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CN108069955A - 3-吡啶基-4-苯并噻唑基吡唑类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents

3-吡啶基-4-苯并噻唑基吡唑类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 Download PDF

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CN108069955A
CN108069955A CN201711111958.8A CN201711111958A CN108069955A CN 108069955 A CN108069955 A CN 108069955A CN 201711111958 A CN201711111958 A CN 201711111958A CN 108069955 A CN108069955 A CN 108069955A
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沈光远
韩吉慧
贺峰
陶维康
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Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
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Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

本发明涉及3‑吡啶基‑4‑苯并噻唑基吡唑类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的新的3‑吡啶基‑4‑苯并噻唑基吡唑类衍生物、其制备方法及其含有该衍生物的药物组合物及其作为治疗剂，特别是作为TGF‑β抑制剂的用途和在制备治疗、预防或减少由TGF‑β过度表达介导的癌症的药物中的用途，其中通式(I)的各取代基与说明书中的定义相同。

Description

3-吡啶基-4-苯并噻唑基吡唑类衍生物、其制备方法及其在医 药上的应用
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一种新的3-吡啶基-4-苯并噻唑基吡唑类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物及其作为治疗剂特别是作为TGF-β的抑制剂的用途和在制备治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌症的药物中的用途。
背景技术
转化生长因子TGF-β(Transforming Growth Factorβ)是二聚多肽生长因子超家族中的一员，其包括例如活化素、抑制素、骨形成蛋白(Bone morphogenetic proteins，BMPs)、生长和分化因子(Growth differentiation factors，GDFs)和繆勒氏管抑制物(Müllerian-inhibiting substance，MIS)。
TGF-β有TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3三种亚型，它们参与细胞增殖与分化、伤口愈合、细胞外基质产生和免疫抑制的调控。参见如Massague,J.Ann.Rev,Cell.Biol.6:594-641(1990)；Roberts,A.B.Peptide Growth Factor and Their receptors,95:419-472Berlin:Springer-Verlag(1990)；Roberts,A.B.和Sporn M.B.Growth Factor 8:1-9(1993)；以及Alexandrow,M.G.,Moses,H.L.Cancer Res.55:1452-1457(1995)。TGF-β的三种亚型与其受体一起存在于大多数的细胞中。每种TGF-β亚型被合成作为前体蛋白，该前体蛋白在细胞内裂解成C-端区域(潜伏相关肽latency associated peptide，LAP)和N-端部分，被称为成熟或活性TGF-β。从细胞中分泌前，LAP一般与成熟TGF-β以非共价的方式连接。LAP-TGF-β复合体不能与TGF-β受体结合且不具有生物学活性。TGF-β通常通过多种机制包括例如，与血小板反应蛋白-1或纤溶酶相互作用，从复合体中释放出来(并具有活性)。TGF-β1通过两种高保守性单跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶转导信号，即I型(ALK5)和II型TGF-β受体。一旦配体诱发低聚化，II型受体过度磷酸化ALK5GS区中的丝氨酸/苏氨酸残基，通过创建Smad蛋白的结合位点引起ALK5的活化。活化的ALK5继而磷酸化C-末端SSXS-基序处的Smad2和Smad3蛋白，从而导致它们从受体中离解，并且与Smad4生成异质复合体(heteromericcomplex)。Smad复合体易位于核，与特异性DNA-结合性辅因子和辅调控剂装配，最终活化细胞外基质组分和基质-降解性蛋白酶抑制剂的转录。
TGF-β信号通路的极度活跃是许多人类疾病(如细胞外基质的过量沉积、炎症应答的异常高水平、纤维变性病症以及进行性癌)的原因。在各种癌症的晚期，肿瘤细胞和肿瘤内基质细胞一般过度表达TGF-β。这引起血管生成与细胞运动的刺激、免疫系统的抑制和肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用增加(例如,Hojo,M.等人,Nature 397:530-534(1999))。所以，肿瘤细胞变得更有侵袭性，转移至远侧器官例如,Maehara,Y.等人,J.Clin.Oncol.17:607-614(1999)；Picon,A.等人,Cancer Epidemiol.BiomarkersPrev.7:497-504(1998))。
大量实验性动物研究证明了TGF-β的肾小球表达与纤维化之间的关联，包括增殖性肾小球性肾炎的Thy-1大鼠模型、兔抗-GBM肾小球性肾炎和局灶性节段性肾小球硬化的5/6肾切除大鼠模型，最近已有评述(例如，Bitzer,M.等，Kidney Blood Press.Res.21:1-12(1998))。TGF-β的中和抗体改进Thy-1肾炎模型中的肾小球组织学(如,Border,W.A.等人,Nature 346:371-374(1990))。
TGF-β1及其受体在受损血管和纤维增殖性血管损伤中被过度表达，引起细胞外基质的过度产生(例如，Saltis,J.等人,Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.23:193-200(1996)；McCaffrey,T.A.等人，J.Clin.Invest.96:2667-2675(1995))。
TGF-β2水平在大多数患有少年青光眼的眼房水肿瘤眼中和几乎一半患有原发性开放角度青光眼(POAG)的眼中都有增加(例如，Picht,G.等人,GraefesArch.Clin.Exp.Ophthalmol.239:199-207(2001))。
因此希望开发出对TGF-β家族成员的抑制剂来预防和/或治疗包括这种信号通路的疾病。公开的TGF-β家族成员受体的调节剂(如拮抗剂)专利申请包括WO2004111046、WO2012000595、WO2012002680、WO2013009140、WO2016106266。
为了达到更好的治疗效果的目的，更好的满足市场需求，发明人希望能开发出新一代的高效低毒的TGF-β受体激酶抑制剂。本发明将提供一种新型结构的TGF-β受体激酶抑制剂，并发现此类结构的化合物具有良好的活性，并表现出优异的TGF-β受体抑制作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
R1选自-S(O)mR4、环烷基和杂环基，其中所述的环烷基和杂环基各自独立地任选被选自氢原子、烷基、烷氧基、卤素、氧代基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基；
R3相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基和硝基；
R4选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R5选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
n为0、1、2、3或4；
p为0、1、2或3；且
m为0、1或2。
在本发明的一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中R3为氢原子。
在本发明的一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(II)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
G选自CH、N、S(O)m和O；
当G为S(O)m或O时，R8不存在；
当G为CH或N时，R8选自氢原子、烷基、烷氧基、卤素、氧代基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7；
s为1或2；
r为0、1或2；
R2、R5～R7、m和n如通式(I)中所定义。
在本发明的一个优选的实施方案中，所述的通式(II)所示的化合物，其为通式(III)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
R9选自烷基、烷氧基、卤素、氧代基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7；
R2、R5～R7、n、m、s和r如通式(II)中所定义。
在本发明的一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III-A)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
R2、n、s和r如通式(II)或(III)中所定义。
在本发明的一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和烷基。
本发明的化合物包括其所有构象异构体，例如顺式和反式异构体；以及其所有旋光异构体和立体异构体及其混合物。本发明的化合物具有不对称中心，因此存在不同的对映异构体与非对映异构体。本发明涉及本发明化合物的用途，和可以采用和含有它们的所有药物组合物和治疗方法。本发明涉及所有这类异构体及其混合物的用途。
本发明的典型化合物包括但不限于：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐。
本发明还涉及一种通式(I-A)所示的化合物，其为合成通式(I)化合物的中间体：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
X为卤素；
R1、R2和n如通式(I)中所定义。
通式(I-A)所示的化合物包括，但不限于：
本发明的另一方面涉及一种制备通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括：
通式(I-A)的化合物和通式(I-B)的化合物在碱性条件下，在催化剂存在下经Suzuki反应，得到通式(I)的化合物，
其中：
G1为
X为卤素，优选为溴；
R1～R3、n和p如通式(I)中所定义。
本发明的另一方面涉及一种制备通式(III)所示的化合物的方法，该方法包括：
通式(III-A)的化合物或其盐酸盐和R9-G2的化合物反应，得到通式(III)的化合物，
其中：
G2选自卤素、氨基、-OC(O)R10和三甲基硅基；其中R10为氢原子或烷基；
R2、R9、n、s和r如通式(III)中所定义。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效剂量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还涉及一种制备上述组合物的方法，其包括将通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂相混合。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，在制备用于抑制TGF-β和/或活化素(特别是人类TGF-β和/或活化素)信号传导途径的药物中的用途。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，在制备用于治疗、预防或减少肿瘤细胞(特别是人类肿瘤细胞)转移的药物中的用途。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌症的药物中的用途，特别是通过抑制人类TGF-β信号传导途径来治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌症的药物中的用途。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，在制备用于治疗、预防或减轻(特别是人类的)选自下述疾病的药物中的用途：血管损伤、肾小球性肾炎、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、高血压-诱发的肾病、肾间质性纤维化、由药物暴露并发症所致肾纤维化、与HIV有关的肾病、移植物肾病、各种病因的肝纤维化、可归因于感染的肝功能障碍、酒精诱发的肝炎、囊性纤维化病、间质性肺病、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、由感染性或毒性因子引起的肺病、梗塞后心纤维化、充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、内膜增厚、血管狭窄、高血压引起的血管重构、肺动脉高压、冠状动脉再狭窄、周围动脉再狭窄、颈动脉再狭窄、支架诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、眼部瘢痕形成、角膜瘢痕形成、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼内压高、发生在由创伤或手术伤口所致伤口愈合期间的过度性或肥厚性真皮瘢痕或瘢痕疙瘩形成、腹膜与皮下粘连、硬皮病、纤维硬化、进行性系统性硬化病、皮肌炎、多肌炎、关节炎、骨质疏松、溃疡、神经系统功能减低、男性勃起功能障碍、佩罗尼氏病、杜普伊特伦氏挛缩、阿尔茨海默氏病、雷诺氏综合征、辐射-诱发的纤维化、血栓形成、肿瘤转移性生长、多发性骨髓瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、白血病、肉瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、胰腺癌、脑癌、皮肤癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌和肝癌。
本发明进一步涉及一种治疗、预防或减少人类肿瘤细胞转移的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物。
本发明进一步涉及一种治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌症的方法，特别是通过抑制TGF-β信号传导途径来治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌症的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物。
本发明进一步涉及一种治疗、预防或减轻(特别是人类的)选自下述疾病的方法：血管损伤、肾小球性肾炎、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、高血压-诱发的肾病、肾间质性纤维化、由药物暴露并发症所致肾纤维化、与HIV有关的肾病、移植物肾病、各种病因的肝纤维化、可归因于感染的肝功能障碍、酒精诱发的肝炎、囊性纤维化病、间质性肺病、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、由感染性或毒性因子引起的肺病、梗塞后心纤维化、充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、内膜增厚、血管狭窄、高血压引起的血管重构、肺动脉高压、冠状动脉再狭窄、周围动脉再狭窄、颈动脉再狭窄、支架诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、眼部瘢痕形成、角膜瘢痕形成、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼内压高、发生在由创伤或手术伤口所致伤口愈合期间的过度性或肥厚性真皮瘢痕或瘢痕疙瘩形成、腹膜与皮下粘连、硬皮病、纤维硬化、进行性系统性硬化病、皮肌炎、多肌炎、关节炎、骨质疏松、溃疡、神经系统功能减低、男性勃起功能障碍、佩罗尼氏病、杜普伊特伦氏挛缩、阿尔茨海默氏病、雷诺氏综合征、辐射-诱发的纤维化、血栓形成、肿瘤转移性生长、多发性骨髓瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、白血病、肉瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、胰腺癌、脑癌、皮肤癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌和肝癌，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物。
本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，其作用药物。
本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，其作用TGF-β受体激酶抑制剂。
本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，其用于治疗、预防或减少肿瘤细胞(特别是人类肿瘤细胞)转移。
本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，其用于治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌症，特别是通过抑制TGF-β信号传导途径来治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌症。
本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，其用于治疗、预防或减轻(特别是人类的)选自下述的疾病：血管损伤、肾小球性肾炎、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、高血压-诱发的肾病、肾间质性纤维化、由药物暴露并发症所致肾纤维化、与HIV有关的肾病、移植物肾病、各种病因的肝纤维化、可归因于感染的肝功能障碍、酒精诱发的肝炎、囊性纤维化病、间质性肺病、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、由感染性或毒性因子引起的肺病、梗塞后心纤维化、充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、内膜增厚、血管狭窄、高血压引起的血管重构、肺动脉高压、冠状动脉再狭窄、周围动脉再狭窄、颈动脉再狭窄、支架诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、眼部瘢痕形成、角膜瘢痕形成、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼内压高、发生在由创伤或手术伤口所致伤口愈合期间的过度性或肥厚性真皮瘢痕或瘢痕疙瘩形成、腹膜与皮下粘连、硬皮病、纤维硬化、进行性系统性硬化病、皮肌炎、多肌炎、关节炎、骨质疏松、溃疡、神经系统功能减低、男性勃起功能障碍、佩罗尼氏病、杜普伊特伦氏挛缩、阿尔茨海默氏病、雷诺氏综合征、辐射-诱发的纤维化、血栓形成、肿瘤转移性生长、多发性骨髓瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、白血病、肉瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、胰腺癌、脑癌、皮肤癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌和肝癌。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。
水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油中配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。
通过加入水可使适用于制备水混悬的可分散粉末和颗粒提供活性成分和用于混合的分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂可说明上述的例子。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂保存这些组合物。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。
本发明的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
发明的详细说明
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7中的一个或多个取代基所取代。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至6个碳原子，例如3、4、5或6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选为环丙基、环丁基、环戊基和环己基；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：
术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：
术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7中的一个或多个取代基所取代。
术语“杂环基”指饱和/或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子，例如1、2、3或4个是杂原子；更优选杂环基包含3至10个环原子，最优选为杂环基包含3至6个环原子，例如3、4、5或6个环原子。单环杂环基的非限制性实例包括氧杂环丁基、氮杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基和等，优选为氮杂环丁基、氧杂环丁基、吡咯基和哌啶基；多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7中的一个或多个取代基所取代。
术语“芳基”指6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，其为具有共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7中的一个或多个取代基所取代。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7中的一个或多个取代基所取代。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、氨基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7中的一个或多个取代基所取代。
术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氧代基”指＝O。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
m和R5～R7如通式(I)中所定义。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
方案一
本发明通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
第一步，通式(I-1)的化合物和通式(I-2)的化合物在碱性条件下反应，得到通式(I-3)的化合物；
第二步，通式(I-3)的化合物和卤代试剂反应，得到通式(I-A)的化合物；
第三步，通式(I-A)的化合物和通式(I-B)的化合物在碱性条件下，在催化剂存在下经Suzuki反应，得到通式(I)的化合物；
提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双三甲基硅基胺基锂、醋酸钾、叔丁醇钠或叔丁醇钾，所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、醋酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化锂；
催化剂包括但不限于钯/碳、雷尼镍、四-三苯基膦钯、二氯化钯、醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、1,1’-双(二苄基磷)二氯二戊铁钯或三(二亚苄基丙酮)二钯，优选为[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯或四-三苯基膦钯；
卤代试剂包括但不限于液溴、溴化氢、N-溴代丁二酰亚胺(NBS)、PBr3、POBr3、过溴化吡啶氢溴酸盐(PHP)、四溴环酮(TBCO)、溴代丙二酸二乙酯、四丁基溴化铵，N-氯代琥珀酰亚胺，PCl3和POCl3；
上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：醋酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物；
其中：
G1选自
X为卤素，优选为溴；
R1～R3、n和p如通式(I)中所定义。
方案二
本发明通式(III)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
通式(III-A)的化合物或其盐酸盐和R9-G2的化合物在碱性条件下反应，得到通式(III)的化合物，
提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、吡啶、N,N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双三甲基硅基胺基锂、醋酸钾、叔丁醇钠或叔丁醇钾，优选为三乙胺或吡啶，所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、醋酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化锂；
上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：醋酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物；
其中：
G2选自卤素、氨基、-OC(O)R10和三甲基硅基；其中R10为氢原子或烷基；
R2、R9、n、s和r如通式(III)中所定义。
具体实施方式
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商:Thermo,型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
手性HPLC分析测定使用LC-10A vp(Shimadzu)或者SFC-analytical(BergerInstruments Inc.)；
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
手性制备柱层析使用Prep Star SD-1(Varian Instruments Inc.)或SFC-multigram(Berger Instruments Inc.)。
CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯体系，C：石油醚/乙酸乙酯体系，D：丙酮，E：二氯甲烷/丙酮体系，F：乙酸乙酯/二氯甲烷体系，G：乙酸乙酯/二氯甲烷/正己烷，H：乙酸乙酯/二氯甲烷/丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
实施例1
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯1
第一步
4-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯1c
将2-甲基-6-(1H-吡唑-3-基)吡啶1a(800mg，5mmol，采用公知的方法“Bioorganicand Medicinal Chemistry,2015,23(6),1260-1275”制备而得)加入100mL单口瓶中，加入30mL N,N-二甲基甲酰胺，再加入(4-甲苯磺酰氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯1b(1.78g，5mmol，采用公知的方法“Journal of Medicinal Chemistry,2012,55(22),9958-9972”制备而得)和碳酸铯(3.2g，10mmol)，60℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，减压浓缩后，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物1c(700mg，白色固体)，产率：40.9％。
MS m/z(ESI):343.5[M+1]
第二步
4-(4-溴-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯1d
将1c(700mg，2mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(356mg,2mmol)，室温搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体B纯化所得残余物，得到标题化合物1d(800mg，白色固体)，产率：95.0％。
MS m/s(ESI):423.0[M+1]
第三步
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯1
将1d(220mg，0.5mmol)，6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噻唑1e(204mg，0.78mmol，采用专利申请“WO2016090296”公开的方法制备而得)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(36mg，0.05mmol)，碳酸钾(138mg，1mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(28mg，0.05mmol)溶于10mL1,4-二氧六环和水(V:V＝4:1)的混合溶剂中，升温至80℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物1(150mg，白色固体)，产率：63.3％。
MS m/z(ESI):476.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.01(s,1H),8.08(d,1H),8.02(s,1H),7.66(s,1H),7.62-7.58(m,1H),7.50(d,1H),7.29(d,1H),7.19-7.11(m,1H),4.53-4.45(m,1H),4.40-4.29(m,2H),3.03-2.89(m,2H),2.69-2.56(m,3H),2.37-2.28(m,2H),2.09-1.97(m,2H),1.52(s,9H)。
实施例2
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-磺酰胺2
第一步
6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑2a
将1(150mg，0.31mmol)加入5mL乙酸乙酯中，滴加0.5mL 4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液，搅拌反应2小时。加入饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物2a(130mg，黄色油状物)，产率：100％。
MS m/z(ESI):376.4[M+1]
第二步
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-磺酰胺2
将粗品2a(100mg，0.24mmol)和磺酰胺(138mg，1.44mmol)溶于2mL吡啶中，130℃微波反应30分钟。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物2(28mg，橙色固体)，产率：25.0％。
MS m/z(ESI):455.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.11(s,1H),8.03(d,1H),7.98-7.96(d,1H),7.36-7.70(m,1H),7.47-7.44(dd,1H),7.36-7.34(d,1H),7.29-7.27(d,1H),4.39-4.46(m,1H),3.86-3.83(d,2H),2.94-2.87(m,2H),2.49(s,3H),2.34-2.23(m,4H)。
实施例3
6-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑3
将2a(40mg，0.11mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(22mg，0.22mmol)和甲磺酰氯(15mg，0.13mmol)，搅拌反应3小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物3(20mg，白色固体)，产率：33.8％。
MS m/z(ESI):454.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(s,1H),8.10(d,1H),8.01(s,1H),7.69(s,1H),7.62-7.58(m,1H),7.49(d,1H),7.29(d,1H),7.27-7.22(m,1H),4.52-4.28(m,1H),4.05-4.00(m,2H),3.10-3.00(m,2H),2.92(s,3H),2.81-2.66(m,3H),2.50-2.42(m,2H),2.33-2.22(m,2H)。
实施例4，5
(1R,4R)-4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)环己甲酰胺4
(1S,4S)-4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)环己甲酰胺5
第一步
(1R,4R)-4-(对甲苯磺酰氧基)环己基羧酸甲酯4b
将(1R,4R)-4-羟基环己烷羧酸甲酯4a(3.16g，20mmol，采用专利申请“US2009118287A1”公开的方法制备而得)溶于20mL吡啶中，加入对甲苯磺酰氯(4.2g，22mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加50mL水，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物4b(3.5g，白色固体)，产率：56.1％。
MS m/z(ESI):330.5[M+1]
第二步
(1S,4S)-4-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)环己基羧酸甲酯4c
将1a(960mg，6mmol)加入100mL单口瓶中，加入30mL N,N-二甲基甲酰胺，再加入4b(2.8g，9mmol)和碳酸铯(3.9g，12mmol)，50℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，减压浓缩后，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物4c(1.0g，无色油状物)，产率：55.6％。
第三步
(1S,4S)-4-(4-溴-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)环己基羧酸甲酯4d
将4c(1g，3.34mmol)溶于30mL二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(0.71mg，4.01mmol)，室温搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物4d(600mg，淡黄色固体)，产率：47.5％
MS m/z(ESI):[M+1]
第四步
(1R,4R)-4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)环己基羧酸甲酯4e
将4d(300mg，0.79mmol)，1e(414mg，1.59mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(58mg，0.08mmol)，碳酸钾(219mg，1.59mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(44mg，0.08mmol)溶于11mL 1,4-二氧六环和水(V:V＝10:1)的混合溶剂中，升温至80℃搅拌反应18小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物4e(200mg，淡黄色粘稠状固体)，产率：58.3％。
MS m/z(ESI):449.5[M+1]
第五步
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)环己基羧酸4f
将4e(200mg，0.46mmol)溶于10mL四氢呋喃和甲醇(V:V＝3:2)的混合溶剂中，加入1.15mL 2M氢氧化钠溶液。搅拌反应2小时。减压蒸去大部分溶剂，加15mL水，用1M盐酸调pH为5～6，有固体析出，过滤，滤饼干燥，得到标题化合物4f(180mg，淡黄色固体)，产率：93.0％
MS m/z(ESI):419.5[M+1]
第六步
(1R,4R)-4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)环己甲酰胺4
(1S,4S)-4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)环己甲酰胺5
将4f(180mg，0.43mmol)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入氯化铵(34.51mg，0.65mmol)，N,N-二异丙基乙胺(0.22mL，1.29mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(99mg，0.52mmol)和1-羟基苯并三氮唑(65mg，0.43mmol)，搅拌反应18小时，加入30mL水，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物4(40mg，白色固体)和5(20mg，白色固体)。
实施例4
MS m/z(ESI):418.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.19(s,1H),8.05(s,1H),8.00(d,1H),7.95(d,1H),7.71(t,1H),7.43(dd,1H),7.33(d,1H),7.27(d,1H),4.28-4.35(m,1H),2.48(s,3H),2.41-2.35(m,1H),2.33-2.27(m,2H),2.09-1.97(m,4H),1.80-1.68(m,2H)。
实施例5
MS m/z(ESI):418.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.18(s,1H),8.08(s,1H),8.03(d,1H),7.94(d,1H),7.71(t,1H),7.45(dd,1H),7.35(d,1H),7.26(d,1H),4.48-4.43(m,1H),2.62-2.55(m,1H),2.47(s,3H),2.43-2.35(m,2H),2.15-2.05(m,4H),1.85-1.76(m,2H)。
实施例6
(R)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯6
第一步
(R)-3-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯6b
将1a(960mg，6mmol)加入100mL单口瓶中，加入30mL N,N-二甲基甲酰胺，再加入(S)-3-(对甲苯磺酰氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯6a(3.07g，9mmol，采用公知的方法“Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,2013,23(14),4044-4047”制备而得)和碳酸铯(3.9g，12mmol)，60℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，加100mL水，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物6b(1.3g，无色油状物)，产率：66.0％。
MS m/z(ESI):329.1[M+1]
第二步
(R)-3-(4-溴-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯6c
将6b(1.3g,3.96mmol)溶于30mL二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(705mg，3.96mmol)，室温搅拌反应16小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物6c(1.5g,无色油状物)，产率：93.1％。
MS m/z(ESI):407.1[M+1]
第三步
(R)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯6
将6c(640mg，1.5mmol)，1e(640mg，2.25mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(274mg，0.3mmol)，碳酸钾(414mg，3mmol)和三环己基膦(210mg，0.75mmol)溶于6.6mL 1,4-二氧六环和水(V:V＝10:1)的混合溶剂中，升温至80℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，加20mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物6(380mg，白色固体)，产率：55.0％。
MS m/z(ESI):462.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),8.04(d,1H),8.00(s,1H),7.62(s,1H),7.51(t,1H),7.47(dd,1H),7.26(d,1H),7.10(d,1H),5.08(m,1H),3.92-3.50(m,4H),2.55(s,3H),2.50-2.43(m,2H),1.49(s,9H)。
实施例7
(R)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑7
将6(362mg，0.78mmol)加入10mL乙酸乙酯中，滴加4mL 4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液，搅拌反应1小时，LC-MS监测至反应完全。加入饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物7(250mg，黄色固体)，产率：88.3％。
MS m/z(ESI):362.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.67(s,1H),8.32-8.28(m,3H),8.17(d,1H),7.86(d,1H),7.67(s,1H),7.58(d,1H),5.53-5.51(m,1H),4.203(d,1H),3.91-3.80(m,2H),3.65-3.59(m,1H),3.01(s,3H),2.77-2.71(m,1H),2.63-2.55(m,1H)。
实施例8
(R)-6-(1-(1-(环丙磺酰基)吡咯烷-3-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑8
将7(40mg，0.11mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入三乙胺(33mg，0.22mmol)和环丙磺酰氯(19mg，0.13mmol)，搅拌反应1小时。加10mL水，二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物8(30mg，白色固体)，产率：58.0％。
MS m/z(ESI):466.6[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.01(s,1H),8.09(d,1H),8.02(d,1H),7.76(s,1H),7.60-7.55(m,1H),7.49(dd,1H),7.27(d,1H),7.16(d,1H),5.20-5.10(m,1H),4.01-3.95(m,2H),3.85-3.79(m,1H),3.71-3.63(m,1H),2.71-2.52(m,6H),1.27-1.23(m,2H),1.04-1.01(m,2H)。
实施例9
(R)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-磺酰胺
第一步
3-氟-2-甲基-6-(1H-吡唑-3-基)吡啶9c
将1H-吡唑-3-硼酸9a(3.09g，27.6mmol)，6-溴-3-氟-2-甲基吡啶9b(6.30g，33.1mmol)，四三苯基磷钯(1.6g，1.38mmol)，27.6mL 2M碳酸钠溶液加入120mL1,4-二氧六环中，加热回流16小时。冷却至室温，减压浓缩，加20mL水，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物9c(2.6g，黄色油状物)，产率：53.2％。
MS m/z(ESI):178.4[M+1]
第二步
(R)-3-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯9d
将9c(800mg，4.5mmol)加入100mL单口瓶中，加入30mL N,N-二甲基甲酰胺，再加入6a(2.32g，6.8mmol)和碳酸铯(2.94g，9mmol)，60℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，加100mL水，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物9d(1.52g，黄色油状物)，产品不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):347.2[M+1]
第三步
(R)-3-(4-溴-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯9e
将粗品9d(1.52g,4.39mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(791mg，4.39mmol)，室温搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物9e(1.3g,无色油状物)，产率69.9％。
MS m/z(ESI):425.1[M+1]
第四步
(R)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯9f
将9e(1.3g，3.1mmol)，1e(1.2g，4.58mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.56g，0.6mmol)，碳酸钾(0.84g，6.11mmol)和三环己基膦(430mg，1.53mmol)溶于33mL1,4-二氧六环和水(V:V＝10:1)的混合溶剂中，升温至80℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物9f(1.4g，白色固体)，产率：65.9％。
MS m/z(ESI):480.2[M+1]
第五步
(R)-6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑
将9f(1.4g，2.92mmol)加入3mL二氯甲烷中，滴加3mL 4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液，搅拌反应2小时。加入饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物9g(1.29g，黄色固体)，产率：73.3％。
MS m/z(ESI):380.1[M+1]
第六步
(R)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-磺酰胺9
将9g(77mg，0.2mmol)和磺酰胺(117mg，1.22mmol)溶于2mL吡啶中，120℃微波反应30分钟。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物9(22mg，橙色固体)，产率：22.7％。
MS m/z(ESI):459.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,1H),8.25(d,1H),8.22(s,1H),7.99(d,1H),7.70-7.50(m,3H),6.94(s,2H),5.11(t,1H),3.73-3.60(m,1H),3.55-3.50(m,1H),3.48-3.42(m,1H),3.36-3.31(m,1H),2.46-2.41(m,2H),2.30(m,3H)。
实施例10
6-1-(1-(环丙磺酰基)哌啶-4-基)3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑10
将2a(45mg，0.11mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(33mg，0.33mmol)和环丙磺酰氯(19mg，0.13mmol)，搅拌反应1小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物10(26mg，白色固体)，产率：50.0％。
MS m/z(ESI):480.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.19(s,1H),8.10(s,1H),8.02(d,1H),7.96-7.94(m,1H),7.70(t,1H),7.45-7.43(mm,1H),7.34(d,1H),7.26(d,1H),4.51-4.44(m,1H),3.96-3.92(m,2H),3.19-3.12(m,2H),2.59-2.53(m,1H),2.47(s,3H),2.33-2.19(m,4H),1.10-1.06(m,4H)。
实施例11
1-(4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙酮11
将2a(40mg，0.11mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(22mg，0.22mmol)和乙酸酐(16mg，0.16mmol)，搅拌反应1小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物11(20mg，白色固体)，产率：43.5％。
MS m/z(ESI):418.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.01(s,1H),8.08(d,1H),8.02(s,1H),7.66(s,1H),7.62-7.58(m,1H),7.49(d,1H),7.29(d,1H),7.27-7.22(m,1H),4.88-4.83(m,1H),4.60-4.52(m,1H),4.10-4.02(m,1H),3.31(t,1H),2.83(t,1H),2.69-2.58(m,3H),2.43-2.40(m,1H),2.36-2.30(m,1H),2.18(s,3H),2.13-2.03(m,2H)。
实施例12
6-1-(1-(乙磺酰基)哌啶-4-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑12
将2a(45mg，0.11mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入0.3mL三乙胺和2滴乙磺酰氯，搅拌反应1小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物12(28mg，白色固体)，产率：54.9％。
MS m/z(ESI):468.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.19(s,1H),8.09(s,1H),8.02(d,1H),7.96-7.94(m,1H),7.70(t,1H),7.45-7.43(m,1H),7.33(d,1H),7.26(d,1H),4.51-4.44(m,1H),3.96-3.93(m,2H),3.15-3.08(m,4H),2.47(s,3H),2.32-2.16(m,4H),1.36(t,3H)。
实施例13
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酰胺13
将2a(45mg，0.11mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(33mg，0.33mmol)和2滴三甲基硅基异氰酸酯，搅拌反应12小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物13(8mg，白色固体)，产率：17.4％。
MS m/z(ESI):419.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.19(s,1H),8.08(s,1H),8.01(d,1H),7.94(d,1H),7.70(t,1H),7.45-7.43(m,1H),7.33(d,1H),7.26(d,1H),4.54-4.48(m,1H),4.23-4.19(m,2H),3.09-3.02(m,2H),2.47(s,3H),2.23-2.07(m,4H)。
实施例14
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)-N,N-二甲基哌啶-1-磺
酰胺14
将2(20mg，0.04mmol)溶于1mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸铯(28mg，0.09mmol)，滴加碘甲烷(0.01mL，0.09mmol)，搅拌反应18小时。减压浓缩，加10mL水，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物14(6mg，类白色固体)，产率：26.8％。
MS m/z(ESI):483.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.18(s,1H),8.07(s,1H),8.01(d,1H),7.94(d,1H),7.68(t,1H),7.45-7.42(m,1H),7.33(d,1H),7.25(d,1H),4.47-4.42(m,1H),3.87-3.84(m,2H),3.12-3.06(m,2H),2.86(s,6H),2.47(s,3H),2.25-2.20(m,4H)。
实施例15
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)-N-甲基哌啶-1-磺酰胺15
将2(20mg，0.04mmol)溶于1mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸铯(28mg，0.09mmol)，0℃下滴加碘甲烷(14mg，0.04mmol)，升温至25℃，搅拌反应2小时。减压浓缩，加10mL水，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物15(8mg，类白色固体)，产率：36.0％。
MS m/z(ESI):469.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.18(s,1H),8.08(s,1H),8.01(d,1H),7.94(d,1H),7.70(t,1H),7.45-7.43(m,1H),7.33(d,1H),7.26(d,1H),4.45-4.41(m,1H),3.85-3.82(m,2H),3.05-2.99(m,2H),2.68(s,3H),2.56(s,3H),2.27-2.19(m,4H)。
实施例16
(S)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯16
采用实施例6的合成路线，将第一步原料6a替换为(R)-3-(对甲苯磺酸)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(采用公知的方法“Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,2013,23(14),4044-4047”制备而得)，制得标题产物16(250mg，黄色油状物)。
MS m/z(ESI):462.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.98(s,1H),8.06(d,1H),7.99(s,1H),7.63(s,1H),7.55(t,1H),7.45(d,1H),7.26(d,1H),7.13(d,1H),5.07(m,1H),3.91-3.58(m,4H),2.60(s,3H),2.45(m,2H),1.47(s,9H)。
实施例17
(S)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑17
将16(250mg，0.54mmol)加入2mL二氯甲烷中，滴加2mL 4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液，搅拌反应12小时。加入饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物17(220mg，黄色固体)，产率：100％。
MS m/z(ESI):362.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),8.04(d,1H),7.99(d,1H),7.68(s,1H),7.51(t,1H),7.46(dd,1H),7.26(d,1H),7.09(d,1H),4.96(m,1H),3.44(dd,1H),3.37(m,1H),3.29(m,1H),3.07(m,1H),2.52(s,3H),2.40(m,1H),2.32(m,1H)。
实施例18
(S)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-(甲磺酰基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑18
将17(50mg，0.1mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入三乙胺(30mg，0.3mmol)和甲磺酰氯(20mg，0.15mmol)，搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物18(20mg，白色固体)，产率：45.4％。
MS m/z(ESI):440.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.98(s,1H),8.05(d,1H),8.00(s,1H),7.70(s,1H),7.55(t,1H),7.46(d,1H),7.25(d,1H),7.13(d,1H),5.08(m,1H),3.95(m,2H),3.72(m,1H),3.64(m,1H),2.97(s,3H),2.56(br,5H)。
实施例19
(S)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸甲酯19
将17(100mg，0.25mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(127mg，1.25mmol)和氯甲酸甲酯(47mg，0.50mmol)，搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物19(70mg，白色固体)，产率：65.1％。
MS m/z(ESI):420.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),8.04(d,1H),7.99(s,1H),7.61(s,1H),7.53(t,1H),7.46(d,1H),7.26(d,1H),7.14(d,1H),5.08(m,1H),3.95(m,2H),3.74(s,3H),3.65(m,2H),2.56(m,5H)。
实施例20
(S)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸乙酯20
将17(100mg，0.25mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(127mg，1.25mmol)和氯甲酸乙酯(54mg，0.50mmol)，搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物20(60mg，白色固体)，产率：54.0％。
MS m/z(ESI):434.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),8.04(d,1H),8.00(s,1H),7.62(s,1H),7.51(t,1H),7.47(d,1H),7.26(d,1H),7.09(d,1H),5.08(m,1H),4.17(m,2H),3.98-3.90(m,2H),3.74-3.62(m,2H),2.54-2.45(m,5H),1.28(t,3H)。
实施例21
(S)-1-(3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-基)乙酮21
将17(50mg，0.1mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入三乙胺(30mg，0.3mmol)和乙酸酐(20mg，0.2mmol)，搅拌反应2小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物21(35mg，白色固体)，产率：87.5％。
MS m/z(ESI):404.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.98(s,1H),8.05(d,1H),7.99(s,1H),7.63(d,1H),7.54(m,1H),7.46(d,1H),7.27(t,1H),7.13(d,1H),5.14-5.06(m,1H),4.05(m,2H),3.83(m,1H),3.69(m,1H),2.59-2.47(m,5H),2.12(d,3H)。
实施例22
(S)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸异丙酯22
将17(80mg，0.2mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(81mg，0.8mmol)和氯甲酸异丙酯(49mg，0.4mmol)，搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物22(50mg，白色固体)，产率：54.4％。
MS m/z(ESI):448.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.98(s,1H),8.05(d,1H),8.00(s,1H),7.63(s,1H),7.54(t,1H),7.47(d,1H),7.26(d,1H),7.12(d,1H),5.08(m,1H),4.97(m,1H),3.69-3.55(m,4H),2.58-2.45(m,5H),1.28(d,6H)。
实施例23
(R)-6-(1-(1-(乙磺酰基)吡咯烷-3-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑23
将7(40mg，0.11mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入三乙胺(33mg，0.22mmol)和乙基磺酰氯(17mg，0.13mmol)，搅拌反应1小时。加10mL水，二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物23(17mg，黄色固体)，产率：34.0％。
MS m/z(ESI):454.6[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.21(s,1H),8.11(s,1H),8.04(d,1H),7.97(d,1H),7.71(t,1H),7.46(dd,1H),7.36(d,1H),7.27(d,1H),5.19-5.14(m,1H),3.97-3.90(m,2H),3.77-3.73(m,1H),3.66-3.62(m,1H),3.21-3.15(q,2H),2.62-2.57(m,2H),2.48(s,3H),1.34(t,3H)。
实施例24
(R)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-磺酰胺24
将7(72mg，0.2mmol)和磺酰胺(77mg，0.8mmol)溶于3mL 1,4-二氧六环中，加2mL三乙胺，100℃反应5小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物24(15mg，黄白色固体)，产率：17.0％。
MS m/z(ESI):441.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.21(s,1H),8.11(s,1H),8.03(d,1H),7.97(d,1H),7.69(t,1H),7.46(dd,1H),7.32(d,1H),7.27(d,1H),5.18-5.14(m,1H),3.85-3.77(m,2H),3.65-3.61(m,1H),3.52-3.48(m,1H),2.60-2.55(m,2H),2.50(s,3H)。
实施例25
(R)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-(甲磺酰基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑25
将7(40mg，0.11mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入三乙胺(33mg，0.22mmol)和甲磺酰氯(15mg，0.13mmol)，搅拌反应1小时。加10mL水，二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物25(20mg，黄色固体)，产率：41.0％。
MS m/z(ESI):440.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.00(s,1H),8.07(d,1H),8.03(s,1H),7.73(s,1H),7.55(t,1H),7.49(dd,1H),7.27(d,1H),7.13(d,1H),5.12-5.09(m,1H),3.99-3.92(m,2H),3.76-3.72(m,1H),3.69-3.65(m,1H),2.99(s,3H),2.61-2.56(m,2H),2.54(s,3H)。
实施例26
3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯26
采用实施例6的合成路线，将第一步原料6a替换为3-(对甲苯磺酰氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(采用公知的方法“Organic Letters,2014,16(7),1992-1995”制备而得)，制得标题产物26(60mg，浅黄色固体)。
MS m/z(ESI):448.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.19(s,1H),8.09(s,1H),8.02(d,1H),7.96-7.94(m,1H),7.70(t,1H),7.45-7.43(m,1H),7.36(d,1H),7.26(d,1H),5.34-5.28(m,1H),4.48-4.41(m,4H),2.47(s,3H),1.48(s,9H)。
实施例27
6-(1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑27
将26(110mg，0.25mmol)加入12mL乙酸乙酯中，滴加1.2mL 4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液，搅拌反应1小时。加入饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物27(83mg，黄色固体)，产率：100％。
MS m/z(ESI):348.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.06(s,1H),8.03(d,1H),7.99-7.97(m,1H),7.69(t,1H),7.46-7.44(m,1H),7.36(d,1H),7.27(d,1H),5.51-5.44(m,1H),4.57-4.44(m,4H),2.51(s,3H)。
实施例28
6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-(甲磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑28
将27(70mg，0.05mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入0.5mL三乙胺和0.05mL甲磺酰氯，搅拌反应1小时。减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物28(16mg，白色固体)，产率：76.0％。
MS m/z(ESI):426.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.09(s,1H),8.03(d,1H),7.97-7.95(m,1H),7.71(t,1H),7.46-7.44(mm,1H),7.40(d,1H),7.27(d,1H),5.40-5.33(m,1H),4.58-4.54(m,2H),4.45-4.41(m,2H),3.13(s,3H),2.46(s,3H)。
实施例29
1-(3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基)乙酮29
将27(18mg，0.05mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入0.5mL三乙胺和0.05mL乙酸酐，搅拌反应1小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物29(5mg，黄色固体)，产率：75.0％。
MS m/z(ESI):390.5[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.12(s,1H),8.03(d,1H),7.97-7.95(m,1H),7.70(t,1H),7.46-7.43(m,1H),7.34(d,1H),7.28(d,1H),5.41-5.34(m,1H),4.74(d,2H),4.54-4.45(m,2H),2.48(s,3H),1.97(s,3H)。
实施例30
6-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑30
第一步
4-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯30a
将9c(885mg，5mmol)加入100mL单口瓶中，加入10mL N,N-二甲基甲酰胺，再加入1b(1.78g，5mmol)和碳酸铯(3.2g，10mmol)，45℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，减压浓缩后，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物30a(720mg，白色固体)，产率：40.0％。
第二步
4-(4-溴-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯30b
将30a(720mg，2mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(356mg，2mmol)，室温搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物30b(700mg，白色固体)，产率：80.0％。
第三步
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯30c
将30b(200mg，0.46mmol)，1e(179mg，0.68mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.84g，0.09mmol)，碳酸钾(138mg，1mmol)和三环己基膦(64mg，0.23mmol)溶于5mL 1,4-二氧六环和水(V:V＝10:1)的混合溶剂中，升温至80℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物30c(227mg，白色固体)，产率：100％。
第四步
6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑30d
将30c(227mg，0.46mmol)加入20mL二氯甲烷中，滴加5mL三氟乙酸，搅拌反应12小时。加入饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物30d(180mg，黄色固体)，产率：100.0％。
第五步
6-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-(甲砜基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑30
将30d(180mg，0.46mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入三乙胺(139mg，1.38mmol)和甲磺酰氯(105mg，0.9mmol)，搅拌反应2小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物30(30mg，淡黄色固体)，产率：11.1％。
MS m/z(ESI):472.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.16-8.14(m,1H),7.94(s,1H),7.67(m,1H),7.60-7.58(m,1H),7.38-7.34(m,1H),7.26(m,1H),4.47(m,1H),4.0-3.97(m,2H),2.99-2.94(m,2H),2.87(s,3H),2.76-2.75(m,3H),2.39-2.36(m,2H),2.17-2.13(m,2H)。
实施例31
(R)-6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-甲磺酰基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑31
将9g(60mg，0.16mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入三乙胺(64mg，0.63mmol)和甲磺酰氯(27mg，0.24mmol)，搅拌反应2小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物31(35mg，淡黄色固体)，产率：48.4％。
MS m/z(ESI):458.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,1H),8.27-8.25(m,2H),7.99(d,1H),7.67-7.50(m,3H),5.13(t,1H),3.90-3.80(m,1H),3.74-3.68(m,1H),3.60-3.45(m,2H),2.95(s,3H),2.46-2.41(m,2H),2.30(m,3H)。
实施例32
(R)-6-(1-(1-(环丙磺酰基)吡咯烷-3-基)-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑32
将9g(70mg，0.18mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入三乙胺(74mg，0.74mmol)和环丙磺酰氯(39mg，0.28mmol)，搅拌反应2小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物32(40mg，淡黄色固体)，产率：42.0％。
MS m/z(ESI):484.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,1H),8.27-8.25(m,2H),7.99(d,1H),7.67-7.51(m,3H),5.15(t,1H),3.90-3.85(m,1H),3.79-3.74(m,1H),3.69-3.51(m,2H),2.78-2.73(m,1H),2.54-2.50(m,2H),2.30(d,3H),0.96-0.92(m,4H)。
实施例33
(S)-6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-甲磺酰基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑33
第一步
(S)-3-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯33b
将9c(600mg，3.4mmol)加入100mL单口瓶中，加入25mL N,N-二甲基甲酰胺，再加入(R)-3-(对甲苯磺酰氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯33a(1.74g，5.1mmol，采用公知的方法“Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,2013,23(14),4044-4047”制备而得)和碳酸铯(2.2g，6.8mmol)，60℃搅拌反应2小时。反应液冷却至室温，加100mL水，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物33b(700mg，黄色油状物)，产率：60.0％。
MS m/z(ESI):347.1[M+1]
第二步
(S)-3-(4-溴-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯33c
将33b(700mg，2.02mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(360mg，2.02mmol)，室温搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物33c(870mg，淡黄色油状物)，产率：100.0％。
MS m/z(ESI):425.0[M+1]
第三步
(S)-3-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯33d
将33c(385mg，0.91mmol)，1e(355mg，1.35mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(167mg，0.18mmol)，碳酸钾(252mg，1.82mmol)和三环己基膦(128mg，0.45mmol)溶于5mL 1,4-二氧六环和水(V:V＝10:1)的混合溶剂中，升温至80℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物33d(440mg，棕色油状物)，产率：100.0％。
MS m/z(ESI):480.1[M+1]
第四步
(S)-6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑33e
将33d(440mg，0.91mmol)加入3mL二氯甲烷中，滴加3mL 4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液，搅拌反应2小时。加入饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物33e(350mg，黄色固体)，产率：100.0％。
MS m/z(ESI):380.1[M+1]
第五步
(S)-6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(1-甲磺酰基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑33
将33e(70mg，0.18mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入三乙胺(56mg，0.55mmol)和甲磺酰氯(31mg，0.28mmol)，搅拌反应2小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物33(40mg，淡黄色固体)，产率：47.6％。
MS m/z(ESI):458.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,1H),8.25-8.27(m,2H),7.99(d,1H),7.50-7.67(m,3H),5.13(t,1H),3.80-3.90(m,1H),3.68-3.74(m,1H),3.45-3.60(m,2H),2.95(s,3H),2.41-2.46(m,2H),2.30(m,3H)。
实施例34
(S)-6-(1-(1-(环丙磺酰基)吡咯烷-3-基)-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑34
将33e(70mg，0.18mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入三乙胺(56mg，0.56mmol)和环丙磺酰氯(39mg，0.28mmol)，搅拌反应2小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物34(30mg，淡黄色固体)，产率：33.7％。
MS m/z(ESI):484.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,1H),8.25-8.27(m,2H),7.99(d,1H),7.51-7.67(m,3H),5.15(t,1H),3.85-3.90(m,1H),3.74-3.79(m,1H),3.51-3.69(m,2H),2.73-2.78(m,1H),2.50-2.54(m,2H),2.30(d,3H),0.92-0.96(m,4H)。
实施例35
6-(1-环丙基-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑35
第一步
6-(1-环丙基-1H-吡唑-3-基)-3-氟-2-甲基吡啶35b
将9c(1.58g，8.92mmol)，环丙基硼酸35a(1.53g，17.83mmol)，一水合乙酸铜(3.56g，17.83mmol)，碳酸钠(1.89g，17.83mmol)和2,2-联吡啶(2.79g，17.83mmol)溶于50mL 1,2-二氯乙烷中，升温至50℃搅拌反应16小时。反应结束后，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物35b(455mg，黄色粘稠物)，产率：23.5％。
第二步
6-(4-溴-1-环丙基-1H-吡唑-3-基)-3-氟-2-甲基吡啶35c
将35b(344mg，1.58mmol)溶于30mL二氯甲烷中，加入N-溴代琥珀酰亚胺(282mg，1.58mmol)，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物35c(380mg，无色油状物)，产率：81.0％。
第三步
6-(1-环丙基-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑35
将35c(75mg，0.25mmol)，1e(99mg，0.38mmol)，碳酸钾(70mg，0.51mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(19mg，0.025mmol)，1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(14mg，0.025mmol)溶于5.5mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝10:1)的混合溶剂中，升温至80℃搅拌反应16小时。反应液减压浓缩，所得残余物中加入水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物35(46mg，白色固体)，产率：51.7％。
MS m/z(ESI):351.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),8.05(d,1H),7.97(s,1H),7.64(s,1H),7.46(dd,1H),7.33-7.31(m,1H),7.26(d,1H),3.76-3.71(m,1H),2.50(d,3H),1.29-1.25(m,2H),1.12-1.09(m,2H)。
实施例36
6-(1-环丁基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑36
第一步
2-(1-环丁基-1H-吡唑-3-基)-6-甲基吡啶36b
将1a(2.01g，12.6mmol)溶于100mL N,N-二甲基甲酰胺中，再加入甲苯-4-磺酸环丁酯36a(4.29g，18.9mmol，采用专利申请“WO200993029”公开的方法制备而得)和碳酸铯(8.23g，25.3mmol)，加热至60℃搅拌反应16小时。冷却至室温，加入水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物36b(1.81g，无色油状物)，产率：67.3％。
第二步
2-(4-溴-1-环丁基-1H-吡唑-3-基)-6-甲基吡啶36c
将36b(1.81g，8.49mmol)溶于100mL二氯甲烷中，加入N-溴代琥珀酰亚胺(1.51g，8.49mmol)，室温搅拌72小时。反应结束后，减压浓缩反应液，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物36c(2.13g，黄色油状物)，产率：85.9％。
第三步
6-(1-环丁基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑36
将36c(77mg，0.26mmol)，1e(103mg，0.40mmol)，1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(15mg，0.026mmol)，磷酸钾(168mg，0.79mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(10mg，0.013mmol)溶于10mL 1,4-二氧六环中，升温至80℃搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，所得残余物中加入水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物36(6mg，白色固体)，产率：6.6％。
MS m/z(ESI):347.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.95(s,1H),8.03(d,1H),7.99(s,1H),7.69(s,1H),7.51-7.47(m,2H),7.25(d,1H),7.08(d,1H),4.96-4.88(m,1H),2.64-2.57(m,4H),2.55(s,3H),1.94-1.87(m,2H)。
实施例37
6-(1-环丙基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑37
第一步
2-(1-环丙基-1H-吡唑-3-基)-6-甲基吡啶37a
将1a(700mg，4.40mmol)，35a(756mg，8.80mmol)，一水合乙酸铜(1.76g，8.80mmol)，碳酸钠(933mg，8.80mmol)和2,2-联吡啶(1.37g，8.80mmol)溶于25mL1,2-二氯乙烷中，升温至50℃搅拌反应16小时。反应结束后，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物37a(440mg，黄色粘稠物)，产率：50.2％。
MS m/z(ESI):200.4[M+1]
第二步
2-(4-溴-1-环丙基-1H-吡唑-3-基)-6-甲基吡啶37b
将37a(330mg，1.66mmol)溶于8mL二氯甲烷中，加入N-溴代琥珀酰亚胺(295mg，1.66mmol)，室温搅拌1小时。反应结束后，反应液中加入10mL水，二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物37b(335mg，黄色粘稠物)，产率：72.6％。
MS m/z(ESI):280.1[M+1]
第三步
6-(1-环丙基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑37
将37b(85mg，0.3mmol)，1e(94mg，0.36mmol)，四三苯基膦钯(35mg，0.03mmol)和0.6mL 2M碳酸钠溶液，溶于3mL乙二醇二甲醚中，升温至110℃微波反应30分钟。反应液减压浓缩，所得残余物中加入水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物37(10mg，黄色固体)，产率：10.0％。
MS m/z(ESI):333.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.06(s,1H),8.01(s,1H),7.95(d,1H),7.71(t,1H),7.43(dd,1H),7.33(d,1H),7.27(d,1H),3.83-3.78(m,1H),2.48(s,3H),1.28-1.24(m,2H),1.16-1.11(m,2H)。
实施例38
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物38
第一步
4-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物38b
将1a(146mg，0.92mmol)加入100mL单口瓶中，加入30mL N,N-二甲基甲酰胺，再加入1,1-二氧化物四氢-2H-噻喃-4-基4-甲苯磺酸酯38a(280mg，0.92mmol，采用专利申请“WO2014036897A1”公开的方法制备而得)和碳酸铯(599mg，1.84mmol)，60℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，减压浓缩后，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物38b(250mg，白色固体)，产率：88.6％。
MS m/z(ESI):292.3[M+1]
第二步
4-(4-溴-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物38c
将38b(250mg，0.86mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(229mg，1.29mmol)，室温搅拌反应36小时。减压浓缩，用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物38c(380mg，白色固体)，产率：100.0％。
MS m/z(ESI):372.3[M+1]
第三步
4-(4-(苯并[d]噻唑-6-基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-1-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物38
将38c(50mg，0.14mmol)，1e(70mg，0.27mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(10mg，0.01mmol)，碳酸钾(37mg，0.27mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(8mg，0.01mmol)加入10mL 1,4-二氧六环和水(V:V＝10:1)的混合溶剂中，氩气氛下，升温至80℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，加50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物38(5mg，白色固体)，产率：7.6％。
MS m/z(ESI):425.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.09(s,1H),8.02(d,1H),7.95(d,1H),7.70(t,1H),7.45-7.43(mm,1H),7.33(d,1H),7.26(d,1H),4.93-4.89(m,1H),3.82-3.75(m,1H),3.62-3.59(m,1H),3.19-3.12(m,2H),2.47(s,3H),2.34-2.21(m,4H)。
实施例39
6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑39
采用实施例38的合成路线，将第一步原料38a替换为甲苯-4-磺酸-四氢-2H-吡喃-4-基酯(采用公知的方法“MedChemComm,2012,3(9),1077-1081”制备而得)，制得标题产物39(61mg，黄色固体)。
MS m/z(ESI):377.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),8.05(d,1H),8.01(s,1H),7.66(s,1H),7.54(t,1H),7.49(d,1H),7.26(d,1H),7.12(d,1H),4.65-4.50(m,1H),4.16(d,2H),3.59(t,2H),2.61(s,3H),2.29-2.23(m,2H),2.17-2.09(m,2H)。
实施例40
6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑40
采用实施例38的合成路线，将第一步原料38a替换为甲苯-4-磺酸氧杂环丁-3-基酯(采用专利申请“US2015336982”公开的方法制备而得)，制得标题产物40(31mg，黄色固体)。
MS m/z(ESI):349.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.99(s,1H),8.07(d,1H),8.01(s,1H),7.89(s,1H),7.56-7.48(m,2H),7.28(d,1H),7.13(d,1H),5.66-5.61(m,1H),5.18-5.12(m,4H),2.59(s,3H)。
实施例41
(R)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑41
采用实施例38的合成路线，将第一步原料38a替换为(S)-甲苯-4-磺酸四氢呋喃-3-基酯(采用公知的方法“European Journal of Organic Chemistry,2011,32,6527-6531”制备而得)，制得标题产物41(50mg，黄色固体)。
MS m/z(ESI):363.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),8.05(d,1H),8.00(s,1H),7.71(s,1H),7.52(t,1H),7.46(d,1H),7.25(d,1H),7.13(d,1H),5.22-5.17(m,1H),4.25-4.20(m,2H),4.11-4.07(m,1H),3.98-3.92(m,1H),2.62(s,3H),2.58-2.09(m,2H)。
实施例42
(S)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑42
采用实施例38的合成路线，将第一步原料38a替换为(R)-甲苯-4-磺酸四氢呋喃-3-基酯(采用公知的方法“Journal of Medicinal Chemistry,2011,54(12),4092-4108”制备而得)，制得标题产物42(50mg，黄色固体)。
MS m/z(ESI):363.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.07(s,1H),8.03(d,1H),7.96(d,1H),7.71(t,1H),7.46(dd,1H),7.36(d,1H),7.27(d,1H),5.20-5.14(m,1H),4.22-4.19(m,2H),4.15-4.11(m,1H),4.01-3.95(m,1H),2.61-2.51(m,2H),2.48(s,3H)。
实施例43
6-(1-(环丙磺酰基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑43
第一步
2-(4-溴-1H-吡唑-3-基)-6-甲基吡啶43a
将1a(5.59g，35.08mmol)溶于200mL二氯甲烷中，分批加入N-溴代丁二酰亚胺(6.24g，35.08mmol)，室温搅拌反应16小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物43a(8.01g，白色固体)，产率：95.41％。
MS m/z(ESI):[M+1]
第二步
2-(4-溴-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-6-甲基吡啶43b
将43a(8g，33.6mmol)，3,4-二氢-2H-吡喃(4.2g，50.4mmol)，1mL三氟乙酸加入200mL甲苯中，80℃搅拌反应12小时。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机相减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物43b(8.1g，白色固体)，产率：74.8％。
MS m/z(ESI):[M+1]
第三步
6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑43c
将43b(3.41g，10.58mmol)，1e(4.15g，15.88mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.77g，1.06mmol)，碳酸钾(2.93g，21.17mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(0.59g，1.06mmol)溶于220mL1,4-二氧六环和水(V:V＝10:1)的混合溶剂中，升温至80℃搅拌反应48小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，加300mL水，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物43c(3.09g，白色固体)，产率：77.6％。
MS m/z(ESI):[M+1]
第四步
6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑43d
将43c(3.09g，8.21mmol)加入50mL甲醇中，滴加10mL 4M氯化氢的1,4-二氧六环溶液，搅拌反应12小时。加入饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物43d(2.11g，白色固体)，产率：87.9％。
MS m/z(ESI):[M+1]
第五步
6-(1-(环丙磺酰基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑43
将43d(30mg，0.10mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入三乙胺(30mg，0.3mmol)和环丙磺酰氯(20mg，0.15mmol)，搅拌反应2小时。减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物43(2mg，淡黄色固体)，产率：5.0％。
MS m/z(ESI):397.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.39(s,1H),8.69(s,1H),8.33(d,1H),8.01(dd,1H),7.92(t,1H),7.58-7.53(m,2H),7.31(d,1H),3.3-3.25(m,1H),2.34(s,3H),1.40-1.37(m,2H),1.29-1.25(m,2H)。
实施例44
6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑44
将43d(80mg，0.27mmol)溶于2mL吡啶中，滴加甲磺酰氯(0.06mL，0.82mmol)，搅拌反应12小时。减压浓缩，加入20mL饱和硫酸铜溶液，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物44(88mg，类白色固体)，产率：81.1％。
MS m/z(ESI):371.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.02(s,1H),8.25(s,1H),8.09(s,1H),8.07(s,1H),7.65(t,1H),7.52-7.48(m,2H),7.20(d,1H),3.51(s,3H),2.50(s,3H)。
实施例45
6-(1-(乙磺酰基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑45
将43d(81mg，0.28mmol)溶于2mL吡啶中，滴加乙磺酰氯(0.08mL，0.83mmol)，搅拌反应12小时。减压浓缩，加入20mL饱和硫酸铜溶液，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物45(90mg，类白色固体)，产率：82.3％。
MS m/z(ESI):385.4[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.01(s,1H),8.24(s,1H),8.10(s,1H),8.07(s,1H),7.64(t,1H),7.57(d,1H),7.51(dd,1H),7.18(d,1H),3.66(dd,2H),2.46(s,3H),1.41(t,3H)。
实施例46
6-(1-(环丙磺酰基)-3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑46
采用实施例43的合成路线，将第一步原料1a替换为9c，制得标题产物46(31mg，白色固体)。
MS m/z(ESI):415.3[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(s,1H),8.18(s,1H),8.10(s,1H),8.08(s,1H),7.68(dd,1H),7.51(d,1H),7.38(t,1H),2.98-2.93(m,1H),2.40(d,3H),1.58-1.56(m,2H),1.29-1.25(m,2H)。
测试例：
生物学评价
测试例1、本发明化合物对TGFβRI激酶活性的抑制作用的测定
体外TGFβRI激酶活性的抑制作用通过以下的方法进行测试。
本发明化合物对TGFβRI激酶ALK5活性的抑制作用采用如下实验方法测定：
酶活性检测使用TGFβRI激酶检测试剂盒(V4093，Promega)，在384孔板(4514，Corning)中依次加入2μl用反应缓冲液(40mM Tris pH7.5，20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA)配制的酶溶液(反应体系中酶终浓度为2ng/μL)，1μl溶于5％DMSO的3倍梯度稀释的化合物，2μl ATP和TGFβRI底物多肽的混合溶液(ATP终浓度为50μM，底物终浓度为0.2μg/μL)，27℃反应2.5小时后，每孔加入5μl试剂盒中的ADP-Glo溶液，27℃放置40分钟，每孔再加入10μl激酶检测试剂，27℃放置30分钟。使用Victor 3(PerkinElmer)多功能酶标仪检测化学发光信号值。用Graphpad prism软件根据化合物各浓度与相应的信号值计算化合物对酶抑制作用的IC50值。
本发明化合物的生物活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表1。
表1本发明化合物对TGFβRI激酶ALK5活性抑制的IC50
结论：本发明实施例化合物对TGFβRI激酶ALK5活性均有明显地抑制作用。
测试例2、本发明化合物对VEGFR2激酶活性的的抑制作用的测定
体外VEGFR2激酶活性的的抑制作用通过以下的方法进行测试。
以下所述实验方法用来测定本发明化合物对VEGFR2激酶活性的抑制作用：
酶活性检测使用Z’-Kinase Assay Kit-Tyrosine 1Peptide(PV3190，Invitrogen)试剂盒，在384孔板(4513，Corning)中依次加入5μl用反应缓冲液(50mM HEPESpH7.5，10mM MgCl2，1mM EGTA，0.05％BRIJ-35)配制的重组人VEGFR2酶(PV3660，Invitrogen)和VEGFR2底物多肽(反应体系中酶终浓度为0.14ng/μL,底物终浓度为2μM)，2.5μl溶于5％DMSO的2倍梯度稀释的化合物，2.5μL ATP溶液(ATP终浓度为50μM)，25℃反应2小时后，每孔加入5μL检测试剂，25℃放置1小时后，用NOVOstar(BMG)多功能酶标仪检测发射波长445nm和520nm的荧光信号值。用Graphpad prism软件根据化合物各浓度与相应的信号值计算化合物对酶抑制作用的IC50值。
本发明化合物的生物活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表2。
表2本发明化合物对VEGFR2激酶活性的抑制作用的IC50
实施例编号 IC50(nM)
3 2331
4 ＞10000
5 819
8 729
9 1320
16 2284
18 407
19 1687
23 386
39 3279
41 744
结论：本发明实施例化合物对VEGFR2激酶活性未表现出明显的抑制作用，说明本发明实施例化合物对TGFβRI激酶具有选择性抑制作用。
测试例3、本发明化合物对p38α激酶活性的抑制作用的测定
体外p38α激酶活性的抑制通过以下的方法进行测试。
以下所述实验方法用来测定本发明化合物对p38α激酶活性的抑制作用：
酶活性检测使用p38α激酶检测试剂盒(V9591，Promega)，在384孔板(4514，Corning)中依次加入2μL用反应缓冲液(40mM Tris pH7.5，20mM MgCl2，0.1mg/mL BSA)配制的酶溶液(反应体系中酶终浓度为0.5ng/μL)，1μL溶于5％DMSO的3倍梯度稀释的化合物，2μL ATP和p38底物多肽的混合溶液(ATP终浓度为50μM，底物终浓度为0.2μg/μL)，27℃反应2.5小时后，每孔加入5μL试剂盒中的ADP-Glo溶液，27℃放置40分钟，每孔再加入10μL激酶检测试剂，27℃放置30分钟。使用Victor 3(PerkinElmer)多功能酶标仪检测化学发光信号值。用Graphpad prism软件根据化合物各浓度与相应的信号值计算化合物对酶抑制作用的IC50值。
本发明化合物的生物活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表3。
表3本发明化合物对p38α激酶活性的抑制作用的IC50
实施例编号 IC50(nM)
2 591
3 750
4 890
5 1078
8 1295
16 2841
18 859
19 4358
22 517
23 655
31 732
33 892
34 2772
39 1754
41 595
43 ＞10000
结论：本发明实施例化合物对p38α激酶活性未表现出明显的抑制作用，说明本发明实施例化合物对TGFβRI激酶具有选择性抑制作用。
测试例4、本发明化合物对NIH3T3细胞增殖的抑制测定
下面的体外试验是用来测定本发明化合物对NIH3T3细胞增殖的抑制活性。
以下所述实验方法用来测定本发明化合物对NIH3T3细胞增殖的抑制作用：
在96孔透明底白板(3903，Corning)中用含10％FBS的DMEM培养基(SH30243.01，GE)每孔接种100μL NIH3T3细胞(GNM6，中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)，接种密度为2000细胞/孔，细胞在37℃，5％CO2条件下培养过夜。过夜培养后，每孔更换为90μL含0.5％FBS的DMEM培养基，然后加入10μL用含0.5％FBS的DMEM培养基3倍梯度稀释的化合物，放置37℃，5％CO2细胞培养箱中培养72小时。最后每孔加入50μL CellTiter-Glo(G7573，Promega)，室温孵育10分钟后使用Victor3酶标仪(PerkinElmer)读取化学发光信号值。用Graphpad Prism软件根据化合物各浓度与相应的信号值计算化合物的IC50值。
本发明化合物生物活性由上述分析所得，计算所得的IC50值如下表4：
表4本发明化合物对NIH3T3细胞增殖的抑制的IC50
结论：本发明化合物对NIH3T3细胞增殖有明显的抑制活性。
测试例5、本发明化合物对TGFβRI的Smad信号通路的抑制活性的测定
下面的体外试验是用来测定本发明化合物对TGFβRI的Smad信号通路的抑制活性。
以下所述实验方法用来测定本发明化合物对TGFβRI的Smad信号通路的抑制活性：
在96孔板中用含10％FBS的EMEM培养液(42360-099，Gibco)每孔接种100μL HepG2(TCHu 72，中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)细胞，接种密度为2.5x104细胞/孔，细胞在37℃，5％CO2条件下培养过夜。更换含10％FBS的EMEM新鲜培养液，每孔转染0.1μg3TP-lux质粒(11767，普如汀生物技术(北京)有限公司)，细胞继续在37℃，5％CO2条件下培养24小时。每孔更换90μL含0.5％FBS的EMEM培养液，饥饿6小时。将化合物配置成20mM的储存液，用100％DMSO梯度稀释成400×的浓度，再用含0.5％FBS的EMEM稀释40倍。取出细胞培养板，每孔分别加入10μL稀释后的化合物或对照(0.25％DMSO)，轻轻振荡混匀，放置37℃，5％CO2培养箱中培养18小时，最后每孔加入100μL检测试剂ONE-GloTM Luciferase Assay(E6110，Promega)，室温避光放置10分钟，采用Victor3.0(PerkinElmer)读取化学发光信号值。用Graphpad Prism软件根据化合物各浓度与相应的信号值计算化合物的IC50值。
本发明化合物生物活性由上述分析所得，计算所得的IC50值如下表5：
表5本发明化合物对TGFβRI的Smad信号通路抑制的IC50
结论：本发明化合物均对TGFβRI的Smad信号通路具有明显的抑制活性。
药代动力学评价
测试例6、本发明化合物的药代动力学测试
1、摘要
以大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了大鼠灌胃给予实施例2化合物、实施例24化合物和实施例37化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
2、试验方案
2.1试验药品
实施例2化合物、实施例24化合物和实施例37化合物。
2.2试验动物
健康成年SD大鼠12只，雌雄各半，平均分成3组，每组4只，购自上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号：SCXK(沪)2013-0006。
2.3药物配制
称取一定量药物，加5％体积的DMSO、5％体积的吐温80和90％体积的生理盐水配制成0.2mg/mL的无色澄清透明液体。
2.4给药
SD大鼠禁食过夜后灌胃给药，给药剂量均为2.0mg/kg，给药体积均为10.0mL/kg。
3.操作
大鼠灌胃给药实施例2化合物、实施例24化合物和实施例37化合物，于给药前及给药后0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，11.0，24.0小时由眼眶采血0.2mL，置于肝素化试管中，4℃、3500转/分钟离心10分钟分离血浆，于-20℃保存，给药后2小时进食。
测定不同浓度的药物灌胃给药后大鼠血浆中的待测化合物含量：取给药后各时刻的大鼠血浆25μL，加入内标溶液喜树碱80μL(100ng/mL)，乙腈200μL，涡旋混合5分钟，离心10分钟(4000转/分钟)，血浆样品取上清液1.0μL进行LC/MS/MS分析。
4、药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如下：
结论：本发明化合物的药代吸收较好，具有药代动力学优势。

Claims (15)

1.一种通式(I)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
R1选自-S(O)mR4、环烷基和杂环基，其中所述的环烷基和杂环基各自独立地任选被选自氢原子、烷基、烷氧基、卤素、氧代基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基；
R3相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基和硝基；
R4选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R5选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
n为0、1、2、3或4；
p为0、1、2或3；且
m为0、1或2。
2.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，其中R3为氢原子。
3.根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(II)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
G选自CH、N、S(O)m和O；
当G为S(O)m或O时，R8不存在；
当G为CH或N时，R8选自氢原子、烷基、烷氧基、卤素、氧代基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7；
s为1或2；
r为0、1或2；
R2、R5～R7、m和n如权利要求1中所定义。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
R9选自烷基、烷氧基、卤素、氧代基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-S(O)mR5、-C(O)NR6R7、-NR6R7和-S(O)mNR6R7；
R2、R5～R7、n、m、s和r如权利要求3中所定义。
5.根据权利要求1～3中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III-A)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
R2、n、s和r如权利要求3中所定义。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和烷基。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其选自：
8.一种通式(I-A)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：
X为卤素；
R1、R2和n如权利要求1中所定义。
9.根据权利要求8所述的通式(I-A)所示的化合物，其选自：
10.一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括：
通式(I-A)的化合物和通式(I-B)的化合物在碱性条件下，在催化剂存在下经Suzuki反应，得到通式(I)的化合物，
其中：
G1为
X为卤素，优选为溴；
R1～R3、n和p如权利要求1中所定义。
11.一种制备根据权利要求4所述的通式(III)所示的化合物的方法，该方法包括：
通式(III-A)的化合物或其盐酸盐和R9-G2的化合物反应，得到通式(III)的化合物，
其中：
G2选自卤素、氨基、-OC(O)R10和三甲基硅基；其中R10为氢原子或烷基；
R2、R9、n、s和r如权利要求4中所定义。
12.一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的根据权利要求1～7中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
13.根据权利要求1～7中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或根据权利要求12所述的药物组合物在制备用于治疗、预防或减少肿瘤细胞转移的药物中的用途。
14.根据权利要求1～7中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或根据权利要求12所述的药物组合物在制备用于治疗、预防或减少由TGF-β过度表达介导的癌症的药物中的用途。
15.根据权利要求1～7中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或根据权利要求12所述的药物组合物在制备用于治疗、预防或减轻选自下述疾病的药物中的用途：血管损伤、肾小球性肾炎、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、高血压-诱发的肾病、肾间质性纤维化、由药物暴露并发症所致肾纤维化、与HIV有关的肾病、移植物肾病、各种病因的肝纤维化、可归因于感染的肝功能障碍、酒精诱发的肝炎、囊性纤维化病、间质性肺病、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、由感染性或毒性因子引起的肺病、梗塞后心纤维化、充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、内膜增厚、血管狭窄、高血压引起的血管重构、肺动脉高压、冠状动脉再狭窄、周围动脉再狭窄、颈动脉再狭窄、支架诱导的再狭窄、动脉粥样硬化、眼部瘢痕形成、角膜瘢痕形成、增生性玻璃体视网膜病变、青光眼、眼内压高、发生在由创伤或手术伤口所致伤口愈合期间的过度性或肥厚性真皮瘢痕或瘢痕疙瘩形成、腹膜与皮下粘连、硬皮病、纤维硬化、进行性系统性硬化病、皮肌炎、多肌炎、关节炎、骨质疏松、溃疡、神经系统功能减低、男性勃起功能障碍、佩罗尼氏病、杜普伊特伦氏挛缩、阿尔茨海默氏病、雷诺氏综合征、辐射-诱发的纤维化、血栓、肿瘤转移性生长、多发性骨髓瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、白血病、肉瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、胰腺癌、脑癌、皮肤癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌和肝癌。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108779100A (zh) * 2016-11-14 2018-11-09 江苏恒瑞医药股份有限公司 3,4-二吡啶基吡唑类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN112625030A (zh) * 2020-12-25 2021-04-09 杭州澳赛诺生物科技有限公司 一种一锅法合成n-保护3-溴代吡唑的合成方法
WO2021124222A1 (en) * 2019-12-20 2021-06-24 Novartis Ag Pyrazolyl derivatives useful as anti-cancer agents
EP4237412A4 (en) * 2020-10-30 2024-04-10 Novartis AG NEW CRYSTALLINE FORMS OF A KRAS G12C INHIBITOR COMPOUND

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004050659A1 (en) * 2002-11-27 2004-06-17 Eli Lilly And Company Novel compounds as pharmaceutical agents
CN1770980A (zh) * 2003-02-12 2006-05-10 比奥根艾迪克Ma公司 吡唑及其制备和使用方法
WO2010046780A2 (en) * 2008-10-22 2010-04-29 Institut Pasteur Korea Anti viral compounds

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004050659A1 (en) * 2002-11-27 2004-06-17 Eli Lilly And Company Novel compounds as pharmaceutical agents
CN1770980A (zh) * 2003-02-12 2006-05-10 比奥根艾迪克Ma公司 吡唑及其制备和使用方法
WO2010046780A2 (en) * 2008-10-22 2010-04-29 Institut Pasteur Korea Anti viral compounds

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108779100A (zh) * 2016-11-14 2018-11-09 江苏恒瑞医药股份有限公司 3,4-二吡啶基吡唑类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN108779100B (zh) * 2016-11-14 2021-11-16 江苏恒瑞医药股份有限公司 3,4-二吡啶基吡唑类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2021124222A1 (en) * 2019-12-20 2021-06-24 Novartis Ag Pyrazolyl derivatives useful as anti-cancer agents
JP2023506841A (ja) * 2019-12-20 2023-02-20 ノバルティス アーゲー 抗癌剤として有用なピラゾリル誘導体
US11702409B2 (en) 2019-12-20 2023-07-18 Novartis Ag Pyrazolyl derivatives useful as anti-cancer agents
EP4344702A3 (en) * 2019-12-20 2024-04-10 Novartis AG Pyrazolyl derivatives useful as anti-cancer agents
JP2024056707A (ja) * 2019-12-20 2024-04-23 ノバルティス アーゲー 抗癌剤として有用なピラゾリル誘導体
JP7726883B2 (ja) 2019-12-20 2025-08-20 ノバルティス アーゲー 抗癌剤として有用なピラゾリル誘導体
EP4237412A4 (en) * 2020-10-30 2024-04-10 Novartis AG NEW CRYSTALLINE FORMS OF A KRAS G12C INHIBITOR COMPOUND
CN112625030A (zh) * 2020-12-25 2021-04-09 杭州澳赛诺生物科技有限公司 一种一锅法合成n-保护3-溴代吡唑的合成方法

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