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CN108137582A - 作为双重DYRK1/CLK1抑制剂的新的吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物 - Google Patents

作为双重DYRK1/CLK1抑制剂的新的吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物 Download PDF

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CN108137582A
CN108137582A CN201680058179.3A CN201680058179A CN108137582A CN 108137582 A CN108137582 A CN 108137582A CN 201680058179 A CN201680058179 A CN 201680058179A CN 108137582 A CN108137582 A CN 108137582A
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N·弗洛派
S·雷
D·沃姆斯利
A·科斯基
M·F·博布里奇
F·H·克鲁扎勒圭
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Furnalis R&d Co ltd
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Furnalis R&d Co ltd
Laboratoires Servier SAS
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Abstract

用于治疗癌症、神经退行性疾病和代谢性疾病的式(I)化合物。

Description

作为双重DYRK1/CLK1抑制剂的新的吡咯并[2,3-d]嘧啶衍 生物
本发明涉及新的吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物、其制备方法以及含有它们的药物组合物。
本发明的化合物是新的且在肿瘤学领域具有非常有价值的药理学特性。
本发明涉及双重DYRK1/CLK1抑制剂在治疗癌症、神经退行性疾病和代谢性疾病中的用途。
在癌症中，双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶DYRK1A和DYRK1B已被证实控制着多种途径，这些途径可以增强癌细胞增殖、迁移和转移，诱导对细胞死亡的抗性和抑制对常规和靶向抗癌疗法的反应[Abbassi等人,Pharmacol Ther.2015；151:87-98；Ionescu等人,MiniRev Med Chem.2012；12(13):1315-29；Friedman等人,J Cell Biochem.2007；102(2):274-9；Yoshida等人,Biochem Pharmacol.2008；76(11):1389-94]。已报道的参与调节癌症进展和对治疗的耐受性的DYRK1A的底物包括转录因子GLI1、STAT3和FOXO1[Mao等人,J BiolChem.2002；277(38):35156-61；Matsuo等人,J Immunol Methods 2001；247:141–51；Woods等人,Biochem J.2001；355(Pt 3):597-607]。据信DYRK1A还可以通过与蛋白Sprouty2相互作用而稳定癌症相关性酪氨酸激酶受体如EGFR和FGFR[Ferron等人,Cell StemCell.2010；7(3):367-79；Aranda等人,Mol Cell Biol.2008；28(19):5899-911]。已证实DYRK1A和DYRK1B是在针对通过化疗药和靶向疗法治疗癌细胞的响应中诱导细胞休眠所需的。这很重要，因为已知休眠的癌细胞对大多数抗癌药物和辐射相对不敏感[Ewton等人,Mol Cancer Ther.2011；10(11):2104-14；Jin等人,J Biol Chem.2009；284(34):22916-25]。例如，DYRK1A激活DREAM多亚基蛋白复合物，该复合物维持细胞处于休眠状态并阻止细胞凋亡[Litovchick等人,Genes Dev.2011；25(8):801-13]。已证实DYRK1B可以通过磷酸化细胞周期蛋白D1阻止因响应于化疗而退出细胞周期[Zou等人,J Biol Chem.2004；279(26):27790-8]。还证实DYRK1B可以通过降低活性氧物质含量来对抗化疗[Hu等人,GenesCancer.2010；1(8):803-811]。
由此可见，DYRK1A/DYRK1B抑制剂的使用将构成对各种癌症的新的抗癌治疗，无论是单独使用还是作为对抗抗药性的一种策略与常规疗法、放射疗法或靶向疗法联合使用。
DYRK1A在神经障碍中的作用是公认的。DYRK1A与神经退行性疾病如阿尔茨海默氏症、帕金森氏症和亨廷顿氏症，以及唐氏综合征、精神发育迟滞和运动缺陷有关[Abbassi等人,Pharmacol Ther.2015；151:87-98；Beker等人,CNS Neurol Disord DrugTargets.2014；13(1):26-33；Dierssen,Nat Rev Neurosci.2012Dec；13(12):844-58]。DYRK1A已被确定为是磷酸化微管相关蛋白TAU的一个主要激酶，导致阿尔茨海默氏症中所观察到的神经毒性神经原纤维缠结的形成和神经变性[Azorsa等人,BMC Genomics.2010；11:25]。DYRK1A还改变TAU pre-mRNA的剪接，导致足以引起神经变性和痴呆的TAU蛋白异构体之间的不平衡[Liu等人,Mol Neurodegener.2008；3:8]。因此，确信DYRK1A与唐氏综合症患者(该疾病患者的21号染色体上存在三份DYRK1A基因)中阿尔茨海默症样疾病的出现存在因果关系是合乎情理的。在这些个体中，增加的DYRK1A活性还造成过早的神经细胞分化和成熟神经元的减少[等人,Development.2011；138(12):2543-54]。
由此可见，DYRK1A抑制剂的使用将为神经退行性疾病、特别是阿尔茨海默氏症以及其他神经病症例如唐氏综合症的治疗提供新的治疗途径。
CDC2-样激酶(CLK)家族包含四个亚型(CLK1-4)，它们在调节剪接体复合物的功能中是非常重要的[Fedorov等人,Chem Biol.2011；18(1):67-76]。该复合物由核小RNA(snRNA)和大量的相关蛋白组成，调节pre-mRNA的剪接以产生成熟的蛋白编码mRNA。已知CLK1通过磷酸化组成型丝氨酸-精氨酸富含(SR)蛋白来调节剪接体的活性[Bullock等人,结构式.2009；17(3):352-62]。通过以这种方式控制剪接体的活性，许多基因都能表达一种以上的mRNA，导致翻译蛋白质的多样性。转录自同一基因的替代蛋白亚型通常具有不同的活性和生理功能。选择性剪接的调控异常与癌症是相关联的，其中一些与癌症相关的蛋白质被认为是选择性剪接的[Druillennec等人,J Nucleic Acids.2012；2012:639062]。一个在癌症中选择性剪接的蛋白质的例子是细胞周期蛋白D1，其对于癌细胞通过细胞周期的进展是非常重要的[Wang等人,Cancer Res.2008；68(14):5628-38]。
由此可见，CLK1抑制剂的使用将构成对各种癌症的新的抗癌治疗，无论是单独使用还是与常规疗法、放射疗法或靶向疗法联合使用。
还有记载表明，由CLK1调节的选择性剪接通过磷酸化剪接体的SR蛋白在包括阿尔茨海默氏症和帕金森氏症在内的神经退行性疾病中起作用[Jain等人,Curr DrugTargets.2014；15(5):539-50]。在阿尔茨海默氏症的情况下，已知CLK1调节微管相关蛋白TAU的选择性剪接，导致足以引起神经变性和痴呆的TAU蛋白异构体之间的不平衡[Liu等人,Mol Neurodegener.2008；3:8]。
由此可见，CLK1抑制剂的使用将为神经退行性疾病、特别是阿尔茨海默氏症以及其他神经病症例如帕金森氏症的治疗提供新的治疗途径。
因此，在癌症和神经系统疾病的治疗中，毫无疑问地迫切需要能有效抑制DYRK1和CLK1激酶而不影响其它密切相关的激酶的化合物。DYRK1和CLK1激酶是CMGC组的成员，该组包括CDK和GSK激酶，对它的慢性抑制被认为是对病人产生毒性的原因。例如，在临床中观察到的CDK抑制的常见毒性反应与传统的细胞毒疗法中所观察到的类似，包括血液学毒性(白细胞及血小板减少)、胃肠道毒性(恶心和腹泻)以及疲劳[Kumar等人,Blood.2015；125(3):443-8]。本发明描述了一类新的DYRK1/CLK1抑制剂，相对于其它激酶，该抑制剂对DYRK1和CLK1具有高度选择性，因此适用于治疗这些疾病。
1型糖尿病和2型糖尿病都涉及生产胰岛素的功能性胰腺β细胞的缺乏。因此，恢复功能性β细胞量是这些影响全世界3亿8000万人的疾病的一个重要治疗目标。最近的研究表明，抑制DYRK1A促进在体外和体内的人类β细胞增殖，并且在长时间的治疗后，可以增加葡萄糖依赖性胰岛素分泌[Dirice等人,Diabetes.2016；65(6):1660-71；Wang等人,NatMed.2015；21(4):383-8]。这些结果清楚地表明，强的选择性DYRK1A抑制剂的使用将为包括糖尿病和肥胖在内的代谢性疾病的治疗和/或预防提供新的治疗途径。
本发明尤其涉及式(I)的化合物、其对映体和非对映体以及其与可药用酸或碱的加成盐:
其中:
◆R1和R2彼此独立地代表氢原子、卤原子、-NR5R5’或直链或支链的(C1-C6)烷基，
◆W3代表直链或支链的(C1-C6)烷氧基、-O-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-O-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-NRaRb、-NRa-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-NRa-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-NRa-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2、-Cy1、-Cy1-(C0-C6)亚烷基-Cy2、-Cy1-O-(C0-C6)亚烷基-Cy2、-(C1-C6)亚烷基-Cy1、-(C2-C6)亚烯基-Cy1、-(C2-C6)亚炔基-Cy1、-(C1-C6)亚烷基-O-Cy1，应当理解的是，以上所定义的亚烷基部分可以是直链或支链的，
◆W4代表氰基、环烷基、直链或支链的(C1-C6)烷基、直链或支链的(C2-C6)烯基、任选地被环烷基取代的直链或支链的(C2-C6)炔基，
◆R5和R5’彼此独立地代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
◆Ra和Rb彼此独立地代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
◆A1和A2彼此独立地代表CH或氮原子，
◆Cy1、Cy2和Cy3彼此独立地代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中:
-“芳基”是指苯基、萘基、联苯基或茚基，
-“杂芳基”是指由5至10个环成员组成的任意单环或双环基团，其具有至少1个芳香族部分并且包含1至4个选自氧、硫和氮的杂原子，
-“环烷基”是指包含3至11个环成员的任意单环或双环非芳香族碳环基团，其可包括稠环、桥环或螺环系统，
-“杂环烷基”是指由3至10个环成员组成的并且包含1至3个选自氧、硫、SO、SO2和氮的杂原子的任意单环或双环非芳香族的稠合或螺环基团，其可包括稠环、桥环或螺环系统，
-“-(C0-C6)亚烷基-”是指共价键(-C0亚烷基-)或含有1、2、3、4、5或6个碳原子的亚烷基，
所定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、烯基、炔基、亚烷基、亚烯基、亚炔基可以被1至4个选自直链或支链的(C1-C6)烷基、直链或支链的(C2-C6)烯基、直链或支链的(C2-C6)炔基、任选地被–NRcRd或被1至3个卤原子取代的直链或支链的(C1-C6)烷氧基、直链或支链的(C1-C6)烷基-S-、羟基、氧代(或在适当情况下的N-氧化物)、硝基、氰基、-C(O)-ORc、-C(O)-Rc、-O-C(O)-Rd、-C(O)-NRcRd、-NRc-C(O)-Rd、-NRcRd、直链或支链的(C1-C6)多卤代烷基或卤素的基团取代，应当理解的是，Rc和Rd彼此独立地代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基。
在可药用酸中，可以提及但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、膦酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、樟脑酸等。
在可药用碱中，可以提及但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、叔丁基胺等。
有利地是，R1代表氢并且R2代表-NH2基团。
在本发明的一个实施方案中，A1代表CH基团。
在本发明的另一个实施方案中，A1代表氮原子。
在本发明的一个优选的实施方案中，A2代表氮原子。
或者，A2代表CH基团。当A2代表CH基团时，A1优选代表CH基团。
在本发明的另一个实施方案中，W3代表直链或支链的(C1-C6)烷氧基、-O-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-O-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-NRa-(C1-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-NRa-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2、-Cy1-O-(C0-C6)亚烷基-Cy2、-(C1-C6)亚烷基-Cy1、-(C2-C6)亚烯基-Cy1、-(C2-C6)亚炔基-Cy1、-(C1-C6)亚烷基-O-Cy1，应当理解的是，以上所定义的亚烷基部分可以是直链或支链的。
或者，W3代表Cy1基团，其选自:1,3-苯并二氧杂环戊烯基、1H-吲哚基、苯基、吡啶基、2,3-二氢-1,4-苯并二英基、1-苯并噻吩基、1-苯并呋喃基、3,4-二氢萘基、1,2,3,4-四氢萘基、3,4-二氢-2H-1,4-苯并嗪基，其中前述基团任选地按照之前描述的定义被取代。
在另一个实施方案中，W3代表:(i)–NRa-Cy1基团，其中Cy1代表选自下列的基团:苯基、2,3-二氢-1H-茚和1,2,3,4-四氢萘，其中前述基团任选地按照之前描述的定义被取代；或(ii)–NRa-(C1-C6)亚烷基-Cy1基团，其中Cy1代表选自下列的基团:苯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、1H-吡唑基、1,3-噻唑基、1,2-唑基、环己基、环丙基和1H-吲哚基，其中前述基团任选地按照之前描述的定义被取代。
在一个具体的实施方案中，W3代表-亚苯基-(C0-C6)亚烷基-Cy2。
更优选地，W3代表-O-(C1-C6)亚烷基-Cy1或-NRa-(C1-C6)亚烷基-Cy1，其中Cy1是苯基或吡啶基，后述基团任选地被一个或两个选自甲氧基、甲基或卤素的基团取代。
优选的W4基团是如下基团:甲基；丙-2-基；丙-1-烯-2-基；乙烯基；氰基；乙炔基；环丙基；环丙基乙炔基。更优选甲基。
优选的本发明化合物包括在以下组中:
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2-甲氧基苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-4-[2-甲基-4-(噻吩-3-基甲氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氯苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-2-甲基-N-(2-甲基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2-氯-6-氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-2-甲基-N-[(3-甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-[(3-氟吡啶-2-基)甲基]-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
其对映体和非对映体以及其与可药用酸或碱的加成盐。
本发明还涉及用于制备式(I)化合物的方法，该方法的特征在于将式(II)的化合物用作原料
其中T代表卤原子、甲硫基、环烷基或直链或支链的(C1-C6)烷基，并且A2如式(I)中所定义，
将该化合物在适宜的醇或胺衍生物的存在下进行亲核取代反应，或与适宜的硼酸衍生物进行偶联，
以生成式(III)的化合物:
其中T如前所定义，A2和W3如式(I)中所定义，
将式(III)的化合物:
(i)当T代表甲硫基时，将其转化成甲磺酰基衍生物，然后与NaCN反应并进一步与适宜的硼酸衍生物进行偶联，
(ii)或者直接与适宜的硼酸衍生物进行偶联，
(iii)或者与4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双-1,3,2-二氧硼戊环进行偶联以生成:
将该式(III’)的化合物进一步与适宜的卤化物进行反应，
以生成式(IV)的化合物:
其中T’代表卤原子、氰基、环烷基或直链或支链的(C1-C6)烷基，并且A1、A2、R1、R2和W3如式(I)中所定义，
当T’代表卤原子时，所述式(IV)的化合物:
-可以与适宜的炔基(或烯基)硼酸衍生物或炔基(或烯基)(三氟)硼酸酯衍生物盐进行偶联，
以生成式(I)的化合物，
所述式(I)的化合物可以根据常规的分离技术进行纯化，如果需要，将其转化成其与可药用酸或碱的加成盐，并且任选地根据常规分离技术将其分离成其异构体，
应当理解，在上述方法过程中被认为适合的任意时间，试剂或合成中间体的一些基团(羟基、氨基…)可以根据合成的需要进行保护然后脱保护。
本发明还涉及用于制备式(I)化合物的另一种方法，该方法的特征在于将式(II)的化合物用作原料:
其中W4和A2如式(I)中所定义，
将式(II)的化合物与适宜的硼酸衍生物进行偶联，
以生成式(V)的化合物:
其中A1、A2、R1、R2和W4如式(I)中所定义，
将该式(V)的化合物进行亲核取代反应，或与适宜的硼酸衍生物进行偶联反应，或与式的化合物进行偶联，其中R3代表氢或Cy1，以生成式(I)的化合物，
所述式(I)的化合物可以根据常规的分离技术进行纯化，如果需要，将其转化成其与可药用酸或碱的加成盐，并且任选地根据常规分离技术将其分离成其异构体，
应当理解，在上述方法过程中被认为适合的任意时间，试剂或合成中间体的一些基团(羟基、氨基…)可以根据合成的需要进行保护然后脱保护。
以上提到的式(II)的化合物、醇和氨基衍生物、硼酸衍生物、硼酸酯盐衍生物和可以购买到或者可以由本领域技术人员使用文献中记载的常规化学反应制得。
本发明化合物的药理学研究已经证实它们是强的DYRK1/CLK1抑制剂，相对于其它激酶例如CDK9，它们对DYRK1和CLK1具有高度选择性。
更具体地，本发明的化合物可用于治疗化疗或放疗抗性的癌症。
在关注的癌症治疗中，可以提及但不限于血液系统癌症(淋巴瘤和白血病)和实体肿瘤，包括癌、肉瘤或母细胞瘤。可以提到的更优选的是急性巨核细胞白血病(AMKL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、卵巢癌、胰腺癌、胃肠道间质瘤(GIST)、骨肉瘤(OS)、结直肠癌(CRC)、神经母细胞瘤和胶质母细胞瘤。
在另一个实施方案中，本发明的化合物可用于治疗诸如阿尔茨海默氏症、帕金森氏症和亨廷顿病等神经退行性疾病，以及唐氏综合症、精神发育迟滞和运动缺陷。
另外，本发明的化合物可用于代谢性疾病、包括糖尿病和肥胖的治疗和/或预防。
本发明还涉及药物组合物，其包含至少一种式(I)的化合物与一种或多种可药用赋形剂的组合。
在本发明的药物组合物中，更具体地可以提及适合于口服、胃肠外、鼻、经皮或透皮、直肠、经舌、眼部或呼吸道施用的那些，尤其是片剂或糖衣丸、舌下片、小药囊(sachets)、药包(paquets)、胶囊、舌下给药剂型(glossettes)、锭剂、栓剂、霜剂、软膏剂、皮肤凝胶和可饮用或可注射安瓿。
剂量可以根据患者的性别、年龄和体重、施用途经、治疗适应症或任意相关治疗的性质的不同而改变，且范围在0.01mg－5g/24小时内，分一次或多次施用。
此外，本发明还涉及式(I)化合物与选自基因毒物、有丝分裂抑制剂、抗代谢药、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂、信号通路抑制剂、磷酸酶抑制剂、细胞凋亡诱导剂和抗体的抗癌药的组合，并且还涉及包含该类组合的药物组合物及其在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
式(I)化合物与抗癌剂的组合可以同时或顺序施用。施用途径优选口服途径，并且相应的药物组合物可以瞬间或延迟释放活性成分。组合中的化合物可以以各自含有一种活性成分的两种独立的药物组合物的形式施用，或者以其中的活性成分以混合物存在的单一药物组合物的形式施用。
本发明的化合物还可以与放疗组合用于治疗癌症。
缩写列表
缩写 名称
Ac 乙酰基
aq. 含水的
Bn 苄基
Boc 叔丁氧基羰基保护基
dppf 1,1’-双(二苯基膦)二茂铁
DCM 二氯甲烷
DEAD 偶氮二甲酸二乙酯
DIBAL 二异丁基氢化铝
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
dtbpf 1,1'-双(二叔丁基膦)二茂铁
eq. 当量
Et 乙基
IPA 异丙醇
HPLC-MS 液相色谱–质谱
LiHMDS 二(三甲基硅基)氨基锂
mCBPA 间氯过氧苯甲酸
Me 甲基
NBS N-溴琥珀酰亚胺
nBu 正丁基
nBuPAd2 正丁基二金刚烷基膦
Pd/C 钯碳
Ph 苯基
PPh3 三苯基膦
pTSA 对甲苯磺酸
RT 保留时间
sat. 饱和的
SEM [2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基
tBu 叔丁基
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
通用方法
所有得自商品来源的试剂不经进一步纯化直接使用。无水溶剂得自商品来源并且不经进一步干燥直接使用。快速色谱用预填充硅胶短柱(Strata SI-1；Phenomenex,Cheshire UK或1ST Flash II,Argonaut,Hengoed,UK)进行，或通过自动快速色谱用Combiflash Rf装置(Teledyne Isco Inc.)用RediSep Rf预填充硅胶柱(Teledyne IscoInc.)或SilaSep预填充柱(Silicycle Inc.)进行。薄层色谱用涂敷Merck 60F254型硅胶的5x 10cm板进行。
本发明的化合物通过高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)在Agilent HP1200快速分辨质谱检测器6140多模源M/z范围150至1000amu或Agilent HP1100质谱检测器1946D ESI源M/z范围150至1000amu上进行表征。下面列出的条件和方法对这两种机器是相同的。
运行时间为7.5分钟的柱:GeminiNX,5μm,C18,30x 2.1mm(Phenomenex)或ZorbaxEclipse Plus,3.5μm,C18,30x 2.1mm(Agilent)。温度:35℃。
运行时间为3.75分钟的柱:GeminiNX,5μm,C18,30x 2.1mm(Phenomenex)或ZorbaxEclipse Plus,3.5μm,C18,30x 2.1mm(Agilent)。温度:35℃。
运行时间为1.9分钟的柱:Kinetex,2.5μm,C18,50x 2.1mm(Phenomenex)或Accucore,2.6μm,C18,50x 2.1mm。温度:55℃。
流动相:A-H2O+10mmol/甲酸铵+0.08％(v/v)甲酸，pH约3.5。
B-95％乙腈+5％A+0.08％(v/v)甲酸。
注射体积:1μL
方法A"短"法梯度表，正(pos)或正和负(pos/neg)电离
时间(min) 溶剂A(％) 溶剂B(％) 流速(mL/min)
0 95 5 1
0.25 95 5 1
2.50 5 95 1
2.55 5 95 1.7
3.60 5 95 1.7
3.65 5 95 1
3.70 95 5 1
3.75 95 5 1
方法B"超短"法梯度表，正(pos)或正和负(pos/neg)电离
时间(min) 溶剂A(％) 溶剂B(％) 流速(mL/min)
0 95 5 1.3
0.12 95 5 1.3
1.30 5 95 1.3
1.35 5 95 1.6
1.85 5 95 1.6
1.90 5 95 1.3
1.95 95 5 1.3
检测:在230、254和270nm UV检测。
还通过核磁共振(NMR)对本发明的化合物进行了表征。分析用Bruker DPX-400波谱仪进行，在400MHz测定质子NMR。光谱对照是已知的溶剂化学位移。质子核磁共振数据报告如下：以ppm为单位的化学位移(δ)，在其之后是裂分多重性，其中s＝单峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quint＝五重峰，m＝多重峰，dd＝双二重峰，dt＝双三重峰，dm＝双多重峰，ddd＝双双二重峰，td＝三二重峰，qd＝四二重峰，br＝宽峰，最后是积分值。
某些本发明的化合物通过制备型HPLC纯化。所述纯化在Waters FractionLynx MS自动纯化系统上进行，使用来自Phenomenex的5μm C18(2),100mm×20mm i.d.柱，运行流速20cm3min-1，UV二极管阵列检测(210–400nm)，并根据质量进行收集。
在pH 4条件下:溶剂A＝10mM乙酸铵在HPLC级水中的溶液+0.08％v/v甲酸。溶剂B＝95％v/v HPLC级乙腈+5％v/v溶剂A+0.08％v/v甲酸。
在pH 9条件下:溶剂A＝10mM乙酸铵在HPLC级水中的溶液+0.08％v/v氨溶液。溶剂B＝95％v/v HPLC级乙腈+5％v/v溶剂A+0.08％v/v氨溶液。
质谱仪为Waters Micromass ZQ2000波谱仪，正或负离子电喷雾电离模式操作，分子量的扫描范围为150到1000。
某些本发明的化合物用连接到带有ESI源的Agilent TOF 6230单四极杆的Agilent 1290 Infinity II系列仪器进行表征。除非另有说明，以正负切换模式电离记录高分辨率质谱。紫外检测采用二极管阵列检测器，波长为230、254和270nm。柱：ThermoAccucore 2.6μM C18,50x2mm，柱温55℃。缓冲液A：水/10mM甲酸铵/0.04％(v/v)甲酸,pH＝3.5。缓冲液B:乙腈/5.3％(v/v)A/0.04％(v/v)甲酸(注射体积:1μL)。
以下制备例和实施例举例说明了本发明，但不以任何方式限定本发明。
通用方法I
通用方法II
通用方法III
在通用方法I、II和III中:
-R1和R2如式(I)中所定义，
-R3代表直链或支链的(C1-C6)烷基、-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2，应当理解的是，Cy1和Cy2彼此独立地代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基。
实施例1:4-甲氧基-2-甲基-5-(吡啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
步骤1:5-溴-4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(制备例1)
向5-溴-4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1g,4.06mmol)的DMF(30mL)溶液中在0℃及氮气氛下加入NaH(60％的矿物油分散液,1eq)。将反应混合物搅拌30分钟，然后在0℃下加入SEM-Cl(1.1eq)并在氮气氛下升温至室温过夜。将反应混合物用乙醚(100mL)稀释，用盐水(4x 50mL)洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到白色固体状产物(1.18g,3.13mmol,77％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),5.65(s,2H),3.67–3.57(m,2H),2.74(s,3H),0.98–0.87(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.59min；m/z＝RT＝1.59min；m/z＝377[M+H]+
步骤2:5-溴-4-甲氧基-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(制备例2)
向NaH(60％的矿物油分散液,2eq)的THF(10mL)悬浮液中在0℃及氮气氛下滴加MeOH(1.3eq)。搅拌10分钟后加入步骤1所得到的化合物(0.5g,1.3mmol)的THF(3mL)溶液。将反应混合物于0℃搅拌30分钟，然后在1小时内升温至室温。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩得到澄清油状产物(0.494g,1.3mmol,100％)。该化合物不经进一步纯化直接使用。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.75(s,1H),5.59(s,2H),4.12(s,3H),3.64–3.55(m,2H),2.65(s,3H),0.97–0.87(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.53min；m/z＝374[M+H]+
步骤3:4-甲氧基-2-甲基-5-(吡啶-4-基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(制备例3)
将步骤2中得到的化合物和(吡啶-4-基)硼酸(1.5eq)在氮气氛下溶于THF/水(6:1,5mL)。加入碳酸钾(3eq)和Pd(dtbpf)Cl2(10％wt)并将形成的混合物在氮气氛下脱气5分钟。将反应混合物在CEM微波反应器上于120℃加热1小时。将反应混合物用水(10mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到油状产物(0.11g,0.30mmol,44％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.67–8.61(m,2H),8.11(s,1H),7.83–7.77(m,2H),5.68(s,2H),4.13(s,3H),3.70–3.61(m,2H),2.68(s,3H),0.99–0.88(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝1.37min；m/z＝371[M+H]+
步骤4:4-甲氧基-2-甲基-5-(吡啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(制备例4)
向步骤3所得到的化合物(0.11g,0.3mmol)的THF(3mL)溶液中加入乙二胺(5eq)，然后加入TBAF(1M的THF溶液,5eq)。将反应液在CEM微波反应器上于120℃加热1小时。将反应混合物用水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。然后将残余物用EtOAc研磨得到白色固体状产物(15mg,0.06mmol,21％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.33(s,1H),8.58–8.50(m,2H),7.85(s,1H),7.78–7.72(m,2H),4.05(s,3H),2.57(s,3H)。
LC/MS(方法A):RT＝1.49min；m/z＝241[M+H]+
实施例6:2-甲基-5-(2-甲基吡啶-4-基)-4-[(3R)-哌啶-3-基甲氧基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
步骤1:4-(苄基氧基)-5-溴-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从5-溴-4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(实施例1,步骤1)(5g,13.27mmol)和苄醇(1.3eq)开始，按照制备例2所述的方法得到浅黄色油状所需产物(5.4g,12mmol,91％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.77(s,1H),7.68–7.60(m,2H),7.54–7.45(m,2H),7.47–7.38(m,1H),5.67(s,2H),5.60(s,2H),3.65–3.55(m,2H),2.67(s,3H),0.97–0.87(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝3.04min；m/z＝450[M+H]+
步骤2:4-(苄基氧基)-2-甲基-5-(2-甲基吡啶-4-基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从步骤1所得到的化合物(2g,4.46mmol)和(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(1.2eq)开始，采用制备例3所述的方法。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到棕色油状产物(1.311g,2.8mmol,64％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.36(dd,1H),8.08(s,1H),7.66–7.40(m,7H),5.67(s,2H),5.63(s,2H),3.69–3.60(m,2H),2.71(s,3H),2.31(s,3H),0.99–0.90(m,2H),0.00(s,9H)。
步骤3:2-甲基-5-(2-甲基吡啶-4-基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酚(制备例5)
将步骤2所得到的化合物(1.311g,2.8mmol)和Pd/C(10％wt)的EtOH(40mL)悬浮液在H2氛下室温搅拌2小时。将悬浮液用硅藻土塞过滤并真空浓缩。将残余物用异己烷研磨得到米色固体状产物(0.886g,2.39mmol,84％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.14(s,1H),8.47–8.40(m,1H),8.01–7.91(m,3H),5.54(s,2H),3.62(dd,2H),2.53(s,3H),2.43(s,3H),0.92(dd,2H),0.00(s,9H)。
步骤4:(3R)-3-({[2-甲基-5-(2-甲基吡啶-4-基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(制备例6)
向步骤3所得到的化合物(100mg,0.27mmol)和(3R)-3-(羟基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5eq)的THF(5mL)溶液中在室温及氮气氛下加入PPh3(1.5eq)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟然后在冰浴中冷却，然后加入DEAD(1.5eq)。移走冰浴并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩并将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到澄清油状产物(122mg,0.214mmol,80％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,1H),8.08(s,1H),7.72(s,1H),7.61(d,1H),5.67(s,2H),4.51(dd,1H),4.40(dd,1H),3.68–3.59(m,2H),3.43(s,9H),2.66(s,3H),2.56(s,3H),1.88(d,1H),1.69(s,1H),1.47-1.19(m,7H),0.99–0.87(m,2H),0.00(s,9H)。
步骤5:2-甲基-5-(2-甲基吡啶-4-基)-4-[(3R)-哌啶-3-基甲氧基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(制备例7)
向步骤4得到的化合物(78mg,0.137mmol)的DCM(5mL)溶液中在氮气氛及室温下加入TFA(3mL)并搅拌3小时。将反应混合物直接上样到scx-2柱(10g)上，用MeOH和DCM洗涤并用1N NH3的MeOH溶液洗脱。将级分真空浓缩并将残余物通过快速色谱纯化，用2N NH3的MeOH溶液和DCM洗脱得到白色固体状所需产物(18mg,0.024mmol,17％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.24(s,1H),8.38(d,1H),7.80(s,1H),7.66(d,1H),7.54(dd,1H),4.30(qd,2H),3.05–2.96(m,1H),2.84(dt,1H),2.54(s,3H),2.51(s,3H),2.47–2.36(m,1H),2.32(dd,1H),1.97–1.86(m,1H),1.79(dd,1H),1.62–1.49(m,1H),1.46–1.02(m,3H)。
LC/MS(方法A):RT＝1.35min；m/z＝338[M+H]+
实施例20:4-[2-甲基-4-(1-苯基乙氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
步骤1:4-(4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-胺
从5-溴-4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.91g,2.42mmol)和4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-胺(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到白色固体状所需产物(0.257g,0.659mmol,27％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.02(t,2H),6.74–6.63(m,2H),6.08(s,2H),5.72(s,2H),3.66(dd,2H),2.76(s,3H),0.99–0.88(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.16min；m/z＝390[M+H]+
步骤2:4-[2-甲基-4-(1-苯基乙氧基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
从步骤1所得到的化合物(100mg,0.25mmol)和1-苯基乙-1-醇(1.3eq)开始，按照制备例2所述的方法得到油状产物(107mg,0.224mmol,90％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.38min；m/z＝476[M+H]+
步骤3:4-[2-甲基-4-(1-苯基乙氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
从步骤2所得到的化合物(107mg,0.224mmol)开始，按照制备例4所述的方法得到白色固体状所需产物(40mg,0.115mmol)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.22(s,1H),7.96(d,1H),7.67(s,1H),7.59–7.51(m,2H),7.47–7.38(m,2H),7.40–7.31(m,1H),6.99–6.88(m,2H),6.54(q,1H),5.86(s,2H),2.6(s,3H),1.76(d,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.09min；m/z＝346[M+H]+
下表1中的实施例1-28通过通用方法I-III所描述的方法用适宜的可购买到的硼酸酯和醇制备。也包括了实施例1、6、20的化合物。表1:HRMS(TOF,ESI)数据
通用方法IV
通用方法V
通用方法VI
在通用方法IV、V和VI中:
-R1和R2如式(I)中所定义，
-R3代表氢原子、直链或支链的(C1-C6)烷基、-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2，应当理解的是，Cy1和Cy2彼此独立地代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
并且R’3代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
或者R3和R’3与携带它们的氮原子形成杂环烷基或杂芳基，
-G代表选自式(I)中所定义的取代基列表的基团，应当理解的是，苯基可以被1至4个独立的G基团取代。
实施例30:4-[2-甲基-4-(吡咯烷-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
步骤1:4-[2-甲基-4-(吡咯烷-1-基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺(制备例8)
向4-(4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-胺(实施例20,步骤1)(50mg,0.128mmol)的THF(3mL)溶液中加入吡咯烷(3eq)。将反应混合物在CEM微波反应器上于90℃加热1小时(通过LC-MS监测反应)。将反应混合物用DCM(10mL)和水(10mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩得到所需产物(58mg,>100％)。经LCMS估计的纯度约为90％。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法A):RT＝2.08min；m/z＝425[M+H]+
步骤2:4-[2-甲基-4-(吡咯烷-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
从步骤1所得到的化合物(58mg)开始，按照制备例4所述的方法得到白色固体状所需产物(23mg,0.078mmol,两步的收率为61％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ:11.71(s,1H),7.86(d,1H),7.17(d,1H),6.56–6.44(m,2H),5.89(s,2H),3.31(m,4H),2.41(s,3H),1.72–1.63(m,4H)
实施例32:5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-苄基-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺步骤1:N-苄基-5-溴-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从5-溴-4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(实施例1,步骤1)(1g,2.65mmol)和苯基甲胺(4eq)开始，采用制备例8所述的方法。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到澄清油状产物(1.08g,2.41mmol,91％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.55(s,1H),7.49–7.26(m,5H),7.04(t,1H),5.51(s,2H),4.85(d,2H),3.62–3.53(m,2H),2.47(s,3H),0.99–0.85(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.95min；m/z＝449[M+H]+
步骤2:5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-苄基-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤1所得到的化合物(0.702g,1.57mmol)和4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-胺(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅棕色油状所需产物(0.335g,0.727mmol,46％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.97(dd,1H),7.50–7.34(m,5H),7.35–7.26(m,1H),6.65–6.56(m,2H),6.09(t,1H),6.06(s,2H),5.58(s,2H),4.77(d,2H),3.67–3.58(m,2H),2.51(s,3H),0.98–0.84(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.33min；m/z＝461[M+H]+
步骤3:5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-苄基-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤2所得到的化合物(0.335g,0.727mmol)开始，按照制备例4所述的方法得到白色固体状所需产物(51mg,0.154mmol,21％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),7.89(d,1H),7.42–7.28(m,4H),7.29–7.19(m,2H),6.60–6.49(m,2H),5.92(d,3H),4.70(d,2H),2.42(s,3H)。
LC/MS(方法A):RT＝1.65min；m/z＝331[M+H]+
实施例52:5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
步骤1:5-溴-N-[(2,6-二氟苯基)甲基]-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从5-溴-4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(实施例1,步骤1)(1.2g,3.19mmol)和(2,6-二氟苯基)甲胺(4eq)开始，采用制备例8所述的方法。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到澄清油状所需产物。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.56(s,1H),7.46(tt,1H),7.24–7.11(m,2H),6.81(t,1H),5.51(s,2H),4.92(d,2H),3.62–3.53(m,2H),2.49(s,3H),0.97–0.85(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.96min；m/z＝485[M+H]+
步骤2:5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤1所得到的化合物(1g,2.07mmol)和4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-胺(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅棕色油状所需产物(0.422g,0.849mmol,41％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.99(dd,1H),7.52–7.39(m,2H),7.22–7.11(m,2H),6.61–6.53(m,2H),6.05(d,3H),5.57(s,2H),4.85(d,2H),3.66–3.57(m,2H),2.53(s,3H),1.00–0.86(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.32min；m/z＝497[M+H]+
步骤3:5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤2所得到的化合物(0.422g,0.849mmol)开始，按照制备例4所述的方法得到白色固体状产物(0.104g,0.284mmol,33％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ11.74(s,1H),7.90(d,1H),7.37(tt,1H),7.24(d,1H),7.09(t,2H),6.54–6.45(m,2H),5.93(s,2H),5.85(t,1H),4.77(d,2H),2.43(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.96min；m/z＝367[M+H]+
实施例129:5-(2-氨基吡啶-4-基)-2-甲基-N-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
步骤1:5-溴-2-甲基-N-苯基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(制备例9)
在室温及氮气氛下，向5-溴-4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(实施例1,步骤1)(0.2g,0.53mmol)的DMF(2mL)溶液中加入苯胺(1.2eq)，然后加入t-BuOK(2eq)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用水(10mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到澄清油状产物(0.109g,0.251mmol,47％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.68min；m/z＝433[M+H]+
步骤2:N-{4-[2-甲基-4-(苯基氨基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-基}氨基甲酸叔丁酯
从步骤1所得到的化合物(0.109g,0.251mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.2eq)开始，按照制备例3所述的方法得到澄清油状产物(0.118g,0.215mmol,86％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.68min；m/z＝547[M+H]+
步骤3:5-(2-氨基吡啶-4-基)-2-甲基-N-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤2所得到的化合物(0.118g,0.215mmol)开始，按照制备例7所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(37mg,0.117mmol,54％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.00(d,1H),8.00(d,1H),7.72–7.65(m,3H),7.45(d,1H),7.35–7.28(m,2H),7.00(m,1H),6.71(dd,1H),6.63(d,1H),6.25(s,2H),2.53(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.87min；m/z＝317[M+H]+
下表2中的实施例29-146通过通用方法IV-VI所描述的方法用适宜的可购买到的硼酸酯和胺制备。也包括了实施例30、32、129的化合物。
表2:HRMS(TOF,ESI)数据
通用方法VII
通用方法VIII
通用方法IX
通用方法X
在通用方法VII、VIII、IX和X中:
-R1和R2如式(I)中所定义，
-R3代表氢原子、直链或支链的(C1-C6)烷基、-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2，应当理解的是，Cy1和Cy2彼此独立地代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
并且R’3代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
或者R3和R’3与携带它们的氮原子形成杂环烷基或杂芳基，
-R4代表氢原子、直链或支链的(C1-C6)烷基或环烷基，
-G代表选自式(I)中所定义的取代基列表的基团，应当理解的是，苯基可以被1至4个独立的G基团取代。
实施例148:5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-乙炔基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
步骤1:5-溴-2-氯-N-[(2,6-二氟苯基)甲基]-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从5-溴-2,4-二氯-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(按照WO2007/104944所述的方法制备)(1g,2.52mmol)和(2,6-二氟苯基)甲胺(2eq)开始，采用制备例8所述的方法。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到澄清油状产物(1.25g,2.48mmol,98％)。
LC/MS(方法B):RT＝3.0min；m/z＝505[M+H]+
步骤2:N-[4-(2-氯-4-{[(2,6-二氟苯基)甲基]氨基}-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯
从步骤1所得到的化合物(1.25g,2.48mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.2eq)开始，按照制备例3所述的方法得到米色固体状所需产物(1.063g,1.72mmol,69％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),8.30(d,1H),7.95(d,1H),7.76(s,1H),7.44(tt,1H),7.19–7.06(m,3H),6.78(t,1H),5.57(s,2H),4.82(d,2H),3.67–3.57(m,2H),1.54(s,9H),0.98–0.84(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.71min；m/z＝617[M+H]+
步骤3:4-{2-[2-(叔丁基二甲基硅烷基)乙炔基]-4-{[(2,6-二氟苯基)甲基]氨基}-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}吡啶-2-胺(制备例10)
将步骤2中得到的化合物(0.5g,0.81mmol)和叔丁基二甲基[2-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)乙炔基]硅烷(1.2eq)在氮气氛下溶于1,4-二恶烷(10mL)。加入2M Na2CO3水溶液(1mL)和四(三苯基膦)钯(0.08mmol)并将形成的混合物在氮气氛下脱气5分钟。将反应混合物在CEM微波反应器上于160℃加热1小时。将反应混合物用硅藻土塞过滤。将滤液用水(10mL)和EtOAc(50mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到黄色油状产物(0.379g)。通过LCMS估计的纯度约为50％。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法A):RT＝2.84min；m/z＝621[M+H]+
步骤4:5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-乙炔基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤3所得到的化合物(0.379g)开始，按照制备例4所述的方法得到白色固体状所需产物(13mg,0.003mmol)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.19(s,1H),7.97(d,1H),7.54–7.41(m,2H),7.19(q,2H),6.62–6.54(m,2H),6.09(t,1H),6.03(s,2H),4.86(d,2H),4.06(s,1H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.99min；m/z＝377[M+H]+
实施例153:4-[4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-(环丙基乙炔基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
步骤1:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1g,5.32mmol)和(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)硼酸(1.05eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(1.45g,3.84mmol)。通过LCMS估计的纯度约为70％。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法B):RT＝1.2min；m/z＝274[M+H]+
步骤2:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-氯-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从步骤1所得到的化合物(1.45g,3.84mmol)开始，按照制备例1所述的方法得到白色固体状所需产物(1.005g,2.49mmol,65％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,1H),7.85(dd,1H),7.73(d,1H),7.21(d,1H),7.12(d,1H),6.25(s,2H),5.68(s,2H),3.73–3.53(m,2H),0.99–0.83(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.57min；m/z＝404[M+H]+
步骤3:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-(环丙基乙炔基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从步骤2所得到的化合物(0.45g,1.11mmol)和(2-环丙基-乙炔-1-基)-三氟硼酸钾(按照Org.Lett.,2010,12,3272-3275制备)(1.4eq)开始，按照制备例10所述的方法得到红色油状所需产物(0.22g,0.512mmol,46％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.95(dd,1H),7.89–7.77(m,1H),7.73(dd,1H),7.26–7.03(m,2H),6.27–6.18(m,2H),5.71(s,2H),3.74–3.58(m,2H),1.50(m,1H),1.01–0.83(m,6H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.61min；m/z＝434[M+H]+
步骤4:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-5-溴-2-(环丙基乙炔基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(制备例11)
向步骤3所得到的化合物(0.22g,0.512mmol)的DMF(10mL)溶液中在0℃及氮气氛下加入NBS(1.05eq)并将反应液在3小时内升温至室温。将反应混合物用水(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到棕色油状产物(0.147g,0.286mmol,56％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.13(s,1H),7.32–7.22(m,2H),7.13(d,1H),6.20(s,2H),5.66(s,2H),3.67–3.58(m,2H),1.69(tt,1H),1.04–0.99(m,2H),0.95–0.86(m,4H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.64min；m/z＝512[M+H]+
步骤5:N-{4-[4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-(环丙基乙炔基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-基}氨基甲酸叔丁酯
从步骤4得到的化合物(0.110g,0.21mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到米色固体状所需产物(96mg,0.153mmol,71％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.63min；m/z＝626[M+H]+
步骤6:4-[4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-(环丙基乙炔基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
从步骤5得到的化合物(96mg,0.153mmol)开始，按照制备例7所述的方法得到米色固体状所需产物(34mg,0.083mmol,54％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.51(s,1H),7.83(s,1H),7.61(d,1H),6.96(d,1H),6.88–6.80(m,1H),6.74(d,1H),6.15(t,1H),6.02(s,2H),6.04–5.98(m,1H),5.68(s,2H),1.63(tt,1H),1.07–0.90(m,2H),0.91–0.79(m,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.99min；m/z＝396[M+H]+
实施例157:5-(2-氨基吡啶-4-基)-4-[(2,6-二氟苄基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-甲腈
步骤1:5-溴-N-[(2,6-二氟苯基)甲基]-2-(甲硫基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从5-溴-4-氯-2-(甲硫基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(按照WO2007/104944所述的方法制备)(0.77g,1.88mmol)和2,6-二氟苄基胺(3eq)开始，采用制备例8所述的方法制得浅黄色油状所需产物(0.856g,1.66mmol,88％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.49(m,2H),7.18(t,2H),6.97(s,1H),5.49(s,2H),4.94(d,2H),3.58(m,2H),2.55(s,3H),0.98–0.87(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.7min；m/z＝515[M+H]+
步骤2:5-溴-N-[(2,6-二氟苯基)甲基]-2-甲磺酰基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(制备例12)
向步骤1所得到的化合物(0.856g,1.66mmol)的DCM(20mL)溶液中在0℃及氮气氛下分批加入mCBPA(2.5eq)。将反应混合物在相同的温度下搅拌1小时，然后在2小时内升温至室温。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和DCM(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩得到黄色油状产物(0.831g,1.51mmol,92％)。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法B):RT＝1.53min；m/z＝549[M+H]+
步骤3:5-溴-4-{[(2,6-二氟苯基)甲基]氨基}-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-甲腈(制备例13)
向步骤2所得到的化合物(0.660g,1.11mmol)的DMF(15mL)溶液中在氮气氛及室温下加入氰化钠(2.5eq)。将反应混合物于90℃加热2小时。将反应混合物冷却至室温，用水(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到澄清油状产物(0.453g,0.916mmol,76％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.97(s,1H),7.55–7.41(m,2H),7.19(t,2H),5.58(s,2H),4.93(d,2H),3.63–3.53(m,2H),0.99–0.83(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.94min；m/z＝496[M+H]+
步骤4:N-[4-(2-氰基-4-{[(2,6-二氟苯基)甲基]氨基}-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯
从步骤3所得到的化合物(0.225g,0.46mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到白色固体状所需产物(0.135g,1.51mmol,49％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),8.32(d,1H),8.03(s,1H),7.97(d,1H),7.45(t,1H),7.19–7.08(m,3H),6.94(t,1H),5.67(s,2H),4.84(d,2H),3.63(t,2H),0.99–0.85(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.98min；m/z＝608[M+H]+
步骤5:5-(2-氨基吡啶-4-基)-4-[(2,6-二氟苄基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-甲腈
从步骤4得到的化合物(0.135g,1.51mmol)开始，按照制备例7所述的方法得到白色固体状所需产物(17mg,0.04mmol)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.56(s,1H),7.92(d,1H),7.64(s,1H),7.40(tt,1H),7.11(t,2H),6.54–6.43(m,3H),5.98(s,2H),4.77(d,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.03min；m/z＝378[M+H]+
实施例158:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-5-(2,6-二氨基吡啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-甲腈
步骤1:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-(甲硫基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从4-氯-2-(甲硫基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(按照WO2007/104944所述的方法制备)(0.411g,1.25mmol)和(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)硼酸(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅黄色油状所需产物(0.462g,1.11mmol,89％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ7.84(dd,1H),7.78–7.69(m,2H),7.20(d,1H),6.99(d,1H),6.24(s,2H),5.68(s,2H),3.68(m,2H),2.71(s,3H),1.00–0.86(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.63min；m/z＝416[M+H]+
步骤2:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲磺酰基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从步骤1所得到的化合物(0.462g,1.11mmol)开始，按照制备例12所述的方法得到浅橙色油状所需产物(0.475g,1.06mmol,95％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.19(d,1H),8.01–7.92(m,2H),7.86(d,1H),7.29(d,1H),6.27(s,2H),5.81(s,2H),3.73–3.61(m,2H),3.57(s,3H),1.01–0.92(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.7min；m/z＝448[M+H]+
步骤3:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-甲腈
从步骤2所得到的化合物(0.260g,0.58mmol)开始，按照制备例13所述的方法得到黑色油状所需产物(0.200g,0.51mmol,87％)。
LC/MS(方法A):RT＝2.84min；m/z＝395[M+H]+
步骤4:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-5-溴-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-甲腈
从步骤3所得到的化合物(0.200g,0.51mmol)开始，按照制备例11所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(0.183g,0.386mmol,76％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,1H),7.40–7.28(m,2H),7.17(d,1H),6.22(s,2H),5.74(s,2H),3.71–3.57(m,2H),0.97–0.89(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.59min；m/z＝473[M+H]+
步骤5:N-[6-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(制备例14)
将(4-溴-6-叔丁氧基羰基氨基-吡啶-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(按照J.Org.Chem.2004,69,543-548所述的方法制备)(10g,25.27mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.5eq)、Pd(OAc)2(0.05eq)、1,1’-双(二苯基膦)二茂铁(0.05eq)和KOAc(3eq)在氮气氛及室温下溶于1,4-二恶烷(160mL)。将反应混合物在氮气氛下于80℃搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用硅藻土过滤并用温热的1,4-二恶烷洗涤。真空除去溶剂。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和DCM洗脱得到米色固体状产物(7.099g,16.3mmol,63％)。1H NMR(399MHz,CDCl3)δ8.16(brs,2H),7.92(s,2H),1.54(s,18H),1.34(s,12H)。
步骤6:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-5-(2,6-二氨基吡啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-甲腈
采用制备例3所述的方法，从步骤4得到的化合物(0.183g,0.386mmol)和步骤5得到的化合物(1.1eq)开始制备。将粗反应混合物真空浓缩并将残余物溶于DCM(2mL)和TFA(1.5mL)，按照制备例7所述的方法得到白色固体状所需产物(8.4mg,0.022mmol,6％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ13.07(s,1H),8.02(s,1H),7.09–6.97(m,2H),6.79(d,1H),6.04(s,2H),5.32(s,2H),5.21(s,4H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.92min；m/z＝372[M+H]+
下表3中的实施例147-158通过通用方法VII-X所描述的方法用适宜的可购买到的硼酸酯和胺制备。也包括了实施例148、153、157、158的化合物。
表3:HRMS(TOF,ESI)数据
实施例150利用制备例5所述的方法从实施例149制备。
通用方法XI
通用方法XII
通用方法XIII
通用方法XIV
通用方法XV
通用方法XVI
通用方法XVII
在通用方法XI至XVII中:
-R1和R2如式(I)中所定义，
-R3代表氢原子、直链或支链的(C1-C6)烷基、-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2，应当理解的是，Cy1和Cy2彼此独立地代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
并且R’3代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
或者R3和R’3与携带它们的氮原子形成杂环烷基或杂芳基，
-G代表选自式(I)中所定义的取代基列表的基团，应当理解的是，苯基可以被1至4个独立的G基团取代。
通用方法XVIII
其中R3代表氢、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基。
实施例162:4-[4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
步骤1:N-{4-[4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-基}氨基甲酸叔丁酯
从N-[4-(4-氯-2-甲基-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(按照实施例20,步骤1中所述的方法用N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯制备)(100mg,0.2mmol)和(3-氟-5-甲氧基苯基)硼酸(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到米色固体状所需产物(104mg,0.179mmol,88％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ9.69(s,1H),8.15(s,1H),8.06(d,1H),7.52(s,1H),6.94–6.79(m,2H),6.72(dd,1H),6.66(dd,1H),5.77(s,2H),3.70(dd,2H),3.5(s,3H),2.82(s,3H),1.49(s,9H),1.00–0.81(m,2H),0.00(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.66min；m/z＝580[M+H]+
步骤2:4-[4-(3-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺(制备例15)
向步骤1所得到的化合物(104mg,0.179mmol)的DCM(2mL)溶液中在0℃及氮气氛下滴加三氟化硼乙醚合物(2eq)并将反应混合物在4小时内升温至室温。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和DCM(20mL)稀释。将有机层分离并真空浓缩。将残余物溶于MeCN(2mL)，加入氢氧化铵溶液(28％氨水,2mL)并将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩并将残余物用乙醚研磨得到浅黄色粉末状产物(8.7mg,0.024mmol,14％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.39(s,1H),7.74(s,1H),7.59(d,1H),6.89(ddd,1H),6.81(dt,1H),6.66(dd,1H),6.20–6.14(m,1H),5.99(dd,1H),5.68(s,2H),3.51(s,3H),2.72(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.9min；m/z＝350[M+H]+
实施例164:4-[4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
步骤1:4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(制备例16)
将4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.511g,3.05mmol)和(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)硼酸(1.02eq)在氮气氛下溶于THF/水(10:1,10mL)。加入碳酸铯(2eq)和Pd(dppf)Cl2(10％wt)并将形成的混合物在氮气氛下脱气5分钟。将反应混合物在CEM微波反应器上于140℃加热1小时。将混合物用水(150mL)稀释并将形成的沉淀通过过滤收集得到米色固体状产物(0.88g,3.04mmol,99％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.27min；m/z＝290[M+H]+
步骤2:5-溴-4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯(制备例17)
向步骤1所得到的化合物(0.88g,3.04mmol)的DMF(15mL)溶液中在0℃及氮气氛下分批加入NBS(1.1eq)并将反应混合物在2小时内升温至室温(通过LCMS监测反应)。向混合物中加入二碳酸二叔丁酯(1.2eq)、DMAP(0.01eq)和三甲基胺(2eq)并在氮气氛下在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水(50mL)和EtOAc(50mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到浅黄色油状产物(0.681g,1.45mmol,48％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.05(s,1H),7.72(d,1H),7.59(d,1H),7.50(dd,1H),2.75(s,3H),1.64(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.6min；m/z＝470[M+H]+
步骤3:4-[4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺(制备例18)
将步骤2中得到的化合物(0.681g,1.45mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)在氮气氛下溶于THF/水(3:1,20ml)。加入碳酸钾(3eq)和Pd(dtbpf)Cl2(10％wt)并将形成的混合物在氮气氛下脱气5分钟。将反应混合物在氮气氛下于65℃加热过夜，冷却至室温并用水(10mL)和DCM(50mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到所需的偶联化合物。将化合物溶于2M HCl的MeOH溶液(4mL)并在CEM微波反应器上于90℃加热1小时。将反应混合物真空浓缩并用10％IPA的DCM溶液(20ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱，用乙醚研磨后得到白色固体状产物(99mg,0.26mmol,26％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.39(s,1H),7.74(s,1H),7.58(d,1H),7.36(d,1H),7.27(d,1H),7.19(dd,1H),6.07(t,1H),6.00(dd,1H),5.68(s,2H),2.72(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.96min；m/z＝382[M+H]+
实施例168:4-{2-甲基-4-[3-(三氟甲基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}吡啶-2-胺
步骤1:7-(苯磺酰基)-5-溴-2-甲基-4-[3-(三氟甲基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(制备例19)
向2-甲基-4-[3-(三氟甲基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(按照实施例164,步骤1中所述的方法用3-(三氟甲基)苯基]硼酸制备)(186mg,0.67mmol)的DMF(5mL)溶液中在0℃及氮气氛下加入NBS(1.1eq)并将反应液在2小时内升温至室温。将反应混合物冷却至0℃，加入NaH(60％的矿物油分散液,1.4eq)并搅拌5分钟，然后在氮气氛下加入苯磺酰氯(1.1eq)。将反应混合物升温至室温过夜，用水(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到(201mg)棕色油状产物。通过LCMS估计的纯度约为70％。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法B):RT＝1.57min；m/z＝496[M+H]+
步骤2:4-[7-(苯磺酰基)-2-甲基-4-[3-(三氟甲基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
从步骤1所得到的化合物(201mg)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到黄色油状所需产物(106mg,0.177mmol,两步的收率为26％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.22min；m/z＝510[M+H]+
步骤3:4-{2-甲基-4-[3-(三氟甲基)苯基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}吡啶-2-胺(制备例20)
向步骤2所得到的化合物(106mg,0.177mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入K2CO3(5eq)并将形成的悬浮液在室温下搅拌过夜。将悬浮液过滤，真空浓缩并将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱得到白色固体状产物(10mg,0.027mmol,15％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,1H),7.87–7.79(m,1H),7.74(d,2H),7.56(s,2H),7.61–7.47(m,1H),6.17–6.11(m,1H),5.90(dd,1H),5.64(s,2H),2.74(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.94min；m/z＝370[M+H]+
实施例169:4-(2-甲基-4-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-胺
步骤1:5-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-4-基)-2-甲基-4-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯(制备例21)
在室温及氮气氛下，向5-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-4-基)-4-(4-甲酰基苯基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯(按照实施例164中所述的方法用(4-甲酰基苯基)硼酸制备)(200mg,0.38mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入1-甲基哌嗪(2eq)，然后加入氰基硼氢化钠(1.5eq)。将反应混合物搅拌过夜。然后将其用饱和NaHCO3水溶液(10mL)和DCM(10mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱得到白色固体状产物(86mg,0.14mmol,37％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ9.67(s,1H),8.02–7.93(m,2H),7.34(s,1H),7.23(d,2H),7.06(d,2H),6.75(dd,1H),3.44(s,2H),2.78(s,3H),2.5–2.2(m,8H),2.18(s,3H),1.67(s,9H),1.44(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.26min；m/z＝614[M+H]+
步骤2:4-(2-甲基-4-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-胺(制备例22)
将步骤1中得到的化合物(86mg,0.14mmol)溶于2M HCl的MeOH溶液(4mL)并在CEM微波反应器上于80℃加热1小时。将混合物真空浓缩并将残余物用乙醚研磨得到盐酸盐形式的产物(58mg,0.119mmol)。1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ13.71(brs,1H),13.23(brs,1H),11.91(brs,1H),8.25(d,1H),7.77(m,4H),7.56(d,2H),6.48(dd,1H),6.39(d,1H),4.7–3.2(m,13H),2.81(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.7min；m/z＝414[M+H]+
实施例174:4-(2-甲基-4-{3-[3-(吗啉-4-基)丙氧基]苯基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-胺(制备例23)
向4-{4-[3-(3-氯丙氧基)苯基]-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基}吡啶-2-胺(按照实施例168中所述的方法用2-[3-(3-氯丙氧基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环(US2007/0004675)制备)(50mg,0.13mmol)的MeCN(2mL)溶液中加入NaI(4eq)、K2CO3(6eq)和吗啉(4eq)。将反应混合物在CEM微波反应器上于150℃加热30分钟。将反应混合物用10％MeOH的DCM溶液(5ml)稀释，用相分离柱过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱，在用MeCN研磨后得到米色固体状产物(30mg,0.067mmol,53％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.33(s,1H),7.70(s,1H),7.51(d,1H),7.21(t,1H),7.12(dt,1H),6.95–6.87(m,1H),6.85–6.79(m,1H),6.19(d,1H),5.91(dd,1H),5.63(s,2H),3.67(t,2H),3.55(t,4H),2.71(s,3H),2.36(s,6H),1.81–1.72(m,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.617min；m/z＝445[M+H]+
实施例178:4-[4-(2,3-二氢-1H-吲哚-1-基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
步骤1:2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酸乙酯(制备例24)
将4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(4g,23.87mmol)、乙酸钠(2eq)、Pd(OAc)2(0.07eq)和1,1’-双(二苯基膦)二茂铁(0.07eq)在乙醇(140mL)中、在氮气氛下在Parr反应瓶中混合。将体系用一氧化碳净化3次并加压至28psi。将反应器加热至70℃并在Parr振动氢化装置中振摇过夜。将反应器冷却至室温，真空除去一氧化碳并将反应混合物用硅藻土塞过滤。将滤液真空浓缩并将残余物用水和乙醚研磨得到浅棕色固体状产物(3.811g,18.58mmol,78％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.24(s,1H),7.69(d,1H),6.81(d,1H),4.43(q,2H),2.71(s,3H),1.39(t,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.92min；m/z＝206[M+H]+
步骤2:7-(苯磺酰基)-5-溴-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酸乙酯
从步骤1所得到的化合物(1.83g,3.8mmol)开始，按照制备例19所述的方法得到白色固体状所需产物(1.63g,3.8mmol,60％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,1H),8.25–8.17(m,2H),7.85–7.74(m,1H),7.74–7.64(m,2H),4.44(q,2H),2.75(s,3H),1.34(t,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.41min；m/z＝423[M+H]+
步骤3:7-(苯磺酰基)-5-溴-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲醛(制备例25)
在-78℃及氮气氛下，向步骤2所得到的化合物(0.5g,1.18mmol)的THF(13mL)溶液中加入DIBAL(1M的THF溶液,3eq)。将反应混合物在相同的温度下搅拌1小时，然后在2小时内升温至室温。冷却至-78℃，将混合物用水(1mL)和2N NaOH溶液(0.5mL)终止反应并使其升温至室温。向混合物中加入MgSO4，用硅藻土塞过滤并真空浓缩得到产物(1.2g,>100％)。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法B):RT＝1.31min；m/z＝413,[M+H]+未见
步骤4:1-{[7-(苯磺酰基)-5-溴-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]甲基}-2,3-二氢-1H-吲哚
从步骤3所得到的化合物(1.2g)和二氢吲哚(1.2eq)开始，按照制备例21所述的方法得到白色固体状所需产物(0.193g,0.399mmol,两步的收率为34％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.57min；m/z＝482[M+H]+
步骤5:4-[7-(苯磺酰基)-4-(2,3-二氢-1H-吲哚-1-基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
从步骤4得到的化合物(0.193g,0.399mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到白色固体状所需产物(0.133g,0.267mmol,67％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.28–8.20(m,2H),7.96–7.88(m,2H),7.83–7.74(m,1H),7.75–7.64(m,2H),6.93(dd,1H),6.79(td,1H),6.70(dd,1H),6.56(dd,1H),6.50(td,1H),6.09–5.99(m,3H),4.36(s,2H),3.03(t,2H),2.69(d,5H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.16min；m/z＝497[M+H]+
步骤6:4-[4-(2,3-二氢-1H-吲哚-1-基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
从步骤5得到的化合物(0.133g,0.267mmol)开始，按照制备例20所述的方法得到米色固体状产物(41mg,0.114mmol,43％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.18(d,1H),7.89(d,1H),7.54(d,1H),6.94(dd,1H),6.81(td,1H),6.65(dd,1H),6.57–6.45(m,2H),6.17(d,1H),5.92(s,2H),4.45(s,2H),3.10(t,2H),2.71(t,2H),2.64(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.89min；m/z＝357[M+H]+
实施例193:4-(2-甲基-4-{[2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)吡啶-2-胺
步骤1:{5-溴-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}甲醇(制备例26)
向5-溴-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酸乙酯(按照实施例153,步骤4中所述的方法从2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酸乙酯(制备例24)开始制备)(0.500g,1.76mmol)的THF(10mL)溶液中在0℃及氮气氛下分批加入LiBH4(2eq)。将反应混合物升温至室温过夜。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱得到白色固体状产物(0.237g,0.98mmol,56％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.29(s,1H),7.67(s,1H),5.23(t,1H),4.96(d,2H),2.65(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.51min；m/z＝243[M+H]+
步骤2:5-溴-4-(羟基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯
按照制备例17所述的方法，向步骤1所得到的化合物(0.237g,0.98mmol)的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.2eq)、DMAP(0.01eq)和三甲基胺(2eq)。得到白色固体状所需产物(0.345g,>100％)。通过LC-MS估计的纯度约为70％。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法B):RT＝1.23min；m/z＝342[M+H]+
步骤3:5-溴-2-甲基-4-{[2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯
从步骤2所得到的化合物(0.345g)和2-(三氟甲基)苯酚(1.1eq)开始，按照制备例6所述的方法得到黄色油状所需产物(0.63g,>100％)。通过LC-MS估计的纯度约为45％。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法B):RT＝1.58min；m/z＝485[M+H]+
步骤4:5-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-4-基)-2-甲基-4-{[2-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯
从步骤3所得到的化合物(0.63g)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例18所述的方法得到白色固体状所需产物(62mg,0.155mmol)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.34(s,1H),7.67(s,1H),7.62–7.53(m,3H),7.22(d,1H),7.09(t,1H),6.63(dd,1H),6.51(t,1H),5.75(d,2H),5.31(s,2H),2.66(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.99min；m/z＝400[M+H]+
实施例198:4-[4-(环丙基乙炔基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
步骤1:5-溴-4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯
从4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(10.53g,59.67mmol)开始，按照制备例17所述的方法得到白色固体状产物(14.43g,41.63mmol,93％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),2.69(s,3H),1.62(s,9H)。
步骤2:5-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-4-基)-4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯
从步骤1所得到的化合物(1g,2.89mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(1.059g,2.3mmol,80％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),8.31(dd,1H),8.02(s,1H),7.97(t,1H),7.20(dd,1H),2.71(s,3H),1.64(s,9H),1.48(s,9H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.49min；m/z＝460[M+H]+
步骤3:5-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-4-基)-4-(环丙基乙炔基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯(制备例27)
向步骤2所得到的化合物(100mg,0.22mmol)在Et3N(4ml)和THF(1mL)中的溶液中在室温下加入乙炔基环丙烷(3eq)和CuI(0.3eq)。将溶液用氮气净化5分钟，然后加入Pd(PPh3)2Cl2(0.3eq)并将反应混合物在CEM微波反应器上于80℃搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱得到白色固体状产物(70mg,0.143mmol,66％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.51min；m/z＝490[M+H]+
步骤4:4-[4-(环丙基乙炔基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺
从步骤3所得到的化合物(70mg,0.143mmol)开始，按照制备例7所述的方法得到白色固体状所需产物(32mg,0.11mmol,77％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.27(s,1H),7.91(d,1H),7.67(d,1H),6.67(dd,1H),6.59(t,1H),5.91(s,2H),2.60(s,3H),1.50(tt,1H),0.85(m,2H),0.66(m,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.76min；m/z＝290[M+H]+
下表4中的实施例159-204通过通用方法XI-XVIII所描述的方法用适宜的可购买到的硼酸酯、醇、胺和乙炔基制备。也包括了实施例162、164、168、169、174、178、193、198的化合物。
表4:HRMS(TOF,ESI)数据
实施例160利用制备例5中所述的方法从实施例159制备。实施例188利用制备例5中所述的方法从实施例187制备。实施例189和190通过手性固定相制备型HPLC从实施例188制备。实施例191按照制备例14描述的方法从2-(7-氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环(从6-溴-4-氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯制备)制备。1H NMR(399MHz,氯仿-d)δ7.18(d,1H),7.08(s,1H),6.05(s,2H),1.35(s,12H)。
通用方法XIX
通用方法XX
通用方法XXI
在通用方法XIX、XX和XXI中:
-R1和R2如式(I)中所定义，
-R3代表氢原子、直链或支链的(C1-C6)烷基、-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2，应当理解的是，Cy1和Cy2彼此独立地代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
并且R’3代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
或者R3和R’3与携带它们的氮原子形成杂环烷基或杂芳基，
-R4代表氢原子、直链或支链的(C1-C6)烷基或环烷基，
-G代表选自式(I)中所定义的取代基列表的基团，应当理解的是，苯基可以被1至4个独立的G基团取代。
实施例206:5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
步骤1:7-(苯磺酰基)-5-溴-4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1g,4.06mmol)开始，按照制备例19所述的方法得到白色固体状所需产物(1.264g,3.27mmol,81％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.24–8.16(m,2H),7.85–7.78(m,1H),7.73–7.65(m,2H),2.69(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.46min；m/z＝387[M+H]+
步骤2:7-(苯磺酰基)-5-溴-N-[(2,6-二氟苯基)甲基]-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤1所得到的化合物(1.2g,3.10mmol)和(2,6-二氟苯基)甲胺(2eq)开始，采用制备例8所述的方法得到白色固体状所需产物(1.410g,2.86mmol,92％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.52min；m/z＝493[M+H]+
步骤3:7-(苯磺酰基)-N-[(2,6-二氟苯基)甲基]-2-甲基-5-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(制备例28)
向步骤2所得到的化合物(1g,2.03mmol)的THF(5mL)溶液中加入双(频哪醇合)二硼(1.2eq)、KOAc(3eq)和PdCl2(PPh3)2(10％wt)。将形成的混合物在氮气氛下脱气5分钟，然后在CEM微波反应器上于140℃加热1小时。将反应混合物用硅藻土塞过滤，用EtOAc洗涤。将有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到白色固体状所需产物(0.675g,1.25mmol,62％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.63min；m/z＝541[M+H]+
步骤4:5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7-(苯磺酰基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤3所得到的化合物(0.915g,1.69mmol)和4-氯嘧啶-2-胺(1.5eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅棕色固体状产物(0.551g,1.08mmol,64％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ10.79(t,1H),8.44(s,1H),8.29(d,1H),8.20–8.13(m,2H),7.80(m,1H),7.65(t,2H),7.40–7.24(m,2H),7.01(t,2H),6.70(s,2H),4.90(d,2H),2.38(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.41min；m/z＝508[M+H]+
步骤5:5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤4得到的化合物(0.551g,1.08mmol)开始，按照制备例20所述的方法得到浅橙色固体状所需产物(0.159g,0.432mmol,40％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ11.97(s,1H),10.63(s,1H),8.14(d,1H),8.04(s,1H),7.33(m,1H),7.12(d,1H),7.06(q,2H),6.35(s,2H),4.91(d,2H),2.36(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.96min；m/z＝368[M+H]+
实施例208:5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
步骤1:7-(苯磺酰基)-5-溴-4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
从4-氯-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1g,4.06mmol)开始，按照制备例19所述的方法得到白色固体状所需产物(1.264g,3.27mmol,81％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.24–8.16(m,2H),7.85–7.78(m,1H),7.73–7.65(m,2H),2.69(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.46min；m/z＝387[M+H]+
步骤2:7-(苯磺酰基)-N-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基甲基)-5-溴-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤1所得到的化合物(0.5g,1.29mmol)和1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基甲胺(2eq)开始，采用制备例8所述的方法得到白色固体状所需产物(0.562g,1.12mmol,87％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.19–8.11(m,2H),7.82–7.72(m,2H),7.66(dd,2H),7.10(t,1H),6.86–6.71(m,3H),6.03(s,2H),4.69(d,2H),2.41(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.52min；m/z＝501[M+H]+
步骤3:7-(苯磺酰基)-N-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基甲基)-2-甲基-5-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(制备例28)
向步骤2所得到的化合物(0.25g,0.5mmol)的THF(5mL)溶液中加入双(频哪醇合)二硼(1.2eq)、KOAc(3eq)和PdCl2(PPh3)2(10％wt)。将形成的混合物在氮气氛下脱气5分钟，然后在CEM微波反应器上于140℃加热1小时。将反应混合物用硅藻土塞过滤，用EtOAc洗涤。将有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到白色固体状产物(0.227g,0.414mmol,83％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.61min；m/z＝549[M+H]+
步骤4:4-[7-(苯磺酰基)-4-[(1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基甲基)氨基]-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]嘧啶-2-胺
从步骤3所得到的化合物(227mg,0.414mmol)和4-氯嘧啶-2-胺(1.5eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅棕色固体状所需产物(85mg,0.165mmol,40％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,2H),8.26–8.17(m,2H),7.82–7.72(m,1H),7.72–7.64(m,3H),7.54(s,2H),6.80–6.63(m,3H),6.51(t,1H),5.93(s,2H),4.60(d,2H),2.44(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.44min；m/z＝549[M+H]+
步骤5:5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基甲基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
从步骤4得到的化合物(85mg,0.165mmol)开始，按照制备例20所述的方法得到浅橙色固体状所需产物(25mg,0.066mmol,40％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.00(s,1H),10.55(t,1H),8.14(d,1H),8.06(d,1H),7.13(d,1H),6.91–6.72(m,3H),6.22(s,2H),6.03(s,2H),4.81(d,2H),2.37(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.935min；m/z＝376[M+H]+
实施例210:4-[4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]嘧啶-2-胺
步骤1:4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁基酯
从5-溴-4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯(参见实施例164,步骤2)(240mg,0.51mmol)开始，按照制备例28所述的方法得到白色固体状所需产物(75mg,0.145mmol,28％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.62min；m/z＝516[M+H]+
步骤2:4-[4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]嘧啶-2-胺
从步骤1所得到的化合物(75mg,0.145mmol)和4-氯嘧啶-2-胺(1.5eq)开始，按照制备例18所述的方法得到白色固体状所需产物(7mg,0.018mmol,13％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),8.01–7.92(m,2H),7.40(d,1H),7.32(m,1H),7.22(dd,1H),6.21(d,1H),6.10(s,2H),2.72(s,3H)。LC/MS(方法B):RT＝1.02min；m/z＝383[M+H]+
实施例211:4-[4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-乙炔基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]嘧啶-2-胺
步骤1:2-[7-(苯磺酰基)-5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,2,3,4-四氢异喹啉
从7-(苯磺酰基)-5-溴-2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(按照WO2007/042299所述的方法制备)(0.875g,2.15mmol)和1,2,3,4-四氢异喹啉(2.5eq)开始，采用制备例8所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(1.044g)(LC-MS显示纯度约为80％)。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法B):RT＝1.69min；m/z＝505[M+H]
步骤2:1-[7-(苯磺酰基)-2-氯-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙-1-酮(制备例29)
将步骤1中得到的化合物(0.52g,1.03mmol)、LiCl(2.5eq)、四(三苯基膦)钯(0.1eq)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(1.2eq)在氮气氛及室温下溶于1,4-二恶烷(10mL)。将反应混合物在氮气氛下于100℃搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，加入2N HCl溶液(5mL)并将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到产物(0.448g)。LC-MS显示纯度约为70％。该化合物不经进一步纯化直接使用。
LC/MS(方法B):RT＝1.55min；m/z＝467[M+H]+
步骤3:叔丁基二甲基[2-(三氟硼烷基)乙炔基]硅烷钾(制备例30)
向叔丁基二甲基[2-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)乙炔基]硅烷(0.973g,3.65mmol)的丙酮(15mL)溶液中在0℃下加入氟氢化钾(4eq)的水(5mL)溶液并将悬浮液升温至室温过夜。将反应混合物真空浓缩并将残余物用温热的丙酮研磨得到白色固体状产物(0.705g,2.86mmol)，其不经进一步纯化直接使用。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ0.89(s,9H),0.00(s,6H)。
步骤4:1-[7-(苯磺酰基)-2-[2-(叔丁基二甲基硅烷基)乙炔基]-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]乙-1-酮
从步骤2所得到的化合物(0.400g,0.86mmol)和叔丁基二甲基[2-(三氟硼烷基)乙炔基]硅烷钾(1.78eq)开始，按照制备例10所述的方法得到黄色油状所需产物(0.220g,0.35mmol,45％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.75min；m/z＝571[M+H]+
步骤5:1-[7-(苯磺酰基)-2-[2-(叔丁基二甲基硅烷基)乙炔基]-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-(二甲基氨基)丙-2-烯-1-酮(制备例31)
向步骤4得到的化合物(0.220g,0.35mmol)的DMF(5mL)溶液中在室温及氮气氛下加入N,N-二甲基甲酰胺二甲缩醛(6eq)。将反应混合物于90℃搅拌3小时。将混合物冷却至室温，用水(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用EtOAc和异己烷洗脱得到黄色油状产物(84mg,0.134mmol,35％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.69min；m/z＝626[M+H]+
步骤6:4-[4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-乙炔基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]嘧啶-2-胺(制备例32)
向步骤5得到的化合物(84mg,0.134mmol)的THF(3mL)溶液中在0℃及氮气氛下加入TBAF(1M的THF溶液,1.1eq)。将反应混合物在1小时内升温至室温。将混合物用DCM(10mL)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物溶于丁-1-醇(3mL)，加入碳酸胍(1.5eq)和甲醇钠(4eq)并将反应混合物在CEM微波反应器上于130℃搅拌30分钟。将混合物倒入水(10mL)和DCM(10mL)中。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化，用10％MeOH的DCM溶液洗脱，然后通过HPLC在pH＝4下纯化得到黄色固体状产物(1.4mg,0.004mmol,3％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.39(s,1H),8.13(d,1H),7.77(s,1H),7.18–7.06(m,3H),7.02–6.94(m,1H),6.75(d,1H),6.54(s,2H),4.56(s,2H),4.05(s,1H),3.64(t,2H),2.76(t,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.13min；m/z＝368[M+H]+
下表5中的实施例205-212通过通用方法XIX、XXI所描述的方法用适宜的可购买到的硼酸酯、胺和乙炔基制备。也包括了实施例208、210、211的化合物。
表5:HRMS(TOF,ESI)数据
通用方法XXII
通用方法XXIII
通用方法XXIV
通用方法XXV
通用方法XXVI
在通用方法XXII至XXIV中:
-R1和R2如式(I)中所定义，
-R3代表氢原子、直链或支链的(C1-C6)烷基、-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2，应当理解的是，Cy1和Cy2彼此独立地代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
并且R’3代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
或者R3和R’3与携带它们的氮原子形成杂环烷基或杂芳基，
-R4代表氢原子、直链或支链的(C1-C6)烷基或环烷基，
-G代表选自式(I)中所定义的取代基列表的基团，应当理解的是，苯基可以被1至4个独立的G基团取代。
实施例213:3-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-胺
步骤1:N-[(2,6-二氟苯基)甲基]-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-胺(制备例33)
向4-氯-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.5g,3mmol)的MeCN(15mL)溶液中在氮气氛及室温下加入2,6-二氟苄基胺(2eq)和pTSA.H2O(2eq)。将反应混合物在CEM微波反应器中于150℃加热4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱得到黄色固体状产物(0.521g,1.90mmol,63％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ10.96(s,1H),7.43(tt,1H),7.20–7.08(m,2H),6.95(d,1H),6.77(t,1H),6.53(d,1H),6.15(s,1H),4.44(d,2H),2.35(s,3H)。
LC/MS(方法A):RT＝1.82min；m/z＝274[M+H]+
步骤2:3-溴-4-{[(2,6-二氟苯基)甲基]氨基}-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
从步骤1所得到的化合物(0.415g,1.51mmol)开始，按照制备例17所述的方法得到固体状所需产物(0.280g,0.61mmol,40％)。
1H NMR(399MHz,氯仿-d)δ7.36(s,1H),7.33–7.23(m,1H),6.95(t,2H),6.46(s,1H),6.20(d,1H),4.57(d,2H),2.59(s,3H),1.65(s,10H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.53min；m/z＝452[M+H]+
步骤3:3-(2-氨基吡啶-4-基)-4-{[(2,6-二氟苯基)甲基]氨基}-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
从步骤2所得到的化合物(0.280g,0.61mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.4eq)开始，按照制备例3所述的方法得到米色固体状所需产物(0.154g,0.33mmol,53％)。
LC/MS(方法B):RT＝0.99min；m/z＝466[M+H]+
步骤4:3-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-胺
从步骤3所得到的化合物(0.154g,0.33mmol)开始，按照制备例7所述的方法得到白色固体状产物(0.110g,0.30mmol,91％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ11.43(s,1H),7.85(d,1H),7.42(tt,1H),7.20–7.07(m,3H),6.51–6.43(m,2H),6.29(s,1H),5.89(s,2H),5.23(t,1H),4.49(d,2H),2.39(s,3H)。
LC/MS(方法A):RT＝1.58min；m/z 366[M+H]+
实施例214:4-[4-(5-氟吡啶-3-基)-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]吡啶-2-胺
步骤1:1-(苯磺酰基)-3-溴-4-氯-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
从4-氯-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.713g,4.27mmol)开始，按照制备例19所述的方法得到白色固体状所需产物(0.493g,1.28mmol,30％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.21–8.13(m,3H),7.81–7.72(m,1H),7.70–7.62(m,2H),7.41(s,1H),2.56(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.52min；m/z＝386[M+H]+
步骤2:4-[1-(苯磺酰基)-4-氯-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]吡啶-2-胺
从步骤1所得到的化合物(0.493g,1.28mmol)和4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-胺(1.4eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(0.200g,0.501mmol,39％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.27–8.17(m,2H),8.00–7.91(m,2H),7.81–7.63(m,3H),7.38(s,1H),6.64(dd,1H),6.57(d,1H),5.99(s,2H),2.57(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.13min；m/z＝399[M+H]+
步骤3:4-[1-(苯磺酰基)-4-(5-氟吡啶-3-基)-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]吡啶-2-胺
从步骤2所得到的化合物(0.133g,0.33mmol)和(5-氟吡啶-3-基)硼酸(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅棕色固体状产物(97mg,0.211mmol,63％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,1H),8.31–8.23(m,2H),8.19(t,1H),7.97(s,1H),7.82–7.73(m,1H),7.73–7.63(m,2H),7.62–7.44(m,4H),7.33(s,1H),6.16(m,1H),5.89(dd,1H),5.77(s,2H),2.65(s,3H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.1min；m/z＝460[M+H]+
步骤4:4-[4-(5-氟吡啶-3-基)-6-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]吡啶-2-胺
从步骤3所得到的化合物(97mg,0.211mmol)开始，按照制备例20所述的方法得到白色固体状所需产物(20mg,0.06mmol,30％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.06(s,1H),8.49(d,1H),8.26(d,1H),7.63(s,1H),7.56–7.46(m,2H),7.10(s,1H),6.08(d,1H),5.87(dd,1H),5.62(s,2H),2.61(s,3H)。
LC/MS(方法A):RT＝1.67min；m/z＝320[M+H]+
实施例215:4-[6-(环丙基乙炔基)-4-(2,3-二氢-1,4-苯并二英-6-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]吡啶-2-胺
步骤1:1-苯甲酰基-4-氯-6-(环丙基乙炔基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
从1-苯甲酰基-6-溴-4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(按照WO2009/087225所述的方法制备)(1.12g,3.72mmol)和乙炔基环丙烷(3eq)开始，按照制备例27所述的方法得到浅棕色固体状所需产物(1.053g,3.28mmol,88％)。LC/MS(方法B):RT＝1.52min；m/z＝321[M+H]+
步骤2:6-(环丙基乙炔基)-4-(2,3-二氢-1,4-苯并二英-6-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
从步骤1所得到的化合物(0.5g,1.56mmol)和(2,3-二氢-1,4-苯并二英-6-基)硼酸(1.2eq)开始，按照制备例3所述的方法得到棕色固体状所需产物(0.234g,0.74mmol,47％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.35min；m/z＝316[M+H]+
步骤3:3-溴-6-(环丙基乙炔基)-4-(2,3-二氢-1,4-苯并二英-6-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
从步骤2所得到的化合物(0.234g,0.74mmol)开始，按照制备例17所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(0.326g,0.658mmol,89％)。
LC/MS(方法B):RT＝1.7min；m/z＝497[M+H]+
步骤4:3-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-4-基)-6-(环丙基乙炔基)-4-(2,3-二氢-1,4-苯并二英-6-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
从步骤3所得到的化合物(0.326g,0.658mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(0.211g,0.347mmol,53％)。
LC/MS(方法A):RT＝3.05min；m/z＝609[M+H]+
步骤5:4-[6-(环丙基乙炔基)-4-(2,3-二氢-1,4-苯并二英-6-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]吡啶-2-胺
从步骤4得到的化合物(0.211g,0.347mmol)开始，按照制备例7所述的方法得到白色固体状所需产物(54mg,0.132mmol,38％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.08(s,1H),7.72(s,1H),7.50(d,1H),7.07(s,1H),6.73–6.60(m,3H),6.05(m,1H),5.89(dd,1H),5.52(s,2H),4.20(ddd,4H),1.60(tt,1H),0.98–0.87(m,2H),0.87–0.76(m,2H)。
LC/MS(方法A):RT＝2.16；m/z＝409[M+H]+
实施例216:3-(2-氨基吡啶-4-基)-6-(环丙基乙炔基)-N-(2,6-二氟苄基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-胺
步骤1:4-氯-6-(环丙基乙炔基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(制备例34)
向1-苯甲酰基-6-溴-4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(按照WO2009/087225所述的方法制备)(1.52g,4.54mmol)在Et3N(15ml)和THF(3mL)中的溶液中在室温下加入乙炔基环丙烷(3eq)和CuI(0.3eq)。将溶液用氮气净化5分钟，然后加入Pd(PPh3)2Cl2(0.3eq)并将反应混合物于室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入水(1mL)并在CEM微波反应器上于80℃加热1小时。将混合物用水(20mL)和DCM(20mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱，然后用异己烷研磨得到米色固体状产物(0.652g,3mmol,66％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.04(s,1H),7.65(d,1H),7.24(s,1H),6.50(d,1H),1.59(tt,1H),1.01–0.85(m,2H),0.89–0.72(m,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.31min；m/z＝217[M+H]+
步骤2:6-(环丙基乙炔基)-N-[(2,6-二氟苯基)甲基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-胺(制备例35)
将步骤1中得到的化合物(0.3g,1.38mmol)、2,6-二氟苄基胺(1.2eq)、BrettPhos(0.01eq)和BrettPhos预催化剂(0.01eq)加入到微波小瓶中。将小瓶用特氟龙螺纹盖密封，然后排空气体并用氮气回填。在室温及氮气氛下加入LiHMDS(1M的THF溶液,2eq)。将反应混合物在CEM微波反应器中于65℃加热4小时。将反应混合物用1N HCl(2mL)溶液终止反应并用DCM(50mL)稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化，用MeOH和DCM洗脱得到浅棕色固体状产物(0.429g,1.32mmol,96％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ11.13(t,1H),7.43(tt,1H),7.20–7.06(m,3H),6.94(t,1H),6.59(dd,1H),6.33(s,1H),4.44(d,2H),1.53(tt,1H),0.96–0.81(m,2H),0.80–0.66(m,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.12min；m/z＝324[M+H]+
步骤3:3-溴-6-(环丙基乙炔基)-4-{[(2,6-二氟苯基)甲基]氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
从步骤2所得到的化合物(0.429g,1.32mmol)开始，按照制备例17所述的方法得到米色固体状所需产物(0.463g,0.921mmol,69％)。
1H NMR(399MHz,氯仿-d)δ7.42(s,1H),7.29(m,1H),7.01–6.92(m,2H),6.69(s,1H),6.19(t,1H),4.56(d,2H),1.64(s,9H),1.50(m,1H),1.00–0.86(m,4H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.61min；m/z＝502[M+H]+
步骤4:3-(2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}吡啶-4-基)-6-(环丙基乙炔基)-4-{[(2,6-二氟苯基)甲基]氨基}-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
从步骤3所得到的化合物(0.463g,0.921mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到浅黄色固体状所需产物(0.233g,0.378mmol,41％)。
1H NMR(399MHz,氯仿-d)δ8.25–8.19(m,1H),8.06(d,1H),7.48(s,1H),7.42(s,1H),7.27–7.21(m,1H),7.02(dd,1H),6.95–6.85(m,2H),6.72(s,1H),4.86(t,1H),4.45(d,2H),1.67(s,9H),1.55(s,9H),1.53–1.48(m,1H),0.97–0.82(m,4H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.64min；m/z＝616[M+H]+
步骤5:3-(2-氨基吡啶-4-基)-6-(环丙基乙炔基)-N-(2,6-二氟苄基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-胺
从步骤4得到的化合物(0.233g,0.378mmol)开始，按照制备例7所述的方法得到白色固体状所需产物(88mg,0.211mmol,56％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ11.61(s,1H),7.85(d,1H),7.48–7.36(m,1H),7.32(s,1H),7.14(t,2H),6.50–6.42(m,3H),5.91(s,2H),5.31(t,1H),4.48(d,2H),1.56(tt,1H),0.91(m,2H),0.80–0.71(m,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.09min；m/z＝416[M+H]+
实施例223:3-(2-氨基吡啶-4-基)-4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈
步骤1:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈
从4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈(按照Synthesis,2008,(2),201-204制备)(100mg,0.56mmol)和(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)硼酸(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法得到黄色固体状所需产物(84mg,0.32mmol,57％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ12.38(s,1H),7.93–7.82(m,1H),7.75(s,1H),7.43–7.31(m,2H),7.12(d,1H),6.78(dd,1H),6.14(s,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝1.23min；m/z＝264[M+H]+
步骤2:4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-3-溴-6-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酸叔丁酯
从步骤1所得到的化合物(0.289g,1.1mmol)开始，按照制备例17所述的方法得到黄色固体状所需产物(0.373g,0.84mmol,77％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),7.87(s,1H),7.14–7.04(m,2H),6.98(dd,1H),6.14(s,2H),1.64(s,9H)。
步骤3:3-(2-氨基吡啶-4-基)-4-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-甲腈
从步骤2所得到的化合物(0.180g,0.41mmol)和N-[4-(四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)开始，按照制备例3所述的方法进行制备。将粗品反应混合物真空浓缩并按照制备例7所述的方法将残余物溶于DCM(2mL)和TFA(1.5mL)。将粗品反应混合物真空浓缩并将残余物用MeOH研磨得到TFA盐形式的产物(49mg,0.137mmol,34％)。
1H NMR(399MHz,DMSO-d6)δ13.10(d,2H),8.38(d,1H),7.79(s,1H),7.67(t,3H),6.98(d,1H),6.85(d,1H),6.71(dd,1H),6.49–6.30(m,2H),6.05(s,2H)。
LC/MS(方法B):RT＝0.97min；m/z＝356[M+H]+
下表6中的实施例213-225通过通用方法XXII-XXVI所描述的方法用适宜的可购买到的硼酸酯、胺和乙炔基制备。也包括了实施例213、214、215、216、223的化合物。
表6:HRMS(TOF,ESI)数据
药理学研究
实施例A:激酶TR-FRET试验
采用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)试验评估对人类激酶酶活性的抑制，试验在384孔反应板中进行。在该试验中，将来自Carna Biosciences的全长人类激酶DYRK1A(NM_001396,ref.04-130；2.0ng/μl)、DYRK1B(NM_004714,ref.04-131；1.2ng/μl)、CLK1(NM_001162407,ref.04-126；0.7ng/μl)、CDK9(NM_001261,ref.04-110；0.9ng/μl)或GSK3β(NM_001146156,ref.04-141；2.0ng/μl)在室温下与ATP(Sigma A2383,10μM)和ULightTM-标记的人髓磷脂碱性蛋白(MBP)肽底物(Perkin Elmer TRF0109,100nM)一起在由50mM HEPES pH7.4,1mM EGTA,10mM MgCl2,2mM DTT和0.01％Tween20组成的反应缓冲液中孵育40分钟(DYRK1A和DYRK1B)或100分钟(CLK1、CDK9和GSK3β)。本发明的测试化合物以0.1nM至30μM的浓度范围加入到反应缓冲液中。加入EDTA(Sigma E7889,10mM)终止反应后，加入识别MBP中的磷酸化-Thr232的铕标记的鼠单克隆抗体(Perkin Elmer TRF0201,1nM)。1小时后，将反应板用荧光阅读器(Perkin Elmer)在620nm和665nm读取(在340nm激发):当铕供体荧光团被波长为340nm的光激发时，发生向受体的能量转移(620nm)，其将发出波长为665nm的光。于是由发射光的相对强度测得DYRK1A激酶的活性以及活性的抑制。从浓度-活性曲线计算出激酶活性抑制50％所需的测试化合物的浓度IC50。结果见表1。
实施例B:激酶ADP试验
His-TEV-DYRK1A激酶结构域(aa127-485)的活性通过在用ATP(Sigma AldrichA7699)磷酸化肽底物Woodtide(Zinnsser Analytic)的过程中所产生的ADP的累积量来测定。酶反应在含有15mM Hepes；20mM NaCl；1mM EGTA；10mM MgCl2；0.02％Tween20和0.1mg/ml牛丙种球蛋白的测定缓冲液(pH 7.4)中进行。本发明的测试化合物以一定的浓度范围在30℃下、在20nM DYRK1A酶、40μM肽底物和20μM ATP的存在下加入反应缓冲液中10分钟。加入检测试剂(DiscoveRx 90-0083)，先加ADP Hunter Plus试剂A，然后是ADP Hunter Plus试剂B。在30℃下孵育20分钟后，加入ADP Hunter Plus终止溶液。在590nm下测定荧光强度。从浓度-活性曲线计算出激酶活性抑制50％所需的测试化合物的浓度IC50。结果见表1。
实施例C:细胞DYRK1A自身磷酸化试验
在第0天，将人U2-OS骨肉瘤细胞接种于12孔培养板(每孔100,000个细胞)并在37℃下、在5％CO2的存在下在1ml含有GlutaMAXTM(Gibco 36600)并且补充有50单位/ml青霉素、50μg/ml链霉素、10mM Hepes缓冲液(pH＝7.4)和10％胎牛血清(FCS,Sigma F7524)的McCoy′s5A(改性)培养基中孵育。在第1天，将培养基用500μl含有GlutaMAXTM(Gibco51985)、150ng含有全长野生型人DYRK1A(NM_001396)编码序列的具有HA标记的pcDNA3.1质粒(Invitrogen)、0.3％阳离子脂质体Lipofectamine(Invitrogen 18324-020)和0.6％Plus试剂(Invitrogen Cat N°11514-015)的优化培养基替换。5小时后，将培养基用900μl含有GlutaMAXTM(Gibco 36600)的McCoy′s 5A(改性)培养基替换。第2天，将细胞暴露于一定浓度范围的本发明测试化合物5小时。然后将细胞用磷酸盐缓冲的盐水溶液洗涤并将细胞在由150mM NaCl、20mM Tris-HCl pH 7.4、1％Triton X-100、1mM EGTA、1mM EDTA以及蛋白酶(1％v/v；539134；Calbiochem)和磷酸酶(1％v/v；524625；Calbiochem)抑制剂合剂组成的裂解缓冲液(每孔50μl裂解缓冲液)中裂解。采用蛋白质印迹或中尺度ELISA平台测定磷酸-Ser520-DYRK1A的相对水平。对于蛋白质印迹分析，将裂解物在含有5％v/vβ-巯基乙醇的Laemmli样品缓冲液(Bio-Rad)中稀释，于95℃加热5分钟，然后在Tris-甘氨酸凝胶或NuPage Bis-Tris凝胶(Novex；Invitrogen)上解析。在所有的凝胶中均包含生物素化分子量标准物(Cell Signaling Technology)。将蛋白质转移到硝酸纤维素膜(Hybond,ECL；Amersham)上，所述的膜在含有5％奶的Tris-缓冲的盐水/0.1％吐温20(TBST)中封闭并用抗-磷酸-Ser520-DYRK1A抗体(Eurogentec SE6974-75；0.23μg/ml 5％BSA)或抗DYRK1A抗体(Abnova H00001859；0.5μg/ml 5％奶)中在4℃下探查过夜。将过氧化物酶标记的二级抗体在5％奶中稀释并在20℃下涂抹到膜上1小时。化学发光检测采用ECL-plus蛋白质印迹检测试剂盒(Amersham)进行并在ECL plus Hyperfilm(Amersham)上记录。使用Bio-Rad GS-800校准型光密度计对印迹进行扫描并用TotalLab软件(Amersham)进行蛋白质印迹的定量分析。从描绘每个浓度下的磷酸-Ser520-DYRK1A与总DYRK1A信号之比的剂量-响应曲线计算抑制磷酸-Ser520-DYRK1A的IC50值。对于中尺度ELISA分析，将裂解物转移到用BSA封闭的含有预先结合的抗-HA捕获抗体(Novus biological NB600-364；15μg/ml)的ELISA板上并在室温下振摇1小时。然后加入抗-磷酸-Ser520-DYRK1A抗体(Eurogentec SE6974-75；2.3–3.0mg/ml)和抗DYRK1A抗体(Abnova H00001859；3μg/ml)，在室温下孵育1小时后加入磺胺类标记的抗兔检测抗体(ref MSD R32AB；1μg/ml)和磺胺类标记的抗鼠检测抗体(ref MSDR32-AC-1；1μg/ml)。再经过1小时后，加入读取缓冲液并将平板在Sector Imager 2400(Mesoscale)上读取。从剂量-响应曲线计算抑制磷酸-Ser520-DYRK1A的IC50值。结果表明，本发明的化合物是细胞DYRK1A Ser520自身磷酸化的强抑制剂。结果见表1。
实施例D:在肿瘤异种移植中抑制DYRK1A自身磷酸化的药效学试验
为了进行抑制DYRK1A自身磷酸化的药效学研究，对雌性SCID小鼠皮下注射RS4；11人急性淋巴细胞白血病细胞。当肿瘤达到200–300mm3大小时，将小鼠随机分为均匀的3组并以最高100mg/kg的剂量单次口服本发明的化合物。在治疗后的不同时间，通常为2小时和6小时，将治疗组和对照组的小鼠处死，切除肿瘤并将蛋白在由150mM NaCl、20mM Tris-HClpH 7.4、1％Triton X-100、1mM EGTA、1mM EDTA以及蛋白酶(1％v/v；539134；Calbiochem)和磷酸酶(1％v/v；524625；Calbiochem)抑制剂合剂组成的组织裂解缓冲液中提取。用蛋白质印迹检测磷酸-Ser520-DYRK1A的相对水平。为此，将裂解物在含有5％v/vβ-巯基乙醇的Laemmli样品缓冲液(Bio-Rad)中稀释，于95℃加热5分钟，然后在Tris-甘氨酸凝胶或NuPage Bis-Tris凝胶(Novex；Invitrogen)上解析。在所有的凝胶中均包含生物素化分子量标准物(Cell Signaling Technology)。将蛋白质转移到硝酸纤维素膜(Hybond,ECL；Amersham)上，所述的膜在含有5％奶的Tris-缓冲的盐水/0.1％吐温20(TBST)中封闭并用抗-磷酸-Ser520-DYRK1A抗体(Eurogentec SE6974-75；0.23μg/ml5％BSA)或抗DYRK1A抗体(Abnova H00001859；0.5μg/ml 5％奶)中在4℃下探查过夜。将过氧化物酶标记的二级抗体在5％奶中稀释并在20℃下涂抹到膜上1小时。化学发光检测采用ECL-plus蛋白质印迹检测试剂盒(Amersham)进行并在ECL plus Hyperfilm(Amersham)上记录。使用Bio-Rad GS-800校准型光密度计对印迹进行扫描并用TotalLab软件(Amersham)进行蛋白质印迹的定量分析。用每个剂量下的磷酸-Ser520-DYRK1A与总DYRK1A信号之比来计算与对照肿瘤相比磷酸-Ser520-DYRK1A的抑制百分比。结果表明，本发明的化合物是肿瘤DYRK1A Ser520自身磷酸化的强抑制剂。
实施例E:在肿瘤异种移植中的效力研究
为了进行抗肿瘤效力研究，对雌性裸NCR nu/nu小鼠皮下注射U87-MG人成胶质细胞瘤细胞。当肿瘤达到约150mm3大小时，将小鼠随机分为均匀的8组并以最高200mg/kg的剂量每日一次口服给药本发明的化合物，持续3周。通过每周至少用游标卡尺测量两次肿瘤大小来监测抗肿瘤效力，并记录体重以记录潜在的一般毒性。指定某天的肿瘤生长抑制(TGI)百分比用如下公式计算:(1-[RTV(治疗的)/RTV(未治疗的)])x100，其中RTV＝与开始治疗时相比在指定某天的相对肿瘤体积。结果表明，本发明的化合物是肿瘤生长的强抑制剂。
表1:Dyrk1/Clk1抑制剂的IC50
实施例F：药物组合物：片剂
1000片包含5mg剂量的选自实施例1至225的化合物的片剂
选自实施例1至225的化合物.................................5g
小麦淀粉.................................................20g
玉米淀粉.................................................20g
乳糖.....................................................30g
硬脂酸镁.................................................2g
二氧化硅.................................................1g
羟丙基纤维素.............................................2g。

Claims (37)

1.式(I)的化合物、其对映体和非对映体以及其与可药用酸或碱的加成盐:
其中:
◆R1和R2彼此独立地代表氢原子、卤原子、-NR5R5’或直链或支链的(C1-C6)烷基，
◆W3代表直链或支链的(C1-C6)烷氧基、-O-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-O-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-NRaRb、-NRa-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-NRa-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-NRa-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2、-Cy1、-Cy1-(C0-C6)亚烷基-Cy2、-Cy1-O-(C0-C6)亚烷基-Cy2、-(C1-C6)亚烷基-Cy1、-(C2-C6)亚烯基-Cy1、-(C2-C6)亚炔基-Cy1、-(C1-C6)亚烷基-O-Cy1，应当理解的是，以上所定义的亚烷基部分可以是直链或支链的，
◆W4代表氰基、环烷基、直链或支链的(C1-C6)烷基、直链或支链的(C2-C6)烯基、任选地被环烷基取代的直链或支链的(C2-C6)炔基，
◆R5和R5’彼此独立地代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
◆Ra和Rb彼此独立地代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基，
◆A1和A2彼此独立地代表CH或氮原子，
◆Cy1、Cy2和Cy3彼此独立地代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中:
-“芳基”是指苯基、萘基、联苯基或茚基，
-“杂芳基”是指由5至10个环成员组成的任意单环或双环基团，其具有至少1个芳香族部分并且包含1至4个选自氧、硫和氮的杂原子，
-“环烷基”是指包含3至11个环成员的任意单环或双环非芳香族碳环基团，其可包括稠环、桥环或螺环系统，
-“杂环烷基”是指由3至10个环成员组成的并且包含1至3个选自氧、硫、SO、SO2和氮的杂原子的任意单环或双环非芳香族的稠合或螺环基团，其可包括稠环、桥环或螺环系统，
-“-(C0-C6)亚烷基-”是指共价键(-C0亚烷基-)或含有1、2、3、4、5或6个碳原子的亚烷基，
所定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、烯基、炔基、亚烷基、亚烯基、亚炔基可以被1至4个选自直链或支链的(C1-C6)烷基、直链或支链的(C2-C6)烯基、直链或支链的(C2-C6)炔基、任选地被–NRcRd或被1至3个卤原子取代的直链或支链的(C1-C6)烷氧基、直链或支链的(C1-C6)烷基-S-、羟基、氧代(或在适当情况下的N-氧化物)、硝基、氰基、-C(O)-ORc、-C(O)-Rc、-O-C(O)-Rd、-C(O)-NRcRd、-NRc-C(O)-Rd、-NRcRd、直链或支链的(C1-C6)多卤代烷基或卤素的基团取代，应当理解的是，Rc和Rd彼此独立地代表氢原子或直链或支链的(C1-C6)烷基。
2.根据权利要求1的式(I)化合物，其中R1代表氢并且R2代表-NH2基团。
3.根据权利要求1或2的式(I)化合物，其中A1代表CH基团。
4.根据权利要求1或2的式(I)化合物，其中A1代表氮原子。
5.根据权利要求1至3之一的式(I)化合物，其中A2代表氮原子。
6.根据权利要求1至3之一的式(I)化合物，其中A2代表CH基团。
7.根据权利要求6的式(I)化合物，其中A2代表CH基团并且A1代表CH基团。
8.根据权利要求1至7之一的式(I)化合物，其中W3代表直链或支链的(C1-C6)烷氧基、-O-(C0-C6)亚烷基-Cy1、-O-(C0-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-NRa-(C1-C6)亚烷基-Cy1-Cy2、-NRa-(C0-C6)亚烷基-Cy1-O-(C1-C6)亚烷基-Cy2、-Cy1-O-(C0-C6)亚烷基-Cy2、-(C1-C6)亚烷基-Cy1、-(C2-C6)亚烯基-Cy1、-(C2-C6)亚炔基-Cy1、-(C1-C6)亚烷基-O-Cy1，应当理解的是，以上所定义的亚烷基部分可以是直链或支链的。
9.根据权利要求1至7之一的式(I)化合物，其中W3代表Cy1基团，其选自:1,3-苯并二氧杂环戊烯基、1H-吲哚基、苯基、吡啶基、2,3-二氢-1,4-苯并二英基、1-苯并噻吩基、1-苯并呋喃基、3,4-二氢萘基、1,2,3,4-四氢萘基、3,4-二氢-2H-1,4-苯并嗪基，其中前述基团任选地按照权利要求1的定义被取代。
10.根据权利要求1至7之一的式(I)化合物，其中W3代表:(i)–NRa-Cy1基团，其中Cy1代表选自下列的基团:苯基、2,3-二氢-1H-茚和1,2,3,4-四氢萘，其中前述基团任选地按照权利要求1的定义被取代；或(ii)–NRa-(C1-C6)亚烷基-Cy1基团，其中Cy1代表选自下列的基团:苯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、1H-吡唑基、1,3-噻唑基、1,2-唑基、环己基、环丙基和1H-吲哚基，其中前述基团任选地按照权利要求1的定义被取代。
11.根据权利要求1至7之一的式(I)化合物，其中W3代表-亚苯基-(C0-C6)亚烷基-Cy2。
12.根据权利要求1至7之一的式(I)化合物，其中W3代表-O-(C1-C6)亚烷基-Cy1或-NRa-(C1-C6)亚烷基-Cy1，其中Cy1是苯基或吡啶基，后述基团任选地被一个或两个选自甲氧基、甲基或卤素的基团取代。
13.根据权利要求1至12之一的式(I)化合物，其中W4基团是如下基团:甲基；丙-2-基；丙-1-烯-2-基；乙烯基；氰基；乙炔基；环丙基；环丙基乙炔基。
14.根据权利要求13的式(I)化合物，其中W4是甲基。
15.根据权利要求1的式(I)化合物，选自:
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2-甲氧基苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-4-[2-甲基-4-(噻吩-3-基甲氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基]吡啶-2-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氯苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-2-甲基-N-(2-甲基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2-氯-6-氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-2-甲基-N-[(3-甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-[(3-氟吡啶-2-基)甲基]-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
-5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，
其对映体和非对映体以及其与可药用酸或碱的加成盐。
16.根据权利要求1的式(I)化合物，所述化合物是5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氯苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
17.根据权利要求1的式(I)化合物，所述化合物是5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
18.根据权利要求1的式(I)化合物，所述化合物是5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-(2-氯-6-氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
19.根据权利要求1的式(I)化合物，所述化合物是5-(2-氨基吡啶-4-基)-2-甲基-N-[(3-甲基吡啶-2-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
20.根据权利要求1的式(I)化合物，所述化合物是5-(2-氨基吡啶-4-基)-N-[(3-氟吡啶-2-基)甲基]-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
21.根据权利要求1的式(I)化合物，所述化合物是5-(2-氨基嘧啶-4-基)-N-(2,6-二氟苄基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。
22.制备根据权利要求1的式(I)化合物的方法，该方法的特征在于将式(II)的化合物用作原料
其中T代表卤原子、甲硫基、环烷基或直链或支链的(C1-C6)烷基，并且A2如式(I)中所定义，
将该化合物在适宜的醇或胺衍生物的存在下进行亲核取代反应，或与适宜的硼酸衍生物进行偶联，
以生成式(III)的化合物:
其中T如前所定义，A2和W3如式(I)中所定义，
将式(III)的化合物:
(i)当T代表甲硫基时，将其转化成甲磺酰基衍生物，然后与NaCN反应并进一步与适宜的硼酸衍生物进行偶联，
(ii)或者直接与适宜的硼酸衍生物进行偶联，
(iii)或者与4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双-1,3,2-二氧硼戊环进行偶联以生成:
将该式(III’)的化合物进一步与适宜的卤化物进行反应，
以生成式(IV)的化合物:
其中T’代表卤原子、氰基、环烷基或直链或支链的(C1-C6)烷基，并且A1、A2、R1、R2和W3如式(I)中所定义，
当T’代表卤原子时，所述式(IV)的化合物:
-可以与适宜的炔基(或烯基)硼酸衍生物或炔基(或烯基)(三氟)硼酸酯衍生物盐进行偶联，
以生成式(I)的化合物，
所述式(I)的化合物可以根据常规的分离技术进行纯化，如果需要，将其转化成其与可药用酸或碱的加成盐，并且任选地根据常规分离技术将其分离成其异构体，
应当理解，在上述方法过程中被认为适合的任意时间，试剂或合成中间体的一些基团(羟基、氨基…)可以根据合成的需要进行保护然后脱保护。
23.制备根据权利要求1的式(I)化合物的方法，该方法的特征在于将式(II)的化合物用作原料:
其中W4和A2如式(I)中所定义，
将式(II)的化合物与适宜的硼酸衍生物进行偶联，
以生成式(V)的化合物:
其中A1、A2、R1、R2和W4如式(I)中所定义，
将该式(V)的化合物进行亲核取代反应，或与适宜的硼酸衍生物进行偶联反应，或与式的化合物进行偶联，其中R3代表氢或Cy1，
以生成式(I)的化合物，
所述式(I)的化合物可以根据常规的分离技术进行纯化，如果需要，将其转化成其与可药用酸或碱的加成盐，并且任选地根据常规分离技术将其分离成其异构体，
应当理解，在上述方法过程中被认为适合的任意时间，试剂或合成中间体的一些基团(羟基、氨基…)可以根据合成的需要进行保护然后脱保护。
24.包含根据权利要求1至21任意一项的式(I)化合物或其与可药用酸或碱的加成盐以及一种或多种可药用赋形剂的药物组合物。
25.用于治疗癌症、神经退行性疾病或代谢性疾病的根据权利要求24的药物组合物。
26.根据权利要求25的药物组合物，其中的癌症选自急性巨核细胞白血病(AMKL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、卵巢癌、胰腺癌、胃肠道间质瘤(GIST)、骨肉瘤(OS)、结直肠癌(CRC)、神经母细胞瘤和胶质母细胞瘤。
27.根据权利要求25的药物组合物，其中的神经退行性疾病选自阿尔茨海默氏症、帕金森氏症和亨廷顿病、唐氏综合症、精神发育迟滞和运动缺陷。
28.根据权利要求24的药物组合物在制备用于治疗癌症、神经退行性疾病或代谢性疾病的药物中的用途。
29.根据权利要求28的用途，其中的癌症选自急性巨核细胞白血病(AMKL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、卵巢癌、胰腺癌、胃肠道间质瘤(GIST)、骨肉瘤(OS)、结直肠癌(CRC)、神经母细胞瘤和胶质母细胞瘤。
30.根据权利要求28的用途，其中的神经退行性疾病选自阿尔茨海默氏症、帕金森氏症和亨廷顿病、唐氏综合症、精神发育迟滞和运动缺陷。
31.用于治疗癌症、神经退行性疾病或代谢性疾病的根据权利要求1至21之一的式(I)化合物或其与可药用酸或碱的加成盐。
32.根据权利要求1至21之一的式(I)化合物或其与可药用酸或碱的加成盐在制备用于治疗癌症、神经退行性疾病或代谢性疾病的药物中的用途。
33.根据权利要求1至21任意一项的式(I)化合物与选自基因毒物、有丝分裂抑制剂、抗代谢药、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂、信号通路抑制剂、磷酸酶抑制剂、细胞凋亡诱导剂和抗体的抗癌药的组合。
34.包含根据权利要求33的组合以及一种或多种可药用赋形剂的药物组合物。
35.用于治疗癌症的根据权利要求33的组合。
36.根据权利要求33的组合在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
37.用于治疗需要放疗的癌症的根据权利要求1至21任意一项的式(I)化合物。
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