CN108815197A - 红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为cd4+t细胞增殖促进剂的用途 - Google Patents
红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为cd4+t细胞增殖促进剂的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108815197A CN108815197A CN201710304838.3A CN201710304838A CN108815197A CN 108815197 A CN108815197 A CN 108815197A CN 201710304838 A CN201710304838 A CN 201710304838A CN 108815197 A CN108815197 A CN 108815197A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- wall skeleton
- nocardia rubra
- cell wall
- purposes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 60
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 title claims abstract description 36
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 title claims abstract description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 35
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims abstract description 19
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 230000003915 cell function Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 241000187563 Rhodococcus ruber Species 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 7
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 3
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 3
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- MSFSPUZXLOGKHJ-PGYHGBPZSA-N 2-amino-3-O-[(R)-1-carboxyethyl]-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical group OC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](N)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O MSFSPUZXLOGKHJ-PGYHGBPZSA-N 0.000 description 1
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073243 Nocardia cell wall skeleton Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000002737 cell proliferation kit Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical class O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical class OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/72—Undefined extracts from bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为CD4+T细胞增殖促进剂、CD4+T细胞表面功能分子CD25、CD69表达促进剂或CD4+T细胞TNF‑α、IL‑5、IL‑2表达促进剂的用途。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为CD4+T细胞增殖促进剂的用途。
背景技术
诺卡氏菌为多形态，有诺卡氏菌属球状、杆状、丝状，菌体大小0.6×(3～4)微米，无运动性，有些菌种呈弱抗酸性，专性需氧，营养要求一般。在普通琼脂平板上培养3天后有可见菌落，7～10天后菌落凸起，气生菌丝形成后，表面呈绒毛状。不同种的菌落有黄、橙、红或这些色素的混合色。DNA中的G+C克分子含量为60～72％。大多为腐生菌，存在于土壤中。红色诺卡氏菌(Nocardiarubra)是其中的一种放线菌。红色诺卡氏菌菌体经发酵、细胞破碎、蛋白酶降解后可制得红色诺卡氏菌细胞壁骨架(以下简称Nr-CWS或N-CWS)。
发明内容
本发明发现红色诺卡氏菌细胞壁骨架能够促进CD4+T细胞增殖、促进CD4+T细胞表面功能分子CD25和CD69的表达、以及促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5和IL-2的表达，进而完成了本发明。
根据本发明的一个方面，本发明提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD4+T细胞增殖的药物中的用途。根据本发明，所述药物能够通过促进CD4+T细胞增殖治疗与CD4+T细胞相关的疾病，包括但不限于：例如病毒等的病原微生物引起的机体局部组织感染或病变，以及自身免疫性疾病。
根据本发明的另一个方面，本发明提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD4+T细胞增殖促进剂的用途。根据本发明，所述“非治疗目的”例如在体外促进CD4+T细胞增殖。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种体外促进CD4+T细胞增殖的方法，其中，给予体外培养的CD4+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。
根据本发明的另一个方面，本发明提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD4+T细胞表面功能分子CD25或CD69表达的药物中的用途。根据本发明，所述药物能够通过促进CD4+T细胞表面功能分子CD25或CD69表达治疗与CD4+T细胞相关的疾病，包括但不限于：例如病毒等的病原微生物引起的机体局部组织感染或病变，以及自身免疫性疾病。
根据本发明的另一个方面，本发明提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD4+T细胞表面功能分子CD25或CD69表达促进剂的用途。根据本发明，所述“非治疗目的”例如在体外促进CD4+T细胞表面功能分子CD25或CD69表达。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种体外促进CD4+T细胞表面功能分子CD25或CD69表达的方法，其中，给予体外培养的CD4+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。
根据本发明的另一个方面，本发明提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5或IL-2表达的药物中的用途。根据本发明，所述药物能够通过促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5或IL-2表达治疗与CD4+T细胞相关的疾病，包括但不限于：例如病毒等的病原微生物引起的机体局部组织感染或病变，以及自身免疫性疾病。
根据本发明的另一个方面，本发明提供红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD4+T细胞TNF-α、IL-5或IL-2表达促进剂的用途。根据本发明，所述“非治疗目的”例如在体外促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5或IL-2表达。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种体外促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5或IL-2表达的方法，其中，给予体外培养的CD4+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。
本领域技术人员可以理解，红色诺卡氏菌细胞壁骨架可以商购或者按照本领域已知的各种方法制备得到。优选，红色诺卡氏菌为Nr-8206(其于2002年2月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.0712)。例如，可以通过将红色诺卡氏菌发酵后去除DNA、DNA、RNA、蛋白质、类脂，制备得到红色诺卡氏菌细胞壁骨架，其主要有效成分为胞壁酸、多聚糖和粘肽，分子量约为2-20KD。
本发明通过实验首次证实了红色诺卡氏菌细胞壁骨架能够促进CD4+T细胞增殖、促进CD4+T细胞表面功能分子CD25和CD69的表达、以及促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5和IL-2的表达，从而使得红色诺卡氏菌细胞壁骨架能够在体内用于治疗与CD4+T细胞有关的疾病，而且能够在体外用于促进CD4+T细胞增殖、促进CD4+T细胞表面功能分子CD25和CD69的表达、以及促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5和IL-2的表达。
附图说明
图1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架促进CD4+T细胞增殖：图1A为24小时，图1B为48小时
图2.红色诺卡氏菌细胞壁骨架促进CD4+T细胞表面功能分子CD25和CD69的表达：图2A1为24小时流式图；图2A2为24小时CD25和CD69表达对比；图2B1为48小时流式图；图2B2为48小时CD25和CD69表达对比
图3.红色诺卡氏菌细胞壁骨架促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5和IL-2的表达：图3A为24小时TNF-α、IL-5和IL-2表达对比；图3B为48小时TNF-α、IL-5和IL-2表达对比
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外，应理解，在阅读了本发明所记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本发明所限定的范围。
实施例1.Nr-CWS促进CD4+T细胞增殖
1.小鼠CD4+T细胞的分离纯化、培养
(1)无菌分离小鼠(清洁级C57BL/6小鼠，6-8周龄，雌性，体重18-20克，购于上海斯莱克实验动物有限公司)脾脏，制备单细胞悬液；1000rpm/min离心10min后弃去上清得细胞沉淀；所得脾脏细胞沉淀用2ml红细胞裂解液悬浮，冰上裂解红细胞5min，加入10ml冷PBS缓冲液，1000rpm/min离心5min后弃去上清得细胞沉淀；重悬于2ml磁珠分选缓冲液中，调整细胞浓度为1×108/ml。
(2)按照StemcellEasySepTMmouse CD4+T cell isolation Kit磁珠分离使用说明书操作步骤，无菌分选CD4+T细胞并用流式检测分选纯度约为96.3％。
(3)用添加10％热灭活胎牛血清(FBS)的完全RPMI 1640培养基(2mM L-谷氨酰胺、50μMβ-巯基乙醇、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、100μg/ml卡那霉素)悬浮新鲜分离的CD4+T细胞，按1×106/ml细胞密度接种96孔板(预先包被anti-CD3抗体)，每孔100μl，并且在培养基里添加anti-CD28抗体；在37℃、5％CO2的培养箱中培养。
2.Nr-CWS促进CD4+T细胞增殖
CD4+T细胞按1×106/ml细胞密度接种96孔板，每孔100μl。在37℃、5％CO2的培养箱中培养2小时后，实验组加入用培养液溶解的浓度分别为1.875μg/ml、3.75μg/ml、7.5μg/ml、15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml的Nr-CWS(辽宁格瑞仕特生物制药有限公司，下同)，每孔100μl，每个浓度设3个复孔。对照组加入RPMI 1640培养液，每孔100μl，设3个复孔。在37℃、5％CO2的培养箱中培养24小时和48小时。在每个检测时间点的最后4小时，每孔加入20μl MTS/PMS混合液(96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay kit)。终止培养后，在酶联免疫检测仪OD490nm处测定各孔的吸光度，参比波长600nm。
结果(见图1，其中图1A为24小时，图1B为48小时)显示，Nr-CWS在浓度为7.5μg/ml、15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml时，处理CD4+T细胞24小时后，CD4+T细胞增殖与对照组相比显著升高(*p<0.05或**p<0.01)；Nr-CWS在浓度为1.875μg/ml、3.75μg/ml、7.5μg/ml、15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml时，处理CD4+T细胞48小时后，CD4+T细胞增殖与对照组相比显著升高(#p<0.001)；与浓度为7.5μg/ml时比较，Nr-CWS在浓度为15μg/ml时，处理CD4+T细胞48小时后，CD4+T细胞增殖显著升高(△p<0.001)。
实施例2.Nr-CWS促进CD4+T细胞表面功能分子CD25和CD69的表达
CD4+T细胞按1×106/ml细胞密度接种96孔板，每孔100μl。在37℃、5％CO2的培养箱中培养2小时后，实验组加入用培养液溶解的浓度为30μg/ml的Nr-CWS，每孔100μl，设3个复孔。对照组加入RPMI 1640培养液，每孔100μl，设3个复孔。未染色对照组与对照组作同样处理，但不染色。在37℃、5％CO2的培养箱中培养24小时和48小时。收集各组CD4+T细胞，分别标记anti-CD4、anti-CD25和anti-CD69流式荧光抗体，然后洗去未结合染料，制备500μl的细胞悬液。采用流式检测CD4+T细胞表面功能分子CD25和CD69的表达情况。其中，采用BDFACSDiva软件收集至少10000个细胞。
结果(见图2，其中图2A1和图2A2为24小时，图2B1和图2B2为48小时)显示，Nr-CWS处理CD4+T细胞24小时后，CD4+T细胞表面功能分子CD25和CD69表达与对照组相比均无明显差异(p＞0.05)；处理48小时后，CD4+T细胞表面功能分子CD25和CD69表达与对照组相比均显著升高(*p<0.05)。
实施例3.Nr-CWS促进CD4+T细胞TNF-α、IL-2、IL-5的表达
CD4+T细胞按1×106/ml细胞密度接种96孔板，每孔100μl。在37℃、5％CO2的培养箱中培养2小时后，实验组加入用培养液溶解的浓度为15μg/ml的Nr-CWS，每孔100μl，设3个复孔。对照组加入RPMI 1640培养液，每孔100μl，设3个复孔。在37℃、5％CO2的培养箱中培养24小时和48小时。收集Nr-CWS组及对照组细胞培养上清液，采用BioLegend公司的LEGENDplexTM Mouse Th Cytokine Panel Kit检测细胞培养上清液内的细胞因子TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5和IL-10。
结果(见图3，其中图3A为24小时，图3B为48小时)显示，Nr-CWS处理CD4+T细胞24小时后，与对照组相比，TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10表达与对照组相比均无明显差异(p＞0.05)，而IL-5表达与对照组相比有明显差异(*p<0.05)；处理48小时后，与对照组相比，TNF-α、IL-2表达水平显著升高(*p<0.05)，IL-4、IL-5、IL-10表达与对照组相比均无明显差异(p＞0.05)。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD4+T细胞增殖的药物中的用途。
2.红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD4+T细胞增殖促进剂的用途。
3.一种体外促进CD4+T细胞增殖的方法，其中，给予体外培养的CD4+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。
4.红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD4+T细胞表面功能分子CD25或CD69表达的药物中的用途。
5.红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD4+T细胞表面功能分子CD25或CD69表达促进剂的用途。
6.一种体外促进CD4+T细胞表面功能分子CD25或CD69表达的方法，其中，给予体外培养的CD4+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。
7.红色诺卡氏菌细胞壁骨架在制备用于促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5或IL-2表达的药物中的用途。
8.红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为非治疗目的的CD4+T细胞TNF-α、IL-5或IL-2表达促进剂的用途。
9.一种体外促进CD4+T细胞TNF-α、IL-5或IL-2表达的方法，其中，给予体外培养的CD4+T细胞红色诺卡氏菌细胞壁骨架。优选，红色诺卡氏菌细胞壁骨架的浓度为1-60μg/ml，进一步优选2-30μg/ml，更优选3-15μg/ml。
10.如权利要求1-9中任一项所述的用途或方法，其中，红色诺卡氏菌为Nr-8206。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710304838.3A CN108815197A (zh) | 2017-05-03 | 2017-05-03 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为cd4+t细胞增殖促进剂的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710304838.3A CN108815197A (zh) | 2017-05-03 | 2017-05-03 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为cd4+t细胞增殖促进剂的用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108815197A true CN108815197A (zh) | 2018-11-16 |
Family
ID=64154029
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710304838.3A Withdrawn CN108815197A (zh) | 2017-05-03 | 2017-05-03 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为cd4+t细胞增殖促进剂的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108815197A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020147472A1 (zh) * | 2019-01-15 | 2020-07-23 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 赤红球菌产品及其制药用途 |
| WO2020182181A1 (zh) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架在治疗外阴白色病变中的用途 |
| WO2021147899A1 (zh) * | 2020-01-21 | 2021-07-29 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 赤红球菌细胞壁骨架在再生医学中的用途 |
| CN114402064A (zh) * | 2020-01-21 | 2022-04-26 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架在再生医学中的用途 |
| CN115025128A (zh) * | 2022-06-24 | 2022-09-09 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架在治疗宫颈病变中的应用 |
-
2017
- 2017-05-03 CN CN201710304838.3A patent/CN108815197A/zh not_active Withdrawn
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020147472A1 (zh) * | 2019-01-15 | 2020-07-23 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 赤红球菌产品及其制药用途 |
| US12102654B2 (en) | 2019-01-15 | 2024-10-01 | Liaoning Greatest Bio-Pharmaceutical Co., Ltd. | Product derived from Rhodococcus ruber, and pharmaceutical use thereof |
| WO2020182181A1 (zh) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架在治疗外阴白色病变中的用途 |
| CN112040962A (zh) * | 2019-03-14 | 2020-12-04 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架在治疗外阴白色病变中的用途 |
| WO2021147899A1 (zh) * | 2020-01-21 | 2021-07-29 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 赤红球菌细胞壁骨架在再生医学中的用途 |
| CN114402064A (zh) * | 2020-01-21 | 2022-04-26 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架在再生医学中的用途 |
| US12280076B2 (en) | 2020-01-21 | 2025-04-22 | Liaoning Greatest Bio-Pharmaceutical Co., Ltd. | Use of Rhodococcus ruber cell wall skeleton in regenerative medicine |
| CN115025128A (zh) * | 2022-06-24 | 2022-09-09 | 辽宁格瑞仕特生物制药有限公司 | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架在治疗宫颈病变中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108815197A (zh) | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为cd4+t细胞增殖促进剂的用途 | |
| Messaoudi et al. | Diversity of actinobacteria isolated from date palms rhizosphere and saline environments: Isolation, identification and biological activity evaluation | |
| Zhou et al. | The predatory myxobacterium Citreicoccus inhibens gen. nov. sp. nov. showed antifungal activity and bacteriolytic property against phytopathogens | |
| Mane et al. | Adherence to buccal epithelial cells, enzymatic and hemolytic activities of Candida isolates from HIV-infected individuals | |
| Sreenadh et al. | In vitro evaluation of Weizmannia coagulans strain LMG S-31876 isolated from fermented rice for potential probiotic properties, safety assessment and technological properties | |
| Devi et al. | Screening of suitable culture media for growth, cultural and morphological characters of Pycnidia forming fungi | |
| Tabares et al. | Anti-protease and immunomodulatory activities of bacteria associated with Caribbean sponges | |
| López-López et al. | Isolation and characterization of Trichoderma spp. for antagonistic activity against avocado (Persea americana Mill) fruit pathogens | |
| Rodríguez-Díaz et al. | The metagenomic composition and effects of fecal-microbe-derived extracellular vesicles on intestinal permeability depend on the patient’s disease | |
| CN108795859A (zh) | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为自然杀伤细胞增殖促进剂的用途 | |
| JP7358002B2 (ja) | バチルス属細菌、インターロイキン－２２産生誘導剤、皮膚バリア機能増強剤 | |
| CN108795860A (zh) | 红色诺卡氏菌细胞壁骨架作为cd8+t细胞增殖促进剂的用途 | |
| Hatem et al. | Inhibition of the growth and development of potato early blight pathogen (Alternaria solani) by combining Penicillium chrysogenum VKM F-4876D with some strobilurin-, triazole-, and phenylpyrrole-based fungicides | |
| Heydari et al. | Coniochaeta fungus benefits from its intracellular bacteria to form biofilm and defend against other fungi | |
| CN111019858A (zh) | 一种抑制细菌生物膜形成的饲用地衣芽孢杆菌及其应用 | |
| JP2005503171A (ja) | 自然環境からの微生物の培養と単離およびそれからの医薬の創薬 | |
| CN104630111A (zh) | 一株解淀粉芽胞杆菌及其活性代谢产物的分离方法与应用 | |
| Schnyder et al. | Investigating the biocontrol potential of the natural microbiota of the apple blossom | |
| Fellag et al. | Culturomics discloses anti-tubercular enterococci exclusive of pulmonary tuberculosis: a preliminary report | |
| Becerril-Espinosa et al. | Dry Stamping Coral Powder: An Effective Method for Isolating Coral Symbiotic Actinobacteria | |
| Meene et al. | A novel antimicrobial metabolite produced by Paenibacillus apiarius isolated from brackish water of Lake Balkhash in Kazakhstan | |
| CN108004171B (zh) | 一种降低α-葡萄糖苷酶活性的空间植物乳杆菌SS18-5及其应用 | |
| WO2014038822A1 (ko) | 페실로마이세스 바리오티 바라이어티 브른네오러스 ｇｐｐ１１０１ｂ 균주 및 이를 이용한 제제 | |
| Rozas et al. | Isolation and cultivation of fungal strains from in vitro cell cultures of two marine sponges (Porifera: Halichondrida and Haplosclerida) | |
| CN102424802A (zh) | 一种短小芽孢杆菌和菌株培养方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20181116 |
|
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |