CN109125303A - 一种兔出血症病毒衣壳蛋白的降解方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用棉酚降解兔出血症病毒衣壳蛋白的方法。针对生产上尚未有降解兔出血症病毒衣壳蛋白以达到治疗该病毒病目的的现状，利用棉酚直接降解病毒衣壳蛋白，从而影响病毒粒子的稳定性，有利于实现病毒病的治疗。同生产上传统的兔病毒性出血症防控主要通过抗生素、疫苗等进行病毒病预防相比，本技术利用棉酚直接降解兔出血症病毒衣壳蛋白，从而有望能够直接治疗病毒病，作用方式新颖，安全性也较高，应用后将有利于兔产业的健康发展。
Description
一、技术领域
本发明属于动物病毒病防控技术领域，具体涉及一种利用棉酚降解兔出血症病毒衣壳蛋白的方法。
二、技术背景
随着人们生活水平的提高以及饮食结构的多样化，兔的养殖量也在不断增大。随着兔养殖量的加大，兔病的出现频率也越来越高，给养兔业带来巨大危害，尤其是兔病毒性出血症的危害最为严重，造成的经济损失极大。兔病毒性出血症又称兔出血性肺炎、兔出血症或兔瘟，是一种由兔出血症病毒引起的兔传染病，其发病急、传染性强、死亡率高(常达70％以上)。目前对该病尚无良好药物进行治疗，抗生素和其他药物仅可起到预防病害及其他并发症的作用。接种疫苗是当前常用防控方法，其中传统的兔瘟疫苗是组织灭活疫苗，其制作需要用兔瘟病毒注射敏感兔子，该制备过程需要在严格的生物安全防范措施下进行，否则容易造成强毒扩散，另外需要用大量的敏感兔子，成本较高，影响了疫苗生产使用。基因工程疫苗是通过细胞来生产疫苗，较组织灭活疫苗更易实现大规模生产，也易控制质量，生物安全性好，同时具有相同的保护率，将有较广阔的前景。但疫苗主要是进行病毒病的预防，而对已感染兔出血症病毒兔无法治疗。为此发掘兔病毒性出血症有效治疗药物十分重要，而要有效治疗病毒病，对病毒的直接破坏清除最为关键，当前有关病毒清除的研究报道还较少。病毒衣壳蛋白组成的衣壳是病毒基因组的重要保护屏障，对于病毒粒子的稳定性至关重要。但将病毒衣壳蛋白作为抗病毒物质的作用靶标还远远未被认识和开发，对病毒衣壳蛋白进行有效破坏的物质有望成功开发为理想的病毒治疗剂。
从自然界中寻找对病毒衣壳蛋白有破坏作用的天然活性物质是筛选获得病毒治疗药物的重要途径。植物是天然抗病毒活性物质的重要来源，已发现不少植物源物质具有抗植物病毒、动物病毒和人类病毒，但它们对病毒衣壳蛋白的直接降解作用还没有被发现。棉酚是大量存在于棉花的根、茎、叶和种子内的一种黄色多酚羟基双萘醛类化合物，在医学上已被广泛用作男性避孕药，也发现其能抗肿瘤、禽流感病毒等，在农业上棉酚能抗番茄黄化曲叶病毒病、南方黑条矮缩病等。棉酚是否对兔出血症病毒的衣壳蛋白具有降解作用？国内外还未见研究报道。本发明研究棉酚对兔出血症病毒衣壳蛋白的降解活性，以期获得一种兔病毒性出血症的治疗药剂，用于高效安全治疗该病，保障兔产业的健康发展。
三、发明内容
1、发明目的
提供一种理想的动物病毒衣壳蛋白降解方法，能安全降解兔出血症病毒衣壳蛋白，为该病毒病的治疗提供新方法。
2、技术方案
本发明为一种动物病毒衣壳蛋白的降解方法，其特征在于利用棉酚降解兔出血症病毒衣壳蛋白。
3、有益效果
本发明的方法与现有技术相比，产生以下有益效果：(1)与常规的动物病毒病以预防为主相比，本发明通过直接降解动物病毒衣壳蛋白来清除病毒，防控思路新且针对性强；(2)本发明利用有着广泛来源并已作为人类服用中药的棉酚，可切实提高动物病毒病的无公害控制水平。
四、具体实施方式
本发明的实施例是采用室内测定的方法。
测定方法如下：
1、病毒衣壳蛋白的原核表达
采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法，设计全长拼接引物，合成兔出血症病毒衣壳蛋白基因，连入载体pCzn1；获得的重组质粒pCzn1-衣壳蛋白基因转入TOP10克隆菌株和Arctic-ExpressTM表达菌株。使用IPTG诱导表达目的蛋白，Ni柱亲和纯化获得目的蛋白。
2、棉酚降解病毒衣壳蛋白
将98％醋酸棉酚溶解于N’N-二甲基甲酰胺中配成106mg/L母液，加至225mg/L 兔出血症病毒衣壳蛋白中，使醋酸棉酚的终浓度为100mg/L，以不含棉酚但含有与 100mg/L棉酚蛋白液中相同量N’N-二甲基甲酰胺的蛋白液作对照，37℃水浴中放置 20min，处理后蛋白经聚丙烯酰胺凝胺电泳后染色，拍照。
实施效果：
研究发现，225mg/L兔出血症病毒衣壳蛋白经100mg/L棉酚处理后，较未经棉酚处理比，其蛋白电泳条带明显变弱，表明醋酸棉酚对病毒衣壳蛋白有降解作用(图1)。
附图说明：
图1兔出血症病毒衣壳蛋白经棉酚处理后的SDS-PAGE电泳图。
Claims (1)
1.一种动物病毒衣壳蛋白的降解方法，其特征在于利用棉酚降解兔出血症病毒衣壳蛋白的方法。
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