CN108299399A - 一种小分子免疫化合物的晶型、其制备方法和含有其的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种小分子免疫化合物的晶型、其制备方法和含有其的药物组合物，该化合物为(3Z,6Z)‐3‐[((E)‐3‐(5‐叔丁基)‐1H‐咪唑基‐4‐基)亚甲基]‐6‐((E)‐3‐(3‐氟苯基)‐2‐丙烯亚基)哌嗪‐2,5‐二酮，所述的其晶型具有稳定的形态，化学稳定性好，耐高温，用于治疗过度增殖疾病，该化合物的结构式如式(1)所示。

Description

一种小分子免疫化合物的晶型、其制备方法和含有其的药物 组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地说，涉及一种新型小分子免疫化合物的新晶型；

本发明还涉及上述新晶型的制备方法以及含新晶型化合物的药物组合物。

背景技术

作为肿瘤治疗的主要手段，抗肿瘤药物为延长患者的生存时间以及改善其生命质量做出了相当的贡献。其中本发明化合物作为一种新型的小分子化合物，能够依附于微管蛋白的秋水仙碱结合位点，从而抑制微管蛋白的结合。研究表明与多西他赛联用增效减毒，能在肿瘤微环境中发挥多重功效，其中包括：1、通过激活Caspase-3直接诱导肿瘤细胞凋亡；2、促进树突状细胞成熟，从而进一步促进T细胞介导的肿瘤杀伤作用；3、促进保护中性粒细胞免于凋亡的一系列细胞因子的释放。

中国专利申请CN106565686公开了式(1)的化合物(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮，该化合物用于减少血管增生和血管密度，作用于肿瘤血管，具有抗癌作用。

发明内容

本发明的一个目的是提供上述化合物的新晶型，即(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮(如式(1)所示)的B晶型；

所述B晶型特征通过熔点、X-射线粉末衍射(XRD)、差示扫描量热分析(DSC)、热重分析(TG)、红外光谱(IR)、元素分析进行了表征，该晶型具备制备药物制剂所需要的性能。

本发明的另一个目的是提供该化合物新晶型的制备方法。

本发明的再一个目的是提供含有所述晶型化合物的药物组合物。

根据本发明的一个方面，先制备所述化合物(如式(1)所示)的粗品，然后通过重结晶的方法对该物质粗品进行结晶，获得化合物晶型。

通过对该结晶进行熔点测量、X-射线粉末衍射、DSC、TG、IR、元素分析等检测和分析，确证获得的结晶是一种新型的结晶，称为B晶型。

具体地，当用Cu辐射源进行X-射线粉末衍射时，所述的B晶型包括在位于2θ°为5.5±0.2°、8.7.7±0.2°、11.0±0.2°、13.5±0.2°、16.0±0.2°、16.4±0.2°的特征衍射峰，这些峰的相对强度(I/I₀)均大于或等于30％。更进一步地，所述结晶在X-射线粉末衍射中还可以进一步包含位于2θ°为18.5±0.2°、21.9±0.2°、22.1±0.2°的特征衍射峰，这些峰的相对强度均大于或等于15％(见图1)。

其中“±0.2°”为允许的测量误差范围。

本发明的B晶型可以通过X-射线粉末衍射图谱进行表征。其特征在于其X射线粉末衍射图谱具有上述2θ°表示的特征衍射峰，如表1所示，其相对强度接近下列数值。

表1

此处的术语“接近”是指相对强度测量值的不确定性。本领域技术人员理解相对强度的不确定性非常依赖于测量条件。相对强度的不确定性非常依赖于测量条件。相对强度值可以例如在±25％范围内改变或优选在±10％范围内改变。

上述B晶型具有图1所示的X射线粉末衍射图谱。

本发明采用差示扫描量热(DSC)技术对B晶型进行表征(见图2)，其中差示扫描量热分析结果表明，供试样品在检测温度范围内(20-310℃)没有明显的吸热或放热过程。

本发明采用热重分析技术对B晶型进行表征(见图3)，其中热重谱图(TG)显示在室温至326℃失重量为0.87％、326℃至436℃的失重量为39.8％、436至700℃的失重量为54.48％、700℃的最后剩余量为0.85％。说明随着温度升高，该化合物降解了。

本发明的化合物的B晶型的红外图谱如图4所示，其中在3175、3060、3007、2969、2905、1691-1634、1600、1579、1555、1503、1491、1472、1376、1277、956、810、775、681cm^-1有较强吸收峰。

本发明的B晶型的元素分析数据与理论值吻合(相差±0.3％以内)，进一步确证该化合物不与其他溶剂共结晶(见表2)。

表2

根据本发明的另一方面，制备所述B晶型的方法包括：将(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的粗品，加入到C1-C4烷基醇和C3-C4烷基酮的混合溶剂中，加热回流至溶解；溶液澄清后开始降温，至析出固体，过滤收集固体，将收集的固体鼓风干燥即得B晶型。所述的醇选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丁醇，优选乙醇；所述的酮选自丙酮、甲基乙基酮和正丁酮等，优选丙酮；醇与酮的体积比(V/V)为5:1～10:1，优选8：1；所述的粗品与溶剂的配比按g/ml计，重量体积比为1：5～20，优选为1:10。将溶液优选加热到40～80℃，更优选C1-C4烷基醇和C3-C4烷基酮混合溶剂加热至50℃；根据此实施方案，析固进行2～8小时，更优选为4小时。析固温度为0～40℃，优选10～20℃。析固完全后过滤，烘干温度为30～60℃，优选为50℃。

根据本发明的又一方面，提供一种药物组合物，该药物组合物含有所述新晶型化合物和任选的药学上可接受的载体和/或赋形剂。

所述药物组合物可进一步按照常规制剂方法配制成可供给药的形式，包括经口或胃肠外给药形式。在可供给药的形式中，应包含治疗有效量的B晶型。所谓“治疗有效量“是指在该剂量下，本发明的化合物能够改善或减轻疾病症状，或能够抑制或阻断疾病的发展。

根据经验并考虑本领域的标准方法和参考文献，本领域技术人员可以很容易地选择各种载体和/或赋形剂并确定其用量。

根据本发明的再一方面，本发明的晶型可单独用于制备治疗过渡性增殖疾病的药物，也可以和其他治疗药物联合制备，协同作用。

本发明(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的B晶型，用于治疗过度增殖性疾病，优选所述的过度增殖性疾病为癌症，包括但不限于非小细胞肺癌、结肠直肠癌、顽固性非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、神经胶质瘤、脑癌或颈部癌症。

该化合物为细胞周期抑制剂，作为肿瘤生长抑制剂或真菌抑制剂。并可用来治疗或预防相关的疾病，如癌症，特别是非小细胞肺癌、结肠直肠癌、顽固性非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、神经胶质瘤、脑瘤或颈部癌症。

有益效果：

本发明制备得到了(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的新晶型，其具有稳定的形态，化学稳定性好，耐高温，这种新晶型的(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮具备了制备制剂所需要的性能，且贮存方便，生产操作更为简便，质量更易控制。

附图说明

图1是本发明实施例1所得的新晶型B的X射线衍射图谱；

图2是本发明实施例1所得的新晶型B的DSC图谱；

图3是本发明实施例1所得的新晶型B的TG图谱；

图4是本发明实施例1所得的新晶型B的IR图谱；

图5是本发明实施例1所得的新晶型B的HPLC图谱。

具体实施方式

所有原料和试剂均为商业购买。

粗品制备：

(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮粗品的制备，以1,4-二乙酰基哌嗪-2,5-二酮、5-叔丁基-1H-咪唑-4-甲醛为起始原料，参考专利申请(CN106565686)的方法来制备。

【实施例1】

取200g(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮粗品加入到反应瓶中，加入2000ml的乙醇和丙酮的混合溶剂中(V/V＝8：1)，搅拌下升温回流至50℃。溶解后搅拌10min，再降温至20～25℃，至固体析出再搅拌析晶4h，抽滤，滤饼用丙酮淋洗。滤饼于50℃鼓风干燥，用五氧化二磷助干。得类白色固体182g，收率91.0％。用卡尔费休测定仪检测水分为0.1％。得到的化合物为(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的B晶型。

化合物性状鉴定如图1～图5所示。

实施例样品的测试条件：

XRD：

检测仪器：锐影(Empyrean)X射线衍射仪

检测条件：Cu靶Kα射线，电压40kV，电流40mA，发散狭缝1/32°，防散射狭缝1/16°，防散射狭缝7.5mm，2θ范围：3°-50°，步长0.02°，每步停留时间40S。

检测依据：中华人民共和国(2015年版四部)0451X射线粉末衍射法

检测结果：如图1。

(二)DSC：

检测仪器：德国NETZSCH公司DSC 214差示扫描量热仪

检测条件：气氛：N2，40ml/min

扫描程序：从室温以10℃/min升温至250℃，记录升温曲线。

检测样品质量：样品1：2.48mg(使用铝质样品盘)

检测依据：JY/T 014-1996热分析方法通则

检测结果：如图2。

(三)TG：

检测仪器：德国NETZSCH公司TG209热重分析仪

检测条件：气氛：空气，20ml/min；

扫描程序：室温～800℃，升温速率：10℃/min。

检测依据：热分析方法通则JY/T 014-1996

检测结果：如图3。

红外光谱：

检测仪器：FT-IR NICOLET 6700(美国)

检测条件：溴化钾压片法

检测依据：GB/T 6040-2002红外光谱分析方法通则

检测结果：如图4。

HPLC

检测仪器：Agilent 1260series(美国)

检测条件：

色谱柱：Waters Sunfire C18

流动相A：水-流动相乙腈B(80:20)

柱温：40℃检测波长：390nm。

检测依据：《中国药典》二部附录VD高效液相色谱法

检测结果：如图5

【实施例2】

各取20g(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮粗品加入到反应瓶中，参考实施例1的实验操作进行以下实验：

表3

实验结论：实验所用醇类溶剂，优选乙醇；实验所用酮类溶剂，优选丙酮；醇与酮的体积比(V/V)为5:1～10:1，优选8：1；粗品与溶剂的配比按g/ml计，重量体积比为1：5～20，优选为1:10。将溶液优选加热到40～80℃，优选烷基醇和烷基酮混合溶剂加热至50℃；根据此实施方案，析固进行2～8小时，更优选为4小时。析固温度为0～40℃，优选10～20℃。析固完全后过滤，烘干温度为30～60℃，优选为50℃。

【实施例3】

(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的B晶型的稳定性考察

将获得的B晶型进行稳定性考察(10天的加速试验)，在60℃、湿度92.5％、光照条件下对新晶型的纯度、最大单杂及总杂与0天的数据进行对比，光照条件下，纯度略有降低，其他条件下显示获得的晶型稳定。

表4 B晶型影响因素试验结果

将(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的粗品进行稳定性考察(10天的加速试验)，在40℃、60℃对粗品的纯度、最大单杂与0天的数据进行对比，粗品60℃5天、60℃10天的纯度低于B晶型相应条件下的纯度。

表5粗品影响因素试验结果

【实施例4】

化合物B晶型注射液的制备

表6处方1

制法：取聚山梨酯-80，加入0.5％的经干燥处理的针用活性炭，加热至40-60℃，恒温搅拌30-60min，加热过滤，至澄明度与颜色检验合格。

取处方量的聚山梨酯-80，边滴加13％盐酸溶液，边搅拌，使测定pH值在3.5-3.9范围内，加入化合物B晶型，搅拌使化合物B溶解，将溶液经微孔滤膜进行正压滤过，至溶液澄明，测定含量和pH，合格后，将溶液在洁净条件灌装于抗生素管制瓶中，每瓶0.5ml(含化合物B)，通氮气后，压胶塞、轧铝盖，即得。

取药用乙醇，在水浴上蒸馏，弃去初馏分，收集冷凝液。称取195g冷凝液，加注射水至1500g，加入0.3％的针用活性碳，加热回流30min后，放冷，脱炭，经0.22um微孔滤膜过滤至溶液澄明，在100级洁净条件下灌装于抗生素管制瓶中，每瓶1.5ml。压胶塞，轧铝盖，即得。

【实施例5】

比较处方中不加酸与加入不同酸、及同一处方不同工艺通氮气与不通氮气对本品稳定性影响，经检测40℃放置7天的各项指标与0天比较，结果见表7，由表7可见本品处方3中不加酸，40℃放置7天后有关物质明显增加，含量下降，其它指标没有明显变化，加入13％盐酸(处方2)或50％枸橼酸(处方4)的处方明显优于不加酸的处方(处方3)，而用13％盐酸调节pH值的处方优于用50％枸橼酸调节pH值的处方，同一处方1工艺不同，40℃放置7天后通氮气样品的含量与有关物质变化不大，不通氮气的样品含量下降、有关物质明显增加，通氮气比不通氮气的样品稳定性更好，因此选择处方1为本品工艺。

表7

注：*pH值测定方法：取本品0.5g，加水4.5ml，搅拌15分钟，依法测定(中国药典2015版)，插入电极后搅拌15分钟，所测定的pH值。

Y2：表示标准比色液黄色2号(符合中国药典2015版，上海药品检验所监制)

以上对本发明较佳实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明做出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (8)

1.式(1)化合物(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的晶型，其特征在于所述晶型的X-射线粉末衍射图谱2θ衍射角在5.5±0.2°、8.7.7±0.2°、11.0±0.2°、13.5±0.2°、16.0±0.2°、16.4±0.2°、18.5±0.2°、21.9±0.2°和22.1±0.2°有特征衍射峰，

2.如权利要求1所述的(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的晶型，其特征在于，所述特征衍射峰的相对强度I/I₀为表1所示的数值，相对强度I/I₀在±25％范围内改变。

表1

3.如权利要求2所述的(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的晶型，其特征在于，相对强度I/I0在±10％范围内改变。

4.如权利要求1-3任一项所述的(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的晶型，其特征在于，

所述晶型的热重谱图显示在室温至326℃失重量为0.87％、326℃至436℃的失重量为39.8％、436至700℃的失重量为54.48％、700℃的最后剩余量为0.85％。

5.如权利要求1-3任一项所述的(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的晶型，其特征在于用KBr压片测得的红外吸收图谱，所述晶型在3175、3060、3007、2969、2905、1691-1634、1600、1579、1555、1503、1491、1472、1376、1277、956、810、775、681cm^-1有吸收峰。

6.制备权利要求1所述的(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的晶型的方法，包括以下步骤：

1)将(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的粗品，加入到C1-C4烷基醇和C3-C4烷基酮的混合溶剂中，加热回流至溶解；

其中所述的烷基醇选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丁醇；

所述的烷基酮选自丙酮、甲基乙基酮和正丁酮，烷基醇与烷基酮的体积比为5:1～10:1；

所述的粗品与溶剂的配比按g/ml计，重量体积比为1：5～20，加热温度为40～80℃；

2)溶液澄清后开始降温，至析出固体，过滤收集固体，将收集的固体鼓风干燥即得所述晶型；

析固进行2～8小时，析固温度为0～40℃，析固完全后过滤，烘干温度为30～60℃。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，

步骤1)中所述的烷基醇为乙醇，所述的烷基酮为丙酮，乙醇与丙酮的体积比为8:1；

所述的粗品与溶剂的配比按g/ml计，重量体积比为1:10，加热温度为50℃；

步骤2)中析固进行4小时，析固温度为10～20℃，烘干温度为50℃。

8.含有权利要求1所述的(3Z,6Z)-3-[((E)-3-(5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基]-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮的晶型的药物组合物。