CN108697725A

CN108697725A - 组合疗法

Info

Publication number: CN108697725A
Application number: CN201680082464.9A
Authority: CN
Inventors: 休·格里菲斯
Original assignee: Nuka Co Ltd
Current assignee: Nuka Co Ltd
Priority date: 2015-12-23
Filing date: 2016-12-21
Publication date: 2018-10-23
Also published as: CA3008749A1; US20190022117A1; MD3393478T2; BR112018012956A2; EP3393478A1; CA3008749C; SMT202000154T1; HUE050290T2; HK1255110A1; PL3393478T3; ME03677B; LT3393478T; ZA201804155B; MY194629A; PT3393478T; IL260076A; US20230149436A1; DK3393478T3; EA201891473A1; KR20180096698A

Abstract

本发明涉及吉西他滨‑[苯基‑苄氧基‑L‑丙氨酰基)]‑磷酸酯(化学名称：2'‑脱氧‑2',2'‑二氟‑D‑胞苷‑5'‑O‑[苯基(苄氧基‑L‑丙氨酰基)]磷酸酯)(NUC‑1031)和基于铂的抗癌剂的组合，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。所述组合可用于治疗癌症，特别是治疗胆道癌和膀胱癌。

Description

组合疗法

本发明涉及吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯(化学名称：2'-脱氧-2',2'-二氟-D-胞苷-5'-O-[苯基(苄氧基-L-丙氨酰基)]磷酸酯)(NUC-1031)和基于铂的抗癌剂的组合，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂(cisplatin)、吡铂(picoplatin)、铂脂质体(lipoplatin)和三铂(triplatin)。

背景技术

NUC-1031

吉西他滨(1；作为销售)是目前批准用于治疗乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌和胰腺癌并广泛用于治疗多种其他癌症包括膀胱癌、胆管癌、结肠直肠癌和淋巴瘤的有效核苷类似物。

吉西他滨的临床应用受到许多固有和获得性耐药机制的限制。在细胞水平上，耐药性取决于三个参数：(i)脱氧胞苷激酶(其是活化成磷酸化的部分所必需的)的下调；(ii)核苷转运蛋白，特别是被癌细胞摄取所需的hENT1的表达降低；和(iii)催化酶，特别是降解吉西他滨的胞苷脱氨酶的上调。

WO2005/012327描述了一系列吉西他滨的核苷酸类似物和相关的核苷药物分子。其中，吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯(NUC-1031；2)被鉴定为特别有效的化合物。这些protide避免了许多固有和获得性耐药机制，而这些机制限制了吉西他滨的应用(‘Application of ProTide Technology to Gemcitabine:A Successful Approach toOvercome the Key Cancer Resistance Mechanisms Leads to a New Agent(NUC-1031)in Clinical Development’；Slusarczyk等人；J.Med.Chem.；2014,57,1531-1542)。

通常将NUC-1031 2制备成在磷酸酯中心差向异构的两种非对映异构体(S-差向异构体3和R-差向异构体4)的混合物，其可以作为单一差向异构体分离和施用。

ProGem1是首次人类(FTIH)、I期、开放标签性两阶段研究，以研究NUC-1031的安全性、耐受性、临床功效、药代动力学(PK)和药效学(PD)，其中以两个平行给药方案向晚期实体恶性肿瘤受试者给予NUC-1031(EudraCT编号：2011-005232-26)。受试者在进入研究时患有以下肿瘤类型：结肠直肠癌(7名受试者)，不明原发性癌(3)，卵巢癌(12)，乳腺癌(4)，胰腺癌(9)，胆管细胞癌(cholangiocarcinoma)(7)，子宫内膜癌(3)，宫颈癌(2)，肺癌(7)，间皮瘤(3)，食道癌(3)，输卵管癌(1)，滋养层癌(1)，肾癌(1)，胃癌(1)，肛门癌(1)，胸腺癌(1)和骨肉瘤(1)。该研究证实了NUC-1031在晚期进展性癌症患者中的抗肿瘤活性，这些患者已经用尽了所有标准治疗方案，其中许多患者对先前的核苷类似物疗法(包括吉西他滨)具有耐药性或难治性。特别值得注意的是，药代动力学数据显示，作为单一药剂的NUC-1031产生的活性三磷酸酯部分(dFdCTP)的细胞内峰浓度(C_max)比等摩尔剂量的单一药剂吉西他滨高约10倍。此外，与许多公开研究中的吉西他滨的历史数据相比，NUC-1031的细胞内暴露时间或针对dFdCTP的曲线下面积(AUC)大27倍。最后，分析表明，NUC-1031释放不到一半水平的、通常与吉西他滨相关的潜在毒性代谢物，2‘,2‘-二氟-2'-脱氧尿苷(dFdU)。

胆道癌

胆道癌(biliary tract cancer,BTC)与高死亡率相关(每百万人群约23例，成人恶性肿瘤发病率为0.7％，即每年在英格兰和威尔士登记的新病例约1200例。根据起源部位，胆道癌被分类为：

·胆囊癌

·远端胆管

·壶腹部肿瘤

·肝内胆管细胞癌

·肝门部(汇管区(Klatskin))胆管细胞癌

这些癌症在50至70岁的患者中更普遍，胆管细胞癌和壶腹部癌在男性中的发病率更高，而胆囊癌在女性中更高。虽然超过90％的BTC是腺癌，但有可能存在其他组织学亚型，如鳞状上皮、神经内分泌肿瘤、淋巴瘤或肉瘤。BTC的主要病因是胆结石、胆管先天性异常、原发性硬化性胆管炎、慢性肝病和遗传性息肉综合征。

手术提供了唯一的长期治愈机会；然而，由于BTC的侵袭性，大多数患者(>65％)在无法进行手术并且姑息化疗是唯一可用的治疗方法时，被诊断为晚期。被诊断患有晚期(转移性或不可切除的局部晚期疾病)胆道癌的患者的预后很差。III期和IV期的五年总存活率分别为10％和0％。然而，与单一药剂治疗相比，一线双联化疗显示总体存活率和生活质量有所改善。

用于治疗BTC的最有活性的化疗药物是吉西他滨、氟嘧啶和铂药剂。英国NCRNABC-02研究确定了顺铂和吉西他滨作为BTC患者一线治疗的参考方案。这项随机III期研究有410例患者，比较了顺铂/吉西他滨双联化疗与吉西他滨单药治疗，结果表明：在总体存活期(中值11.7对8.1个月；p<0.001)和无进展存活期(中值8对5个月；p<0.001)方面均有优势。在使用相同治疗方案的日本随机II期研究(BT-22研究)中观察到非常相似的益处，其中用顺铂/吉西他滨记录的中值存活期为11.2个月。鉴于其大小和观察到的存活优势，ABC-02研究的稳健性已经确定了顺铂和吉西他滨的组合作为护理标准，并且已经在英国和国际上广泛采用(例如美国的NCCN指南)。

本发明的一个目的是提供用于治疗癌症的组合疗法。本发明的某些实施方案的一个目的是提供比现有治疗更有效的疗法。

本发明的某些实施方案满足上述目标中的一些或全部。

发明内容

根据本发明，提供了吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其与基于铂的抗癌剂组合用于治疗癌症，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。

本发明还提供了吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，或其药学上可接受的盐或溶剂化物与基于铂的抗癌剂的组合，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。所述组合通常将用于治疗癌症。

本发明还提供了基于铂的抗癌剂，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂，其与吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物组合用于治疗癌症。

本发明还提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用治疗有效量的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物与基于铂的抗癌剂的组合，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。

本发明还提供了吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其与基于铂的抗癌剂组合用于制备治疗癌症的药物，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。

本发明还提供了吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其用于制造与基于铂的抗癌剂组合治疗癌症的药物，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。

本发明还提供了基于铂的抗癌剂，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂，其用于制造与吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物组合治疗癌症的药物。

本发明还提供了一种药物制剂，其包含吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及基于铂的抗癌剂，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂，和至少一种药学上可接受的赋形剂。

所述制剂可以含有单位剂量的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯和单位剂量的基于铂的抗癌剂。两个单位剂量可以相同，但通常不同。

本发明还提供了一起使用的两种分开的制剂，所述制剂是：

第一制剂，其包含吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物，和至少一种药学上可接受的赋形剂；和

第二制剂，其包含基于铂的抗癌剂，和至少一种药学上可接受的赋形剂，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。

所述制剂可以是试剂盒的形式。所述制剂(即包含所述制剂的试剂盒)通常将用于治疗癌症。

本发明的治疗基于以下事实：两种剂(即，吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯和基于铂的抗癌剂)的组合在组合施用时显示出比单独施用的情况更高的效率。在本发明的背景中，术语“组合”或“一起”是指以下事实：在治疗期间向相同患者施用这两种剂。在以分开的剂提供的意义上，施用可以是分开的，或者施用可以在相同的剂中。施用可以同时或按顺序进行，或者是一个紧接一个或者是在两种剂的施用之间有一段时间间隔。因此，在本讨论的背景中，术语“单独”意指在治疗期间仅施用一种活性剂并且不施用其他剂，即使在一段时间间隔之后。

根据本发明的组合疗法包括在整个治疗期间以相对于单独施用一种活性剂而言提高整体治疗结果的方式共同施用或相继施用两种活性剂。用于该目的的药物制剂可以是单独的，即分开的制剂，或以单一制剂形式存在。所述制剂或每种制剂可以是液体形式，稀释的或准备稀释的，或者可以是固体形式。可以提供固体形式用于溶解在合适的溶剂介质中。固体形式也可以以浓缩的单位剂量形式呈现，如片剂、胶囊、锭剂(losange)等。

特别地，本发明人发现顺铂对某些癌细胞系敏感，例如，膀胱癌细胞系HT1376，与NUC-1031具有很强的协同作用。此外，本发明人发现，在体内，NUC-1031和顺铂的组合导致dFdCTP的细胞内t_1/2增加，并且已显示该组合可有效治疗胆道癌。

所观察到的吉西他滨和铂的协同作用归因于吉西他滨和NUC-1031的活性代谢物dFdCTP(吉西他滨三磷酸酯)的水平增加了1.5倍(van Moorsel等人,British Journal ofCancer,1999,80(7),981-990)，这已被描述为脱氧胞苷激酶(dCK)活性改善的结果。当与吉西他滨组合时，已经提出两种基于铂的机制来增加dCK介导的dFdCTP水平。第一种细胞机制涉及核糖核苷酸还原酶抑制，该酶负责脱氧胞苷三磷酸(dCTP)合成，已知其抑制dCK(Bajetta等人,Annals of Oncology,2003,14,242-247)。在第二种分子机制中，铂诱导的DNA损伤激活核苷酸切除修复过程，其需要脱氧核糖核苷酸(dNTP)。转而参与dNTPs合成的几种酶被上调，包括dCK(van Moorsel等人，1999)。将NUC-1031合成为单磷酸酯形式的核苷酸类似物，其绕过dCK依赖性dFdCTP形成，因此所观察到的组合了NUC-1031和顺铂的协同作用似乎源于不同且尚未知的途径。

在某些优选的实施方案中，基于铂的抗癌剂是顺铂。

吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯可以是磷酸酯非对映异构体的混合物，或者其可以是基本上非对映异构纯形式的(S)-差向异构体或(R)-差向异构体。为了本发明的目的，将“基本上非对映异构纯”定义为非对映异构体纯度大于约90％。如果以基本上非对映异构纯形式存在，则吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的非对映异构体纯度可以大于95％，98％，99％或甚至99.5％。

癌症可能是实体肿瘤癌症。癌症可以是选自以下的癌症：胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，结肠直肠癌，肺癌，胆道癌(例如选自胆囊癌、远端胆管癌、壶腹部癌、肝门部胆管细胞癌和肝内胆管细胞癌的癌症)，前列腺癌，肾癌，淋巴瘤，白血病，宫颈癌，胸腺癌，原发部位未知癌，食管癌，间皮瘤，肾上腺癌，子宫癌，输卵管癌，子宫内膜癌，睾丸癌，头颈癌，中枢神经系统癌和生殖细胞肿瘤。

在某些优选的实施方案中，癌症选自膀胱癌，卵巢癌，非小细胞肺癌和胆道癌(例如选自胆囊癌、远端胆管癌、壶腹部癌、肝门部胆管细胞癌和肝内胆管细胞癌的癌症)。在某些优选的实施方案中，癌症选自膀胱癌，卵巢癌和胆道癌(例如选自胆囊癌、远端胆管癌、壶腹部癌、肝门部胆管细胞癌和肝内胆管细胞癌的癌症)。在某些优选的实施方案中，癌症是胆道癌。在其他优选的实施方案中，癌症是膀胱癌。其中基于铂的抗癌剂是顺铂的组合特别优选用于治疗这些特定的癌症。在某些优选的实施方案中，癌症选自卵巢癌，非小细胞肺癌和胆道癌(例如选自胆囊癌、远端胆管癌、壶腹部癌、肝门部胆管细胞癌和肝内胆管细胞癌的癌症)并且基于铂的抗癌剂是顺铂。在某些优选的实施方案中，癌症选自卵巢癌和胆道癌(例如选自胆囊癌、远端胆管癌、壶腹部癌、肝门部胆管细胞癌和肝内胆管细胞癌的癌症)，并且基于铂的抗癌剂是顺铂。因此，可能癌症是胆道癌，基于铂的抗癌剂是顺铂。同样地，可能癌症是膀胱癌，基于铂的抗癌剂是顺铂。

癌症可能以前未接受过化疗。或者，癌症(例如胆道癌或膀胱癌)可能是复发的。因此，在一个或多个先前的化学疗程(其可能包括或不包括用选自顺铂、吉西他滨或吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的药剂治疗)后，癌症可能已经复发或进展。癌症(例如胆道或膀胱癌)可能对基于铂的抗癌剂(例如顺铂)具有难治性、耐药性或部分耐药性。或者，癌症(例如胆道癌或膀胱癌)可能对基于铂的抗癌剂(例如顺铂)敏感。癌症(例如胆道或膀胱癌)可能是转移性的。

溶剂化物通常是水合物。因此，吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯可以是盐或水合物或盐的溶剂化物(例如水合物)的形式。吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯可能不是盐的形式，也可能不是溶剂化物或水合物的形式。优选地，吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯是游离碱的形式。

组合的施用可能提供超过10小时的dFdCTP的细胞内t_1/2。组合的施用可能提供超过15小时的dFdCTP的细胞内t_1/2。组合的施用可能提供超过18小时的dFdCTP的细胞内t_1/2。组合的施用可能提供超过20小时的dFdCTP的细胞内t_1/2。

吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯和基于铂的抗癌剂可以同时施用或者可以相继施用。当它们同时施用时，它们可以以单一制剂施用或者它们可以以分开的制剂施用。当它们相继施用时，它们可以在同一天施用，或者它们可以在治疗期间内分开的日期施用。在治疗期间的某些天，吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯和基于铂的抗癌剂可以同时施用或者在同一天施用，并且在治疗计划中的某些其他日期施用这两种剂中的单一一种。

NUC-1031制剂

吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯可以肠胃外施用，例如静脉内、皮下或肌肉内。优选地，吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯静脉内施用。

吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯可以作为水性制剂肠胃外施用，所述水性制剂任选地还包含极性有机溶剂，例如DMA。在肠胃外(例如静脉内)施用的情况下，所述制剂优选还包含极性非质子有机溶剂，例如DMA。

吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯可以包含在制剂中。所述制剂可以在施用前不久，即在施用前多达48小时(例如多达24、12或2小时)，以预定量稀释。

所述制剂还可以包含一种或多种药学上可接受的增溶剂，例如，药学上可接受的非离子型增溶剂。增溶剂也可以被称为表面活性剂或乳化剂。示例性增溶剂包括聚乙氧基化脂肪酸和脂肪酸酯及其混合物。合适的增溶剂可以是或包含聚乙氧基化蓖麻油(例如以商品名ELP销售的)；或者可以是或包含聚乙氧基化羟基硬脂酸(例如以商品名或HS15销售的)；或者可以是或包含聚乙氧基化(例如聚氧乙烯(20))脱水山梨糖醇单油酸酯(例如以商品名80销售的)。

在某些优选的实施方案中，所述制剂包含多于一种药学上可接受的增溶剂。

所述制剂还可以包含水性溶媒。所述制剂可以随时施用，在这种情况下，其通常将包含水性溶媒。

尽管优选将吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯配制成用于肠胃外施用，例如，用于静脉内、皮下或肌肉内施用，但在本发明的某些实施方案中，它可以口服施用。优选地，该制剂用于静脉内施用。施用可以通过中心静脉施用装置(CVAD)或者可以通过外周静脉进行。

适于施用的制剂中吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的总剂量将通常为250mg至3g，例如1g至2g，例如约1.5g。

储备溶液制剂

极性非质子溶剂(例如DMA)可以占制剂体积的30％或更多。因此，极性非质子溶剂(例如DMA)可能占制剂体积的50％或更多，例如60％或更多。极性非质子溶剂(例如DMA)可以占制剂体积的95％或更少，例如90％或更少。制剂还可包含水性溶媒(例如盐水)。水性溶媒可以占制剂体积的50％或更少，例如制剂体积的30％或更少。通常，水性溶媒(例如盐水)将占制剂的体积的5％或更多，例如10％或更多。

制剂溶剂中吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的浓度可为每毫升500mg或更少。浓度可以为每毫升100mg或更多。优选地，浓度为每毫升200mg至300mg，例如225mg至275mg，例如约250mg。

某些优选的制剂包含：

30％至95％体积的DMA；

5％至50％体积的水性溶媒；以及

每毫升100mg至400mg(例如100mg至300mg)的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯。

更优选的制剂包含：

70％至90％体积的DMA；

10％至30％体积的水性溶媒(例如盐水)；以及

每毫升200mg至300mg的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯。

前四段中描述的制剂，其中极性非质子溶剂(例如DMA)作为主要组分存在，可以用于施用(例如通过输注或注射)制剂，而无需在所述施用之前将其稀释。例如，它们可以通过CVAD进行施用。当通过CVAD施用时，通常不稀释制剂。

或者，这些制剂可以是储备溶液，所述储备溶液在使用前稀释以形成适于施用(例如通过外周静脉)的制剂。

表面活性剂溶液制剂

极性非质子溶剂(例如DMA)可占制剂体积的10％或更多，例如20％或更多。因此，极性非质子溶剂(例如DMA)可能占制剂体积的80％或更少，例如70％或更少。极性非质子溶剂(例如DMA)可占制剂体积的55％或更少。制剂还可包含一种或多种增溶剂(例如一种或多种聚乙氧基化脂肪酸)。所述一种或多种增溶剂可占制剂体积的70％或更少，例如制剂体积的60％或更少。通常，所述一种或多种增溶剂占制剂体积的20％或更多，例如35％。制剂还可包含水性溶媒，其含量为例如1％至15％体积或5％至12％体积。

制剂溶剂中吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的浓度可以为每毫升200mg或更少，例如150mg或更少或130mg或更少。浓度可以为每毫升40mg或更多，例如60mg或更多。优选地，浓度为每毫升70mg至120mg，例如每毫升约100mg。

某些优选的制剂包含：

20％至70％体积的DMA；

20％至70％体积的一种或多种增溶剂；以及

每毫升50mg至150mg的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯。制剂还可包含水性溶媒，其含量为例如1％至15％体积。

某些特别优选的制剂包含：

30％至60％体积的DMA；

10％至35％体积的第一增溶剂；

10％至35％体积的第二增溶剂；

2％至15％体积的水性溶媒；以及

每毫升50mg至150mg的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯。第一种增溶剂可以是聚乙氧基化蓖麻油(例如以商品名ELP出售的)。第二增溶剂可以是聚乙氧基化脱水山梨糖醇单油酸酯(例如以商品名80出售的)。

制剂可包含：

35％至50％体积的DMA；

15％至30％体积的第一增溶剂；

15％至30％体积的第二增溶剂；

5％至12％体积的水性溶媒；以及

每毫升50mg至150mg的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯。

前五段中描述的表面活性剂溶液制剂，其中极性非质子溶剂(例如DMA)作为主要组分存在，通常在施用前用水性溶媒稀释。它们通常由上述储备溶液制备，然后进一步稀释以备施用。稀释后，它们可以通过外周静脉施用。

这些制剂可以通过用含有增溶剂的溶液稀释不含任何增溶剂的储备溶液制剂来形成。

输注溶液制剂

极性非质子溶剂(例如DMA)可以占制剂体积的0.1％或更多，例如0.5％或更多或1％或更多。因此，DMA可以占制剂体积的12％或更少，例如10％或更少或8％或更少。制剂还可包含水性溶媒(例如盐水或WFI)。水性溶媒可以占制剂体积的99.5％或更少，例如制剂体积的99％或98％或更少。通常，水性溶媒占制剂体积的80％或更多，例如95％或更多。制剂还可包含一种或多种增溶剂(例如一种或多种聚乙氧基化脂肪酸)。所述一种或多种增溶剂可以占制剂体积的12％或更少，例如，制剂体积的10％或更少或8％或更少。通常，所述一种或多种增溶剂将占制剂体积的0.1％或更多，例如0.5％或更多或1％或更多。

制剂溶剂中吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的浓度可以为每毫升15.0mg或更少或每毫升12.0mg或更少，例如每毫升10mg或更少或8mg或更少。浓度可以为每毫升1.0mg或更多，例如2.0mg或更多。优选地，浓度为每毫升2.5mg至12mg，例如每毫升3mg至11mg。

某些优选的制剂包含：

0.1％至10％体积的DMA；

0.1％至10％体积的一种或多种增溶剂；

85％至99％体积的水性溶媒；以及

每毫升2.0mg至12.0mg的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯。

某些特别优选的制剂包含：

1％至8％体积的DMA；

0.5％至4％体积的第一增溶剂；

0.5％至4％体积的第二增溶剂；

85％至99％体积的水性溶媒；以及

每毫升2.0mg至12.0mg的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯。第一种增溶剂可以是聚乙氧基化蓖麻油(例如以商品名ELP出售的)。第二增溶剂可以是聚乙氧基化脱水山梨糖醇单油酸酯(例如以商品名80出售的)。

前四段中描述的输注溶液制剂，其中极性非质子溶剂(例如DMA)作为次要组分(minor component)存在，通常在施用前至多48小时通过用水性溶媒稀释吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的浓缩溶液来制备。所述浓缩溶液可以是吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯在极性非质子溶剂中的溶液(参见上文“储备溶液制剂”标题下的内容)，或者是吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯在极性非质子溶剂和增溶剂的混合物中的溶液(参见上文“表面活性剂溶液制剂”标题下的内容)。其中极性非质子溶剂(例如DMA)作为次要组分存在的这些制剂可以通过外周静脉施用。所述制剂中低浓度的极性非质子溶剂(例如DMA)意味着它们在外周施用时不会引起疼痛。

试剂盒

本发明提供了用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包含：

第二制剂，其包含基于铂的抗癌剂，和至少一种药学上可接受的赋形剂。

在某些具体的实施方案中，试剂盒可以包含：

第一制剂，其包含：

30％至95％体积的DMA；

5％至50％体积的水性溶媒；和

每毫升100mg至400mg(例如100mg至300mg)的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯；

第二制剂，其包含基于铂的抗癌剂和至少一种药学上可接受的赋形剂；和

第三制剂，其包含：

30％至95％体积的DMA；

5％至50％体积的水性溶媒。

所述第三制剂通常不包含活性成分。因此，它通常不包含吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，也不包含基于铂的抗癌剂。第三制剂可以在两个分开的容器中或在单一容器中被提供。

前两段中提到的试剂盒可用于其中吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯通过CVAD静脉内施用的情况。在施用第一制剂之前，CVAD用第三制剂冲洗。通过避免活性制剂与水性介质(例如盐水冲洗溶液)的直接接触来减轻吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯在静脉内施用装置(即CVAD)中或入口处沉淀的风险。还可以在施用第一制剂后用第三制剂冲洗CVAD。这进一步防止了沉淀。

在某些具体的实施方案中，试剂盒可以包含：

第一制剂，其包含：

30％至95％体积的DMA；

5％至50％体积的水性溶媒；和

第三制剂，其包含：

10％至50％体积的DMA；

20％至60％体积的第一增溶剂；

20％至60％体积的第二增溶剂。

通常，所述第三制剂不包含任意活性成分。因此，它通常不包含吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，也不包含基于铂的抗癌剂。

前两段中提到的试剂盒可用于其中吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯通过外周静脉静脉内施用的情况。在施用前多达48小时，例如多达24小时，用第三制剂稀释第一制剂以形成第四制剂。在施用之前，进一步用水性溶媒稀释第四制剂至所需浓度，以形成用于通过输注或注射向患者施用的制剂。为了实现在吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯沉淀方面稳定的外周施用制剂，通常希望包括增溶剂。然而，在这种增溶剂的存在下，吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯可能易于降解。因此，在本发明的某些实施方案中，两阶段稀释法是优选方式，由此实现用于外周施用的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯制剂。

施用吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的示例性方法

施用吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的示例性方法如下：

在DMA和0.9％盐水的80:20(体积)混合物中形成250mg/mL的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯(S-差向异构体、R差向异构体或其混合物)溶液。该储备溶液制剂通常足够稳定以长期储存和运输protide。该储备溶液制剂可通过CVAD(例如Hickman置管(Hickman line)，PICC置管(PICC line)，Portacath)，例如以20ml/小时的速度，向患者静脉内施用。在施用包含吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的制剂之前和之后，通常用DMA和0.9％盐水的80:20(体积)混合物(下述实施例4中提及的冲洗溶液)冲洗静脉内施用装置。这有助于减轻与盐水冲洗接触时静脉内施用装置中吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的任何潜在沉淀的风险。或者，当向外周静脉静脉内施用是优选的施用方法时，则用稀释溶液将储备溶液制剂稀释至100mg/mL，所述稀释溶液为DMA:80:ELP的20％:40％:40％混合物(例如，将6.7mL的80:20DMA:0.9％盐水中的250mg/ml吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯加入到10mL的DMA:80:ELP稀释剂溶液中)。所得(表面活性剂溶液)制剂通常稳定长达5天。然后通过用0.9％盐水将该表面活性剂溶液制剂稀释至所需浓度来制备输注溶液制剂。

实施例中描述的ABC-08研究中施用的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯使用该施用方法进行，其中吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯的S差向异构体通过CVAD施用。

基于铂的抗癌剂的制剂

基于铂的抗癌剂可以肠胃外施用，例如静脉内、腹膜内、皮下或肌内。优选地，将基于铂的抗癌剂静脉内施用。

基于铂的抗癌剂通常以水性溶液形式施用，例如无菌的1mg/mL水性溶液。水性溶液通常是盐溶液(例如0.9％盐水溶液)。水性溶液还可包含甘露醇(例如，以10mg/mL)。

当基于铂的抗癌剂(例如顺铂)以小于50mg/mL的剂量施用时，其通常在15-60分钟内作为输注液从100-250mL袋中施用。当基于铂的抗癌剂(例如顺铂)以大于或等于50mg/mL的剂量施用时，其通常在15至60分钟内作为输注液从250至500mL袋中施用。

关于顺铂施用的进一步信息可在例如美国FDA批准的商标获得。

剂量方案

NUC-1031可以在21天的周期中施用两次。基于铂的抗癌剂(例如顺铂)可在该21天的周期中施用两次。在优选的剂量方案中，在21天周期的第1天和第8天施用NUC-1031。还可以在该21天周期的第1天和第8天施用基于铂的抗癌剂(例如顺铂)。可以在21天周期的第1天和第8天同时施用NUC-1031和基于铂的抗癌剂(例如顺铂)。

每次施用事件中施用的NUC-1031的剂量优选在250mg/m²至1250mg/m²的范围。每次施用事件中施用的NUC-1031的剂量可以在300mg/m²至1000mg/m²的范围。每次施用事件中施用的NUC-1031的剂量可以在400mg/m²至900mg/m²的范围，例如600mg/m²至800mg/m²，或300mg/m²至750mg/m²。每次施用事件中施用的NUC-1031的剂量可以为约750mg/m²。

在每次施用事件中施用的基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量可以是10mg/m²至200mg/m²。在每次施用事件中施用的基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量可以是20mg/m²至100mg/m²。在每次施用事件中施用的基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量可以是20mg/m²至60mg/m²。在每次施用事件中施用的基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量可以是30mg/m²至90mg/m²。

在每个治疗周期中，NUC-1031的剂量，或基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量，或两种化合物的剂量保持基本上相同。例如，在多个治疗周期中，可以使用每个施用事件约750mg/m²的NUC-1031剂量，和约50mg/m²的顺铂剂量。

或者，NUC-1031的剂量，或基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量，或两种化合物的剂量从第一治疗周期至第二(或随后的)治疗周期可能降低。例如，每次施用事件中施用的NUC-1031的剂量可以从第一治疗周期的约750mg/m²降低至第二(或随后的)治疗周期的约625mg/m²。基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量可以从第一治疗周期的约90mg/m²，降低至第二(或随后的)治疗周期的约60mg/m²或至约50mg/m²。

合适的治疗方案可以使用NUC-1031的剂量和基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量自第一治疗周期至第二(或随后的)治疗周期的降低(如前段所述)。例如，每次施用事件中施用的NUC-1031的剂量可以从第一治疗周期的约750mg/m²降低至第二(或随后的)治疗周期的约625mg/m²，并且基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量可以从第一治疗周期的90mg/m²，降低至第二(或随后的)治疗周期的约60mg/m²或至约50mg/m²。

在NUC-1031的剂量从第一治疗周期至第二或随后的治疗周期降低的情况下(例如从每次施用事件约750mg/m²，至每次施用事件约625mg/m²)，基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量可以在第一和第二或随后的治疗周期之间保持相同(例如，每次周期约50mg/m²)。

在NUC-1031的剂量从第一至第二或随后的治疗周期中保持不变的情况下(例如每次施用事件约625mg/m²)，基于铂的抗癌剂(例如顺铂)的剂量可以在第一和第二或随后的治疗周期之间有所降低(例如，从第一治疗周期的90mg/m²，降低至第二或随后的治疗周期的约60mg/m²或至约50mg/m²)。

预计上述剂量方案提供了一个平衡，其中组合中每种组分的毒性处于可接受的水平，但仍然能观察到来自组合的治疗益处。

上述剂量方案可以使患者的存活率提高。它可以在超过50％的患者中使疾病稳定。它可以提供一个或多个上述益处，并具有可接受水平的副作用。所述剂量可以使得所述组合的dFdCTP的AUC高于作为单一药剂施用的NUC-1031。所述剂量可以使得所述组合的dFdCTP的AUC与C_max的比例高于作为单一药剂施用的NUC-1031。

附图说明

以下将参照附图进一步描述本发明的实施方案，其中：

图1示出了使用Chiralpak AD柱和正庚烷/IPA梯度溶剂体系通过HPLC来分离化合物3和4的色谱图。

图2示出了在膀胱癌细胞系HT1376中使用顺铂/NUC-1031的曲线移位方法所显示的协同效应。

具体实施方式

“同时”旨在意指“基本上同时”，例如相隔不到30分钟。“相继”意指施用相隔超过30分钟。

在整篇说明书中，术语S-差向异构体或S-非对映异构体是指吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-(S)-磷酸酯。同样，在整篇说明书中，术语R-差向异构体或R-非对映异构体是指吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-(R)-磷酸酯。

本发明的化合物可以以药学上可接受的盐的形式获得、储存和/或施用。合适的药学上可接受的盐包括但不限于药学上可接受的无机酸如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸的盐，或药学上可接受的有机酸例如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡萄糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸(edetic acid)、硬脂酸，棕榈酸，油酸、月桂酸、泛酸、单宁酸、抗坏血酸和戊酸的盐。合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星青霉素盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、醇胺盐、钾盐、钠盐、氨基丁三醇盐和锌盐。也可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐、半草酸盐和半钙盐。在某些实施方案中，特别是那些适用于s-差向异构体的实施方案中，化合物为HCl盐或半草酸盐的形式。

本发明的化合物可以以单晶体形式或以晶体混合物形式存在，或者它们可以是无定形的。因此，意图用于药物用途的本发明化合物可以作为结晶或无定形产品施用。它们可以通过例如沉淀、结晶、冷冻干燥或喷雾干燥或蒸发干燥等方法获得，例如作为固体塞(solid plug)、粉末或薄膜。微波或射频干燥可用于此目的。

对于本发明的上述化合物，施用剂量当然会随所用化合物、施用方式、所需治疗和所示病症而变化。例如，如果本发明化合物肠胃外施用，则本发明化合物的剂量范围可以为0.1至5g/m²，例如0.5至2g/m²。根据众所周知的医学原理，本发明化合物用于治疗目的的剂量大小将根据病况的性质和严重性、动物或患者的年龄和性别以及施用途径而自然变化。

预期本发明化合物的剂量水平、给药频率和治疗持续时间根据制剂和临床适应症、患者的年龄和共患疾病(co-morbid medical condition)而不同。

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以单独使用，但通常以药物组合物的形式施用，所述药物组合物中本发明的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体组合。例如，Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs",M.E.Aulton,Churchill Livingstone,1988中描述了用于选择和制备合适药物制剂的常规步骤。

根据本发明化合物的施用方式，用于施用本发明化合物的药物组合物将优选包含0.05至99％w(重量百分比)的本发明化合物，更优选0.05至80％w的本发明化合物，还更优选0.10至70％w的本发明化合物，甚至更优选0.10至50％w的本发明化合物，所有重量百分比均基于总组合物。

对于口服施用，可以将本发明的化合物与佐剂或载体混合，所述佐剂或载体例如乳糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇；淀粉，例如马铃薯淀粉，玉米淀粉或支链淀粉；纤维素衍生物；粘合剂，例如明胶或聚乙烯吡咯烷酮；和/或润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸钙，聚乙二醇，蜡，石蜡等，然后压制成片剂。如果需要包衣片剂，则如上所述制备的片芯可用浓缩的糖溶液包衣，所述糖溶液可包含例如阿拉伯树胶、明胶、滑石和二氧化钛。或者，片剂可以用溶解在易挥发性有机溶剂中的合适的聚合物包衣。

为了制备软明胶胶囊，本发明的化合物可以与例如植物油或聚乙二醇混合。硬明胶胶囊可以含有化合物颗粒，使用上述片剂的赋形剂。也可将本发明化合物的液体或半固体制剂填充入硬明胶胶囊中。

用于口服应用的液体制剂可以是糖浆剂或混悬剂的形式，例如含有本发明化合物的溶液，其余为糖和乙醇、水、甘油和丙二醇的混合物。任选地，这样的液体制剂可以含有着色剂、调味剂、甜味剂(例如糖精)、防腐剂和/或羧甲基纤维素作为增稠剂或本领域技术人员已知的其它赋形剂。

对于肠胃外(例如静脉内)施用，化合物可以作为无菌水性或油性溶液施用。本发明的化合物是非常亲脂性的。因此，水性制剂通常也将含有药学上可接受的极性有机溶剂。

根据众所周知的医学原理，本发明化合物用于治疗目的的剂量大小将根据病况的性质和严重性、动物或患者的年龄和性别以及施用途径而自然变化。

预期本发明化合物的剂量水平、给药频率和治疗持续时间根据制剂和临床适应症、患者的年龄和共患疾病而不同。

本发明还包括化合物2、3或4的所有药学上可接受的同位素标记形式，其中一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现的优势同位素(predominant isotope)的原子质量或质量数的原子所替代。

适合包含在本发明化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，例如²H和³H，碳的同位素，例如¹¹C、¹³C和¹⁴C，氯的同位素，例如³⁶Cl，氟的同位素，例如¹⁸F，碘的同位素，例如¹²³I和¹²⁵I，氮的同位素，例如¹³N和¹⁵N，氧的同位素，例如¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O，磷的同位素，例如如³²P，和硫的同位素，例如³⁵S。

某些同位素标记的化合物，例如掺入放射性同位素的化合物，可用于药物和/或底物组织分布研究。鉴于其易于掺入和完备的检测手段，放射性同位素氚(即³H)和碳-14(即¹⁴C)特别适用于此目的。

用较重的同位素例如氘(即²H)取代可以提供由较大的代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如体内半衰期增加或剂量需求降低，因此在某些情况下可能是优选的。

用正电子发射同位素如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N取代可用于正电子发射断层扫描(Positron Emission Topography,PET)研究以检查底物受体占有率。

同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与使用合适的同位素标记的试剂代替先前使用的未标记的试剂所描述的那些类似的方法来制备。

除了吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯和基于铂的抗癌化合物之外，治疗方法或用于治疗癌症的化合物还可以涉及常规手术或放疗或化疗。这样的化疗可以包括施用一种或多种其他活性剂。

因此，每个或任一药物制剂都可以包含另一种活性剂。

所述一种或多种其他活性剂可以是以下类别的抗肿瘤剂中的一种或多种：

(i)抗增殖/抗肿瘤药物及其组合，例如烷化剂(例如环磷酰胺，氮芥，苯达莫司汀(bendamustin)，美法仑(melphalan)，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，白消安(busulphan)，替莫唑胺(temozolamide)和亚硝基脲)；抗代谢物(例如，吉西他滨和叶酸拮抗剂如氟嘧啶如5-氟尿嘧啶和替加氟(tegafur)，雷替曲塞(raltitrexed)，甲氨蝶呤(methotrexate)，培美曲塞(pemetrexed)，阿糖胞苷(cytosine arabinoside)和羟基脲)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱(vincristine)，长春花碱(vinblastine)，长春地辛(vindesine)和长春瑞滨(vinorelbine)以及紫杉烷类如紫杉酚和泰索帝(taxotere)和polo激酶(polokinase)抑制剂)；蛋白酶体抑制剂，例如卡非佐米(carfilzomib)和硼替佐米(bortezomib)；干扰素疗法；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素如依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)，安吖啶(amsacrine)，拓扑替康，米托蒽醌(mitoxantrone)和喜树碱(camptothecin))；

(ii)细胞生长抑制剂(cytostatic agent)，例如抗雌激素药(例如他莫昔芬(tamoxifen)，氟维司群(fulvestrant)，托瑞米芬(toremifene)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)和吲哚昔芬(iodoxyfene))，抗雄激素药(例如比卡鲁胺(bicalutamide)，氟他胺(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)和醋酸环丙孕酮(cyproterone acetate))，LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林(goserelin)，亮丙瑞林(leuprorelin)和布舍瑞林(buserelin))，孕激素(例如醋酸甲地孕酮(megestrolacetate))，芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑(anastrozole)，来曲唑(letrozole)，伏氯唑(vorazole)和依西美坦(exemestane))和5α-还原酶抑制剂如非那甾胺(finasteride)；

(iii)抗侵袭剂，例如达沙替尼(dasatinib)和波舒替尼(bosutinib)(SKI-606)；以及金属蛋白酶抑制剂，尿激酶型纤溶酶原激活物受体功能抑制剂或乙酰肝素酶抗体；

(iv)生长因子功能抑制剂：例如，这样的抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体，例如，抗erbB2抗体曲妥珠单抗(trastuzumab)[Herceptin^TM]，抗EGFR抗体帕尼单抗(panitumumab)，抗erbB1抗体西妥昔单抗(cetuximab)，酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼(gefitinib)，厄洛替尼(erlotinib)和6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI1033)，erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼(lapatinib))；肝细胞生长因子家族抑制剂；胰岛素生长因子家族抑制剂；细胞凋亡调控蛋白质的调节剂(例如Bcl-2抑制剂)；血小板衍生的生长因子家族抑制剂，例如伊马替尼(imatinib)和/或尼罗替尼(nilotinib)(AMN107)；丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号传导抑制剂如法呢基转移酶抑制剂，例如索拉非尼(sorafenib)，替比法尼(tipifarnib)和洛那法尼(lonafarnib))，通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号传导抑制剂，c-kit抑制剂，abl激酶抑制剂，PI3激酶抑制剂，PIt3激酶抑制剂，CSF-1R激酶抑制剂，IGF受体，激酶抑制剂；极光激酶抑制剂和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，例如CDK2和/或CDK4抑制剂；

(v)抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子作用的那些，[例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(bevacizumab)(Avastin^TM))；沙利度胺(thalidomide)；来那度胺(lenalidomide)；以及例如VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，例如凡德他尼(vandetanib)，瓦他拉尼(vatalanib)，舒尼替尼(sunitinib)，阿西替尼(axitinib)和帕唑帕尼(pazopanib)；

(vi)基因疗法，包括例如替代异常基因例如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法；

(vii)免疫疗法，包括例如抗体疗法，例如阿仑单抗(alemtuzumab)，利妥昔单抗(rituximab)，替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)和奥法木单抗(ofatumumab)；干扰素如干扰素α；白细胞介素例如IL-2(阿地白介素(aldesleukin))；白细胞介素抑制剂，例如IRAK4抑制剂；癌症疫苗，包括预防性和治疗性疫苗，如HPV疫苗，例如加德西(Gardasil)，希瑞适(Cervarix)，Oncophage和Sipuleucel-T(Provenge)；和toll样受体调节剂，例如TLR-7或TLR-9激动剂；和

(viii)细胞毒性剂，例如氟达拉滨(fludaribine)(福达华(fludara))，克拉屈滨(cladribine)，喷司他丁(pentostatin)(Nipent^TM)；

(ix)类固醇如皮质类固醇，包括糖皮质激素和盐皮质激素，例如阿氯米松(aclometasone)，阿氯米松双丙酸酯，醛固酮，安西奈德(amcinonide)，倍氯米松(beclomethasone)，倍氯米松双丙酸酯，倍他米松(betamethasone)，倍他米松双丙酸酯，倍他米松磷酸钠，倍他米松戊酸酯，布地奈德(budesonide)，氯倍他松(clobetasone)，氯倍他松丁酸酯，氯倍他索丙酸酯，氯泼尼醇(cloprednol)，可的松(cortisone)，醋酸可的松，可的伐唑(cortivazol)，去氧皮质酮(deoxycortone)，地奈德(desonide)，去羟米松(desoximetasone)，地塞米松(dexamethasone)，地塞米松磷酸钠，地塞米松异烟酸酯，二氟可龙(difluorocortolone)，氟氯洛龙(fluclorolone)，氟米松(flumethasone)，氟尼缩松(flunisolide)，氟轻松(fluocinolone)，氟轻松安奈德(fluocinolone acetonide)，醋酸氟轻松(fluocinonide)，氟考丁酯(fluocortin butyl)，氟可的松(fluorocortisone)，氟可龙(fluorocortolone)，氟可龙己酸酯(fluocortolone caproate)，氟可龙新戊酸酯(fluocortolone pivalate)，氟米龙(fluorometholone)，氟泼尼定(fluprednidene)，氟泼尼定乙酸酯，氟氢缩松(flurandrenolone)，氟替卡松(fluticasone)，氟替卡松丙酸酯(fluticasone propionate)，哈西奈德(halcinonide)，氢化可的松(hydrocortisone)，氢化可的松乙酸酯，氢化可的松丁酸酯，氢化可的松醋丙酯(hydrocortisone aceponate)，氢化可的松丁丙酸酯(hydrocortisone buteprate)，氢化可的松戊酸酯，艾可米松(icomethasone)，醋丁艾可米松(icomethasone enbutate)，甲泼尼松(meprednisone)，甲泼尼龙(methylprednisolone)，莫米松(mometasone)帕拉米松(paramethasone)，糠酸莫米他松一水合物(mometasone furoate monohydrate)，泼尼卡酯(prednicarbate)，泼尼松龙(prednisolone)，泼尼松(prednisone)，替可的松(tixocortol)，替可的松新戊酸酯，曲安奈德(triamcinolone)，醋酸曲安奈德(triamcinolone acetonide)，曲安奈德醇及其各自药学上可接受的衍生物。可以使用类固醇的组合，例如本段中提及的两种或更多种类固醇的组合；

(x)靶向疗法，例如PI3Kd抑制剂，例如爱拉利西(idelalisib)和哌立福辛(perifosine)；或抑制PD-1、PD-L1和CAR T的化合物。

所述一种或多种其他活性剂也可以是抗生素(例如蒽环类药物(anthracyclines)如阿霉素(adriamycin)，博莱霉素(bleomycin)，多柔比星(doxorubicin)，道诺霉素(daunomycin)，表柔比星(epirubicin)，伊达比星(idarubicin)，丝裂霉素-C，放线菌素和光神霉素(mithramycin))。

贯穿本说明书的描述和权利要求书，词语“包含”和“含有”及其变体意指“包括但不限于”，并且其不旨在(且不是)排除其他部分、添加剂、组分、整数或步骤。贯穿本说明书的描述和权利要求书，除非上下文另有要求，否则单数涵盖复数。特别地，在使用不定冠词的情况下，除非上下文另有要求，否则说明书应被理解为考虑复数以及单数。

结合本发明的特定方面、实施方案或示例描述的特征、整体、特性、化合物、化学部分或组应被理解为适用于本文所述的任意其它方面、实施方案或示例，除非与其不兼容。本说明书(包括任意所附权利要求、摘要和附图)中公开的所有特征和/或如此公开的任意方法或过程的所有步骤可以任意组合，除了这些特征和/或步骤中的至少一些相互排斥的组合之外。本发明不限于任意前述实施方案的细节。本发明延伸至本说明书(包括任意所附权利要求书、摘要和附图)中公开的任一新特征或任意新特征组合，或如此公开的任意方法或过程的任一新步骤或任意新步骤组合。

读者的关注是针对所有与本申请有关的与本说明书同时提交或在本说明书之前提交的文章和文件，并且这些文章和文件在本说明书中公开供公众查阅，并且所有这些文章和文件的内容通过引用并入本文。

实施例1-NUC-1031的单一非对映异构体

可在以下条件下通过HPLC分离(R)和(S)异构体：

设备：具有DAD检测器的Agilent 1200^TM系列

流速：1.0mL/min

柱：Chiralpak AD^TM；250×4.6mm ID(正相)

温度：环境

颗粒大小：20μm

进料：溶于甲醇；10g/L

溶剂：正庚烷/IPA10->50％异丙醇

色谱图如图1所示。在8.6分钟洗脱(S)-差向异构体，在10.3分钟洗脱(R)-差向异构体。

表征方法和材料：在Bruker Avance500光谱仪上于25℃记录质子(¹H)、碳(¹³C)、磷(³¹P)和氟(¹⁹F)NMR光谱。光谱自动校准至氘代溶剂峰，所有¹³C NMR和³¹P NMR均质子去偶。使用Varian Polaris C18-A(10μM)作为分析柱，使用在35分钟内从100/0至0/100的H₂O/MeOH梯度洗脱，通过HPLC分析可以确定最终化合物的纯度。HPLC分析通过Varian Prostar(LCWorkstation-Varian prostar 335LC检测器)进行。

2'-脱氧-2',2'-二氟-D-胞苷-5'-O-[苯基(苄氧基-L-丙氨酰基)]-(S)-磷酸酯3

(ES+)m/z,实测值：(M+Na⁺)603.14。C₂₅H₂₇F₂N₄O₈NaP预期值：(M⁺)580.47。

³¹P NMR(202MHz,MeOD):δ_P 3.66

¹H NMR(500MHz,MeOD):δ_H 7.58(d,J＝7.5Hz,1H,H-6),7.38–7.32(m,7H,ArH),7.26–7.20(m,3H,ArH),6.24(t,J＝7.5Hz,1H,H-1‘),5.84(d,J＝7.5Hz,1H,H-5),5.20(AB系统,J_AB＝12.0Hz,2H,OCH₂Ph),4.46–4.43(m,1H,H-5‘),4.36–4.31(m,1H,H-5‘),4.25–4.19(m,1H,H-3‘),4.07–4.00(m,2H,H-4‘,CHCH₃),1.38(d,J＝7.2Hz,3H,CHCH₃).

¹⁹F NMR(470MHz,MeOD):δ_F–118.0(d,J＝241Hz,F),–120.24(宽d,J＝241Hz,F).

¹³C NMR(125MHz,MeOD):δ_C 174.61(d,³J_C-P＝5.0Hz,C＝O,酯),167.63(C-NH₂),157.74(C＝O基础),152.10(d,²J_C-P＝7.0Hz,C-Ar),142.40(CH-基础),137.22(C-Ar),130.90,129.63,129.39,129.32,126.32(CH-Ar),124.51(d,¹J_C–F＝257Hz,CF₂),121.47,121.43(CH-Ar),96.67(CH-基础),85.92(宽信号,C-1′),80.31(C-4′),71.27(明显的t,²J_C–F＝23.7Hz,C-3′),68.03(OCH₂Ph),65.73(d,²J_C–P＝5.30Hz,C-5‘),51.66(CHCH₃),20.42(d,³J_C–P＝6.25Hz,CHCH₃).

反相HPLC，用35分钟内从100/0至0/100的H₂O/MeOH洗脱，显示一个非对映异构体峰，t_R＝22.53min。

2'-脱氧-2',2'-二氟-D-胞苷-5'-O-[苯基(苄氧基-L-丙氨酰基)]-(R)-磷酸酯4

³¹P NMR(202MHz,MeOD):δ_P 3.83

¹H NMR(500MHz,MeOD):δ_H 7.56(d,J＝7.5Hz,1H,H-6),7.38–7.31(m,7H,ArH),7.23–7.19(m,3H,ArH),6.26(t,J＝7.5Hz,1H,H-1‘),5.88(d,J＝7.5Hz,1H,H-5),5.20(s,2H,OCH₂Ph),4.49–4.46(m,1H,H-5‘),4.38–4.34(m,1H,H-5‘),4.23–4.17(m,1H,H-3‘),4.07–4.01(m,2H,H-4‘,CHCH₃),1.38(d,J＝7.2Hz,3H,CHCH₃).

¹⁹F NMR(470MHz,MeOD):δ_F–118.3(d,J＝241Hz,F),–120.38(宽d,J＝241Hz,F).

¹³C NMR(125MHz,MeOD):δ_C 174.65(d,³J_C-P＝5.0Hz,C＝O,酯),167.65(C-NH₂),157.75(C＝O基础),152.10(d,²J_C-P＝7.0Hz,C-Ar),142.28(CH-基础),137.50(C-Ar),130.86,129.63,129.40,129.32,126.31(CH-Ar),124.50(d,¹J_C–F＝257Hz,CF₂),121.44,121.40(CH-Ar),96.67(CH-基础),85.90(宽信号,C-1′),80.27(C-4′),71.30(明显的t,²J_C–F＝23.7Hz,C-3′),68.02(OCH₂Ph),65.50(C-5‘),51.83(CHCH₃),20.22(d,³J_C–P＝7.5Hz,CHCH₃).

反相HPLC，用35分钟内从100/0至0/100的H₂O/MeOH洗脱，显示一个非对映异构体峰，t_R＝21.87min。

实施例2——NUC-1031和顺铂组合体外研究。

2.1材料与方法

细胞培养和试剂

A2780、SK-OV-3、OVCAR-3、NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H2122、5637和HT1376在补充有10％胎牛血清(FBS；Invitrogen-10099141)的RPMI培养基1640(Invitrogen-22400105)中培养。将所有细胞系保持在37℃、5％CO₂的潮湿培养箱中。细胞培养基和补充物购自Invitrogen，组织培养瓶购自Corning，96孔板和384孔板购自Greiner。CellTiter-Glo发光细胞活力测定试剂盒购自Promega(Promega-G7573)，细胞计数器Vi-Cell购自Beckman，检测仪器Envision购自PerkinElmer。紫杉醇(Paclitaxcel)(用作参考)和顺铂购自SELLECK，它们具有最高纯度。所有化合物在DMSO中和在稀释到培养基中时都具有溶解性。将DMSO、化合物溶液和培养基温热至37℃以进行溶液制备和稀释。

细胞毒性测定

将8种细胞系粘附于96孔板过夜(100μL/孔)，用于药物处理，3.16倍稀释，9个剂量点，一式三份或溶媒对照，在DMSO中制备化合物储备溶液并将其加入到孔中以得到指定的最终药物浓度。最终的DMSO浓度为0.5％。在药物添加后72小时，根据制造商的说明使用CellTiter-Glo细胞活力测定评估细胞ATP浓度。

组合分析

将8种细胞系粘附到384孔板过夜(60μL/孔)，进行组合研究，对于两种化合物的四种组合将进行两次研究，使一种化合物保持固定浓度，同时增加第二种化合物的浓度(10倍稀释，5个剂量点)，在DMSO中制备化合物储备溶液并将其加入孔中，通过D300e数字分配器得到指定的最终药物浓度。最终的DMSO浓度为0.5％。

在药物添加后72小时，根据制造商的说明，使用CellTiter-Glo细胞活力测定评估细胞ATP浓度。

因此，该研究包括两个阶段：

阶段1：单一药剂IC50测定

在阶段1中，测定相关细胞系中各个化合物(顺铂、吉西他滨和NUC-1031)的IC₅₀(使用5种或更多种浓度)。

表1：9个点、3.16倍系列稀释并且一式三份测试的单一药剂的最高浓度。

阶段2：组合治疗

阶段2确定了所选化合物组合对癌细胞生长的相互作用。总共在相关细胞系上测试了8种情况。这意味着对两种化合物的四种组合进行了两次研究，使一种化合物保持在固定浓度，同时增加第二种化合物的浓度。

表2：以一式四份、5个点、10倍稀释进行的组合治疗计划。

2.2分析方法

以下术语将用于表征化合物组合的效果：

·“协同作用”定义如下：组合化合物所观察到的效果强于单一化合物的预测效果。

·“相加”效应定义如下：组合化合物所观察到的效果等于单一化合物的预测效果总和。

·“拮抗作用”定义如下：组合化合物的效果明显弱于单一化合物的预测效果。

Chou-Talalay方法

用于药物组合的Chou-Talalay方法基于中值效应方程，其源自质量作用定律原理，得到的Chou-Talalay组合指数(CI)定理为药物组合的相加效应(CI＝1)、协同作用(CI<1)提供定量定义。

Bliss独立模型

该方法将观察到的组合响应(YO)与预测的组合响应(YP)进行比较，该预测的组合响应是基于不存在药物-药物相互作用的影响的假设而获得的。

假设两种药物A和B均抑制肿瘤生长：剂量a的药物A抑制Y^a百分比的肿瘤生长，剂量b的药物B抑制Y^b百分比的肿瘤生长。如果两种药物独立起作用，可以使用概率论的完全相加性，如Y^ab,P＝Y^a+Y^b-Y^aY^b，来预测组合百分比抑制Y^ab,P。

曲线移位分析

假设两种药物独立起作用，将药物A保持在固定浓度并改变药物B的浓度，使基于固定的A浓度的组合效应标准化，比较由药物B获得的剂量效应曲线，组合剂量-效应曲线向左移动涉及协同作用，向右移动表示拮抗作用，重叠表示相加。

2.3结果

阶段1：用单一药剂进行细胞毒性测定

在研究的阶段1，研究了单一药剂顺铂、NUC-1031和吉西他滨的细胞毒性，以便为阶段2的组合研究提供最合适的浓度。

表3：单一药剂治疗在所测试的相关癌细胞系中的绝对IC₅₀、相对IC₅₀和最大抑制结果的总结。

数据综述——所有三种分析方法的结果总结

下表4示出了利用3种方法(Chou-Talalay、Bliss独立法和曲线移位)的分析结果以表征组合化合物NUC-1031和顺铂的效应。

表4：用于评估组合化合物对癌细胞生长的效应的3种分析方法的结果

所有三种分析方法之间结果的一致性显示，观察到用两种化合物组合针对HT1376癌细胞系具有协同作用，这总结于表5中。

表5：三种方法中观察到的组合治疗的协同作用

各个方法结果

·使用Chou-Talalay方法分析的数据

CI＜1，表明协同作用

CI＞1，表明拮抗作用

·使用曲线移位法分析的数据

下文所示的膀胱癌细胞系HT1376中的协同效应示于图2中。

	吉西他滨(1.98uM)+顺铂	顺铂	Acelarin(1.98uM)+顺铂	顺铂2
					IC50	30.30	84.45	36.27	57.98

·使用Bliss独立法分析的数据

实施例3——NUC-1031和顺铂组合的进一步的体外研究

细胞培养和试剂

SKOV3细胞购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC)。将它们在含有10％Gibco^TM FBS(Life Technologies；10270-106)和1％Gibco^TM青霉素-链霉素(Life Technologies；15140122)的Gibco^TM RMPI培养基1640+GlutaMAX^TM-I(Life Technologies；61870-010)(称为完全培养基)，在37℃、5％CO₂在细胞培养瓶中培养。顺铂购自TEVA UK Limited(PL 00289/1146)。氟伐他汀和萝卜硫素(Sulforaphane)均购自Merck Millipore Corporation(目录号分别为344096和574215)。(S)-NUC-1031由Ltd提供。

应用药物的细胞培养

将SKOV3细胞以每孔200μl中250个细胞铺板于3596 96孔板的中间60个孔中，外部36孔每孔填充200μl PBS。使细胞在完全培养基中生长48小时，然后加入不同的药物化合物。对于单一药剂，将10种不同浓度的顺铂、(S)-NUC-1031、氟伐他汀和萝卜硫素在完全培养基中的溶液加入到中间60孔中(第0天)。每种浓度一式六份加载。将细胞暴露于化合物24小时，并用纯的完全培养基替换化合物。用暴露4天而非24小时重复进行氟伐他汀的实验。在第4天，在加入药物化合物后，将板用50μl 25％TCA溶液在4℃下固定60分钟，用于磺酰罗丹明B测定(见下文)。

对于两种药剂的组合，将不同浓度的顺铂和氟伐他汀，以及与各种浓度的氟伐他汀组合的两种固定浓度的顺铂，一式三份地铺板于3596 96孔板的中间60个孔中。外部36个孔各填充200μl PBS(第0天)。在第1天，使细胞暴露于药物化合物24小时，吸出化合物并用纯的完全培养基替换。用顺铂与萝卜硫素以及顺铂与(S)-NUC-1031重复该实验，并且每种浓度也一式三份加载。在第4天，将板用50μl 25％TCA溶液在4℃下固定60分钟，用于磺酰罗丹明B测定(见下文)。

磺酰罗丹明B(SRB)比色测定法

在加入TCA溶液后，在流动的自来水下洗涤板10次，然后在50℃的烘箱中干燥。然后将细胞用50μl SRB染料染色，并在加入SRB后30分钟，用1％冰醋酸洗掉染料4次。然后将板在烘箱中干燥。使SRB染料在摇动器上在150μl10mM Tris缓冲溶液中溶解60分钟。在Biohit BP800Microplate Reader(Biohit Healthcare)上读板，并在540nm处测量吸光度。单一药剂和组合实验的结果用于使用Prism软件(GraphPad)计算药物化合物的IC₅₀，IC₅₀是引起50％抑制的药物浓度。至于两种试剂组合的结果，使用CalcuSyn软件(Biosoft)将它们用于计算化合物的组合指数(CI)。

结果：

顺铂和萝卜硫素的IC50分别为2.436μM和7.002μM。由于不可观察到的抑制作用，无法计算氟伐他汀和NUC-1031的IC50。顺铂与氟伐他汀的CI值范围为0.355至0.557，显示出协同作用。顺铂与萝卜硫素的CI值范围为0.891至1.474，显示出拮抗作用。顺铂与0.1-0.5μM的NUC-1031和1-2μM的NUC-1031对SKOV3细胞的CI值范围分别为0.871至0.957，和1.067至1.756。

结论

发现低浓度的NUC-1031(0.1-0.5μM)与顺铂对于SKOV3细胞具有协同抑制，这使得它更可能在临床上使用，因为较低浓度的药物通常产生较低的毒性。该结果可作为在患者测试之前进一步研究精确的最佳组合剂量的基础，以确保效力和安全性。由于遗传谱和药物响应的多样性，通过评估个体中组合的细胞毒性和副作用的个体化治疗将是最佳的，使得每个患者可以以最佳剂量接受药物。

实施例4——ABC-008临床研究(NUC-1031与顺铂组合)的dFdCTP浓度的药代动力学分析，以及与ProGem1临床研究(仅NUC-1031)的结果的比较。

对从ABC-008临床研究中前三名患者获得的样品进行初始药代动力学分析。

患者详情如下：

患者1：71岁——转移性胆道癌——起始剂量：625mg/m²(S)-NUC-1031+25mg/m²顺铂

患者2：78岁——转移性胆道癌——起始剂量：625mg/m²(S)-NUC-1031+25mg/m²顺铂

患者3：75岁——转移性胆道癌——起始剂量：625mg/m²(S)-NUC-1031+25mg/m²顺铂

在21天周期的第1天和第8天施用NUC-1031和顺铂两者。

在Luerlock注射器中制备适当剂量的625mg/m²的NUC-1031。给出的剂量基于受试者的身高和体重，使用标准体表面积(BSA)计算。在将含有NUC-1031的注射器连接到聚乙烯延长线之前，用多达1.5ml的冲洗溶液灌注延长线。

将延长线连接到患者的中心静脉通路装置(Central Venous Access Device,CVAD)，并且使用注射泵以20ml/小时的速率注射NUC-1031。

注射完成后，将NUC-1031注射器与延长线断开，然后用额外体积的多达3ml冲洗溶液冲洗延长线。

材料和方法

1.材料

dFdCTP参考化合物获自英国Biorbyt。Lymphoprep获自英国STEMCELLTechnologies公司。高氯酸(PCA)、乙酸铵(NH4Ac)和氨均获自英国Sigma Aldrich。LC-MS级水、甲醇、乙腈和甲酸均获自英国Fisher Scientific公司。

2.方法

A.血液收集和PBMC制备：使用肝素化血液收集管收集6ml血液。离心并分离血浆后，收集血沉棕黄层并将其转移至含有3ml Lymphoprep密度梯度的新试管中。离心后，将含有PBMC层的上界面转移至新的试管中。用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤后，将PBMC重悬于100μl PBS中。然后，再加入100μl 0.8M PCA并将混合物涡旋混合并离心，然后将100μl上清液转移至新试管中。将PCA提取物储存在-80℃直至分析时刻。

B.样品提取(PBMC)：使用50μl 1M NH4Ac缓冲PCA提取物，然后用20μl10％氨溶液中和。最后，加入5μl含有内标8-ChloroATP和5μl去离子水。将提取物转移至LC-MS小瓶中，并将10μl注入到UPLC-MS/MS系统中。

3.色谱方法和样品分析

制备10mg/mL的分析物储备溶液并等分冷冻于-80℃直至使用。使用配备有Biobasic AX，5μm，50×2.1mm柱(Thermo Electron Corporation，Murrieta，CA，USA)的超高效液相色谱系统(Accela UPLC，Thermo Scientific，UK)以及由10mM NH4Ac的ACN/H₂O溶液(30:70v/v)，pH 6.0(A)和1mM NH4Ac的ACN/H₂O溶液(30:70v/v)，pH 10.5(B)的混合物组成的流动相，对分析物进行解析。使用的流动相梯度包括：缓冲液A在0-0.5min时为95％，在1.25min内从95至0％，保持0％1.75分钟，在0.1分钟内从0至95％，以95％持续2.9分钟结束，全部流速为500μl/min。

4.质谱方法

使用配备有电喷雾离子源的三级四极Vantage质谱系统(Thermo Scientific，UK)检测目标洗脱化合物。在多反应监测(MRM)，正(+ve)和负(-ve)离子模式下分别在3500和3000V的喷雾电压下分析样品。使用氮气作为鞘气和辅助气体，流速分别为50和20个任意单位。使用氩气作为碰撞气体，压力为1.5mTorr。

结果

初始结果示于表9和10中。

表10：ProGem1和ABC-008研究的平均PK参数比较

讨论

与ProGem1(用单一药剂NUc-1031进行的首次人体I期研究)相比，NUC-1031血浆PK参数显示AUC增加2.1倍，Cmax增加1.9倍。与单一药剂NUC-1031相比，NUC-1031血浆PK参数还显示半衰期增加3.6倍。

细胞内dFdCTP(活性抗癌部分)参数与ProGem1非常相似，除了t1/2较长之外。t1/2较长可能是由于在PK取样的4小时期间细胞内dFdCTP维持较高水平。NUC-1031与顺铂治疗后在dFdCTP水平方面观察到的协同作用具有显著的潜在临床意义，包括治疗癌症的更广泛的临床效用，其中为了阻断肿瘤生长和治疗单一药剂使用后的复发性癌症需要dFdCTP在较长时间段内处于高水平。

可以理解，使用本文所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物与基于铂的抗癌剂的组合治疗时所观察到的dFdCTP的半衰期增加，在许多情况下了提供了在治疗癌症方面的优势。主要优势见于这种半衰期增加赋予了剂量灵活性。例如，这种医学用途允许有效的治疗方案，其中使用活性剂的治疗发生率低于目前使用的治疗。仅举例来说，本发明的治疗可以以每日一次的治疗发生率提供给患者，而不是在一天中需要多次施用。适当的治疗发生率，例如这种一次的治疗发生率，可能仅需要相对快速地提供活性剂，而不是例如通过输注延长施用。吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯和与其一起使用的基于铂的抗癌剂可以配制(组合或单独)成用于向患者每日一次施用的药物。每日一次施用的这种药物可用于治疗复发性癌症。

根据本发明的治疗，使用吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯与基于铂的抗癌剂组合，无论是组合还是相继，可以用于每两天、每三天、每四天、每五天、每六天或每周提供的治疗发生率。实际上，根据本发明的治疗可以用于与另一治疗相隔一、二或三周提供的治疗发生率。

实施例5——ABC-08研究和相关放射学响应中至今获得的关键无进展存活时间点，与单一药剂吉西他滨和吉西他滨/顺铂组合疗法的ABC-02研究中确定的无进展存活中值时间点的比较。

ABC-02背景：

ABC-02研究确定了在转移性胆管环境中，与单独的吉西他滨相比，吉西他滨/顺铂组合是优越的护理治疗标准。确定了接受吉西他滨/顺铂的患者的无进展生存期中值为8个月。确定了接受作为单一药剂疗法的吉西他滨的患者的无进展生存期中值为5个月。(ValleJ,Wasan H,Palmer DH et al in 2010)

ABC-08比较：

迄今为止，在AB-C08研究中获得的无进展存活时间点已超过单一药剂吉西他滨和吉西他滨/顺铂组合疗法的已确定的中值。具体实例如下：

患者02：——NUC-1031剂量减少60％至375mg/m²，顺铂减少25％。然而，如下所述，她继续表现出一系列肿瘤体积的持续减小。

该患者已达到9个月的无进展存活时间点并且正在进行中。这是ABC-08研究中观察到的最长的无进展存活时间点，目前超过了ABC-02研究确定的中值。

在多次放射学评估中，已证实该患者肿瘤体积持续减小。

·第3个月扫描：减小17％——疾病稳定

·第6个月扫描：减小24％——疾病稳定

·第9个月扫描：减小41％——部分响应。

患者05——55岁——转移性胆道癌——起始剂量：625mg/m²(S)-NUC-1031+25mg/m²顺铂

该患者达到了5.5个月的无进展存活时间点并且正在进行中，超过接受单一药剂吉西他滨的患者所确定的5个月的无进展存活时间点中值。

在第一次放射学评估中，已证实该患者肿瘤体积显著减小：

·第3个月扫描：减小54％——部分响应。

尽管这些结果来自个体患者，但它们代表了本发明组合的有希望的临床结果。

Claims

1.吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其与基于铂的抗癌剂组合用于治疗癌症，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。

2.根据权利要求1所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述基于铂的抗癌剂为顺铂。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯为基本上非对映异构纯形式的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-(S)-磷酸酯。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯是磷酸酯非对映异构体的混合物。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯为游离碱的形式。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯被静脉内施用。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述癌症是实体瘤，例如选自以下的癌症：卵巢癌、膀胱癌和胆道癌。

8.根据权利要求7所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述癌症是胆道癌，例如选自以下的癌症：胆囊癌、远端胆管癌、壶腹部癌、肝门部胆管细胞癌和肝内胆管细胞癌。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述癌症是复发性的。

10.根据权利要求1至8中任一项所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述癌症是转移性的。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述癌症对所述基于铂的抗癌剂是难治性、耐药性或部分耐药性的。

12.根据权利要求1至9中任一项所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中所述癌症对所述基于铂的抗癌剂敏感。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯，其中每次施用事件中施用的NUC-1031的剂量在250mg/m²至1250mg/m²之间，并且每次施用事件中施用的基于铂的抗癌剂的剂量在在10mg/m²至200mg/m²之间。

14.一种治疗癌症的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用治疗有效量的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物与基于铂的抗癌剂的组合，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述基于铂的抗癌剂为顺铂。

16.根据权利要求14或权利要求15所述的方法，其中所述吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯为基本上非对映异构纯形式的吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-(S)-磷酸酯。

17.根据权利要求14或权利要求15所述的方法，其中所述吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯是磷酸酯非对映异构体的混合物。

18.根据权利要求14至17中任一项所述的方法，其中所述吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯为游离碱的形式。

19.根据权利要求14至18中任一项所述的方法，其中所述吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯被静脉内施用。

20.根据权利要求14至19中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体瘤，例如选自以下的癌症：卵巢癌、膀胱癌和胆道癌。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述癌症是胆道癌，例如选自以下的癌症：胆囊癌、远端胆管癌、壶腹部癌、肝门部胆管细胞癌和肝内胆管细胞癌。

22.根据权利要求14至21中任一项所述的方法，其中所述癌症是复发性的。

23.根据权利要求14至22中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移性的。

24.根据权利要求14至23中任一项所述的方法，其中所述癌症对所述基于铂的抗癌剂是难治性、耐药性或部分耐药性的。

25.根据权利要求14至23中任一项所述的方法，其中所述癌症对所述基于铂的抗癌剂敏感。

26.根据权利要求14至25中任一项所述的方法，其中每次施用事件中施用的NUC-1031的剂量优选在250mg/m²至1250mg/m²之间，并且每次施用事件中施用的基于铂的抗癌剂的剂量在10mg/m²至200mg/m²之间。

27.根据权利要求14至26中任一项所述的方法，其中所述组合的施用提供超过10小时的dFdCTP的细胞内t_1/2。

28.根据权利要求14至27中任一项所述的方法，其中所述组合的施用提供超过18小时的dFdCTP的细胞内t_1/2。

29.一种药物制剂，其包含吉西他滨-[苯基-苄氧基-L-丙氨酰基)]-磷酸酯或其药学上可接受的盐或溶剂化物，连同基于铂的抗癌剂，以及至少一种药学上可接受的赋形剂，所述基于铂的抗癌剂选自顺铂、吡铂、铂脂质体和三铂。

30.一种试剂盒，其包含一起使用的两种分开的制剂，所述制剂是：