂从稀释剂室驱动时，取样尖端的尺寸与管匹配也迫使稀释剂冲洗通过尖端。优选地，稀释剂室的形状类似波纹管，以帮助腔室的压缩。或者，腔室可以是类似于注射器中的柱塞和管的组合，或者可以是由使用者用手压缩的填充的柔性小袋或在释放密封时收缩的气囊。

在一些实施例中，试剂盒包含用于收集样品的取样组件和测试装置。测试装置包含壳体，其围绕管以限定壳体的开口以接收取样组件，壳体内具有密封的稀释剂室，稀释剂室连接到管的相对端并且保持液体稀释剂，用于取样尖端移出样品以形成测试液体。管与反应孔液体连通，反应孔容纳能够指示分析物存在的反应剂。

驱动机构将稀释剂从室驱动通过取样尖端，进入管中，并且最后到反应孔。

图26展示用于检测样品中的分析物的独立装置试剂盒的横截面。取样组件(2)包含手柄(4)和取样尖端(6)，其处于通过管(10)的一个端部插入壳体的过程中。取样组件(2)具有密封构件(12)，其与管(10)的开口端形成密封，而取样尖端(6)压下球阀(14)以打开稀释剂室(16)。图27展示完全插入壳体以将组件密封到装置的取样尖端。图28展示独立装置试剂盒的平面视图，其中取样组件在适当位置，并且展示壳体的左侧的三个观察窗(20)，其与三个反应室(18)一致，反应室包含能够指示分析物存在的反应剂。反应室可以含有能够检测来自例如伤口流体的不同分析物的反应剂。当从上方观察时，壳体右侧的窗是控制窗，其指示测试已经发生。壳体(8)在两个主要部分中，其可滑动地彼此连接。在图29中，装置的使用者可以将壳体的下部部分(24)滑动离开壳体的上部部分(26)并且在如此操作时引起杠杆(28)压缩稀释剂室(16)并且将稀释剂驱出室，通过取样尖端(6)和管(10)上到歧管(30)。独立装置试剂盒的平面视图(图30)，其中壳体滑动开，产生窗(20)和指示测试已经发生的控制窗(22)。图29(A)中的箭头表示稀释剂通过装置移动以形成测试溶液。在独立装置试剂盒中的稀释剂室、管和反应室在图31中所展示，其中壳体为清楚起见移除。图32展示在独立装置试剂盒中测试溶液向每个反应室的分配。测试溶液从中央节点(32)流到每个反应室(18)。节点(32)还可以含有止回阀，以防止测试溶液流回到装置并且引起交叉污染。

取样组件包含手柄和在通过管的一端插入壳体的过程中的取样尖端。取样组件具有密封构件，在取样尖端压下球阀以打开稀释剂室时其与管的开口端形成密封。当取样尖端完全插入壳体中以将部件密封到装置时，允许壳体打开，释放稀释剂并且允许强制构件操作。

装置还包含在壳体中对应于含有能够指示分析物的存在的反应剂的三个反应室的观察窗。反应室可以含有能够检测来自例如伤口流体的不同分析物的反应剂。一些实施例包括表明测试已经发生并且样品足够使测试可行的控制窗。

装置的使用者可以将壳体的下部部分远离壳体的上部部分滑动，在如此操作时，使杠杆压缩稀释剂腔室并且驱动稀释剂从室离开，通过取样尖端并且从管向上到歧管。如果装置是未被激活，即如果在稀释剂室中的密封件还没有被打破，壳体不可能打开。壳体的开口使观察窗被定位在反应孔上方并且使得使用者能够观察结果。这提供一种安全措施，因为它确保装置的适当操作以便获得可靠结果。

一旦激活，则测试液体从中央节点流动到每个反应室。在一些实施例中，节点包含止回阀和过滤器，以防止测试溶液回流到装置和反应室之间，回流会导致交叉污染。稀释剂通过装置的流动路径优选在反应室端设置有排出口。

实例17.具有单独样品制备室的装置

图33展示具有壳体的诊断拭子装置。在一个实施例中，拭子装置包含可重复密封的壳体(80)，其进一步包含定位器和锁定销(82)，用于观察来自放置在盘保持器(83)中的反应剂盘的可见信号的观察窗(81)和用于放置拭子的凹槽(85)。图33(C)的侧视图展示壳体(80)。使用时，使用者用拭子触碰样品，将拭子放入壳体(80)中的凹槽(85)中，如(D)中的箭头所示拉动拭子的杆柄，使拭子上的样品在条(86)上滑动并且将样品转移到反应剂或指示剂盘(83)。可以通过观察窗(81)查看结果。拭子也可以保持在壳体(80)中以便后续分析。

图34展示线钩样品制备装置(200)的一个实施例，其包含针状尖端和手柄或柱塞(201)，其中尖端进一步包含用于在不干扰敷料的情况下从敷料中抽出线的钩，如图所示在图34(A)中所展示。在从敷料中取出线时，可以将线钩装置(200)插入含有稀释剂的样品制备室或稀释剂室(202)中，用于溶解或稀释来自图34(B)和图34(C)的线的微生物生物标志物或伤口流体。线钩装置的柱塞(201)可以在样品制备室(202)中向下压，使得针的尖端破坏如图34(D)中所展示在样品制备室(203)的底部的密封件，以便将样品溶液释放到用于分析伤口流体或手术部位的装置中。

图35展示拭子样品制备装置(300)的一个实施例，包含具有手柄或柱塞(301)的拭子(302)，可用于接触样品以进行测试。在对体液或伤口流体取样后，拭子装置(300)放置在含有用于溶解或稀释伤口流体或体液的缓冲液的样品制备室(202)内，如图35(A)中所见。在样品制备室内搅拌或混合拭子装置，以进一步将流体样品释放到样品制备室中，如图35(B)中所展示。针的柱塞(301)向下压，如图35(C)中所展示，破坏样品制备室底部的密封件(203)，使样品流体流入含有反应剂或指示剂插入件或盘的反应室中，以检测由拭子取出的样品中的微生物感染。在一些实施例中，如图35(D)中所展示，使用Goretex膜(204)去除气体，Goretex膜是气体和蒸汽可渗透的，但液态水不可渗透。所述膜可以用于在注入时使样品脱气，并且在进行测定的地方使流体室排气。

图36展示适于指示剂测试的样品制备室。样品制备室(202)适于溶解或稀释样品进行进一步测试，并且包含可重复密封的顶部(401)和在室的底部(203)的可破坏密封件(402)，其中样品制备室连接到反应室或诊断装置。当拭子装置或线钩装置在室中向下插入或向下按压时，其使底部的密封件(402)破裂，将样品流体释放到连接到室的诊断装置中。

在另外的实施例中，图37，诊断装置(500)或分析系统适于在一端连接到样品制备室(202)，在破坏室连接器处的密封件(203)时允许样品流体从样品尖端(300)流出，允许样品流体从样品制备室(202)流入反应室(502)以便分析。位于反应室(502)之后的吸收性材料(501)有助于将样品流体从样品制备室(202)吸入反应室(502)。反应室可以含有如本文所描述的反应剂、反应剂片剂、反应剂盘或指示剂插入件。

只要液相测试需要的话，其可以使用各种手段进行，但最终依赖于低体积液体(例如100μL)中的可见信号的形成。这些方法在获取、稀释和引入样品方面有所不同。在此实例中，我们使用调适的注射器式配置来引入样品。样品可以是拭子、纱布片或来自敷料的受污染的线。拭子(图35)被放置在柱塞构造中，并且然后柱塞形成手柄，可以用手柄将拭子样品制备室中与提取缓冲液或稀释剂混合。然后，柱塞允许通过同时抵靠拭子的杆柄和室的侧密封而移除流体；柱塞中的GORETEX插入件允许柱塞下降时去除气体。在样品是线或纱布片的情况下，用钩代替拭子，然而，原理与将钩子的杆柄放置在柱塞内的原理相同。

样品制备室含有缓冲液，其与拭子/钩上的样品混合。室在鲁尔锁式连接器处密封并且此密封件在鲁尔被放置在容器中时，或当拭子或钩被推动通过室的底部时破坏(图35)。测定装置入口包括标准阴鲁尔，具有鲁尔锁式围绕件以确保良好的密封。修改后的腔室与阴鲁尔锁不可逆地啮合并且在柱塞的下压时，流体经由流体分配网络不含气地转移进入装置。装置中的每个室都含有反应剂片剂(参看前面的反应剂实例)。每个室通过声波焊接在室上的goretex贴片排气。一旦室被填充(从底部到顶部)，流体流优选停止。排出的气体在到达大气之前通过过滤器。液体的到达溶解反应剂丸并且允许反应开始。在给定时间内的反应的程度通过比较比色卡来确定。结果在很大程度上是二元的，清楚的颜色或没有。与颜色相关的标志物越多，越有可能是潜在的感染。因此，来自未感染伤口的伤口流体不使颜色变化。那些来自感染伤口的伤口流体在5分钟内引起至少一种标志物改变颜色，并且更通常全部三种标志物。

图38展示诊断装置或转移系统的实施例，其包含含有缓冲液(如盐水)的室或容器(601)、可重复密封的顶部(600)、在一端具有气体出口和用于将样品转移到样品制备室或稀释剂室(601)中的钩或样品尖端的柱塞或类似装置(602)以及至少一个能够分析来自室(601)的样品流体反应室(606)。为了进行此类分析，将在末端含有样品的柱塞或活塞(602)插入到样品制备室(601)中，或将样品置于稀释剂室(601)中，使得样品可以在腔室(601)中的缓冲液中稀释或溶解。插入稀释剂室(601)中的柱塞(602)的组合件在(607)中所展示。

室(601)可以进一步包含鲁尔锁或滑动尖端(605)，其用于连接到反应室(604)或分析系统。在将柱塞单元(601，602)连接到反应室(604)之后，可以向下按压柱塞(602)以破坏室(601)末端处的密封件，将样品流体从样品制备室释放到反应室中(604)，其中个别反应室(606)可以具有用于检测分析物的不同报告器或颜色系统。柱塞(602)可以进一步包含推动水并且释放气体的膜，从而在将柱塞压入室时使样品流体脱气。反应室可以并行地填充，并且最后一个腔室含有气溶胶过滤器和到大气中的压力出口。压力、均衡、反应室填充和气溶胶过滤可以通过膜出口来实现。在一些实施例中，反应室含有反应剂片剂或反应剂盘。可以使用超声波将顶膜焊接在适当位置。在一些实施例中使用使反应室视图放大的透镜。与反应室或转移系统(604)的连接包括粗滤器和用于破坏605处连接件上的缓冲液密封件的穿透器。通过夹紧可以在顶部和底部封闭反应室。

反应容器的结构可以灵活组织。一个实例在图39中所展示，其展示分析系统(604)的另一实施例。反应室(606)可以以径向方式布置而不是线性布置。扇形或径向形状的分析系统(604)适于与具有用于将样品溶液驱动到反应孔或室中的柱塞(602)系统的样品制备室(601)一起使用。在(B)中展示这种分析系统(604)的不同视图。(608)展示以径向布置布置的一系列反应室的顶视图。在一些实施例中，反应室单元(610)可以是可从壳体(609)移除的。这种可移除特征便于使用者在反应单元(610)内的个别反应室中再填充、插入或更换反应剂。

在此实例中，使用的反应剂是水溶性的，并且被配制为使用赋形剂(如PEG、麦芽糖和山梨糖醇)作为载剂的片剂。将片剂与本体混合物中适量的缓冲盐一起配制，以在溶解时产生最佳pH。为了供应过氧化氢，使用过碳酸钠。作为MPO底物，使用可溶性坚牢蓝衍生物，即与丁二酸酐反应的产物，或者可以使用guacol、二氨基苯酚或类似物。对于弹性蛋白酶，采用AAPV硝基苯酚酰胺，或者具有重氮盐增强剂的AAPV-吲哚酚。对于溶菌酶，底物是标记的肽聚糖粒子，然而，孔在观察界面处含有带正电的膜。这种膜的一半来源于捕集器，并且反应主要指示剂中两侧的对比指示反应程度。

在一些实施例中，如图24，取样线(100)内置或添加到用于伤口或手术部位的敷料(92)中。在敷料(92)的一些实施例中使用AQUACEL(4)。取样线在吸收伤口流体或手术部位处的流体(D)。如图24(E)中所展示，可以从敷料中拉出或抽出线，而不必使用如镊子、钩或线钩装置的器械(101)来移除或干扰敷料。然后可以使用本文中所描述的的一种或多种指示剂反应剂或指示剂盘将线溶解在用于诊断装置(102)的缓冲液中。

在一些实施例中，伤口敷料包含内置取样线。在一些实施例中，取样线吸收伤口流体并且可以在不干扰伤口敷料的情况下移除以检测伤口流体中的分析物。

在一些实施例中，可以将样品线稀释在缓冲液中以溶解标志物，以便诊断手术部位或伤口的状态。

在一些实施例中，线钩装置可以用于从伤口敷料移除线。

虽然本文已经展示并且描述了所公开技术的优选实施例，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施例仅作为实例提供。本领域技术人员现在将在不脱离所公开的技术的情况下意识到大量变型、变化以及取代。应理解，可以在实践所公开技术时采用本文中所描述的所公开技术的实施例的各种替代方案。期望所附权利要求书限定所公开技术的范围，并且因此涵盖这些权利要求和其等效物的范围内的方法和结构。

Claims (92)

1.一种伤口敷料，其包含

a)伤口接触层；

b)反应剂层，其包含一个或多个测试区，其中所述反应剂层与所述伤口接触层流体连通；和

c)覆盖所述反应剂层的外层。

2.根据权利要求1所述的伤口敷料，其中所述伤口接触层包含凝胶形成聚合物。

3.根据权利要求1所述的伤口敷料，其中所述一个或多个测试区中的每一个包含一个或多个回流捕集器、反应剂垫、过滤垫、指示剂捕集器和吸收区域中的每一个，并且其中一个或多个观察窗位于所述反应剂垫或所述指示剂捕集器上方。

4.根据权利要求3所述的伤口敷料，其中：

a)所述反应剂垫与所述过滤垫流体连通；

b)所述过滤垫与所述指示剂捕集器流体连通；并且

c)所述指示剂捕集器与所述吸收区域流体连通。

5.根据权利要求1所述的伤口敷料，其中所述一个或多个测试区包含一种或多种选自由以下组成的组的反应剂：酶反应性指示剂、作为过氧化物源的反应剂、产生有色产物的酶、pH指示剂、蛋白质反应反应剂和水分检测反应剂。

6.根据权利要求5所述的伤口敷料，其中酶反应性指示剂是蛋白质指示剂缀合物。

7.根据权利要求6所述的伤口敷料，其中所述蛋白质指示剂缀合物沉积在所述反应剂垫中或所述反应剂垫上。

8.根据权利要求6所述的伤口敷料，其中所述蛋白质指示剂缀合物具有式(I)的结构：

A-B

式(I)

其中：

A是有助于将酶反应性区与所述反应剂垫结合的锚定区或部分；并且

B是所述酶反应性区。

9.根据权利要求8所述的伤口敷料，其中所述酶反应性区包含肽。

10.根据权利要求8所述的伤口敷料，其中所述酶反应性区包含具有酶反应性指示剂的指示剂区。

11.根据权利要求8所述的伤口敷料，其中B进一步包含指示剂区。

12.根据权利要求11所述的伤口敷料，其中所述指示剂区在被靶酶剪切后通过选自由以下组成的组的辅助酶转化成染色物种：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、过氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酶、漆酶和其中两种或更多种的组合。

13.根据权利要求10所述的伤口敷料，其中所述酶反应性指示剂与一种或多种选自由以下组成的组的酶相互作用：弹性蛋白酶、溶菌酶、组织蛋白酶G、髓过氧化物酶和其任何组合。

14.根据权利要求10所述的伤口敷料，其中所述酶反应性指示剂包含在所述酶不稳定或酶反应性区与一种或多种酶相互作用时能够产生可见颜色或可检测的电子变化的部分，其中所述部分选自由以下组成的组：过氧化物酶底物、芳胺、氨基酚、中性染料、带电染料、纳米粒子、胶体金粒子和其类似物。

15.根据权利要求8所述的伤口敷料，其中所述锚定区共价连接到所述反应剂垫。

16.根据权利要求8所述的伤口敷料，其中所述锚定区非共价连接到所述反应剂垫。

17.根据权利要求16所述的伤口敷料，其中所述锚定区离子连接到所述反应剂垫。

18.根据权利要求1所述的伤口敷料，其进一步包含除所述外层之外的所述伤口敷料的所有层中的一行或多行芯吸缝合或芯吸簇绒，并且其中所述芯吸缝合或芯吸簇绒提供所述反应剂层与所述伤口接触之间的流体连通。

19.根据权利要求18所述的伤口敷料，其中一行或多行芯吸缝合或芯吸簇绒包含可润湿并且展现毛细作用的纤维。

20.根据权利要求19所述的伤口敷料，其中所述纤维包含棉、人造丝、粘胶纤维、羊毛、蚕丝、聚酯、聚酰胺、CMC、聚丙烯或其任何组合。

21.根据权利要求1所述的伤口敷料，其中一个或多个测试区包含与反应剂垫流体连通的反浸出捕集器和仅在所述反浸出捕集器处穿过一个或多个测试区的一行或多行芯吸缝合或芯吸簇绒。

22.根据权利要求1所述的伤口敷料，其进一步包含在所述伤口接触层与所述反应剂层之间的泡沫层。

23.根据权利要求22所述的伤口敷料，其进一步包含在所述伤口接触层中的一个或多个穿孔。

24.根据权利要求22所述的伤口敷料，其进一步包含在所述泡沫层和所述伤口接触层中的一个或多个穿孔。

25.根据权利要求21所述的伤口敷料，其中所述一个或多个测试区中的每一个进一步包含与所述反应剂垫流体连通的反浸出捕集器和与所述反浸出捕集器对准的一个或多个穿孔。

26.根据权利要求1所述的伤口敷料，其中所述一个或多个测试区中的每一个包含多通道测试区，其中每个通道通过一个或多个不可渗透的隔板或边界与相邻通道分隔。

27.根据权利要求26所述的伤口敷料，其包含多个测试区。

28.根据权利要求26所述的伤口敷料，其中所述测试区以线性构型布置。

29.根据权利要求26所述的伤口敷料，其中所述测试区以径向构型布置。

30.根据权利要求1所述的伤口敷料，其中所述外层具有一个或多个窗，所述窗允许观测来自所述反应剂层的信号。

31.根据权利要求30所述的伤口敷料，其中所述信号是颜色变化。

32.根据权利要求30所述的伤口敷料，其中所述信号是荧光信号、发光信号或由物理手段介导的信号，如电性变化。

33.一种检测哺乳动物伤口中一种或多种酶的水平的方法，所述方法包含：

a)使所述哺乳动物伤口与根据权利要求1所述的伤口敷料接触；

b)观察所述反应剂层中的一个或多个信号，其中所述信号是颜色变化、荧光信号、发光信号或电性变化；和

c)将所述信号与参考物或对照物比较以确定酶的水平。

34.一种检测哺乳动物伤口中一种或多种酶的存在的方法，所述方法包含：

a)使所述哺乳动物伤口与根据权利要求1所述的伤口敷料接触；和

b)观察所述反应剂层中的一个或多个信号，其中所述信号是颜色变化、荧光信号、发光信号或电性变化。

35.一种检测哺乳动物伤口中的感染的方法，所述方法包含：

a)使所述伤口与根据权利要求1所述的伤口敷料接触；和

b)观察所述反应剂层中的一个或多个信号，其中所述信号是颜色变化、荧光信号、发光信号或电性变化。

36.一种治疗哺乳动物的伤口中的感染的方法，所述方法包含：

a)使所述伤口与根据权利要求1所述的伤口敷料接触；

b)观察所述反应剂层中的一个或多个指示感染的信号，其中所述信号是颜色变化、荧光信号、发光信号或电性变化；和

c)对所述哺乳动物施用药物治疗。

37.一种用于检测伤口中的感染的装置，其包含：

a)伤口接触层；

b)反应层，其包含一种或多种反应剂，所述反应剂可以指示与感染相关的一种或多种分析物的存在，其中所述反应剂固定在固相上并且在报告器区域产生可检测信号；

c)在所述反应层的顶部上的盖，其中所述盖包含一个或多个窗或透明区域以允许观测所述可检测信号；和

d)所述伤口接触层与所述反应层之间的流体连通。

38.根据权利要求37所述的装置，其中所述反应剂包含酶反应性区，所述酶反应性区与一种或多种选自由以下组成的组的靶酶相互作用：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶、酯酶和其任何组合。

39.根据权利要求37所述的装置，其中一种或多种反应剂在pH变化时、在酸性pH下或在碱性pH下产生可见颜色，并且其中所述pH敏感性反应剂包含溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料。

40.根据权利要求38所述的装置，其中所述酶反应性区包含在与一种或多种靶酶相互作用时能够产生可见颜色或可检测电子变化的部分，其中所述部分是过氧化物酶底物、芳胺、氨基酚、吲哚酚、中性染料、带电染料、纳米粒子、胶体金粒子或其类似物。

41.根据权利要求40所述的装置，其中所述反应剂与靶酶相互作用以产生染色物种或产生与选自由以下组成的组的辅助酶相互作用的中间产物：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、过氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酶和漆酶。

42.根据权利要求37所述的装置，其中所述流体连通包含吸收性材料的芯吸缝合或芯吸簇绒，其允许所述伤口接触层与所述反应层之间的流体连通。

43.根据权利要求37所述的装置，其中所述反应剂被印刷、喷涂或沉积在所述固相上。

44.根据权利要求37所述的装置，其中所述固相选自由以下组成的组：纸、粘胶纤维、再生纤维素、玻璃纤维和其任何组合。

45.根据权利要求37所述的装置，其中所述可检测信号是颜色变化、荧光信号、发光信号或电性变化。

46.根据权利要求37所述的装置，其中所述装置是伤口敷料。

47.一种用于检测感染相关酶的装置，其作为独立实体提供并且可以放置在任何敷料系统中，包含与反应剂池流体连通的样品入口，其中反应剂池包含样品递送和/或pH的指示剂，和一种或多种选自由以下组成的组的感染的生物标志物的指示剂：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶和酯酶。

48.根据权利要求47所述的装置，其中所述指示剂包含酶反应性指示剂、作为过氧化物源的反应剂、产生有色产物的酶、pH指示剂、蛋白质反应反应剂或水分检测反应剂。

49.根据权利要求47所述的装置，其中所述指示剂是酶反应性指示剂或蛋白质指示剂缀合物。

50.根据权利要求47所述的装置，其中所述蛋白质指示剂缀合物沉积在所述反应剂垫中或所述反应剂垫上。

51.根据权利要求47所述的装置，其中所述蛋白质指示剂缀合物具有式(I)的结构：A-B，其中A是有助于将酶反应性区与所述反应剂垫结合的锚定区或部分；B是所述酶反应性区；并且其中所述酶反应性区包含肽或指示剂区。

52.根据权利要求51的装置，其中所述指示剂区与酶相互作用以产生染色物种，或其中中间物种与选自由以下组成的组的辅助酶相互作用以产生染色物种：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、过氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酶和漆酶。

53.根据权利要求47所述的装置，其中所述流体连通包含由不可渗透的通路、边界或隔板分隔的一到十个指示剂通道，其中每个指示剂通道包含不同的反应剂或对照物。

54.根据权利要求47所述的装置，其中所述流体连通包含多个独立指示剂通道，并且其中每个指示剂通道包含不同的反应剂或对照物。

55.根据权利要求47所述的装置，其中所述反应剂以径向构型印刷、喷涂或沉积在固相上以形成盘。

56.根据权利要求47所述的装置，其中所述反应剂以线性构型印刷、喷涂或沉积在固相上以形成测试条或量杆型装置。

57.根据权利要求55所述的装置，其中所述盘包含印刷、喷涂或沉积在所述盘的顶表面上的反应剂，所述盘在底表面上具有捕集材料和底物材料，其中所述底物可以被所述样品中的一种或多种酶消化以释放一种或多种向所述捕集器迁移的产物。

58.根据权利要求57所述的装置，其中一种或多种产物通过与辅助酶的相互作用染色或产生颜色变化，并且其中所述颜色变化可以在所述盘的所述顶表面上观测。

59.一种用于检测伤口中的感染的诊断盘，其包含：

a)反应层，其包含一种或多种与指示感染的靶酶相互作用的反应剂，其中所述反应剂固定在固相上；

b)每种反应剂喷涂、印刷或沉积在通过不可渗透的隔板与相邻通路分隔的通路中的反应剂区域中；

c)每个通路包含报告器区域，其中观察到颜色、颜色变化或其它可检测信号；和

d)盖，其包含用于观测所述报告器区域中的所述信号的窗。

60.根据权利要求59所述的诊断盘，其中一种或多种反应剂在pH变化时、在酸性pH下或在碱性pH下产生可见颜色，其中所述pH敏感性反应剂包含溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料。

61.根据权利要求59所述的诊断盘，其中多个通路围绕切割入口、穿孔或芯吸材料以线性或径向构型布置，所述切割入口、穿孔或芯吸材料允许伤口接触区域与所述反应层中的所述反应剂之间的流体连通。

62.根据权利要求59所述的诊断盘，其中一种或多种反应剂在与酶相互作用时产生颜色信号或其它可检测信号，所述酶选自由以下组成的组：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶和酯酶。

63.根据权利要求59所述的诊断盘，其中所述反应剂包含选自由以下组成的组的部分：过氧化物酶底物、芳胺、氨基酚、吲哚酚、中性染料、带电染料、纳米粒子和胶体金粒子，以及其类似物。

64.根据权利要求59所述的诊断盘，其中所述反应剂包含产生染色物种或颜色信号的辅助酶，并且其中所述辅助酶是脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、过氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酶、漆酶或其中一种或多种的组合。

65.根据权利要求59所述的诊断盘，其中所述固相选自由以下组成的组：纸、粘胶纤维、再生纤维素、玻璃纤维和类似材料。

66.根据权利要求59所述的诊断盘，其中存在多个通路，所述多个通路各自具有不同的反应剂或对照物。

67.根据权利要求59所述的诊断盘，其中所述可检测信号包含颜色变化、颜色的出现或消失、荧光信号、发光信号或电性变化或信号。

68.一种用于检测伤口中的感染的侧流或量杆装置，其包含：一个或多个以线性构型布置的反应剂盘，其中每个反应剂盘浸渍有反应剂，所述反应剂与酶相互作用以产生颜色变化和/或对pH敏感，包含溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料，并且其中所述盘固定在固相上。

69.根据权利要求68所述的装置，其中所述反应剂在与酶相互作用时产生颜色信号，所述酶选自由以下组成的组：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶和酯酶。

70.根据权利要求68所述的装置，其中所述固相选自由以下组成的组：纸、粘胶纤维、再生纤维素、玻璃纤维和其任何组合。

71.一种用于检测伤口或样品中的感染的装置，其包含壳体，其中所述壳体包含：

a)用于收集所述样品的取样组件；

b)与反应室流体连通的样品制备室，其中所述样品制备室接收所述样品；

c)所述反应室包含一个或多个反应池，所述反应池含有反应剂，所述反应剂与所述样品中的一种或多种酶相互作用以指示感染的存在和/或所述样品的pH；和

d)用于观测可检测信号的窗或透明区域，其中所述信号是颜色变化。

72.根据权利要求71所述的装置，其中一种或多种反应剂在与酶相互作用时产生颜色信号，所述酶选自由以下组成的组：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶和酯酶。

73.根据权利要求71所述的装置，其中所述反应剂中的一种响应于pH的变化、碱性pH或酸性pH产生颜色变化。

74.根据权利要求71所述的装置，其中所述反应剂在主要是液体的介质中进行。

75.根据权利要求71所述的装置，其中所述反应剂以用于所述反应池的片剂形式提供。

76.根据权利要求71所述的装置，其中所述反应剂被印刷、喷涂或沉积在载体材料上的独立反应剂区中，以形成用于所述反应室的测试板。

77.根据权利要求71所述的装置，其中所述载体材料选自由以下组成的组：纸、粘胶纤维、再生纤维素和玻璃纤维，其沿载体条排列成一行。

78.根据权利要求76所述的装置，其中所述反应剂区沿载体条排成一行，所述载体条能够吸收所述反应室中的所述样品。

79.根据权利要求71所述的装置，其中所述取样组件是拭子装置。

80.根据权利要求71所述的装置，其中所述取样组件是钩或针装置，其适于在不干扰伤口敷料的情况下从所述伤口敷料移除线。

81.一种用于检测样品中的感染的试剂盒，其包含：

a)用于收集所述样品的取样组件；

b)测试装置，其包含壳体，所述壳体围绕管以限定用于接收所述取样组件的所述壳体中的开口，所述壳体包含：

c)稀释剂室，其容纳液体稀释剂；

d)反应孔，其与所述管液体连通，其中所述反应孔容纳一种或多种反应剂，所述一种或多种反应剂与一种或多种分析物相互作用以产生颜色变化或可检测信号；

e)观察窗或报告器区域，其中可以观察到所述颜色变化或可检测信号；

并且

f)其中所述液体稀释剂从所述样品组件流动到所述反应孔以将所述样品与所述反应孔中的所述反应剂混合。

82.根据权利要求81所述的试剂盒，其中所述反应剂包含一种或多种酶反应性指示剂和/或pH指示剂。

83.根据权利要求81所述的试剂盒，其中一种或多种反应剂在与酶相互作用时产生颜色信号，所述酶选自由以下组成的组：溶菌酶、MPO、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、过氧化氢酶、脂肪酶和酯酶。

84.根据权利要求81所述的试剂盒，其中所述反应剂包含选自由以下组成的组的部分：过氧化物酶底物、芳胺、氨基酚、吲哚酚、中性染料、带电染料、纳米粒子、胶体金粒子和其类似物。

85.根据权利要求81所述的试剂盒，其中所述可检测信号包含颜色信号或颜色变化、荧光信号、发光信号或电信号。

86.根据权利要求81所述的试剂盒，其中至少一种反应剂响应于碱性pH、酸性pH或pH的变化产生颜色信号，其中所述pH敏感性反应剂是溴百里酚蓝、酚红、溴酚红、氯酚红、百里酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫；硝嗪黄；或其它磺酞染料。

87.根据权利要求81所述的试剂盒，其中所述样品从伤口、伤口敷料或手术部位获得。

88.根据权利要求81所述的试剂盒，其中所述取样组件是拭子装置或钩或针装置。

89.根据权利要求81所述的试剂盒，其中所述反应剂沉积在测试条上的独立区中以形成测试板。

90.根据权利要求81所述的试剂盒，其中存在多个反应孔，其中每个反应孔包含不同的反应剂或对照物。

91.根据权利要求90所述的试剂盒，其中所述反应孔以线性构型布置。

92.根据权利要求90所述的试剂盒，其中所述反应孔以径向构型布置。