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CN108794567A - 一种蛋白质电泳分离纯化方法及其装置 - Google Patents

一种蛋白质电泳分离纯化方法及其装置 Download PDF

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CN108794567A
CN108794567A CN201810690200.2A CN201810690200A CN108794567A CN 108794567 A CN108794567 A CN 108794567A CN 201810690200 A CN201810690200 A CN 201810690200A CN 108794567 A CN108794567 A CN 108794567A
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China
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separation
separated
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electrophoresis
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CN201810690200.2A
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English (en)
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滕世超
张宝献
何英福
王猛
郭心怡
李长明
张建璀
刘余江
孟丽丽
张学成
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Hualan Bio-Engineering Co Ltd
HUALAN BIO-ENGINEERING CHONGQING Co Ltd
Original Assignee
Hualan Bio-Engineering Co Ltd
HUALAN BIO-ENGINEERING CHONGQING Co Ltd
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    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K1/00General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/24Extraction; Separation; Purification by electrochemical means
    • C07K1/26Electrophoresis

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  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
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  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种蛋白质电泳分离纯化方法,使用电泳分离纯化装置将待分离液按照下列所述的步骤进行分离:将待分离液的PH值调整为待分离组分的等电点使待分离组分不带电,待分离液的离子强度调整为0.05‑0.1,其温度控制在0‑6℃;将泳分离纯化装置内的电泳电源电压控制在50‑300V之间,电流为25‑30mA,待分离液进入电泳分离纯化装置的上样进液狭缝的线性流速度为0.7‑1cm/min;待分离液在电泳分离纯化装置中下移,在电泳分离纯化装置下部的等动力收集槽对分离出的各个不同的蛋白组分进行收集;本发明与现有技术相比,实现了蛋白质的批量分离,且分离效果佳。

Description

一种蛋白质电泳分离纯化方法及其装置
技术领域
本发明涉及蛋白质分离技术领域,具体涉及一种蛋白质电泳分离纯化方法及其装置。
背景技术
生物大分子蛋白质、多肽类目前的分离纯化方法多为沉淀、离子交换、亲和层析等技术,由于方法的原因决定了分离提纯精度不够高,要想获得高纯度达到药用级别的目标物,通常需要多步才能实现。多步的分离纯化往往会带来活性分子的不同程度损伤,目标物的步步损失,最终造成回收率不高,效益降低。
生物分子的电泳技术,系利用生物分子在溶液环境中其自身表面集团因电离而带有不同性质和不同数量的电荷,将其置入电场中会产生不同方向和速率的位移,从而达到分离分开的效果。目前此技术仅有一维平面电泳,仅能用于检测分析领域,不能用于大批量生产。
发明内容
针对现有技术中所存在的不足,本发明的目的在于提供一种蛋白质电泳分离纯化方法,以解决现有技术中,不能够对蛋白质混合物进行批量分离的问题。
为实现上述目的,本发明采用了如下的技术方案:一种蛋白质电泳分离纯化方法,使用电泳分离纯化装置将待分离液按照下列所述的步骤进行分离:
步骤一:将待分离液的PH值调整为待分离组分的等电点使待分离组分不带电,待分离液的离子强度调整为0.05-0.1,其温度控制在0-6℃;
步骤二:将泳分离纯化装置内的电泳电源电压控制在50-300V之间,电流为25-30mA,待分离液进入电泳分离纯化装置的上样进液狭缝的线性流速度为0.7-1cm/min;
步骤三:待分离液在电泳分离纯化装置中下移,在电泳分离纯化装置下部的等动力收集槽对分离出的各个不同的蛋白组分进行收集。
相比于现有技术,本发明具有如下有益效果:
在电泳分离纯化装置内根据待分离组分的性质,通过对待分离液的进液速度、PH值、离子强度和温度等参数进行控制,使待分离组分不带电,在泳分离纯化装置内不偏移,自上而下直线通过,达到一次性对待分离组分进行分离的目的,提高了待分离组分的分离效率和分离效果,实现了量产的目的。
针对上述所要解决的技术问题,结合本电泳分离纯化方法提供了一种电泳分离纯化装置,包括箱体,所述箱体包括通过正极箱体壁和负极箱体壁形成的呈″八″字形的侧壁和设置在其底部的等动力收集槽,正极箱体壁和负极箱体的内壁上均分别对应为正极侧和负极侧,通过正极侧和负极侧在箱体内形成水平方向上电场,″八″字形的侧壁顶部开有进液狭缝;所述等动力收集槽包括对称设置的左半槽和右半槽,左半槽包括倾斜设置的隔离板和多个分割块,多个分割块等距设置在隔离板与正极箱体壁或负极箱体壁之间,且左半槽中的隔离板和右半槽的的隔离板呈″八″字形设置,两隔离板之间、相邻的分割块之间、隔离板与其相邻的分隔板之间以及正极箱体壁或负极箱体壁与其相邻的分隔板之间均设置有排液管,两隔离板之间的排液管的中心线与进液狭缝的中心线在同一直线上。
工作原理:将待分离液按照待分离组分的性质调整好,并调节好本电泳分离纯化装置各个性能参数之后,将待分离液从进液狭缝中加入,通过待分离液的重力使其自上而下进入箱体中,形成竖直方向上的位移;通过正极箱体壁和负极箱体壁在箱体内形成水平方向上电场,在电荷力和阻力共同作用下形成位移,从而形成连续不同的分子区带,达到连续分离物料的作用;待分离组分因不带电从两隔离板之间的排液管排出,其他各个组分根据其性能从其他的排液管排出。
相比于现有技术,本发明具有如下有益效果:
1、通过箱体的结构设置,从上至下形成了逐渐扩展的方式,在电荷力和阻力共同作用下形成位移,在箱体内形成连续不同的分子区带,达到连续分离待分离液的目的,同时使不同的分子物质在水平方向有足够的分离空间,保证不同分子间的分离度;
2、上样时采用进液狭缝,使待分离组分具有一定的集中度,在水平方向上具有足够的分离度,提高了待分离组分的分离纯度;
3、等动力收集槽的结构的设置,便于以逐渐扩散开的方式各个组分进行收集,使出液更集中,更有利于批量生产。
附图说明
图1为本发明一种电泳分离纯化装置的剖面图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细的说明:
说明书附图中的附图标记包括:箱体1、正极箱体壁101、负极箱体壁102、等动力收集槽2、进液狭缝3、隔离板4、分割块5、排液管6、降温冷媒流体夹层7、球形颗粒填料8。
本方案以人血浆为例,对人血浆中不同蛋白质进行分离,查询相关资料得出人血浆中各个蛋白质不同的等电点和分子量,如表1:
表1
实施例1
待分离组分为:IgG
一种蛋白质电泳分离纯化方法,使用电泳分离纯化装置将待分离液按照下列所述的步骤进行分离:
(1)调整融合后血浆的pH为7.3,离子强度0.05-0.10,控制温度在0-6℃;
(2)将泳分离纯化装置内的电泳电源电压控制在50-300v之间,电流为25-30mA,待分离液进入电泳分离纯化装置的上样进液狭缝的线性流速度为0.7-1cm/min;
(3)因不同蛋白表面带有不同的的电荷及分子大小受阻力不一样,在料液下移过程中,不同的蛋白质即会以不同的条带分开,IgG以不带电的状态下直线流出,XI因子带正电荷、其它蛋白带负电荷,分布在电泳分离纯化装置内的两侧流出,在电泳分离纯化装置下部的等动力收集槽进行收集,即可得到纯度较高的不同蛋白组分,如白蛋白、凝血因子VIII、凝血因子IX、免疫球蛋白、纤维蛋白原等。
将收集分离出的IgG进行透析浓缩至所需浓度,加入保护剂作为辅料,配制成为药品。
实施例2
待分离组分为:IX因子
一种蛋白质电泳分离纯化方法,使用电泳分离纯化装置将待分离液按照下列所述的步骤进行分离:
(1)调整融合后血浆的pH为4.35,离子强度0.05-0.10,控制温度在0-6℃;
(2)将泳分离纯化装置内的电泳电源电压控制在50-300V之间,电流为25-30mA,待分离液进入电泳分离纯化装置的上样进液狭缝的线性流速度为0.7-1cm/min;
(3)IX因子以不带电的状态,在电泳分离纯化装置内中以直线轨迹以最快的速度被分离出,而其它带正/负电荷的组分分别在电泳分离纯化装置内的两侧被分离,在电泳分离纯化装置下部的等动力收集槽进行收集。
将收集分离出的IX因子进行透析浓缩至所需浓度,加入保护剂作为辅料,配制成为药品。
实施例3
待分离组分为:凝血因子VIII
一种蛋白质电泳分离纯化方法,使用电泳分离纯化装置将待分离液按照下列所述的步骤进行分离:
(1)调整融合后血浆的pH为7.2,离子强度0.05-0.10,控制温度在0-6℃;
(2)将泳分离纯化装置内的电泳电源电压控制在50-300V之间,电流为25-30mA,待分离液进入电泳分离纯化装置的上样进液狭缝的线性流速度为0.7-1cm/min;
(3)凝血因子VIII以不带电的状态,在电泳分离纯化装置内中以直线轨迹以最快的速度被分离出,而其它带正/负电荷的组分分别在电泳分离纯化装置内的两侧被分离,在电泳分离纯化装置下部的等动力收集槽进行收集。
将收集分离出的凝血因子VIII进行透析浓缩至所需浓度,加入保护剂作为辅料,配制成为药品。
参见图1:
本发明配合其方法使用的一种电泳分离纯化装置,包括箱体1,箱体1包括通过正极箱体壁101和负极箱体壁102形成的呈″八″字形的侧壁和设置在其底部的等动力收集槽2,″八″字形的侧壁顶部开有进液狭缝3;等动力收集槽2包括对称设置的左半槽和右半槽,左半槽包括倾斜设置的隔离板4和多个分割块5,多个分割块5等距设置在隔离板4与正极箱体壁101或负极箱体壁102之间,且左半槽中的隔离板4和右半槽的的隔离板4呈″八″字形设置,两隔离板4之间、相邻的分割块5之间、隔离板4与其相邻的分隔板之间以及正极箱体壁101或负极箱体壁102与其相邻的分隔板之间均设置有排液管6,每个排液管6上均设置有调节阀,两隔离板4之间的排液管6的中心线与进液狭缝3的中心线在同一直线上。
为了方便对待分离组分进行收集,两隔离板4顶部之间形成有呈倒″八″字形的集液口,集液口的上端口比进液狭缝3的出液口口径大;使不带电的待分离组分呈直线轨迹流入两隔离板4之间的集液口中,便于将待分离组分进行完全收集。
为了便于待分离液中的其他组分在等动力收集槽2内进行分离和导流,将分割块5的横截面均设计呈三角形,每个分割块5的底边均水平设置且在同一直线上,每个分割块5的两侧边均倾斜设置。
为了消除焦耳热对活性分子的影响,在正极箱体壁101、负极箱体壁102、隔离板4和分割块5内均设置有降温冷媒流体夹层7,通过降温冷媒流体夹层7对各个活性分子进行降温。箱体1内填充有球形颗粒填料8,球形颗粒填料8为无吸附、无内孔的凝胶状颗粒物,以限制分子的自由扩散,提高同种分子的集中度和和不同种分子的分离度。
为了提高分离提纯的效率,可以并联多个本电泳分离纯化装置同时进行分离工作。
使用时,将待分离液按照待分离组分的性质调整好,并调节好本电泳分离纯化装置各个性能参数之后,将待分离液从进液狭缝3中加入,通过待分离液的重力使其自上而下进入箱体1中,形成竖直方向上的位移;通过正极箱体壁101和负极箱体壁102在箱体1内形成水平方向上电场,使带有不同电荷的大分子物质在移动中相互分离开,且各个组分在电荷力和阻力共同作用下产生位移;带正电荷的分子向负极箱体壁102移动,带负电荷的分子向正极箱体壁101移动,不带电的分子则不移动,进而在箱体1内形成连续不同的分子区带;待分离液中的各个组分因其自身性质的特点,进入等动力收集槽2内的各个收集区,通过排液管6导入其他器皿进行收集,调节阀的设置根据不同成分的含量比例调整出液量,使被分离开的组分均匀分布。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (6)

1.一种蛋白质电泳分离纯化方法,其特征在于,使用电泳分离纯化装置将待分离液按照下列所述的步骤进行分离:
步骤一:将待分离液的PH值调整为待分离组分的等电点使待分离组分不带电,待分离液的离子强度调整为0.05-0.1,其温度控制在0-6℃;
步骤二:将泳分离纯化装置内的电泳电源电压控制在50-300V之间,电流为25-30mA,待分离液进入电泳分离纯化装置的上样进液狭缝的线性流速度为0.7-1cm/min;
步骤三:待分离液在电泳分离纯化装置中下移,在电泳分离纯化装置下部的等动力收集槽对分离出的各个不同的蛋白组分进行收集。
2.一种用于实现权利要求1中所述蛋白质电泳分离纯化方法的电泳分离纯化装置,其特征在于:包括箱体,所述箱体包括通过正极箱体壁和负极箱体壁形成的呈″人″字形的侧壁和设置在其底部的等动力收集槽,″人″字形的侧壁顶部开有进液狭缝;所述等动力收集槽包括对称设置的左半槽和右半槽,左半槽包括倾斜设置的隔离板和多个分割块,多个分割块等距设置在隔离板与正极箱体壁或负极箱体壁之间,且左半槽中的隔离板和右半槽的的隔离板呈″八″字形设置,两隔离板之间、相邻的分割块之间、隔离板与其相邻的分隔板之间以及正极箱体壁或负极箱体壁与其相邻的分隔板之间均设置有排液管,两隔离板之间的排液管的中心线与进液狭缝的中心线在同一直线上。
3.根据权利要求2所述的一种电泳分离纯化装置,其特征在于:所述两隔离板顶部之间形成有呈倒″八″字形的集液口,集液口的上端口比进液狭缝的出液口口径大。
4.根据权利要求2或3所述的一种电泳分离纯化装置,其特征在于:所述分割块的横截面均呈三角形,每个分割块的底边均水平设置且在同一直线上,每个分割块的两侧边均倾斜设置。
5.根据权利要求2所述的一种电泳分离纯化装置,其特征在于:所述正极箱体壁、负极箱体壁、隔离板和分割块内均设置有降温冷媒流体夹层。
6.根据权利要求2所述的一种电泳分离纯化装置,其特征在于:所述箱体内填充有球形颗粒填料。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111560063A (zh) * 2020-05-12 2020-08-21 蚌埠医学院 一种动物胰脏来源胰岛素原料药纯化装置及使用方法
RU214011U1 (ru) * 2022-03-28 2022-10-07 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр Тюменский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук Устройство для вертикального электрофореза проламинов с внешним охлаждающим контуром

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1127157A (zh) * 1995-01-20 1996-07-24 清华大学 制备型等电点电泳分离方法及设备
WO1998013689A1 (de) * 1996-09-28 1998-04-02 Fuhr Guenter Verfahren und vorrichtung zur isoelektrischen teilchentrennung
CN103217311A (zh) * 2013-03-26 2013-07-24 上海交通大学 生物复合物的分离与收集方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1127157A (zh) * 1995-01-20 1996-07-24 清华大学 制备型等电点电泳分离方法及设备
WO1998013689A1 (de) * 1996-09-28 1998-04-02 Fuhr Guenter Verfahren und vorrichtung zur isoelektrischen teilchentrennung
CN103217311A (zh) * 2013-03-26 2013-07-24 上海交通大学 生物复合物的分离与收集方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111560063A (zh) * 2020-05-12 2020-08-21 蚌埠医学院 一种动物胰脏来源胰岛素原料药纯化装置及使用方法
CN111560063B (zh) * 2020-05-12 2022-11-01 蚌埠医学院 一种动物胰脏来源胰岛素原料药纯化装置及使用方法
RU214011U1 (ru) * 2022-03-28 2022-10-07 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр Тюменский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук Устройство для вертикального электрофореза проламинов с внешним охлаждающим контуром

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