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CN108359008A - 抗cgrp或抗cgrp-r抗体或抗体片段用于治疗或预防慢性和急性形式的腹泻的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明是针对通过施用治疗或预防有效量的对CGRP具有结合特异性的抗体和其片段来治疗慢性或急性形式的腹泻的方法。特别地，所述方法预防或减少导致例如胃肠道(结肠)中CGRP水平升高的病状或治疗中的腹泻，所述CGRP水平升高与腹泻和/或来自肠或泌尿系统的不当电解质和流体排泄相关。更明确地说，本发明涉及使用本文所述的抗CGRP抗体和片段以及其结合片段的治疗。

Description

抗CGRP或抗CGRP-R抗体或抗体片段用于治疗或预防慢性和急 性形式的腹泻的用途
相关申请
本申请是申请号为201280035841.5的专利申请的分案申请。
本申请要求了2011年6月14日提交的名称为“抗CGRP抗体和抗体片段用于在具有导致CGRP水平升高的疾病或治疗的受试者中治疗腹泻的用途(USE OF ANTI-CGRPANTIBODIES AND ANTIBODY FRAGMENTS TO TREAT DIARRHEA IN SUBJECTS WITH DISEASESOR TREATMENTS THAT RESULT IN ELEVATED CGRP LEVELS)”的美国临时申请No.61/496,873(代理人备案No.67858.770000)以及2011年5月20日提交的名称为“抗CGRP组合物及其用途(ANTI-CGRP COMPOSITIONS AND USE THEREOF)”的美国临时申请No.61/488,660(代理人备案No.67858.730300)的权益，所述临时申请各自特此以全文引用的方式并入。
本申请包含通过EFS-Web以ASCII格式提交的序列表并且特此以全文引用的方式并入。所述ASCII副本创建于2012年5月18日，命名为67858o730304.txt并且大小为203,920字节。
发明背景
发明领域
本发明涉及以下发现：结合于CGRP或CGRP受体的多肽和/或抑制CGRP/CGRP受体相互作用的其他多肽如抗CGRP或抗CGRP受体抗体和抗体片段或者抑制CGRP/CGRP受体相互作用的CGRP或CGRP受体的片段可用于治疗或预防腹泻，尤其是与导致CGRP水平升高的病状或治疗相关的腹泻。本文鉴定了涉及CGRP增加的示例性病状和治疗。本发明特别地涉及抑制、预防或治疗具有与CGRP水平升高相关的病状或治疗的受试者的腹泻和/或维持其结肠中的电解质平衡和流体水平的方法，所述CGRP水平升高会导致腹泻和/或来自结肠的电解质和流体的通量增加，所述方法包括施用有效量的抗CGRP抗体或抗CGRP抗体片段。示例性病状包括例如功能性肠道障碍和炎症性肠病、细菌或病毒感染，并且更明确地说胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、功能性腹痛综合征、憩室病和憩室炎、克罗恩病(Crohn'sdisease)、回肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、溃疡性结肠炎、与CGRP增加和腹泻相关的癌症或癌症治疗如化学疗法、放射、甲状腺髓样癌以及结肠直肠癌。
另外，本发明提供了在动物模型中筛选对人类降钙素基因相关肽(CalcitoninGene Related Peptide，下文为“CGRP”)以及CGRP或CGRP受体的片段具有结合特异性的多肽如抗CGRP或抗CGRP受体抗体和其片段(包括Fab片段)以测定其体内作用、尤其是其拮抗CGRP的不良副作用以及治疗涉及过量CGRP的病状、尤其与腹泻相关的CGRP相关病状或治疗的能力的方法。本发明还涉及通过单独地或与其他活性剂联合地施用所述抗体或其片段来筛选与CGRP增加相关的疾病和病症的方法，所述CGRP增加与腹泻和用于预防或治疗涉及CGRP相关腹泻的疾病和病症的具体治疗方式相关。
相关技术描述
降钙素基因相关肽(CGRP)是以长度为37个氨基酸的多功能神经肽形式产生。两种形式的CGRP，即CGRP-α和CGRP-β形式，存在于人类中并且具有类似的活性。CGRP-α与CGRP-β在人类中相差三个氨基酸，并且是源自不同的基因。CGRP肽家族包括胰淀素(amylin)、肾上腺髓质素(adrenomedullin)以及降钙素，但各自具有不同的受体和生物活性。Doods,H.,Curr.Op.Invest.Drugs,2(9):1261-68(2001)。
CGRP是从众多组织如三叉神经中释放，当被活化时在脑膜中释放神经肽，从而介导神经源性炎症，其特征为血管舒张、血管渗漏以及肥大细胞退化。Durham,P.L.,NewEng.J.Med.,350(11):1073-75(2004)。CGRP的生物作用是通过CGRP受体(CGRP-R)介导，该CGRP受体由七次跨膜成分结合受体相关膜蛋白(RAMP)组成。CGRP-R进一步需要受体成分蛋白(RCP)的活性，该受体成分蛋白(RCP)对于通过G蛋白与腺苷酸环化酶有效偶联以及cAMP的产生是必要的。Doods,H.,Curr.Op.Invest.Drugs,2(9):1261-68(2001)。
偏头痛是影响美国约10％成年群体的神经血管病症，并且典型地伴随着剧烈的头痛。约20-30％的偏头痛患者经历先兆，包括先于事件和/或伴随事件的局灶性神经现象。认为CGRP在偏头痛发展中起到显著作用。例如，在偏头痛的头痛期间在颈静脉血中鉴定出血浆CGRP浓度升高，排除其他神经肽。此外，根据Arulmozhi等人，在偏头痛患者中鉴定出下列：(1)血浆CGRP浓度与偏头痛之间存在强相关性；(2)输注CGRP产生类偏头痛的头痛；(3)基线CGRP水平升高；以及(4)在偏头痛发作期间血浆CGRP水平的变化与头痛强度显著相关。Arulmozhi,D.K.等人,Vas.Pharma.,43:176-187(2005)。另外，在2011年6月06日于网上发布的国际疼痛研究协会杂志(Journal of the International Association for theStudy of Pain)PII:S0304-3959(11)00313-7；doi:10.1016/j.pain.2011.04.033中，Hou等人报道了降钙素基因相关肽β的角化细胞表达与神经性和炎性疼痛机制有关联。
一种有效的偏头痛治疗是施用曲坦类(triptans)，它们是基于色胺的药物家族，包括舒马曲坦(sumatriptan)和利扎曲坦(rizatriptan)。这个家族的成员对包括5-HT1B、5-HT1D以及5-HT1F在内的多种5-羟色胺受体具有亲和力。这个家族成员的药物选择性地收缩脑血管，但也对冠状血管造成血管收缩作用。Durham,P.L.,New Eng.J.Med.,350(11):1073-75(2004)。在确定患有心脏病的患者中在施用后存在冠状动脉痉挛的理论风险，并且在服用曲坦类后心脏事件可能很少发生。应注意，冠状动脉血管疾病患者禁用。
类似地，通常可能通过施用某些麻醉剂或非甾体抗炎药物(NSAID)来解决疼痛问题。然而，这些治疗的施用可能以某些负面后果为代价。NSAID有可能造成肾衰竭、肠道出血以及肝功能障碍。麻醉剂有可能造成恶心、呕吐、精神功能受损以及成瘾。因此，期望鉴定出替代的疼痛疗法以避免这些负面后果中的某些。
认为CGRP在包括但不限于偏头痛、头痛以及疼痛的许多疾病和病症中起作用。由于察觉到这些疾病和病症中涉及CGRP，因此本领域中需要可用于预防或治疗与CGRP相关的疾病和病症并且同时避免不良副作用的组合物和方法。本领域中尤其需要降低或抑制与CGRP相关的疾病或病症如偏头痛、头痛以及疼痛的组合物或方法。
除上述病状以外，需要治疗与CGRP增加相关的其他病状或不良副作用。在这点上，在文献中已经报道了一些轶事证据，表明CGRP水平增加可能在一些与腹泻相关的疾病中起作用。例如，Rolston等人在Digestive Diseases and Sciences,(1989年4月)34(4):612-6,“Intravenous calcitonin gene-related peptide stimulates net water secretionin rat colon in vivo”报道了外源降钙素基因相关肽对大鼠小肠和大肠中的水和电解质的净通量具有影响。他们报道了在结扎肠袢中，静脉内降钙素基因相关肽(CGRP)诱导了结肠液分泌但对小肠无影响。他们还报道了使用单通灌流技术，观察到在静脉内施用CGRP时大鼠结肠立即以剂量依赖性方式分泌水并且还观察到钠、钾和氯离子的净分泌也得到提高。他们提出了这些观察结果暗示着高循环浓度的CGRP有可能牵涉于伴随甲状腺髓样癌的水样腹泻综合征。
此外，Keates等人,Gastroenterology 114:956-64(1998),“CGRP Upregulationin dorsal root ganglia and ilea mucosa during Clostridium difficile toxin A-induced enteritis in mice”报道了CGRP可能在毒素A介导的腹泻中起作用并且CGRP拮抗剂基本上抑制毒素A介导的腹泻和炎症。
另外，Picard等人在International Journal of Radiation Biology,(2001),第77卷,第3期,第349-356页,“Presence of protective role of afferent nerves inearly intestinal mucosal alterations induced by abdominal irradiation inrats”中报道了在腹部照射后以及特别是在放射性肠炎(一种特征为腹泻和其他炎症反应的病状)中CGRP水平增加。
发明概要
除了使患病个体不舒服以外，腹泻，尤其如果是慢性或重度的话，可以危及生命，尤其是在老年患者和婴幼儿以及患有可能基本上耗尽流体和电解质水平的疾病如与慢性腹泻相关的癌症和病毒感染的疾病患者中。存在2种一般类型的腹泻，急性和慢性。
腹泻一般归类为每天具有三次或更多次松散的或液体排便的病状。它在发展中国家是一种常见的死亡原因以及在全世界范围内是第二大常见的婴儿死亡原因。通过腹泻的流体损失可以造成脱水和电解质失衡。在2009年，据估计腹泻已经造成5岁以上人群中110万例死亡和5岁以下儿童中150万例死亡。具有适量电解质的口服补液溶液(ORS)和锌片为首选治疗并且据估计在过去25年中已经拯救了5千万儿童。应尽可能早地开始服用ORS。在用ORS治疗的前一或两个小时期间经常出现呕吐，但这很少会阻止成功的补液，因为大多数流体仍然被吸收了。世界卫生组织(WHO)推荐，如果儿童呕吐，则等待五或十分钟，然后再次更缓慢地开始。
由WHO推荐的自制溶液包括加盐饮料(例如加盐米汤或加盐酸奶饮料)以及含盐的植物或鸡汤。如果可用的话，则可以将补充钾以及补充锌添加至或给予这种自制溶液。此外还推荐，具有腹泻的人如果能够的话就持续或继续进食，因为这会加速正常肠道功能的恢复并且一般导致腹泻持续时间较短。洁净的淡水可以是若干种所给予流体中的一种。存在商业溶液如Pedialyte，并且救援机构如UNICEF会广泛分发小包的盐和糖。
除了腹泻的慢性和急性名称以外，这种病状还被分类为不同类型，这些分类是基于病因和疾病表现。一种类型为“分泌性腹泻”。分泌性腹泻意指存在主动分泌的增加，或者存在对吸收的抑制。结构损伤很少或无结构损伤。这种类型腹泻的最常见原因是霍乱毒素，它刺激阴离子、尤其是氯离子的分泌。在这种类型的腹泻中，即使在禁食期间的肠液分泌也与血浆等渗。[8]<>即使在没有经口摄入食物时也持续这种情况。
第二种类型为“渗透性腹泻”。当过多的水被提取到肠中时可能发生渗透性腹泻。如果一个人饮用了含过量糖或过量盐的溶液，则这些溶液可以从身体提取水进入肠中并引起渗透性腹泻。此外，渗透性腹泻也可以由消化不良(例如，胰腺疾病或乳糜泻)造成，其中营养物被留在内腔中以引入水中。或者它可以由渗透性轻泻剂(其通过将水提取到肠中来起作用以减轻便秘)造成。在健康的个体中，过多的镁或维生素C或未消化的乳糖可以产生渗透性腹泻和肠膨胀。在摄入格外高量的乳制品之后，具有乳糖不耐受症的人可能会具有乳糖吸收的困难。在具有果糖吸收不良的人群中，过多的果糖摄入也可以引起腹泻。另外具有高葡萄糖含量的高果糖食物更容易被吸收并且不易于引起腹泻。糖醇如山梨糖醇(经常见于不含糖的食物中)难以被身体吸收并且在大量时可能导致渗透性腹泻。
第三种类型的腹泻为“渗出性腹泻”。渗出性腹泻的发生伴随着大便中存在血液和脓液。炎症性肠病如克罗恩病或溃疡性结肠炎以及感染如大肠杆菌或其他形式的食物中毒会发生这种情况。
第四种类型的腹泻为“蠕动性相关腹泻”。蠕动性相关腹泻是由食物通过肠的快速移动(蠕动过强)造成的。如果食物移动通过胃肠道的速度过快，则用于使营养物和水被充分吸收的时间不足。这可能归因于迷走神经切断术或糖尿病性神经病变，或月经期并发症。甲状腺功能亢进可以产生蠕动过强并导致这种类型的腹泻。腹泻可以用抗蠕动剂(例如洛哌丁胺(loperamide))来治疗。可以在已经切除其部分肠(使得用于吸收营养物的总时间较少)的人群中观察到蠕动过强。
第五种类型的腹泻为“炎症性腹泻”。当粘膜衬里或刷状缘存在损伤时发生炎症性腹泻，它导致富蛋白流体的被动损失以及吸收这些损失流体的能力降低。所有三种其他类型的腹泻的特征都可见于这种类型的腹泻中。它可能由细菌感染、病毒感染、寄生虫感染或诸如炎症性肠病等自身免疫问题造成。它还可能由肺结核、结肠癌以及肠炎造成。
腹泻的相关病状为“痢疾”。通常，如果大便中存在可见的血液，则并非腹泻而是痢疾。血液是肠组织遭到入侵的痕迹。痢疾是志贺菌属(Shigella)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)以及沙门菌属(Salmonella)等的症状。
腹泻最通常是由于轮状病毒造成的病毒性胃肠炎，这占五岁以下儿童中病例的40％。然而在旅行者中以细菌感染为主。各种毒素如蘑菇中毒和药物也可以引起急性腹泻。
如上文所提到，腹泻可分类为慢性或急性。“慢性腹泻”可以是多种侵袭肠的慢性医学病状的呈现的一部分。常见原因包括溃疡性结肠炎、克罗恩病、显微镜结肠炎、乳糜泻、肠易激综合征以及胆汁酸吸收不良。
感染性腹泻存在许多原因，其包括病毒、细菌以及寄生虫。诺如病毒(Norovirus)是成年人病毒性腹泻的最常见的原因，而轮状病毒是五岁以下儿童中最常见的原因。40型和41型腺病毒以及星状病毒造成显著数目的感染。
弯曲菌属(Campylobacter)细菌是细菌性腹泻的常见原因，但频繁被沙门菌属、志贺菌属以及一些大肠杆菌(Escherichia coli/E.coli)菌株感染。在老年人中，特别是已经用抗生素治疗不相关感染的那些老年人中，由艰难梭状芽胞杆菌(Clostridiumdifficile)产生的毒素经常造成重度腹泻。
一些寄生虫可能造成腹泻，例如原生动物贾第虫属(Giardia)，如果这些未被诊断出来并用诸如甲硝唑等药物治疗，则可能造成慢性感染；以及溶组织内阿米巴。
慢性腹泻的其他原因包括：酶缺乏或粘膜异常，如在食物过敏症和食物不耐受症中，例如乳糜泻(谷蛋白不耐受症)、乳糖不耐受症(对乳糖不耐受症，常见于非欧洲人)，以及果糖吸收不良；恶性贫血；或由于不能吸收维生素B12而导致的肠功能受损；胰腺分泌损失，其可能是由于囊肿性纤维化或胰腺炎；结构缺陷，如短肠综合征(通过手术切除肠)；以及放射性纤维化，例如通常在癌症治疗和其他药物(包括化学疗法中使用的药剂)之后；以及某些药物，如奥利司他(orlistat)，其抑制脂肪的吸收。
溃疡性结肠炎的特点是慢性带血丝腹泻并且炎症最主要影响接近直肠的结肠末端。克罗恩病典型地影响结肠中相当充分划分的肠段并且经常影响小肠末端。
腹泻的另一种原因为肠易激综合征(IBS)，其通常呈现为可通过排便减轻的腹部不适以及大便不正常(腹泻或便秘)，在先前的3个月内每周至少3天。腹泻为主型IBS的症状可以通过饮食变化、可溶性纤维补充剂和/或药物如洛哌丁胺或可待因的组合来处理。约30％的患有腹泻为主型IBS的患者具有用异常SeHCAT检验诊断的胆汁酸吸收不良。
腹泻的其他原因为慢性乙醇摄取、缺血性肠病、显微镜结肠炎、胆汁盐吸收不良(原发性胆汁酸腹泻)(其中结肠中过多的胆汁酸产生分泌性腹泻)、激素分泌瘤(一些激素(例如5-羟色胺)如果过量分泌(通常来自肿瘤)的话则可能会引起腹泻)。
药物如洛哌丁胺(Imodium)和碱式水杨酸铋可能有益于治疗一些腹泻病状，然而它们在某些情形下可能是禁忌的。
尽管抗生素在某些类型的急性腹泻中是有益的，但除非在特定情形下否则通常不使用它们。事实上，抗生素也可能引起腹泻，并且抗生素相关腹泻是用一般抗生素治疗的最常见的不良作用。
铋化合物如(Pepto-Bismol)可用于治疗一些腹泻病状。此外，可使用抗蠕动剂来治疗一些腹泻病状。这些药剂包括洛哌丁胺。可待因有时被用于治疗腹泻以减缓蠕动和排泄物通过肠道。此外，胆汁酸螯合剂如消胆胺、考来替泊(colestipol)以及考来维仑(colesevelam)可有效用于由于胆汁酸吸收不良而引起的慢性腹泻。
锌补充可用于治疗一些慢性腹泻病状。益生菌有时可用于缩短症状的持续时间。
如所述，第二种类型的腹泻为急性腹泻。急性腹泻的最常见原因是感染—病毒性、细菌性以及寄生虫性。细菌也可以造成急性食物中毒。急性腹泻的第三个重要原因是开始服用新药。
急性腹泻的其他特定原因包括病毒性胃肠炎，其在全世界范围内为急性腹泻的最常见原因。病毒性胃肠炎可能以散发形式(在单一个体中)或以流行形式(在个体群体中)发生。散发性腹泻可能是由若干种不同病毒引起的并且被认为是通过人与人之间的接触传播。流行性腹泻(例如，在游轮上)的最常见原因是感染被称作杯状病毒的病毒家族，其中诺如病毒属为最常见的(例如，“诺沃克剂(Norwalk agent)”)。所述杯状病毒是通过被生病的食物处理者污染的食物或通过人与人之间的接触传播的。
急性腹泻的另一个原因是由细菌所产生的毒素造成的食物中毒。此类毒素引起腹部疼痛(腹部绞痛)和呕吐并且还造成小肠分泌出大量的水从而导致腹泻。食物中毒的症状通常持续不到24小时。对于一些细菌，毒素是在食物被食用之前于食物中产生的，而对于其他细菌，毒素是在食物被食用之后于肠中产生的。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是在食物被食用之前于食物中产生毒素的细菌的例子。典型地，被葡萄球菌污染的食物(例如沙拉、肉或含蛋黄酱的三明治)是在室温下未冷藏放置过夜。葡萄球菌在食物中繁殖并产生毒素。产气夹膜梭状芽胞杆菌(Clostridium perfringens)为在食物(通常为罐装食物)中繁殖并且在被污染的食物被食用之后于小肠中产生毒素的细菌的例子。
急性腹泻的另一个原因为通常由大肠杆菌的致病菌株引起的旅行者腹泻。偶尔地，其他细菌或寄生虫可以造成旅行者腹泻(例如，志贺菌属、贾第虫属、弯曲菌属)。由这些其他生物体引起的腹泻通常持续3天以上。
急性腹泻的另一个原因为细菌性小肠结肠炎，其在引起疾病的细菌通常入侵小肠和结肠并造成小肠结肠炎(小肠和结肠发炎)时发生。细菌性小肠结肠炎的特征为以下征象：发炎(大便中有血液或脓液，发热)和腹部疼痛以及腹泻。空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)为在美国造成急性小肠结肠炎的最常见细菌。造成小肠结肠炎的其他细菌包括志贺菌属、沙门菌属以及EPEC。这些细菌通常是通过饮用被污染的水或食用被污染的食物如蔬菜、家禽以及乳制品而获得的。
由艰难梭状芽胞杆菌造成的小肠结肠炎经常是由抗生素治疗引起的。艰难梭状芽胞杆菌也是最常见的造成腹泻的医院内感染(在医院时获得的感染)。不幸的是，在既未服用过抗生素也未出现在医院中的个体中的感染还在增加。
急性腹泻的另一个原因是大肠杆菌O157:H7，其为产生造成出血性小肠结肠炎(有出血的小肠结肠炎)的毒素的大肠杆菌株。在美国有过一次著名的出血性小肠结肠炎的爆发，追溯到汉堡包中被污染的绞碎牛肉(因此也称为汉堡包结肠炎)。约5％的感染大肠杆菌O157:H7的患者、特别是儿童，可能发展成溶血性尿毒综合征(HUS)，这是一种可能导致肾衰竭的综合征。一些证据表明，抗腹泻剂的长期使用或抗生素的使用可能增加患上HUS的几率。
急性腹泻的另一个原因是寄生虫感染，在美国以外的地方更常见。例如，在山区远足或在国外旅行的个体中出现蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)感染并且通过被污染的饮用水传播。隐孢子虫属(Cryptosporidium)是另一种产生腹泻的寄生虫，其典型地通过被污染的水传播。
急性腹泻的另一个原因是药物诱发的腹泻。最频繁引起腹泻的药物为抗酸剂和含镁的营养补充剂。其他种类的引起腹泻的药物包括：非甾体抗炎药物(NSAID)、化学疗法药物、抗生素、控制心律不齐的药物(抗心律失常药)以及用于高血压的药物。米索前列醇(Cytotec)、奎尼丁(Quinaglute、Quinidex)、奥沙拉嗪(Dipentum)、秋水仙碱(Colchicine)、甲氧氯普胺(Reglan)以及西沙比利(Propulsid、Motilium)。
慢性腹泻的常见原因包括肠易激综合征；感染性疾病，例如蓝氏贾第虫感染、AIDS感染、小肠细菌过度生长；感染后腹泻，其中个体在急性病毒性、细菌性或寄生虫性感染后患上慢性腹泻(也称为感染后IBS)；炎症性肠病(IBD)、克罗恩病和溃疡性结肠炎；以及其他造成小肠和/或结肠发炎的疾病，通常引起慢性腹泻；结肠癌，特别是在结肠的末端部分中，可能导致稀便；严重便秘；碳水化合物(糖)吸收不良，例如乳糖酶缺乏(也称为乳糖或牛奶不耐受)、脂肪吸收不良；胰腺炎或胰腺癌；阻止被消化脂肪的吸收的小肠衬里疾病，例如乳糜泻；内分泌疾病，例如甲状腺功能亢进或者垂体或肾上腺功能减退(爱迪生氏病(Addison's disease))；以及轻泻剂滥用。
急性和慢性腹泻都可能涉及不良的并发症，包括由于腹泻引起的身体内流体和电解质过多损失而产生的脱水。在大量排便的成年急性腹泻患者中脱水是常见的，特别是当流体摄入受到嗜睡限制或与恶心和呕吐相关时，并且在患上病毒性胃肠炎或细菌性感染的婴幼儿中是常见的。
中度至重度脱水可能造成直立性低血压晕厥(站立时由于血容量降低(这造成站立时血压下降)而晕厥)、尿量减少、严重虚弱、休克、肾衰竭、精神混乱、酸中毒(血液中的酸过多)以及甚至昏迷。
当腹泻长期持续或严重的时候，电解质(矿物质)也与水一起失去，并且可能发生矿物质或电解质缺乏。最常见发生的是钠和钾缺乏。也可能发展成氯离子和碳酸氢根异常。最终，由于含有刺激性物质的水样大便的频繁通过而可能对肛门存在刺激。
因此，预防或治疗不同形式的腹泻如上述腹泻并且特别是急性或慢性腹泻的有效方法将为有益的。
沿着这些思路，本发明提供了用于治疗或预防CGRP相关腹泻的方法和药物，其包括施用至少一种结合CGRP或CGRP受体的多肽和/或抑制CGRP/CGRP受体相互作用的多肽。这些多肽包括抗CGRP或抗CGRP受体抗体和抗体片段，以及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的CGRP或CGRP受体的片段或变体。这些疗法有效地治疗或预防腹泻，尤其是由于与CGRP水平增加(例如胃肠系统并且更具体地结肠中水平增加)相关的疾病病状或治疗而发生的腹泻。
本发明特别地涉及抑制、预防或治疗具有导致CGRP水平升高的病状(例如，胃肠病状、癌症、病毒性或感染性病症)或相关治疗(例如放射或化学疗法)的受试者的腹泻和/或维持其结肠中的电解质平衡和流体水平的方法，所述CGRP水平升高会导致腹泻和/或来自结肠的电解质和流体的通量增加，所述方法包括施用有效量的抗CGRP抗体或抗CGRP抗体片段。这些病状包括例如功能性肠道障碍和炎症性肠病、细菌或病毒诱发的腹泻、放射和化学疗法，并且更明确地说选自以下的功能性肠道障碍：胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、功能性腹痛综合征、憩室病以及憩室炎；选自以下的炎症性肠病：克罗恩病、回肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎以及溃疡性结肠炎；以及与腹泻相关的癌症，例如甲状腺髓样癌和结肠直肠癌。
本发明还涉及在动物模型中筛选对人类降钙素基因相关肽(下文为“CGRP”)或CGRP受体具有结合特异性或抑制CGRP/CGRP受体相互作用的抗体和其片段(包括Fab片段)以测定其体内作用、尤其是其拮抗CGRP的不良副作用以及治疗或预防涉及过量CGRP的病状或治疗中的腹泻的能力的方法。
此外，本发明涉及一种评估候选抗CGRP抗体或抗体片段或另一种抑制CGRP/CGRP受体相互作用的多肽用于治疗或预防腹泻的潜在体内功效的方法，其包括与在不存在候选CGRP抗体或抗体片段或其他多肽抑制剂的情况下施用了CGRP的啮齿动物相比，在施用了外源CGRP的啮齿动物中测定所述抗体或其他多肽是否抑制腹泻。
此外，本发明涉及一种施用抗CGRP或抗CGRP受体抗体或抗体片段或另一种抑制CGRP/CGRP受体相互作用的多肽来治疗特征为CGRP水平增加(其与腹泻相关)的神经性和疼痛病状的方法。
本发明还涉及用于治疗与腹泻相关的病状的药物，所述病状选自胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、功能性腹痛综合征、憩室病、憩室炎、克罗恩病、回肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎和溃疡性结肠炎、甲状腺髓样癌或结肠直肠癌。
此外，本发明涉及基于啮齿动物CGRP动物模型中的结果评估候选抗体或抗体片段在人类中用于预防或治疗CGRP相关腹泻的合适治疗剂量或给药方式的方法。
更进一步，本发明涉及抑制、预防或治疗具有与CGRP水平升高相关的病状的受试者的腹泻和/或维持其结肠中的电解质平衡和流体水平的组合物，所述CGRP水平升高会导致腹泻和/或来自结肠的电解质和流体的通量增加，所述组合物包括有效量的抗CGRP或抗CGRP受体抗体或抗CGRP或抗CGRP受体抗体片段以及任选地另一种活性剂。
与其相关，本发明明确地涉及用于治疗或预防以下疾病的组合物：功能性肠道障碍或炎症性肠病、细菌或病毒诱发的腹泻、与腹泻相关的癌症如甲状腺髓样癌或结肠直肠癌，并且功能性肠道障碍或炎症性肠病包括例如胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、功能性腹痛综合征、憩室病以及憩室炎，或炎症性肠病是选自以下：克罗恩病、回肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎以及溃疡性结肠炎，其中这些疗法施用有效量的抗CGRP抗体或抗体片段，其以单一疗法施用或与另一种活性剂组合施用。
在优选的实施方案中，本发明是针对特异性抗体和其片段用于治疗或预防与CGRP水平增加相关的疾病或治疗中的腹泻的治疗用途，所述抗体或抗体片段对CGRP具有结合特异性，特别是具有所需表位特异性、高亲和力或亲合力和/或功能特性的抗体。在其他优选的实施方案中，本发明涉及本文所述的抗体的测定法和用途，所述抗体包含本文所述的VH、VL以及CDR多肽的序列，以及编码其的多核苷酸。本发明的一个优选实施方案是针对能够结合至CGRP和/或抑制由CGRP与CGRP受体(“CGRP-R”)结合而介导的生物活性的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)。
在本发明的另一个优选实施方案中，所述测定法和疗法使用全长抗体和其Fab片段来治疗或预防导致CGRP水平增加的疾病或病状中的腹泻，所述全长抗体和其Fab片段抑制由CGRP-α、CGRP-β以及大鼠CGRP驱动的cAMP产生。在本发明的另一个优选实施方案中，涵盖在施用后降低接受者中的血管舒张的全长和其Fab片段。
在本发明的另一个实施方案中，能够结合于CGRP或CGRP受体的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)可用于针对降低、治疗或预防导致CGRP水平增加的疾病或病状中的腹泻的方法中，所述疾病或病状如偏头痛(有或无先兆)、癌症或肿瘤、与癌症或肿瘤生长相关的血管生成、与癌症或肿瘤存活相关的血管生成、体重减轻、疼痛、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、潮热、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛(例如与窦炎相关)以及过敏症诱发的头痛或偏头痛。
在本发明的另一个实施方案中，能够结合于CGRP的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)可用于针对降低、治疗或预防以下疾病的方法中：腹泻和与胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、炎症性肠病、克罗恩病(Crohn's disease)、回肠炎、溃疡性结肠炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎、月经期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相关的内脏疼痛。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防导致CGRP水平增加的疾病或病状中的腹泻的这些抗体和人源化形式可能源自兔免疫细胞(B淋巴细胞)并且可根据其与人类生殖系序列的同源性(序列同一性)进行选择。这些抗体可能需要最小序列修饰或无序列修饰，从而促进人源化后功能特性的保留。本发明的另一个实施方案是针对来自涵盖例如源自兔免疫细胞的VH、VL和CDR多肽的抗CGRP抗体的片段和编码其的多核苷酸，以及这些抗体片段和编码其的多核苷酸在产生用于治疗或预防导致CGRP水平增加的疾病或病状中的腹泻的能够结合于CGRP和/或CGRP/CGRP-R复合物的新颖抗体和多肽组合物中的用途。
本发明还涵盖用于治疗或预防导致CGRP水平增加的疾病或病状中的腹泻的抗CGRP抗体和其结合片段缀合于一种或多种功能性或可检测部分的缀合物。本发明还涵盖制造用于治疗或预防导致CGRP水平增加的疾病或病状中的腹泻的所述嵌合或人源化抗CGRP或抗CGRP/CGRP-R复合物抗体和其结合片段的方法。在一个实施方案中，结合片段包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体以及IgNAR。
本发明的实施方案涉及抗CGRP抗体和其结合片段用于诊断、评估和治疗由于CGRP水平增加而导致腹泻的与CGRP或其异常表达相关的疾病和病症的用途。本发明还涵盖抗CGRP抗体的片段用于诊断、评估和治疗与CGRP或其异常表达相关的疾病和病症(例如其中肠管中的CGRP水平增加导致腹泻的疾病或病状)的用途。本发明的其他实施方案涉及抗CGRP抗体或其片段在重组宿主细胞、例如哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞、或酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属(diploid Pichia))以及其他酵母菌株中的产生。
附图简要说明
图1提供对应于全长抗体Ab1的多核苷酸和多肽序列。
图2提供对应于全长抗体Ab2的多核苷酸和多肽序列。
图3提供对应于全长抗体Ab3的多核苷酸和多肽序列。
图4提供对应于全长抗体Ab4的多核苷酸和多肽序列。
图5提供对应于全长抗体Ab5的多核苷酸和多肽序列。
图6提供对应于全长抗体Ab6的多核苷酸和多肽序列。
图7提供对应于全长抗体Ab7的多核苷酸和多肽序列。
图8提供对应于全长抗体Ab8的多核苷酸和多肽序列。
图9提供对应于全长抗体Ab9的多核苷酸和多肽序列。
图10提供对应于全长抗体Ab10的多核苷酸和多肽序列。
图11提供对应于全长抗体Ab11的多核苷酸和多肽序列。
图12提供对应于全长抗体Ab12的多核苷酸和多肽序列。
图13提供对应于全长抗体Ab13的多核苷酸和多肽序列。
图14提供对应于全长抗体Ab14的多核苷酸和多肽序列。
图15提供遵循下文实施例1中的方案而获得的关于抗体Ab1、Ab2、Ab3以及Ab4的CGRP-αELISA结合数据。
图16提供遵循下文实施例1中的方案而获得的关于抗体Ab5、Ab6、Ab7以及Ab8的CGRP-αELISA结合数据。
图17提供遵循下文实施例1中的方案而获得的关于抗体Ab9、Ab10以及Ab14的CGRP-αELISA结合数据。
图18提供遵循下文实施例1中的方案而获得的关于抗体Ab11、Ab12以及Ab13的CGRP-αELISA结合数据。
图19显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab1、Ab2以及Ab4对于CGRP-α驱动的cAMP产生的抑制作用。
图20显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab3对于CGRP-α驱动的cAMP产生的抑制作用。
图21显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab5和Ab6对于CGRP-α驱动的cAMP产生的抑制作用。
图22显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab7、Ab8、Ab9以及Ab10对于CGRP-α驱动的cAMP产生的抑制作用。
图23显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab11、Ab12以及Ab13对于CGRP-α驱动的cAMP产生的抑制作用。
图24显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab14对于CGRP-α驱动的cAMP产生的抑制作用。
图25显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab1、Ab2以及Ab3对于CGRP-β驱动的cAMP产生的抑制作用。
图26显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab4、Ab5以及Ab6对于CGRP-β驱动的cAMP产生的抑制作用。
图27显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab7和Ab8对于CGRP-β驱动的cAMP产生的抑制作用。
图28显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab9、Ab10以及Ab14对于CGRP-β驱动的cAMP产生的抑制作用。
图29显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab11、Ab12以及Ab13对于CGRP-β驱动的cAMP产生的抑制作用。
图30显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab1、Ab2、Ab4以及Ab5对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
图31显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab3和Ab6对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
图32显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab7和Ab8对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
图33显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab9对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
图34显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab10对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
图35显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab11和Ab12对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
图36显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab13对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
图37显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab14对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
图38显示遵循下文实施例6中的方案而获得的抗体Ab1-Ab13对于经放射性标记的CGRP与CGRP-R结合的抑制作用。
图39显示遵循下文实施例7中的方案而获得的通过在大鼠模型中施用辣椒素(capsaicin)之后再施用抗体Ab3和Ab6而获得的相对于对照抗体的血管舒张减少。
图40显示遵循下文实施例7中的方案而获得的通过在大鼠模型中施用辣椒素之后再施用不同浓度的抗体Ab6而获得的相对于对照抗体的血管舒张减少。
图41包含评估CGRP在转基因Nestin/hRamp1小鼠中的作用的实验结果。数据显示大鼠CGRP-α施用在Nestin/hRAMP1 tg小鼠中诱发腹泻并且腹膜内注射Ab3(30mg/kg，在CGRP攻击前约24小时)在Nestin/hRAMP1 tg小鼠中抑制了脑室内(ICV)注射的大鼠CGRP-α诱发的腹泻。
图42包含显示脑室内(ICV)注射人类CGRP-α在C57BL/6J小鼠中以剂量依赖性方式诱发腹泻的实验结果。
图43包含显示腹膜内注射Ab3(30mg/kg ip，在人类CGRP-α攻击前约24小时)在C57/BL6J小鼠中抑制了ICV注射的人类CGRP-α诱发的腹泻的实验结果。
图44包含显示Ab3(30mg/kg腹膜内注射，在人类CGRP-α攻击前约24小时)在C57/BL6J小鼠中抑制了腹膜内注射的人类CGRP-α诱发的腹泻的实验结果。
图45显示Ab3和Ab6(都以10mg/kg施用)对于CGRP诱发的腹泻的预防。阴性对照动物(用对照抗体和磷酸盐缓冲盐水处理，左侧条柱)未展现腹泻，而80％的阳性对照动物(用CGRP和阴性对照抗体处理，填充条柱)展现腹泻。施用Ab3(对角线纹条柱)和Ab6(交叉阴影线条柱)使腹泻发生率分别降至40％和60％。
图46显示关于图45中所示的实验由CGRP诱发的腹泻所产生的总粪便重量。与阴性对照动物(第一条柱)相比，通过施用CGRP(第二条柱)使总粪便重量极大地增加。然而，被Ab3和Ab6处理的动物展现出极大地降低总粪便重量(分别为第三和第四条柱)。所示值为各测试组中所有动物的平均值±平均值的标准误差(SEM)。
图47证实了在另一个实验中利用Ab3和Ab6可预防CGRP诱发的腹泻(两种抗体都以30mg/kg施用)。在阴性对照动物(用对照抗体和磷酸盐缓冲盐水处理，第一条柱)中不存在腹泻，但在80％的阳性对照动物(第二条柱，填充)中观察到腹泻。利用Ab3(第三条柱，对角线纹)和Ab6(第四条柱，交叉阴影线)使腹泻发生率分别降至20％和40％。
图48显示关于图47中所示的实验由CGRP诱发的腹泻所产生的总粪便重量。与阴性对照动物(第一条柱，未填充)相比，通过施用CGRP(第二条柱，填充)使总粪便重量极大地增加。然而，被Ab6处理的动物展现出极大地降低总粪便重量(第四条柱，方格线)，而被Ab3处理的动物(第三条柱，交叉阴影线)展现出与阴性对照动物(左侧条柱，未填充)相当的平均总粪便重量。所示值为各测试组中所有动物的平均值±平均值的标准误差(SEM)。
优选实施方案的详细说明
定义
应理解，本发明并不限于所述的具体方法、方案、细胞系、动物物种或属以及试剂，因为这些可能会有变化。还应理解，本文所用的术语仅为描述具体的实施方案，而不意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求书限制。除非上下文另外明确指出，否则如本文所用的单数形式“一”和“该”包括复数个指示物。因此，例如，提及“一个细胞”包括多个此类细胞以及提及“该蛋白质”包括提及一种或多种蛋白质以及为本领域技术人员已知的其等效物，诸如此类。除非另外明确指出，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员所通常理解相同的含义。
降钙素基因相关肽(CGRP)：如本文所用，CGRP不仅涵盖可获自American Peptides(Sunnyvale CA)和Bachem(Torrance,CA)的下列智人CGRP-α和智人CGRP-β氨基酸序列：
CGRP-α：ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2(SEQ ID NO:281)，其中N端苯丙氨酸被酰胺化；
CGRP-β：ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-NH2(SEQ ID NO:282)，其中N端苯丙氨酸被酰胺化；而且涵盖些这CGRP氨基酸序列的任何膜结合形式，以及这种序列的突变体(突变蛋白)、剪接变体、同种型、直系同源物、同源物以及变体。特别地，本文的CGRP涵盖啮齿动物CGRP和其他哺乳动物的CGRP序列。
本文的“CGRP受体”包括所有被CGRP特异性结合的内源受体，其包括人类和啮齿动物CGRP以及其他哺乳动物CGRP。“CGRP受体”还包括被CGRP特异性结合的CGRP受体的突变体(突变蛋白)、剪接变体、同种型、直系同源物、同源物、片段以及变体。特别地，本文的CGRP受体涵盖人类、大鼠、鼠科和非人灵长类动物CGRP受体以及其他哺乳动物的CGRP受体序列。
本文的“CGRP/CGRP受体抑制剂”是指抑制CGRP与其受体的相互作用的分子、优选为多肽如抗体或抗体片段。其非限制性例子包括特异性结合CGRP或CGRP受体以及CGRP或CGRP受体的片段的抗体和抗体片段。
“腹泻”是指排便频率增加或大便形态降低(大便松散度更大)。尽管排便频率和大便松散度的变化可能彼此独立地改变，但经常两者都发生变化。腹泻需要与四种其他病状相区别。尽管这些病状可能伴随着腹泻，但它们经常具有与腹泻不同的原因和不同的治疗。这些其他病状为：大便失禁，其为不能控制(延迟)排便直到适当的时间，例如，直到可以到达厕所；直肠急迫，其为突然急迫要排便，感觉如此强烈以致于如果不能立即使用厕所则将失禁；不完全排空，其为在排便之后不久就需要另一次排便的感觉，但又难以第二次再排便；以及在进食后立即排便。
腹泻可以根据排便频率或粪便坚实度(松散度)以绝对或相对术语进行定义。
排便频率。绝对腹泻为比正常情况排便更多。因此，由于在健康个体中每日排便最大次数约为三次，因此可以将腹泻定义为任何大于三次的大便次数。相对腹泻为比平常情况排便要多。因此，如果一名通常每天排便一次的个体开始每天排便两次，则即使每天排便不到三次仍存在腹泻，即，不存在绝对腹泻。
大便坚实度。绝对腹泻更难以基于大便坚实度进行定义，这是因为大便坚实度在健康个体中取决于其饮食而可以在相当大程度上变化。因此，食用大量蔬菜的个体将比食用很少蔬菜的个体具有更松散的大便。液体或水样的大便始终不正常并且被认为是腹泻。相对腹泻更易于基于大便坚实度进行定义。因此，产生比平常更松散的大便的个体具有腹泻，即使所述大便关于坚实度可能在正常范围内。
腹泻一般分为两种类型，急性和慢性。急性腹泻持续几天至一周。慢性腹泻可以若干种方式定义，但几乎总是持续三周以上。急性和慢性腹泻通常具有不同的原因，需要不同的诊断检验，并且经常涉及不同的治疗。
“CGRP诱发的腹泻的治疗或预防”意指治疗，例如，相对于未被治疗的受试者，抗CGRP抗体或片段的施用有效地抑制或治疗有需要的受试者的腹泻和/或维持其结肠中适当的电解质和流体水平。
“CGRP诱发的腹泻或CGRP相关腹泻”是指导致CGRP水平升高的病状或治疗，尤其是在胃肠系统并且尤其是结肠中，其导致以下情形中的一种或多种：来自结肠的流体排泄增加、电解质平衡受损以及一次或多次水样排便(腹泻)。
本文的“导致CGRP相关腹泻的治疗”是指任何用于导致与腹泻相关的CGRP水平增加的疾病病状的治疗，例如，放射、化学疗法、药物疗法。
“CGRP相关的疾病或病状”为任何与相对于正常个体中的CGRP水平而增加的CGRP水平相关的疾病或病状。
交配感受态酵母物种：在本发明中，意欲广泛地涵盖可以在培养物中生长的任何二倍体或四倍体酵母。此类酵母物种可以单倍体、二倍体或其他多倍体形式存在。给定倍性的细胞可在适当条件下以所述形式增殖无限代数。二倍体细胞也可以孢子化以形成单倍体细胞。连续交配可通过二倍体菌株的进一步交配或融合而产生四倍体菌株。本发明涵盖单倍体酵母以及例如通过交配或原生质球融合而产生的二倍体或其他多倍体酵母细胞的用途。
在本发明的一个实施方案中，交配感受态酵母为酵母科(Saccharomycetaceae)成员，其包括阿斯霉属(Arxiozyma)；Ascobotryozyma；固囊酵母属(Citeromyces)；德巴利酵母属(Debaryomyces)；德克酵母属(Dekkera)；假囊酵母属(Eremothecium)；伊萨酵母属(Issatchenkia)；哈萨克酵母属(Kazachstania)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)；柯达酵母属(Kodamaea)；娄德酵母属(Lodderomyces)；管囊酵母属(Pachysolen)；毕赤酵母属(Pichia)；酵母属(Saccharomyces)；Saturnispora；Tetrapisispora；有孢圆酵母属(Torulaspora)；拟威尔酵母属(Williopsis)；以及接合酵母属(Zygosaccharomyces)。潜在地可用于本发明中的其他类型的酵母包括子囊菌酵母属(Yarrowia)；红冬孢酵母属(Rhodosporidium)；假丝酵母属(Candida)；汉逊酵母属(Hansenula)；线黑粉酵母属(Filobasium)；锁掷酵母属(Sporidiobolus)；布勒掷孢酵母属(Bullera)；白冬孢酵母属(Leucosporidium)以及线黑粉菌属(Filobasidella)。
在本发明的一个优选实施方案中，交配感受态酵母是毕赤酵母属成员。在本发明的另一个优选实施方案中，毕赤酵母属的交配感受态酵母是以下物种之一：巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)以及多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)(安格斯毕赤酵母(Pichia angusta))。在本发明的一个特别优选实施方案中，毕赤酵母属的交配感受态酵母为物种巴斯德毕赤酵母。
单倍体酵母细胞：具有其正常基因组(染色体组)补体的各基因的单拷贝的细胞。
多倍体酵母细胞：具有其正常基因组(染色体组)补体的多于一个拷贝的细胞。
二倍体酵母细胞：具有其正常基因组补体的基本上每个基因的两个拷贝(等位基因)的细胞，其典型地通过两个单倍体细胞融合(交配)的方法而形成。
四倍体酵母细胞：具有其正常基因组补体的基本上每个基因的四个拷贝(等位基因)的细胞，其典型地通过两个单倍体细胞融合(交配)的方法而形成。四倍体可携带两个、三个、四个或更多个不同的表达盒。此类四倍体可在酿酒酵母(S.cerevisiae)中通过选择性交配纯合基因的异宗配合a/a和α/α二倍体而获得以及在毕赤酵母中通过单倍体的连续交配以获得营养缺陷型二倍体而获得。例如，[met his]单倍体可以与[ade his]单倍体交配来获得二倍体[his]；并且[met arg]单倍体可以与[ade arg]单倍体交配来获得二倍体[arg]；然后二倍体[his]×二倍体[arg]来获得四倍体原养型微生物。本领域技术人员应理解，提及二倍体细胞的益处和用途还可适用于四倍体细胞。
酵母交配：通过两个单倍体酵母细胞天然地融合以形成一个二倍体酵母细胞的方法。
减数分裂：通过二倍体酵母细胞经受减少性的分裂以形成四个单倍体孢子产物的方法。每一孢子然后可发芽并形成单倍体植物性生长细胞系。
可选择标记物：可选择标记物为对例如通过转化事件接收该基因的细胞赋予生长表型(物理生长特征)的基因或基因片段。可选择标记物允许该细胞在选择性生长培养基中在不接收该可选择标记基因的细胞不能生长的条件下存活和生长。可选择标记基因通常属于几种类型，包括阳性可选择标记基因，例如赋予细胞对于抗生素或其他药物的抗性、当杂交两个温度敏感性(“ts”)突变体或转化ts突变体时赋予温度抗性的基因；阴性可选择标记基因，例如赋予细胞以在不含特定营养物的培养基中生长的能力的生物合成基因，而不具有该生物合成基因的所有细胞都需要这种营养物；或赋予细胞以不能利用不具有野生型基因的细胞而生长的诱变型生物合成基因；等。合适的标记物包括但不限于：ZEO；G418；LYS3；MET1；MET3a；ADE1；ADE3；URA3；等。
表达载体：这些DNA载体包含便于外来蛋白质在目标宿主细胞内的表达操作的元件。方便起见，序列的操作和用于转化的DNA的产生首先在细胞宿主、例如大肠杆菌(E.coli)中进行，并且通常载体将包括便于此类操作的序列，包括细菌复制起点和适当的细菌选择标记物。选择标记物对在选择性培养基中生长的转化宿主细胞的存活或生长而言必需的蛋白质进行编码。未用包含选择基因的载体转化的宿主细胞将不在该培养基中存活。典型的选择基因编码具有以下功能的蛋白质：(a)赋予对于抗生素或其他毒素的抗性，(b)补充营养缺陷型缺陷，或(c)供应不能从复合培养基中获得的关键营养物。用于转化酵母的示例性载体和方法描述于例如Burke,D.,Dawson,D.和Stearns,T.(2000).Methods inyeast genetics:a Cold Spring Harbor Laboratory course manual.Plainview,N.Y.:Cold Spring Harbor Laboratory Press中。
用于本发明的方法中的表达载体将进一步包括酵母特异性序列，其包括可选择营养缺陷型或药物标记物以用于鉴定转化的酵母菌株。药物标记物此外可用于在酵母宿主细胞中扩增载体的拷贝数。
所关注的编码多肽的序列可操作地连接至转录和翻译调控序列，所述调控序列提供多肽在酵母细胞中的表达。这些载体成分可包括但不限于下列一种或多种：增强子元件、启动子以及转录终止序列。还可以包括用于分泌多肽的序列，例如信号序列等。酵母复制起点为任选的，因为表达载体通常整合到酵母基因组中。在本发明的一个实施方案中，所关注的多肽可操作地连接或融合至提供多肽从酵母二倍体细胞中优化分泌的序列。
当核酸与另一核酸序列发生功能关系时为“可操作地连接”。例如，如果信号序列的DNA以参与多肽分泌的前蛋白形式表达，则其与多肽的DNA可操作地连接；如果启动子或增强子影响序列的转录，则其与编码序列可操作地连接。通常，“可操作地连接”意味着所连接的DNA序列为相邻的，并且，在分泌前导序列的情况下，为相邻的并且在阅读框中。然而，增强子不必需是相邻的。连接可以通过在适宜的限制性位点接合或可选地通过本领域技术人员熟悉的PCR/重组方法来实现(GatewayR Technology；Invitrogen,CarlsbadCalifornia)。如果此类位点不存在，则根据常规实践使用合成的寡核苷酸适配子或连接子。
启动子为位于结构基因(通常在约100至1000bp内)的起始密码子的上游(5')的非翻译序列，其控制与其可操作地连接的特定核酸序列的转录和翻译。此类启动子属于几类：诱导型、组成型以及阻抑型启动子(其应答于阻遏子的缺失而增加转录水平)。诱导型启动子可应答于培养条件的某些变化，例如营养物的存在或不存在或者温度变化，而引发来自它们控制下的DNA的转录水平的增加。
酵母启动子片段还可用作用于同源重组和将表达载体整合到酵母基因组中的相同位点的位点；可选地，可选择标记物用作用于同源重组的位点。毕赤酵母属转化描述于Cregg等人(1985)Mol.Cell.Biol.5:3376-3385中。
来自毕赤酵母属的合适启动子的例子包括AOX1和启动子(Cregg等人(1989)Mol.Cell.Biol.9:1316-1323)；ICL1启动子(Menendez等人(2003)Yeast 20(13):1097-108)；甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(GAP)(Waterham等人(1997)Gene 186(1):37-44)；以及FLD1启动子(Shen等人(1998)Gene 216(1):93-102)。GAP启动子为强组成型启动子并且AOX和FLD1启动子为诱导型。
其他酵母启动子包括ADH1、醇脱氢酶II、GAL4、PHO3、PHO5、Pyk以及从其衍生的嵌合启动子。另外，非酵母启动子可用于本发明中，例如哺乳动物、昆虫、植物、爬行动物、两栖动物、病毒以及鸟类启动子。最典型地该启动子将包括哺乳动物启动子(可能对所表达的基因来说是内源性的)或将包括在酵母系统中提供有效转录的酵母或病毒启动子。
所关注的多肽不仅可以直接重组地产生，而且可以作为与异源多肽、例如信号序列或在成熟蛋白或多肽的N端具有特定裂解位点的其他多肽的融合多肽形式产生。一般来说，信号序列可为载体的成分，或其可为插入载体中的多肽编码序列的一部分。优选的异源信号序列为通过宿主细胞内可获得的标准途径之一识别并加工的异源信号序列。酿酒酵母α因子前原信号已经证明在各种来自巴斯德毕赤酵母的重组蛋白的分泌中有效。其他酵母信号序列包括α交配因子信号序列、转化酶信号序列以及衍生自其他分泌的酵母多肽的信号序列。另外，这些信号肽序列可以被工程改造以提供在二倍体酵母表达系统中的增强的分泌。所关注的其他分泌信号还包括哺乳动物信号序列，其可能与所分泌的蛋白质是异源的，或可能为所分泌的蛋白质的天然序列。信号序列包括前肽序列，并且在一些情况下可包括原肽序列。许多此类信号序列在本领域是已知的，包括在免疫球蛋白链中发现的信号序列，例如K28前原毒素序列、PHA-E、FACE、人类MCP-1、人类血清白蛋白信号序列、人类Ig重链、人类Ig轻链等。例如参见Hashimoto等人Protein Eng 11(2)75(1998)；以及Kobayashi等人Therapeutic Apheresis 2(4)257(1998)。
转录可以通过将转录激活子序列插入载体来增强。这些激活子是DNA的顺式作用元件，通常约10至300bp，其作用在启动子上以增强其转录。转录增强子相对独立地定位和定向，已经发现于转录单元的5'和3'、在内含子内以及在编码序列本身内。增强子可以在编码序列的5'或3'位置剪接至表达载体中，但是优选位于从启动子起的5'位点。
用于真核宿主细胞中的表达载体还可以包含对于转录终止和对于使mRNA稳定所需的序列。此类序列通常可从真核或病毒DNA或cDNA的非翻译区中翻译终止密码子的3'获得。这些区域包含转录为在mRNA的非翻译部分中的多腺苷酸化片段的核苷酸区段。
包含一种或多种以上所列成分的合适载体的构建使用标准接合技术或PCR/重组方法。分离的质粒或DNA片段以需要产生所需质粒的形式或通过重组方法被裂解、修改和再接合。为了分析以确认所构建质粒中的正确序列，使用接合混合物来转化宿主细胞，并且在适当时通过抗生素抗性(例如氨苄青霉素或博莱霉素(Zeocin))来选择成功的转化株。制备来自转化株的质粒，通过限制性核酸内切酶消化进行分析和/或测序。
作为片段的限制和接合的替代方案，可使用基于att位点和重组酶的重组方法来将DNA序列插入载体中。此类方法由例如Landy(1989)Ann.Rev.Biochem.58:913-949描述；并且为本领域技术人员已知。此类方法利用分子间DNA重组，其由λ和大肠杆菌编码的重组蛋白的混合物介导。重组出现在相互作用DNA分子上的特异性附着(att)位点之间。对于att位点的描述，参见Weisberg和Landy(1983)Site-Specific Recombination in PhageLambda,in Lambda II,Weisberg编(Cold Spring Harbor,NY:Cold Spring HarborPress),第211-250页。使侧接重组位点的DNA区段交换，以使得重组后，att位点为由各亲本载体贡献的序列所构成的杂交序列。重组可以在任何拓扑学的DNA之间发生。
可以通过以下步骤将att位点引入所关注的序列中：将所关注的序列接合入适当的载体；通过使用特定的引物产生包含att B位点的PCR产物；产生克隆入包含att位点的适当载体中的cDNA文库；等等。
如本文所用的折叠是指多肽和蛋白质的三维结构，其中氨基酸残基之间的相互作用用于稳定该结构。尽管非共价相互作用在确定结构上是重要的，但所关注的蛋白质通常将具有由两个半胱氨酸残基形成的分子内和/或分子间共价二硫键。对于天然存在的蛋白质和多肽或其衍生物和变体，适当的折叠典型地为导致最佳生物活性的排列，并且可以方便地通过活性测定法、例如配体结合、酶促活性等来监测。
在一些情况下，例如其中所需产品是合成来源时，基于生物活性的测定法将较无意义。此类分子的正确折叠可基于物理性质、能量考虑、建模研究等确定。
表达宿主可通过引入编码一种或多种酶的序列来进一步修饰，所述一种或多种酶将增强折叠和二硫键形成，即折叠酶、伴侣蛋白等。此类序列可使用本领域已知的载体、标记物等在酵母宿主细胞中组成性或诱导性地表达。优选地包括足以用于所需表达模式的转录调控元件的序列，通过靶向方法稳定地整合入酵母基因组。
例如，真核PDI不仅是蛋白质半胱氨酸氧化和二硫键异构化的有效催化剂，而且展现伴侣蛋白活性。PDI的共同表达可以促进具有多个二硫键的活性蛋白的产生。此外所关注的是BIP(免疫球蛋白重链结合蛋白)、亲环素(cyclophilin)等的表达。在本发明的一个实施方案中，每一单倍体亲本菌株表达不同的折叠酶，例如一个菌株可以表达BIP，而另一菌株可以表达PDI或其组合。
术语“所需蛋白”或“所需抗体”可互换使用并且通常指对标靶具有特异性的亲本抗体，即如本文所述的CGRP或者衍生自其的嵌合或人源化抗体或者其结合部分。术语“抗体”意欲包括具有适合并识别表位的特定形状的任何包含多肽链的分子结构，其中一种或多种非共价结合相互作用使分子结构和表位之间的复合物稳定化。原型抗体分子为免疫球蛋白，并且认为来自所有来源、例如人类、啮齿动物、兔、牛、绵羊、猪、狗、其他哺乳动物、鸡、其他鸟类等的所有类型的免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等为“抗体”。用于产生用作根据本发明的起始物质的抗体的优选来源为兔。已经描述了许多抗体编码序列；以及其他可通过本领域众所周知的方法产生。其例子包括嵌合抗体、人类抗体以及其他非人类哺乳动物抗体、人源化抗体、单链抗体(例如scFv)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR(源自鲨鱼的单链抗体)、小模块免疫药物(SMIP)，以及抗体片段如Fab、Fab'、F(ab')2等。参见Streltsov VA等人,Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of anearly-developmental isotype,Protein Sci.2005年11月；14(11):2901-9.电子版2005年9月30日；Greenberg AS等人,Anew antigen receptor gene family that undergoesrearrangement and extensive somatic diversification in sharks,Nature.1995年3月9日；374(6518):168-73；Nuttall SD等人,Isolation of the new antigen receptorfrom wobbegong sharks,and use as a scaffold for the display of protein looplibraries,Mol Immunol.2001年8月；38(4):313-26；Hamers-Casterman C等人,Naturallyoccurring antibodies devoid of light chains,Nature.1993年6月3日；363(6428):446-8；Gill DS等人,Biopharmaceutical drug discovery using novel proteinscaffolds,Curr Opin Biotechnol.2006年12月；17(6):653-8.电子版2006年10月19日。
例如，抗体或抗原结合片段可以通过基因工程产生。在这种技术中，如其他方法一样，抗体产生细胞对所需抗原或免疫原敏感。从抗体产生细胞分离的信使RNA用作模板以使用PCR扩增制备cDNA。各自包含保持初始抗原特异性的一个重链基因和一个轻链基因的载体的文库通过将扩增的免疫球蛋白cDNA的适当部分插入表达载体中而产生。通过将重链基因文库与轻链基因文库组合来构建组合文库。这产生了共同表达重链和轻链(类似于抗体分子的Fab片段或抗原结合片段)的克隆的文库。将携带这些基因的载体共同转染入宿主细胞。当在转染的宿主中诱导抗体基因合成时，重链和轻链蛋白自组装以产生活性抗体，所述活性抗体可以通过用抗原或免疫原筛选来检测。
所关注的抗体编码序列包括被以下编码的那些：天然序列，以及借助于基因编码的简并性而在序列上与所公开核酸不相同的核酸，和其变体。变体多肽可以包括氨基酸(aa)取代、添加或缺失。氨基酸取代可以为保守性氨基酸取代或为消除非必需氨基酸的取代，例如以改变糖基化位点，或通过取代或缺失一个或多个对于功能不必需的半胱氨酸残基而使错误折叠最小化。变体可以设计成保持或具有蛋白质特定区域(例如，功能域、催化性氨基酸残基等)的增强的生物活性。变体还包括本文公开的多肽的片段，特别是生物学活性片段和/或对应于功能域的片段。用于克隆基因的体外诱变技术是已知的。本发明中还包括这样的多肽，其已经使用普通分子生物技术修饰以改进其对蛋白水解降解的抗性或以优化溶解度性质或以使其更适合作为治疗剂。
用于治疗或预防导致CGRP水平增加的疾病或病状中的腹泻的根据本发明的嵌合抗体可以利用重组手段通过将获自一个物种的抗体产生细胞的可变轻链区和可变重链区(VL和VH)与来自另一物种的恒定轻链区和恒定重链区组合而制得。典型地嵌合抗体利用啮齿动物或兔可变区和人类恒定区，以产生具有主要人类结构域的抗体。此类嵌合抗体的产生在本领域是众所周知的，并且可利用标准手段实现(如例如美国专利No.5,624,659中所述，该专利以全文引用的方式并入本文中)。此外涵盖本发明的嵌合抗体的人类恒定区可选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19恒定区。
人源化抗体被工程改造以包含甚至更多类人免疫球蛋白结构域，并且只并入动物源抗体的互补决定区。这通过仔细地检查单克隆抗体的可变区的高变环的序列并且使它们适合人类抗体链的结构来实现。尽管表面上复杂，但实际上该过程是简单的。参见例如美国专利No.6,187,287，其以引用的方式完全并入本文中。
除了完整免疫球蛋白(或其重组对应物)之外，还可合成包括表位结合位点的免疫球蛋白片段(例如，Fab'、F(ab')2或其他片段)。可利用重组免疫球蛋白技术来设计“片段”或最小免疫球蛋白。例如，用于本发明的“Fv”免疫球蛋白可以通过合成融合的可变轻链区和可变重链区而产生。抗体的组合也令人关注，例如双功能抗体，其包括两种不同的Fv特异性。在本发明的另一个实施方案中，免疫球蛋白片段涵盖SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体以及IgNAR。
免疫球蛋白和其片段可以被翻译后修饰，例如添加效应子部分如化学连接子、可检测部分如荧光染料、酶、毒素、底物、生物发光材料、放射性材料、化学发光部分等，或特异性结合部分如链霉亲和素(streptavidin)、亲和素(avidin)或生物素等可用于本发明的方法和组合物中。另外的效应子分子的例子在下文提供。
如果按照遗传密码翻译多核苷酸序列产生多肽序列，则该多核苷酸序列与该多肽序列相“对应”(即，该多核苷酸序列“编码”该多肽序列)；如果两个序列编码相同的多肽序列，则一个多核苷酸序列与另一个多核苷酸序列相“对应”。
DNA构建体的“异源”区或结构域为较大DNA分子内可鉴定的DNA区段，其在自然界中未发现与该较大分子相连。因此，当异源区编码哺乳动物基因时，该基因将通常通过在来源有机体的基因组中不侧接哺乳动物基因组DNA的DNA所侧接。异源区的另一个例子为其中编码序列本身未在自然界中发现的构建体(例如，其中基因组编码序列包含内含子的cDNA，或具有不同于天然基因的密码子的合成序列)。等位变异或天然存在的突变事件不产生如本文定义的DNA的异源区。
“编码序列”为密码子的同框序列，其(考虑到遗传密码)对应于或编码蛋白质或肽序列。如果序列或其互补序列编码相同的氨基酸序列，则两个编码序列彼此相一致。与适当的调控序列相连的编码序列可被转录和翻译成多肽。多腺苷酸化信号和转录终止序列将通常位于编码序列的3'。“启动子序列”为能够结合细胞中的RNA聚合酶并且启动下游(3'方向)编码序列的转录的DNA调控区域。启动子序列典型地包含用于结合影响编码序列的转录的调控分子(例如，转录因子)的另外的位点。当RNA聚合酶结合细胞中的启动子序列并且将编码序列转录成mRNA，该mRNA然后又翻译成由编码序列编码的蛋白质时，编码序列在启动子序列的“控制下”或“可操作地连接”至启动子。
使用载体将外来物质如DNA、RNA或蛋白质引入有机体或宿主细胞中。典型的载体包括重组病毒(用于多核苷酸)和脂质体(用于多肽)。“DNA载体”为复制子如质粒、噬菌体或粘粒，另一个多核苷酸区段可连接至其以引起所连接区段的复制。“表达载体”为DNA载体，其包含将通过适当的宿主细胞引导多肽合成的调控序列。这通常意味着结合RNA聚合酶并启动mRNA的转录的启动子，以及核糖体结合位点和引导mRNA翻译成多肽的起始信号。在适当的位点处和在正确的阅读框中将多核苷酸序列并入表达载体中，然后通过载体转化适当的宿主细胞，能够产生由所述多核苷酸序列编码的多肽。
多核苷酸序列的“扩增”为体外产生特定核酸序列的多个拷贝。扩增序列通常为DNA形式。用于进行此类扩增的各种技术描述于Van Brunt的综述文章(1990,Bio/Technol.,8(4):291-294)中。聚合酶链反应或PCR为核酸扩增的原型，并且本文的PCR的使用应该被认为是其他合适扩增技术的示例。
现在已充分理解脊椎动物中抗体的一般结构(Edelman,G.M.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,190:5(1971))。抗体由分子量约23,000道尔顿的两条相同的轻多肽链(“轻链”)和分子量53,000-70,000的两条相同的重链(“重链”)组成。四条链通过二硫键以“Y”形构型结合，其中轻链在“Y”形构型的口处括住重链。“Y”形构型的“分枝”部分称为Fab区域；“Y”形构型的茎部分称为FC区域。氨基酸序列定向是从“Y”形构型顶部的N末端至各链底部的C末端。N末端拥有对引发其的抗原具有特异性的可变区，并且长度约100个氨基酸，在轻链和重链之间以及在不同抗体之间存在轻微的变化。
在各链中可变区连接至恒定区，该恒定区延伸链的剩余长度并且在特定种类的抗体内不随抗体的特异性(即，引发其的抗原)而变化。存在五种已知的主要种类的恒定区，其确定免疫球蛋白分子的种类(对应于γ、μ、α、δ以及ε重链恒定区的IgG、IgM、IgA、IgD以及IgE)。恒定区或种类决定抗体的后续效应子功能，包括补体的激活(Kabat,E.A.,Structural Concepts in Immunology and Immunoc hemistry,第2版,第413-436页,Holt,Rinehart,Winston(1976))，和其他细胞应答(Andrews,D.W.等人,ClinicalImmunobiology,第1-18页,W.B.Sanders(1980)；Kohl,S.等人,Immunology,48:187(1983))；而可变区决定将与其反应的抗原。轻链被分类为κ(kappa)或λ(lambda)。各重链种类可以用κ或λ轻链制备。当通过杂交瘤或通过B细胞产生免疫球蛋白时，轻链和重链彼此共价地键合，并且两个重链的“尾”部分通过共价二硫键彼此键合。
表述“可变区”或“VR”是指在抗体中各轻链和重链对内的结构域，其直接参与抗体与抗原的结合。各重链在一端具有可变域(VH)，接着为多个恒定域。各轻链在一端具有可变域(VL)并且在另一端具有恒定域；轻链的恒定域与重链的第一个恒定域对齐，并且轻链可变域与重链的可变域对齐。
表述“互补决定区”、“高变区”或“CDR”是指在抗体的轻链或重链的可变区中存在的一个或多个高变区或互补决定区(CDR)(参见Kabat,E.A.等人,Sequences of Proteinsof Immunological Interest,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,(1987))。这些表述包括如由Kabat等人(“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”Kabat E.等人,US Dept.of Health and Human Services,1983)定义的高变区或在抗体的三维结构中的高变环(Chothia和Lesk,J Mol.Biol.196 901-917(1987))。在各链中的CDR由框架区保持紧密接近，并且与其他链的CDR一起形成抗原结合位点。在CDR内存在选定的氨基酸，其已经描述为代表在抗体-抗原相互作用中CDR所用的关键接触残基的选择性决定区(SDR)(Kashmiri,S.,Methods,36:25-34(2005))。
表述“框架区”或“FR”是指抗体的轻链和重链的可变区内的一个或多个框架区(参见Kabat,E.A.等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.,(1987))。这些表述包括置于抗体的轻链和重链的可变区内的CDR之间的那些氨基酸序列区域。
对CGRP具有结合活性的抗CGRP抗体和其结合片段
抗体Ab1
本发明宽泛地涵盖任何抗CGRP抗体或抗体片段用于治疗或预防任何导致CGRP水平增加的疾病或病状中的CGRP相关腹泻的用途，所述CGRP水平增加涉及到腹泻和/或来自结肠的流体或电解质排泄增加。在本申请中鉴定了导致与腹泻相关的CGRP增加的病状和治疗。
在一个优选的实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:1)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:2)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:4)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:1的可变轻链序列或SEQ ID NO:2的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6以及SEQ ID NO:7的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO:3的可变重链序列或SEQ ID NO:4的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9以及SEQ ID NO:10的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:1或SEQ ID NO:2的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:1的可变轻链序列或SEQ ID NO:2的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6以及SEQ ID NO:7的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:3的可变重链序列或SEQ ID NO:4的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9以及SEQ ID NO:10的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:1的可变轻链区；SEQ ID NO:3的可变重链区；SEQ ID NO:1的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:5；SEQ ID NO:6；以及SEQ ID NO:7)；以及SEQ ID NO:3的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9；以及SEQ ID NO:10)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的嵌合抗CGRP抗体为Ab1，其包含SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4或可选地由SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab1，Fab片段包括SEQ ID NO:1的可变轻链序列和SEQ ID NO:3的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab1的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab1或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab2
在一个实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:11)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:12)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:13)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:14)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:11的可变轻链序列或SEQ ID NO:12的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:16以及SEQ ID NO:17的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:13的可变重链序列或SEQ ID NO:14的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:19以及SEQ ID NO:20的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:11或SEQ ID NO:12的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:11的可变轻链序列或SEQ ID NO:12的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16以及SEQ ID NO:17的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:13的可变重链序列或SEQ ID NO:14的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19以及SEQ ID NO:20的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:11的可变轻链区；SEQ ID NO:13的可变重链区；SEQ ID NO:11的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:16；以及SEQ ID NO:17)；以及SEQ ID NO:13的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19；以及SEQ ID NO:20)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的人源化抗CGRP抗体为Ab2，其包含SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14或可选地由SEQ ID NO:12和SEQ IDNO:14组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab2，Fab片段包括SEQ ID NO:11的可变轻链序列和SEQ ID NO:13的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:13的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab2的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab2或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab3
在一个实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:22)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:23)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:24)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:21的可变轻链序列或SEQ ID NO:22的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:26以及SEQ ID NO:27的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:23的可变重链序列或SEQ ID NO:24的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:29以及SEQ ID NO:30的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:21或SEQ ID NO:22的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:21的可变轻链序列或SEQ ID NO:22的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26以及SEQ ID NO:27的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:23的可变重链序列或SEQ ID NO:24的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29以及SEQ ID NO:30的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:21的可变轻链区；SEQ ID NO:23的可变重链区；SEQ ID NO:21的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:25；SEQ ID NO:26；以及SEQ ID NO:27)；以及SEQ ID NO:23的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29；以及SEQ ID NO:30)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的嵌合抗CGRP抗体为Ab3，其包含SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24或可选地由SEQ ID NO:22和SEQ IDNO:24组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab3，Fab片段包括SEQ ID NO:21的可变轻链序列和SEQ ID NO:23的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:21和/或SEQ ID NO:23的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab3的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab3或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab4
在一个优选的实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:31)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:32)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:33)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:34)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:31的可变轻链序列或SEQ ID NO:32的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:36以及SEQ ID NO:37的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:33的可变重链序列或SEQ ID NO:34的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:38、SEQ ID NO:39以及SEQ ID NO:40的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:31或SEQ ID NO:32的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:31的可变轻链序列或SEQ ID NO:32的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36以及SEQ ID NO:37的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:33的可变重链序列或SEQ ID NO:34的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39以及SEQ ID NO:40的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:31的可变轻链区；SEQ ID NO:33的可变重链区；SEQ ID NO:31的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:35；SEQ ID NO:36；以及SEQ ID NO:37)；以及SEQ ID NO:33的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39；以及SEQ ID NO:40)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的人源化抗CGRP抗体为Ab4，其包含SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:34或可选地由SEQ ID NO:32和SEQ IDNO:34组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab4，Fab片段包括SEQ ID NO:31的可变轻链序列和SEQ ID NO:33的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:31和/或SEQ ID NO:33的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab4的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab4或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab5
在一个实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:41)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:42)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:43)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:44)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:41的可变轻链序列或SEQ ID NO:42的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:45、SEQ ID NO:46以及SEQ ID NO:47的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:43的可变重链序列或SEQ ID NO:44的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:49以及SEQ ID NO:50的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:41或SEQ ID NO:42的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:41的可变轻链序列或SEQ ID NO:42的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46以及SEQ ID NO:47的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:43的可变重链序列或SEQ ID NO:44的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49以及SEQ ID NO:50的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:41的可变轻链区；SEQ ID NO:43的可变重链区；SEQ ID NO:41的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:45；SEQ ID NO:46；以及SEQ ID NO:47)；以及SEQ ID NO:43的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:48；SEQ ID NO:49；以及SEQ ID NO:50)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的嵌合抗CGRP抗体为Ab5，其包含SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44或可选地由SEQ ID NO:42和SEQ IDNO:44组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab5，Fab片段包括SEQ ID NO:41的可变轻链序列和SEQ ID NO:43的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:43的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab5的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab5或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab6
在一个实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:51)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:52)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:53)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:54)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:51的可变轻链序列或SEQ ID NO:52的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:55、SEQ ID NO:56以及SEQ ID NO:57的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:53的可变重链序列或SEQ ID NO:54的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:59以及SEQ ID NO:60的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:51或SEQ ID NO:52的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:51的可变轻链序列或SEQ ID NO:52的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56以及SEQ ID NO:57的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:53的可变重链序列或SEQ ID NO:54的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59以及SEQ ID NO:60的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ ID NO:51的可变轻链区；SEQ ID NO:53的可变重链区；SEQ IDNO:51的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:55；SEQ ID NO:56；以及SEQ ID NO:57)；以及SEQ ID NO:53的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:58；SEQ ID NO:59；以及SEQ IDNO:60)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的人源化抗CGRP抗体为Ab6，其包含SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:54或可选地由SEQ ID NO:52和SEQ IDNO:54组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab6，Fab片段包括SEQ ID NO:51的可变轻链序列和SEQ ID NO:53的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab6的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab6或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab7
在一个优选的实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:61)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:62)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体：QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:63)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体：QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:64)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:61的可变轻链序列或SEQ ID NO:62的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:66以及SEQ ID NO:67的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:63的可变重链序列或SEQ ID NO:64的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:69以及SEQ ID NO:70的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:61或SEQ ID NO:62的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:61的可变轻链序列或SEQ ID NO:62的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66以及SEQ ID NO:67的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:63的可变重链序列或SEQ ID NO:64的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69以及SEQ ID NO:70的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:61的可变轻链区；SEQ ID NO:63的可变重链区；SEQ ID NO:61的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:65；SEQ ID NO:66；以及SEQ ID NO:67)；以及SEQ ID NO:63的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:68；SEQ ID NO:69；以及SEQ ID NO:70)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的嵌合抗CGRP抗体为Ab7，其包含SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:64或可选地由SEQ ID NO:62和SEQ IDNO:64组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab7，Fab片段包括SEQ ID NO:61的可变轻链序列和SEQ ID NO:63的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:63的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab7的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab7或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab8
在一个实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合或人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:71)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:72)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:73)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:74)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:71的可变轻链序列或SEQ ID NO:72的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:75、SEQ ID NO:76以及SEQ ID NO:77的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:73的可变重链序列或SEQ ID NO:74的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:78、SEQ ID NO:79以及SEQ ID NO:80的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:71或SEQ ID NO:72的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:73或SEQ ID NO:74的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:71的可变轻链序列或SEQ ID NO:72的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76以及SEQ ID NO:77的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:73的可变重链序列或SEQ ID NO:74的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79以及SEQ ID NO:80的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ ID NO:71的可变轻链区；SEQ ID NO:73的可变重链区；SEQ IDNO:71的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:75；SEQ ID NO:76；以及SEQ ID NO:77)；以及SEQ ID NO:73的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:78；SEQ ID NO:79；以及SEQ IDNO:80)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的人源化抗CGRP抗体为Ab8，其包含SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:74或可选地由SEQ ID NO:72和SEQ IDNO:74组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab8，Fab片段包括SEQ ID NO:71的可变轻链序列和SEQ ID NO:73的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:71和/或SEQ ID NO:73的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab8的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab8或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab9
在一个优选的实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:81)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:82)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:83)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:84)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:81的可变轻链序列或SEQ ID NO:82的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:85、SEQ ID NO:86以及SEQ ID NO:87的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:83的可变重链序列或SEQ ID NO:84的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:88、SEQ ID NO:89以及SEQ ID NO:90的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:82的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:83或SEQ IDNO:84的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:81的可变轻链序列或SEQ ID NO:82的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86以及SEQ ID NO:87的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:83的可变重链序列或SEQ ID NO:84的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89以及SEQ ID NO:90的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ ID NO:81的可变轻链区；SEQ ID NO:83的可变重链区；SEQ IDNO:81的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:85；SEQ ID NO:86；以及SEQ ID NO:87)；以及SEQ ID NO:83的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:88；SEQ ID NO:89；以及SEQ IDNO:90)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的嵌合抗CGRP抗体为Ab9，其包含SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:84或可选地由SEQ ID NO:82和SEQ IDNO:84组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab9，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段包括SEQ ID NO:81的可变轻链序列和SEQ ID NO:83的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:81和/或SEQ ID NO:83的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab9的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab9或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab10
在一个实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:91)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:92)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:93)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:94)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:91的可变轻链序列或SEQ ID NO:92的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:95、SEQ ID NO:96以及SEQ ID NO:97的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ IDNO:93的可变重链序列或SEQ ID NO:94的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ IDNO:98、SEQ ID NO:99以及SEQ ID NO:100的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:91或SEQ ID NO:92的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:93或SEQ IDNO:94的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:91的可变轻链序列或SEQ ID NO:92的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96以及SEQ ID NO:97的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:93的可变重链序列或SEQ ID NO:94的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99以及SEQ ID NO:100的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:91的可变轻链区；SEQ ID NO:93的可变重链区；SEQ ID NO:91的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:95；SEQ ID NO:96；以及SEQ ID NO:97)；以及SEQ ID NO:93的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:98；SEQ ID NO:99；以及SEQ ID NO:100)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的人源化抗CGRP抗体为Ab10，其包含SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:94或可选地由SEQ ID NO:92和SEQ IDNO:94组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab10，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段包括SEQ ID NO:91的可变轻链序列和SEQ ID NO:93的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:91和/或SEQ ID NO:93的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab10的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab10或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab11
在一个优选的实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:101)。
本发明还包括对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体：QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:102)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体：QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:103)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体：QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:104)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:101的可变轻链序列或SEQ ID NO:102的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQID NO:105、SEQ ID NO:106以及SEQ ID NO:107的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO:103的可变重链序列或SEQ ID NO:104的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109以及SEQ ID NO:110的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:101或SEQ ID NO:102的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:103或SEQ ID NO:104的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:101的可变轻链序列或SEQ ID NO:102的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:105、SEQ IDNO:106以及SEQ ID NO:107的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:103的可变重链序列或SEQ ID NO:104的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:108、SEQ IDNO:109以及SEQ ID NO:110的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ ID NO:101的可变轻链区；SEQ ID NO:103的可变重链区；SEQID NO:101的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:105；SEQ ID NO:106；以及SEQ ID NO:107)；以及SEQ ID NO:103的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:108；SEQ ID NO:109；以及SEQ ID NO:110)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的嵌合抗CGRP抗体为Ab11，其包含SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:104或可选地由SEQ ID NO:102和SEQID NO:104组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab11，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段包括SEQ ID NO:101的可变轻链序列和SEQ ID NO:103的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:101和/或SEQ ID NO:103的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab11的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab11或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab12
在一个实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:111)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:112)。
本发明进一步包括对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:113)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:114)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:111的可变轻链序列或SEQ ID NO:112的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQID NO:115、SEQ ID NO:116以及SEQ ID NO:117的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO:113的可变重链序列或SEQ ID NO:114的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119以及SEQ ID NO:120的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:111或SEQ ID NO:112的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:113或SEQID NO:114的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:111的可变轻链序列或SEQ ID NO:112的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:115、SEQ IDNO:116以及SEQ ID NO:117的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:113的可变重链序列或SEQ ID NO:114的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:118、SEQ IDNO:119以及SEQ ID NO:120的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ ID NO:111的可变轻链区；SEQ ID NO:113的可变重链区；SEQID NO:111的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:115；SEQ ID NO:116；以及SEQ ID NO:117)；以及SEQ ID NO:113的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:118；SEQ ID NO:119；以及SEQ ID NO:120)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的人源化抗CGRP抗体为Ab12，其包含SEQ ID NO:112和SEQ ID NO:114或可选地由SEQ ID NO:112和SEQID NO:114组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab12，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段包括SEQ ID NO:111的可变轻链序列和SEQ ID NO:113的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO:111和/或SEQ ID NO:113的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab12的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab12或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab13
在一个优选的实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体：AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR(SEQ ID NO:121)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体：AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:122)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体：QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGIIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:123)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体：QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:124)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:121的可变轻链序列或SEQ ID NO:122的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQID NO:125、SEQ ID NO:126以及SEQ ID NO:127的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO:123的可变重链序列或SEQ ID NO:124的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129以及SEQ ID NO:130的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQID NO:121或SEQ ID NO:122的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:123或SEQ ID NO:124的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:121的可变轻链序列或SEQ ID NO:122的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:125、SEQ IDNO:126以及SEQ ID NO:127的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:123的可变重链序列或SEQ ID NO:124的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:128、SEQ IDNO:129以及SEQ ID NO:130的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:121的可变轻链区；SEQ ID NO:123的可变重链区；SEQ ID NO:121的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:125；SEQ ID NO:126；以及SEQ ID NO:127)；以及SEQ ID NO:123的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:128；SEQ ID NO:129；以及SEQ ID NO:130)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的嵌合抗CGRP抗体为Ab13，其包含SEQ ID NO:122和SEQ ID NO:124或可选地由SEQ ID NO:122和SEQID NO:124组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab13，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段包括SEQ ID NO:121的可变轻链序列和SEQ ID NO:123的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQID NO:121和/或SEQ ID NO:123的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab13的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体如Ab13或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab14
在一个实施方案中，本发明包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:131)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:132)。
本发明进一步包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:133)。
本发明还包括用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:134)。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体，其包含对应于SEQ IDNO:131的可变轻链序列或SEQ ID NO:132的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQID NO:135、SEQ ID NO:136以及SEQ ID NO:137的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO:133的可变重链序列或SEQ ID NO:134的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139以及SEQ ID NO:140的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成：一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:131或SEQ ID NO:132的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：SEQ ID NO:133或SEQID NO:134的多肽序列。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:131的可变轻链序列或SEQ ID NO:132的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:135、SEQ IDNO:136以及SEQ ID NO:137的多肽序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:133的可变重链序列或SEQ ID NO:134的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:138、SEQ IDNO:139以及SEQ ID NO:140的多肽序列中的一种或多种。
本发明还涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段：SEQ IDNO:131的可变轻链区；SEQ ID NO:133的可变重链区；SEQ ID NO:131的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:135；SEQ ID NO:136；以及SEQ ID NO:137)；以及SEQ ID NO:133的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:138；SEQ ID NO:139；以及SEQ ID NO:140)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的人源化抗CGRP抗体为Ab14，其包含SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:134或可选地由SEQ ID NO:132和SEQID NO:134组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体片段包含以下或可选地由以下组成：对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Ab14，Fab片段包括SEQ ID NO:131的可变轻链序列和SEQ ID NO:133的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ IDNO:131和/或SEQ ID NO:133的添加、缺失以及变体。
在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的Fab片段可通过Ab14的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab14或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
在另一个实施方案中，抗体片段可以一种或多种下列非限制性形式存在：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv以及单链Fv抗体形式。在一个优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本文所述的抗CGRP抗体进一步包括包含下文所示序列的κ恒定轻链序列：
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:283)。
在另一个优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的本文所述的抗CGRP抗体进一步包括包含下文所示序列的γ-1恒定重链多肽序列：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:284)。
在另一个实施方案中，本发明涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的分离的抗CGRP抗体，其包含选自以下的VH多肽序列：SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或其变体；并且进一步包含选自以下的VL多肽序列：SEQ ID NO:1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131，或其变体，其中所述VH或VL多肽中的一个或多个框架残基(FR残基)已经被另一个氨基酸残基取代，产生特异性结合CGRP的抗CGRP抗体。本发明涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的这些抗体的人源化和嵌合形式。此类嵌合抗体可包括衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19恒定区的Fc。
在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体或VH或VL多肽源自或选自在本文所述人源化过程开始之前的一种或多种兔B细胞群体。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体和其片段不具有对CGRP-R的结合特异性。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体和其片段抑制CGRP与CGRP-R的缔合。在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗CGRP抗体和其片段抑制CGRP与CGRP-R和/或另外的蛋白质和/或其多聚体的缔合，和/或拮抗其生物效应。
如本文的段落中所述，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体和其片段可被翻译后修饰以添加效应子部分如化学连接子、可检测部分如例如荧光染料、酶、底物、生物发光材料、放射性材料以及化学发光部分，或功能性部分如例如链霉亲和素、亲和素、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂以及放射性材料。
抗体或其片段也可以被化学修饰以提供另外的优点，例如多肽的溶解性、稳定性以及循环时间(体内半衰期)增加，或免疫原性降低(参见美国专利No.4,179,337)。用于衍生化的化学部分可选自水溶性聚合物，例如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇等。抗体和其片段可在分子内的任意位置或在分子内的预定位置被修饰并且可包括一个、两个、三个或更多个连接的化学部分。
聚合物可具有任何分子量，并且可为分枝或未分枝的。对于聚乙二醇来说，为便于处理和制造，优选的分子量介于约1kDa与约100kDa之间(术语“约”指示在制备聚乙二醇时，一些分子的重量将比所述分子量更大或略小)。取决于所需治疗概况(例如，所需持续释放的持续时间、对生物活性的影响(如果存在的话)、处理简易性、聚乙二醇与治疗蛋白或类似物的抗原性和其他已知作用的程度或缺乏)，可使用其他大小。例如，聚乙二醇可具有约200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000或100,000kDa的平均分子量。分枝聚乙二醇描述于例如美国专利No.5,643,575；Morpurgo等人,Appl.Biochem.Biotechnol.56:59-72(1996)；Vorobjev等人,Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750(1999)；以及Caliceti等人,Bioconjug.Chem.10:638-646(1999)中，其各自的公开内容以引用的方式并入本文中。
存在多种为本领域技术人员可用的连接方法。参见例如EP 0 401 384，其以引用的方式并入本文中(将PEG偶联至G-CSF)。也参见Malik等人,Exp.Hematol.20:1028-1035(1992)(报道使用三氟代乙烷磺酰氯进行GM-CSF的聚乙二醇化)。例如，聚乙二醇可经由反应性基团(例如游离氨基或羧基)通过氨基酸残基共价结合。反应性基团为可结合至活化的聚乙二醇分子的那些基团。具有游离氨基的氨基酸残基可包括赖氨酸残基和N端氨基酸残基；具有游离羧基的氨基酸残基可包括天冬氨酸残基、谷氨酸残基以及C端氨基酸残基。巯基也可以用作反应性基团以连接聚乙二醇分子。对于治疗目的优选的是在氨基处连接，例如在N端或赖氨酸基团处连接。
如上文所示，聚乙二醇可经由键联至多种氨基酸残基中的任一个而连接至蛋白质。例如，聚乙二醇可经由与赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸残基的共价键而键联至多肽。可使用一种或多种反应化学来连接聚乙二醇与特定氨基酸残基(例如，赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸)或多于一种类型的氨基酸残基(例如，赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸以及其组合)。
可选地，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗体或其片段可经由与白蛋白(包括但不限于重组人类血清白蛋白或其片段或变体(参见例如1999年3月2日颁予的美国专利No.5,876,969；欧洲专利0 413 622；以及1998年6月16日颁予的美国专利No.5,766,883，以全文引用的方式并入本文中))或其他循环血蛋白如转铁蛋白或铁蛋白融合而具有增加的体内半衰期。在一个优选的实施方案中，本发明的多肽和/或抗体(包括其片段或变体)与人类血清白蛋白的成熟形式(即，如欧洲专利0 322 094的图1和图2中所示的人类血清白蛋白的氨基酸1-585，该文献以全文引用的方式并入本文中)融合。本发明还涵盖了编码本发明的融合蛋白的多核苷酸。
关于可检测部分，另外的示例性酶包括但不限于辣根过氧化物酶、乙酰胆碱酯酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶以及荧光素酶。另外的示例性荧光材料包括但不限于罗丹明(rhodamine)、荧光素、异硫氰酸荧光素、伞形酮(umbelliferone)、二氯三嗪胺、藻红蛋白(phycoerythrin)以及丹磺酰氯(dansyl chloride)。另外的示例性化学发光部分包括但不限于鲁米诺(luminol)。另外的示例性生物发光材料包括但不限于荧光素和水母发光蛋白(aequorin)。另外的示例性放射性材料包括但不限于碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)以及磷32(32P)。
关于功能性部分，示例性细胞毒性剂包括但不限于甲氨蝶呤(methotrexate)、氨基蝶呤(aminopterin)、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪(decarbazine)；烷化剂如氮芥(mechlorethamine)、赛替派(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)、丝裂霉素C(mitomycin C)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、1-甲基亚硝基脲、环磷酰胺(cyclothosphamide)、氮芥、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、链脲佐菌素(streptozotocin)、丝裂霉素C、顺式二氯二氨合铂(II)(DDP)顺铂以及卡铂(铂尔定(paraplatin))；蒽环类包括柔红霉素(以前的道诺霉素)、阿霉素(亚德里亚霉素)、地托比星(detorubicin)、洋红霉素(carminomycin)、伊达比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)以及比生群(bisantrene)；抗生素包括更生霉素(放线菌素D)、博莱霉素、卡奇霉素、光神霉素以及安曲霉素(AMC)；以及抗有丝分裂剂如长春花生物碱、长春新碱(vincristine)以及长春碱(vinblastine)。其他细胞毒性剂包括紫杉醇(泰素)、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin)、吉西他滨(gemcitabine)、细胞松弛素B(cytochalasin B)、短杆菌肽D(gramicidin D)、溴化乙锭(ethidium bromide)、依米丁(emetine)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、秋水仙素(colchicin)、二羟基炭疽菌素二酮、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔(propranolol)、嘌呤霉素、丙卡巴肼(procarbazine)、羟基脲、天冬酰胺酶、皮质类固醇、米托坦(Ο,Ρ'-(DDD))、干扰素以及这些细胞毒性剂的混合物。
另外的细胞毒性剂包括但不限于化学治疗剂如卡铂、顺铂、太平洋紫杉醇、吉西他滨、卡奇霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、放线菌素D、环磷酰胺、长春新碱以及博莱霉素。来自植物和细菌的毒性酶如蓖麻毒素、白喉毒素以及假单胞菌毒素可以缀合至人源化或嵌合抗体或其结合片段，以产生细胞类型特异性杀伤试剂(Youle等人,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 77:5483(1980)；Gilliland等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 77:4539(1980)；Krolick等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 77:5419(1980))。
其他细胞毒性剂包括由Goldenberg在美国专利No.6,653,104中所述的细胞毒性核糖核酸酶。本发明的实施方案还涉及放射免疫缀合物，其中使用或不使用复合物形成剂，使发射α或β粒子的放射性核素稳定地偶联至抗体或其结合片段。此类放射性核素包括β发射体，例如磷-32(32P)、钪-47(47Sc)、铜-67(67Cu)、镓-67(67Ga)、钇-88(88Y)、钇-90(90Y)、碘-125(125I)、碘-131(131I)、钐-153(153Sm)、镥-177(177Lu)、铼-186(186Re)或铼-188(188Re)；以及α发射体，例如砹-211(211At)、铅-212(212Pb)、铋-212(212Bi)或铋-213(213Bi)或锕-225(225Ac)。
用于将抗体或其结合片段结合至可检测部分等的方法在本领域是已知的，例如由Hunter等人,Nature 144:945(1962)；David等人,Biochemistry 13:1014(1974)；Pain等人,J.Immunol.Meth.40:219(1981)；以及Nygren,J.,Histochem.and Cytochem.30:407(1982)描述的那些方法。
本文所述的实施方案进一步包括与本文所示的抗体、抗体片段、双功能抗体、SMIP、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、多肽、可变区以及CDR基本上同源的变体和等效物。这些物质可包含例如保守性取代突变(即一个或多个氨基酸被类似的氨基酸取代)。例如，保守性取代是指氨基酸被同一通用类别内的另一氨基酸取代，例如一个酸性氨基酸被另一酸性氨基酸取代，一个碱性氨基酸被另一碱性氨基酸取代，或一个中性氨基酸被另一中性氨基酸取代。保守性氨基酸取代所预期的内容在本领域众所周知。
在另一个实施方案中，本发明涵盖与任何一种或多种本文所示的抗体片段、可变区以及CDR的多肽序列具有至少90％或更大的序列同源性的多肽序列。更优选地，本发明涵盖与任何一种或多种本文所示的抗体片段、可变区以及CDR的多肽序列具有至少95％或更大的序列同源性、甚至更优选至少98％或更大的序列同源性以及再更优选至少99％或更大的序列同源性的多肽序列。用于测定核酸与氨基酸序列之间的同源性的方法为本领域技术人员众所周知。
在另一个实施方案中，本发明进一步涵盖进一步具有抗CGRP活性的本文所示抗体片段、可变区以及CDR的上述多肽同源物。本文例如在下文的段落-中阐述抗CGRP活性的非限制性例子。
在另一个实施方案中，本发明进一步涵盖结合任何上述序列的抗独特型抗体的产生和使用。在一个示例性实施方案中，此类抗独特型抗体可以施用于已接受抗CGRP抗体的受试者以调节、降低或中和抗CGRP抗体的作用。此类抗独特型抗体还可以用于治疗特征在于存在抗CGRP抗体的自身免疫疾病。此类抗独特型抗体的另一个示例性用途为检测本发明的抗CGRP抗体，例如监测在受试者的血液或其他体液中存在的抗CGRP抗体的水平。
本发明还涵盖抗CGRP抗体，其包含用于取代本文所述的任何其他多核苷酸序列的本文所述的任何多肽或多核苷酸序列。例如，但不限于此，本发明涵盖包含本文所述的任何可变轻链和可变重链序列的组合的抗体，并且进一步涵盖由本文所述的任何CDR序列取代本文所述的任何其他CDR序列而产生的抗体。
本发明的另外的示例性实施方案
在另一个实施方案中，本发明涵盖一种或多种用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗人类CGRP抗体或其抗体片段，其特异性结合于在完整人类CGRP多肽或其片段上与选自以下的抗人类CGRP抗体相同的线性或构象表位和/或竞争结合于在完整人类CGRP多肽或其片段上与选自以下的抗人类CGRP抗体相同的线性或构象表位：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14。在一个优选实施方案中，抗人类CGRP抗体或其片段特异性结合于在完整人类CGRP多肽或其片段上与Ab3、Ab6、Ab13、Ab12或Ab14相同的线性或构象表位和/或竞争结合于在完整人类CGRP多肽或其片段上与Ab3、Ab6、Ab13、Ab12或Ab14相同的线性或构象表位。
本发明的一个优选实施方案是针对用于治疗或预防CGRP相关腹泻的对CGRP具有结合特异性并抑制由CGRP与CGRP受体结合而介导的生物活性的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)。在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的嵌合或人源化抗CGRP抗体是选自Ab3、Ab6、Ab10、Ab13或Ab14。
本发明的一个优选实施方案是针对在动物模型中筛选对人类降钙素基因相关肽(下文为“CGRP”)具有结合特异性的抗体和其片段(包括Fab片段)以测定其体内作用、尤其是其拮抗CGRP的不良副作用(包括CGRP相关腹泻)以及治疗涉及过量CGRP的病状的能力的方法。
本发明的另一个更具体的优选实施方案涉及一种评估候选抗CGRP抗体或抗体片段的潜在体内功效的方法，其包括与在不存在候选CGRP抗体或抗体片段的情况下施用了CGRP的啮齿动物相比，测定所述抗体是否抑制CGRP相关腹泻。
本发明的一个更具体的优选实施方案涉及一种评估候选抗CGRP抗体或抗体片段治疗特征为CGRP水平增加的神经性病状的潜在体内功效的方法。
本发明的另一个更具体的优选实施方案涉及一种评估候选抗CGRP抗体或抗体片段治疗与腹泻相关的CGRP相关病症的潜在体内功效的方法，所述CGRP相关病症如偏头痛或慢性偏头痛(有或无先兆)、体重减轻、癌症或肿瘤、与癌症或肿瘤生长相关的血管生成、与癌症或肿瘤存活相关的血管生成、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、潮热、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛(例如与窦炎相关)、过敏症诱发的头痛或偏头痛、疼痛、炎性疼痛、手术后切口疼痛、复杂区域性疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤产生的疼痛、骨质疏松症、痛风性关节疼痛、腹痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其他伤害性疼痛，以及肝细胞癌、乳腺癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经性疼痛、伤害性疼痛、三叉神经痛、带状疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、经痛、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背痛、糖尿病性神经病变、坐骨神经痛，或与以下相关的疼痛或内脏疼痛：胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、激惹性结肠、痉挛性结肠、粘液性结肠炎、炎症性肠病、克罗恩病、回肠炎、溃疡性结肠炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎、月经期、分娩、更年期、前列腺炎、胰腺炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎(包括间质性膀胱炎(IC))、与肠梗阻相关的手术、憩室炎、腹膜炎、心包炎、肝炎、阑尾炎、结肠炎、胆囊炎、子宫内膜异位、慢性和/或急性胰腺炎、心肌梗塞、肾脏疼痛、胸膜疼痛、前列腺炎、骨盆痛、器官创伤、慢性伤害性疼痛、慢性神经性疼痛、慢性炎性疼痛、纤维肌痛、爆发性疼痛以及持续性疼痛。
本发明的另一个更具体的优选实施方案涉及一种使用抗CGRP抗体或抗体片段治疗与腹泻相关的CGRP相关病症的方法，其中该病状为起因于恶性疾病或癌症的癌症疼痛，该恶性疾病或癌症优选地选自以下一种或多种：腺组织中的腺癌、器官胚胎组织中的胚细胞瘤、上皮组织中的癌瘤、形成血细胞的组织中的白血病、淋巴组织中的淋巴瘤、骨髓组织中的骨髓瘤、结缔组织或支持组织中的肉瘤、肾上腺癌、AIDS相关淋巴瘤、贫血、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、类癌瘤、子宫颈癌、化学疗法、结肠癌、血细胞减少症、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、头癌、颈癌、肝胆管癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、何杰金病(Hodgkin'sdisease)、淋巴瘤、非何杰金病、神经系统肿瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、骨癌、结缔组织肉瘤癌、骨组织癌、造血细胞癌、骨髓癌、多发性骨髓瘤、白血病、原发性或继发性骨癌、转移至骨骼的肿瘤、浸润神经和空腔脏器的肿瘤、接近神经结构的肿瘤。癌症疼痛更优选包括内脏疼痛，优选为起因于胰腺癌和/或腹部转移瘤的内脏疼痛。癌症疼痛更优选包括躯体疼痛，优选为由于骨癌、骨骼中的转移瘤、手术后疼痛、结缔组织肉瘤癌、骨组织癌、骨髓的造血细胞癌、多发性骨髓瘤、白血病、原发性或继发性骨癌中的一种或多种而造成的躯体疼痛。
本发明的另一个优选实施方案涉及抑制、预防或治疗具有与CGRP水平升高相关的病状的受试者的腹泻和/或维持其肠中的电解质平衡和流体水平的方法，所述CGRP水平升高会导致腹泻和/或来自肠的电解质和流体的通量增加，所述方法包括施用有效量的抗CGRP抗体或抗CGRP抗体片段。
与其相关，本发明的另一个优选实施方案明确地涉及治疗或预防具有以下疾病的个体的腹泻的方法：功能性肠道障碍或炎症性肠病、细菌或病毒诱发的腹泻、与腹泻相关的癌症如甲状腺髓样癌或结肠直肠癌，并且更明确地说功能性肠道障碍或炎症性肠病包括例如胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、功能性腹痛综合征、憩室病以及憩室炎，或炎症性肠病是选自以下：克罗恩病、回肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎以及溃疡性结肠炎，其中这些疗法施用有效量的抗CGRP抗体或抗体片段，其以单一疗法施用或与另一种活性剂组合施用。
本发明的其他优选实施方案是针对于对CGRP具有结合特异性的特异性抗体和其片段、特别是具有所需抗原特异性、高亲和力或亲合力和/或功能特性的抗体的筛选测定法和治疗用途。在优选实施方案中，本发明涉及本文所述的抗体的测定法和用途，所述抗体包含本文所述的VH、VL以及CDR多肽的序列，以及编码其的多核苷酸。本发明的一个优选实施方案是针对能够结合至CGRP和/或抑制由CGRP与CGRP受体(“CGRP-R”)结合而介导的生物活性的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)。
在本发明的另一个实施方案中涵盖一种降低、治疗或预防与CGRP相关的疾病或病症(其可能包括腹泻作为不良副作用)的方法，该方法通过影响经由CGRP介导的那些生物活性，从而避免经由CGRP与CGRP-R的结合而介导的生物活性。本文提供与CGRP相关的疾病和病症的另一个非限制性列表。
在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗人类CGRP抗体为特异性结合于在完整CGRP多肽或其片段上由Ab3、Ab6、Ab13或Ab14特异性结合的相同的线性或构象表位的抗体，如使用横跨天然人类CGRP多肽的全长的重叠线性肽片段通过表位定位所确定。
本发明还涉及用于治疗或预防CGRP相关腹泻的与和本文公开的抗体或抗体片段相同的CGRP表位结合和/或与抗CGRP抗体竞争结合于CGRP的抗CGRP抗体，包括但不限于选自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14的抗CGRP抗体。
在另一个实施方案中，本发明还涉及用于治疗或预防CGRP相关腹泻的分离的抗CGRP抗体或抗体片段，其包含一个或多个在选自以下的VH多肽序列中所含的CDR：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或其变体，和/或一个或多个在选自以下的VL多肽序列中所含的CDR：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131，或其变体。
在本发明的一个实施方案中，在前面两个段落中所讨论的抗人类CGRP抗体在可变轻链和可变重链区中各包含至少2个互补决定区(CDR)，其与选自以下的抗人类CGRP抗体中所含的CDR相同：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14。
在一个优选的实施方案中，上文讨论的抗人类CGRP抗体在可变轻链和可变重链区中各包含至少2个互补决定区(CDR)，其与Ab3或Ab6中所含的CDR相同。在另一个实施方案中，上文讨论的抗人类CGRP抗体的所有CDR都与选自以下的抗人类CGRP抗体中所含的CDR相同：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14。在本发明的一个优选实施方案中，上文讨论的抗人类CGRP抗体的所有CDR都与选自Ab3或Ab6的抗人类CGRP抗体中所含的CDR相同。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的上文讨论的一种或多种抗人类CGRP抗体，其为未糖基化的；或最小程度地被糖基化，例如，其缺乏N-糖基化但可能包含一些O-糖基化，例如甘露糖残基，和/或其包含已被修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fc区；其为人类抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体；以及其为源自兔(亲本)抗人类CGRP抗体的人源化抗体。
本发明进一步涵盖用于治疗或预防CGRP相关腹泻的一种或多种抗人类CGRP抗体，其中所述抗体的可变轻链区和可变重链区中的框架区(FR)分别为未被修饰或已通过用亲本兔抗体的相应FR残基取代可变轻链或重链区中的一个或多个人类FR残基而被修饰的人类FR，并且其中所述人类FR已经来源于人类可变重链和轻链抗体序列，所述人类可变重链和轻链抗体序列已基于其相对于文库中所含的其他人类生殖系抗体序列与相应的兔可变重链或轻链区的高同源性水平而从人类生殖系抗体序列文库中选出。
在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防CGRP相关腹泻的抗人类CGRP抗体或片段特异性结合于表达CGRP的人类细胞和/或结合于体内循环的可溶性CGRP分子，包括在与表达CGRP的细胞相关的疾病患者中于人类细胞上表达或通过人类细胞表达的CGRP。
在另一个实施方案中，可能与腹泻相关的CGRP相关疾病选自偏头痛(有或无先兆)、体重减轻、癌症或肿瘤、与癌症或肿瘤生长相关的血管生成、与癌症或肿瘤存活相关的血管生成、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、潮热、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛(例如与窦炎相关)、过敏症诱发的头痛或偏头痛、疼痛、炎性疼痛、手术后切口疼痛、复杂区域性疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤产生的疼痛、骨质疏松症、痛风性关节疼痛、腹痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其他伤害性疼痛，以及肝细胞癌、乳腺癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经性疼痛、伤害性疼痛、三叉神经痛、带状疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、经痛、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背痛、糖尿病性神经病变、坐骨神经痛，或与以下相关的疼痛或内脏疼痛：胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、激惹性结肠、痉挛性结肠、粘液性结肠炎、炎症性肠病、克罗恩病、回肠炎、溃疡性结肠炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎、月经期、分娩、更年期、前列腺炎、胰腺炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎(包括间质性膀胱炎(IC))、与肠梗阻相关的手术、憩室炎、腹膜炎、心包炎、肝炎、阑尾炎、结肠炎、胆囊炎、子宫内膜异位、慢性和/或急性胰腺炎、心肌梗塞、肾脏疼痛、胸膜疼痛、前列腺炎、骨盆痛、器官创伤、慢性伤害性疼痛、慢性神经性疼痛、慢性炎性疼痛、纤维肌痛、爆发性疼痛以及持续性疼痛。
在本发明的另一个实施方案中，可能与腹泻相关的所治疗疾病为起因于恶性疾病或癌症的癌症疼痛，该恶性疾病或癌症优选地选自以下一种或多种：腺组织中的腺癌、器官胚胎组织中的胚细胞瘤、上皮组织中的癌瘤、形成血细胞的组织中的白血病、淋巴组织中的淋巴瘤、骨髓组织中的骨髓瘤、结缔组织或支持组织中的肉瘤、肾上腺癌、AIDS相关淋巴瘤、贫血、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、类癌瘤、子宫颈癌、化学疗法、结肠癌、血细胞减少症、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、头癌、颈癌、肝胆管癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、何杰金病(Hodgkin's disease)、淋巴瘤、非何杰金病、神经系统肿瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、骨癌、结缔组织肉瘤癌、骨组织癌、造血细胞癌、骨髓癌、多发性骨髓瘤、白血病、原发性或继发性骨癌、转移至骨骼的肿瘤、浸润神经和空腔脏器的肿瘤、接近神经结构的肿瘤。癌症疼痛更优选包括内脏疼痛，优选为起因于胰腺癌和/或腹部转移瘤的内脏疼痛。癌症疼痛更优选包括躯体疼痛，优选为由于骨癌、骨骼中的转移瘤、手术后疼痛、结缔组织肉瘤癌、骨组织癌、骨髓的造血细胞癌、多发性骨髓瘤、白血病、原发性或继发性骨癌中的一种或多种而造成的躯体疼痛。
本发明进一步涵盖直接或间接连接至可检测标记或治疗剂的抗人类CGRP抗体或片段腹泻。
本发明还涵盖产生如上文所示的抗人类CGRP抗体或抗体片段的表达的一种或多种核酸序列，包括包含酵母或人类偏爱密码子或可选地由酵母或人类偏爱密码子组成的核酸序列。本发明还涵盖包含所述核酸序列的载体(包括质粒或重组病毒载体)。本发明还涵盖表达至少一种上文所示抗体的宿主细胞或重组宿主细胞，包括哺乳动物、酵母、细菌以及昆虫细胞。在一个优选实施方案中，宿主细胞为酵母细胞。在另一个优选实施方案中，酵母细胞为二倍体酵母细胞。在一个更优选实施方案中，酵母细胞为毕赤酵母。
本发明还涵盖一种治疗方法，其包括向患有导致腹泻的与表达CGRP的细胞相关的疾病或病状的患者施用治疗有效量的至少一种本文所述的抗人类CGRP抗体或片段。本发明还涵盖该治疗方法可包括施用两种或更多种抗CGRP抗体或其片段并公开于本文中。如果向患者施用多于一种的抗体，则多种抗体可同时或并行施用，或其施用可交错进行。可治疗的疾病呈现于上文和本文他处所示的非限制性列表中。在一个优选实施方案中，疾病选自偏头痛、头痛、体重减轻、疼痛、癌症疼痛或神经性疼痛。在另一个实施方案中，治疗进一步包括施用选自化学疗法、放射疗法、细胞因子施用或基因疗法的另一种治疗剂或方式。
在本发明的非限制性实施方案中，另一种治疗剂或方式包括阿片类、止痛剂如NSAID、泰素(紫杉醇)或其衍生物、铂化合物如卡铂或顺铂、蒽环类如阿霉素、烷化剂如环磷酰胺、抗代谢物如5-氟尿嘧啶、或依托泊苷。
本发明进一步涵盖一种体内成像方法，其检测表达CGRP的细胞的存在，该方法包括施用诊断有效量的至少一种抗人类CGRP抗体。在一个实施方案中，所述施用进一步包括在表达CGRP的疾病位点施用促进抗体检测的放射性核素或荧光团。在另一个实施方案中，使用所述体内成像方法的结果来促进适当的治疗方式的设计，包括包含放射疗法、化学疗法或其组合的治疗方式。
对CGRP腹泻具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段的抗CGRP活性还可以通过其对于CGRP的结合强度或其亲和力来描述。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段以小于或等于5×10-7M、10-7M、5×10-8M、10-8M、5×10-9M、10-9M、5×10-10M、10-10M、5×10-11M、10-11M、5×10-12M、10-12M、5×10-13M或10-13M的解离常数(KD)结合于CGRP。优选地，抗CGRP抗体和其片段以小于或等于10-11M、5×10-12M或10-12M的解离常数结合CGRP。在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段结合于线性或构象CGRP表位。
在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段的抗CGRP活性以小于或等于10-4S-1、5×10-5S-1、10-5S-1、5×10-6S-1、10-6S-1、5×10-7S-1或10-7S-1的解离速率结合于CGRP。
在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段的抗CGRP活性通过预防、改善或减少与CGRP相关的疾病和病症(尤其是腹泻)的症状或可选地治疗与CGRP相关的疾病和病症(尤其是腹泻)而展现抗CGRP活性。本文示出与CGRP相关的疾病和病症的非限制性例子。
编码抗CGRP抗体多肽的多核苷酸
抗体Ab1
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:1的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:1的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:141)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:2的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:2的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:142)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:3的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:3的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:143)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:4的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:4的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:144)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:1的轻链可变序列或SEQ ID NO:2的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146以及SEQ ID NO:147的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:3的重链可变序列或SEQ ID NO:4的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149以及SEQ ID NO:150的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:1的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:141；编码SEQ IDNO:2的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:142；编码SEQ ID NO:3的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:143；编码SEQ ID NO:4的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:144；编码SEQ ID NO:1的轻链可变序列或SEQ ID NO:2的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:145；SEQ ID NO:146；以及SEQ ID NO:147)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:3的重链可变序列或SEQ IDNO:4的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:148；SEQ ID NO:149；以及SEQ ID NO:150)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab1，编码全长Ab1抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:2的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:142和编码SEQ ID NO:4的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:144。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab1的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab1或其Fab片段可通过Ab1多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab2
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:11的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:11的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(SEQ ID NO:151)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:12的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:12的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:152)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:13的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:13的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaCTCGACCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(SEQ ID NO:153)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:14的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:14的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaCTCGACCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:154)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:11的轻链可变序列或SEQ ID NO:12的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:156以及SEQ ID NO:157的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:13的重链可变序列或SEQ ID NO:14的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159以及SEQ ID NO:160的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:11的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:151；编码SEQ IDNO:12的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:152；编码SEQ ID NO:13的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:153；编码SEQ ID NO:14的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:154；编码SEQ IDNO:11的轻链可变序列或SEQ ID NO:12的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:155；SEQ IDNO:156；以及SEQ ID NO:157)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:13的重链可变序列或SEQID NO:14的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:158；SEQ ID NO:159；以及SEQ ID NO:160)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab2，编码全长Ab2抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:12的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:152和编码SEQ ID NO:14的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:154。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab2的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab2或其Fab片段可通过Ab2多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab3
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:21的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:21的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(SEQ ID NO:161)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:22的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:22的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:162)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:23的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:23的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaCTCGACCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(SEQ ID NO:163)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:24的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:24的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaCTCGACCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:164)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:21的轻链可变序列或SEQ ID NO:22的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166以及SEQ ID NO:167的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:23的重链可变序列或SEQ ID NO:24的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:169以及SEQ ID NO:170的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:21的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:161；编码SEQ IDNO:22的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:162；编码SEQ ID NO:23的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:163；编码SEQ ID NO:24的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:164；编码SEQ IDNO:21的轻链可变序列或SEQ ID NO:22的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:165；SEQ IDNO:166；以及SEQ ID NO:167)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:23的重链可变序列或SEQID NO:24的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:168；SEQ ID NO:169；以及SEQ ID NO:170)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab3，编码全长Ab3抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:22的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:162和编码SEQ ID NO:24的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:164。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab3的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab3或其Fab片段可通过Ab3多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab4
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:31的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:31的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:171)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:32的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:32的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:172)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:33的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:33的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:173)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:34的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:34的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:174)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:31的轻链可变序列或SEQ ID NO:32的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176以及SEQ ID NO:177的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:33的重链可变序列或SEQ ID NO:34的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:178、SEQ ID NO:179以及SEQ ID NO:180的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:31的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:171；编码SEQ IDNO:32的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:172；编码SEQ ID NO:33的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:173；编码SEQ ID NO:34的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:174；编码SEQ IDNO:31的轻链可变序列或SEQ ID NO:32的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:175；SEQ IDNO:176；以及SEQ ID NO:177)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:33的重链可变序列或SEQID NO:34的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:178；SEQ ID NO:179；以及SEQ ID NO:180)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab4，编码全长Ab4抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:32的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:172和编码SEQ ID NO:34的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:174。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab4的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab4或其Fab片段可通过Ab4多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab5
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:41的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:41的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatGATGCATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(SEQ ID NO:181)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:42的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:42的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatGATGCATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:182)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:43的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:43的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtGGCTACTACATGAACtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(SEQ ID NO:183)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:44的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:44的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtGGCTACTACATGAACtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:184)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:41的轻链可变序列或SEQ ID NO:42的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186以及SEQ ID NO:187的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:43的重链可变序列或SEQ ID NO:44的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189以及SEQ ID NO:190的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:41的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:181；编码SEQ IDNO:42的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:182；编码SEQ ID NO:43的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:183；编码SEQ ID NO:44的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:184；编码SEQ IDNO:41的轻链可变序列或SEQ ID NO:42的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:185；SEQ IDNO:186；以及SEQ ID NO:187)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:43的重链可变序列或SEQID NO:44的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:188；SEQ ID NO:189；以及SEQ ID NO:190)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab5，编码全长Ab5抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:42的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:182和编码SEQ ID NO:44的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:184。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab5的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab5或其Fab片段可通过Ab5多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab6
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:51的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:51的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatGATGCATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(SEQ ID NO:191)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:52的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:52的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatGATGCATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:192)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:53的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:53的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtGGCTACTACATGAACtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(SEQ IDNO:193)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:54的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:54的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtGGCTACTACATGAACtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:194)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:51的轻链可变序列或SEQ ID NO:52的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:196以及SEQ ID NO:197的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:53的重链可变序列或SEQ ID NO:54的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:199以及SEQ ID NO:200的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:51的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:191；编码SEQ IDNO:52的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:192；编码SEQ ID NO:53的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:193；编码SEQ ID NO:54的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:194；编码SEQ IDNO:51的轻链可变序列或SEQ ID NO:52的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:195；SEQ IDNO:196；以及SEQ ID NO:197)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:53的重链可变序列或SEQID NO:54的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:198；SEQ ID NO:199；以及SEQ ID NO:200)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab6，编码全长Ab6抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:52的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:192和编码SEQ ID NO:54的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:194。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab6的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab6或其Fab片段可通过Ab6多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab7
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:61的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:61的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:201)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:62的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:62的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:202)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:63的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:63的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:203)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:64的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:64的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:204)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:61的轻链可变序列或SEQ ID NO:62的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206以及SEQ ID NO:207的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:63的重链可变序列或SEQ ID NO:64的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209以及SEQ ID NO:210的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:61的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:201；编码SEQ IDNO:62的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:202；编码SEQ ID NO:63的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:203；编码SEQ ID NO:64的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:204；编码SEQ IDNO:61的轻链可变序列或SEQ ID NO:62的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:205；SEQ IDNO:206；以及SEQ ID NO:207)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:63的重链可变序列或SEQID NO:64的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:208；SEQ ID NO:209；以及SEQ ID NO:210)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab7，编码全长Ab7抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:62的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:202和编码SEQ ID NO:64的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:204。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab7的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab7或其Fab片段可通过Ab7多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab8
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:71的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:71的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTAcAATTACAACTACCTTGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(SEQ ID NO:211)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:72的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:72的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAGTGTTTAcAATTACAACTACCTTGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:212)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:73的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:73的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtAACCACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCGTTGGTATcAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(SEQ ID NO:213)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:74的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:74的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACCTCagtAACCACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCGTTGGTATcAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCTAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:214)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:71的轻链可变序列或SEQ ID NO:72的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216以及SEQ ID NO:217的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:73的重链可变序列或SEQ ID NO:74的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219以及SEQ ID NO:220的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:71的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:211；编码SEQ IDNO:72的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:212；编码SEQ ID NO:73的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:213；编码SEQ ID NO:74的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:214；编码SEQ IDNO:71的轻链可变序列或SEQ ID NO:72的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:215；SEQ IDNO:216；以及SEQ ID NO:217)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:73的重链可变序列或SEQID NO:74的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:218；SEQ ID NO:219；以及SEQ ID NO:220)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab8，编码全长Ab8抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:72的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:212和编码SEQ ID NO:74的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:214。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab8的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab8或其Fab片段可通过Ab8多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab9
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:81的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:81的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:221)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:82的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:82的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:222)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:83的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:83的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:223)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:84的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:84的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:224)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:81的轻链可变序列或SEQ ID NO:82的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:226以及SEQ ID NO:227的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:83的重链可变序列或SEQ ID NO:84的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229以及SEQ ID NO:230的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:81的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:221；编码SEQ IDNO:82的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:222；编码SEQ ID NO:83的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:223；编码SEQ ID NO:84的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:224；编码SEQ IDNO:81的轻链可变序列或SEQ ID NO:82的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:225；SEQ IDNO:226；以及SEQ ID NO:227)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:83的重链可变序列或SEQID NO:84的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:228；SEQ ID NO:229；以及SEQ ID NO:230)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab9，编码全长Ab9抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:82的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:222和编码SEQ ID NO:84的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:224。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab9的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab9或其Fab片段可通过Ab9多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab10
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:91的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:91的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAATGTTTAcAATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(SEQ ID NO:231)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:92的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:92的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAATGTTTAcAATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:232)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:93的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:93的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGGCCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtACCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(SEQ ID NO:233)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:94的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:94的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGGCCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtACCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:234)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:91的轻链可变序列或SEQ ID NO:92的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:236以及SEQ ID NO:237的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:93的重链可变序列或SEQ ID NO:94的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:239以及SEQ ID NO:240的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:91的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:231；编码SEQ IDNO:92的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:232；编码SEQ ID NO:93的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:233；编码SEQ ID NO:94的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:234；编码SEQ IDNO:91的轻链可变序列或SEQ ID NO:92的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:235；SEQ IDNO:236；以及SEQ ID NO:237)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:93的重链可变序列或SEQID NO:94的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:238；SEQ ID NO:239；以及SEQ ID NO:240)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab10，编码全长Ab10抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:92的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:232和编码SEQ ID NO:94的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:234。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab10的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab10或其Fab片段可通过Ab10多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab11
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:101的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:101的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:241)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:102的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:102的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:242)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:103的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:103的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:243)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:104的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:104的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:244)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:101的轻链可变序列或SEQ IDNO:102的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:246以及SEQ ID NO:247的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:103的重链可变序列或SEQ IDNO:104的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249以及SEQ ID NO:250的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:101的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:241；编码SEQ IDNO:102的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:242；编码SEQ ID NO:103的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:243；编码SEQ ID NO:104的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:244；编码SEQID NO:101的轻链可变序列或SEQ ID NO:102的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:245；SEQ ID NO:246；以及SEQ ID NO:247)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:103的重链可变序列或SEQ ID NO:104的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:248；SEQ ID NO:249；以及SEQID NO:250)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab11，编码全长Ab11抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:102的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:242和编码SEQ ID NO:104的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:244。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab11的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab11或其Fab片段可通过Ab11多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab12
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:111的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:111的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCGGGCCAGTCAGAGTGTTTAcTATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(SEQ ID NO:251)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:112的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:112的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCGGGCCAGTCAGAGTGTTTAcTATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:252)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:113的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:113的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACGTCACTAACTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(SEQ ID NO:253)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:114的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:114的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGACGTCACTAACTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtGCCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:254)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:111的轻链可变序列或SEQ IDNO:112的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256以及SEQ ID NO:257的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:113的重链可变序列或SEQ IDNO:114的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259以及SEQ ID NO:260的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:111的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:251；编码SEQ IDNO:112的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:252；编码SEQ ID NO:113的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:253；编码SEQ ID NO:114的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:254；编码SEQID NO:111的轻链可变序列或SEQ ID NO:112的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:255；SEQ ID NO:256；以及SEQ ID NO:257)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:113的重链可变序列或SEQ ID NO:114的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:258；SEQ ID NO:259；以及SEQID NO:260)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab12，编码全长Ab12抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:112的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:252和编码SEQ ID NO:114的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:254。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab12的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab12或其Fab片段可通过Ab12多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab13
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:121的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:121的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:261)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:122的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:122的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:262)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:123的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:123的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTAcAATGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:263)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:124的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:124的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTAcAATGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:264)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:121的轻链可变序列或SEQ IDNO:122的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:265、SEQ ID NO:266以及SEQ ID NO:267的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:123的重链可变序列或SEQ IDNO:124的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:269以及SEQ ID NO:270的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:121的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:261；编码SEQ IDNO:122的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:262；编码SEQ ID NO:123的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:263；编码SEQ ID NO:124的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:264；编码SEQID NO:121的轻链可变序列或SEQ ID NO:122的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:265；SEQ ID NO:266；以及SEQ ID NO:267)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:123的重链可变序列或SEQ ID NO:124的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:268；SEQ ID NO:269；以及SEQID NO:270)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab13，编码全长Ab13抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:122的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:262和编码SEQ ID NO:124的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:264。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab13的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab13或其Fab片段可通过Ab13多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab14
本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:131的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:131的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAATGTTTAcAATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgt(SEQ ID NO:271)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:132的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:132的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
CAAGTGCTGacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcAATtgcCAGGCCAGTCAGAATGTTTAcAATAACAACTACCTAGCCtggtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagCAActgatctatTCTACATCCACTCTGGCATCTggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgaagatgttgcaacttattactgtCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTttcggcggaggaaccaaggtggaaatcaaacgtACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:272)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:133的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:133的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGGCCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtACCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGC(SEQ ID NO:273)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:134的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:134的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成：
gaggtgcagctTgtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaGTCtctggaATCGGCCTCagtAGCTACTACATGCAAtgggtccgtcaggctccagggaaggggctggagtgggtcGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCcgattcaccatctccagagacaattccaagACCACGGTGtatcttcaaatgaacagcctgagagctgaggacactgctgtgtatTTCtgtACCAGAGGGGACATCtggggccaagggaccctcgtcaccgtcTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAcCCTCCTCCaAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGaTCTCCCgGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:274)。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:131的轻链可变序列或SEQ IDNO:132的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:276以及SEQ ID NO:277的多核苷酸序列中的一种或多种。
在本发明的另一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:133的重链可变序列或SEQ IDNO:134的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:279以及SEQ ID NO:280的多核苷酸序列中的一种或多种。
本发明还涵盖包括一种或多种编码本文所述的抗体片段的多核苷酸序列的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对CGRP具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列编码抗体片段的多核苷酸：编码SEQ ID NO:131的轻链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:271；编码SEQ IDNO:132的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:272；编码SEQ ID NO:133的重链可变序列的多核苷酸SEQ ID NO:273；编码SEQ ID NO:134的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:274；编码SEQID NO:131的轻链可变序列或SEQ ID NO:132的轻链序列的互补决定区(SEQ ID NO:275；SEQ ID NO:276；以及SEQ ID NO:277)的多核苷酸；以及编码SEQ ID NO:133的重链可变序列或SEQ ID NO:134的重链序列的互补决定区(SEQ ID NO:278；SEQ ID NO:279；以及SEQID NO:280)的多核苷酸。
在本发明的一个优选实施方案中，本发明的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段的多核苷酸。关于抗体Ab14，编码全长Ab14抗体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：编码SEQ ID NO:132的轻链序列的多核苷酸SEQ ID NO:272和编码SEQ ID NO:134的重链序列的多核苷酸SEQ ID NO:274。
本发明的另一个实施方案涵盖这些多核苷酸并入表达载体中以在哺乳动物细胞如CHO、NSO、HEK-293中或在真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如毕赤酵母属)中表达。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，Fab片段可通过在合适的宿主中表达全长多核苷酸之后Ab14的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab14或其Fab片段可通过Ab14多核苷酸在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK 293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
在一个实施方案中，本发明是针对一种分离的多核苷酸，其包含编码选自SEQ IDNO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的抗CGRP VH抗体氨基酸序列或编码其变体的多核苷酸，其中至少一个框架残基(FR残基)已经被在兔抗CGRP抗体VH多肽中的相应位置处存在的氨基酸取代或被保守性氨基酸取代。
在另一个实施方案中，本发明是针对一种分离的多核苷酸，其包含编码抗CGRP VL抗体氨基酸序列1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131或编码其变体的多核苷酸序列，其中至少一个框架残基(FR残基)已经被在兔抗CGRP抗体VL多肽中的相应位置处存在的氨基酸取代或被保守性氨基酸取代。
在另一个实施方案中，本发明是针对一种或多种异源多核苷酸，其包含编码以下中所含的多肽的序列：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13；SEQ IDNO:21和SEQ ID NO:23；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:33；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:43；SEQID NO:51和SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:63；SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73；SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:83；SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:93；SEQ ID NO:101和SEQ IDNO:103；SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:113；SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:123；或SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:133。
在另一个实施方案中，本发明是针对一种分离的多核苷酸，其表达包含至少一个源自抗CGRP抗体的CDR多肽的多肽，其中所述表达多肽单独特异性结合CGRP，或当与另一个多核苷酸序列一起表达时特异性结合CGRP，该另一个多核苷酸序列表达包含至少一个源自抗CGRP抗体的CDR多肽的多肽，其中所述至少一个CDR选自在SEQ ID NO:1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131或SEQ IDNO:133的VL或VH多肽中所含的CDR。
还涵盖包含所述多核苷酸的宿主细胞和载体。
本发明进一步涵盖包含编码如本文所示的可变重链和轻链多肽序列以及单独的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸序列的载体，以及包含所述载体序列的宿主细胞。在本发明的一个实施方案中，宿主细胞为酵母细胞。在本发明的另一个实施方案中，酵母宿主细胞属于毕赤酵母属。
B细胞筛选和分离
在一个实施方案中，本发明涵盖抗原特异性B细胞的克隆群体的制备和分离，其可用于分离至少一种CGRP抗原特异性细胞，该CGRP抗原特异性细胞可用于产生针对CGRP的单克隆抗体(该抗体对所需CGRP抗原具有特异性)或对应于此种抗体的核酸序列。制备和分离所述抗原特异性B细胞的克隆群体的方法传授于例如Carvalho-Jensen等人的美国专利公开no.US 2007/0269868中，该文献的公开内容以全文引用的方式并入本文中。制备和分离所述抗原特异性B细胞的克隆群体的方法也在本文传授于实施例中。通过尺寸或密度“富集”细胞群体的方法在本领域是已知的。参见例如美国专利5,627,052。除了通过抗原特异性富集细胞群体之外，还可以使用这些步骤。
人源化抗体的方法
在另一个实施方案中，本发明涵盖人源化抗体重链和轻链的方法。可应用于抗CGRP抗体的人源化抗体重链和轻链的方法传授于例如Olson等人的美国专利申请公开no.US 2009/0022659和Garcia-Martinez等人的美国专利no.7,935,340中，所述文献各自的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
产生抗体和其片段的方法
在另一个实施方案中，本发明涵盖产生抗CGRP抗体和其片段腹泻的方法。用于产生从交配感受态酵母的多倍体、优选地二倍体或四倍体菌株中分泌的抗CGRP抗体和其片段的方法传授于例如Olson等人的美国专利申请公开no.US 2009/0022659和Garcia-Martinez等人的美国专利no.7,935,340中，所述文献各自的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
其他产生抗体的方法为本领域技术人员众所周知。例如，嵌合抗体的产生方法现在为本领域众所周知(参见例如Cabilly等人的美国专利No.4,816,567；Morrison等人,P.N.A.S.USA,81:8651-55(1984)；Neuberger,M.S.等人,Nature,314:268-270(1985)；Boulianne,G.L.等人,Nature,312:643-46(1984)，所述文献各自的公开内容以全文引用的方式并入本文中)。
同样，其他产生人源化抗体的方法现在为本领域众所周知(参见例如Queen等人的美国专利No.5,530,101、5,585,089、5,693,762以及6,180,370；Winter的美国专利No.5,225,539和6,548,640；Carter等人的美国专利No.6,054,297、6,407,213以及6,639,055；Adair的美国专利No.6,632,927；Jones,P.T.等人,Nature,321:522-525(1986)；Reichmann,L.等人,Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen,M等人,Science,239:1534-36(1988)，所述文献各自的公开内容以全文引用的方式并入本文中)。
具有CGRP结合特异性腹泻的本发明的抗体多肽还可以通过使用本领域技术人员众所周知的常规技术构建包含操纵子和编码抗体重链的DNA序列的表达载体而产生，其中编码抗体特异性所需的CDR的DNA序列是源自非人类细胞来源，优选兔B细胞来源，而编码抗体链剩余部分的DNA序列是源自人类细胞来源。
第二表达载体是使用本领域技术人员众所周知的相同常规手段产生，所述表达载体包含操纵子和编码抗体轻链的DNA序列，其中编码抗体特异性所需的CDR的DNA序列是源自非人类细胞来源，优选兔B细胞来源，而编码抗体链剩余部分的DNA序列是源自人类细胞来源。
通过本领域技术人员众所周知的常规技术将表达载体转染入宿主细胞以产生转染的宿主细胞，通过本领域技术人员众所周知的常规技术培养所述转染的宿主细胞以产生所述抗体多肽。
宿主细胞可以用上述两种表达载体共同转染，第一表达载体包含编码操纵子和轻链衍生多肽的DNA，第二载体包含编码操纵子和重链衍生多肽的DNA。两种载体包含不同的可选择标记物，但优选基本上实现重链和轻链多肽的相等表达。可选地，可以使用单一载体，该载体包括编码重链和轻链多肽二者的DNA。用于重链和轻链的编码序列可包含cDNA、基因组DNA或二者。
用于表达抗体多肽的宿主细胞可以为细菌细胞如大肠杆菌，或真核细胞如巴斯德毕赤酵母。在本发明的一个实施方案中，可使用为此目的充分限定类型的哺乳动物细胞，例如骨髓瘤细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系、NSO细胞系或HEK293细胞系。
可以构建载体的一般方法、产生宿主细胞所需的转染方法以及从所述宿主细胞产生抗体多肽所需的培养方法都包括常规技术。尽管用于产生抗体的细胞系优选为哺乳动物细胞系，但可以可选地使用任何其他合适的细胞系，例如细菌细胞系如大肠杆菌源细菌株，或酵母细胞系。
类似地，抗体多肽一旦产生就可以根据本领域中的标准程序纯化，例如错流过滤、硫酸铵沉淀、亲和柱色谱等。
本文所述的抗体多肽还可以用于设计和合成肽或非肽模拟物，其将用于与本发明的抗体多肽相同的治疗应用。参见例如Saragobi等人,Science,253:792-795(1991)，其内容以全文引用的方式并入本文中。
筛选测定法
本发明还包括筛选测定法，其设计成有助于在展现CGRP相关疾病或病症的症状的患者中鉴定与CGRP和腹泻相关的疾病和病症。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段被用于在获自患者的生物样本中检测CGRP的存在，所述患者展现与CGRP和腹泻相关的疾病或病症的症状。CGRP的存在，或当与在可比较的生物样本中CGRP的疾病前水平相比(尤其在结肠中)其升高的水平，可以有利于诊断与腹泻相关的CGRP相关的疾病或病症。
本发明的另一个实施方案提供诊断或筛选测定法以有助于在展现本文鉴定的与CGRP相关的疾病或病症的症状的患者中诊断与CGRP相关的疾病或病症，包括使用翻译后修饰的抗CGRP抗体或其结合片段测定来自所述患者的生物样本中的CGRP表达水平。抗CGRP抗体或其结合片段可以被翻译后修饰以包括例如本公开中先前阐述的可检测部分。
生物样本中的CGRP水平如下确定：使用如本文所示的被修饰的抗CGRP抗体或其结合片段，并且将该生物样本中的CGRP水平与CGRP的标准水平(例如，正常生物样本中的水平)比较。熟练的临床医生将理解在正常生物样本之间可能存在一些可变性，并且当评估结果时可以将此考虑在内。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗CGRP抗体可用于将CGRP表达水平与癌发展的特定阶段相关联。本领域技术人员应能够测量众多受试者中的CGRP以确立对应于临床上定义的癌发展阶段的CGRP表达范围。这些范围将允许熟练的专业人员测量被诊断患有癌症的受试者中的CGRP并且将每一受试者中的水平与对应于所述癌症阶段的范围相关联。本领域技术人员应理解，通过测量患者中的CGRP在不同区间，可以确定癌症的进程。
上述测定法还可以用于监测疾病或病症，其中将在来自认为具有与CGRP相关的疾病或病症的患者的生物样本中获得的CGRP水平与来自同一患者的先前生物样本中的CGRP水平相比较，以确定所述患者中的CGRP水平是否已随着例如治疗方式而改变。
本发明还涉及一种体内成像方法，其检测表达CGRP的细胞的存在，该方法包括施用诊断有效量的诊断组合物。所述体内成像可用于检测或成像例如表达CGRP的肿瘤或转移瘤，并且可以用作用于设计有效的癌症治疗方案的计划方式的一部分。该治疗方案可包括例如放射、化学疗法、细胞因子疗法、基因治疗和抗体疗法中的一种或多种，以及抗CGRP抗体或其片段。
本发明进一步提供一种用于检测本发明的抗CGRP抗体与CGRP的结合的试剂盒。特别地，该试剂盒可用于检测可与本发明的抗CGRP抗体或其免疫反应性片段特异性反应的CGRP的存在。该试剂盒还可能包括结合于底物的抗体、可与抗原反应的二级抗体以及用于检测二级抗体与抗原的反应的试剂。此种试剂盒可为ELISA试剂盒并且可以包含底物、初级抗体和二级抗体(适当时)，以及任何其他必需的试剂如可检测部分、酶底物和显色试剂，例如如本文所述。诊断试剂盒还可以呈免疫印迹试剂盒形式。诊断试剂盒还可以呈化学发光试剂盒形式(Meso Scale Discovery,Gaithersburg,MD)。诊断试剂盒还可以是基于镧系元素的检测试剂盒(PerkinElmer,San Jose,CA)。
熟练的临床医生应理解，生物样本包括但不限于血清、血浆、尿液、唾液、粘液、胸膜液、滑液以及脊髓液。
改善或减少与CGRP相关的疾病和病症的症状、或者治疗或预防与CGRP相关的疾病和病症的方法
本文所述的抗CGRP抗体或其片段可用于改善或减少与CGRP相关的疾病和病症(尤其是腹泻)的症状，或者治疗或预防与CGRP相关的疾病和病症(尤其是腹泻)。在一个优选实施方案中，抗CGRP抗体或抗体片段应显示为有效的(在实施例8中公开的啮齿动物模型中阻止与过量循环CGRP相关的不良副作用(包括腹泻))。
本文所述的抗CGRP抗体或其片段以及组合还可以如下文更详细描述的药物组合物形式以治疗有效量施用于需要治疗与CGRP相关的疾病和病症的患者。
在本发明的另一个实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其片段可用于改善或减少CGRP相关病状中的腹泻的症状、或者治疗或预防CGRP相关病状中的腹泻，所述CGRP相关病状包括：偏头痛(有或无先兆)、体重减轻、癌症或肿瘤、与癌症或肿瘤生长相关的血管生成、与癌症或肿瘤存活相关的血管生成、疼痛、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、潮热、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛(例如与窦炎相关)以及过敏症诱发的头痛或偏头痛。
在本发明的一个实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其片段和/或与第二药剂一起可用于改善或减少与下列非限制性列表的CGRP相关疾病和病症相关的腹泻的症状、或者治疗或预防与下列非限制性列表的CGRP相关疾病和病症相关的腹泻：疼痛、炎性疼痛、手术后切口疼痛、复杂区域性疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤产生的疼痛、骨质疏松症、痛风性关节疼痛、腹痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其他伤害性疼痛，以及肝细胞癌、乳腺癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经性疼痛、伤害性疼痛、三叉神经痛、带状疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、经痛、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背痛、糖尿病性神经病变、坐骨神经痛，或与以下相关的疼痛或内脏疼痛：胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、激惹性结肠、痉挛性结肠、粘液性结肠炎、炎症性肠病、克罗恩病、回肠炎、溃疡性结肠炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎、月经期、分娩、更年期、前列腺炎、胰腺炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎(包括间质性膀胱炎(IC))、与肠梗阻相关的手术、憩室炎、腹膜炎、心包炎、肝炎、阑尾炎、结肠炎、胆囊炎、子宫内膜异位、慢性和/或急性胰腺炎、心肌梗塞、肾脏疼痛、胸膜疼痛、前列腺炎、骨盆痛、器官创伤、慢性伤害性疼痛、慢性神经性疼痛、慢性炎性疼痛、纤维肌痛、爆发性疼痛和持续性疼痛，以及起因于恶性疾病或癌症的癌症疼痛，该恶性疾病或癌症优选地选自以下一种或多种：腺组织中的腺癌、器官胚胎组织中的胚细胞瘤、上皮组织中的癌瘤、形成血细胞的组织中的白血病、淋巴组织中的淋巴瘤、骨髓组织中的骨髓瘤、结缔组织或支持组织中的肉瘤、肾上腺癌、AIDS相关淋巴瘤、贫血、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、类癌瘤、子宫颈癌、化学疗法、结肠癌、血细胞减少症、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、头癌、颈癌、肝胆管癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、何杰金病、淋巴瘤、非何杰金病、神经系统肿瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、骨癌、结缔组织肉瘤癌、骨组织癌、造血细胞癌、骨髓癌、多发性骨髓瘤、白血病、原发性或继发性骨癌、转移至骨骼的肿瘤、浸润神经和空腔脏器的肿瘤、接近神经结构的肿瘤。癌症疼痛更优选包括内脏疼痛，优选为起因于胰腺癌和/或腹部转移瘤的内脏疼痛。癌症疼痛更优选包括躯体疼痛，优选为由于骨癌、骨骼中的转移瘤、手术后疼痛、结缔组织肉瘤癌、骨组织癌、骨髓的造血细胞癌、多发性骨髓瘤、白血病、原发性或继发性骨癌中的一种或多种而造成的躯体疼痛。
在本发明的另一个实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其片段和/或与第二药剂一起可用于改善或减少下列非限制性列表的疾病和病症的症状、或者治疗或预防下列非限制性列表的疾病和病症：癌症或肿瘤、与癌症或肿瘤生长相关的血管生成、与癌症或肿瘤存活相关的血管生成。
在本发明的另一个实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其片段和/或与第二药剂一起可用于改善或减少下列非限制性列表的疾病和病症的症状、或者治疗或预防下列非限制性列表的疾病和病症：神经源性、神经性或伤害性疼痛。神经性疼痛可包括但不限于三叉神经痛、带状疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、经痛、卵巢痛、反射性交感神经营养不良以及神经源性疼痛。在其他优选实施方案中，骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背痛、糖尿病性神经病变、坐骨神经痛以及其他神经性疼痛。
在本发明的另一个实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其片段和/或与第二药剂一起可用于改善或减少下列非限制性列表的疾病和病症的症状、或者治疗或预防下列非限制性列表的疾病和病症：腹泻，以及与胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、炎症性肠病、克罗恩病、回肠炎、溃疡性结肠炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎、月经期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎相关的内脏疼痛。
施用
在本发明的一个实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合以接受受试者体重的约0.1与100.0mg/kg之间的浓度施用于受试者。在本发明的一个优选实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合以接受受试者体重的约0.4mg/kg的浓度施用于受试者。在本发明的一个优选实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合以如下频率施用于接受受试者：每26周或更短时间一次，例如每16周或更短时间一次、每8周或更短时间一次、每4周或更短时间一次、每两周或更短时间一次、每周或更短时间一次、或每天或更短时间一次。
Fab片段可每两周或更短时间一次、每周或更短时间一次、每天或更短时间一次、每天多次和/或每数小时一次施用。在本发明的一个实施方案中，患者每天接受0.1mg/kg至40mg/kg的Fab片段，以每天1至6次的分次剂量提供，或以持续释放形式提供，可有效获得所需结果。
应理解，施用于特定患者的抗体或Fab的浓度可能高于或低于上文在段落和中所示的示例性施用浓度。
本领域技术人员应能够通过常规实验确定有效剂量和施用频率，例如由本文公开内容和下列文献中的教义所指导：Goodman,L.S.,Gilman,A.,Brunton,L.L.,Lazo,J.S.和Parker,K.L.(2006).Goodman&Gilman's the pharmacological basis oftherapeutics.New York:McGraw-Hill；Howland,R.D.,Mycek,M.J.,Harvey,R.A.,Champe,P.C.和Mycek,M.J.(2006).Pharmacology.Lippincott's ill ustratedreviews.Philadelphia:Lippincott Williams&Wilkins；以及Golan,D.E.(2008).Principles of pharmacology:the pathophysiologic basis of drugtherapy.Philadelphia,Pa.,[等]:Lippincott Williams&Wilkins。
在本发明的另一个实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合以药物制剂形式施用于受试者。
“药物组合物”是指适合施用于哺乳动物的化学或生物学组合物。此类组合物可以特别地配制以用于通过众多途径中的一种或多种施用，包括但不限于经颊、表皮、硬膜外、吸入、动脉内、心脏内、脑室内、皮内、肌肉内、鼻内、眼内、腹膜内、脊柱内、鞘内、静脉内、经口、胃肠外、通过灌肠剂或栓剂经直肠、皮下(subcutaneous)、皮下(subdermal)、舌下、透皮以及透粘膜施用。此外，施用可以借助于注射、粉末、液体、凝胶、滴剂或其他施用手段发生。
在本发明的一个实施方案中，本文所述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合可任选地与一种或多种活性剂组合施用。此类活性剂包括止痛剂、抗组胺、退热剂、抗炎剂、抗生素、抗病毒剂以及抗细胞因子剂。活性剂包括下列激动剂、拮抗剂和调节剂：TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝细胞生长因子(HGF)、铁调素(Hepcidin)，包括针对任何上述的反应性抗体，以及针对任何其受体的反应性抗体。活性剂还包括但不限于2-芳基丙酸、乙酰氯芬酸、阿西美辛、乙酰水盐酸(阿司匹林)、阿氯芬酸、阿明洛芬、阿莫西品(Amoxiprin)、氨基安替比林(Ampyrone)、芳基链烷酸、阿扎丙酮、扑炎痛/贝诺酯、苯恶洛芬、溴芬酸、卡布洛芬、塞来考昔、水杨酸胆碱镁、氯非宗、COX-2抑制剂、右布洛芬、右酮洛芬、双氯芬酸、二氟尼柳、屈恶昔康、乙水杨胺、依托度酸、艾托考昔、菲斯胺(Faislamine)、芬那酸、芬布芬、非诺洛芬、氟芬那酸、氟诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、异丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、酮保泰松、酮洛芬、酮咯酸、氯诺昔康、氯索洛芬、罗美昔布、水杨酸镁、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、水杨酸甲酯、莫非保松、萘丁美酮、甲氧萘丙酸、N-芳基邻氨基苯甲酸、神经生长因子(NGF)、奥沙美辛、奥沙普秦、昔康类、羟保松、帕瑞考昔、非那宗、保泰松、保泰松、吡罗昔康、吡洛芬、普鲁芬、丙谷美辛、吡唑烷衍生物、罗非考昔、双水杨酸、水杨酰胺、水杨酸酯、P物质、磺吡酮、舒林酸、舒洛芬、替诺昔康、噻洛芬酸、托芬那酸、托美汀以及伐地考昔。
抗组胺可以为对抗组胺作用或对抗其从细胞(例如，肥大细胞)释放的任何化合物。抗组胺包括但不限于阿伐斯汀、阿司咪唑、阿扎他定、氮卓斯汀、贝托斯汀(betatastine)、溴苯那敏、布克利嗪、西替利嗪、西替利嗪类似物、扑尔敏、氯马斯汀、CS560、赛庚啶、地氯雷他定、右氯苯那敏、依巴斯汀、依匹斯汀、非索非那定、HSR 609、羟嗪、左卡巴斯汀、氯雷他定、甲基东莨菪碱、咪唑斯汀、诺司咪唑、苯茚胺、异丙嗪、吡拉明、特非那定以及曲尼司特。
抗生素包括但不限于丁胺卡那霉素、氨基糖苷类、阿莫西林、氨苄青霉素、安沙霉素类、胂凡纳明、阿奇霉素、阿洛西林、氨曲南、杆菌肽、碳头孢烯、碳青霉烯类、羧苄青霉素、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢噻吩(Cefalothin)、头孢噻吩(Cefalotin)、头孢孟多、头孢唑林、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡肟、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢他啶、头孢布坦、头孢唑肟、头孢吡普、头孢曲松、头孢呋辛、头孢菌素类、氯霉素、西司他丁、环丙沙星、克拉霉素、克林霉素、氯唑西林、粘菌素、复方新诺明(Co-trimoxazole)、达福普汀、地美环素、双氯青霉素、地红霉素、多利培南、强力霉素、依诺沙星、厄他培南(Ertapenem)、红霉素、乙胺丁醇、氟氯西林、磷霉素、呋喃唑酮、夫西地酸、加替沙星、格尔德霉素、庆大霉素、糖肽类、除莠霉素、亚胺培南、异烟肼、卡那霉素、左氧氟沙星、林肯霉素、利奈唑胺、洛米沙星、氯拉卡比、大环内酯类、磺胺米隆、美罗培南、甲氧西林、甲硝哒唑、美洛西林、米诺环素、单环内酰胺类、莫西沙星、莫匹罗星、萘夫西林、新霉素、奈替米星、硝基呋喃妥因、诺氟沙星、氧氟沙星、苯唑西林、土霉素、巴龙霉素、青霉素、青霉素类、哌拉西林、平板霉素(Platensimycin)、多粘菌素B、多肽、百浪多息(Prontosil)、吡嗪酰胺、喹诺酮、奎奴普丁、利福平(Rifampicin)、利福平(Rifampin)、罗红霉素、大观霉素、链霉素、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、磺胺二甲异噁唑(Sulfanilimide)、柳氮磺胺吡啶、磺胺异噁唑(Sulfisoxazole)、磺胺类、替考拉宁、泰利霉素、四环素、四环素类、替卡西林、替硝唑、妥布霉素、甲氧苄氨嘧啶、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲噁唑、醋竹桃霉素、曲伐沙星以及万古霉素。
活性剂还包括醛固酮、倍氯米松、倍他米松、皮质类固醇、氢化皮质醇、醋酸可的松、醋酸脱氧皮质酮、地塞米松、醋酸氟氢可的松、糖皮质激素类、氢化可的松(Hydrocortisone)、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松、类固醇以及曲安西龙。还涵盖这些活性剂的任何合适的组合。
“药物赋形剂”或“药学上可接受的赋形剂”为载体，通常为液体，在其中配制活性治疗剂。在本发明的一个实施方案中，活性治疗剂为本文所述的人源化抗体，或其一种或多种片段。赋形剂通常不向制剂提供任何药理学活性，但其可能提供化学和/或生物稳定性，以及释放特性。示例性的制剂可以见于例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第19版,Grennaro,A.编,1995，其以引用的方式并入。
如本文所用的“药学上可接受的载体”或“赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂，其为生理学上相容的。在一个实施方案中，载体适合胃肠外施用。可选地，载体可以适合于静脉内、腹膜内、肌肉内或舌下施用。药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散液和无菌粉末以用于临时制备无菌注射溶液或分散液。对于药学上的活性物质使用此类介质和试剂在本领域是众所周知的。除非任何常规介质或试剂与该活性化合物不相容，否则涵盖其在本发明的药物组合物中的使用。补充性活性化合物也可以并入组合物中。
药物组合物典型地在制造和储存条件下必需是无菌和稳定的。本发明涵盖药物组合物以冻干形式存在。该组合物可以配制成溶液、微溶液、脂质体或适合高药物浓度的其他有序结构。载体可以为溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)，以及其合适的混合物。本发明进一步涵盖在药物组合物中包括稳定剂。可以例如通过在分散液的情况下维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。
在许多情况下，在组合物中优选包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇、或氯化钠。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂、例如单硬脂酸盐和明胶而产生可注射组合物的延长吸收。此外，碱性多肽可以配制在缓释制剂中，例如在包括缓释聚合物的组合物中。活性化合物可以与将保护化合物免于快速释放的载体一起制备，例如受控释放的制剂，包括植入物和微囊封递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯-醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯、聚乳酸以及聚乳酸、聚乙醇酸共聚物(PLG)。本领域技术人员已知用于制备此类制剂的许多方法。
对于每一所述实施方案，化合物可以通过各种剂型施用。涵盖本领域技术人员已知的任何生物学上可接受的剂型及其组合。此类剂型的例子包括但不限于可复原粉剂、酏剂、液体、溶液、混悬剂、乳剂、粉剂、颗粒剂、粒剂、微粒剂、可分散颗粒剂、扁囊剂、吸入剂、气溶胶吸入剂、贴剂、粒子吸入剂、植入剂、贮库式植入剂、注射剂(包括皮下、肌肉内、静脉内以及皮内)、输液以及其组合。
各种举例说明的本发明实施方案的上述描述并不意欲为详尽的或将本发明局限于所公开的精确形式。尽管本发明的具体实施方案和实施例在本文描述以用于举例说明目的，但各种等效的修改形式可能在本发明的范围内，这将被相关领域技术人员所承认。除了上述实施例之外，本发明于此提供的教义可以应用于其他目的。
根据上文详细描述，可以对本发明作出这些和其他变化。一般来说，在下列权利要求书中，所用术语不应被理解为将本发明局限于本说明书和权利要求书中所公开的具体实施方案。因此，本发明不受公开内容所限制，而是通过下列权利要求书完全地确定本发明的范围。
本发明可以除了在以上描述和实施例中特别描述的那些之外的方式实施。根据上述教义，本发明的许多修改和变化是可能的，并且因此在所附权利要求书的范围内。
与用于获得抗原特异性B细胞的克隆群体的方法相关的特定教义公开于2006年5月19日提交的美国临时专利申请no.60/801,412中，其公开内容以全文引入的方式并入本文中。
与兔源单克隆抗体的人源化和为保持抗原结合亲和力的优选序列修饰有关的特定教义公开于2008年5月21日提交的国际申请No.PCT/US2008/064421，对应于国际公开No.WO/2008/144757，名称为“新颖的兔抗体人源化方法以及人源化兔抗体(Novel RabbitAntibody Humanization Methods and Humanized Rabbit Antibodies)”，其公开内容以全文引入的方式并入本文中。
与使用交配感受态酵母和相应方法产生抗体或其片段有关的特定教义公开于2006年5月8日提交的美国专利申请no.11/429,053(美国专利申请公开No.US2006/0270045)，其公开内容以全文引入的方式并入本文中。
特定的CGRP抗体多核苷酸和多肽公开于本专利申请文档所附的序列表中，并且所述序列表的公开内容以全文引入的方式并入本文中。
在发明背景、详细说明和实施例中引用的各文件(包括专利、专利申请、期刊文献、摘要、手册、书籍或其他公开)的全部公开内容以全文引入的方式并入本文中。
提出以下实施例以向本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开和描述，并且并不意欲限制本发明的范围。关于所用数值(例如量、温度、浓度等)已经付出努力来确保精确度，但是应该容许一些实验误差和偏差。除非另外指出，否则份为重量份，分子量为平均分子量，温度是以摄氏度计；以及压力为大气压或接近大气压。
实施例
实施例1结合CGRP的抗体的制备
通过使用本文所述的抗体选择方案，可产生广泛多种抗体。
免疫策略
用人类CGRPα(American Peptides,Sunnyvale CA和Bachem,Torrance CA)使兔免疫。免疫由以下组成：第一次皮下(sc)注射100μg抗原与100μg KLH于完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant，CFA)(Sigma)中的混合物，接着两次加强免疫，间隔两周，各包含50μg抗原与50μg于不完全弗氏佐剂(incomplete Freund's adjuvant，IFA)(Sigma)中的混合物。在第55天对动物放血，并且通过ELISA(抗原识别)和通过抑制SK-N-MC中CGRP驱动的cAMP增加来确定血清效价。
抗体选择效价评估
为了鉴定和表征结合于人类CGRPα的抗体，通过ELISA测试含抗体的溶液。简言之，用在ELISA缓冲液(于PBS中的0.5％鱼皮明胶，pH 7.4)中稀释的N端生物素化人类CGRPα(每孔50μL，1μg/mL)涂布被中性亲和素(neutravidin)涂布的培养板(Thermo Scientific)，大约在室温下1小时或可选地在4℃下过夜。然后所述培养板在室温下用ELISA缓冲液进一步封闭一小时并使用洗涤缓冲液(PBS，0.05％tween 20)洗涤。使用ELISA缓冲液连续稀释所测试的血清样本。将50微升的稀释血清样本转移至孔上并在室温下温育一小时。这次温育后，用洗涤缓冲液洗涤培养板。为了显色，将抗兔特异性Fc-HRP(于ELISA缓冲液中的1:5000稀释液)添加至孔上并在室温下温育45分钟。用洗涤溶液进行3次洗涤步骤后，使用TMB底物使培养板在室温下显色两分钟并且使用0.5M HCl淬灭反应。在450nm下读取孔吸光度。
通过功能活性(对CGRP驱动的cAMP水平的抑制作用)进行血清样本的效价测定
为了鉴定和表征具有功能活性的抗体，使用电化学发光(Meso Scale Discovery,MSD)进行对CGRP驱动的cAMP水平增加的抑制作用的测定法。简言之，在96孔圆底聚苯乙烯板(Costar)中在MSD测定缓冲液(Hepes，MgCl2，pH 7.3，1mg/mL封闭剂A，Meso ScaleDiscovery)中连续稀释待测试的抗体制剂。向这个板中添加于MSD测定缓冲液中稀释的人类CGRPα(10ng/mL最终浓度)并在37℃下温育一小时。按照测定试剂盒制造商所建议使用适当的对照物。使用EDTA溶液(5mM，于PBS中)分离人类神经上皮瘤细胞(SK-N-MC,ATCC)并且通过离心使用生长培养基(MEM、10％FBS、抗生素)洗涤。在测定缓冲液中将细胞数目调节至每毫升2百万个细胞，并且在即将将细胞装载到cAMP测定板上之前添加IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，Sigma)至最终浓度为0.2mM。在抗体人类CGRPα溶液被温育一小时后，将20微升含细胞的溶液转移至cAMP测定板。在适当对照物下一式两份地操作所有测试样本。将10微升细胞添加至孔并且在室温下在振荡下将板温育30分钟。在细胞与CGRP溶液一起温育的同时，通过制得被TAG标记的cAMP(MSD)于溶解缓冲液(MSD)中的1:200溶液来制备停止溶液。为停止细胞-CGRP温育，添加20微升停止溶液至细胞并且在室温下在振荡下将板温育一小时。用水将读取缓冲液(MSD)稀释四次并且添加100微升至板上的所有孔。然后使用Sector成像仪2400(MSD)读取板并且使用Prism软件进行数据拟合和IC50测定。
组织采集
一旦确定可接受的效价，就将兔处死。采集脾脏、淋巴结以及全血并且如下处理：
通过解离组织并且用20cc注射器的柱塞推动穿过70μm无菌丝网(Fisher)将脾脏和淋巴结加工成单细胞悬浮液。将细胞收集于PBS中。通过离心洗涤细胞两次。在最后洗涤后，利用台盼蓝测定细胞密度。细胞在1500rpm下离心10分钟；弃去上清液。将细胞再次悬浮在适当体积的含10％二甲亚砜(DMSO，Sigma)的FBS(Hyclone)溶液中并以每小瓶1ml分配。小瓶在慢速冷冻室中在-70℃下储存24小时，然后储存于液氮中。
通过将全血与相等份的上述不含FBS的低葡萄糖培养基混合来分离外周血单核细胞(PBMC)。将35ml全血混合物小心地层压在45ml锥形管(Corning)中8ml兔淋巴细胞(Cedarlane)上并且在室温下在2500rpm下不间断地离心30分钟。在离心后，使用玻璃巴斯德吸管(VWR)小心地移去PBMC层，组合，并放置在洁净的50ml小瓶中。通过在室温下在1500rpm下离心10分钟用上述改性培养基洗涤细胞两次，并且通过台盼蓝染色测定细胞密度。在最后洗涤后，将细胞再次悬浮在适当体积的10％DMSO/FBS培养基中并且如上所述冷冻。
B细胞选择、富集以及培养条件
在设立B细胞培养当天，将PBMC、脾细胞或淋巴结小瓶解冻供使用。从LN2槽中移出小瓶并放置在37℃水浴中直到解冻。将小瓶内含物转移至15ml圆锥形离心管(Corning)中并且将10ml上述改性RPMI缓慢添加至管中。使细胞在2K RPM下离心5分钟，并且弃去上清液。将细胞再次悬浮在10ml新鲜培养基中。利用台盼蓝测定细胞密度和活力。
a)下列方案用于Ab1和Ab13
如下将细胞与生物素化人类CGRPα预混合。再次洗涤细胞并且以1E07个细胞/80μL培养基的密度再次悬浮。以5ug/mL的最终浓度将生物素化人类CGRPα添加至细胞悬浮液并在4℃下温育30分钟。使用PBF[不含Ca/Mg的PBS(Hyclone)、2mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma，不含生物素)]进行两次10ml洗涤，去除未结合的生物素化人类CGRPα。在第二次洗涤后，将细胞以1E07个细胞/80μl PBF的密度再次悬浮并且向细胞悬浮液添加每10E7个细胞20μl的链霉亲和素珠粒(Miltenyi Biotech,Auburn CA)。将细胞和珠粒在4℃下温育15分钟并且用2ml PBF/10E7个细胞洗涤一次。
b)下列方案用于Ab4、Ab7、Ab9以及Ab11：
如下将生物素化人类CGRPα预先装载至链霉亲和素珠粒上。将75微升的链霉亲和素珠粒(Milteny Biotec,Auburn CA)与N端生物素化huCGRPα(10ug/ml最终浓度)和300ulPBF混合。将这种混合物在4℃下温育30分钟并且使用分离柱(Miltenyi Biotec，用1ml冲洗以去除未结合的物质)去除未结合的生物素化人类CGRPα。然后倒出物质，用于将来自上述的细胞再次悬浮于100ul/1E7个细胞中，然后将混合物在4℃下温育30分钟并用10ml PBF洗涤一次。
对于a)和b)方案，下列适用：在洗涤后，将细胞再次悬浮于500μl PBF中并静置。在磁性架(Milteni)上用500ml PBF预先冲洗M MS柱(Miltenyi Biotec,Auburn CA)。细胞悬浮液通过预滤器施加于柱，并且收集未结合的部分。用2.5ml PBF缓冲液洗涤柱。从磁性架移开柱并放置在洁净无菌的1.5ml eppendorf管上。将1ml PBF缓冲液添加至柱顶部，并且收集阳性选择细胞。通过台盼蓝染色测定阳性细胞部分的产率和活力。阳性选择得到起始细胞浓度的1％的平均值。
建立试验细胞筛选以提供关于培养物接种水平的信息。培养板以10、25、50、100或200个富集B细胞/孔的密度接种。另外，各孔在250微升/孔的最终体积下在高葡萄糖改性RPMI培养基中包含50K细胞/孔的被照射过的EL-4.B5细胞(5,000拉德)和适当水平的活化兔T细胞上清液(参见美国专利申请公开No.20070269868)(根据制剂而定范围为1-5％)。培养物在37℃下在4％CO2中温育5至7天。
通过抗原识别(ELISA)进行B细胞培养筛选
为了鉴定产生抗人类CGRPα抗体的孔，在下列改变情况下使用与关于通过抗原识别(ELISA)对血清样本进行效价测定所述相同的方案。简言之，用N端生物素化人类CGRPα与C端生物素化人类CGRPα的混合物(每孔50μL，各自1μg/mL)涂布被中性亲和素涂布的培养板。在无先前稀释的情况下测试B细胞上清液样本(50μL)。
使用CGRP驱动的cAMP产生鉴定B细胞上清液中的功能活性
为了测定B细胞上清液中所含的功能活性，在下列修改情况下使用与关于血清样本的功能效价测定所述类似的程序。简言之，使用B细胞上清液(20μL)代替被稀释的多克隆血清样本。
抗原特异性B细胞的分离
将含有所关注孔的培养板从-70℃移出，并且使用五次每孔200微升培养基(10％RPMI完全、55μM BME)的洗涤回收每个孔的细胞。通过离心使所回收的细胞形成球粒并且小心地去除上清液。将球粒细胞再次悬浮在100μl培养基中。为了鉴定表达抗体的细胞，用N端生物素化人类CGRPα与C端生物素化人类CGRPα的组合涂布被链霉亲和素涂布的磁性珠粒(M280dynabeads,Invitrogen)。通过连续稀释优化单独的生物素化人类CGRPα批次。然后将包含约4×10E7个涂布珠粒的100微升物质与再次悬浮的细胞混合。向这种混合物中添加以1:100稀释于培养基中的15微升的山羊抗兔H&L IgG-FITC(Jackson Immunoresearch)。
移出20微升的细胞/珠粒/抗兔H&L悬浮液并且将5微升小液滴分配在先前用Sigmacote(Sigma)处理过的单孔载玻片上，每个载玻片总共35至40个小液滴。使用石蜡油(JT Baker)的非渗透性阻挡层浸没小液滴，并且使载玻片在4％CO2温育箱中在黑暗中在37℃下温育90分钟。
可以通过抗体分泌产生的环绕荧光环，识别珠粒缔合的生物素化抗原以及通过荧光-IgG检测试剂进行后续检测来鉴定产生抗体的特异性B细胞。一旦鉴定出所关注的细胞，就可通过微型操纵器(Eppendorf)将其回收。将合成并输出抗体的单细胞转移至微量离心管中，使用干冰冷冻并储存在-70℃下。
来自抗原特异性B细胞的抗体序列的扩增和序列测定
使用基于组合RT-PCR的方法从单个分离的B细胞回收抗体序列。含有限制酶的引物被设计用来在目标免疫球蛋白基因(重链和轻链)如兔免疫球蛋白序列的保守区和恒定区中粘接，并且使用两步巢式PCR回收来扩增抗体序列。对来自每个孔的扩增子分析回收率和尺寸完整性。然后用AluI消化所得片段以指纹识别序列克隆性。相同的序列在其电泳分析中显示共同的裂解模式。然后使用PCR引物内所含的限制酶位点消化原始重链和轻链扩增子片段并克隆到表达载体中。将包含亚克隆DNA片段的载体扩增并纯化。在表达之前检验亚克隆重链和轻链的序列。
具有所需抗原特异性和/或功能特性的单克隆抗体的重组产生
为了测定从特异性B细胞回收的抗体的抗原特异性和功能特性，将驱动所需成对重链和轻链序列的表达的载体转染到HEK-293细胞中。
通过ELISA进行重组抗体的抗原识别
为了表征重组表达的抗体结合于人类CGRPα的能力，通过ELISA测试含抗体的溶液。所有温育都在室温下进行。简言之，用含CGRPα的溶液(1ut/mL，于PBS中)涂布ImmulonIV培养板(Thermo Scientific)持续2小时。然后用洗涤缓冲液(PBS、0.05％Tween-20)将被CGRPα涂布的培养板洗涤三次。然后使用封闭液(PBS、0.5％鱼皮明胶、0.05％Tween-20)封闭培养板约一小时。然后移去封闭液并且然后用所测试抗体的连续稀释液将培养板温育约一小时。在此温育结束时，用洗涤缓冲液洗涤培养板三次并且用含二级抗体的溶液(过氧化物酶缀合的亲和纯F(ab')2片段山羊抗人类IgG，Fc片段特异性(JacksonImmunoresearch))进一步温育约45分钟并洗涤三次。此时将底物溶液(TMB过氧化物酶底物，BioFx)在黑暗中温育3至5分钟。通过添加含HCl的溶液(0.5M)停止反应并且在板读取器中在450nm下读取板。
结果：图15-18显示抗CGRP抗体Ab1-Ab14结合于CGRPα并识别CGRPα。
通过调节CGRP驱动的细胞内cAMP水平和对大鼠的交叉反应性对重组抗体进行功 能表征
为了表征重组表达的抗体抑制CGRPα介导的cAMP测定细胞水平增加的能力，使用电化学发光测定试剂盒(Meso Scale Discovery,MSD)。简言之，在96孔圆底聚苯乙烯培养板(Costar)中用MSD测定缓冲液(Hepes，MgCl2，pH 7.3，1mg/mL封闭剂A，Meso ScaleDiscovery)连续稀释待测试的抗体制剂。向这个培养板中添加以MSD测定缓冲液稀释的人类CGRPα(25ng/mL最终浓度)并在37℃下温育一小时。按照测定试剂盒制造商所建议使用适当的对照物。使用EDTA溶液(5mM)分离人类神经上皮瘤细胞(SK-N-MC，ATCC)并通过离心使用生长培养基(MEM、10％FBS、抗生素)洗涤。在测定缓冲液中将细胞数目调节至每毫升2百万个细胞，并且在即将将细胞装载到cAMP测定板上之前添加IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，50mM Sigma)至最终浓度为0.2mM。将抗体人类CGRPα溶液温育一小时，然后将20微升的含细胞的溶液转移至cAMP测定板。在适当对照物下一式两份地操作所有测试样本。将10微升细胞添加至孔并且在振荡下将板温育30分钟。在细胞与CGRP溶液一起温育的同时，通过制得被TAG标记的cAMP(MSD)于溶解缓冲液(MSD)中的1:200溶液来制备停止溶液。为停止细胞-CGRP温育，添加20微升停止溶液至细胞并且在振荡下将板温育一小时。用水将读取缓冲液(MSD)稀释四次并且添加100微升至板上的所有孔。然后使用Sector成像仪2400(MSD)读取板并且使用Prism软件进行数据拟合和IC50测定。
为了测试重组抗体拮抗人类CGRPβ的能力，用CGRP激动剂(CGRPβ10ng/mL最终浓度)代替进行类似的测定法。使用大鼠CGRP(5ng/mL最终浓度)和大鼠L6细胞系(ATCC)对重组抗体识别并抑制大鼠CGRP介导的cAMP产生进行评估。
结果：图19-37显示抗CGRP抗体Ab1-Ab14抑制CGRPα、CGRPβ，以及大鼠CGRP介导的cAMP细胞水平增加。
实施例2：Fab片段的酶促产生
按照制造商的说明使用固定化木瓜蛋白酶(Thermo/Pierce)进行木瓜蛋白酶消化。简言之，纯化抗体与固定化木瓜蛋白酶一起在含半胱氨酸/HCl的缓冲液中在37℃下在轻微摇动下温育。通过取出等分试样并使用SDS-PAGE分析重链的裂解来监测消化。为停止反应，离心旋出固定化木瓜蛋白酶并且使用50mM Tris pH 7.5洗涤并过滤。通过使用MabSelectSure(GE)柱去除未消化的全长抗体和Fc片段。
实施例3酵母细胞表达
用于重链和轻链的巴斯德毕赤酵母表达载体的构建
商业合成人源化轻链和重链片段并亚克隆到pGAP表达载体中。该pGAP表达载体使用GAP启动子来驱动免疫球蛋白链和人类血清白蛋白(HSA)前导序列的表达以供输出。另外，这种载体包含常见元件如细菌复制起点，和卡那霉素抗性基因的拷贝，该卡那霉素抗性基因在巴斯德毕赤酵母中赋予对抗生素G418的抗性。G418为包含整合到其基因组中的所需表达载体的菌株提供选择手段。
表达载体转化到巴斯德毕赤酵母的单倍体met1和lys3宿主菌株中
如毕赤酵母方案(Methods in Molecular Biology Higgings,DR和Cregg,JM编,1998.Humana Press,Totowa,NJ)中所述进行用于转化单倍体巴斯德毕赤酵母菌株和操纵巴斯德毕赤酵母性周期的所有方法。在转化之前，每一载体在GAP启动子序列内线性化以引导载体整合到巴斯德毕赤酵母基因组的GAP启动子基因座中。使用电穿孔转染单倍体菌株并且在YPDS(酵母提取物，含山梨醇的胨右旋糖)G418琼脂板上选择成功的转化株。通过蛋白质印迹分析(Southern blot analysis)对单倍体菌株测定重链和轻链基因的拷贝数。单倍体菌株随后交配并针对其在氨基酸标记物(即，Lys和Met)不存在的情况下生长的能力进行选择。随后对所得二倍体克隆物进行最终蛋白质印迹分析以确定重链和轻链基因的拷贝数。使用监测表达的生物层干涉蛋白A生物传感器(Octet,ForteBio)来选择表达所关注抗体的克隆物。
实施例4 Ab3、Ab6以及Ab14在巴斯德毕赤酵母中的表达
制备用于表达全长抗体的三个毕赤酵母菌株。对于所有表达全长抗体的菌株，产生单倍体菌株并且随后交配。一个单倍体菌株表达全长轻链序列并且另一个单倍体菌株表达全长重链序列。使用每一个二倍体菌株来产生研究细胞库并用于在生物反应器中表达。
首先使用研究细胞库利用由以下营养物(％w/v)组成的培养基扩增接种物：酵母提取物3％、无水右旋糖4％、YNB 1.34％、生物素0.004％以及100mM磷酸钾。为了产生用于发酵罐的接种物，在振荡温育箱中在30℃和300rpm下使细胞库扩增约24小时。然后将10％接种物添加至包含1L无菌生长培养基的Labfors 2.5L工作体积容器。该生长培养基由以下营养物组成：硫酸钾18.2g/L、磷酸二氢铵36.4g/L、磷酸氢二钾12.8g/L、七水合硫酸镁3.72g/L、二水合柠檬酸钠10g/L、甘油40g/L、酵母提取物30g/L、PTM1痕量金属4.35mL/L以及消泡剂204 1.67mL/L。PTM1痕量金属溶液包括以下成分：五水合硫酸铜6g/L、碘化钠0.08g/L、水合硫酸锰3g/L、二水合钼酸钠0.2g/L、硼酸0.02g/L、氯化钴0.5g/L、氯化锌20g/L、七水合硫酸亚铁65g/L、生物素0.2g/L以及硫酸5mL/L。
生物反应器过程控制参数设定如下：搅拌1000rpm，气流1.35标准升/分钟，温度28℃并且使用氢氧化铵将pH控制为6。不提供氧气补充。
使发酵培养物生长约12至16小时直到初始甘油被消耗完，如由溶解氧尖峰所指示。在溶解氧尖峰之后使培养物饥饿约三小时。这个饥饿期之后，向反应器中添加乙醇大剂量添加物以达到1％乙醇(w/v)。使发酵培养物平衡15至30分钟。在乙醇大剂量添加后30分钟起始进料添加并且设定为恒定速率1mL/min，持续40分钟，然后通过乙醇传感器控制进料泵，使用乙醇传感探头(Raven Biotech)对于剩余操作保持乙醇浓度为1％。进料由以下成分组成：酵母提取物50g/L、右旋糖500g/L、七水合硫酸镁3g/L以及PTM1痕量金属12mL/L。对于全长Ab6和Ab14的发酵，还向进料中添加二水合柠檬酸钠(0.5g/L)。总发酵时间为约90小时。
实施例5人源化抗体的方法
人源化抗体的方法先前已描述于颁予的美国专利No.7935340中，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。在一些情况下，有必要确定是否需要另外的兔框架残基来维持活性。在一些情况下，人源化抗体仍需要保留一些关键的兔框架残基以将亲和力或活性的损失降至最小。在这些情况下，有必要将来自人类生殖系序列的单个或多个框架氨基酸再变回原始兔氨基酸以具有所需活性。这些改变是通过实验方法测定以鉴定哪些兔残基为保持亲和力和活性所必需。现在这是可变重链和轻链人源化氨基酸序列的目标。
实施例6对CGRP与其细胞受体结合的抑制作用
为了表征重组表达的抗体抑制CGRP与其细胞受体结合的能力，如先前所述进行放射性配体-结合测定法[Elshourbagy等人,Endocrinology 139:1678(1998)；Zimmerman等人,Peptides,16:421(1995)]。使用重组人类CGRP受体、降钙素受体样受体以及RAMP1的膜制剂(Chemiscreen,Millipore)。抗体稀释液与被125I放射性标记的人类CGRPα(0.03nM)一起在室温下预温育30分钟。在0.1uM人类CGRPα存在下估算非特异性结合。将膜过滤并洗涤。然后对过滤器进行计数以测定特异性结合的被125I放射性标记的人类CGRPα。结果：图38显示抗CGRP抗体Ab1-Ab13抑制CGRP与其细胞受体的结合。
实施例7大鼠中抗CGRP抗体对神经源性血管舒张的抑制作用
CGRP为有效的血管舒张剂(Nature 313:54-56(1985)；和BrJ.Clin.Pharmacol.26(6):691-5.(1988))。使用非侵袭性地测量CGRP受体拮抗剂活性的药效测定法来表征抗CGRP抗体。模型依赖于在局部施用辣椒素溶液之后使用激光多普勒成像所测量的皮肤血流量的变化。辣椒素活化瞬时受体电位香草素1型受体(TRPV-1)，通过包括CGRP和P物质在内的血管活性介体的局部释放而产生神经源性炎症和血管舒张(Br.J.Pharmacol.110:772-776(1993))。
在血管舒张测定法之前的当天，通过IP(腹膜内)向动物给予测试剂或对照物。在给药后，在动物背侧的下背区域中约2×6cm的面积中对动物刮剃除毛。然后使动物返回到其笼中过夜。在测试当天，给药后约24小时，用异氟烷气体将动物麻醉并且放置在温度受控的加热垫上并配备鼻锥以连续递送异氟烷。使用激光多普勒成像仪来观察血管舒张。将通过633nm氦-氖激光器产生的相干红光束导向长方形(2×6cm)剃毛区，并且以中等分辨率模式扫描。首先获得基线多普勒扫描并且通过鉴定两个类似的低通量区域来预定O形环放置的位置。将两个橡胶O形环(直径约1cm)放置在所选区域中并且进行基线扫描。在扫描完成之后，立即在两个O形环的每一者内施用含1mg辣椒素的5μL乙醇:丙酮溶液(1:1)。在施用辣椒素后的2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、22.5、25、27.5以及30分钟时重复多普勒扫描。将两个O形环的每一者内基线平均通量的变化百分比绘制为由于辣椒素所致的血管舒张的结果。
为了测试重组表达的抗体抑制CGRP与其细胞受体结合的能力，如先前所述进行放射性配体-结合测定法。
结果：图39和图40显示在施用辣椒素后抗CGRP抗体Ab3和Ab6在这个模型中降低了血管舒张。
实施例8抗CGRP抗体在两个小鼠品系(Nestin/人类RAMP1转基因小鼠和C57BL/6J小鼠)中阻止CGRP诱发的腹泻的用途
CGRP抗体可以用于预防或治疗CGRP诱发的腹泻的初始发现是基于关于CGRP抗体对CGRP诱发的畏光或厌光的影响的研究。这得以实现是由于偏头痛的一个特点是畏光或对光的敏感性增加[Mulleners等人,Headache 41:31-39(2001)；Recober等人,J.Neuroscience 29:8798:8804(2009)]。还已知偏头痛患者而不是非偏头痛患者对CGRP诱发的头痛敏感[综述于Neurology 22:241-246(2009)中]。CGRP结合于被称为CLR(降钙素样受体)的G蛋白偶联受体，该受体伴随着受体活性修饰蛋白1(RAMP1)起作用来介导CGRP结合和信号传导。在体外，CGRP的活性通过CGRP受体的RAMP1亚单元的过度表达而强烈增强[(J.Neurosci.27:2693-2703(2007)]。为研究小鼠中的厌光行为，开发了nestin/人类RAMP1转基因小鼠模型[Recober等人,J.Neuroscience 29:8798-8804(2009)；Russo等人,Mol.Cell.Pharmacol.,1:264-270(2009)]。这些小鼠当暴露于CGRP时呈现出与偏头痛相关的症状，特别是厌光(同上)。下文详述这种方案。
厌光方案
为了测试抗CGRP抗体阻止CGRP诱发的畏光的能力，将小鼠以每笼2-5只的群组在标准条件下在12小时光照循环(在0500CST/0600CDT时开灯并且在1700CST/1800CDT时关灯)下圈养并且可随意取食水和食物。研究中所用的小鼠包括于包含两个转基因等位基因Tg(Nes-cre)1Kln/J和Tg(RAMP1)等位基因的基因型Nestin/hRAMP1的小鼠集群(B6；SJL-Tg(Nes-cre)1Kln Tg(RAMP1))中。通过在B6基因背景上进行涉及获自The JacksonLaboratory的小鼠(库存号003771)的杂交而在这些小鼠中引入Nes-cre。
方案中所用的对照小鼠为非转基因或含有转基因nestin-cre或Cx1-GFP-hRAMP1的单一转基因(不表达hRAMP1)的同窝出生仔畜。通过在屏障设施中使CX1-GFP-hRAMP1小鼠与非转基因同窝出生仔畜回交来维持库存集群。对于行为研究，通过使CX1-GFP-hRAMP1单一转基因与nestin-cre小鼠在无屏障设施中杂交来维持集群。所有这些小鼠都由爱荷华大学动物管理和使用委员会(University of Iowa Animal Care and Use Committee)批准的动物管理和程序进行管理并且进一步依据国立卫生研究院(National Institutes ofHealth)设立的标准来执行。
这个方案中所用的材料和设备包括光照/黑暗箱和测试室，该测试室包括包含16个光束红外阵列(Med Associates Inc.,St.Albans,VT)的有机玻璃旷场(27×27×20.3cm)。通过对可见光不透明的深色插入物将光照/黑暗箱分成两个相等尺寸的区域。该深色插入物中存在一个允许小鼠在两个区域之间自由移动的开口(5.2×6.8cm)。将这个测试室放置在具有通风扇的隔音箱(56×38×36cm)(Med Associates Inc.)内部。整个系统有六个室，该系统与包含用于记录和数据收集的软件的计算机(Med Associates Inc.)整合在一起。
用于监测结果的软件为Activity Monitor 6.02版(Med Associates Inc.)。用于记录的软件设定包括：分辨率(毫秒)：50，箱尺寸：3，休眠延时(毫秒)：500，动态触发：3，对话类型：C，对话时间(分钟)：20，区块间隔(秒)：300，以及压缩文件：DEFAULT.ZIP。
在该方案中，用于各室的光源为LED面板，其被安装在隔音箱的顶棚上。该LED面板包含36个准直的1瓦LED灯泡(5500k日光白)(LEDwholesalers,Burlingame,CA)。为了控制光强度，将每一个LED面板连接至可调光LED驱动器(LINEARdrive；eldoLED America Inc.,San Jose,CA)，使得光强度的可能范围为约300至27,000勒克斯。除非另外说明，否则标准光强度为约1000-1200勒克斯。
所用注射器为通过将经拆下的30规格x1/2”针插入非不透射线的聚乙烯管状物(内径.38mm；外径1.09mm)中而手工制作的。使用上述管状物，将一个塞子(长度为约1cm)放置在该针的上方，留下约2.5mm的斜面未被覆盖。将这些注射器连接到一个10μL Hamilton针筒。
向小鼠ICV注射被稀释在杜尔贝克磷酸盐缓冲盐水(Dulbecco phosphate-buffered saline，D-PBS)(Hyclone)中的大鼠α-CGRP(Sigma)。总递送剂量为0.5nmol。例如，将250或500μg CGRP稀释在250或500μL无菌PBS中使最终浓度为1μg/μL。将CGRP储存在-20℃并且等分试样至多一次被冷冻-解冻。将PBS储存在4℃。
向小鼠施用本文公开的示例性抗CGRP抗体(Ab3)，其在施用之前储存在4℃。在这个方案中，在抗体施用之前，即在测试之前约24小时，将小鼠称重，然后接受以下任一者的全身性(腹膜内(ip))注射：媒介物、对照抗体(抗地高辛抗体)、或剂量为30mg/kg的CGRP结合抗体。还对小鼠进行筛选以检测可能影响测定法的任何异常身体状况，例如独眼、白内障或其他异常如理毛等。在施用抗体后的第二天，将小鼠于笼子中从动物圈养地转运到手推车上，然后将小鼠放置在行为室中以在任何注射或测试之前适应环境至少1小时。从笼子上去除转运所需的任何遮盖物并且在适应环境期间开启正常光照条件(标准的顶置式荧光照明)并且在程序的其余部分继续保持。另外，在适应环境期间开启所有产生声音的设备，包括麻醉装置、光照/黑暗室以及LED面板，并且保持直到测试完成。典型地在适应环境期间室内有最少人员存在。
在适应环境之后，将每只小鼠放置在诱导室中并且施用3.5％异氟醚。在小鼠被麻醉之后，将其转移至维持3.5％异氟醚施用的鼻锥，以使得其在注射期间保持麻醉。其后使用注射器通过穿过完整头皮直接注射到右侧脑室来实现药物施用，目标点在前囟后方1mm并在中线右侧1mm。
典型地，为了一致性，所有注射都由经过一段时期训练后的同一个人执行，得到成功率>90％，如通过将染料注射到脑室中所显示。所注射的药物为2.0μL媒介物(D-PBS)μL或含2.0μg CGRP的2.0μL媒介物(1μg/μL)，其以如上所述穿过完整头皮直接脑室内注射到大脑的右侧脑室的形式来施用，目标点在前囟后方1mm并在中线右侧1mm[Recober等人,J.Neuroscience 29:8798-8804(2009)]。在全部2.0μL都被递送之后，针在原地保持10秒，然后去除。然后记录注射时间。
在注射之后，使小鼠在测试之前在包含纸巾用作垫子的无遮盖空笼中恢复30分钟。在恢复期间，记录下列：腹泻、排尿过多、注射后出血、异常行为如缺乏运动、抽搐等。基于这些观察结果，判定在施用了抗体并且稍后施用了CGRP ICV的转基因小鼠中，相对于仅施用了CGRP和对照物(媒介物或含对照抗体的媒介物)的转基因小鼠，抗CGRP抗体的施用是否对CGRP诱发的腹泻具有影响(预防性或减轻性)。在这个方案中抑制CGRP诱发的腹泻的抗体被鉴定为潜在地可用于治疗或预防急性或慢性腹泻，特别是与CGRP水平升高相关的腹泻。
在恢复30分钟之后，实现光照方案测试。将每一只小鼠沿后壁(距两个区域之间的开口最远)放置在光区中大约中心处。这触发记录开始。每次测试至多六只小鼠(每个室一只小鼠)。在测试期间，将具有腔室的架子推回到橱柜中并且将门关闭。软件记录小鼠运动20分钟。在记录完成之后，移出每一只小鼠并且放回到主笼中以转运回动物圈养地。
结果
使用这个方案，在本文鉴定为Ab3的由Alder Biopharmaceuticals开发的抗CGRP抗体被证明使转基因小鼠在光照中消耗统计上显著量的时间。(这些结果未示，因为它们与2011年6月14日提交的美国临时申请No.61/496,860(代理人备案No.67858.760000)和与该申请同日提交的美国序列No.__________(代理人备案No.67858.730303)中所公开的另一项发明有关，并且所述申请以引用的方式并入本文中)。
与本发明相关，在这些实验期间发现用相同的Alder抗CGRP抗体(Ab3)处理的小鼠也不展现CGRP相关腹泻。而CGRP施用在未施用抗CGRP抗体的厌光研究中使用的大部分转基因小鼠中引起腹泻，在接受CGRP施用并且进一步全身性(腹膜内)施用Ab3的相同转基因小鼠中未观察到腹泻。
这些结果显示于图41中。更明确地说，图41包含脑室内(ICV)注射的CGRP在转基因Nestin/hRamp1小鼠中的作用的实验结果。数据显示ICV注射的大鼠CGRP在Nestin/hRAMP1tg小鼠中诱发腹泻并且腹膜内注射Ab3(30mg/kg，在CGRP攻击前约24小时)在nestin/hRAMP1tg小鼠中抑制了脑室内(ICV)注射的CGRP诱发的腹泻。
从该图中可见，所有未接受CGRP的转基因Nestin/hRamp1小鼠(仅施用了IP媒介物和ICV媒介物的小鼠)未产生腹泻。在这些研究中，RAMP1转基因C57/BL6J小鼠接受了大鼠CGRP(α)。
相比之下，大多数接受了ICV施用的大鼠CGRP并且进一步施用了对照物(含对照抗体的IP媒介物或IP与ICV媒介物的组合)的相同转基因小鼠产生腹泻(分别在90％或约80％的接受了CGRP和抗体或媒介物对照的小鼠中观察到)。最显著的是，图41中的数据显示所有接受了Alder Ab3抗体和CGRP的转基因小鼠未产生腹泻。
另外，在非转基因小鼠(C57BL/6J小鼠)中进行实验。与使用Nestin/hRAMP1小鼠的先前研究相比，C57/BL6J品系被施用了人类CGRP(α)。这些实验产生相似的结果，即，抗CGRP抗体在这些动物中预防了CGRP相关腹泻。这些结果累积表明，特异性结合CGRP的抗体(以及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的可能其他多肽)可用于在不同个体中抑制CGRP相关腹泻，并且治疗涉及过量CGRP水平的不同病状或治疗，例如本文所鉴定的那些。
图42-44包含在非转基因(C57BL/6J小鼠)中实现的这些相似CGRP实验的结果。这些结果显示，相同的抗CGRP抗体(Ab3)在接受了人类CGRP的C57BL/6J小鼠中预防了腹泻。相比之下，大部分的接受了人类CGRP(α)和相同对照物的C57BL/6J小鼠产生腹泻。
明确地说，图42包含显示脑室内(ICV)注射人类CGRP(与大鼠CGRP类似)在C57BL/6J小鼠中以剂量依赖性方式诱发腹泻的实验结果。数据还显示约80％的经由脑室内注射施用了2.0μg人类CGRP的C57BL/6J小鼠产生腹泻，而接受了对照物或降低量的人类CGRP(0.4μg)的小鼠无一者产生腹泻。
图43包含显示腹膜内注射Ab3(30mg/kg ip，在人类CGRP攻击前约24小时)在C57/BL6J小鼠中抑制了ICV注射的CGRP诱发的腹泻的另外的实验的结果。相比之下，对照抗体或媒介物的施用对ICV注射的CGRP诱发的腹泻无影响。
图44包含显示Ab3(30mg/kg腹膜内注射，在人类CGRP攻击前约24小时)在C57/BL6J小鼠中抑制了IP注射的CGRP诱发的腹泻的另外的实验的结果。相比之下，包含在与Ab3相同的媒介物中的对照抗体的施用对CGRP诱发的腹泻无影响。
在不同的小鼠品系中获得的这些结果令人信服地表明，施用抗CGRP抗体或抗体片段可预防或改善腹泻，尤其是在与CGRP水平升高相关的病状中。这些结果进一步指示，当CGRP以2种不同的方式施用(腹膜内或脑室内注射)并且对不同的物种具有特异性时，存在相似的预防作用。因此，抗CGRP抗体明显能够有效地结合CGRP并且预防其不良腹泻作用，而与其是全身性递送或是通过ICV注射局部递送无关。
另外，结果显示在被施用了CGRP的啮齿动物中的测定法可用于评估候选抗CGRP抗体或另一种CGRP/CGRP受体多肽抑制剂是否可用于抑制或治疗胃肠病症或特征为CGRP过多的其他病状，所述CGRP过多涉及排便、电解质平衡和/或流体排泄的异常并且特别是腹泻。这些病状包括例如炎症性肠病；细菌或病毒诱发的腹泻；选自以下的功能性肠道障碍：胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、功能性腹痛综合征、憩室病和憩室炎、克罗恩病、回肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎以及溃疡性结肠炎；以及与腹泻相关的癌症和癌症治疗，例如，甲状腺髓样癌或结肠直肠癌以及先前所鉴定的其他病状。
实施例9CGRP抗体施用对结肠排空的影响
在C57BL/6小鼠中进行实验以评估CGRP抗体施用对于治疗或预防腹泻和相关胃肠病症的潜在功效。相对于在实施例8中使用C57BL/6J小鼠的实验，利用更高剂量的CGRP和更低剂量的抗体；然而，Ab3和Ab6可有效降低腹泻的发生率。
方法
将6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠(Harlan Laboratories)单独圈养于具有经过检验的辐照接触垫的透明聚碳酸酯常规笼或透明/黄色聚碳酸酯微型隔离笼中并且适应研究设施至少24小时。食物和水可任意取食。设定环境控制以维持温度为18℃至26℃(64℉至79℉)，相对湿度为30％至70％。维持12:12小时光照：黑暗循环。
根据到达后第二天的体重，将动物随机分成四个处理组(每组十只动物)。审阅各组的平均体重以确保平均值和标准偏差满足同质性假定。
第1天，对第1处理组和第2处理组施用阴性对照抗体(具有与抗CGRP抗体相同的同种型)，并且第3组和第4组分别接受抗体Ab3和Ab6(所有抗体都以10mg/kg、剂量体积2.63mL/kg经腹膜内施用)。
第2天，对第2处理组、第3处理组以及第4处理组腹膜内施用CGRP(0.05mg/kg、剂量体积3.33mL/kg)并且对第1组腹膜内施用相等剂量体积的磷酸盐缓冲盐水。然后在给药后立即将动物放置在与其主笼分开的笼子内部的一片吸水纸上。在放置于笼子底部之前对该片纸称重并且记录重量。在CGRP给药后对每只动物的排便监测30分钟。观察腹泻的发生率和总重量(其粘到纸上)。如果存在松散大便的话则记录腹泻的阳性发生率。通过抓紧长侧并提起将纸提出笼子同时保持纸呈约45度角并轻轻振荡来测定总粪便重量。任何滚落的大便被视为正常，粘到纸上的任何东西被视为腹泻。然后将附着有任何大便的纸片放置在天平上并称重。
结果
在CGRP施用后，在30分钟观察期内评估两种不同的抗CGRP抗体对胃肠不适(在这种情况下为腹泻)的影响并与两个对照组进行比较。如图45中所示，80％的阳性对照动物(接受CGRP和阴性对照抗体)展现腹泻，与之相比接受Ab6和Ab3的动物中仅60％和40％展现腹泻。阴性对照动物中无一者展现腹泻。另外，接受CGRP抗体的动物中的总粪便重量显著小于对照动物(图46)。此外，接受对照抗体的动物中的粪便坚实度相对于接受抗CGRP抗体的动物具有更大流动性(水样)，另一个指示为CGRP抗体已有助于恢复正常胃肠功能并且明确地说是正常结肠排空。
这些结果进一步证实抗CGRP抗体可有效预防或治疗腹泻和相关病状。
实施例10 CGRP抗体施用对结肠排空的影响
在C57BL/6小鼠中进行另一个实验来评估CGRP抗体施用对于治疗或预防腹泻和相关胃肠病症的潜在功效。利用比实施例9中更高剂量的抗CGRP抗体并且对腹泻发生率和总粪便重量的影响更显著。
方法
通过实验方式在C57BL/6小鼠中诱发腹泻，其中如实施例9中一样为四个处理组，每组十只小鼠，不同的是每一抗体的剂量为三倍高(30mg/kg、剂量体积7.89mL/kg)，并且CGRP的剂量体积为三倍高，但是CGRP的剂量相同(0.05mg/kg，剂量体积为10mL/kg)。第1组(阴性对照)在第1天接受阴性对照抗体并且在第2天接受磷酸盐缓冲盐水。第2组、第3组和第4组在第1天分别接受对照抗体、Ab3和Ab6，并且在第2天接受CGRP。抗体和CGRP是经腹膜内施用的。
结果
在CGRP施用后，在30分钟观察期内评估两种不同的抗CGRP抗体对胃肠不适(在这种情况下为腹泻)的影响并与两个对照组进行比较。如图47中所示，80％的阳性对照动物(接受CGRP和阴性对照抗体)展现腹泻，与之相比接受Ab6和Ab3的动物中仅40％和20％展现腹泻。阴性对照动物中无一者展现腹泻。另外，接受抗CGRP抗体的动物中的平均总粪便重量显著小于对照动物(图48)。此外，接受对照抗体的动物中的粪便坚实度相对于接受抗CGRP抗体的动物具有更大流动性(水样)，另一个指示为CGRP抗体已有助于恢复正常胃肠功能并且明确地说是正常结肠排空。
这些结果进一步证实抗CGRP抗体可有效预防或治疗腹泻和相关病状。
序列表
<110> RUSSO, ANDREW F.
KAISER, ERIC A.
RECOBER, ANA
KUBURAS, ADISA
RADDANT, ANN C.
KOVACEVICH, BRIAN ROBERT
LATHAM, JOHN A.
SMITH, JEFFREY T.L.
GARCIA-MARTINEZ, LEON F.
<120> 抗CGRP或抗CGRP-R抗体或抗体片段用于治疗或预防慢性和急性形式的腹泻的用途
<130> 67858.730306
<150> 61/488,660
<151> 2011-05-20
<150> 61/496,873
<151> 2011-06-14
<160> 284
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 1
Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
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Arg
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 2
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
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Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr
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Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
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Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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<212> PRT
<213> 家兔
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<213> 家兔
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Gly Asp Ile
1
<210> 11
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 11
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
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Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
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Arg
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 12
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
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Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
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100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
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<210> 13
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr
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Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
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Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
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100 105 110
<210> 14
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr
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Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
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Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
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Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
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100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
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Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
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Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
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Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
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Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
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Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
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Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
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Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
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Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
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Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
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<213> 家兔
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Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Tyr Leu Ala
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<213> 家兔
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<213> 家兔
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Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Ser Gly Asp Cys Phe Val
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<213> 家兔
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Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
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<211> 3
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<213> 家兔
<400> 20
Gly Asp Ile
1
<210> 21
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 21
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
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100 105 110
Arg
<210> 22
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 22
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
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Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
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Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 23
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr
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Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
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Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 24
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr
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Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
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Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg
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Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
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Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
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325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 25
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 26
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 27
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 27
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Ser Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 28
Ser Tyr Tyr Met Gln
1 5
<210> 29
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 29
Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 30
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 30
Gly Asp Ile
1
<210> 31
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 31
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asn Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg
<210> 32
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 32
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asn Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 33
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 33
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105
<210> 34
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 34
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
210 215 220
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
275 280 285
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 35
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 36
Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 37
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 37
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 38
Gly Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 39
Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 40
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 40
Gly Asp Ile
1
<210> 41
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 41
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 42
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 42
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 43
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 44
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 45
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 45
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 46
Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 47
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 47
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 48
Gly Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 49
<211> 15
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 49
Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 50
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 50
Gly Asp Ile
1
<210> 51
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 51
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 52
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 52
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 53
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 54
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 54
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 55
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 55
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 56
Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 57
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 57
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 58
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 58
Gly Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 59
<211> 15
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 59
Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 60
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 60
Gly Asp Ile
1
<210> 61
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 61
Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg
<210> 62
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 62
Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 63
Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 64
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 64
Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
100 105 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
130 135 140
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
145 150 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
180 185 190
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
195 200 205
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
305 310 315 320
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 65
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 65
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 66
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 66
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 67
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 67
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Thr Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 68
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 68
Asn His Tyr Met Gln
1 5
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 69
Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 70
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 70
Gly Asp Ile
1
<210> 71
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 71
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 72
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 72
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 73
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 74
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 74
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 75
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 75
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 76
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 76
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 77
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 77
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Thr Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 78
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 78
Asn His Tyr Met Gln
1 5
<210> 79
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 79
Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 80
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 80
Gly Asp Ile
1
<210> 81
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 81
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg
<210> 82
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 82
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 83
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 83
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Met
65 70 75 80
Ala Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105
<210> 84
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 84
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Met
65 70 75 80
Ala Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
210 215 220
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
275 280 285
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435
<210> 85
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 85
Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 86
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 87
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 87
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Arg Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 88
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 88
Ser Tyr Tyr Met Gln
1 5
<210> 89
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 89
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 90
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 90
Gly Asp Ile
1
<210> 91
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 91
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 92
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 92
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 93
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 94
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 95
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 95
Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 96
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 97
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 97
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Arg Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 98
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 98
Ser Tyr Tyr Met Gln
1 5
<210> 99
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 99
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 100
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 100
Gly Asp Ile
1
<210> 101
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 101
Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Pro Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg
<210> 102
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 102
Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Pro Ala Val Gly Ser
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 103
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 103
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105
<210> 104
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 104
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
210 215 220
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
275 280 285
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435
<210> 105
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 105
Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 106
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 107
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 107
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 108
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 108
Asn Tyr Tyr Met Gln
1 5
<210> 109
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 109
Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 110
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 110
Gly Asp Ile
1
<210> 111
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 111
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 112
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 112
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 113
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 113
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 114
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 115
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 115
Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 116
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 116
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 117
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 117
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 118
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 118
Asn Tyr Tyr Met Gln
1 5
<210> 119
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 119
Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 120
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 120
Gly Asp Ile
1
<210> 121
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 121
Ala Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Lys Ser Val Pro Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Arg Ser Asp
85 90 95
Ser Val Asp Gly Val Ala Phe Ala Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg
<210> 122
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 122
Ala Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Lys Ser Val Pro Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Arg Ser Asp
85 90 95
Ser Val Asp Gly Val Ala Phe Ala Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 123
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 123
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn Ala
20 25 30
Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn
50 55 60
Gly Arg Phe Ser Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln
65 70 75 80
Leu Asn Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Leu Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 124
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 124
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn Ala
20 25 30
Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn
50 55 60
Gly Arg Phe Ser Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln
65 70 75 80
Leu Asn Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Leu Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 125
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 125
Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn Asn Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 126
Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 127
<211> 12
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 127
Gly Gly Tyr Arg Ser Asp Ser Val Asp Gly Val Ala
1 5 10
<210> 128
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 128
Ser Asn Ala Met Trp
1 5
<210> 129
<211> 17
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 129
Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn
1 5 10 15
Gly
<210> 130
<211> 4
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 130
Asp Leu Asp Leu
1
<210> 131
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 131
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 132
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 132
Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 133
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 133
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 134
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 134
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 135
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 135
Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 136
<211> 7
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 136
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 137
<211> 13
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 137
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Arg Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 138
<211> 5
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 138
Ser Tyr Tyr Met Gln
1 5
<210> 139
<211> 16
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 139
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 140
<211> 3
<212> PRT
<213> 家兔
<400> 140
Gly Asp Ile
1
<210> 141
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 141
caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339
<210> 142
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 142
caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 143
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 143
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggactcga cctcagtagc tactacatgc aatgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg ataacacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaga gcctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300
ccaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327
<210> 144
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 144
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggactcga cctcagtagc tactacatgc aatgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg ataacacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaga gcctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300
ccaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420
tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480
accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540
ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600
accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660
tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320
<210> 145
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 145
caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc 39
<210> 146
<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 146
tctacatcca ctctggcatc t 21
<210> 147
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 147
ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39
<210> 148
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 148
agctactaca tgcaa 15
<210> 149
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 149
gtcattggta ttaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 150
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 150
ggggacatc 9
<210> 151
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 151
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339
<210> 152
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 152
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
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<210> 153
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 153
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 154
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 154
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
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accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
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cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
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<210> 155
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 155
caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc 39
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<211> 21
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<213> 家兔
<400> 156
tctacatcca ctctggcatc t 21
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<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 157
ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39
<210> 158
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 158
agctactaca tgcaa 15
<210> 159
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 159
gtcattggta tcaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 160
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 160
ggggacatc 9
<210> 161
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 161
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339
<210> 162
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 162
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
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tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 163
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 163
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
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<210> 164
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 164
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> 165
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 165
caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc 39
<210> 166
<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 166
tctacatcca ctctggcatc t 21
<210> 167
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 167
ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39
<210> 168
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 168
agctactaca tgcaa 15
<210> 169
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 169
gtcattggta tcaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 170
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 170
ggggacatc 9
<210> 171
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 171
caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaaaca actgatctat gatgcatcca ctctggcgtc tggggtccca 180
tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cggcgtgcag 240
tgtaacgatg ctgccgctta ctactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339
<210> 172
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 172
caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaaaca actgatctat gatgcatcca ctctggcgtc tggggtccca 180
tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cggcgtgcag 240
tgtaacgatg ctgccgctta ctactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 173
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 173
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgttccgtct ctggcatcga cctcagtggc tactacatga actgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg gtgccacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300
ccgggcaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327
<210> 174
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 174
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgttccgtct ctggcatcga cctcagtggc tactacatga actgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg gtgccacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300
ccgggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420
tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480
accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540
ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600
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gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
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<210> 175
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 175
caggccagtc agagtgttta tcataacacc tacctggcc 39
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<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 176
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<210> 177
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 177
ctgggcagtt atgattgtac taatggtgat tgttttgtt 39
<210> 178
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 178
ggctactaca tgaac 15
<210> 179
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 179
gtcattggta ttaatggtgc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 180
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 180
ggggacatc 9
<210> 181
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 181
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180
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cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339
<210> 182
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 182
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
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ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
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<210> 183
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 183
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<210> 184
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 184
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
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<211> 39
<212> DNA
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<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 187
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<213> 家兔
<400> 188
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<212> DNA
<213> 家兔
<400> 189
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<210> 190
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<213> 家兔
<400> 190
ggggacatc 9
<210> 191
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 191
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300
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<210> 192
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 192
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180
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cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300
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ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 193
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 193
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<210> 194
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 194
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
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gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
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<400> 195
caggccagtc agagtgttta tcataacacc tacctggcc 39
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<212> DNA
<213> 家兔
<400> 196
gatgcatcca ctctggcatc t 21
<210> 197
<211> 39
<212> DNA
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<212> DNA
<213> 家兔
<400> 198
ggctactaca tgaac 15
<210> 199
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 199
gtcattggta ttaatggtgc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 200
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 200
ggggacatc 9
<210> 201
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 201
caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttataat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcgattca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg actgtagtac tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339
<210> 202
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 202
caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttataat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcgattca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg actgtagtac tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 203
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 203
caggagcagc tgaaggagtc cgggggtcgc ctggtcacgc ctgggacatc cctgacactc 60
acctgcaccg tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcggagtc gttggtatta atggtcgcac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agaacctcgt cgaccacggt ggatctgaaa 240
atgaccaggc tgacaaccga ggacacggcc acctatttct gtgccagagg ggacatctgg 300
ggcccaggca ccctggtcac cgtctcgagc 330
<210> 204
<211> 1323
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 204
caggagcagc tgaaggagtc cgggggtcgc ctggtcacgc ctgggacatc cctgacactc 60
acctgcaccg tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcggagtc gttggtatta atggtcgcac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agaacctcgt cgaccacggt ggatctgaaa 240
atgaccaggc tgacaaccga ggacacggcc acctatttct gtgccagagg ggacatctgg 300
ggcccaggca ccctggtcac cgtctcgagc gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc 360
ctggcaccct cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag 420
gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg 480
cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc 540
gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc 600
aacaccaagg tggacaagag agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca 660
ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 720
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 780
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 840
aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 900
gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 960
ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1020
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1080
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1140
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1200
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1260
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1320
tga 1323
<210> 205
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 205
caggccagtc agagtgttta taattacaac taccttgcc 39
<210> 206
<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 206
tctacatcca ctctggcatc t 21
<210> 207
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 207
ctaggcagtt atgactgtag tactggtgat tgttttgtt 39
<210> 208
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 208
aaccactaca tgcaa 15
<210> 209
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 209
gtcgttggta ttaatggtcg cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 210
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 210
ggggacatc 9
<210> 211
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 211
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttacaat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtac tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339
<210> 212
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 212
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttacaat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtac tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 213
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 213
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc gttggtatca atggtcgcac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
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<210> 214
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 214
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc gttggtatca atggtcgcac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> 215
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 215
caggccagtc agagtgttta caattacaac taccttgcc 39
<210> 216
<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 216
tctacatcca ctctggcatc t 21
<210> 217
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 217
ctgggcagtt atgattgtag tactggtgat tgttttgtt 39
<210> 218
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 218
aaccactaca tgcaa 15
<210> 219
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 219
gtcgttggta tcaatggtcg cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 220
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 220
ggggacatc 9
<210> 221
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 221
caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttataat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacgtcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcgattca gaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
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<210> 222
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 222
caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttataat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacgtcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcgattca gaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
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ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 223
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 223
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcgg cctcagtagc tactacatgc agtgggtccg ccagtctcca 120
gggagggggc tggaatggat cggagtcatt ggtagtgatg gtaagacata ctacgcgacc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaag acctcgtcga ccacggtgga tctgagaatg 240
gccagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgta ccagagggga catctggggc 300
ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327
<210> 224
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 224
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcgg cctcagtagc tactacatgc agtgggtccg ccagtctcca 120
gggagggggc tggaatggat cggagtcatt ggtagtgatg gtaagacata ctacgcgacc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaag acctcgtcga ccacggtgga tctgagaatg 240
gccagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgta ccagagggga catctggggc 300
ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420
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ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600
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tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320
<210> 225
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 225
caggccagtc agaatgttta taataacaac tacctagcc 39
<210> 226
<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 226
tctacgtcca ctctggcatc t 21
<210> 227
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 227
ctaggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39
<210> 228
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 228
agctactaca tgcag 15
<210> 229
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 229
gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc 48
<210> 230
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 230
ggggacatc 9
<210> 231
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 231
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
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<210> 232
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 232
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 233
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 233
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180
acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
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<210> 234
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 234
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180
acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
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accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
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<210> 235
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<400> 235
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<212> DNA
<213> 家兔
<400> 236
tctacatcca ctctggcatc t 21
<210> 237
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 237
ctgggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39
<210> 238
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 238
agctactaca tgcaa 15
<210> 239
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 239
gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc 48
<210> 240
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 240
ggggacatc 9
<210> 241
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 241
caggtgctga cccagactgc atcccccgtg tctccagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccggg ccagtcagag tgtttattat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339
<210> 242
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 242
caggtgctga cccagactgc atcccccgtg tctccagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccggg ccagtcagag tgtttattat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 243
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 243
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cgtcactaac tactatatgc aatgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtgtgaatg gtaagagata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagaggcga catctggggc 300
ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327
<210> 244
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 244
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cgtcactaac tactatatgc aatgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtgtgaatg gtaagagata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagaggcga catctggggc 300
ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420
tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480
accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540
ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600
accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660
tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
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catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320
<210> 245
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 245
cgggccagtc agagtgttta ttataacaac tacctagcc 39
<210> 246
<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 246
tctacatcca ctctggcatc t 21
<210> 247
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 247
ctaggcagtt atgattgtag taatggtgat tgttttgtt 39
<210> 248
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 248
aactactata tgcaa 15
<210> 249
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 249
gtcattggtg tgaatggtaa gagatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 250
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 250
ggcgacatc 9
<210> 251
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 251
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccggg ccagtcagag tgtttactat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339
<210> 252
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 252
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccggg ccagtcagag tgtttactat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
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ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
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<210> 253
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 253
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacgtcact aactactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtgtga atggtaagag atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
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tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 254
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 254
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacgtcact aactactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtgtga atggtaagag atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
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ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
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gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> 255
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 255
cgggccagtc agagtgttta ctataacaac tacctagcc 39
<210> 256
<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 256
tctacatcca ctctggcatc t 21
<210> 257
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 257
ctgggcagtt atgattgtag taatggtgat tgttttgtt 39
<210> 258
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 258
aactactaca tgcaa 15
<210> 259
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 259
gtcattggtg tgaatggtaa gagatactac gcgagctggg cgaaaggc 48
<210> 260
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 260
ggggacatc 9
<210> 261
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 261
gccatcgtga tgacccagac tccatcttcc aagtctgtcc ctgtgggaga cacagtcacc 60
atcaattgcc aggccagtga gagtctttat aataacaacg ccttggcctg gtttcagcag 120
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ccatcgcggt tcagtggcgg tgggtctggg acacagttca ctctcaccat cagtggcgtg 240
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<210> 262
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 262
gccatcgtga tgacccagac tccatcttcc aagtctgtcc ctgtgggaga cacagtcacc 60
atcaattgcc aggccagtga gagtctttat aataacaacg ccttggcctg gtttcagcag 120
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<210> 263
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 263
cagtcggtgg aggagtccgg gggaggcctg gtccagcctg agggatccct gacactcacc 60
tgcacagcct ctggattcga cttcagtagc aatgcaatgt ggtgggtccg ccaggctcca 120
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tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 264
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 264
cagtcggtgg aggagtccgg gggaggcctg gtccagcctg agggatccct gacactcacc 60
tgcacagcct ctggattcga cttcagtagc aatgcaatgt ggtgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggagtggat cggatgcatt tacaatggtg atggcagcac atactacgcg 180
agctgggtga atggccgatt ctccatctcc aaaacctcgt cgaccacggt gactctgcaa 240
ctgaatagtc tgacagtcgc ggacacggcc acgtattatt gtgcgagaga tcttgacttg 300
tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
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accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
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<212> DNA
<213> 家兔
<400> 265
caggccagtg agagtcttta taataacaac gccttggcc 39
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<213> 家兔
<400> 266
gatgcatcca aactggcatc t 21
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<213> 家兔
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<213> 家兔
<400> 268
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<210> 269
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<212> DNA
<213> 家兔
<400> 269
tgcatttaca atggtgatgg cagcacatac tacgcgagct gggtgaatgg c 51
<210> 270
<211> 12
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 270
gatcttgact tg 12
<210> 271
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 271
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339
<210> 272
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 272
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
<210> 273
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 273
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
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<210> 274
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 274
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180
acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> 275
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 275
caggccagtc agaatgttta caataacaac tacctagcc 39
<210> 276
<211> 21
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 276
tctacatcca ctctggcatc t 21
<210> 277
<211> 39
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 277
ctgggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39
<210> 278
<211> 15
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 278
agctactaca tgcaa 15
<210> 279
<211> 48
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 279
gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc 48
<210> 280
<211> 9
<212> DNA
<213> 家兔
<400> 280
ggggacatc 9
<210> 281
<211> 37
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> C端酰胺化
<400> 281
Ala Cys Asp Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu
1 5 10 15
Ser Arg Ser Gly Gly Val Val Lys Asn Asn Phe Val Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Lys Ala Phe
35
<210> 282
<211> 37
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> C端酰胺化
<400> 282
Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu
1 5 10 15
Ser Arg Ser Gly Gly Met Val Lys Ser Asn Phe Val Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Lys Ala Phe
35
<210> 283
<211> 105
<212> PRT
<213> 智人
<400> 283
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
1 5 10 15
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
20 25 30
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
35 40 45
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
50 55 60
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
65 70 75 80
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
85 90 95
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 284
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 284
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330

Claims (10)

1.一种抑制、预防或治疗具有与腹泻或痢疾相关的病状的受试者的腹泻或痢疾和/或维持其结肠中适当的电解质和流体水平的方法，其包括施用有效量的抗CGRP抗体或抗CGRP抗体片段或抗CGRP受体抗体或抗体片段。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述腹泻或痢疾与CGRP增加相关。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述腹泻为急性腹泻或慢性腹泻。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述腹泻包括渗透性腹泻、分泌性腹泻、蠕动性腹泻、渗出性腹泻和/或炎症性腹泻。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其中腹泻是由选自以下的慢性或急性病状所引起：功能性肠道障碍、肠易激综合征、乳糜泻、胰腺疾病、胰腺炎、1型或2型糖尿病、囊肿性纤维化、克罗恩病、糖尿病性神经病变、月经期、甲状腺功能亢进、激素失衡、肠炎、炎症性肠病、显微镜结肠炎、缺血性肠病、溃疡性结肠炎、粘膜炎或肺结核。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述与腹泻相关的病状为细菌、寄生虫或病毒诱发的腹泻。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述导致腹泻的病状为选自溶组织内阿米巴、贾第虫属或另一种原生动物的寄生虫。
8.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述导致腹泻的病状为选自大肠杆菌、志贺菌属、溶组织内阿米巴、沙门菌属、弯曲菌属或艰难梭状芽胞杆菌的细菌。
9.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述导致腹泻的病状为选自轮状病毒、RSV、HIV、诺如病毒、腺病毒以及星状病毒的病毒。
10.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述导致腹泻的病状为食物中毒。
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