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CN108676797B - 用于检测人乳头瘤病毒的成套试剂与方法 - Google Patents

用于检测人乳头瘤病毒的成套试剂与方法 Download PDF

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CN108676797B CN201810580442.6A CN201810580442A CN108676797B CN 108676797 B CN108676797 B CN 108676797B CN 201810580442 A CN201810580442 A CN 201810580442A CN 108676797 B CN108676797 B CN 108676797B
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Abstract

本发明公开了用于检测人乳头瘤病毒的成套试剂与方法。本发明公开的用于检测人乳头瘤病毒的成套试剂由621条探针组成,这621条探针的序列为序列表中序列1‑621,序列1‑621的每条序列的第1‑15位和第94‑108位均相同,可用于扩增所述621条探针;每条探针的5’端均可标记有生物素。本发明的成套试剂在捕获人乳头瘤病毒基因组与测序中,可以区分其不同的分型,还可以确定其DNA是否整合到人基因组,也可以确定人乳头瘤病毒的拷贝数,且具有分型准确、可获得整合信息与拷贝数、灵敏度高等特点,符合精准医疗的发展趋势,意义非常重大。

Description

用于检测人乳头瘤病毒的成套试剂与方法
技术领域
本发明涉及医学基因工程及分子遗传学领域中,用于检测人乳头瘤病毒的成套试剂与方法。
背景技术
人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)属于乳头瘤病毒科,是一种小分子的、无被膜包被的环状双链DNA病毒,基因组长约8000碱基对(bp),分为3个功能区,即早期转录区(E区)、晚期转录区(L区)和非转录区(长控制区,LCR)。HPV通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。该病毒不但具有宿主特异性,而且具有组织特异性,只能感染人的皮肤和粘膜上皮细胞,引起人类皮肤的多种乳头状瘤或疣及生殖道上皮增生性损伤。
对于感染生殖道和肛门的HPV,根据各基因型别致病力大小或致癌危险性大小可分为低危型和高危型两大类。关于高危型与低危型的划分,依据WHO国际癌症研究机构(IARC)及其他国际组织的研究成果,HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等13种基因型列为高危基因型别,HPV26、53、66、73、82等5种基因型列为中危基因型别,HPV6、11基因型列为低危基因型别。
在有性生活史的女性中生殖道HPV感染具有普遍性,据统计70%~80%的女性在其一生中会有至少一次的HPV感染,但大多数感染为自限性,超过90%的感染的女性会出现一种有效的免疫应答,在没有任何长期的健康干预时在6到24个月之间可以清除感染。而持续性的高危型HPV感染则是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要原因。全球范围的研究结果显示,在99.7%的宫颈癌患者体内检测到高危型HPV DNA的存在,其中HPV16型、18型、45型和31型感染占80%。
多年来,国际上通用的宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的诊断主要按照宫颈细胞学、阴道镜及组织病理学检查。宫颈细胞学检查是普遍应用的宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的筛查方法,可发现早期病变。但宫颈细胞学检查存在其固有的局限性。低危型HPV虽然极少引起浸润癌,但一般与尖锐湿疣或低度鳞状上皮内病变相关。
鉴于此,寻求HPV的分型检测方法用于宫颈细胞学检查异常患者的分流及宫颈癌筛查,可有效地增加宫颈病变检出率,提高细胞学检查敏感性,并降低筛查频率。而且对宫颈癌治疗和判断预后很有意义,同时对完善病毒导致癌症的机理研究也有很大帮助。
HPV病毒在人体内的存在形式也与疾病进展相关。HPV病毒在进入人体后,其DNA会断开成单链,会以嵌入的形式整合到人的基因组中。这种整合不仅会导致嵌入位点的DNA序列发生突变,而且细胞在分裂和增殖过程中会与HPV病毒基因组一起复制,从而导致HPV病毒逃避免疫系统清除。有研究发现,HPV与宿主染色体的整合是宫颈细胞永生化过程中的一个重要步骤,也是导致宫颈上皮内瘤变向宫颈癌恶性进展的一个重要标志。在HPV导致的良性病变中,细胞内的病毒DNA一般不会整合于宿主基因组中。但是在高级别内皮瘤变和宫颈癌中,HPV DNA常整合于宿主染色体中,且随着宫颈病变发展,整合显著增加。因此,HPV病毒在宿主细胞中的整合状态检测也是评估宫颈病变及预后的重要参数。
目前市面上,HPV核酸检测技术主要包括生物芯片法、酶切信号放大法、PCR-荧光探针法、转录介导的核酸扩增技术以及PCR-杂交法等。
然而这些HPV核酸检测手段或仅检测HPV核酸信息、无法检测HPV整合状态,或存在敏感度低、操作繁琐、耗时、需大量样本、检测HPV基因型少及判定结果不确定等缺点,如Southern杂交、实时定量PCR,基因芯片、扩增HPV整合致癌基因转录子等检测方法。二代测序(next generation sequencing,NGS)技术的发展,使得高通量、大规模的HPV整合状态的检测成为可能。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何检测人乳头瘤病毒。
为解决上述技术问题,本发明首先提供了一种成套试剂,将该成套试剂记为成套试剂1,所述成套试剂1由621条探针组成,所述621条探针的序列分别为序列表中序列1-621的第16-93位。
本发明还提供了另一种成套试剂,将该成套试剂记为成套试剂2,所述成套试剂2由621条探针组成,所述621条探针分别含有序列表中序列1-621的第16-93位。
所述成套试剂2的所述621条探针还可含有用于扩增探针的引物的识别序列。所述所述621条探针的序列具体可为序列表中序列1-621。其中,序列1-621的每条序列的第1-15位和第94-108位均相同,可用于扩增所述621条探针。
上述成套试剂1和成套试剂2中的每条探针的5’端均可标记有生物素。
上述成套试剂1和成套试剂2均可用于检测人乳头瘤病毒。
上述成套试剂1和成套试剂2中,所有探针均可包装在一起,各探针的摩尔数均可相等。
本发明还提供了用于检测人乳头瘤病毒的系统,所述系统包括所述成套试剂1或所述成套试剂2。
所述系统还可包括M1,所述M1为富集缓冲液、杂交缓冲液和/或结合缓冲液;
所述富集缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为人cot-1DNA、鲑鱼精DNA、引物1和引物2,所述引物1为序列表中序列622所示的单链DNA,所述引物2为序列表中序列623所示的单链DNA;
所述杂交缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为50mM-200mM Tris-HCl(pH 7.6),所述溶质及其在所述杂交缓冲液中的浓度分别为1.25M NaCl,0.125M柠檬酸钠,0.1g/100mL BSA,5%-10%(体积比)Tween20;其中,所述50mM-200mM Tris-HCl(pH 7.6)由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为50mM-200mM,pH为7.6;
所述结合缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为10mM Tris-HCl(pH 7.5),所述溶质及其浓度分别为1M NaCl,1mM EDTA;所述10mM Tris-HCl(pH 7.5)由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mM,pH为7.5。
上述系统中,所述富集缓冲液中所述溶质的含量分别可为Invitrogen的人cot-1DNA 35%(体积比)、Invitrogen的鲑鱼精DNA 15%(体积比)、所述引物1 0.5nmol/μl和所述引物20.5nmol/μl;
所述杂交缓冲液中,所述溶剂为100mM Tris-HCl(pH 7.6),所述溶质及其在所述杂交缓冲液中的浓度分别为1.25M NaCl,0.125M柠檬酸钠,0.1g/100mL BSA,7%(体积比)Tween20;所述100mM Tris-HCl(pH 7.6)由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为100mM,pH为7.6。
所述系统可还包括M2,所述M2为漂洗液1、漂洗液2、NaOH溶液(0.1M)、Tris-HCl缓冲液(1M,pH 7.5)、PCR反应液和TE缓冲液中的至少一种;
所述漂洗液1由溶剂和溶质组成,所述溶剂为1×SSC溶液,所述溶质为SDS,SDS在所述漂洗液1中的质量百分比浓度为0.1%;所述1×SSC溶液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质及其在所述1×SSC溶液中的浓度分别为NaCl 175g/L和柠檬酸三钠88g/L,pH 7.4;
所述漂洗液2由溶剂和溶质组成,所述溶剂为0.1×SSC溶液,所述溶质为SDS,SDS在所述漂洗液2中的质量百分比浓度为0.1%;其中,所述0.1×SSC溶液为将所述1×SSC溶液稀释10倍得到的溶液;
所述NaOH溶液(0.1M)由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质及在所述NaOH溶液(0.1M)中的浓度为0.1M NaOH;
所述Tris-HCl缓冲液(1M,pH 7.5)由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为1M,pH为7.5;
所述PCR反应液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为1倍浓度的Phusion缓冲液,所述溶质及其在所述PCR反应液中的浓度分别为0.2mM dATP、0.2mM dTTP、0.2mM dCTP、0.2mMdGTP、2.5pmol引物3、2.5pmol引物4、0.05U/μl Hotstart Phusion酶、5%(体积比)DMSO;其中,所述1倍浓度的Phusion缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为50mM Tris-HCl(pH8.8),所述溶质及其在所述1倍浓度的Phusion缓冲液中的浓度分别为4mM MgCl2,500mMKCl,0.8%(v/v)Nonidet P40;所述50mM Tris-HCl(pH 8.8)由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为50mM,pH为8.8;所述引物3和所述引物4的序列分别可为序列表中序列624和625,所述引物3和所述引物4的最后一位核苷酸均可带有硫代修饰;
所述TE缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷、EDTA和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mM,EDTA的浓度为1mM,pH为8.0。
所述1倍浓度的Phusion缓冲液具体可为将New England Biolabs的5倍浓度的Phusion缓冲液稀释5倍得到的溶液。
所述Hotstart Phusion酶具体可为New England Biolabs产品。
上述系统可仅由所述成套试剂1或所述成套试剂2与所述M1组成,还可由所述成套试剂1或所述成套试剂2与所述M1和所述M2组成。
所述系统可为试剂盒。
本发明还提供了下述任一方法:
X1)富集人乳头瘤病毒基因组DNA的方法,包括:利用所述成套试剂1或所述成套试剂2捕获待测样本人乳头瘤病毒基因组DNA,实现人乳头瘤病毒基因组DNA的富集;
X2)检测人乳头瘤病毒基因组序列的方法,包括:利用所述成套试剂1或所述成套试剂2捕获待测样本人乳头瘤病毒基因组DNA,得到捕获到的基因组DNA,对所述捕获到的基因组DNA进行测序,得到人乳头瘤病毒基因组序列;
X3)检测人乳头瘤病毒分型的方法,包括:利用所述成套试剂1或所述成套试剂2捕获待测样本人乳头瘤病毒基因组DNA,得到捕获到的基因组DNA,对所述捕获到的基因组DNA进行测序,得到待测样本人乳头瘤病毒基因组序列;将所述待测样本人乳头瘤病毒基因组序列与人乳头瘤病毒基因组参考序列进行比对,得到所述待测样本的人乳头瘤病毒分型;
X4)检测人乳头瘤病毒DNA在人基因组中插入位点的方法,包括:利用所述成套试剂1或所述成套试剂2捕获待测样本基因组DNA,得到捕获到的基因组DNA,对所述捕获到的基因组DNA进行测序,得到测序序列;将所述测序序列与人乳头瘤病毒基因组参考序列以及人参考基因组序列进行比对,确定所述待测样本的HPV DNA在人基因组中的插入位点;
X5)检测HPV拷贝数的方法,包括:利用所述成套试剂1或所述成套试剂2捕获待测样本基因组DNA,得到捕获到的基因组DNA;对所述捕获到的基因组DNA进行测序,确定HPV的拷贝数。
X5)中,对所述捕获到的基因组DNA进行测序,确定HPV的拷贝数具体可包括:对所述捕获到的基因组DNA进行测序,得到HPV平均测序深度和HPV捕获富集倍率;通过对所述待测样本的基因组DNA进行测序,然后将测序结果与人基因组比对,得到人基因组平均测序深度;根据如下公式(1)计算HPV拷贝数;
HPV拷贝数=HPV平均测序深度/(人基因组平均测序深度×HPV捕获富集倍率)(公式(1))。
其中,HPV捕获富集倍率是指捕获到的基因组DNA中HPV DNA的含量与所述待测样本基因组DNA中HPV DNA的含量的比值。在本发明的一个实施例中,HPV捕获富集倍率为46000。
所述人乳头瘤病毒分型可为HPV 6、11、16、18、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68、69、82、51、26、30、34、53、67、70、73、85和97中的至少一种。
本发明还提供了所述成套试剂1或所述成套试剂2的下述任一应用:
Y1)在制备检测人乳头瘤病毒基因组序列产品中的应用;
Y2)在检测人乳头瘤病毒基因组序列中的应用;
Y3)在制备检测人乳头瘤病毒分型产品中应用;
Y4)在检测人乳头瘤病毒分型中应用;
Y5)在制备检测人乳头瘤病毒DNA在人基因组中插入位点产品中的应用;
Y6)在检测人乳头瘤病毒DNA在人基因组中插入位点中的应用;
Y7)在制备检测HPV拷贝数产品中的应用;
Y8)在检测HPV拷贝数中的应用。
所述产品可为试剂盒。
本发明还提供了所述系统的下述任一应用:
Z1)在检测人乳头瘤病毒基因组序列中的应用;
Z2)在检测人乳头瘤病毒分型中应用;
Z3)在检测人乳头瘤病毒DNA在人基因组中插入位点中的应用;
Z4)在检测HPV拷贝数中的应用。
本发明的用于检测人乳头瘤病毒的成套试剂在捕获人乳头瘤病毒基因组与测序中,可以区分其不同的分型,还可以确定人乳头瘤病毒DNA是否整合到人基因组,若有整合情况,可以检测到具体的整合位点和整合序列,也可以确定人乳头瘤病毒的拷贝数,且具有分型准确、可获得整合信息与拷贝数、灵敏度高等特点。利用本发明的成套试剂可以同时检测27个HPV基因型别,其中包括与宫颈癌密切相关的高危基因型别HPV,还包括中危基因型别和与尖锐湿疣或低度鳞状上皮内病变相关的低危基因型别,可用于检测与HPV感染相关的各种疾病,如宫颈癌、阴道癌、外阴癌、肛门早期癌等。本发明的成套试剂可以应用于宫颈癌及癌前病变筛查、治疗后残留或复发病变的预测、阴道镜检查的适应证、非典型鳞状上皮细胞患者分流以及进行相应的健康咨询、探究HPV致癌机制等,符合精准医疗的发展趋势,意义非常重大。
附图说明
图1为样本17O010099在chr11:129325933处的整合位点图。第(01)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(06)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(07)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(08)-(12)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图2为样本17O010099在chr11:129339149处的整合位点图。第(01)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(06)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(07)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(08)-(12)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图3为样本17O010099在chr11:129319998处的整合位点图。第(01)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(05)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(06)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(07)-(10)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图4为样本17O011102在chr2:191437654处的整合位点图。第(01)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(06)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(07)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(08)-(12)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图5为样本17O011102在chr2:191452577处的整合位点图。第(01)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(06)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(07)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(08)-(12)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图6为样本17O011102在chr2:191462814处的整合位点图。第(01)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(06)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(07)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(08)-(12)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图7为样本17O011228在chr4:172351833处的整合位点图。第(01)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(06)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(07)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(08)-(12)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图8为样本17O011808在chr1:142934469处的整合位点图。第(01)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(06)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(07)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(08)-(12)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图9为样本17O011808在chr4:151085095处的整合位点图。第(01)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(06)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(07)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(08)-(12)行是测序读长序列名称及碱基序列。
图10为样本17O010971在chr2:109387815处的整合位点图。第(01)行是HPV参考基因组位置及碱基序列;第(02)-(07)行是测序读长序列名称及碱基序列;第(08)行是人参考基因组位置及碱基序列;第(09)-(14)行是测序读长序列名称及碱基序列。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。下述实施例中,如无特殊说明,序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA的5′末端核苷酸,末位均为相应DNA的3′末端核苷酸。
实施例1、检测人乳头瘤病毒的成套试剂与试剂盒的制备
1、检测人乳头瘤病毒的成套试剂
本实施例提供的检测人乳头瘤病毒的成套试剂,根据27种HPV基因型别设计并用于识别这27种HPV基因型别,这27种HPV基因型别分别为HPV 6、11、16、18、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68、69、82、51、26、30、34、53、67、70、73、85和97。检测人乳头瘤病毒的成套试剂由621条探针组成,这621条探针的序列为序列表中序列1-621,每条序列的第16-93位用于识别人乳头瘤病毒,每条序列的第1-15位和第94-108位均相同,可以用来扩增探针,每条探针的5’端均由生物素标记。
该成套试剂中,所有探针包装在一起,各探针的摩尔数均相等。
2、检测人乳头瘤病毒的试剂盒
本实施例提供的检测人乳头瘤病毒的试剂盒由检测人乳头瘤病毒的成套试剂与以下试剂组成:富集缓冲液、杂交缓冲液、结合缓冲液、漂洗液1、漂洗液2、NaOH溶液(0.1M)、Tris-HCl缓冲液(1M,pH 7.5)、PCR反应液、TE缓冲液。其中各溶液组成如下:
(1)富集缓冲液:
富集缓冲液由溶剂和溶质组成,溶剂为水,溶质及其浓度分别为人cot-1DNA(Invitrogen)35%(体积比)、鲑鱼精DNA(Invitrogen)15%(体积比)、引物1 0.5nmol/μl和引物2 0.5nmol/μl,其中引物1和引物2的序列如下:
引物1:AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCT(序列表中序列622);
引物2:CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGGTCTCGGCATTCCTGCTGAACCGC(序列表中序列623);
(2)杂交缓冲液:
杂交缓冲液由溶剂和溶质组成,溶剂为100mM Tris-HCl(pH 7.6),溶质及其浓度分别为1.25M NaCl,0.125M柠檬酸钠,0.1g/100mL BSA,7%(体积比)Tween20;其中,100mMTris-HCl(pH 7.6)由溶剂和溶质组成,溶剂为水,溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和用于调节pH的HCl,Tris的浓度为100mM,pH为7.6;
(3)结合缓冲液:
结合缓冲液由溶剂和溶质组成,溶剂为10mM Tris-HCl(pH 7.5),溶质及其浓度分别为1M NaCl,1mM EDTA;10mM Tris-HCl(pH 7.5)由溶剂和溶质组成,溶剂为水,溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和用于调节pH的HCl,Tris的浓度为10mM,pH为7.5;
(4)漂洗液1:
漂洗液1由溶剂和溶质组成,溶剂为1×SSC溶液,溶质为SDS,SDS在漂洗液1中的质量百分比浓度为0.1%;其中,1×SSC溶液由溶剂和溶质组成,溶剂为水,溶质及其浓度分别为NaCl 175g/L和柠檬酸三钠88g/L,pH 7.4;
(5)漂洗液2:
漂洗液2由溶剂和溶质组成,溶剂为0.1×SSC溶液,溶质为SDS,SDS在漂洗液2中的质量百分比浓度为0.1%;其中,0.1×SSC溶液为将1×SSC溶液稀释10倍得到的溶液;
(6)NaOH溶液(0.1M)
NaOH溶液(0.1M)由溶剂和溶质组成,溶剂为水,溶质及其浓度为0.1M NaOH;
(7)Tris-HCl缓冲液(1M,pH 7.5)
Tris-HCl缓冲液(1M,pH 7.5)由溶剂和溶质组成,溶剂为水,溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和用于调节pH的HCl,Tris的浓度为1M,pH为7.5;
(8)PCR反应液:
PCR反应液由溶剂和溶质组成,溶剂为1倍浓度的Phusion缓冲液(New EnglandBiolabs),溶质及其浓度分别为0.2mM dATP、0.2mM dTTP、0.2mM dCTP、0.2mM dGTP、2.5pmol引物3、2.5pmol引物4、0.05U/μl Hotstart Phusion酶(New England Biolabs)、5%(体积比)DMSO;其中,1倍浓度的Phusion缓冲液由溶剂和溶质组成,溶剂为50mM Tris-HCl(pH 8.8),溶质及其浓度分别为4mM MgCl2,500mM KCl,0.8%(v/v)Nonidet P40;50mMTris-HCl(pH 8.8)由溶剂和溶质组成,溶剂为水,溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和用于调节pH的HCl,Tris的浓度为50mM,pH为8.8。
其中,引物序列如下:
引物3:AATGATACGGCGACCACCGA*G(序列表中序列624);
引物4:CAAGCAGAAGACGGCATACG*A(序列表中序列625);*表示硫代修饰。
(9)TE缓冲液
TE缓冲液由溶剂和溶质组成,溶剂为水,溶质为Tris、EDTA和用于调节pH的HCl,Tris的浓度为10mM,EDTA的浓度为1mM,pH为8.0。
实施例2、检测人乳头瘤病毒的方法
本发明的利用实施例1的成套试剂和试剂盒检测人乳头瘤病毒的方法如下:
1、全基因组文库的制备
经患者知情同意,提取HPV病毒感染个体的外周血的基因组DNA,将得到的基因组DNA浓度调整到75ng/μl,总量3-5μg DNA随机打断,利用KAPA Hyper文库构建试剂盒(货号为KK8504)构建全基因组文库。所用接头的两条单链DNA的序列如下:
单链DNA1:AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT
单链DNA2:AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACNNNNNNNNATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG,其中,N为A、T、C或G。
2、HPV基因片段的特异性捕获及测序
1)取1μg步骤1的全基因组文库,向其中加入13μl富集缓冲液和5μl成套试剂溶液(该溶液为利用水溶解实施例1的成套试剂得到的液体,该溶液中探针的总浓度为100ng/μl),将得到的反应体系置于PCR仪上,反应条件为95℃7min,之后65℃2min,反应结束得到反应产物;
2)将65℃预热的杂交缓冲液23μl加入到上述步骤1)得到的反应产物中,然后于PCR仪上65℃杂交22小时,得到富集体系混合物;
3)将MyOne C1链霉亲和素磁珠(Invitrogen)漩涡震荡使磁珠充分悬浮,取50μlMyOne C1链霉亲和素磁珠到新的1.5ml的离心管;
4)将步骤3)的装有50μl MyOne C1链霉亲和素磁珠的1.5ml离心管漩涡震荡至少5s,使磁珠充分悬浮,短暂离心后放入磁力架上保持静止一分钟(不要旋转离心管),小心吸弃上清;
5)取下步骤4)的离心管,向其中加入50μl结合缓冲液,旋窝震荡至少5s,短暂离心后放入磁力架上静止一分钟,小心吸弃上清,重复三次;
6)取下步骤5)的离心管,向其中加入100μl的2倍浓度的结合缓冲液(即将实施例1中结合缓冲液的各溶质浓度加倍得到的溶液,即2倍浓度的结合缓冲液中各溶质浓度为实施例结合缓冲液相应溶质浓度的2倍),旋窝震荡至少5s,短暂离心后放入磁力架上静止一分钟;
7)将步骤2)得到的富集体系混合物加入到骤6)的离心管中,旋窝震荡至少5s,然后置于旋转仪上室温旋转1小时(60转/分钟);
8)步骤7)完成后,利用漂洗液1室温清洗步骤7)的磁珠一次,15分钟,然后再用漂洗液2于65℃下清洗3次,每次15分钟;
9)步骤8)完成后,将磁珠用NaOH溶液(0.1M)室温下洗脱10分钟,然后将得到的洗脱液漩涡震荡至少5s,短暂离心后放入磁力架上静止一分钟,然后将上清液转移到含有70μl Tris-HCl缓冲液(1M,pH 7.5)的干净离心管中,即得到DNA溶液;
10)采用Qiagen MinElute Column(Qiagen产品)对步骤9)得到的DNA溶液进行纯化,将得到DNA利用TE缓冲液溶解,得到纯化DNA溶液;
11)向30μl步骤10)得到的纯化DNA溶液中加入70ul PCR反应液进行PCR扩增,得到PCR产物;
PCR反应条件为:98℃30s,1个循环;98℃25s,65℃30s,72℃30s,15个循环;72℃5min,1个循环;
12)利用Agencourt AMPure XP核酸纯化试剂盒(Beckman Coulter)纯化步骤11)的PCR产物,得到纯化产物。
13)将步骤12)得到的纯化产物在Illumina NextSeq 500测序仪上进行测序,所用测序引物为测序引物1和测序引物2,测序引物1:AATGATACGGCGACCACCGA;测序引物2:CAAGCAGAAG ACGGC ATACG AGAT。
3、生物信息学分析流程及结果输出
根据步骤2的测序结果对HPV病毒分型和确定HPV病毒的整合位点:
(1)HPV病毒分型分析流程
①获取测序原始序列;
②数据预处理:去除测序数据中的防污染接头和低质量数据等,所用到的参数:-m40-q10,10-O 6-e 0.08,具体参数含义参考:http://cutadapt.readthedocs.io/en/ stable/
③用BWA工具将预处理后数据与所有HPV参考基因组进行比对,所用到的参数:bwamem-M,具体参数含义参考:http://bio-bwa.sourceforge.net/bwa.shtml
④统计测序结果信息,确定HPV病毒域覆盖大小、平均测序深度以及HPV病毒的分型等;
(2)HPV病毒整合分析流程
①根据步骤(1)的分型信息,选取每种型比对最优株型作为HPV-Integration分析参考基因组;
②筛选后数据与hg19和HPV-Integration分析参考基因组进行bwa mem比对,得到比对bam结果,所用到的参数:bwa mem-M,具体参数含义参考:http://bio- bwa.sourceforge.net/bwa.shtml
③根据比对bam结果,用SVdetect分析structral variations,得到初步整合位点区域,具体参数含义参考:http://svdetect.sourceforge.net/Site/Manual.html;
④用CREST分析HPV整合位点,将CREST分析结果和SVdetect分析结果整合,得到HPV病毒整合结果。
实施例3、利用实施例1的试剂盒检测HPV分型结果
利用实施例1的试剂盒检测12例宫颈癌患者(均经患者知情同意)的HPV基因型别,按照实施例2的方法进行。
结果证实,实施例1的成套试剂对HPV基因具有高捕获率,目标区域(HPV基因)的平均有效测序READ量达到20Mb,目标区域(HPV基因)的平均测序深度为1000X以上(见表1),检测到不同患者感染的HPV基因型别如表1所示,所检测到的患者感染的HPV基因型别均为中国大陆常见的HPV基因型别。
表1、利用本发明试剂盒对12例宫颈癌患者检测的HPV分型结果
用凯普23种HPV荧光分型检测试剂盒(荧光PCR法)(注册证号:国械注准20153401700)检测以上样本,所检测各样本的HPV基因型别与利用实施例1的试剂盒检测结果完全一致。
实施例4、利用实施例1的试剂盒检测HPV整合位点
利用利用实施例1的试剂盒检测5例宫颈癌患者(均经患者知情同意)的HPV分型,按照实施例2的方法进行。
结果证实均检测到HPV基因型别,并检测到不同的HPV整合位点,包括人基因组整合位点、HPV整合位点、整合片段(见表2及图1-10)。
表2、利用本发明试剂盒对部分宫颈癌患者检测到的HPV整合情况
分别在每个插入位点的上下游设计引物,并对插入位点进行PCR扩增与Sanger测序,引物序列如表3所示。结果显示,利用实施例1的试剂盒得到的结果与Sanger测序的结果完全一致。
表3、引物序列
插入位点编号 样品编号 正向引物(5’-3’) 反向引物(5’-3’)
1 17O010099 GGTGCAGTTACCTGACCCAA GCAGAAGGGCAATGTGCTTG
2 17O010099 ACTGCGTCAACTAATGGGCA TCCTGCTTATTGCCACCACC
3 17O010099 GCCCTGTTGCGTTACAAATGT TGTAGTCTTGTAGCGTTCGAAGA
4 17O011102 TGGTACAGATTCTAGGTGGCC TGGTAACTGTCTTCTCAGAAACCA
5 17O011102 AATAGTGCGCTGCTTGTTGC TGCAGCAATACACCAATCGC
6 17O011102 TGTCTTCTTCGTTGTGGGGC TTGGCCAAGTGCTGCCTAAT
7 17O011228 AGAGGACGAGGATGAAAATGCA ACAAGAAAAGGATGGCATGACT
8 17O011808 AGCCTGCATTATGAAGGGCA TGACCTTGTGTGCTACGAGC
9 17O011808 CTGTGTTAGGCTGGTGCAGT CGCTGCATACGGTGTACAGT
10 17O010971 GAGGACGAAACAGCAGACGA GCAAATGCATGGATATTTTGGTAAACT
实施例5、利用实施例1的试剂盒检测HPV拷贝数
用正常人基因组dna梯度稀释caski细胞系dna样本,分别利用实施例1的试剂盒按照实施例2的方法检测HPV基因组拷贝数。然后按照公式【HPV拷贝数计算值=HPV平均测序深度(去冗余)/(人基因组平均测序深度×HPV捕获富集倍率)】计算拷贝数,结果证实计算得出的HPV基因组的拷贝数与理论拷贝数(见表4),表明,本发明的试剂盒还可以用于确定HPV拷贝数。其中,HPV捕获富集倍率由多次测定的捕获倍率所得,是指捕获到的基因组DNA中HPV DNA的含量与所述待测样本基因组DNA中HPV DNA的含量的比值,此处为46000;人基因组平均测序深度为将样本按照实施例2步骤1的方法得到的全基因组文库进行测序,所得测序数据大小与人基因组大小的比值即为人基因组平均测序深度。
表4、利用实施例1的试剂盒对CaSki细胞系gDNA梯度稀释检测的HPV拷贝数结果
<110> 迈基诺(重庆)基因科技有限责任公司
<120> 用于检测人乳头瘤病毒的成套试剂与方法
<160> 625
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gactacatgg gacatatgga aagtgcaaat gcctccacgt ctgcaacgac catagaccag 60
ttgtgcaaga cgtttaatct atctatgcat acgtacgtcg taggttcc 108
<210> 2
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gactacatgg gacattgcta tgagcaatta gtagacagct cagaagatga ggtggacgaa 60
gtggacggac aagattcaca acctttaaaa caatacgtcg taggttcc 108
<210> 3
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gactacatgg gacattatgt tagtcctata aacactatag ccgaggcagt ggaaagtgaa 60
ataagtccac gattggacgc cattaaactt acatacgtcg taggttcc 108
<210> 4
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gactacatgg gacatgccat taagtttata tgcacatata caatggctaa caaatgcatg 60
gggaatggta ttgttagtat tattaagatt taatacgtcg taggttcc 108
<210> 5
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gactacatgg gacataacaa tggataaaac ataggggttc taaaatagaa ggcacaggaa 60
attggaaacc aattgtacaa tttctacgac atctacgtcg taggttcc 108
<210> 6
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
gactacatgg gacataatcc attccctttt gacagaaatg ggaatgcagt gtatgaactg 60
tcaaatgcaa actggaaatg tttttttgaa agatacgtcg taggttcc 108
<210> 7
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
gactacatgg gacatataca atggattatg tggtatggac agatgtgtat gtgcaggaca 60
ctgactcctg ggtaaaggtg catagtatgg tagtacgtcg taggttcc 108
<210> 8
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
gactacatgg gacattctaa ttgtttaaag tgttttagat ataggctaaa tgacaaacac 60
agacatttat ttgatttaat atcatcaacg tggtacgtcg taggttcc 108
<210> 9
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
gactacatgg gacatctaaa ggtcctgttt cgaggcggct atccatatgc agcctgcgcg 60
tgctgcctag aatttcatgg aaaaataaac caatacgtcg taggttcc 108
<210> 10
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
gactacatgg gacataacat gtttagattg ggtggtagca ggatttggta tacatcatag 60
catatcagag gcatttcaaa aattaattga gcctacgtcg taggttcc 108
<210> 11
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
gactacatgg gacatacaga aagcataaag cattgacatt aattaaatgt ccacctctgc 60
tagtaacgtc caacatagat attactaaag aagtacgtcg taggttcc 108
<210> 12
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
gactacatgg gacatatgtg gacaatttaa aacatattat gtaaactttg taaaagaggc 60
agaaaagtat gggagcacca aacattggga agttacgtcg taggttcc 108
<210> 13
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
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tattgtaatt tgtatatatg taaatgtgta aattacgtcg taggttcc 108
<210> 14
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
gactacatgg gacatcctaa aggttgtgtg gcgagacaac tttccctttg cagcgtgtgc 60
ctgttgctta gaactgcaag ggaaaattaa ccatacgtcg taggttcc 108
<210> 15
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
gactacatgg gacatagaca tcagacaact acaagacctt ttgctgggca cactaaatat 60
tgtgtgtccc atctgcgcac caaaaccata acatacgtcg taggttcc 108
<210> 16
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
gactacatgg gacattgaag tggaagctgc aacgcaggta gagaaacatg gcgacccgga 60
aaatggggga gatggtcagg aaagggacac aggtacgtcg taggttcc 108
<210> 17
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
gactacatgg gacattaatt gagcctccta aaatacaaag tggcgtagca gccctgtatt 60
ggtttaggac aggcatttca aatgcaagta cagtacgtcg taggttcc 108
<210> 18
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
gactacatgg gacatatagc cattgtaggg ccaccggaca ctgggaagtc gtgcttttgc 60
atgagtttaa ttaagttttt ggggggaaca gtttacgtcg taggttcc 108
<210> 19
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
gactacatgg gacatcgtgc caggatcagt tgttagaact ttatgaagaa aacagtattg 60
atatacacaa acacattatg cattggaaat gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 20
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
gactacatgg gacataagta tggtagtacc aatcattggg aagtatgtta tggcagcaca 60
gttatatgtt ctcctgcatc tgtatctagc acttacgtcg taggttcc 108
<210> 21
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
gactacatgg gacatgcaat ttttaaacag tgtaaaaata ccacccacca ttaggcataa 60
ggtggggttt atgtcattac atttattgta acctacgtcg taggttcc 108
<210> 22
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
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ggtttaggac aggcatttca aatgcaagta cagtacgtcg taggttcc 108
<210> 23
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
gactacatgg gacatcaatt gtttaaaatg ttttagatat agactgaatg acaaatataa 60
acatttgttt gaattagcat cttcaacgtg gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 24
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
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cagcaataca acaaaccgtt gtgtgatttg ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 25
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 25
gactacatgg gacatattgt gtgccccatc tgttctcaga aaccataatc taccatggct 60
gatcctgcag gtaccaatgg ggaagagggt acgtacgtcg taggttcc 108
<210> 26
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 26
gactacatgg gacatacacc atgtagtcag tatagtggtg gaagtggggg tggttgcagt 60
cagtacagta gtggaagtgg gggagagggt gtttacgtcg taggttcc 108
<210> 27
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 27
gactacatgg gacatgtata aaacaggtat atcaaatatt agtgaagtgt atggagacac 60
gccagaatgg atacaaagac aaacagtatt acatacgtcg taggttcc 108
<210> 28
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 28
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attctaaaag ccatttttgg ttacaaccat tagtacgtcg taggttcc 108
<210> 29
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 29
gactacatgg gacatagacc tacgtgacca tatagactat tggaaacaca tgcgcctaga 60
atgtgctatt tattacaagg ccagagaaat gggtacgtcg taggttcc 108
<210> 30
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 30
gactacatgg gacataggta atattatgtc ctacatctgt gtttagcagc aacgaagtat 60
cctctcctga aattattagg cagcacttgg ccatacgtcg taggttcc 108
<210> 31
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 31
gactacatgg gacatgtgtc tactggattt atgtctatat gacaaatctt gatactgcat 60
ccacaacatt actggcgtgc tttttgcttt gcttacgtcg taggttcc 108
<210> 32
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 32
gactacatgg gacataatta gagaattaag acattattca gactctgtgt atggagacac 60
attggaaaaa ctaactaaca ctgggttata caatacgtcg taggttcc 108
<210> 33
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 33
gactacatgg gacatagcag acgaccttcg agcattccag cagctgtttc tgaacaccct 60
gtcctttgtg tgtccgtggt gtgcatccca gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 34
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
gactacatgg gacatgctgt tctgaagtgg aagcaacaca gattcaggta actacaaatg 60
gcgaacatgg cggcaatgta tgtagtggcg gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 35
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 35
gactacatgg gacatttaca cgtacctgaa acttgtatgt taattcaacc accaaaattg 60
cgaagtagtg ttgcagcact atattggtat agatacgtcg taggttcc 108
<210> 36
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
gactacatgg gacataaaag gaacccccaa aaaaaattgt ttagtatttt gtggaccagc 60
aaatacagga aaatcatatt ttggaatgag ttttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatccgaa ggaaaccctt tcggaacgtt taagtgcgtt gcaggacaaa 60
atcatagacc actatgaaaa tgacagtaaa gactacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatcacgt tttatataga atttaaaagt gaatgtgaaa aatatgggaa 60
cacaggtacg tgggaagtac attttgggaa taatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
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gactacatgg gacataccat agtgaaacac aaagaacaaa atttttaaat actgttgcaa 60
ttccagatag tgtacaaata ttggtgggat acatacgtcg taggttcc 108
<210> 40
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatggcaa ctaatacgtt gggaaaatgc aatattcttt gcagcaaggg 60
aacatggcat acagacatta gaccaccagg tggtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatagtgt gtatggaaca acattagaaa aattgacaaa caaaggtata 60
tgtgatttat taattaggtg tataacgtgt cagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
gactacatgg gacatctgta actacaatgg ctgatccagc aggtacagat ggggagggga 60
cgggatgcaa tggttggttt tatgtagaag cagtacgtcg taggttcc 108
<210> 43
<211> 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacatgaacg agacaatgaa actccaacac gtaatatatt gcaagtgtta 60
aaaactagca atggtaaagc tgctatgtta ggttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattaatg acacaacatt tgatttgtcc caaatggtac aatgggcata 60
tgacaatgat gttatggatg atagtgaaat tgctacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacataaata ggcatgttag atgatgctac aacgccatgt tggcattata 60
tagacaatta cctacgaaat gcactagatg gcatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacattatta accaccaggt ggtgccagcg ttgtcagtat caaaggccaa 60
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gactacatgg gacatccacc acatcgaatt ccaaaacctg cgccttgggc accagtgaag 60
gtgtgcggcg ggcgacgacg tctactaagc gactacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgctat gctttttgct ttgcttttgt gtgctactat ttgtgtgtct 60
tgtcatacgt ccacttgtgc tgtctgtgtc ggttacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatcactg ttatgagcaa ttacccgaca gctcagatga ggaggatgtc 60
atagacagtc cagctggaca agcagaaccg gactacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgcaaa aaatagaata acaattgaaa aattattaga aaaattattg 60
tgtatatcta caaattgtat gttaattcag ccatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacataactg cacctacagg gtgtttaaaa aaacatggat atactgtaga 60
ggtgcaattt gatggtgatg tacacaacac cattacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgggaa atccatttgg aatatgtaaa ctgtgtttgc ggttcttatc 60
taaaattagt gaatatagac attataatta ttctacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacattgtca acagtacagc aagtgaccta cgaaccatac agcaactact 60
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gactacatgg gacatgctaa tttgtggacc agcaaataca ggaaagtcat attttggaat 60
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gactacatgg gacatctgtg caaataagta ctggatttat gacattataa gtgtacatca 60
caagccaata tgtgctgcta attgtatata acctacgtcg taggttcc 108
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aaaaaaaacg attccataac atcggtggac ggttacgtcg taggttcc 108
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tgtccatacc gatggcgcga tttcacaatc ctgtacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgatac aggttcagac ctggcagact ttattgatga ttccacagat 60
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taaaagtgat aaaacaacat gtacagactg ggttacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatattat gcaatgttag cagattgtaa cagtaatgct gcagcctttt 60
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ccaccattat taataacctc caataccaat ccttacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacataaagt gttgcacaaa ctgaatacaa tacagaggag tggacattaa 60
aagacactag taatgaactg tggcatacac agctacgtcg taggttcc 108
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aaacgaagat ttcacagcat agctggacag tactacgtcg taggttcc 108
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acggttacaa gaaatttcat taaatagtgg gcatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacattaaca tgtgacagag gcgtgcttat actgctgcta attaggttta 60
aatgtggaaa aaacagatta acagtgtcca aactacgtcg taggttcc 108
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gtagattatt atgggttata ttattggtgt gattacgtcg taggttcc 108
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atctacctgg cattggacca gtaatgaatg tactacgtcg taggttcc 108
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gagggtaaga aaaccattaa gtgaaataac tattacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatccacc aaaattacga agtgctacct gtgcattata ttggtataga 60
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 118
gactacatgg gacatcgtcc gtgggcaacc aagacgccgc agtatcccac agaccaggaa 60
aacgacccag actacgggaa tcagaatttg acttacgtcg taggttcc 108
<210> 119
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 119
gactacatgg gacatgaaag ttttaatcat acttttatat attgggagta accgaaaagg 60
gtttaagacc gaaaacggta catataaaag gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 120
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 120
gactacatgg gacataattc atatatagaa aatatacagg cagacagaga gacagctcaa 60
caattgttgc aagtacaaac agcacatgca gattacgtcg taggttcc 108
<210> 121
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatctttt ggttgcagcc attagacaat gctaaacttg gtttgttgga 60
tgatgcaaca gaaatatgtt ggaaatatat agatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattgaaa ctcttaacga atacaacacc cacaagacca ccaccaccac 60
ctccacgtcc gtgggcaacc aagacgccgc agttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
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gactacatgg gacatatgga aatccatttg cagtatgtaa agtgtgttta cgattgctat 60
ctaaaataag tgagtataga cattataatt atttacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacattgtgt atcaacagta cagcaactga agtacgaacc ctacagcagc 60
tgcttatggg cacatgtact attgtgtgcc ccatacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacatggata tggcaatact gaagtggaaa ctgagcagat ggcacaccag 60
gtagaaagcc aaaatggcga cgcagactta aattacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgatta ttgagccacc aaaattacga agtcaagcat gtgccttata 60
ttggtttaga acagcaatgt caaatataag tgatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgtatg ttactgtgtg gcccagcaaa tacagggaaa tcatattttg 60
gaatgagttt aatacatttt ttaaaaggat gcatacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacataagtg cagtgcagga caaaatccta gacatatacg aagctgataa 60
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gactacatgg gacatcaaaa aagtactcta aaacacaatt atgggaggta catgtgggta 60
gtcgggtaat tgtatgtcct acatctatac ctatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatactgt taaaatacca cccactgtgc aaataagtac tggtgttatg 60
tcattgtaat tgtattgtac aattactgta tgttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatgatga aataggcttg gacgggccag atggacaagc acaaccggcc 60
acagctaatt actacattgt aacttgttgt tactacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatttcta cataacagta atactaaagc aacgctatta tataaattca 60
aagaagctta tggagtaagt tttatggaat tagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatatata tagatgatta tatgagaaat gcattagatg gtaacgacat 60
ttcaatagat gtaaaacata gggcattagt acatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 134
gactacatgg gacatgtcat ccacatggca ttggaccagt gatgacaaag gtgacaaagt 60
aggaattgtt actgtaacat acacaacgga aactacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
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gactacatgg gacattgagc tgctgatacg ctgttataga tgcctaaaac ctctatgtcc 60
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gactacatgg gacatttgta gcgacagtca aatagactgt agcgacagca gtaacatgga 60
tgttgaaaac atagttccaa catcccccac taatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
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gactacatgg gacattaggg gaaacgcccg aatggataca aagactaaca attatacaac 60
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<212> DNA
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gactacatgg gacatagtac cagtgacgag caagtatcca cttctggatc ttctgagcaa 60
ctatcatacc cctccgcaac gccccccgaa gcctacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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agtaaggtta gaaaatatag gtactataaa tattacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgagtt ggtggtgcag ttggacattc agagtaccaa agaggagcta 60
cgtgtggtac aacagctgct tatgggtgcg ttatacgtcg taggttcc 108
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agctcacaaa atggaggctc gcaaaacagt aattacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacataagtc ctgctgtagc attatatttt tataaaacag caatgtcaaa 60
tattagtgag gtgtatgggg aaacaccaga atgtacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacatataca ggtaaatcat gttttgctat gagccttata aattttttcc 60
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattatgg gaagtacata tggaaaccga gagtatttac tgtcctgact 60
ctgtgtctag tacctgtaga tacaacgtac ccctacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatttaaa tgttgtaaaa ataccaccta gtgtacaggt tattttggga 60
caaatgagtt gtccataaag tgttgtatat atttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatcgata tcaaggggtc gacttcattt catttttaag ttattttaaa 60
ttatttttac aaggcacgcc taaacataat tgttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
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gactacatgg gacatatggc gctatttcac aaccctgagg aacggccata caaattgcca 60
gacctgtgca ggacattgga caccacattg cattacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 158
gactacatgg gacatccacc gtgcaggaaa ttgtgttaga gttatgtcca tgcaatgaaa 60
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacatcaggc agagcgtgag acagcacaag tactgttaaa tatgcaacag 60
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gactacatgg gacatggtag cagcaatatt tggagtaaat ccaaccattg ccgaagggtt 60
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacataagat tgtgcaacaa tgtgtagaca ttacaaacgg gcacaaaaac 60
gacaaatgtc aatgccgcaa tggattaaat ttatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 162
gactacatgg gacatcctgt ggaagacaat aggtggcctt atttacatag cggactaact 60
gtgtttaaat ttcctaatgc atttccattt gactacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatagcca aagcaatgtt ttaaaaaaca tggtgttaca gtggaagtat 60
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 164
gactacatgg gacatgcagg ccacaacaaa agaaggaacg tgtgttgtgg tgacactaca 60
cctatagtgc atttaaaagg tgacaaaaat ggttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 165
gactacatgg gacatcatga cgttacaata gactgtgtct attgcagaag gcaactacaa 60
cggacagagg tatatgaatt tgcctttagt gactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 166
gactacatgg gacatattag gagattcaga cgatgaaata gatgaacccg accatgcagt 60
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 167
gactacatgg gacattaaaa cgaaagtata cagacagtat agaaagcagt cctttagcaa 60
agtcgccatt acaggaatta tcactaaatg taatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
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<213> 人工序列
<400> 168
gactacatgg gacataccca tatacaatgt ttagatacaa aaactggaat attaatacta 60
atgctaataa gatacaaatg tggaaaaaat agatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattagat gcagtaaatg tgacgaaggc ggtgattggc gcccaattgt 60
acaattttta agatatcaag gactggaatt tattacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacataccaa aacaggaacc cagtgtatac aatcaatgat aaaaactgga 60
aatgtttttt tgaaaagact tggtgcagat tagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 171
gactacatgg gacatttatg tagtgtgggg tacaatttac tttaaaaaca gtacagacac 60
atggtgtaaa acccaagggc gtgtggatta ctgtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 172
gactacatgg gacatgatta aaatgtctta ggtataggtt gcaaaaacat aacgctttgt 60
atgacaatat atcatgtaca tggcattgga taatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 173
gactacatgg gacataagct ttgaatacac ctttgcaatc tttgcaggta cagtgtgtat 60
attgcaagaa aacattagaa tgggcagatg tattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 174
gactacatgg gacatgacta tgaacaattt gacagctcag aggaggatga aacagataat 60
gtgcgtaacc agcaagccag acaagctgaa caatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 175
gactacatgg gacatgtagt cagaacagcc cgttgcaaga cataacaaat caaagcaaca 60
gtcagcagag cacagacgaa gtaaacaatt tactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 176
gactacatgg gacataattg gggagtacta ccactaatgc taatacgatt tacatgtgcc 60
aaaaatagag caacaattaa aaaatgcctg tgttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 177
gactacatgg gacataggaa cgtggaagga catagcaaga tttctaagat atcaaaatgt 60
taattttatt tattttttgc aagtattaaa acatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 178
gactacatgg gacataattg actgatgtaa attggaaaag ttttttttcc accacttggt 60
ccagattaga tttggaggag gacgcggaca aagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 179
gactacatgg gacataacag atatgggatg gtgtaaaaca aatggagaag tggattataa 60
ggggatatac tatatgcatg ggtgttgtaa acatacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
<400> 180
gactacatgg gacattaagg tatagattta aaaaacataa gggattgtat tgtaaagtgt 60
catctacctg gcattggacc agtaatacta acctacgtcg taggttcc 108
<210> 181
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 181
gactacatgg gacattacag aaggtatagt aggtctgtgt atggtgctac attagaggcc 60
attactaaca aaagtttata tgaattatta atatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
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gactacatgg gacatgtgac ctaagcctgg tgggcccgtg ttgcgcgaac aactaacaac 60
ggcgatggac agtgaaggta cagatgagga gggtacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacataaaat ggcgggtcac aacacagtat gtgtagtggc ggggggagca 60
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatggaat atctaatatt agtactacat atggagaaac accagaatgg 60
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattagat ttttgcaggg gtgtattata tcatatgtaa attcgggcag 60
ccatttctgg ttacagccac tagaggatgc taatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 186
gactacatgg gacatcaaat aaactattgg acattggtac gatacgaatg tgctatgttt 60
tatacagcac gggaaaaaaa cttacaaact ctttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattgaat atgtatctag tacctgcaga gacccgttac cctctactac 60
aactgttgaa cagcactcga acacccccac gactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattgtat tgtacatata tatataggta atacaagcca atatgtgctg 60
ctaattgtat atattgaatt gcaaccattg cggtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattaatg ttttattcta gaattagaga atacagaagg tatagtaggt 60
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattcgca tatttcagca aatgttactg ggcgacctaa gcctggtgtg 60
cccgtggtgt gcgaccaact aacatcggca atgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatggaag gacccttaca ggtagatggg caaaatgacg ggtcacaaca 60
tagtatgtgt agtggcgggg ggagcagcga cagtacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatcagcc gttgcattgt acttttatag aacaggaata tcaaacatta 60
gtagcacata tggcgaaaca ccagaatgga ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 193
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 193
gactacatgg gacatgggaa atcacaattt gcaatgagtt taattagatt tttgcaaggg 60
tgcgttattt catatgtaaa ttcaggtagt cattacgtcg taggttcc 108
<210> 194
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 194
gactacatgg gacatatgaa ctggacagtg ataaattagt agatcaaatt aattattgga 60
cgttggtacg atatgaatgt gctatgtttt atatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattatat gtgtggcaat gtaataacat gtcctgaata tgtatctagt 60
acctacagca ccccgtcacc ctctactaca acttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatgtcat tgggtattat gacagtgtaa atatatgtat tgtacatata 60
taggtttaca agccaatatg tgctgctaag tgttacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacataaaag cttatatgat ttatcgataa ggtgtcatag atgtcaaaga 60
ccacttgggc ctgaagaaaa gcaaaaattg gtgtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
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gactacatgg gacatggact gtgaaggtac agaggatgag ggggcggggt gtaatgggtg 60
gttttttgtt gaagcaatag tagaaaaaaa aactacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatcaaca gaaagctgtg caaatgtaga actaaacagt atatgtgaag 60
tattaaaaag cagtaatgca aaagcaacgt taatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatagttt tgaggatagt acctttgaat tatcacaaat ggtgcaatgg 60
gcatttgacc atgaagtatt agatgatagt gaatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacattgcta aaatagcatt gttagatgat gctacgtatg ggtgttggac 60
atatattgat cagtatttaa gaaacttttt agatacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacatacaat caatcaccag gtagtaccag caacaacagt atcaaaacaa 60
aaggcctgtc aagcaattga aatgcacatg gcctacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacataacga ccaatcccct taccacctgc gtgggcgcca aagaagccca 60
gacacaacag cgaaaacgac agcgacttac tgatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatttgca gtgtttatta ttttgctatt tgtgctttgc ttgtgtgtgt 60
gtcttgtgtt gtgttgtttg ttgccgctac tgctacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatggttc catgaaatag cgggacgttg gacggggcaa tgcgctaatt 60
gctggcaacg tacacgacaa cgtaacgaaa ccctacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacattcgga tgatgaggat gaaaatgcag atgatacagg atctgattta 60
ataaacttta tagatagtga aactagtatt tgctacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatagagt tgtatggtat tagttataat gagttggtac gggtgtttaa 60
aagtgataaa acatgttgta tagattgggt ttgtacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatatgca caattagcag atatagatag taatgctgca gcgtttttaa 60
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gactacatgg gacatagtat agatagaaaa cataggagtt taatacaatt agtatgtcca 60
ccattactaa taacgtcaaa cataaatcca caatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgatac aaatggtaat cctgtatatc aattaaataa tgtaaactgg 60
aaatgttttt ttgaaaggac atggtccaga ttatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatatgtt gtgtggcaat gggtgtatta ctgtggggac aatgggtgga 60
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atccagctca gaggtatata attttgcatg taatacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatggatg aagtagacca tttacagaag cagccacagc aagctagaca 60
agaagaacaa catccttgtt acctaattaa cactacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatatatc aaggggtcga cttcatttca tttttaagtt attttaaatt 60
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gactacatgg gacataaagg acatggtcca gattagattt gaacaacgac gaagacaagg 60
aaaaccatgg agacgctatg ccaacgttta gattacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacattttat gtgttgtata tagaaagggg aaaccacttg gggtatgtca 60
accgtgttta ttgttttact caaaggttag acatacgtcg taggttcc 108
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tatgggtgca ctaaaaattg tgtgccccaa ctgtacgtcg taggttcc 108
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atgtatgggc ggtgaggtaa tatgttctgc tcctacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacatgacac tgtcatttgt gtgtccctgg tgtgcatcgg gaacccagta 60
acctgcaatg gccaattgtg aaggtacaga tggtacgtcg taggttcc 108
<210> 267
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 267
gactacatgg gacatctgta gtaaataata caaatgggga agaggaaggg gaaaatggcg 60
gggaaaatgg cggcagcata cgggaggagt gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 268
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 268
gactacatgg gacatcctgt tgcagcactg tattggtata gaactggaat gtctaatata 60
agtgaagtgt caggtactac gccagaatgg atatacgtcg taggttcc 108
<210> 269
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 269
gactacatgg gacataggca agtcatactt ttgtatgagt ttaatgcact ttttacaagg 60
tacagtaatt tcatatgtaa attccactag tcatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 270
gactacatgg gacatgaaca ttatgaacag gacagtaaac taatatatga tcaaatcaat 60
tattggaaat atgtgcgact ggaaaatgca atatacgtcg taggttcc 108
<210> 271
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 271
gactacatgg gacataaaat gggaagtgca ttgtaatggc aacataattc attgtcctga 60
ctctatgtac agtaccagtg acgacacagt acctacgtcg taggttcc 108
<210> 272
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 272
gactacatgg gacattggga tatatgacat tgtaacagca catgctgtat gtatattgta 60
tacatatcaa tgattgcatt ggtgtttttg gtgtacgtcg taggttcc 108
<210> 273
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 273
gactacatgg gacataaaag catgtagatg aaaaaaaacg gtttcatcaa atagcagaac 60
agtggaccgg acgctgtaca cggtgctgga gactacgtcg taggttcc 108
<210> 274
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 274
gactacatgg gacatctatg atggagggga tacagatgag tcggaaatgg gggattttat 60
tgataatgca catataccaa atatatatgc acatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 275
gactacatgg gacatgtaat aatgcaaaag cagcattgct agcaaaattt aaagaagtat 60
atgggttaag ttatatggaa ttagttagac cattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 276
gactacatgg gacataatga tataacagac gactgtgaaa tagcatataa atatgcatta 60
ttaggcaatg tagacagtaa tgcagctgca ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 277
gactacatgg gacatcaaat atttaagaaa tgcattagat ggtaatccta tatgtttaga 60
tagaaaacat aaaaatttat tacaagttaa atgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 278
gactacatgg gacattataa tgcaattgaa ctgcaaatag cactagaaag tttaaatgaa 60
tctttgtata acacagagga atggacattg caatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 279
gactacatgg gacatacggc aaagacagtg tgacccggac cagaggcccc tggattgttt 60
gcataaccta catcccacca cagagtcctg tactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 280
gactacatgg gacattacga gacagaggta ccgggacttg gggcaggggc agggtgttta 60
caaaatggta atgaagaagg caaccaaatt gtgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 281
gactacatgg gacatcttat acttttttat aattttatta ctgaaaaggg tgtaaccgaa 60
aacggtcatg accgaaatcg gtgcatatat atatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 282
gactacatgg gacataaata tagaggacag tgtcgccggt gcatgacgcg tgcacaagaa 60
cagcaaggca gccgcagaga aacacaagta taatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 283
gactacatgg gacatacagg tgacaccata tcagaggatg aggacgagga cgggacagat 60
acaggttcag acttggtaga ttttattgac acttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 284
gactacatgg gacataaaag taaataataa aaaagcagca atattggcta aatttaaaga 60
aacatatgga ttgtcattta cagatttggt acgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatatgac tatatagatg aaagtgacat agcatatgaa tatgcacagt 60
tagctgattg taatagtaat gcagcagcat ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattggca atccaataag tatagataga aaacataaac atttaataca 60
aatgaagtgt ccaccaatgc taattacatc taatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 287
gactacatgg gacatatggc actagagagt cttgctaaat cagagtttaa aaatgaactg 60
tggacattgc aagatacgtg ccaagaacta tattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacataaaga gtgggggttc ggcgccgact agaaaaccat tcagacattg 60
tggattcaca gaaacaagtg aagtcgacgg acttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 289
gactacatgg gacatcctga aatagagata agctgtgtat attgcaaaac aaccttggaa 60
cgcacagagg tatatgaatt tgcatttaag gattacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacatcacct aagtgactta gaggaagaat acgatgaaac agatgatgtt 60
aatcatcgac aactaccagc ccgacgagct gaatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatgtatg gaacagaaag taaagaaaac agcccattag gggagcagcc 60
aggtgtggat acagatttaa gtccacgatt acatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattacag ccatgtacat tatatgctca cattcaatgt ttagactgta 60
aatggggagt attaatatta gcattattgc gcttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 293
gactacatgg gacatatgtc acagtggatt aaatatagat gttcaaaaat agacgaagga 60
ggggactgga ggccaatagt acaattttta agatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 294
gactacatgg gacattccaa atgcatttcc atttgataag aatggtaatc cagtgtatga 60
aataaatgac aaaaattgga aatgtttttt tgatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 295
gactacatgg gacataacaa agacaactgt atgtcttatg tagcatggaa atgtgtgtac 60
tatatgactg aggcaggaac atgggataaa acatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 296
gactacatgg gacattgata aaaacagttt aaaatgtttg cggtatcgat ttaaaaaata 60
taatcaatac tatagttcta tatcatcaac ctgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 297
gactacatgg gacatgtaat atagaaaatg aaaatccgca attagtaatt gcagaattaa 60
aagacctatt aaaggcaaat aataaaaaag ctgtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatcacag caatgatgct aacatgtcaa tttaatgatg gagatacctg 60
gctgggtttg tggttgttat gtgcctttat tgttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 299
gactacatgg gacatctgca aaaccttcta ttactagtgg gcctatggct cgtcctcctg 60
tggtggtgga gcctgtggcc ccttcggatc cattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 300
gactacatgg gacatcaacg cttaattaca tatgataacc ctgtatatga aggggaggat 60
gttagtgtac aatttagtca tgattctata cactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 301
gactacatgg gacattatgg gaacaccctt tagtcctgta actcctgctt tacctacagg 60
ccctgttttc attacaggtt ctggatttta ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 302
gactacatgg gacataaata tgatgatgtt gaaaattcag ggagtggtgg taaccctgga 60
caggataaca gggttaatgt tggtatggat tattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 303
gactacatgg gacattaaca ccccaagcgg ctctttggtg tcctctgagg cacaattgtt 60
taataagcca tattggctac aaaaagccca gggtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 304
gactacatgg gacatatcag tatcctttgg gacgcaagtt tttgttacaa agtggatata 60
ggggacggtc ctctattcgt accggtgtta agctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 305
gactacatgg gacattgcaa ccgttttcgg ttgcccttgg catacacttt ccaccaattt 60
gttacaacgt gttgcctgtt aatcctatat atttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 306
gactacatgg gacatatgca ctatagagct gtacaagggg ataaacacac caaatgtaag 60
aagtgtaaca aacacaactg taatgatgat tattacgtcg taggttcc 108
<210> 307
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 307
gactacatgg gacatcaacc acccgtggag gctaatggac atatattaat ttctgcaccc 60
actgtaacgt cacaccctat agaggaaatt ccttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 308
gactacatgg gacatgtggt gttaccagat cctaacaaat ttgcattgcc tgactcgtct 60
cttttcgatc ccacaacaca acgtttagta tggtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 309
gactacatgg gacattatgt actgttatat atatgtgtgt atgtactgtt atgtatatgt 60
gtgtatgtac tgttatatgt atgtgtgttg tattacgtcg taggttcc 108
<210> 310
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 310
gactacatgg gacatgtgtt atacttttat gcactgtagc caactcttaa aagcattttt 60
ggcttgtagc agcacatttt tttgctctta ctgtacgtcg taggttcc 108
<210> 311
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 311
gactacatgg gacatccgca atactactgt ggattatgtg tatatgtcac atggtgataa 60
tggagattat gtgtacatga actagagtaa acctacgtcg taggttcc 108
<210> 312
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 312
gactacatgg gacatactat aacatcatct gaatcgacta cacctgctat tttagatgtg 60
tctgttacca atcacactac cactagtgtg ttttacgtcg taggttcc 108
<210> 313
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 313
gactacatgg gacattagtc gcattgggca acgggggtcc atgtacacac gcagtggaca 60
acatataggt gcccgcatac attattttca ggatacgtcg taggttcc 108
<210> 314
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 314
gactacatgg gacatgtgcc tcctcccaac cctgtatcca aggttgttgc cacggatgcg 60
tatgttaaac gcaccaacat attttatcat gcctacgtcg taggttcc 108
<210> 315
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 315
gactacatgg gacatacaaa atggtgactg ccccccgttg gaacttatta ccagtgttat 60
acaggatggg gacatggttg atacaggctt tggtacgtcg taggttcc 108
<210> 316
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 316
gactacatgg gacatctgtg tctaaatctg ctacatacac taattcagat tataaggaat 60
acatgcgcca tgtggaggag tttgatttac agttacgtcg taggttcc 108
<210> 317
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 317
gactacatgg gacattattt atatgttgtt gtagtgtgta tatgtttctt gtattgtgta 60
tatgtgtata tgtttgtgta tatgtgtatg ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 318
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 318
gactacatgg gacatgcatt tttggcttct agctgaacat ttttgtaccc ttagtatatt 60
atgcacaata cccacaaaat gagtaaccta aggtacgtcg taggttcc 108
<210> 319
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 319
gactacatgg gacatgccaa caacacacct ggccagggcg cggtattgca tgactaatgt 60
acaataaacc tgtcggtttg tacaatgttg tggtacgtcg taggttcc 108
<210> 320
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 320
gactacatgg gacatgacat tatacctaag gttgaaggca aaactattgc tgaacaaata 60
ttacaatatg gaagtatggg tgtatttttt ggttacgtcg taggttcc 108
<210> 321
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 321
gactacatgg gacattatgg atacatttat tgttagcaca aaccctaaca cagtaactag 60
tagcacaccc ataccagggt ctcgcccagt ggctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 322
gactacatgg gacatgatta tatgatattt atgcagatga ctttattaca gatacttcta 60
caaccccggt accatctgta ccctctacat ctttacgtcg taggttcc 108
<210> 323
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 323
gactacatgg gacattaaag tatcaggatt acaatacagg gtatttagaa tacatttacc 60
tgaccccaat aagtttggtt ttcctgacac ctctacgtcg taggttcc 108
<210> 324
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 324
gactacatgg gacataatat ccagattata ttaaaatggt gtcagaacca tatggcgaca 60
gcttattttt ttatttacga agggaacaaa tgttacgtcg taggttcc 108
<210> 325
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 325
gactacatgg gacatactat tttggaggac tggaattttg gtctacaacc tcccccagga 60
ggcacactag aagatactta taggtttgta acctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 326
gactacatgg gacatcttat tgtttcaaca cctactaatt gtgttgtggt tattcattgt 60
atataaacta tatttgctac atcctgtttt tgttacgtcg taggttcc 108
<210> 327
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 327
gactacatgg gacattcatt tgtaaaactg cacatgggtg tgtgcaaacc gattttgggt 60
tacacattta caagcaactt atataataat acttacgtcg taggttcc 108
<210> 328
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 328
gactacatgg gacatcagct acagatacac ttgctcctgt aagaccccct ttaacagtag 60
atcctgtggg cccttctgat ccttctatag ttttacgtcg taggttcc 108
<210> 329
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 329
gactacatgg gacataaact tattacatat gataatcctg catatgaagg tatagatgtg 60
gataatacat tatatttttc tagtaatgat aattacgtcg taggttcc 108
<210> 330
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 330
gactacatgg gacattgata tacccattaa tataactgac caagctcctt cattaattcc 60
tatagttcca gggtctccac aatatacaat tattacgtcg taggttcc 108
<210> 331
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 331
gactacatgg gacatggtgt gggcattagt ggccatcctt tattaaataa attggatgac 60
acagaaaatg ctagtgctta tgcagcaaat gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 332
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 332
gactacatgg gacattgggt ctactgcaaa tttagccagt tcaaattatt ttcctacacc 60
tagtggttct atggttacct ctgatgccca aattacgtcg taggttcc 108
<210> 333
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 333
gactacatgg gacatgggaa gtaaatttaa aggaaaagtt ttctgcagac ctagatcagt 60
ttcctttagg acgcaaattt ttactacaag cagtacgtcg taggttcc 108
<210> 334
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 334
gactacatgg gacatcacaa aatgtgtttt tttaaatagt tctatgtcag caactatggt 60
ttaaacttgt acgtttcctg cttgccatgc gtgtacgtcg taggttcc 108
<210> 335
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 335
gactacatgg gacattgcat atacatgcta tattgtcttt acagtaattg tataggttgt 60
tttatacagt gtattgtaca ttgtatattt tgttacgtcg taggttcc 108
<210> 336
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 336
gactacatgg gacatttgat ataacatctg cgggtacaac tacacctgcg gttttggata 60
tcacaccttc gtctacctct gtgtctattt ccatacgtcg taggttcc 108
<210> 337
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 337
gactacatgg gacatcgctt tagtagatta ggtcaacggg caactatgtt tacccgcagc 60
ggtacacaaa taggtgctag ggttcacttt tattacgtcg taggttcc 108
<210> 338
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 338
gactacatgg gacatggcct agtgacaata ccgtatatct tccacctcct tctgtggcaa 60
gagttgtaaa taccgatgat tatgtgactc gcatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 339
gactacatgg gacatggcac tgcttgtaaa tcgcgtcctt tatcacaggg cgattgcccc 60
cctttagaac ttaaaaacac agttttggaa gattacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
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gactacatgg gacatcagta ccaatttaac aatatgtgct tctacacagt ctcctgtacc 60
tgggcaatat gatgctacca aatttaagca gtatacgtcg taggttcc 108
<210> 341
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 341
gactacatgg gacatccagg aagtaatatg tgtgtgtgta tatatatata catctattgt 60
tgtgtttgta tgtcctgtgt ttgtgtttgt tgttacgtcg taggttcc 108
<210> 342
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 342
gactacatgg gacataggtg cgctacaaca attgcttgca taactatatc cactccctaa 60
gtaataaaac tgcttttagg cacatatttt agttacgtcg taggttcc 108
<210> 343
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 343
gactacatgg gacatacaaa taggtgctag ggttcacctt tatcatgata taagtcctat 60
tgcaccttcc ccagaatata ttgaactgca gcctacgtcg taggttcc 108
<210> 344
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 344
gactacatgg gacattatgt cctatattca tagtatgaat agcggtattt tagaggattg 60
gaactttggt gttccccccc cgccaactac tagtacgtcg taggttcc 108
<210> 345
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 345
gactacatgg gacattactt tttttttatt attaccatgc ggtccaaacg ctctacaaaa 60
cgcactaaac gtgcgtctgc tacacaatta tattacgtcg taggttcc 108
<210> 346
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 346
gactacatgg gacattccat ctgtattgca acctcctaca cctgcagaaa catcaggtca 60
tttactactt tcatcatctt ctattagcac acatacgtcg taggttcc 108
<210> 347
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 347
gactacatgg gacatatcct gcaggtgaaa gtattgaaat gcaaccttta ggggcgtctg 60
caactactac ttctacttta aatgatggct tattacgtcg taggttcc 108
<210> 348
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 348
gactacatgg gacatatatt atcacgcagg cagtgctagg ctgcttacag taggccatcc 60
atattattcc atacctaaat ctgacaatcc taatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 349
gactacatgg gacatatatg gttggtacag gctttggagc tatggatttt actgctttac 60
aagacactaa aagtaatgtt cctttggaca ttttacgtcg taggttcc 108
<210> 350
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 350
gactacatgg gacatcatgg tgaggaattt gatttacaat ttatatttca gttatgcaaa 60
ataacattat ctgcagacat aatgacatat atttacgtcg taggttcc 108
<210> 351
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 351
gactacatgg gacattgtat gtatgtttat gtatgcgtgt gtacttgtat atatgtatag 60
tatgttatgt gtgtatgtat gctatgtatg ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 352
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 352
gactacatgg gacattaaat acaactgtag ttcaactatg tgtcatgcac atatattata 60
ttgtcctaca caccttaaac tgcttttagg cactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 353
gactacatgg gacataaata ttaaggtatg gtagtatggg tgtttttttt ggtgggttgg 60
gtattgggtc cggctctggt actgggggtc gcatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 354
gactacatgg gacatattcc aggggtgcgc cgtcctgcac gtttagggtt atatagtaag 60
gctacacaac aagtaaaagt tattgatcca acgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 355
gactacatgg gacatacagt ccacatctgc tgtgtctgcc tatgtaccta caaataccac 60
tgtgccacta agtacaggtt ttgacattcc cattacgtcg taggttcc 108
<210> 356
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 356
gactacatgg gacattttgg atttcctgat acatcttttt ataatcctga aactcaacgc 60
ttagtttggg cctgtgttgg tttagaggta ggttacgtcg taggttcc 108
<210> 357
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 357
gactacatgg gacattttac gtagggaaca aatgtttgta aggcattttt ttaatagatc 60
aggcacggtt ggtgaatcgg tccctactga ctttacgtcg taggttcc 108
<210> 358
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 358
gactacatgg gacatatacc tataggtttg tcacctcaca ggccattaca tgtcaaaaaa 60
ctgcccccca aaagcccaag gaagatccat ttatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 359
gactacatgg gacatatttt ataaactatt gttcctactt gttcctactt gttcctgctc 60
ctcccaatag tcatgtactt atttctgcct atatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 360
gactacatgg gacataaggt tgtgtcatgc attataaata agttgtatgt tactcatata 60
attaattgca tataggtatt acaccgtttt cggtacgtcg taggttcc 108
<210> 361
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 361
gactacatgg gacatgctgc aatccccttg cagcctatac gtcctccggt tactgtagac 60
actgttggac ctttagactc gcctatagtg tcatacgtcg taggttcc 108
<210> 362
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 362
gactacatgg gacattaaac ttataacata tgataatcct gcatttgaaa gctttgaccc 60
tgaagacaca ttacaatttc aacatagtga tattacgtcg taggttcc 108
<210> 363
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 363
gactacatgg gacattattt cccacatcta gcccatttgt tcctatttcg cctttttttc 60
cttttgacac cattgttgta gacggtgctg acttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 364
gactacatgg gacattggtc atcctttatt aaacaaattt gatgacactg aaaccggtaa 60
caagtatcct ggacaaccgg gtgctgataa tagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 365
gactacatgg gacatttcaa agcagtgctt tttttcccac tcctagtgga tcaatggtta 60
cttccgaatc tcagttattt aataagccat atttacgtcg taggttcc 108
<210> 366
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 366
gactacatgg gacataaatt ttcagcagat ttagatcagt ttcctttggg acgcaagttt 60
ttattacagg caggtcttaa agcaaaacct aaatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 367
gactacatgg gacatttttg acatactagt gtccatattg tacaatttcc tccattttgt 60
atgcctaacc gttttcggtt acttggcata cattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 368
gactacatgg gacatactaa taaatacctt tatattttag cagtgtatta ttatgagaca 60
caaacgatct acaaggcgca agcgtgcatc tgctacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 369
gactacatgg gacattttct acacatttaa atcccacatt tactgaacca tctgtactac 60
accctccagc gcctgcagaa gcctctggac atttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 370
gactacatgg gacatataca ttattatcag gatttaagtc ctattgtgcc tttagaccgc 60
actgtgccaa atgaacaata tgaattacag ccttacgtcg taggttcc 108
<210> 371
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 371
gactacatgg gacatatgtg tctcgcgcaa gcatttatta ttatgctggt agttccagac 60
ttcttgctgt tggccatcca tatttttcta ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 372
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 372
gactacatgg gacatattat tgaggatggt gatatggtgg acacaggatt tggttgcatg 60
gattttaaaa cattgcaggc taataaaagt gattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 373
gactacatgg gacatggaat atataagaca tgttgaagaa tatgatctac agtttgtttt 60
tcaactatgc aaagttacct taactgcaga cgttacgtcg taggttcc 108
<210> 374
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 374
gactacatgg gacattttgt gtatgtgtta caatgtatgt tatgttgtat gttactgtgt 60
ttgttttaca tgtacttgtt tgtgtgcatg ttctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 375
gactacatgg gacatttttt actttacttt caaaccttat gtgcagtttt ggcttacaca 60
attgctttgt atgccaaact atgccttgta aaatacgtcg taggttcc 108
<210> 376
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 376
gactacatgg gacatctggc acaggtggaa gatctggata tgttccactg ggtacaacac 60
ctccaacggc tgccacaaac attcctatac gactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 377
gactacatgg gacataccca gcaggttaag gttgttgacc ctgcctttat gacttctcct 60
gcaaaactta ttacatatga taatcctgca tattacgtcg taggttcc 108
<210> 378
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 378
gactacatgg gacataccat taagtagtgg ctatgatatt cctataacag cagggccaga 60
cattgtattt aactctaata ctattactaa cactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 379
gactacatgg gacatgcctg tacaggcgtt gaagtaggtc gtggtcagcc attaggtgta 60
ggtattagtg gtcatccttt attaaataaa ttgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 380
gactacatgg gacataggtg aaacagtacc tgcagaccta tatattaagg gtaccactgg 60
cacattgcct agtactagtt attttcctac tcctacgtcg taggttcc 108
<210> 381
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 381
gactacatgg gacatctaaa gatgatccat taaaaaatta tactttttgg gaggttgatt 60
taaaggaaaa gttttctgca gacttagatc aattacgtcg taggttcc 108
<210> 382
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 382
gactacatgg gacatcctcc attttgtgtg ttagtgtcat tctacctcca ttttgtgtgt 60
tagtgtcctt tacattacct ttcaaccgat ttctacgtcg taggttcc 108
<210> 383
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 383
gactacatgg gacatattgt gtttggtact gtgtaacatg tgtgtatggt ggttttattt 60
tttgttgttc attgtatatt ttgttttttt acttacgtcg taggttcc 108
<210> 384
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 384
gactacatgg gacatcccct gttgttacac caagggtccc acctacaaca ggttttacaa 60
taaccacatc tacagatacc acacctgcta ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 385
gactacatgg gacatgcact aacatctagg aaaggcacta ttagatatag tagagtaggt 60
aataaacgta ctatgcatac acgaagtgga aaatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 386
gactacatgg gacatagcta tcccatattt ttttgcagat gtctctgtgg cggtctaacg 60
aagccactgt ctacctgcct ccagtgtcag tgttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 387
gactacatgg gacattgttt aataggttgt aggcctccta taggtgaaca ttggggaaaa 60
ggcacacctt gtaatgctaa ccaggtaaaa gcatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 388
gactacatgg gacatgagta accaattgtt tgttactgta gttgatacaa cccgtagtac 60
aaatatgtct gtgtgttctg ctgtgtcttc tagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 389
gactacatgg gacatctaaa aaatcttcta ctaaacgtag aaaagtaaaa agttaatgtg 60
taaatgtgta tgcatgtata ctgtgtgtta tgttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 390
gactacatgg gacattgatt catcttgcag tattagtcat ttttcatact tgtggtccac 60
ccacacttgt aacacttgta acagtgcttt tagtacgtcg taggttcc 108
<210> 391
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 391
gactacatgg gacattaagc gtgcatctgc aactgaccta tatagaacct gtaaacaatc 60
gggtacctgt ccaccagacg ttgttgataa agttacgtcg taggttcc 108
<210> 392
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 392
gactacatgg gacatcctcg ggtaatatat ttgtcagtac ccctacatca ggtacacatg 60
gctatgagga aatacctatg gaagtgtttg ccatacgtcg taggttcc 108
<210> 393
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 393
gactacatgg gacattctga tgcttcagat gcattatttg atatatatgc tgatgtggac 60
aataacacat atttagatac tgcatttaat aattacgtcg taggttcc 108
<210> 394
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 394
gactacatgg gacattagga catccatatt ttaaagtggg tatgaatggt ggtcgcaagc 60
aggacattcc aaaggtgtct gcatatcaat atatacgtcg taggttcc 108
<210> 395
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 395
gactacatgg gacatttgca ggaaaccaaa agtgaggtgc ctttagatat ttgtcaatcc 60
atttgtaaat atcctgatta tttgcaaatg tcttacgtcg taggttcc 108
<210> 396
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 396
gactacatgg gacatgtgta ctgtcacatt aacaactgat gttatgtctt atattcacac 60
tatgaattcc tctatattgg acaattggaa ttttacgtcg taggttcc 108
<210> 397
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 397
gactacatgg gacatacagt ttcatgtgtg attgcacacc ctgtgactaa cagtgtattt 60
gttttacata taataggtct gcaacatttc atatacgtcg taggttcc 108
<210> 398
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 398
gactacatgg gacattgctt ggttgttggt gtttcttttt atagttgtta ttacatcccc 60
attaacagca tttgctgtat acatttgttg ctatacgtcg taggttcc 108
<210> 399
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 399
gactacatgg gacatcacct gtggttattg accctgtagg gcctactgat ccatctattg 60
ttacgttggt agaggagtcc agtgttgttt ccttacgtcg taggttcc 108
<210> 400
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 400
gactacatgg gacattatga gcccctggac accacactat cctttgagcc taccagtaat 60
gttcctgatt cagattttat ggatattatt cgttacgtcg taggttcc 108
<210> 401
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 401
gactacatgg gacattgctg ccacctccac ctatataggt attcatggca cacaatatta 60
tttatggcca tggtattatt attttcctaa aaatacgtcg taggttcc 108
<210> 402
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 402
gactacatgg gacatagtgc tcatgcagct acagctgtta ttacgcagga tgttagggat 60
aatgtgtcag ttgattataa gcaaacacag ctgtacgtcg taggttcc 108
<210> 403
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 403
gactacatgg gacatcagtg gctctattac tacttctgat tctcaattat ttaataagcc 60
atattggtta cataaggccc agggccataa caatacgtcg taggttcc 108
<210> 404
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 404
gactacatgg gacataatat ccccttggtc gaaagttttt agttcaggct gggttacgtc 60
gtaggcctac cataggacct cgtaagcgtc ctgtacgtcg taggttcc 108
<210> 405
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 405
gactacatgg gacatccttt taaacataat acttaaactg gcacatttac aacccctaca 60
tagtttaaac tactggcgcg ccttcttggc gtatacgtcg taggttcc 108
<210> 406
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 406
gactacatgg gacatcaact gacttatata gaacatgtaa gcaatccggt acgtgccccc 60
ctgatgttat taacaaggtg gaaggcacaa ccttacgtcg taggttcc 108
<210> 407
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 407
gactacatgg gacataatca acaggtccgt gtgtccacct cacagttttt aacacatccc 60
tcatcgttgg ttacatttga taatccagct tattacgtcg taggttcc 108
<210> 408
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 408
gactacatgg gacatatatt ttagggttgt acctaatggt gcaggtaata aacaggctgt 60
tcctaaggta tccgcatatc agtatagggt gtttacgtcg taggttcc 108
<210> 409
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 409
gactacatgg gacatagttc aggctgggtt acgtcgtagg cctaccatag gacctcgtaa 60
gcgtcctgct gcttccacgt ctactgcatc tactacgtcg taggttcc 108
<210> 410
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 410
gactacatgg gacatcctaa actggcacat ttacaacccc tacatagttt aacctactgg 60
cgcgccttct tggcgtacat gtggcacacc tggtacgtcg taggttcc 108
<210> 411
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 411
gactacatgg gacattttgt ctaataaata cttttatatt ttttaatagc ttgtcgcaat 60
gagatacaga cggtctacac ggcacaaacg tgctacgtcg taggttcc 108
<210> 412
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 412
gactacatgg gacataatca gtttctacac atttaaatcc tacattcact gaaccatcta 60
taatacagcc cccggcacct gcagaagcat ctgtacgtcg taggttcc 108
<210> 413
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 413
gactacatgg gacatgcacg ggtacattat tatcatgata ttagtcctat acagcctgct 60
gaagttcagg aagacataga agtgcaacct ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 414
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 414
gactacatgg gacatagtat gtgtctcgca caagcatcta ttattatgca ggcagttcta 60
gattacttac agtaggacat ccctattttt ctatacgtcg taggttcc 108
<210> 415
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 415
gactacatgg gacatctcat taacagtgta atacaggatg gggacatggt agatacagga 60
tttggttgca tggattttaa taccttgcaa gcttacgtcg taggttcc 108
<210> 416
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 416
gactacatgg gacattaaaa atgaaaattt taaggaatac cttcgtcatg gcgaggaatt 60
tgatttacaa tttatttttc aattgtgcaa aattacgtcg taggttcc 108
<210> 417
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 417
gactacatgg gacatggtaa ccattgtttg ttatgtaatt gttttctgtg tgtactgtgt 60
tgtttgcatg ttatgtatgt gtgtgtgcat gtttacgtcg taggttcc 108
<210> 418
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 418
gactacatgg gacatataca ttgcctaaca ttgcatgttt taaactgctt ttaggcacat 60
attttattta aactttcaat gcactaatta cagtacgtcg taggttcc 108
<210> 419
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 419
gactacatgg gacatgcaaa gcctctggca cctgcccccc cgatgttatt cctaaagtgg 60
aaggcacaac tattgcagat caacttttaa aattacgtcg taggttcc 108
<210> 420
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 420
gactacatgg gacatattag tacacacacc tatgaagaaa tccctatgga tacatttgtt 60
acctctactg acagcagcag tgtaacaagt agttacgtcg taggttcc 108
<210> 421
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 421
gactacatgg gacattatta atgatggttt gtatgatgtg tatgcagagt ctttgcagca 60
acccacgttt cacttacctt ccacactttc tactacgtcg taggttcc 108
<210> 422
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 422
gactacatgg gacataaaaa agttttagtt cccaaggtgt ctggcctgca atacagggta 60
tttagaatta aattgccgga ccctaataaa ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 423
gactacatgg gacatatgta gcagtgtatg taagtatcca gattatttgc aaatggctag 60
cgagccatat ggtgacagtt tgttcttttt tcttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 424
gactacatgg gacatatatt cataagatgg atgccactat tttagaggac tggcaatttg 60
gccttacccc accaccgtct gcatctttgg aggtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 425
gactacatgg gacattttgt gtatgtatta ataaagtact gtatttacta aactatttat 60
attagtctta tgttatggtt gcacccacat gagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 426
gactacatgg gacatcctac gccaaatatg tcttgtaaaa cataattgaa tactgttact 60
caccaggtgt gcactacacg accggttacg gtttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 427
gactacatgg gacataggcc ttccacaata gttgatgtaa ctccggcgcg accacctatt 60
gttgtggaat ccgtagggcc tacagaccct tcctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 428
gactacatgg gacattagac ctgcaacatt agtatctgct gataatccac tttttgaagg 60
tactgacaca tctttagctt tttctccgtc gggtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 429
gactacatgg gacatctaca ggccccagta cgtggccctt tgttcctcag tctccttatg 60
atgttaccca tgatgtatat atacagggat ccttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 430
gactacatgg gacatccatc cattgtttaa taggctggat gatactgaaa gttccaattt 60
agcaaataat aatgttatag aagatagtag ggatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 431
gactacatgg gacatctccg agttctgtat atgttgctac gcctagtggg tctatgatta 60
cgtctgaggc acagttattt aataaacctt atttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 432
gactacatgg gacatagttt ttctacagac ctggatcaat ttccactggg tagaaaattt 60
ttaatgcaac tgggcactag gtcaaagcct gcttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 433
gactacatgg gacataattc ggttgcatgg cctagtgcca ttatttaaac taaaaggaat 60
tcggttgcat ggcctagtgc cattatttaa acctacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 434
gactacatgg gacatacata tttcggaggc cttggcattg gtacaggaac tgggtctggg 60
ggtcgtgcag gctatgttcc attggggtct aggtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 435
gactacatgg gacattattc gggtcctgac atagtgttgc ctacaggccc cagtacgtgg 60
cccttcgttc ctcagtctcc ttatgatgtt acctacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 436
gactacatgg gacatttatg gcatatttac ataatatgaa tgctaaccta ctggaggact 60
ggaatattgg gttatccccg ccagtggcca ctatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 437
gactacatgg gacatataaa ctaaggtgtg tcattattgt ggcttttgtt ttgtaagtta 60
ttgtgtacag tgcactatgt gtattgtgca tactacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattgatg tgtattaatt ttcatgcaca atacttaacc caacaagact 60
gaatgtatac tggtgttgca catggtggta tggtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 439
gactacatgg gacatctagt tttatagacg ccggtgcacc agccccatca attcccactc 60
catctggctt tgatattacc acctctgcag atatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatgatcc tgattttcta gatattgttg cattgcacag acctgcatta 60
acctctcgca ggggtactgt acgttatagt aggtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattttta tgttgcaccc tagttatttt attttgcgtc gcagacgtaa 60
acgttttcca tatttttttg cagatgtccg tgttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 442
gactacatgg gacataggga atgcttatct atggattata aacaaacaca attatgttta 60
attggctgta aacctcccac tggtgagcat tggtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 443
gactacatgg gacatttggc tacagcgtgc acaaggtcat aacaatggca tttgctgggg 60
caatcagtta tttgttaccg tggttgatac cactacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 444
gactacatgg gacatgacta aaacgttcag cccctactac ccgtgcacca tccaccaaac 60
gcaaaaaggt taaaaaataa ttgttgtggt acttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 445
gactacatgg gacattactt gcatatgtga ctcatatata catgcagtgc agttgcaaaa 60
tgtttaatta tactcatagt ttaaacatgc ttatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 446
gactacatgg gacatcacct gatgttatac ccaaagttga aggcactact atagcagatc 60
aaatattacg atatggtagc ttaggggtgt ttttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 447
gactacatgg gacataacat accaatggat acctttgtta tttctactga cagtggcaat 60
gtcacgtcta gcacacccat tccagggtct cgctacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 448
gactacatgg gacatacttt atgatattta tgctgacgat gctgatacta tacatgattt 60
tcagagtcct ctgcactcac atacgtcctt tgctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 449
gactacatgg gacatttagt tcccaaggta tcaggcttac agtatagggt ctttagggtg 60
cgtttacctg atcccaataa atttggtttt ccttacgtcg taggttcc 108
<210> 450
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 450
gactacatgg gacatatgca aatatccaga ttatttaaaa atggccagtg aaccttatgg 60
ggatagtttg ttcttttttc ttagacgtga gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 451
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 451
gactacatgg gacatccaat attttggagg actggcaatt tggtttaaca cctcctccgt 60
ctgccagttt acaggacaca tatagatttg ttatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 452
gactacatgg gacattgtat tgtttgggtg tatctatgag taaggtgctg tccctaaatt 60
gccctaccct gccctgccta ttatgcatac ctatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 453
gactacatgg gacattttat aattccactg ttactactat atgcccatgc aatactgtcc 60
atacaataat tgttgtatat tgtaaattac atttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 454
gactacatgg gacatggagc ccctgcccca acatttacag gtacttcagg atttgaaata 60
tctacctcta gtacaacaac accagctgtt ttgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 455
gactacatgg gacattaggc ctgcattaac atccagacgc agcactgtaa ggtttagtag 60
gctaggacaa cgggcaacca tgtttacccg tagtacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
<400> 456
gactacatgg gacataacgt aaacgtgttc cctatttttt tacagatggc tctatggcgt 60
tctagtgaca acaaggtgta tctacctcca ccttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 457
gactacatgg gacattatta ttggctgtgt acctgccatt ggagaacact ggacaaaggg 60
cactgcttgt aagcctacta ctgtggttca gggtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacatgttgg cacaatcaat tgtttttaac agttgtagat actactcgca 60
gcaccaatct ttctgtgtgt gcttctacta ctttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 459
gactacatgg gacatcccac ctctacccca tcaccaaaac gtgttaagcg tcgcaagtct 60
tccagaaaat agtgttgttt gctatgtgtt tgttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 460
gactacatgg gacatctaac acaacttacg aacgccaaat agttagtcat catcctgtcc 60
aggtgcactc taacaatacc ttgcataact ttgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 461
gactacatgg gacatttcaa attagtagct ctagttttat aaatcctgca tttacagacc 60
cttctgtcat tgaggttccc caaacaggtg aaatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 462
gactacatgg gacatcccac gcaaacgtgc agcgcctgcc cctacctcta ccccatcacc 60
aaaacgtgtt aagcgtcgca agtcttccag aaatacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
<400> 463
gactacatgg gacataattt gtgtgtttgc gctttgcttt tgtgtttgtc tgtgtgtgtg 60
ccattttgtc ccgcttttgc tatctgcatc ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 464
gactacatgg gacattcctg cacgaccacc tattgtggtg gagtcagttg ggcctacaga 60
tccttctatt gttacactgg tagaagaatc tagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 465
gactacatgg gacatataat cctgtttttg aaggtgctga cacaacgttg accttttctc 60
cctcgggtgt ggctcctgat cctgatttta tggtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 466
gactacatgg gacatgtacc tcagtctcct tctgatgtta cacatgatgt atatatacag 60
ggagctacat ttgcactatg gcctgtatat ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 467
gactacatgg gacatacact gaggtctcta atttagcagg taataatgtt atagaagata 60
gccgggacaa tatatctgtt gattgtaaac aaatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 468
gactacatgg gacatcctag tgggtccatg attacctctg aggcccaatt atttaataaa 60
ccttattggt tgcaacgtgc acagggccat aattacgtcg taggttcc 108
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<213> 人工序列
<400> 469
gactacatgg gacattcctt tgggtagaaa atttttaatg caactaggcc ctagaccccc 60
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<213> 人工序列
<400> 470
gactacatgg gacatcgact tttcagcaaa acagttaatc ctttggcata ttgccgtttc 60
ctgttgtatg attcaggtat gtacactgcc ttatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 471
gactacatgg gacataacgc gcatctgcca cacaattata taaaacctgc aaattatctg 60
gtacatgtcc tgaggatgtt attaataagg tagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 472
gactacatgg gacattctgg taatattttg attagcactc ctacatctgg aatacatagc 60
tatgaggaaa tacctatgca aacatttgct atatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 473
gactacatgg gacatatttg atggcctata tgatatttat gcaaatattg atgatgaggc 60
acccatttca tttcgtcagt ctggtgctac acctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 474
gactacatgg gacatgtttc taaatctggt accaaaacaa acatccctaa agttagtgca 60
tatcagtata gagtgtttag ggtacggttg ccttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 475
gactacatgg gacatggtgc cattggacat tgtacaatct acatgtaaat atcctgatta 60
tctaaaaatg tctgcagatg cctatgggga ttctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 476
gactacatgg gacatttatg gcatatttgc ataatatgaa taatacttta ttagacgatt 60
ggaacattgg attgtcccca ccagttgcaa ctatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 477
gactacatgg gacatgttac ttttacgcgt ggttgcataa actaaggtgc ggtagtatcc 60
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<211> 108
<212> DNA
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<400> 478
gactacatgg gacatgctcg ttatagtatg ccttaagttt tgtattgtgc atttgtattg 60
gtgtatattt gtataaataa atatggtatc acatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 479
gactacatgg gacatcttcg tctgggtctg tgcaagtaag cagtactagt tttactaacc 60
ctgcatttgc agaccccact attatagaag tgctacgtcg taggttcc 108
<210> 480
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 480
gactacatgg gacatcaaat cggggcacag gtgcactatt atcatgatat tagtggcatt 60
gctcctgctg acagcattga actacaacct ttgtacgtcg taggttcc 108
<210> 481
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 481
gactacatgg gacatccccc tcagtggcga aggttgtcaa tacagatgat tacgtaacac 60
gcactggcat ttattactat gctggtacat ctatacgtcg taggttcc 108
<210> 482
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 482
gactacatgg gacatcccgg ggactgtcca ccattggaat tagtaaatac acctattcag 60
gatggcgata tgattgatac aggatatggt gcttacgtcg taggttcc 108
<210> 483
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 483
gactacatgg gacattgaat cagctgtacc aaatatttat gatcctaata aatttaagga 60
atatattagg catgttgagg aatatgattt gcatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattggtt gtatgtgtgg ttgtatatgt gtcatgttgt tgttggtatg 60
ttgtgcatgt atgtgtatat gtatatgtgt atgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 485
gactacatgg gacattaata aaactgcttt taggcatagg tttttaactg tttttacttg 60
cctaatagca tagttggcct gtataactac ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 486
gactacatgg gacatgtact ggctctggca ccggaggtcg tgctgggtac attcctttag 60
gtggaaaacc taatactgtt gtggatgtgt cgctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 487
gactacatgg gacattatag tagggcacat caacaggttc gtgttagtaa ttttgatttt 60
gtaacgcacc cttcatcatt tgtaacattt gattacgtcg taggttcc 108
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gactacatgg gacattacta ccattcctct tggtactgct tggaacacgc ctgtaaatac 60
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gactacatgg gacatcgcat ggtatgggcc tgtgttggtg ttgaaatagg tagggggcag 60
ccattgggcg ttggccttag tgggcatcca ctatacgtcg taggttcc 108
<210> 490
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 490
gactacatgg gacatgggag gcatggtagg ggacactatt cccactgaca tgtatattaa 60
gggcactgac attcgtgaaa ctcctagtag ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 491
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 491
gactacatgg gacataaaag gacgcccctg cacctgttaa aaaagatccc tatgatggtc 60
ttaacttttg gaatgtggat ttaaaggaaa agttacgtcg taggttcc 108
<210> 492
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 492
gactacatgg gacatatatg caatatattt atggttgcaa actataccgt gtggccattt 60
tgtatggccg ggttgtgtgc gaccgctttc ggttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 493
gactacatgg gacattggtt tgtggtttca acatcattta cagctacgtt ttttgtatat 60
atttgtttgt tttatatacc tgcatttttg ttatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 494
gactacatgg gacatagtgg tggggatggg tttgaggtca ctacctcctc tactacaacc 60
cctgctgtgt tagatattac cccctcccct ggatacgtcg taggttcc 108
<210> 495
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 495
gactacatgg gacatttctc gcagaggcac tgtaaggttt agcaggttag gtcaaaaggc 60
cacacttaaa acacgtagtg gtaaacaaat tggtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 496
gactacatgg gacatcttgt tttttttcag atggccttgc ggcgtactag tgacagcaag 60
gtatatctgc ctcctacccc tgtgtcccgg gtttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 497
gactacatgg gacattttag gtgaacactg gggcgttggc actgtatgta aaaatgcaca 60
gtctcaggta cagcgtggcg attgtccacc ttttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 498
gactacatgg gacataattg tttgttactt gtgtagatac tacccgcagt accaacctca 60
ctattagtac tgtatctgca caatctgcat ctgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 499
gactacatgg gacattcctc taccacacgt aaaaaacgca aacttactaa gtaattccac 60
atggttgtgt cagtgtatag ttttgtatgt gtgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
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gactacatgg gacattttac taagtgcata gttggctagc agttttactg ttttatgcca 60
actatatgtc tgacacattc cttttaacaa taatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 501
gactacatgg gacatagtat tattaattca ggatctacta tacctacatt tactggtact 60
gatggctttg aaataacttc ctcttctaca acatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 502
gactacatgg gacatttttc tagatattat taaactgcac cgccctgcgc ttacatctcg 60
cagaggtaca gtgcgcttta gtagactggg tcatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 503
gactacatgg gacatattac tatttgtggc cctatacata tttattacgc aaacgccgta 60
aacgtatacc ctattttttt gcagatggct ttgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 504
gactacatgg gacattaaca tatctgtaga caacaaacaa acacagttat gcattatagg 60
ctgtgctcct cctattgggg aacactgggc cactacgtcg taggttcc 108
<210> 505
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 505
gactacatgg gacatattgg ttgcatcgcg cccagggcca caataatggc atttgctgga 60
ataatcagct ttttattact tgtgttgaca ctatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 506
gactacatgg gacataaggc caggccaggc cttaaaaggc ctgccccatc ctcttcctct 60
tcctcttcag ccaaacgtaa acgggttaaa aaatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 507
gactacatgg gacatggttg ctaacatttc actacatttg ccaactttta aaccacagta 60
cctatgttta ttggcataaa ccttaattct ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 508
gactacatgg gacatctaca tttactgtat acttgatttg tttttatatt ccatgctttt 60
tattacattt atataccttt tctattttgc aactacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 509
gactacatgg gacatctttg aaattacttc ctcttctaca acaactcctg cggttttaga 60
cattacacct tccgctggta cagtacatgt tactacgtcg taggttcc 108
<210> 510
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 510
gactacatgg gacatgtaca gtgcggttta gtagattggg tcaaaaggcc accatacgca 60
cacgtagtgg caaacaaata ggtgctcgtg gactacgtcg taggttcc 108
<210> 511
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 511
gactacatgg gacattatac cctatttttt tgcagatggc tttgtggcgt actaatgaca 60
gcaaagtgta tttaccacct gcaccagtgt cactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 512
gactacatgg gacatgctcc tcctattggg gaacactggg ccacaggtac cacatgtaaa 60
aacgtacctg tacctcaggg tgactgtcca ccttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 513
gactacatgg gacattcagc tttttattac ttgtgttgac actactaaaa gtaccaattt 60
aaccattagc actgctgtta ctccatctgt tgctacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 514
gactacatgg gacatcgtct gccaaacgta aaagggttaa aaaataggtt cgccctgcct 60
atgtatgtgt ttgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 515
gactacatgg gacatggtat gtacatcccg cccgcccacg ccttgttcct ggcgcgcctt 60
cctggcgcat gtcatacaca ccacattact cattacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 516
gactacatgg gacatttggc cgataaaata ttacagtgga gtgggttggg tatatttttg 60
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<213> 人工序列
<400> 517
gactacatgg gacattactg gtactgaacc tattagcagc acacctactc caggggttag 60
tcgcatagct gctccccgct tgtatagtaa gtctacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 518
gactacatgg gacatactcc tctttgtcta ggcagttgcc ctccttatct tcatctatgt 60
cttcatctta tgcaaatgtt actattccat ttttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 519
gactacatgg gacataccag atcctaacaa gtttggactc ccggatccaa atttatataa 60
tccagacaca gataggttgg tgtggggttg tgttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 520
gactacatgg gacatattcc atgttttttc atttacgcag ggagcaaatc tttgctaggc 60
actattataa taaacttgta agtgttgggg aagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 521
gactacatgg gacatccgtc tgctagtttg gaggatgcat ataggtttgt tagaaatgca 60
gctactagct gtcaaaagga cacccctcca cagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 522
gactacatgg gacatattat ccccgtaggt caagggtggt gtttcggtgg cgtccctatt 60
gccctaccca ttttttgcag cacaacagtt tattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 523
gactacatgg gacatcatcc caattaacta cattttttgt atatttgatt tttttttact 60
taccttgttt acttttacat ctatatacat ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 524
gactacatgg gacatctttg aaattacttc atcttccaca acaacccctg ctgtgttgga 60
catcacccca tctgctggta ctgtacatgt ttctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 525
gactacatgg gacatgcaca gtacgcttta gtaggttagg tcaaaaggcc accatgcgca 60
ctcgtagtgg caaacaaatt ggtgctcgtg tactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 526
gactacatgg gacattttac agatggcatt gtggcgcact aatgacagca aggtgtattt 60
gccacctgca cctgtgtctc gaagtgtgaa tactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 527
gactacatgg gacatgggaa cactggggta ttggcactac atgcaaaaac acacctgtac 60
ctccaggaga ctgccccccc ctggaacttg tattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 528
gactacatgg gacatacctg tgttgatact accagaagta caaatttaac tattagcact 60
gccactgctg cggtttcccc aacatttact ccatacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 529
gactacatgg gacatacgta aacgtgttaa aaagtaatgt atgttagttt ttgtatgctt 60
gtgcacactg ttgtatgcct gtatgtatat gtttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 530
gactacatgg gacatgtact tggcgcgcct taccggcgct agtcatacaa cctattagtc 60
atttgtactt taacaattgt tggcacactg ttttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 531
gactacatgg gacatgatgt tattcctaaa attgaaggtt ctacccttgc tgataagata 60
ttacaatgga gtggtttggg aatattttta ggttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 532
gactacatgg gacataatgg aagtatttgc ttctactaat ggaacaggat tagaacctat 60
tagtagtaca cctattcctg gtatacaacg agttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 533
gactacatgg gacatctagc atacatacgc cgcgcatgtc atattcccct acaacattac 60
cagttccaag atatgcctcc aatgtgtttt ccttacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 534
gactacatgg gacatggtat ctgcctatca gtacagggta tttagagtgc acctacctga 60
tcctaataaa tttggattgc ctgatccaca gtttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 535
gactacatgg gacatatcct gattatctta aaatgtctgc agatacatat ggaaacagca 60
tgtttttttt tcttcgccgg gaacaattat ttgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 536
gactacatgg gacatgcctc catattggag gattggaatt ttggactaac cttacctccc 60
actgctagtt tggaagatgc ctataggttt atttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 537
gactacatgg gacattcttc atgcatggtt acatgtcttt actacactat ttgtcatttg 60
ttttacccct gaggtaatgg gaggaacctt aggtacgtcg taggttcc 108
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 539
gactacatgg gacatggtac acggcctaca acagttgtgg acgcatcccc tgctagacca 60
cctattgttg ttgaatctgt gggtcctacg gactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 540
gactacatgg gacatcctta ccaaacctga aacattaatt actgtggata atccagtctt 60
tgaggatgct gacacaactt taaccttttc acctacgtcg taggttcc 108
<210> 541
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 541
gactacatgg gacattgcct actggtccta ccacatggcc ctatgcccct caggccccat 60
ttgacactac acatgatgtg gttatacagg gattacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 542
gactacatgg gacattagtg gcaatccttt atttaataaa ttggatgaca ctraaagttc 60
cactatagct aatcaggata cagcagagga tagtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 543
gactacatgg gacatatccc ccgccaagct cagtatatgt tgctactcct agtgggtcta 60
tggtaacctc tgaggctcag ttgtttaata aactacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 544
gactacatgg gacatcagga cagtttttct gctgaccttg accaattccc actgggcaga 60
aagtttttaa tgcaacttgg ggttcgtact aaatacgtcg taggttcc 108
<210> 545
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 545
gactacatgg gacattcggt ttcctggcat gtatgagtgt tttttatatg tacatgccaa 60
aagtacattc agcaaaacac ttaatccact ggctacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 546
gactacatgg gacatataaa ttgttttata acatattaca cttttgcttt gtgtagggcg 60
tgtactatgg tcgcccaccg ggcacgcaga cgatacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 547
gactacatgg gacatccatg ttagtagtac ccattatacc aatccctcct ttattgaacc 60
ccctgttatt gaggttccac aaaccgggga ggttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 548
gactacatgg gacattacat tattattatg atgtgagtcc tattgcacac actgaggaaa 60
ttgaaatgca gccattattg tctgcaaata atttacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 549
gactacatgg gacatatatg taaagcgcac caatatattt tatcatgcag gcagctcacg 60
tttgcttgct gttggacatc catattattc tattacgtcg taggttcc 108
<210> 550
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 550
gactacatgg gacatctcct atacaggatg gcgacatggt tgatattggg tttggtgcca 60
tggattttaa aacattacag gaatctaaat cagtacgtcg taggttcc 108
<210> 551
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 551
gactacatgg gacataaaca gtatgtaaga catgtagagg aatatgaatt acagtttgtg 60
tttcaactgt gtaaaatttc actgtctgca gaatacgtcg taggttcc 108
<210> 552
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 552
gactacatgg gacatgtttt tgtatgaatg tatgttttgt ttatatgttt ctgtatgact 60
gtatgtatgt gtaatgcctg tatgtatgta atatacgtcg taggttcc 108
<210> 553
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 553
gactacatgg gacatataag tttttattgc aaacatctgc aacacaatga tttggcttgc 60
agcatatatt ttggtagcca actatgtgtc ttgtacgtcg taggttcc 108
<210> 554
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 554
gactacatgg gacattcgta caggatacgt gccattgccc acaactacaa catctaggcc 60
agttgaaatt cctttacaac ctaccaggcc tcctacgtcg taggttcc 108
<210> 555
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 555
gactacatgg gacatctata caacaggtta aggttgtaga ccctgctttt ataacaacgc 60
ccacacgttt ggtaacatat gataatcctg ccttacgtcg taggttcc 108
<210> 556
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 556
gactacatgg gacatattcc tttaaatgct ggattggata cacatcctgg ccctgatatt 60
gctttacctg tacccagtgc agaaaccatt ttttacgtcg taggttcc 108
<210> 557
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 557
gactacatgg gacatgtgct ggtgttgagg ttggacgcgg acagccatta ggtataggca 60
caagtggtaa tccttttatg aataaacttg aagtacgtcg taggttcc 108
<210> 558
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 558
gactacatgg gacatattcc tgatgaatta atgattaagg gtacaggcaa taccgcagcg 60
ccatccagtt gtgtttttta tcctactcct agttacgtcg taggttcc 108
<210> 559
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 559
gactacatgg gacatggaat ctgaggatcc atatgctaaa atgacatttt gggaggtaga 60
ccttaaagaa aagttttctg cagaattaga tcatacgtcg taggttcc 108
<210> 560
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 560
gactacatgg gacattgttt ctgctgttgt agcacaaagt ttaatttgtt ttggcttcct 60
gcaggcaact tggattgtac tcaagcactt agatacgtcg taggttcc 108
<210> 561
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<212> DNA
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gactacatgg gacatgcaca tgtcctcctg acataattcc aaaggttgaa ggcaatactt 60
tagctgacca aatattaaaa tatggtagca ttgtacgtcg taggttcc 108
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<211> 108
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<400> 563
gactacatgg gacattgatg ggttatatga tgtattgtta gataatgatg tagatacaga 60
tgtagtacaa acacctaaca cttctagaaa cactacgtcg taggttcc 108
<210> 564
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 564
gactacatgg gacatcttgc agtacctaaa gtttcaggtt tgcagtacag ggtatttaga 60
atacgtttac cagaccccaa taaatttggg ttttacgtcg taggttcc 108
<210> 565
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 565
gactacatgg gacatatgta aatatccaga ttatttaggc atggctgcag atccctatgg 60
tgattctatg tggttttata ttcgtaggga acatacgtcg taggttcc 108
<210> 566
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 566
gactacatgg gacatctatg agttctagta tattagaaca gtggaatttt ggtcttacac 60
caccgccatc tggtacttta gaagaaacat atatacgtcg taggttcc 108
<210> 567
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 567
gactacatgg gacatactat atatgttgtg tgagtggttt atgctagcca ctgtgtctcc 60
attttgttca ttcgccattt tatgtatttt aagtacgtcg taggttcc 108
<210> 568
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 568
gactacatgg gacattttgt ctgctttaat gtgccgctat tgcagtctgc ctctgtgttt 60
gcctcgtgta tattacttat acttttattt tggtacgtcg taggttcc 108
<210> 569
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 569
gactacatgg gacatctatt gttgtagaat cggtaggccc cactgaccct tcaattgtta 60
cattggttga agaatccagt gttattgagt ctgtacgtcg taggttcc 108
<210> 570
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 570
gactacatgg gacatcaaaa tgctgacaca acgttaacct tttcaccatc aggtgtggca 60
cctgatcctg attttttaga cattgtggct ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 571
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 571
gactacatgg gacattgata ccacccatga tgtagttata cagggctcca catttgcgtt 60
atggcctgtt tattttttga aacgtaggcg tcgtacgtcg taggttcc 108
<210> 572
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 572
gactacatgg gacatgctat tcaggatact gccccggaca gtagggataa tgtttcagtg 60
gatcctaaac aaacacagtt atgcattatt ggctacgtcg taggttcc 108
<210> 573
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 573
gactacatgg gacatttcag aggctcaatt gtttaataag ccatattggc tgcaacgtgc 60
ccagggacat aataatggca tctgttggaa caatacgtcg taggttcc 108
<210> 574
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 574
gactacatgg gacattaatg caggttgggg tccgtactaa accgcctgta tcctctaaaa 60
aacgctctgc ttctactaca tctacctcag ccctacgtcg taggttcc 108
<210> 575
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 575
gactacatgg gacataagca tattcagcag aactgttaat cctttggcat agtgccgttt 60
cctgtgttta atgttttttt gttttataca ctatacgtcg taggttcc 108
<210> 576
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 576
gactacatgg gacatgatct acaaggcgca aacgtgcctc tgcaacacaa ctatatcaaa 60
catgcaaggc ggcaggcacc tgtcccccgg atgtacgtcg taggttcc 108
<210> 577
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 577
gactacatgg gacatttttc atcttctgaa gcctctggtc atttaatatt ttctacaccc 60
actattagta cacattcata tgaggacatt ccttacgtcg taggttcc 108
<210> 578
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 578
gactacatgg gacatactac agccattatc tcgccctgtg tcttctgctt cccattctat 60
taatgatggt ttatatgatg tatatatgga tcctacgtcg taggttcc 108
<210> 579
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 579
gactacatgg gacatggcca tccttacttt tccattccta atccctccaa cactaaaaag 60
gtgttagtgc ccaaggtgtc aggtttgcag tattacgtcg taggttcc 108
<210> 580
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 580
gactacatgg gacatatctt tgcaggccaa taaaagtgat gttccgttag atatatgtac 60
cagtatttgt aaatatcctg attatcttgg tattacgtcg taggttcc 108
<210> 581
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 581
gactacatgg gacatgcaaa atatccctta ctgcaaatgt tatgcaatac atacacacca 60
tgaatccaga tatattagag gactggcaat ttgtacgtcg taggttcc 108
<210> 582
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 582
gactacatgg gacatttaac tatattgttg tgtcgtgtgg ttgcacccaa tgagtaaggt 60
actgtcccta tatccctgcc catgccatgc ccttacgtcg taggttcc 108
<210> 583
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 583
gactacatgg gacatggttt tataggttcc cccttacggg tatttttggc atatcttata 60
tttttgtacc tacctatgat gtgtattcat ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 584
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 584
gactacatgg gacattgata ctgtagggcc cctagactct tctattgtgt ctatgataga 60
ggaaacaagt tttattgagt caggtgcacc tgctacgtcg taggttcc 108
<210> 585
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 585
gactacatgg gacataacct gatgaaacac tttactttca acaccaagac atttcacctg 60
cacctgaccc tgacttttta gacatagttg cattacgtcg taggttcc 108
<210> 586
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 586
gactacatgg gacatccctt taacaatgta cttgtttatg gtagtgattt tattttacac 60
cctagttatt ttttacgtcg caggcgtaaa cggtacgtcg taggttcc 108
<210> 587
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 587
gactacatgg gacataatac cctagccagc ctggtactga taatagggaa tgcttgtcta 60
tggatgctaa gcagacccag ctatgtatta ttgtacgtcg taggttcc 108
<210> 588
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 588
gactacatgg gacattcctc agaatctcaa ttatttaata aaccatattg gttacaacgc 60
gcacaaggtc ataacaatgg tatatgctgg ggttacgtcg taggttcc 108
<210> 589
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 589
gactacatgg gacattttat tgcaggcagg ttttacagct aaacctaaac taaaacgttc 60
ttcaccttct tcgtcctctt cctcctctgc aaatacgtcg taggttcc 108
<210> 590
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 590
gactacatgg gacatgtgca atgcctttac ttgctgttgc tctcccgcct aaattgactc 60
atagtattgc agtgcaacac gcccttttac atgtacgtcg taggttcc 108
<210> 591
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 591
gactacatgg gacataatca ggcacatgtc cgcctgatgt tgttaataag gtggagggta 60
ccacactggc tgataggttt ttacaatggg ctatacgtcg taggttcc 108
<210> 592
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 592
gactacatgg gacatcatgg atatgaagaa attcctatgc aggtttttgc ctcacatgga 60
acaggcacag aacctattag tagtactcct gtttacgtcg taggttcc 108
<210> 593
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 593
gactacatgg gacattaatg caatgttaca tactacttct catacaggtt ctacaggacc 60
taggtcccat ctttcatttc cttctatacc ttctacgtcg taggttcc 108
<210> 594
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 594
gactacatgg gacatcctaa ggtgtctgca tatcagtata gggtatttag ggtatcccta 60
cctgatccta ataagtttgg ccttccggat ccttacgtcg taggttcc 108
<210> 595
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 595
gactacatgg gacattcctg attatttgca gatgtctgct gatgtatatg gggacagtat 60
gtttttttgt ttgcgcaagg aacagttgtt tgctacgtcg taggttcc 108
<210> 596
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 596
gactacatgg gacatcaatt ttggacaatt ggaatatagg agttacccct ccaccatctg 60
caagcttggt ggacacgtat aggtatttac aattacgtcg taggttcc 108
<210> 597
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 597
gactacatgg gacattatgt gtatgtttta gaagtatgtg tgtatgtatg tttttgttaa 60
taaagtatgt atggaggttt catttgtggt tgctacgtcg taggttcc 108
<210> 598
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 598
gactacatgg gacatcatag ttggcctgta taacagcttt tacatccaag aatgtgtcgt 60
ttggtgcaag ttatattttg tgactaatat ttttacgtcg taggttcc 108
<210> 599
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 599
gactacatgg gacatgtttt atagagtcag gtatacctgg tcctacatct atagtgcctt 60
ctacttcagg gtttgatatt acaacttctg taatacgtcg taggttcc 108
<210> 600
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 600
gactacatgg gacatgattc tgatttttta gatattgtaa aattacatag gcctgcttta 60
acctctagaa aaacaggcat acgtgttagt agatacgtcg taggttcc 108
<210> 601
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 601
gactacatgg gacattttta tattacaccc tagttattat ttgttaaagc gcaaacgtaa 60
acgtctgtca tattctttta cagatgtggc gactacgtcg taggttcc 108
<210> 602
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 602
gactacatgg gacatatgtc agtggattat aaacaaacac agttgtgtat tttaggttgt 60
aggcctccct taggggaaca ttggggtcca ggctacgtcg taggttcc 108
<210> 603
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 603
gactacatgg gacatgcaaa aggcacaggg acaaaataat ggtatttgtt ggcataatca 60
attattttta actgttgtag atactactag aagtacgtcg taggttcc 108
<210> 604
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 604
gactacatgg gacatctaag ttacaagctt ctaaacgttc tgcatctgct accacaagtg 60
ccacacctaa gaaaaaacgt gctaaacgta ttttacgtcg taggttcc 108
<210> 605
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 605
gactacatgg gacataggtt ataaaggtaa aaggcgccac ctggcagtta ctcatttgtc 60
tgcaattatt taaacaatgt cttgcacaca cattacgtcg taggttcc 108
<210> 606
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 606
gactacatgg gacattttga tttacagttt gtttttcagt tatgtaaaat tagtttaact 60
actgaggtaa tgacatatat acattctatg aattacgtcg taggttcc 108
<210> 607
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 607
gactacatgg gacattagtt tgggaatatt tttaggaggc cttggaatag gtactggtag 60
tggcacaggg gggcgtaccg gctatattcc atttacgtcg taggttcc 108
<210> 608
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 608
gactacatgg gacatttcct ggtgttaggc gtgtggcagg acctagatta tatagtcaag 60
cttatcaaca agttaaaata actaattcag acttacgtcg taggttcc 108
<210> 609
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 609
gactacatgg gacattctcg ttatagtaat actactattc ctttagcaac atcttgggat 60
gttcctgttc atacagggcc tgacatgaca ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 610
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 610
gactacatgg gacatatcct gaaacacaac gtttagtatg ggcctgtgtt ggcatggagg 60
taggtcgtgg gcagccttta ggtgttagcc ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 611
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 611
gactacatgg gacatcattt ttggaacagg ggaggcacta taggagatgc agtaccggaa 60
acattatata taaaaggtac taatgatagg gcatacgtcg taggttcc 108
<210> 612
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 612
gactacatgg gacatcatat gaaaaattaa agttttggaa tgtggatctt aaagaacatt 60
tttcatctga tttagatcag tttcctttag gactacgtcg taggttcc 108
<210> 613
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 613
gactacatgg gacatcaagc ctccatttta ctatgcaacc gatatcggtt gcctttgaca 60
cacctaacat tatacattct tattgttaca ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 614
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 614
gactacatgg gacatgcaga taaaatttta cagtggtcca gccttggtat atttttgggt 60
ggtcttggga taggtactgg tagtggtact gggtacgtcg taggttcc 108
<210> 615
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 615
gactacatgg gacattgaac caattagtag taccccattg cctaatatta ggcgtgtggc 60
aggtccccgc ctttatagta aggctaatca acatacgtcg taggttcc 108
<210> 616
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 616
gactacatgg gacatctact gtatcgtcag tctcttctta tggtaacctt actgttcctt 60
taacttcctc atgggatgtg cctgtatata cagtacgtcg taggttcc 108
<210> 617
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 617
gactacatgg gacattgact ctactattta caatcccgaa acacaacgtc ttgtgtgggc 60
ctgtgttggt gttgaaatag gccgtggaca acctacgtcg taggttcc 108
<210> 618
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 618
gactacatgg gacataacaa ctgtttgcta ggcatttttg gaacagagct ggaacaatgg 60
gtgacactat tccacaggag ttatatatta aagtacgtcg taggttcc 108
<210> 619
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 619
gactacatgg gacatcgctt tgtacagtct gttgctataa cctgtcaaaa ggatactact 60
cccgctgaga aaaaggatcc ttatgataac ttatacgtcg taggttcc 108
<210> 620
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 620
gactacatgg gacatcattt tatattacaa ttctccattt taatgtgcaa ccgttttcgg 60
ttgcccttgg cttacctttg tacattctgg cactacgtcg taggttcc 108
<210> 621
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 621
gactacatgg gacattaaca ataatgttat ataaaaatgg gtgtaaccga aaacggttgc 60
aaccgaaact ggtgtatata aaagacctgc aaatacgtcg taggttcc 108
<210> 622
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 622
aatgatacgg cgaccaccga gatctacact ctttccctac acgacgctct 50
<210> 623
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 623
caagcagaag acggcatacg agatcggtct cggcattcct gctgaaccgc 50
<210> 624
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 624
aatgatacgg cgaccaccga g 21
<210> 625
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 625
caagcagaag acggcatacg a 21

Claims (8)

1.成套试剂,由621条探针组成,所述621条探针的序列分别为序列表中序列1-621的第16-93位。
2.成套试剂,由621条探针组成,所述621条探针的序列为序列表中序列1-621。
3.根据权利要求1或2所述的成套试剂,其特征在于:所述成套试剂中的每条探针的5’端均标记有生物素。
4.用于检测人乳头瘤病毒的系统,包括权利要求1-3中任一所述成套试剂。
5.根据权利要求4所述的系统,其特征在于:所述系统还包括M1,所述M1为富集缓冲液、杂交缓冲液和/或结合缓冲液;
所述富集缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为人cot-1 DNA、鲑鱼精DNA、引物1和引物2,所述引物1为序列表中序列622所示的单链DNA,所述引物2为序列表中序列623所示的单链DNA;
所述杂交缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为Tris-HCl,所述溶质及其在所述杂交缓冲液中的浓度分别为1.25M NaCl,0.125 M 柠檬酸钠,0.1g/100mL BSA,体积百分含量为5%-10%的Tween20;其中,所述Tris-HCl由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为50mM-200mM,pH为7.6;
所述结合缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为Tris-HCl,所述溶质及其浓度分别为1M NaCl,1 mM EDTA;所述Tris-HCl由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为10 mM,pH为7.5。
6.根据权利要求5所述的系统,其特征在于:所述富集缓冲液中所述溶质的含量分别为Invitrogen的人cot-1 DNA 35%、Invitrogen的鲑鱼精DNA15%、所述引物1 0.5nmol/µl和所述引物2 0.5nmol/µl;
所述杂交缓冲液中,所述溶剂为Tris-HCl,所述溶质及其在所述杂交缓冲液中的浓度分别为1.25M NaCl,0.125 M 柠檬酸钠,0.1 g/100mL BSA,7%Tween20;所述Tris-HCl由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为100mM,pH为7.6;
所述百分比均为体积百分含量。
7.根据权利要求5或6所述的系统,其特征在于:所述系统还包括M2,所述M2为漂洗液1、漂洗液2、NaOH溶液、Tris-HCl缓冲液、PCR反应液和TE缓冲液中的至少一种;
所述漂洗液1由溶剂和溶质组成,所述溶剂为1×SSC溶液,所述溶质为SDS,SDS 在所述漂洗液1中的质量百分比浓度为0.1%;所述1×SSC溶液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质及其在所述1×SSC溶液中的浓度分别为NaCl 175g/L和柠檬酸三钠88g/L,pH7.4;
所述漂洗液2由溶剂和溶质组成,所述溶剂为0.1×SSC溶液,所述溶质为SDS,SDS 在所述漂洗液2中的质量百分比浓度为0.1%;其中,所述0.1×SSC溶液为将所述1×SSC溶液稀释10倍得到的溶液;
所述NaOH溶液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质及在所述NaOH溶液中的浓度为0.1M NaOH;
所述Tris-HCl缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为1M,pH为7.5;
所述PCR反应液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为1倍浓度的Phusion缓冲液,所述溶质及其在所述PCR反应液中的浓度分别为0.2mM dATP、0.2mM dTTP、0.2mM dCTP、0.2mM dGTP、2.5pmol引物3、2.5pmol引物4、0.05U/µl Hotstart Phusion 酶、5%DMSO;其中,所述1倍浓度的Phusion缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为50 mM Tris-HCl,所述溶质及其在所述1倍浓度的Phusion缓冲液中的浓度分别为4mM MgCl2,500 mM KCl,0.8% Nonidet P40;所述50 mM Tris-HCl由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为50 mM,pH为8.8;所述引物3和所述引物4的序列分别为序列表中序列624和625,所述引物3和所述引物4的最后一位核苷酸均带有硫代修饰;
所述TE缓冲液由溶剂和溶质组成,所述溶剂为水,所述溶质为三羟甲基氨基甲烷、EDTA和用于调节pH的HCl,三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mM,EDTA的浓度为1mM,pH为8.0;
所述百分比均为体积百分含量。
8.权利要求1或2所述成套试剂的下述任一应用:
Y1)在制备检测人乳头瘤病毒基因组序列产品中的应用;
Y2)在制备检测人乳头瘤病毒分型产品中应用;
Y3)在制备检测人乳头瘤病毒DNA在人基因组中插入位点产品中的应用;
Y4)在制备检测HPV拷贝数产品中的应用。
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