CN108883056A - 用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的制剂、制造方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于药学领域，并且涉及用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的外用制剂。所要求保护的制剂提供了药物活性成分、特别是硫酸葡糖胺或其他葡糖胺盐，以及额外成分向受影响的关节的优异(与现有的类似物相比)的透皮递送。还提出了生产所述制剂的方法及其治疗用途。通过临床试验结果证实了所提出的制剂的功效。

Description

用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元 件的制剂、制造方法和用途

技术领域

本发明属于药学领域。更具体地，其涉及用于治疗外周关节(peripheral joint)、脊柱关节(spinal joint)和/或结缔组织的细胞外基质元件的疾病的表面制剂。

背景技术

葡糖胺(2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖)，并且特别是硫酸葡糖胺氯化钾，是内源性糖胺聚糖合成的特异性底物和刺激物。其属于氨基糖类并且是糖胺聚糖和进一步的蛋白聚糖的通用前体和构建单元(building block)，其进而成为生物体结缔组织(筋膜、韧带、肌腱、软骨、关节、关节囊和椎间盘)的细胞外基质的成分。

葡糖胺促进外周关节和脊柱关节(包括椎间盘)的软骨表面的恢复，并防止其侵蚀。它还恢复在关节疾病晚期期间从软骨下方侵蚀的骨组织，增加软骨组织的弹性和回弹性及其对机械应力的抗性，增加关节活动幅度，改善滑液质量并改善微循环，改善关节组织的向性并减少水肿。

此外，葡糖胺具有抗炎和镇痛特性。其减少了对非甾体抗炎药(nonsteroidalanti-inflammatory drug，NSAID)的需求，允许减少NSAID剂量或完全消除NSAID治疗。其抑制超氧化物自由基的形成和破坏软骨组织的酶(胶原酶和磷脂酶)的产生。

葡糖胺已被证明是骨和结缔组织代谢紊乱的预防和治疗中的有效软骨保护剂(chondroprotector)，特别是在胶原和软骨基质中，所述骨和结缔组织代谢紊乱引起炎性和退行性变化[1]。内源性葡糖胺(其是滑液中糖胺聚糖和蛋白聚糖的特异性底物和结构单元)的浓度对退行性疾病的发展和进程有很大的影响。在缺乏内源性葡糖胺的情况下，葡糖胺制剂补充血浆和滑液中的葡糖胺，从而减缓甚至逆转软骨侵蚀。

葡糖胺制剂广泛地表现为含有葡糖胺盐酸盐或硫酸葡糖胺的经口、注射和外用剂型，旨在作为100mg至1500mg的单剂量施用。

基于葡糖胺的制剂常常包含额外成分二甲基硫醚(DMS；其另一名称为甲磺酰基甲烷(MSM))和抗坏血酸，其对生物体具有积极的治疗作用。更具体地，DMS具有镇痛和抗炎作用。此外，其促进羟基自由基的失活，改善炎症部位的代谢过程并减缓周围神经元中的伤害性冲动。DMS拮抗组胺、缓激肽和前列腺素E1的血管作用。

抗坏血酸具有显著的抗氧化和抗血小板特性，抑制前列腺素以及炎症和变态反应的其他介质的产生，并且参与氧化还原过程、糖代谢、血液凝固和组织再生的调节。

现有技术公开了用于治疗关节疾病的药剂，其包含葡糖胺盐、DMS、软膏基质和非甾体抗炎药(专利RU 2259204 C1，2005年8月27日授权；专利EA 007597 B1，2006年12月29日授权)。

现有技术公开了用于治疗关节疾病的药剂，其包含包括在可接受的软膏基质中的葡糖胺盐、硫酸软骨素盐和DMS(2006年3月20日授权的专利RU 2271812 C1)。

现有技术公开了用于护理外周关节和脊柱的药剂，其包含硫酸软骨素、硫酸葡糖胺、乙酰葡糖胺和几种软膏基质变体的混合物(2009年12月20日授权的专利RU 2376011)。

现有技术公开了用于治疗关节疾病的药物组合物，其包含硫酸软骨素、葡糖胺盐、MSM、曲克芦丁、N-甲基-2-吡咯烷酮和软膏基质(2011年1月10日授权的专利RU 2408380)。

现有技术公开了用于治疗关节和肌肉疼痛的组合物，其由辣椒素类(capsaicinoid)、葡糖胺或其盐和软膏基质组成(2004年2月10日授权的专利US 6,689,399)。

现有技术公开了用于治疗类风湿性关节炎的组合物，其包含在不存在镇痛剂的情况下治疗有效量的硫酸软骨素、N-乙酰基D-葡糖胺和透明质酸(2008年1月3日公布的专利申请US20080003258)。

现有技术公开了透皮关节疼痛治疗组合物，其包含0.1％至15％的硫酸葡糖胺氯化钠和由选自以下组的一种或更多种物质组成的透皮组合物：鲸蜡醇、硬脂醇、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、豆蔻酸异丙酯、卵磷脂、丁基化羟基甲苯、二甲基硅油、尿素、山梨酸钾、氢氧化钠、硬脂酸聚烃氧40酯、EDTA二钠和水(2008年5月1日公布的专利申请US20080102107)。

然而，所有现有的基于葡糖胺的制剂均具有缺点，其降低了在实践中使用它们的益处。限制经口葡糖胺制剂在实践中的使用的原因是需要使用高葡糖胺浓度和长期经口施用以提供必需的生物利用度，这可能导致胃肠道的显著刺激和与其有关的不良副作用。

包含软骨素和葡糖胺的现有的外用剂型(乳膏剂、软膏剂、乳剂、凝胶剂)不具有通过皮肤和组织将活性成分和赋形剂成分递送至受影响区域周围的滑膜的有效机制。因此，尽管软骨素和葡糖胺具有潜在的高效力，但经典的表面药剂的治疗效果远小于经口形式。

提供最大的生物利用度的注射用葡糖胺制剂受到特有的施用方法(其不是对于所有患者可接受的)以及需要具有受过训练的卫生保健专业人员来施用它们的限制。

所有以上列出的用于透皮递送的制剂缺乏用于药物活性剂，特别是用于葡糖胺及其盐的物理性结构化的透皮载体。上述成分(其分子量在179.2(葡糖胺)与456.4(硫酸葡糖胺)之间)穿过皮肤导致递送相当少量的活性剂。向制剂中引入提高皮肤渗透性的赋形剂(例如，DMS)仅略微增加了上述药物活性剂的生物利用度。还应当注意，最常被宣称为促进皮肤渗透性提高的成分的DMS可能具有不利影响，这导致许多禁忌症。例如，在严重心血管功能不全、动脉粥样硬化、肾或肝病、卒中、妊娠、昏迷、心绞痛、母乳喂养、青光眼和白内障的情况下，DMS是忌用的。DMS可以增加其他药物的不利影响。根据限制，9岁以下的儿童和老年人应谨慎使用DMS。

专利申请US20050232980(2005年10月20日公开)公开了用于透皮递送葡糖胺和硫酸软骨素的混悬剂形式的组合物，其包含0.01％至20％的葡糖胺；0.01％至20％的硫酸软骨素；0.01％至10％的樟脑；0.01％的薄荷醇；0.01％至20％的抗炎剂；以及卵磷脂有机凝胶、MSM、苄基醇、苯甲酸、或其组合形式的透皮载体(将单独的或与所提及的其他化学成分混合的即用型卵磷脂有机凝胶与上述药物活性和辅助成分混合)。所述卵磷脂有机凝胶的胶束具有已被证实的容易穿透皮肤的能力，并且在理论上它们可积极地影响所讨论的药物活性成分的生物利用度。然而，卵磷脂有机凝胶存在于三组分体系中，所述三组分体系在相当于十分之几和百分之几的重量百分比的非常窄的水浓度范围内包含卵磷脂、非极性有机溶剂和水[3]。因此，卵磷脂有机凝胶运输药学上大量的水溶性成分(例如葡糖胺及其盐的能力)是非常有限的。

因此，需要向受影响的关节区域提供药物活性成分和辅助成分的更有效的透皮递送的表面药剂。

发明内容

在根据本发明提出的用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的制剂中，使用了将药物活性成分和辅助成分透皮递送至组织的全新方法-即，基于胶束和/或脂质体结构的透皮递送系统，其包含至少含有以下成分的聚集和沉淀稳定的分散体系：

60％至80％以重量计的水，

1.0％至6.0％以重量计的甘油，

0.7％至4％以重量计的丁二醇，

至多12.1％以重量计的C8脂肪醇，

至多3.5％以重量计的C16脂肪醇，

至多4.2％以重量计的C21脂肪醇，

至多2.0％以重量计的C15-C17脂肪酸的酯，

至多1.4％以重量计的聚硅氧烷，

至多1.4重量％以重量计的C2聚乙二醇，

至多0.98重量％以重量计的C20聚乙二醇。

由至少一组或两组在流体动力学直径/尺寸方面不同的结构组成的分散体系提供优异的透皮递送，其中第一组由包含被脂质层包围/与脂质层缔合的活性和辅助成分的尺寸为0.1nm至100nm的胶束纳米囊组成，以及第二组包含尺寸为200nm至8000nm的胶束和/或脂质体结构。

所提出的递送系统以与肌内注射提供的相当且比片剂或常规软膏剂提供的高数倍的效率提供葡糖胺递送至靶细胞。此外，在麻醉效率方面，根据本发明的制剂以与市售的非甾体抗炎药(NSAID)相同的水平或甚至比市售的非甾体抗炎药(NSAID)更好地起作用。在麻醉效率和受影响关节的活动性的恢复以及减少或消除NSAID的所需剂量方面，根据本发明的透皮制剂相当于或甚至优于用于注射的已知的基于葡糖胺的药剂。

表面施用根据本发明的活性剂防止了胃肠道酶对活性组分的降解并提供了显著更大的治疗效果。

所提出的制剂结合了对抗骨关节炎的两个原理：快速抗炎和麻醉效果；以及受影响组织的稳定恢复和软骨的强化，其特征在于延长的治疗后效果。此外，所提出的用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的制剂在长期使用期间是安全的并且很少具有(如果有的话)副作用。

本发明的技术结果是通过显著提高受影响部位周围的血浆和滑液中的药物活性成分和辅助成分的生物利用度来提高用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的表面药剂的药理学功效。

与现有的制剂相比，由于将药物活性成分和赋形剂更有效地透皮递送至受影响的关节，特别是透皮递送硫酸葡糖胺和其他葡糖胺盐，因此所提出的药物制剂基本上具有更明显的治疗和麻醉效果。

附图说明

图1.制剂A的样品中胶束/脂质体的数量(相对体积)按尺寸的分布。

图2.在动物的经剃刮的皮肤上施用制剂A之后，大鼠血浆中的葡糖胺浓度(μg/mL)随时间(小时)的曲线。

图3.2组中治疗期间随时间的总WOMAC评分(VAS)。

图4.2组中治疗期间随时间的总WOMAC功能不全评分(VAS)。

图5.2组中治疗期间的平均每周NSAID(布洛芬)需求。

具体实施方式

在整个说明书中使用的用于表示成分的量的表述“％以重量计”意指所提及的制剂中的所述成分的重量与所述制剂的总重量的百分比。

根据本发明，用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的制剂利用将极性药物活性成分(特别是葡糖胺)和赋形剂(例如DMS和/或抗坏血酸)透皮递送至受影响器官周围的真皮和组织的微毛细管血管循环的全新方法。更具体地，除了一种或更多种药物活性成分之外，所公开的制剂还包含基于胶束和脂质体结构的用于透皮递送系统并且包含至少含有以下成分的聚集和沉淀稳定的分散体系：

60％至80％以重量计的水，

1.0％至6.0％以重量计的甘油，

0.7％至4％以重量计的丁二醇，

至多12.1％以重量计的C8脂肪醇，

至多3.5％以重量计的C16脂肪醇，

至多4.2％以重量计的C21脂肪醇，

至多2.0％以重量计的C15-C17脂肪酸的酯，

至多1.4％以重量计的聚硅氧烷，

至多1.4％以重量计的C2聚乙二醇，

至多0.98％以重量计的C20聚乙二醇。

分散在制剂中的胶束和脂质体结构可形成至少两个在流体动力学直径/尺寸方面不同的组，其中结构的数量(相对体积)与其特征尺寸的分布类似于具有最大值的高斯曲线。

更具体地，所述结构的第一组由尺寸为0.1nm至100nm，特别是15nm至80nm的胶束纳米囊组成，其中至少90％结构的流体动力学直径/尺寸为15nm至100nm，并且颗粒数量(相对体积)的最大分布为25nm至50nm；各胶束被类似于角质形成细胞膜的人工脂质包衣包围并且包含活性成分和赋形剂/与活性成分和赋形剂缔合。

第二组由尺寸为200nm至8000nm，特别是500nm至7000nm的胶束和/或脂质体结构组成，其中至少90％结构的流体动力学直径/尺寸可为500nm至7000nm，并且颗粒数量(相对体积)的最大分布可为1500nm至5000nm；该组结构还包含活性成分和赋形剂/与活性成分和赋形剂缔合。

由于它们的特定组成和尺寸，第一组结构的纳米囊能够容易地在细胞间隙中行进，而不使组织细胞变形或损坏组织细胞。当将制剂按摩到皮肤中时，胶束以有效且无害的方式穿过毛孔和真皮细胞的细胞间隙以及微毛细管床血管进入血流。胶束的人造生物膜在接触血浆时降解并释放葡糖胺和赋形剂，其从血流扩散到受影响关节的滑液中，或者首先进入受影响关节周围的组织中，然后进入受影响关节本身中。

当将制剂按摩到皮肤中时，属于第二组的较大结构以有效且无害的方式部分穿过细胞间隙，但主要穿过毛孔和真皮通道，并且将葡糖胺和辅助成分释放到微毛细管床血管中，其扩散到血流中，然后进入受影响关节的滑液中，或者首先进入受影响关节周围的组织中，然后进入受影响关节本身中。

如旨在确定所公开的制剂的最佳组成的研究所表明的，正是如上所指示的列表的成分以指示的相对量形成胶束和脂质体结构，提供其高渗透能力以及聚集和沉淀稳定性，所述结构进而提供了药物活性成分的优异的生物利用度以及药物在至少三年的时间内的储存稳定性。

此外，通过实施在此所述的要求保护的制剂的制造方法，所指示的分散体系的组成提供了所述结构，特别是胶束和/或脂质体。此外，仅制剂和制造方法的描述中指示的包含在分散体系中的成分的量提供了所提出的制剂的聚集和沉淀稳定性与其高渗透能力的组合，条件是遵循本文中所述的生产技术。

根据本发明，上述研究表明，上述透皮递送系统可以用于递送例如任何葡糖胺盐，例如葡糖胺盐酸盐、硫酸葡糖胺、用氯化钠或氯化钾稳定的硫酸葡糖胺。然而，已经发现使用硫酸葡糖胺氯化钾提供血浆和滑液中葡糖胺的最大生物利用度。

在本发明的一个实施方案中，所提出的制剂用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件。

在一个实施方案中，所述“一种或更多种药物活性成分”是葡糖胺盐，例如硫酸葡糖胺氯化钾，其中葡糖胺盐，特别是硫酸葡糖胺氯化钾以4％至14％以重量计的量存在于制剂中。在一个实施方案中，所述量的范围为以重量计7.0％至9.5％。在另一个实施方案中，所述量为以重量计8.00％。

在另一个实施方案中，一种或更多种药物活性成分以有效量存在于所提出的制剂中。在本发明的一些实施方案中，所公开的制剂还可包含其他药物活性成分，例如，肝素、酮洛芬、利多卡因和其他化合物。

除了一种或更多种药物活性成分之外，所提出的制剂还至少包含以下额外成分：

60％至80％以重量计的水，

1.0％至6.0％以重量计的甘油，

0.7％至4％以重量计的丁二醇，

至多12.1％以重量计的C8脂肪醇，

至多3.5％以重量计的C16脂肪醇，

至多4.2％以重量计的C21脂肪醇，

至多2.0％以重量计的C15-C17脂肪酸的酯，

至多1.4％以重量计的聚硅氧烷，

至多1.4％以重量计的C2聚乙二醇，

至多0.98％以重量计的C20聚乙二醇。

在一个实施方案中，水以67％至75％以重量计的量存在于所提出的制剂中；在一个实施方案中，水以71.69％以重量计的量存在。

在另一个实施方案中，甘油以2.0％至4.0％以重量计的量存在于制剂中；在一个实施方案中，甘油以3.0％以重量计的量存在。

在另一个实施方案中，丁二醇以1.0％至3.0％以重量计的量存在于制剂中；在一个实施方案中，丁二醇以2.0％以重量计的量存在。

在一个实施方案中，组分C8脂肪醇是辛酸/癸酸甘油三酯。在另一个实施方案中，C8脂肪醇(例如，辛酸/癸酸甘油三酯)以1.7％至12.1％以重量计的量存在于制剂中，在另一个实施方案中，C8脂肪醇以3.0％至7.0％以重量计的量存在于制剂中；以及在又一个实施方案中，C8脂肪醇以5.0％以重量计的量存在于制剂中。

在一个实施方案中，C16脂肪醇的代表为鲸蜡醇。在另一个实施方案中，C16脂肪醇(例如，鲸蜡醇)以0.3％至3.5％以重量计的量存在于制剂中；在另一个实施方案中，C16脂肪醇以1.5％至3.0％以重量计的量存在于制剂中；以及在又一个实施方案中，C16脂肪醇以2.3％以重量计的量存在于制剂中。

在本发明的一个实施方案中，C21脂肪醇的代表为硬脂酸甘油酯。在另一个实施方案中，C21脂肪醇(例如，硬脂酸甘油酯)以1.0％至4.2％以重量计的量存在于制剂中；在另一个实施方案中，C21脂肪醇以3.0％至4.0％以重量计的量存在于制剂中；以及在又一个实施方案中，C21脂肪醇以3.8％以重量计的量存在于制剂中。

在一个实施方案中，C15-C17脂肪酸的酯的代表为辛酸十六烷基酯。在另一个实施方案中，C15-C17脂肪酸的酯(例如，辛酸十六烷基酯)以0.3％至2.0％以重量计的量存在于制剂中；在另一个实施方案中，C15-C17脂肪酸的酯以0.7％至1.3％以重量计的量存在于制剂中；以及在又一个实施方案中，C15-C17脂肪酸的酯以1.0％以重量计的量存在于制剂中。

在另一个实施方案中，聚硅氧烷以0.3％至1.4％以重量计的量存在于制剂中；在另一个实施方案中，聚硅氧烷以0.3％至1.0％以重量计的量存在于制剂中。在另外的实施方案中，聚硅氧烷不存在于制剂中。

在另一个实施方案中，C2聚乙二醇是硬脂醇聚醚(steareth)-2。在另一个实施方案中，C2聚乙二醇(例如，硬脂醇聚醚-2)以0.3％至1.4％以重量计的量存在于制剂中；在另一个实施方案中，C2聚乙二醇以0.7％至1.3％以重量计的量存在于制剂中；以及在又一个实施方案中，C2聚乙二醇以1.0％以重量计的量存在于制剂中。

在本发明的一个实施方案中，C20聚乙二醇是硬脂醇聚醚-20。在另一个实施方案中，C20聚乙二醇(例如，硬脂醇聚醚-20)以0.22％至0.98％以重量计的量存在于制剂中；在另一个实施方案中，C20聚乙二醇以0.50％至0.80％以重量计的量存在于制剂中；以及在又一个实施方案中，C20聚乙二醇以0.66％以重量计的量存在于制剂中。

在一个实施方案中，一种或更多种额外成分包括0.05％至0.3％以重量计的量的氨基多羧酸(该酸属于配体家族并且充当调节产物稳定性的螯合剂)，0.12％至1.0％以重量计的量的羟乙基纤维素和/或0.005％至0.05％以重量计的硅胶，其充当允许调节产品的黏度的流变改性剂。

在另一个实施方案中，一种或更多种额外成分包括0.5％至5％以重量计的量的DMS。

在另一个实施方案中，一种或更多种额外成分包括0.05％至0.3％以重量计的量的抗坏血酸。

在另一个实施方案中，一种或更多种额外成分包括防腐剂和/或香料。

在另一个实施方案中，一种或更多种额外成分包括0.05％至0.5％以重量计的量的辣椒素类，特别是辣椒素，0.2％至1.8％以重量计的量的樟脑，0.00005％至0.005％以重量计的量的姜提取物，0.02％至1.5％以重量计的量的薄荷油和/或薄荷醇，其在施用于皮肤时具有“变暖”或部分麻醉效果，从而赋予患者舒适感。特别地，0.02％至1.5％以重量计的量的所述薄荷油和/或薄荷醇可以作为香料用于制剂中。

在另一个实施方案中，一种或更多种额外成分包括标准防腐剂，特别是0.01％至0.3％的量，在一个实施方案中，0.2％以重量计的量的对羟基苯甲酸甲酯和/或0.01％至0.07％的量，在一个实施方案中，0.05％以重量计的量的甲基异噻唑啉酮。为了制备“不含防腐剂”的制剂，可使用0.02％至2.5％以重量计的量的白柳树皮提取物与丙二醇的混合物(SAP)来代替常规的防腐剂。

在另一个实施方案中，一种或更多种额外成分包括0.1％至0.9％以重量计的量的缓冲溶液，特别是三(羟甲基)氨基甲烷(HOCH₂)3CNH₂(在下文称为“Tris”)。

在另一个实施方案中，一种额外成分包括0.005％至0.05％以重量计的量的硅胶，其可充当在分散体系中形成的胶束和脂质体结构的成分。

在一个实施方案中，所提出的制剂具有以下组成：

为了制备用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的所提出的制剂，使用包括以下步骤的生产方法：

(i)向第一混合罐中添加：60％至80％以重量计的量的高纯水，随后添加1％至6％以重量计的量的甘油和0.7％至4％以重量计的量的丁二醇；在持续搅拌下将混合物加热至65℃至70℃；

(ii)向第二混合罐中添加：0.3％至3.5％以重量计的量的一种或更多种C16脂肪醇，1％至4.2％以重量计的量的一种或更多种C21脂肪醇，1.7％至12.1％以重量计的量的一种或更多种C8脂肪醇，0.3％至2.0％以重量计的量的一种或更多种C15-C17脂肪酸的酯，0.3％至1.4％以重量计的量的一种或更多种聚硅氧烷，0.3％至1.4％以重量计的量的一种或更多种聚乙二醇C2，以及0.22％至0.98％以重量计的量的一种或更多种聚乙二醇C20；在持续搅拌下将混合物加热至65℃至70℃；

(iii)在5分钟期间在持续搅拌下将(ii)的混合物添加到第一混合罐中，随后使混合物冷却至50℃或更低并在持续搅拌下添加一种或更多种药物活性剂，随后使混合物冷却至30℃并在持续搅拌下添加防腐剂和香料，

由此生产用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的制剂。

在所述方法中，一种或更多种药物活性剂包括葡糖胺盐，特别是硫酸葡糖胺或硫酸葡糖胺氯化钾。

同样在所述方法中，还可在加热之前在步骤(i)中向第一混合罐中添加0.05％至0.3％的量的氨基多羧酸和/或0.12％至1.0％以重量计的量的羟乙基纤维素和/或0.005％至0.05％以重量计的量的硅胶，以产生所述成分的描述中的上述效果。

同样在一个实施方案中，在所述方法的步骤(iii)中，添加一种或更多种药物活性剂，随后进一步添加0.5％至5％以重量计的量的DMS和/或0.05％至0.3％以重量计的量的抗坏血酸，以产生所述成分的描述中的上述效果。

同样在另一个实施方案中，在所述方法的步骤(ii)中，将第二混合罐中的混合物加热至65℃至70℃，随后进一步添加0.05％至0.5％以重量计的量的辣椒素类，特别是辣椒素，以产生所述成分的描述中的上述效果。

在另一个实施方案中，在所述方法的步骤(iii)中，添加一种或更多种药物活性成分，随后添加0.2％至1.8％以重量计的量的樟脑和/或0.00005％至0.005％以重量计的量的姜提取物，以产生所述成分的描述中的上述效果。

在另一个实施方案中，在所述方法的步骤(iii)中，添加0.01％至0.3％以重量计的量的对羟基苯甲酸甲酯和/或0.01％至0.05％以重量计的量的甲基异噻唑啉酮作为防腐剂，或者添加0.02％至2.5％以重量计的量的白柳树皮提取物与丙二醇的混合物(SAP)作为标准防腐剂的替代物。

同样在一些实施方案中，在所述方法的步骤(iii)中，添加一种或更多种药物活性剂并冷却至30℃，随后添加0.02％至1.5％以重量计的量的薄荷油和/或薄荷醇，二者均是香料并赋予患者舒适感。

在所述方法的一些实施方案的步骤(i)中，在添加水之后，向第一混合罐中添加0.1％至0.9％以重量计的量的三(羟甲基)氨基甲烷作为缓冲溶液，以保持长期储存期间制剂的pH值。

在一个实施方案中，公开了一种治疗方法，其中将含有活性剂的制剂以长度为至少2至3厘米且直径为至少0.5厘米的条带施用到受影响关节或脊骨部位处的皮肤上并按摩到皮肤中直至完全吸收，每天至少两次并且每天至多5至6次，其中所述制剂在至少三周期间使用，如果需要可以重复该过程，从而实现治疗。在一个优选的实施方案中，所述方法是治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的方法。

用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的所提出的制剂具有许多有益的药物特性。这些中主要的两个是：1)与注射葡糖胺提供的相当的关节软骨和结缔组织的其他细胞外基质元件的有效恢复，以及2)与市售的NSAID相当并且有时甚至优于市售的NSAID的明显的麻醉效果。

所要求保护的制剂的有益的药物特性还包括有效预防使用NSAID后的创伤或相关疾病后的关节和韧带的骨关节炎和炎性疾病，刺激关节内液体产生并改善其组成，以及维持关节内液体的最佳黏度。

所指出的有益的药物特性对使用所提出的制剂的以下适应症提供改善：

外周关节和脊柱关节的骨关节炎、骨软骨病；

关节的炎性疾病，例如关节炎，包括类风湿性多发性关节炎；

运动系统元件、外周关节和脊柱关节的创伤(挫伤、破裂、扭伤)；

预防创伤后关节和韧带的骨关节病和炎性疾病；

保护关节免受NSAID和激素制剂(吲哚美辛、orthofen、双氯芬酸、泼尼松龙)对软骨组织的副作用；

肌肉疼痛(肌痛(mialgia)、肌炎)。

实施例

对于在下面的实施例2-6中描述的实验研究，已经制备了要求保护的发明所涵盖的示例性制剂(在下文中称为制剂A)(参见实施例1)。

实施例1.制剂A的制备

制剂A的组成如下：

为了制造100kg的制剂A，采取以下步骤。

(i)向第一混合罐中添加71.69kg的量的高纯水，随后添加3.0kg的量的甘油和2kg的量的丁二醇；在60至70rpm的持续搅拌下将混合物加热至70℃。

(ii)然后向第二混合罐中添加2.3kg的量的鲸蜡醇，3.8kg的量的硬脂酸甘油酯，5.0kg的量的辛酸/癸酸甘油三酯，1.0kg的量的辛酸十六烷基酯，1.0kg的量的聚二甲基硅氧烷，1.0kg的量的硬脂醇聚醚-2和0.66kg的量的硬脂醇聚醚-20；在60至70rpm的持续搅拌下将混合物加热至70℃。

(iii)在5分钟期间在60至70rpm的持续搅拌下将(ii)的混合物添加到第一混合罐中，然后使混合物冷却至50℃或更低，并在60至70rpm的持续搅拌下添加8.0kg的量的硫酸葡糖胺氯化钾，随后将混合物进一步冷却至30℃，并在60至70rpm的持续搅拌下添加0.05kg的量的甲基异噻唑啉酮、0.2kg的量的对羟基苯甲酸甲酯和0.3kg的量的薄荷油。

实施例2.制剂A的结构研究

已经使用具有激光辐射源的Zetasizer Nano ZS装置(Malvern，英国)在532nm的波长处通过动态光散射(光子相关光谱法)确定在分散体系中形成的结构的上述特征(结构的流体动力学直径/尺寸及其按流体动力学直径/尺寸的数量)(图1)。

在图1中，自动生成的报告显示出测试样品中的颗粒占据的相对体积对颗粒尺寸的依赖性。例如，颗粒占据的测试样品总体积的17.9％对应于流体动力学直径为15nm至80nm的颗粒，并且平均流体动力学直径为43.62nm，而测试样品总体积的82.1％被对应于流体动力学直径为0.5微米至5微米的颗粒占据，并且该子集的平均流体动力学直径为2005nm。

实施例3.在使用制剂A时葡糖胺生物利用度的研究

为了获得关于皮肤施用后葡糖胺生物利用度的客观信息的目的，已经进行了对大鼠的研究。

已经在Sprague-Dawley大鼠中进行了比较经口和肌内施用水性硫酸葡糖胺溶液和表面施用制剂A乳膏剂的情况下的葡糖胺的相对生物利用度和渗透率的研究。

通过测定大鼠中的血浆葡糖胺浓度获得了以下呈现的结果。根据主要研究方案进行5组大鼠(其中每组中9只大鼠)的研究。一组表面施用制剂A乳膏剂，而另一组经口施用葡糖胺溶液，以及其他三组-其通过注射不同的葡糖胺浓度。

基于大鼠血浆中的葡糖胺的药代动力学曲线的分析，已经确定，相对于肌内注射含有400mg/kg剂量的4％硫酸葡糖胺溶液，每天3次，持续一周的时间，使用提供400mg/kg动物体重的剂量的制剂A乳膏剂，每天3次，持续一周导致葡糖胺的61.6％的生物利用度。在施用乳膏剂后的4小时内葡糖胺通过动物皮肤递送到血浆中的平均速率为26.9μg/cm²·小时。在4小时的时间期间在单次施用后通过皮肤递送到血浆中的葡糖胺的相对量是剂量的4.12％。

获得的实验数据和文献中存在的实验数据的比较分析以及基于此的计算表明，在如实验中施用的制剂A治疗的过程中，发炎关节的滑液中的葡糖胺的估计的平均浓度为0.7μg/ml至1.5μg/ml，其是人关节滑液中的内源性葡糖胺浓度(通常为0.02μg/ml至0.07μg/m1)的10至75倍高。所述值与通过注射施用葡糖胺获得的值相当，并且是经口形式的葡糖胺情况下获得的值的多至2倍高。

实施例4.制剂A稳定性的研究

在三种不同条件下随时间测试制剂A的稳定性：

(i)在25±2℃和60±5％的相对湿度下孵育；

(ii)在-15℃下孵育，随后解冻；

(iii)在40±2℃和75±5％的相对湿度下孵育。

将制剂A密封在各自含有50g药物的容器中。对于三种条件中的每一种使用三个不同的容器。在3年时间内在以下时间点处监测许多物理和化学参数：

第一年：每三个月；

第二年：每六个月；

第三年：一次。

结果示于下面。

1号容器 制造日期：2012年3月27日

条件：25±2℃的温度和60±5％的相对湿度

2号容器 制造日期：2012年3月28日

条件：25±2℃的温度和60±5％的相对湿度

3号容器 制造日期：2012年3月28日

条件：25±2℃的温度和60±5％的相对湿度

4号容器 制造日期：2012年3月27日

条件：在-15℃下孵育，随后解冻

5号容器 制造日期：2012年3月28日

条件：在-15℃下孵育，随后解冻

6号容器 制造日期：2012年3月28日

条件：在-15℃下孵育，随后解冻

7号容器 制造日期：2012年3月27日

条件：在40±2℃和75±5％的相对湿度下孵育

8号容器 制造日期：2012年3月28日

条件：在40±2℃和75±5％的相对湿度下孵育

9号容器 制造日期：2012年3月28日

条件：在40±2℃和75±5％的相对湿度下孵育

结果表明，尽管pH和黏度降低，但产品仍然是均匀的乳膏剂并且在至少三年内有效。

实施例5.制例A和的比较

为了证实所要求保护的制剂的功效，已经进行了比较随机临床试验以在80名诊断为膝关节I-III期骨关节病的志愿者中测试制剂A与 (外用凝胶，NOVARTIS Consumer Health GmbH，瑞士)的效率、安全性和耐受性。

在80名患者中，68名是女性，12名是男性，年龄在44岁至80岁之间。由于筛选和随机化，所有患者均符合入选标准。

将患者随机分为两组：实验组(制剂A)和对照组( )。所有患者均按照方案完成了研究。两组在年龄和性别、身高和体重、收缩压和舒张压、关节综合征临床评分(西安大略和麦克马斯特大学关节炎指数(the Western Ontario andMcMaster Universities Arthritis Index)或“WOMAC”，其用于在步行和触诊期间使用视觉模拟量表(visual analog scale，VAS)在目标关节中进行疼痛评估)方面在统计上没有差异。未建立两组之间在膝关节病的放射学阶段方面的统计上的显著差异。也未揭示两组之间在大多数实验室指标方面的可靠的差异。基于前述内容，两组可被认为是可比较的。

在研究过程中未观察到血压、脉搏、心电图或实验室指标的临床上显著的偏差。在整个研究中，检测到11个轻度不良事件。检测到与施用的药物有关的两个不良事件(每组中一个)。两者均是轻度的，不需要治疗并且以恢复结束。在实验组和对照组中分别由34名和30名患者达到主要终点，其对应于“WOMAC疼痛”“减少大于20％”。此外，在治疗结束后持续的效果：在分别访视4(在从治疗开始第56天)、32和24名患者时，仍达到终点。两组之间的结果的比较未揭示实验组与对照组之间的显著差异。因此，在上述标准方面，制剂A的治疗效率与的治疗效率在统计上没有差异(由进行该研究的医师推断)。

根据患者和临床医师二者，在治疗结束后4周，实验组中阳性结果的数量是统计上显著的。换言之，发现葡糖胺的透皮递送系统与用于减轻疼痛的相当，并且在治疗效果的持续时间方面优于

实施例6.制剂A与硫酸葡糖胺注射形式“Dona”的比较

为了进一步证实用于本发明的葡糖胺的透皮递送系统的功效，本发明的发明人已经在诊断为膝关节病的患者中在治疗膝关节的骨关节炎时进行了制剂A(外用乳膏剂)和用于肌内施用“Dona”的注射形式的硫酸葡糖胺(各2ml的注射用安瓿，1ml中含有200mg的硫酸葡糖胺氯化钾)的治疗效率的比较研究。

在研究之前，评估了40名患有经确认的膝关节骨关节炎(膝关节病)(按照R.Altman标准，1995)和患有明显疼痛综合征的患者。患者年龄从48岁至75岁(平均年龄56.7±8.2岁)；38名(95％)为女性，2名(5％)为男性。疾病的持续时间从2年到15年变化(平均持续时间为6.7±2.9年)。按照Kellegren&Lawrence分级，在30名(75％)患者中，膝关节病的放射照相等级被确定为II，以及在10名(25％)患者中，膝关节病的放射照相等级被确定为III。在评估时，所有40名(100％)患者均接受NSAID治疗。

将患者分为在主要参数方面相当的两组(各20人)。第一组表面接受制剂A，其中将乳膏剂的长度为2至3厘米且直径为约0.5厘米的条带施用于受影响的关节区域，一日三次，持续一个月。治疗所针对的关节是在研究开始时产生最大疼痛的关节。第二组患者在一个月期间每天一次每周三次肌内接受“Dona”。根据目标膝关节中关节综合征指数的动态来评估治疗效率。评估以下因素：使用VAS的在静止和运动时关节中的疼痛强度，总指数和单独的指数的动态：通过WOMAC评分的关节的疼痛、约束和功能不全、对NSAID(布洛芬)的需求。在第一次评估时和在一个月期间每周一次评估上述临床参数。

作为上述治疗的结果，在表征疼痛综合征的严重程度降低的指数的情况下，观察到了比较WOMAC指数的大多数动态。在治疗过程中，观察到与在平坦的表面上行走、上楼梯、关节触诊有关的疼痛的显著(p＜0.05)减少(参见表1，图1、2)。未观察到两组之间指标的统计上显著的差异。然而，在用制剂A治疗的情况下观察到由触诊引起的疼痛感觉的更显著(p＝0.06)的减少，这或许可以通过其直接表面施用于疼痛部位来解释。

在这两组中，观察到身体活动的可靠显著(p＜0.05)的改善，这表现为在第一组和第二组中患者步行15米距离所需的时间分别从29.6±12.18秒减少至18.0±6.1秒和从30.7±12.21秒减少至18.25±5.23秒(参见表1)。

通常，在研究即将结束时在制剂A患者中观察到的总WOMAC指数的降低(57％)与在参照“Dona”组中观察到的(大于56％)在统计上没有差异(参见图3、4)。

在治疗过程中，每组显示出对NSAID的平均需求明显降低大于15倍(参见表1、图5)。更详细地，在接受制剂A的患者中，15名(75％)停止接受布洛芬，而5名(25％)的剂量减小7-10倍。在接受“Dona”的组中，在治疗1个月之后，16名(80％)患者不再需要布洛芬，而4名患者的原始剂量减小3-5倍。

表1.在制剂A(表面)和“Dona”(肌内)的情况下的关节综合征定量指标

本文中所述的研究的主要结论是所提出的制剂在麻醉效果和受影响关节的活动性的恢复以及减少在治疗过程中对NSAID的平均每周需求方面均类似于并且在一些情况下优于市售的基于硫酸葡糖胺的注射用制剂。

所引用的文献

1.Altman，R.D.Clinical Pharmacology2(4)，359-371(2009)[俄语].

2.Handbook on Drugs，Vidal：http：//www.vidal.ru/drugs/molecule/322.

3.Scartazzini R.，Luisi P.L.，Organogels from Lecithins//J.Phys.Chem.92，829-833(1988).

Claims (41)

1.制剂，其包含有效量的一种或更多种药物活性剂和至少以下成分：

60％至80％以重量计的水，

1.0％至6.0％以重量计的甘油，

0.7％至4％以重量计的丁二醇，

至多12.1％以重量计的C8脂肪醇，

至多3.5％以重量计的C16脂肪醇，

至多4.2％以重量计的C21脂肪醇，

至多2.0％以重量计的C15-C17脂肪酸的酯，

至多1.4％以重量计的聚硅氧烷，

至多1.4％以重量计的C2聚乙二醇，

至多0.98％以重量计的C20聚乙二醇。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件。

3.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂中的成分形成聚集和沉淀稳定的分散体系，其包含胶束和/或脂质体结构。

4.根据权利要求3所述的制剂，其中所述结构形成至少一个组，其中至少90％的所述结构的流体动力学直径/尺寸为15nm至100nm，并且按尺寸的颗粒数量的最大分布为25nm至50nm。

5.根据权利要求3所述的制剂，其中所述结构形成至少两个组，其中

在第一组中，至少90％所述结构的流体动力学直径/尺寸为15nm至100nm，并且按尺寸的颗粒数量的最大分布为25nm至50nm，以及

在第二组中，至少90％所述结构的流体动力学直径/尺寸为500nm至7000nm，并且按尺寸的颗粒数量的最大分布为1500nm至5000nm。

6.根据权利要求1所述的制剂，其中所述一种或更多种药物活性成分是葡糖胺盐。

7.根据权利要求6所述的制剂，其中所述葡糖胺盐是硫酸葡糖胺。

8.根据权利要求6所述的制剂，其中所述葡糖胺盐是硫酸葡糖胺氯化钾。

9.根据权利要求8所述的制剂，其中硫酸葡糖胺氯化钾以4％至14％以重量计的量存在于所述制剂中。

10.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.05％至0.3％以重量计的量的氨基多羧酸。

11.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.12％至1.0％以重量计的量的羟乙基纤维素。

12.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.5％至5％以重量计的量的二甲基硫醚(DMS)。

13.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.05％至0.3％以重量计的量的抗坏血酸。

14.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.05％至0.5％以重量计的量的辣椒素类，特别是辣椒素。

15.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.2％至1.8％以重量计的量的樟脑。

16.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.005％至0.05％以重量计的量的硅胶。

17.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.00005％至0.005％以重量计的量的姜提取物。

18.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂还包含0.01％至0.3％以重量计的量的对羟基苯甲酸甲酯和/或0.01％至0.05％以重量计的量的甲基异噻唑啉酮。

19.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂还包含0.02％至2.5％以重量计的量的白柳树皮提取物与丙二醇的混合物(SAP)。

20.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂还包含0.02％至1.5％以重量计的量的香料、薄荷油和/或薄荷醇。

21.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.005％至0.05％以重量计的量的硅胶。

22.根据权利要求1所述的制剂，其还包含0.1％至0.9％以重量计的量的三(羟甲基)氨基甲烷(HOCH₂)3CNH₂(Tris)。

23.根据权利要求1所述的制剂，其包含：

24.生产用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的制剂的方法，其包括：

(i)向第一混合罐中添加60％至80％以重量计的量的高纯水，添加1％至6％以重量计的量的甘油；添加0.7％至4％以重量计的量的丁二醇；在持续搅拌下将混合物加热至65℃至70℃；

(ii)向第二混合罐中添加：0.3％至3.5％以重量计的量的一种或更多种C16脂肪醇，1％至4.2％以重量计的量的一种或更多种C21脂肪醇，1.7％至12.1％以重量计的量的一种或更多种C8脂肪醇，0.3％至2.0％以重量计的量的一种或更多种C15-C17脂肪酸的酯，0.3％至1.4％以重量计的量的一种或更多种聚硅氧烷，0.3％至1.4％以重量计的量的一种或更多种C2聚乙二醇，以及0.22％至0.98％以重量计的量的一种或更多种C20聚乙二醇；并且在持续搅拌下将混合物加热至65℃至70℃；

(iii)在5分钟期间，在持续搅拌下将(ii)的所述混合物添加到所述第一混合罐中；使所述混合物冷却至50℃或更低；在持续搅拌下添加一种或更多种药物活性剂；使所述混合物冷却至30℃；并在持续搅拌下添加防腐剂和香料，

由此生产用于治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的制剂。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述一种或更多种药物活性剂是葡糖胺盐。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述葡糖胺盐是硫酸葡糖胺。

27.根据权利要求25所述的方法，其中所述葡糖胺盐是硫酸葡糖胺氯化钾。

28.根据权利要求24所述的方法，其还包括在步骤(i)在所述加热之前向所述第一混合罐中添加0.05％至0.3％以重量计的量的氨基多羧酸。

29.根据权利要求24所述的方法，其还包括在步骤(i)在所述加热之前向所述第一混合罐中添加0.12％至1.0％以重量计的量的羟乙基纤维素。

30.根据权利要求24所述的方法，其还包括在步骤(iii)在所述添加一种或更多种药物活性剂之后添加0.5％至5％以重量计的量的DMS。

31.根据权利要求24所述的方法，其还包括在步骤(iii)在所述添加一种或更多种药物活性剂之后添加0.05％至0.3％以重量计的量的抗坏血酸。

32.根据权利要求24所述的方法，其中在步骤(ii)在达到65℃的温度之后，向所述第二混合罐中添加0.05％至0.5％以重量计的量的辣椒素。

33.根据权利要求24所述的方法，其中在步骤(i)在加热之前，向所述第一混合罐中添加0.005％至0.05％以重量计的量的硅胶。

34.根据权利要求24所述的方法，其中在步骤(ii)在所述冷却至50℃之后，向所述第二混合罐中添加0.00005％至0.005％以重量计的量的姜提取物。

35.根据权利要求24所述的方法，其中在步骤(iii)添加0.01％至0.3％以重量计的量的对羟基苯甲酸甲酯和/或0.01％至0.05％以重量计的量的甲基异噻唑啉酮。

36.根据权利要求24所述的方法，其中在步骤(iii)添加0.02％至2.5％以重量计的量的白柳树皮提取物与丙二醇的混合物(SAP)。

37.根据权利要求24所述的方法，其中在步骤(iii)添加0.02％至1.5％以重量计的量的薄荷油和/或薄荷醇。

38.根据权利要求24所述的方法，其中在步骤(i)在向所述第一混合罐中添加水之后，添加0.1％至0.9％以重量计的量的三(羟甲基)氨基甲烷。

39.制剂，其通过根据权利要求24所述的方法生产。

40.治疗方法，其中将根据权利要求1或39所述的制剂以长度为至少2至3厘米且宽度为至少0.5厘米的条带施用到受影响关节或脊骨部位处的皮肤上，并按摩到所述皮肤中直至完全吸收，每天至少两次并且每天至多5至6次，其中所述制剂每天使用持续至少三周的时间并重复直至实现治疗。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述治疗方法是治疗外周关节、脊柱关节和/或结缔组织的细胞外基质元件的方法。