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CN108699036A - 化合物(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(1:1)柠檬酸盐 - Google Patents

化合物(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(1:1)柠檬酸盐 Download PDF

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CN108699036A
CN108699036A CN201780014325.7A CN201780014325A CN108699036A CN 108699036 A CN108699036 A CN 108699036A CN 201780014325 A CN201780014325 A CN 201780014325A CN 108699036 A CN108699036 A CN 108699036A
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Application number
CN201780014325.7A
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T.巴雷特
R.J.D.哈特利
S.J.F.麦克唐纳
P.萨克拉特瓦拉
S.Y.E.谢
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GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
Original Assignee
GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
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Abstract

本发明涉及化合物，其为(S)‑4‑((S)‑3‑氟‑3‑(2‑(5,6,7,8‑四氢‑1,8‑萘啶‑2‑基)乙基)吡咯烷‑1‑基)‑3‑(3‑(2‑甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(1:1)柠檬酸盐，包含该化合物的药物组合物，以及该化合物在治疗(包括在治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的疾病或病症，特别是特发性肺纤维化)中的用途。

Description

化合物(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5，6，7，8-四氢-1，8-萘啶-2- 基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸 (1:1)柠檬酸盐
发明领域
本发明涉及作为αvβ6整联蛋白拮抗剂的吡咯烷化合物，包含此类化合物的药物组合物，和它们在治疗中(尤其在治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的病症中)的用途，化合物在制备用于治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的病症的药物中的用途，和用于治疗人中的需要αvβ6整联蛋白的拮抗作用的病症的方法。
发明背景
整联蛋白超家族蛋白是由α和β亚基构成的异源二聚细胞表面受体。已经报道了至少18种α亚基和8种β亚基，其已经表明形成24种不同的α/β异源二聚体。每条链包含大细胞外结构域(对于β亚基，>640个氨基酸，对于α亚基，>940个氨基酸)，每条链具有约20个氨基酸的跨膜跨越区域，并且通常每条链具有30-50个氨基酸的短胞质尾。不同的整联蛋白已经显示参与繁多的细胞生物学，包括细胞粘附至细胞外基质，细胞-细胞相互作用，和对细胞迁移、增殖、分化和存活的影响(Barczyk等人,Cell and Tissue Research,2010,339,269)。
整联蛋白受体通过短蛋白-蛋白结合界面与结合蛋白相互作用。整联蛋白家族可以分为在此类配体中共享相似的结合识别基序的亚家族。主要的亚家族是RGD-整联蛋白，其识别在其蛋白序列内含有RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)基序的配体。在该亚家族中存在8种整联蛋白，即αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、αIIbβ3、α5β1、α8β1，其中命名法表明αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6和αvβ8共享共同的αv亚基和不同的β亚基，且αvβ1、α5β1和α8β1共享共同的β1亚基和不同的α亚基。β1亚基已经显示与11种不同的α亚基配对，其中只有上述列出的3种共同识别RGD肽基序(Humphries等,Journal of Cell Science,2006,119,3901)。
8种结合RGD的整联蛋白对不同的含有RGD的配体具有不同的结合亲和力和特异性。配体包括蛋白诸如纤连蛋白、玻连蛋白、骨桥蛋白和转化生长因子β1和β3(TGFβ1和TGFβ3)的潜在相关肽(LAP)。与TGFβ1和TGFβ3的LAP结合的整联蛋白已经显示在几个系统中能够激活TGFβ1和TGFβ3生物活性，和随后的TGFβ-驱动的生物学(Worthington等,Trends inBiochemical Sciences,2011,36,47)。这种配体的多样性，连同结合RGD的整联蛋白的表达模式，为疾病干预产生了多种机会。此类疾病包括纤维变性疾病(Margadant等人,EMBOreports,2010,11,97)、炎性病症、癌症(Desgrosellier等人,Nature Reviews Cancer,2010,10,9)、再狭窄和具有血管生成组分的其它疾病(Weis等人,ColdSpring.Harb.Perspect.Med.2011,1,a 006478)。
文献中已经公开了大量的αv整联蛋白拮抗剂(Goodman等人,Trends inPharmacological Sciences,2012,33,405)，包括抑制剂抗体、肽和小分子。对于抗体，这些包括泛-αv拮抗剂英妥木单抗和Abituzumab(Gras,Drugs of the Future,2015,40,97)，选择性αvβ3拮抗剂埃达珠单抗，和选择性αvβ6拮抗剂STX-100。西仑吉肽(Cilengitide)是抑制αvβ3和αvβ5两者的环状肽拮抗剂，且SB-267268是抑制αvβ3和αvβ5两者的化合物的实例(Wilkinson-Berka等人,Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,2006,47,1600)。化合物充当αv整联蛋白的不同组合的拮抗剂的发明使得能够产生且适合于特定疾病适应症的新药。
肺纤维化代表几种间质性肺病的终末期，包括特发性间质性肺炎，并且其特征在于细胞外基质在肺间质中的过度沉积。在特发性间质性肺炎中，特发性肺纤维化(IPF)代表最常见和最致命的病症，其在诊断后典型的存活时间为3至5年。IPF中的纤维化通常是进行性的，当前药理学干预是难治的，并且不可避免地导致由于功能性肺泡单位的闭塞引起的呼吸衰竭。IPF在美国和欧洲影响约50万人。
有体外实验、动物和IPF患者免疫组织化学数据支持上皮细胞限制性整联蛋白αvβ6在TGFβ1的活化中的关键作用。这种整联蛋白的表达在正常上皮组织中较低，并且在损伤的和发炎的上皮(包括IPF中的活化的上皮)中明显上调。因此，靶向这种整联蛋白降低了干扰更宽的TGFβ内稳态作用的理论可能性。已经显示通过抗体阻断对αvβ6整联蛋白的部分抑制可预防肺纤维化而不加重炎症(Horan GS等人,Partial inhibition of integrin αvβ6prevents pulmonary fibrosis without exacerbating inflammation.Am J RespirCrit CareMed 2008 177：56-65)。在肺纤维化之外，αvβ6也被认为是其他器官(包括肝和肾)的纤维化病的重要启动子(在Henderson NC等人,integrin-mediated regulation of TGFβin Fibrosis,Biochimica et Biophysica Acta–Molecular Basis of Disease 20131832：891-896中综述)，其表明αvβ6拮抗剂可有效地治疗多器官中的纤维化疾病。
与几个结合RGD的整联蛋白可以结合并激活TGFβ的观察相一致，最近发现不同的αv整联蛋白涉及纤维化疾病(Henderson NC等人Targeting of αv integrin identifies acore molecular pathway that regulates fibrosis in several organs NatureMedicine 2013 Vol 19,Number 12：1617-1627；Sarrazy V等人Integrins αvβ5 and αvβ3promote latent TGF-β1 activation by human cardiac fibroblast contractionCardiovasc Res 2014 102：407-417；Minagawa S等人Selective targeting of TGF-βactivation to treat fibroinflammatory airway disease Sci Transl Med 2014 Vol6,Issue 241：1-14；Reed NI等人,The αvβ1 integrin plays a critical in vivo rolein tissue fibrosis Sci Transl Med 2015 Vol 7,Issue 288：1-8)。因此，针对结合RGD的整联蛋白家族的特定成员的抑制剂或具有结合RGD的整联蛋白家族内的特异性选择性指纹的抑制剂可有效治疗多器官中的纤维化疾病。
已经描述了一系列针对αvβ3、αvβ5、αvβ6和αvβ8的整联蛋白拮抗剂的SAR关系(Macdonald,SJF等人.Structure activity relationships of αv integrinantagonists for pulmonary fibrosis by variation in aryl substituents.ACSMedChemLett 2014,5,1207-1212.19Sept 2014)。
WO 2016/046225 A1(在2016年3月31日出版)公开了作为αvβ6拮抗剂的下式化合物及其盐，包括特定的非对映异构体(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸及其马来酸盐和柠檬酸盐。
本发明的一个目的是提供αvβ6拮抗剂，包括具有针对其它αv整联蛋白例如αvβ1、αvβ3、αvβ5或αvβ8活性的那些，特别是(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸的其它盐。
发明概述
在本发明的第一个方面中，提供了(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐。
(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐具有αvβ6整联蛋白拮抗活性，并且据信具有治疗某些疾病的潜在用途。术语αvβ6拮抗活性包括本文的αvβ6抑制剂活性。
在本发明的第二个方面中，提供了包含(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。
在本发明的第三个方面中，提供了用于治疗，特别是治疗其中需要αvβ6整联蛋白受体拮抗剂的疾病或病症的(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐。
在本发明的第四个方面中，提供了在需要的人中治疗需要αvβ6整联蛋白受体拮抗剂的疾病或病症的方法，所述方法包括向需要的人给药治疗有效量的(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐。
在本发明的第五个方面中，提供了(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐在制备用于治疗需要αvβ6整联蛋白受体拮抗剂的疾病或病症的药物中的用途。
发明详述
在本发明的第一个方面中，提供了(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐(在下文中也称为“本发明的化合物”)。
应当理解的是，许多有机化合物可以与它们在其中反应或者它们从其中沉淀或结晶的溶剂形成复合物。这些复合物被称为“溶剂合物”。例如，与水的复合物被称为“水合物”。具有高沸点和/或能够形成氢键的溶剂，诸如水、二甲苯、N-甲基吡咯烷酮、甲醇和乙醇可用于形成溶剂合物。用于鉴定溶剂合物的方法包括但不限于NMR和微量分析。本发明化合物可以以溶剂合物或非溶剂合物形式存在。
本发明化合物可以呈晶体或无定形形式。此外，一些本发明化合物的晶体形式可以不同的多晶型形式存在。本发明化合物的多晶型形式可以使用多种常规分析技术表征和区分，所述分析技术包括但不限于，X-射线粉末衍射(XRPD)图谱、红外(IR)光谱、拉曼光谱、差示扫描量热(DSC)、热重分析(TGA)和固态核磁共振(SSNMR)。
本发明化合物还可以使用喷雾干燥的分散(SDD)方法制备聚合物基质中的无定形分子分散体，例如乙酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯，以改善药物的稳定性和溶解性。
本发明化合物还可以使用液体包封技术递送，以改善液体或半固体填充的硬胶囊或软明胶胶囊形式的性质，例如生物利用度和稳定性。
本发明的化合物可以几种互变异构形式之一存在。应当理解的是，本发明涵盖(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸的1:1柠檬酸盐形式的所有互变异构体，无论是作为单一互变异构体或其混合物。
定义
术语在其接受的含义内使用。以下定义旨在阐明但不限制所定义的术语。
本文所用术语“治疗”是指在先前患有或确诊的患者或受试者中，减轻具体病症、消除或减少该病症的一种或多种症状、减缓或消除该病症的进展和延迟该病症的复发。
本文所用术语“有效量”是指由例如研究人员或临床医师所探索的将引起组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂的量。
术语“治疗有效量”是指与未接受该量的相应受试者相比，引起疾病、障碍或副作用的改进的治疗、治愈或改善，或降低疾病或障碍进展速度的任意量。术语在其范围内还包括提高正常生理功能的有效量。
化合物制备
本发明的化合物可以通过各种方法(包括标准化学法)制备。
本领域技术人员将理解，可以以两种几何异构体存在的一些中间体化合物的(E)或(Z)描述可以包含作为次要组分的另一几何异构体。
本发明的化合物可以通过使式(I)化合物与柠檬酸通过本领域技术人员熟知的方法反应来制备。
式(I)化合物可以如WO 2016/046225 A1中所公开的，通过涉及结构式(II)的化合物的脱保护(即酯基的裂解)的方法制备：
其中R2为C1-C6烷基例如叔丁基、异丙基、乙基或甲基。或者，R2为手性烷基例如(-)-薄荷基[得自(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基环己醇]。
结构式(II)的化合物(其中R2为甲基、薄荷基或叔丁基)的脱保护可以通过在惰性溶剂(诸如二氯甲烷、2-甲基-四氢呋喃、四氢呋喃、1,4-二噁烷、环戊基甲基醚或水)中使用例如盐酸、氢溴酸、硫酸或三氟乙酸的酸水解来完成。或者，可以使用酶水解。
或者，结构式(II)的化合物(其中R2为甲基、乙基、异丙基或薄荷基)的脱保护可以通过在合适的溶剂(诸如含水溶剂如甲醇水溶液)中使用例如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾的碱水解来完成。
式(II)化合物可以由式(III)化合物通过与结构式(IV)的硼酸化合物反应来获得：
其中R2如上所定义。
或者，可以使用硼酸酯(例如频哪醇酯)，其原位提供母体硼酸。结构式(IV)的化合物可商购获得，例如购自Enamine LLC,Princeton Corporate Plaza,7 Deer Park DriveSte.17-3,Monmouth Jct.NJ(USA)08852,Manchester Organics or Fluorochem。结构式(III)和(IV)的化合物之间的反应可以在合适的催化剂如铑催化剂(例如(1,5-环辛二烯)氯化铑的二聚体[Rh(COD)Cl]2)和添加剂如膦配体(例如双(二苯基膦基)-1,1'-联萘(BINAP))存在下，优选在碱如氢氧化钾水溶液存在下，在升高的温度例如50-90℃，在水易混溶性溶剂如1,4-二噁烷中进行。优选反应在严格的无氧条件下进行，其中反应混合物用惰性气体如氮气吹扫，并在减压下抽空，重复该抽真空和用氮气吹扫三次。在(R)-BINAP存在下的偶联反应提供了具有主要异构体的非对映异构体混合物，例如约80：20或更高。当使用(R)-BINAP时，该主要的非对映异构体具有(S)构型(如WO2014/154725中关于结构相关化合物的制备中类似所示的)。通过手性HPLC、手性SFC或通过结晶，在酯阶段(式(II)化合物)时或转化为相应的酸(式(I)化合物)之后，非对映异构体比例可进一步增加至例如大于99:1。使用酶水解进行式(II)化合物向式(I)化合物的转化也可用于增加非对映异构体比例并且可避免使用诸如手性HPLC的方法的需要。
式(III)化合物可以由式(V)化合物通过下列方法与式(VI)化合物(其中R2如上所定义)反应来获得：
在有机碱例如N,N-二异丙基乙胺(“DIPEA”)和合适的基于钯的催化剂例如PdCl2(dppf)-CH2Cl2[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷复合物存在下，在溶剂如二氯甲烷中进行。式(VI)化合物(其中R2代表叔丁基)公开在WO2014/154725中的第32页。式(VI)化合物(其中R2代表甲基)公开在WO2014/15475中的第50页。式(V)化合物可以用作母体化合物，或者在叔胺碱存在下由盐(例如二盐酸盐)原位产生。
式(VI)化合物可以通过本文所述的方法制备。通过说明的方式，结构式(VI)的化合物(其中R2是甲基)与具有(E)几何结构的双键可以通过以下所示的方法制备：在升高的温度如50℃，由市售的4-溴巴豆酸甲酯和乙酸钠或乙酸钾在乙腈中开始：
式(V)化合物可以由结构式(VII)的化合物通过例如在惰性溶剂(如乙醇或乙酸乙酯)中，使用沉积在碳上的钯催化剂的催化氢解来制备：
式(VII)化合物可以由式(VIII)化合物通过二酰亚胺还原获得，例如由苯磺酰肼在碱(例如碳酸钾)存在下，在合适的溶剂(例如DMF)中，并在升高的温度(如130℃)下生成：
式(VIII)化合物以几何异构体例如(E)或(Z)-形式存在，并且可以作为纯异构体或作为混合物使用。式(VIII)化合物可以由已知可商购获得的式(IX)化合物(例如得自Wuxi App Tec,288Fute Zhong Road,Waigaoquiao Free Trade,Shanghai 200131,China)开始进行制备，所述式(IX)化合物可以例如用吡啶中的三氧化硫氧化成相应的式(X)的醛：
然后可以将该式(X)化合物(可以不用分离式(X)化合物)与式(XI)的叶立德反应：
从而形成以几何异构体(E)和(Z)的混合物形式存在的式(VIII)化合物。本领域技术人员将理解，存在从醛(X)形成式(VIII)化合物的其它方法。几何异构体可以通过色谱法分离或在下一步骤中作为混合物使用。制备式(I)化合物的总体方案概述在下面的方案(I)中：
方案(I)
式(XI)的叶立德可以由式(XII)化合物(购自Fluorochem)开始，其通过首先与盐酸反应，随后用碳酸氢钠中和，然后可以转化为式(XIII)的醛：
其可以例如使用硼氢化钠还原成相应的式(XIV)的醇：
(也参见US-A-20040092538中公开的用于制备式(XIV)的醇的途径)，然后可将其例如使用三溴化磷溴化以制备相应的式(XV)的溴化合物：
所述式(XV)的溴化合物可以通过在溶剂(例如乙腈)中与三苯基膦反应转化为三苯基溴化鏻(XVI)。
式(XI)的上述叶立德化合物可以通过使结构式(XVI)的化合物与碱(例如叔丁醇钾)在惰性溶剂(例如THF)中的溶液的反应获得。式(XI)的叶立德可以分离或优选原位形成，并且在相同容器中与式(X)的醛反应，而不预先分离。
制备式(XI)的叶立德的总体方案总结在如下的方案(II)中：
方案(II)
应当理解，在上述任何路线中，保护一个或多个官能团可能是有利的。保护基的实例及其去除的方法可以在T.W.Greene‘Protective Groups in Organic Synthesis’(3rdedition,J.Wiley and Sons,1999)中找到。合适的胺保护基包括酰基(例如乙酰基)、氨基甲酸酯(例如2',2',2'-三氯乙氧基羰基、苄氧基羰基或叔丁氧基羰基)和芳烷基(例如苄基)，所述胺保护基可视情况通过水解(例如使用酸如盐酸的二噁烷溶液或三氟乙酸的二氯甲烷溶液)或还原(例如苄基或苄氧基羰基的氢解，或使用锌的乙酸溶液还原除去2’,2’,2’-三氯乙氧基羰基)除去。其它合适的胺保护基包括三氟乙酰基(-COCF3)，其可通过碱催化水解除去。
应当理解，在上述任何途径中，将各种基团和部分引入分子的合成步骤的精确顺序可以改变。确保在该方法的一个阶段引入的基团或部分不受随后的转化和反应的影响，相应地，选择合成步骤的顺序在本领域技术人员的技术范围内。
式(I)化合物的绝对构型可以按照由已知绝对构型的中间体的独立对映选择性合成获得。或者，对映体纯的式(I)化合物可以转化为其绝对构型已知的化合物。在任一情况下，分析型HPLC柱上的谱图数据、旋光性和保留时间的比较可用于确认绝对构型。第三种可能的选择是通过X射线晶体学确定绝对构型。
使用方法
本发明的化合物具有αv整联蛋白拮抗剂活性、特别是αvβ6受体活性，因此在治疗需要αvβ6拮抗剂的疾病或病症中具有潜在的用途。
因此本发明提供了(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐，其用于治疗。本发明的化合物可用于治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的疾病或病症。
因此本发明提供了(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐，其用于治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的疾病或病症。
还提供了(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐在制备用于治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的疾病或病症的药物中的用途。
还提供了在有需要的受试者中治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的疾病或病症的方法，其包括给药治疗有效量的(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐。
合适地，有需要的受试者是哺乳动物，特别是人。
纤维变性疾病涉及修复或反应过程中的器官或组织中过量纤维性结缔组织的形成。据信αvβ6拮抗剂可用于治疗各种此类疾病或病症，包括依赖于αvβ6整联蛋白功能和经由αv整联蛋白活化转化生长因子β的那些。因此，在一个实施方案中，需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的疾病或病症是纤维化疾病。疾病可以包括但不限于肺纤维化(例如，特发性肺纤维化、非特异性间质性肺炎(NSIP)、普通型间质性肺炎(UIP)、Hermansky-Pudlak综合征、进行性大块纤维化(煤矿工人的肺尘病的并发症)、结缔组织病相关的肺纤维化、哮喘和COPD中的气道纤维化、ARDS相关的纤维化、急性肺损伤、辐射诱导的纤维化、家族性肺纤维化、肺动脉高压)；肾纤维化(糖尿病肾病、IgA肾病、狼疮性肾炎、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、移植肾病、自身免疫性肾病、药物诱导的肾病、高血压相关的肾病、肾源性系统纤维化)；肝纤维化(病毒诱导的纤维化(例如，丙型肝炎或乙型肝炎)、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝疾病(包括非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、先天性肝纤维化、原发性硬化性胆管炎、药物诱导的肝炎、肝硬化)；皮肤纤维化(增生性瘢痕、硬皮病、瘢痕疙瘩、皮肌炎、嗜酸性筋膜炎、Dupytrens挛缩、Ehlers-Danlos综合征、Peyronie氏病、营养不良性大疱性表皮松解(epidermolysis bullosa dystrophica)、口腔粘膜下纤维化)；眼部纤维化(年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿、干眼症、青光眼)、角膜瘢痕、角膜损伤和角膜伤口愈合、预防小梁切除术后的滤泡瘢痕；心脏纤维化(充血性心力衰竭、动脉粥样硬化、心肌梗死、心内膜心肌纤维化、肥大性心肌病(HCM))和其它混杂纤维化病症(纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、克罗恩病、神经纤维瘤病、子宫肌瘤(纤维瘤)、慢性器官移植排斥)。αvβ1、αvβ5或αvβ8整联蛋白的额外抑制作用可存在额外的益处。
此外，还可以治疗与αvβ6整联蛋白相关的癌前期病变或癌症(这些可以包括但不限于：子宫内膜癌、基底细胞癌、肝癌、结肠癌、子宫颈癌、口腔癌、胰腺癌、乳腺和卵巢癌、卡波西肉瘤、巨细胞肿瘤和与基质相关的癌症)。可以得益于对血管生成的影响的病症也可受益(例如实体瘤)。
术语“需要αvβ6拮抗剂的疾病或病症”意欲包括任何或所有上述疾病状态。
在一个实施方案中，所述需要αvβ6拮抗剂的疾病或病症为特发性肺纤维化。
在另一个实施方案中，所述需要αvβ6拮抗剂的疾病或病症选自角膜瘢痕，角膜损伤和角膜伤口愈合。
组合物
在治疗中使用时，尽管(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐可以作为原料化学品给药，但其通常作为药物组合物的活性成分存在。
因此本发明在另外方面提供了包含(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。该载体、稀释剂或赋形剂在与组合物的其它成分相容且对其接受者无害的意义上必须是可接受的。
根据本发明的另一个方面，还提供了用于制备药物组合物的方法，其包括混合本发明化合物与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。所述药物组合物可以用于治疗本文所述的任何病症。
进一步提供了用于治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的疾病或病症的药物组合物，所述药物组合物包含(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐。
进一步提供了包含0.05至1000mg的(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐和0.1至2g的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。
由于本发明化合物意欲用于药物组合物中，容易理解的是，其优选以基本上纯的形式提供，例如，至少60％纯，更合适地至少75％纯，优选至少85％纯，尤其是至少98％纯(基于重量的重量％)。
药物组合物可以每个单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量形式呈现。优选的单位剂量组合物是含有每日剂量或亚剂量或其适当部分的活性成分的那些组合物。此类单位剂量可以因此一天给药多于一次。优选的单位剂量组合物是含有如上文所述的每日剂量或亚剂量(用于一天给药多于一次)或其适当部分的活性成分的那些组合物。
药物组合物可以适于通过任何适当的途径，例如通过口服(包括口腔或舌下)、直肠、吸入、鼻内、局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道、眼睛或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内或真皮内)途径来给药。此类组合物可以通过药剂领域中已知的任何方法来制备，例如通过使活性成分与载体或赋形剂结合在一起。
在一个实施方案中，该药物组合物适于口服给药。
适于口服给药的药物组合物可以呈现为离散的单元，诸如胶囊或片剂；粉末或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食性泡沫或泡剂(whip)；或者水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。
例如，对于片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物成分可以与口服的非毒性的药学上可接受的惰性载体(诸如乙醇、甘油、水等)组合。适于引入片剂或胶囊的粉末可以通过将化合物降低至适当的细度(例如通过微粉化)且与类似地制备的药物载体(诸如可口服的碳水化合物，如例如，淀粉或甘露醇)混合而制备。调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可以存在。
胶囊可以通过制备如上所述的粉末混合物且填充形成的胶囊壳而制备。助流剂和润滑剂(诸如胶体二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇)可以在填充操作之前添加至粉末混合物。也可以添加崩解剂或增溶剂(诸如琼脂、碳酸钙或碳酸钠)以改善摄入胶囊时的药物的可利用度。
此外，当期望或必要时，合适的粘合剂、助流剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、崩解剂和着色剂也可以掺入混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(诸如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成的胶(诸如阿拉伯胶、黄芪胶或藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。
在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。
崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄原胶等。片剂通过，例如，制备粉末混合物，制粒或压制，添加润滑剂和崩解剂且压制成片而配制。粉末混合物通过混合适当地粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质及任选地粘合剂(诸如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、或聚乙烯吡咯烷酮)、溶解延迟剂(诸如石蜡)、吸收加速剂(诸如季盐)和/或吸收剂(诸如皂土、高岭土或磷酸二钙)而制备。粉末混合物可以通过用粘合剂诸如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶浆(acadia mucilage)或者纤维素物质或聚合物的溶液润湿且强制通过筛网而制粒。作为制粒的替代方式，粉末混合物可以通过压片机，因此将未完全成形的小块破碎成粒。颗粒可以通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油的方式被润滑以防止粘结到片剂成型模具上。润滑的混合物随后被压成片。本发明的化合物也可以与自由流动的惰性载体组合且被直接压成片而不经过制粒或成块步骤。可以提供由虫胶的密封包衣、糖或聚合材料的包衣和蜡的上光包衣组成的透明或不透明的保护性包衣。可以将染料添加至这些包衣中以区分不同的单位剂型。
口服液(诸如溶液、糖浆和酏剂)可以被制备成剂量单位形式，使得给定量含有预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解在适当调味的水性溶液中制备，而酏剂通过利用非毒性醇媒介物来制备。悬浮液可以通过将化合物分散于非毒性媒介物中来配制。也可以添加增溶剂和乳化剂(诸如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、调味添加剂(诸如薄荷油)或者天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂等。
适当时，用于口服给药的剂量单位组合物可以是微囊包封的。该制剂也可以通过例如在聚合物、蜡等中包衣或包埋微粒材料而制备以延长或持续释放。
本发明的化合物也可以脂质体递送系统的形式(诸如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡)来给药。脂质体可由多种磷脂(诸如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱)形成。
本发明化合物还可以使用喷雾干燥的分散(SDD)方法制备聚合物基质中的无定形分子分散体，例如乙酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯，以改善药物的稳定性和溶解性。
本发明化合物还可以使用液体包封技术递送，以改善液体或半固体填充的硬胶囊或软明胶胶囊形式的性质，例如生物利用度和稳定性。
适合经皮给药的药物组合物可以呈现为离散的贴剂，其目的是保持与接受者的表皮紧密接触延长的一段时间。
适合局部给药的药物组合物可以配制为软膏、霜剂、悬浮液、乳液、粉末、溶液、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油。
对于眼或其他外部组织(例如口和皮肤)的治疗，组合物优选以局部软膏剂或乳膏剂的形式给药。当配制为软膏剂时，活性成分可以与石蜡基的软膏基质或与水混溶的软膏基质一起使用。可选地，可以使用水包油乳膏基质或油包水基质将活性成分配制入乳膏剂中。本发明的化合物可以作为局部滴眼剂给药。本发明的化合物可以通过结膜下、前房内或玻璃体内途径给药，这将需要比每日给药更长的给药间隔。
适于局部给药至眼的药物组合物包括滴眼剂，其中活性成分溶于或混悬于适合的载体特别是含水溶剂中。给药至眼的制剂应具有眼科上相容的pH和重量摩尔渗透压浓度。可以将一种或多种眼科上可接受的pH调节剂和/或缓冲液包括到本发明的组合物中，其包括酸例如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱例如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠和乳酸钠；和缓冲液例如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。所包括的这样的酸、碱和缓冲液的量可以为将组合物的pH保持在眼科上可接受的范围内所需的量。一种或多种眼科上可接受的盐可以足以使组合物的重量摩尔渗透压浓度达到眼科可接受的范围的量包括在组合物中。这样的盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯化物、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的那些。
眼部递送设备可以经设计用于以多种限定的释放速率和持续的剂量动力学和渗透性控制释放一种或多种治疗剂。可以通过引入具有能够增强药物扩散、侵蚀、溶解和渗透的聚合物分子量、聚合物结晶度、共聚物比例、加工条件、表面加工、几何形状、赋形剂添加和聚合物涂层的不同选择和性质的生物可降解的/生物可蚀的聚合物(例如聚(乙烯乙烯基)乙酸酯(EVA)、超水解的PVA)、羟基烷基纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、羟基丙基甲基纤维素(HPMC)、聚己内酯、聚(乙醇)酸、聚(乳)酸、聚酸酐而设计聚合物基质，从而可以获得控制释放。
用于使用眼部设备进行药物递送的制剂可以组合适于所示的给药途径的一种或多种活性剂和佐剂。例如，活性剂可以与任何药学上可接受的赋形剂、乳糖、蔗糖、淀粉粉末、醇酸的纤维素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、阿拉伯胶、明胶、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷、和/或聚乙烯醇共混，压片或包囊用于常规给药。可选地，化合物可以溶于聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纤维素胶体溶液、乙醇、玉米油、花生油、棉籽油、芝麻油、黄蓍胶和/或多种缓冲液中。化合物还可以与具有时间延迟性质的生物可降解的和生物不可降解的聚合物、和载体或稀释剂混合。生物可降解的组合物的代表性的实例可以包括白蛋白、明胶、淀粉、纤维素、右旋糖、多糖、聚(D,L-丙交酯)、聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)、聚(乙交酯)、聚(羟基丁酸酯)、聚(烷基碳酸酯)和聚(原酸酯)及其混合物。生物不可降解的聚合物的实例可以包括EVA共聚物，硅橡胶和聚(丙烯酸甲酯)及其混合物。
用于眼部递送的药物组合物还包括可原位胶凝的含水组合物。这样的组合物包含胶凝剂，其浓度在与眼或泪液接触时可有效地促进胶凝。适合的胶凝剂包括但不限于热固化的聚合物。本文使用的术语“可原位胶凝”不仅包括与眼接触或与泪液接触时形成凝胶的低粘度的液体，而且还包括更粘的液体例如在给药于眼睛后显示出大幅增加粘度或凝胶刚性的半流体的和触变的凝胶。参见例如Ludwig(2005)Adv.Drug Deliv.Rev.3；57：1595-639，由于其对于用于眼部药物递送的聚合物的实例的教导的目的，将其在此处并入本文作为参考。
适合在口中局部给药的药物组合物包括糖锭剂、软锭剂和漱口剂。
适合直肠给药的药物组合物可以呈现为栓剂或灌肠剂。
用于经鼻或吸入给药的剂型可以方便地配制为气溶胶、溶液剂、悬浮剂、凝胶剂或干粉剂。
适合阴道给药的药物组合物可以呈现为阴道栓剂、卫生棉条、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂。
适合肠胃外给药的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使组合物与预期的接受者的血液等渗的溶质；和水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。组合物可以呈现于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下保存，其只需要在临使用前添加无菌液体载体，例如注射用水。即配注射溶液和悬浮液可以由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
本发明的化合物可以在长效肠胃外(LAP)药物递送系统中施用。这种药物递送系统包括旨在一旦注射就提供药物缓慢释放的制剂。LAP制剂可以是基于颗粒的，例如纳米或微米尺寸的聚合物球形颗粒，其一旦注射就不能回收，因此用作长效制剂(depotformulation)；或者如果需要可以回收的小棒状插入装置。长效颗粒可注射制剂可以由结晶药物颗粒的水性悬浮液组成，其中药物具有低溶解度，因此提供缓慢的溶出率。基于聚合物的LAP制剂通常由含有均匀分散在基质中的(亲水或疏水性质的)药物的聚合物基质组成。当LAP制剂是基于聚合物时，广泛使用的聚合物是聚-d,l-乳酸-共-羟基乙酸(PLGA)或其变体。
本发明化合物的治疗有效量依赖于许多因素，包括例如受试者的年龄和体重、需要治疗的确切的病症和其严重度、制剂的性质和给药途径，且最终决定于主治医师或兽医的判断。
在药物组合物中，用于口服或肠胃外给药的每个剂量单位可含有0.01-3000mg，或0.1-2000mg，或更特别地0.5至1000mg的本发明化合物，以两性离子母体化合物计算。
用于鼻或吸入给药的每个剂量单位优选含有0.001至50mg，更优选0.01至5mg，还更优选1至50mg的本发明化合物，以两性离子母体化合物计算。
对于喷雾溶液或悬浮液的给药，剂量单位通常含有1至15mg，其可适当地每天一次，每天两次或每天多于两次递送。本发明的化合物可以以用于在药房中或由患者重构的干燥或冻干粉末提供，或者可以例如在盐水溶液中提供。
本发明的化合物可以每日剂量(对于成人患者)的本发明化合物给药，例如每天0.01毫克至3000毫克，或每天0.5至1000毫克或每天0.5至300毫克，或每天2至300毫克的口服或肠胃外剂量，或每天0.001至50毫克或每天0.01至50毫克，或每天1至50毫克的鼻或吸入剂量，以两性离子母体化合物计算。该量可以每日单一剂量给予，或者更通常以采用每日许多(诸如二、三、四、五或六次)亚剂量给予，使得每日总剂量是相同的。(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐的有效量可以作为两性离子母体化合物的有效量的比例而确定。
本发明的化合物可以单独使用或与其它治疗剂组合使用。因此根据本发明的组合治疗包括给药本发明化合物，以及使用至少一种其它药学活性剂。优选地，本发明的组合治疗包括给药本发明化合物，以及至少一种其它药学活性剂。本发明的化合物和其它药物活性剂可以在单一药物组合物中一起给药或分开给药，当分开给药时，其可以同时或以任何顺序相继给药。选择本发明的化合物和其它药学活性剂的量以及相对给药时机以获得预期的组合疗效。
因此，在另一方面，提供了包含本发明的化合物和至少一种其它药学活性剂的组合。
因此，在一个方面，根据本发明的化合物和药物组合物可以与一种或多种其它治疗剂组合使用，或者可包含一种或多种其它治疗剂，所述治疗剂包括用于过敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病，抗纤维化疗法的疗法和用于呼吸道阻塞疾病的疗法，或用于糖尿病眼病的疗法，以及用于角膜瘢痕形成、角膜损伤和角膜伤口愈合的疗法。
抗过敏疗法包括抗原免疫治疗(例如蜂毒、花粉、牛奶、花生、CpG基序、胶原、细胞外基质的其它组分的组分或片段，其可作为口服或舌下抗原给药)、抗组胺药(例如西替利嗪、氯雷他定、阿伐斯汀、非索非那定(fexofenidine)、扑尔敏)，和皮质类固醇(例如丙酸氟替卡松、糠酸氟替卡松、二丙酸倍氯米松、布地奈德、环索奈德、糠酸莫米松、曲安奈德、氟尼缩松、泼尼松龙、氢化可的松)。
抗炎疗法包括NSAID(例如阿司匹林、布洛芬、萘普生)、白细胞三烯调节剂(例如孟鲁司特、扎鲁司特、普仑司特)和其它抗炎疗法(例如iNOS抑制剂、类胰蛋白酶抑制剂、IKK2抑制剂、p38抑制剂(洛吡莫德、dilmapimod)、弹性蛋白酶抑制剂、β2激动剂、DP1拮抗剂、DP2拮抗剂、pI3Kδ抑制剂、ITK抑制剂、LP(溶血磷脂酸)抑制剂或FLAP(5-脂氧合酶激活蛋白)抑制剂(例如3-(3-(叔丁基硫基)-1-(4-(6-乙氧基吡啶-3-基)苄基)-5-((5-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-1H-吲哚-2-基)-2,2-二甲基丙酸钠)；腺苷a2a激动剂(例如腺苷和瑞加诺生)、趋化因子拮抗剂(例如CCR3拮抗剂或CCR4拮抗剂)、介质释放抑制剂。
自身免疫性疾病的疗法包括DMARDS(例如甲氨蝶呤、来氟米特、硫唑嘌呤)、生物疗法(例如抗-IgE、抗-TNF、抗白细胞介素(例如抗-IL-1、抗-IL-6、抗-IL-12、抗-IL-17、抗-IL-18))、受体疗法(例如依那西普和类似的药剂)；抗原非特异性免疫疗法(例如干扰素或其它细胞因子/趋化因子、细胞因子/趋化因子受体调节剂、细胞因子激动剂或拮抗剂、TLR激动剂和类似的药剂)。
其它抗纤维化疗法可用于组合中，包括TGFβ合成的抑制剂(例如吡非尼酮)，靶向血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生的生长因子(PDGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)受体激酶的酪氨酸激酶抑制剂(例如Nintedanib(BIBF-1120)和甲磺酸伊马替尼(Gleevec))，内皮素受体拮抗剂(例如安立生坦或马西替坦)，抗氧化剂(例如N-乙酰半胱氨酸(NAC)；广谱抗生素(例如磺胺甲基异噁唑，四环素(盐酸米诺环素))，磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂(例如西地那非)，抗-αvβx抗体和药物(例如抗-αvβ6单克隆抗体(例如WO2003100033A2中所述的那些可用于组合中)；英妥木单抗；西仑吉肽)。
阻塞性气道疾病的疗法包括支气管扩张剂，例如短效β2-激动剂(例如沙丁胺醇)，长效β2-激动剂(例如沙美特罗、福莫特罗和维兰特罗)，短效毒蕈碱拮抗剂(例如异丙托溴铵)，长效毒蕈碱拮抗剂(例如噻托溴铵，芜地溴铵)。
在一些实施方案中，治疗还可以包括本发明的化合物与其它现有治疗模式的组合，例如用于治疗糖尿病性眼病的现有药剂，例如抗VEGF治疗剂例如和阿柏西普和类固醇，例如曲安奈德，以及含有氟轻松的类固醇植入物。
在一些实施方案中，治疗还可涉及本发明的化合物与其它现有治疗模式的组合，例如用于治疗角膜瘢痕、角膜损伤或角膜伤口愈合的现有药剂，例如小牛血提取物、和
本发明的化合物和组合物可以单独或与癌症疗法(包括化学疗法、放射疗法、靶向药物、免疫疗法和细胞或基因疗法)组合用于治疗癌症。
上述组合可方便地以药物组合物的形式使用，因此包含如上定义的组合以及药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物代表本发明的另一方面。这种组合的单个化合物可以在单独或组合的药物组合物中顺序或同时给药。优选地，单独的化合物将在组合的药物组合物中同时给药。已知治疗剂的合适剂量将容易被本领域技术人员理解。
应当理解，当本发明的化合物与一种或多种通常通过吸入、静脉内、口服、鼻内、眼部局部或其它途径给药的其它治疗活性剂组合给予时，所得药物组合物可通过相同途径给药。或者，组合物中的各个组分可以通过不同的途径给药。
现在将仅通过实施例来阐明本发明。
缩写
以下列表提供了本文使用的某些缩写的定义。应当理解，该列表不是穷尽的，但是本文以下没有定义的那些缩写的含义对于本领域技术人员将是显而易见的。
Ac(乙酰基)
BCECF-AM(2',7'-双-(2-羧基乙基)-5-(和-6)-羧基荧光素乙酰氧基甲酯)
BEH(乙烯桥接混合技术)
Bu(丁基)
CBZ(羧基苄基)
CHAPS(3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐)
Chiralcel OD-H(涂覆在5μm硅胶上的纤维素三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯))
Chiralpak AD-H(涂覆在5μm硅胶上的直链淀粉三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯))
Chiralpak ID(固定在5μm硅胶上的直链淀粉三(3-氯苯基氨基甲酸酯))
Chiralpak AS(涂覆在5μm硅胶上的直链淀粉三((S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯))
CDI(羰基二咪唑)
CSH(带电表面混合技术)
CV(柱体积)
DCM(二氯甲烷)
DIPEA(二异丙基乙胺)
DMF(N,N-二甲基甲酰胺)
DMSO(二甲基亚砜)
DSC(差示扫描量热法)
Et(乙基)
EtOH(乙醇)
EtOAc(乙酸乙酯)
h(小时)
HCl(盐酸)
HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)
LCMS(液相色谱-质谱法)
MDAP(质量定向自动制备型HPLC)
MDCK(Madin-Darby犬肾)
Me(甲基)
MeCN(乙腈)
MeOH(甲醇)
MS(质谱)
min分钟
PdCl2(dppf)-CH2Cl2[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷复合物
Ph(苯基)
iPr(异丙基)
(R)-BINAP(R)-(+)-2,2′-双(二苯基膦基)-1,1′-联萘
[Rh(COD)Cl]2((1,5-环辛二烯)氯化铑(I)二聚体)
RT(保留时间)
SPE(固相萃取)
TBME(叔丁基甲基醚)
TEA(三乙胺)
TFA(三氟乙酸)
TGA(热重分析)
THF(四氢呋喃)
TLC(薄层色谱法)
UPLC(超高效液相色谱)
所有提及的盐水是指氯化钠的饱和水溶液。
实验细节
分析型LCMS
分析型LCMS在下列系统A、B、C或D之一上进行。
对所有系统的紫外检测是从波长220nm到350nm的平均信号，使用交替扫描正和负模式电喷雾电离在质谱仪上记录质谱。
本文提及的LCMS系统A-D的实验细节如下：
系统A
柱：50mm×2.1mm ID,1.7μm Acquity UPLC BEH C18柱
流速：1mL/min.
温度：40℃
溶剂：A：用氨水溶液调节至pH为10的10mM碳酸氢铵的水溶液
B：乙腈
系统B
柱：50mm×2.1mm ID,1.7μm Acquity UPLC BEH C18柱
流速：1mL/min
温度：40℃
溶剂：A：0.1％v/v甲酸的水溶液
B：0.1％v/v甲酸的乙腈溶液
系统C
柱：50mm×2.1mm ID,1.7μm Acquity UPLC CSH C18柱
流速：1mL/min.
温度：40℃
溶剂：A：用氨水溶液调节至pH为10的10mM碳酸氢铵的水溶液
B：乙腈
系统D
柱：50mm×2.1mm ID,1.7μm Acquity UPLC BEH C18柱
流速：1mL/min
温度：40℃
溶剂：A：0.1％v/v三氟乙酸的水溶液
B：0.1％v/v三氟乙酸的乙腈溶液
中间体1：7-(溴甲基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶(化合物(XV))
在0℃在氮气下，将三溴化磷(0.565mL，5.99mmol)滴加到(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)甲醇(化合物(XIV))(参见US20040092538,第80页,[0844])(820mg,4.99mmol)在无水乙腈(50mL)中的悬浮液中。加入后，形成深橙色沉淀，其变成浅橙色。将反应混合物在0℃下搅拌1小时，此时反应完成。将混合物真空浓缩并将残余物在乙酸乙酯(250mL)和饱和NaHCO3水溶液(250mL)之间分配。水相用乙酸乙酯(250mL)进一步萃取。将合并的有机溶液通过疏水砂芯，然后真空浓缩，得到标题化合物(1.05g,93％)，为蓬松奶油状固体：LCMS(系统C)RT＝0.95min,ES+ve m/z 227,229(M+H)+。
中间体2：三苯基((5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)甲基)溴化鏻(化合物(XVI))
将7-(溴甲基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶(化合物(XV)，中间体1)(1.00g，4.40mmol)的乙腈(98mL)溶液用三苯基膦(1.270g，4.84mmol)处理，将溶液在室温在氮气下搅拌过夜。将混合物真空浓缩，得到深奶油色固体，然后用乙醚研磨，得到标题化合物(2.139g,99％)，为淡奶油色固体：LCMS(系统C)RT＝1.23min,ES+ve m/z 409(M+H)+.
中间体3：(E,Z)3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲 酸苄基酯.(化合物(VIII))
将搅拌下的(+)-3-氟-3-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸苄基酯(化合物(IX)：购自Wuxi App Tec；也参见Tetrahedron Asymmetry,27(2016)，第1222-1230页)(260mg，1.03mmol)在DCM(3mL)和DMSO(0.3mL)中的溶液在氮气下用DIPEA(0.896mL，5.13mmol)处理。冷却至0-5℃(冰浴)后，用大约5分钟的时间分批加入吡啶三氧化硫(327mg，2.05mmol)，以将醇化合物(IX)氧化为相应的醛化合物(X)，其未被分离。除去冷却浴，继续搅拌0.5小时。同时，在氮气下，用大约5分钟的时间，将三苯基((5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)甲基)溴化鏻(化合物(XVI)，其制备参见中间体2)(553mg,1.13mmol)的无水DCM(10mL)溶液用滴加叔丁醇钾(1M的THF溶液)(1.232mL,1.232mmol)来处理，生成橙色溶液。继续搅拌10分钟，然后将醛(式(X))溶液一次性加入到叶立德溶液中，将混合物在环境温度下搅拌22小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，然后真空蒸发。将深棕色残余物通过20g硅胶SPE柱色谱纯化，并用0-100％乙酸乙酯-环己烷的梯度在30分钟内洗脱，得到标题化合物，为两种几何异构体：
异构体1：稻草色胶状物(123.4mg,31％),LCMS(系统A)RT＝1.28min,95％,ES+vem/z 382(M+H)+和
异构体2：稻草色胶状物(121.5mg,31％),LCMS(系统A)RT＝1.22min,91％,ES+vem/z 382(M+H)+
总产率＝244.9mg,62.5％。
中间体3的构型随后显示为(R)，且两种几何异构体为：(R,E)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸苄基酯和(R,Z)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸苄基酯。
中间体4：3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-甲酸苄基 酯(化合物(VII))
将(E,Z)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸苄基酯(化合物VIII,中间体3)(244mg,0.640mmol)(1:1,E:Z)的DMF(2mL)溶液用苯磺酰肼(购自Alfa Aesar)(275mg,1.60mmol)和碳酸钾(354mg,2.56mmol)处理。将反应混合物加热至130℃保持1小时，然后冷却并在DCM和水之间分配。有机相用水洗涤并通过疏水砂芯干燥。真空蒸发有机溶液，残余的橙色油状物通过硅胶柱色谱(20g)纯化，用0-50％[(3：1EtOAc-EtOH)-EtOAc]的梯度溶液洗脱20分钟。合并适当的级分并真空蒸发，得到标题化合物(150mg，61％)，为浅黄色胶状物：LCMS(系统A)RT＝1.24min,90％,ES+vem/z 384(M+H)+。中间体4的绝对构型随后显示为(S)，因此该化合物是(S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-甲酸苄基酯。
中间体5：7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶(化合物(V))
将搅拌下的3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-甲酸苄基酯(化合物(VII)，中间体4)(4.67g，12.2mmol)在含有10％钯/碳(0.50g)的乙醇(70mL)中的溶液在氢气氛下搅拌7小时。LCMS显示去保护不完全，并加入另外的10％钯/碳(0.25g)，并将混合物在氢气氛下搅拌过夜。反应混合物以深灰色悬浮液存在，因此加入DCM以溶解该物质直到混合物变黑。通过硅藻土垫过滤除去催化剂，真空蒸发滤液和洗涤液。将残余物从DCM中蒸发，得到标题化合物，为橙色油状物(3.28g)：LCMS(系统A)RT＝0.79min,90％,ES+ve m/z 250(M+H)+。随后确定中间体5的构型为(S)，化合物的名称为(S)-7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶。
中间体6：(E)-4-乙酰氧基丁-2-烯酸甲酯(化合物(VI))
将乙酸钠(3.5g，42mmol)在MeCN(30mL)中的悬浮液用4-溴巴豆酸甲酯(Aldrich)(3.33mL，5g，28mmol)处理，将混合物加热至50℃持续3天。将混合物用乙醚稀释，然后过滤。固体用乙醚洗涤，合并的滤液和洗涤液在减压下蒸发。蒸发后，将残余物在乙醚和水之间分配。有机相用碳酸氢钠水溶液洗涤，用MgSO4干燥，减压蒸发，得到浅橙色油状物。NMR表明为产物和原料的混合物，因此，向残余油中加入乙酸钠(3.44g，42mmol)，然后加入MeCN(10mL)，将混合物加热至70℃过周末。将混合物减压浓缩，将残余物在乙醚和水之间分配。将有机溶液用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。减压蒸发滤液，得到标题化合物(3.55g,80％)，为橙色油状物：NMRδ(CDCl3)6.92(dt,J 16,5Hz,1H),6.01(dt,J 16,2Hz,1H),4.72(dd,J 5,2Hz,2H),3.73(s,3H),2.10(s,3H)。
中间体7：(E)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1- 基)丁-2-烯酸甲酯(化合物(III))
将(E)-4-乙酰氧基丁-2-烯酸甲酯(化合物(VI)，对于制备参见中间体6)(127mg,0.802mmol)、7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶(化合物(V)，对于制备参见中间体5)(200mg,0.802mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(65.7mg,0.080mmol)在DCM(2mL)中的混合物在环境温度搅拌2小时。LCMS显示约50％的转化率，加入DIPEA(0.279mL，1.60mmol)，将溶液在室温搅拌2小时。LCMS显示几乎完全转化为产物。将物质直接加载到柱上，通过色谱(20g氨基丙基柱)纯化，用0-100％EtOAc的环己烷溶液梯度洗脱20分钟。将合适的级分合并并蒸发，得到标题化合物(101.4mg,36％)：LCMS(系统A)RT＝1.08min,95％,ES+ve m/z 348(M+H)+。确定中间体8的构型为(S)，且化合物的名称为(S,E)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)丁-3-烯酸甲酯。
中间体8：(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷- 1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸和
中间体9：(R)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷- 1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸
将(S,E)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸甲酯(化合物(III),中间体8)(101.4mg,0.292mmol)、3.8M KOH(aq)(0.230mL,0.876mmol)和(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)硼酸(化合物(IV)，得自Enamine LLC,)(172mg,0.876mmol)溶于1,4-二噁烷(2mL)中，并将溶液脱气。将[Rh(COD)Cl]2(7.20mg,0.015mmol)和(R)-BINAP(21.81mg,0.035mmol)悬浮于1,4-二噁烷(2mL)中并脱气。然后在氮气下将前面的反应物溶液加入到后面的催化剂溶液中。将反应混合物加热并搅拌(50℃，2小时)。然后将混合物加载到SCX柱(10g)(用1CV MeOH，1CV MeCN预处理)上，用10VDMSO、4CV MeCN洗涤，并用2M的NH3在MeOH中的溶液(4CV)洗脱。在减压下蒸发碱性级分。将残余物在高真空下干燥12小时，得到(S)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸甲酯(131.3mg,93％)。
然后将该甲酯溶解在THF(2mL)中，并加入1M LiOH水溶液(1.459mL，1.459mmol)。将溶液在室温搅拌18小时。LCMS显示完全水解成羧酸，并加入2M HCl(0.876mL，1.751mmol)，将溶液加载到SCX柱(10g)(用1CVMeOH、1CV MeCN预处理)上，用4CV MeCN洗涤，并用2M的NH3在MeOH中的溶液(4CV)洗脱。在减压下蒸发碱性级分，得到为胶状物的粗产物(127mg，90％)。分析型手性HPLC RT＝9.0min,88％和RT＝13.8min,12％，在Chiralcel OJ-H柱(4.6mm id×25cm)上，用60％EtOH(含有0.2％异丙胺)–庚烷洗脱，流速＝1.0mL/min，在215nm处检测。该非对映异构体混合物通过在Chiralcel OJ-H柱(3cm×25cm)上的制备型手性HPLC分离，用60％EtOH-庚烷洗脱，流速＝30mL/min，在215nm处检测，得到两个单独的非对映异构体的标题化合物。
中间体8(78mg,55％)：分析型手性HPLC RT＝9.0min,98.7％，在Chiralcel OJ-H柱(4.6mm id×25cm)上，用60％EtOH(含有0.2％异丙胺)–庚烷洗脱，流速＝1.0mL/min，在215nm处检测；LCMS(系统D)RT＝0.52min,100％,ES+ve m/z 486(M+H)+和(系统C)RT＝0.81min,92％,ES+ve m/z 486(M+H)+，1H NMR(CDCl3,600MHz)：δ8.45(br s,1H),7.21(t,J＝7.7Hz,1H),7.16(d,J＝7.2Hz,1H),6.86-6.73(m,3H),6.31(d,J＝7.2Hz,1H),4.12(t,J＝4.4Hz,2H),4.08(br s,1H),3.75(td,J＝4.7,0.8Hz,2H),3.73-3.68(m,1H),3.47(brs,2H),3.46(d,J＝1.1Hz,2H),3.42(br t,J＝5.1Hz,2H),3.00-2.85(m,2H),2.82-2.75(m,1H),2.70-2.66(m,1H),2.63-2.57(m,1H),2.73-2.55(m,3H),2.49(q,J＝9.1Hz,1H),2.45(dd,J＝11.9,3.7Hz,1H),2.23-1.97(m,4H),1.95-1.80(m,3H)；[α]D 20+51(c＝0.72，在乙醇中)
确定中间体8的不对称中心的绝对构型，发现化合物为(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
中间体9(10mg,7％)：分析型手性HPLC RT＝12.5min,>99.5％，在Chiralcel OJ-H柱(4.6mm id×25cm)上，用60％EtOH(含有0.2％异丙胺)–庚烷洗脱，流速＝1.0mL/min，在215nm处检测；LCMS(系统C)RT＝0.82min,84％,ES+ve m/z 486(M+H)+。[α]D 20-28(c＝0.50，在乙醇中)。
确定中间体9的不对称中心的绝对构型，发现化合物具有结构式(R)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
实施例1：(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷- 1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸1:1柠檬酸盐。
将柠檬酸(40.8mg,0.212mmol)悬浮于THF(0.1mL)中，加热至50℃直至溶解，然后冷却至室温。在单独的小瓶中，将(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(中间体8)(102mg,0.210mmol)溶于乙腈(0.100mL)中，并加入到柠檬酸溶液中。约10秒后，观察到沉淀。加入二异丙基醚(5mL)，进一步沉淀，并将悬浮液搅拌3小时。通过过滤收集固体，并用二异丙基醚(5mL)洗涤，得到(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸柠檬酸盐(1:1盐)(138mg,0.204mmol,97％)，为白色固体：LCMS(系统C)RT＝0.82min,100％,ES+ve m/z 486(M+H)+；1H NMR(600MHz,氧化氘)δ7.54(d,J＝7.5Hz,1H),7.39(t,J＝8.0Hz,1H),7.03(d,J＝8.0Hz,1H),6.99-6.97(m,1H),6.98-6.97(m,1H),6.58(d,J＝7.5Hz,1H),4.22-4.20(m,2H),3.83-3.81(m,2H),3.79-3.70(m,1H),3.70-3.65(m,1H),3.67-3.61(m,2H),3.64-3.60(m,1H),3.55-3.47(m,1H),3.49-3.45(m,1H),3.47-3.43(m,2H),3.44(s,3H),2.86-2.83(m,2H),2.86-2.81(m,2H),2.80-2.75(m,2H),2.74(d,J＝15.0Hz,2H),2.70(dd,J＝8.0,15.5Hz,1H),2.60(dd,J＝8.0,15.5Hz,1H),2.44-2.38(m,1H),2.30-2.18(m,1H),2.31-2.18(m,2H),1.94-1.87(m,2H).
生物测定
细胞粘附测定
利用的试剂和方法如[Ludbrook等人,Biochem.J.2003,369,311和Macdonald等人,ACS Med.Chem.Lett.2014,5,1207-1212，对于αvβ8测定]所述，澄清以下几点。使用以下细胞系，其中括号中为配体：K562-αvβ3(LAP-b1)、K562-αvβ5(玻连蛋白)、K562-αvβ6(LAP-b1)、K562-αvβ8(LAP-b1)、A549-αvβ1(LAP-b1)。用于促进粘附的二价阳离子为2mM MgCl2。粘附通过用荧光染料BCECF-AM(Life Technologies)标记细胞进行定量，其中将3x106个细胞/mL的细胞悬浮液与0.33uL/mL的30mM BCECF-AM在37℃孵育10分钟，然后将50μL/孔分配至96-孔测定板中。在测定结束时，使用50μL/孔的0.5％Triton X-100的H2O溶液裂解粘附的细胞以释放荧光。使用板读数器(Perkin Elmer)检测荧光强度。对于测定中的活性拮抗剂，将数据拟合至4参数逻辑斯蒂方程(logistic equation)，用于测定IC50。
根据上述测定法测试实施例1的化合物，发现其为αvβ6整联蛋白拮抗剂。本领域技术人员将认识到，体外结合测定和基于细胞的功能活性测定受到实验可变性的影响。因此，应理解下面给出的值仅是示例性的，并且重复进行测定可导致稍微不同的pIC50值。
实施例1在细胞粘附测定中的平均亲和力(pIC50)为：αvβ6pIC50＝7.9；αvβ3pIC50＝7.2；αvβ5pIC50＝ND(未测定)；αvβ8pIC50＝ND；αvβ1pIC50＝6.4。
化学和物理稳定性
已显示(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(1:1)柠檬酸盐在除50℃以外的各种测试条件下具有合适的化学稳定性(参见表1和表2)，并且当(1:1)柠檬酸盐不受潮时具有合适的物理稳定性(参见表2)。
通过将两批样品(第一批-参见表1；第二批-参见表2)暴露于各种温度和湿度条件下来测定本发明化合物的稳定性。(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸的含量和杂质使用高效液相色谱(HPLC)分析方法测定，以5℃/amb样品作为第一批的标准品(表1)，冷藏样品作为第二批的标准品(表2)。将杂质确定为相对于色谱图中的(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸峰的百分比面积。
对于表1和表2，每个实验一式两份进行。测定值以两个重复的平均值给出。杂质值代表每个重复实验的结果。
表1：固态稳定性
E＝暴露的(样品容器没有盖盖子)
RH＝相对湿度
amb＝环境湿度
表2：固态稳定性
全部盖上盖子并含有干燥剂储存
*含有污染物的峰，仅见于其中一个实验中
RT＝室温。

Claims (14)

1.化合物，其为(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(1:1)柠檬酸盐。
2.药物组合物，其包含根据权利要求1的化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
3.根据权利要求2的药物组合物，其为适合口服给药的形式。
4.根据权利要求3的药物组合物，其为胶囊。
5.根据权利要求1的化合物或根据权利要求2-4中任一项的药物组合物，其用于治疗。
6.根据权利要求1的化合物或根据权利要求2-4中任一项的药物组合物，其用于治疗需要αvβ6受体拮抗剂的疾病或病症。
7.权利要求6中用于所述用途的化合物或权利要求6中用于所述用途的药物组合物，其中所述疾病或病症是纤维化疾病。
8.权利要求7中用于所述用途的化合物或权利要求7中用于所述用途的药物组合物，其中所述纤维化疾病是特发性肺纤维化。
9.在人中治疗需要αvβ6整联蛋白拮抗剂的疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的人给药治疗有效量的根据权利要求1的化合物。
10.根据权利要求9的方法，其中所述疾病或病症是纤维化疾病。
11.根据权利要求10的方法，其中所述纤维化疾病是特发性肺纤维化。
12.根据权利要求1的化合物在制备用于治疗需要αvβ6受体拮抗剂的疾病或病症的药物中的用途。
13.根据权利要求12的用途，其中所述疾病或病症是纤维化疾病。
14.根据权利要求13的用途，其中所述纤维化疾病是特发性肺纤维化。
CN201780014325.7A 2016-03-18 2017-03-16 化合物(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(1:1)柠檬酸盐 Pending CN108699036A (zh)

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