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CN107937491A - 一种针对口腔拭子的基于pcr的snp基因分型方法 - Google Patents

一种针对口腔拭子的基于pcr的snp基因分型方法 Download PDF

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CN107937491A CN201711244487.8A CN201711244487A CN107937491A CN 107937491 A CN107937491 A CN 107937491A CN 201711244487 A CN201711244487 A CN 201711244487A CN 107937491 A CN107937491 A CN 107937491A
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陶勇
艾鹏
黄玉萍
刘腾飞
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Guangzhou Decare Medical Technology Co ltd
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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种针对口腔拭子的基于PCR的SNP基因分型方法。包括：取处理液加入离心管中，加入口腔拭子样本，涡旋混匀，离心；取上述离心后的样本，加入到SNP位点检测反应液中，在实时荧光定量PCR仪上进行扩增，60～65℃检测荧光信号；据各荧光通道Ct值差值，得出样本目标SNP基因型。本发明方法无需进行核酸提取，简化了操作过程，节约了时间和成本，适于大范围推广应用。

Description

一种针对口腔拭子的基于PCR的SNP基因分型方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种针对口腔拭子的基于PCR的SNP基因分型方法。
背景技术
单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymor2phism,SNP)是人类基因组中最为丰富的遗传变异形式，被认为是继限制性片段长度多态性(re2strictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)和短串联重复序列(shorttandemrepeat，STR)之后的第三代遗传标记系统。因在人类基因组中密度高、遗传稳定、易于分型等特点而被广泛应用于遗传作图、疾病相关性分析、群体遗传学和药物研究等领域，是当前相关学科研究的热点。
目前，国内外常见的SNP检测技术包括以下几种，高分辨率融解曲线检测法、基于芯片技术的SNP分型方法、等位基因特异性扩增法、Taqman荧光探针法、质谱法、高效液相层析法和基因测序法等。而在进行检测前，首先一般要提取样本的核酸，目前核酸的提取的主要方法有：酚-氯仿抽提法、磁珠法和离心柱法等。酚-氯仿抽提法可保证提取的DNA保持天然状态、且纯度高，但操作繁琐、比较费时且苯酚对试验人员有一定的危害。而磁珠法和离心柱法存在提取的成本较高，提取率偏低等问题。
因此，提供一种无需核酸提取直接PCR对SNP分型的方法对提高检测效率和质量是非常有必要的。
发明内容
本发明旨在提供一种针对口腔拭子的基于实时定量PCR反应的SNP分型方法。该方法不需核酸提取过程，简单易于操作，节省了时间和成本。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种针对口腔拭子的基于PCR的SNP基因分型方法，包括以下步骤：
A)取处理液加入离心管中，加入口腔拭子样本，涡旋混匀，离心；
B)取上述离心后的样本，加入到SNP位点检测反应液中，在实时荧光定量PCR仪上进行扩增，60～65℃检测荧光信号；据各荧光通道Ct值差值，得出样本目标SNP基因型；
其中，所述处理液为50～100mmol/L Tris-HCl、10～30mmol/L(NH4)2SO4、1～10mmol/L MgCl2·6H2O、1～10umol/L EDTA、0.1～0.5mg/mlBSA、0.1～0.5wt％NP40以及0.1～0.5wt％抗干扰液，pH为8.8。
进一步地，所述处理液为55～100mmol/L Tris-HCl、15～30mmol/L(NH4)2SO4、3～10mmol/L MgCl2·6H2O、3～10umol/L EDTA、0.2～0.5mg/mlBSA、0.2～0.5wt％NP40以及0.2～0.3wt％抗干扰液，pH为8.8。
进一步地，所述SNP检测反应液为：其中包括SNP特异检测探针100～900nmol/L、Taq酶0.5～1.5u、特异性SNP上下游引物100～300nmol/L、pH＝8.0～8.5的PCR buffer50～250umol/L、dNTP 50～250umol/L、(NH4)2SO45～20mmol/L、MgSO41.5～5mmol/L、KCl 50～150mmol/L以及1～3mg/mlBSA。
进一步地，所述特异性检测探针包括野生型探针，其报告基团可选自FAM、VIC和Cy5荧光基团中的一种；突变型探针，其报告基团可选自FAM、VIC和Cy5荧光基团中的一种。
进一步地，所述步骤A)中样本与处理液的体积比为1:1～1:5。
进一步地，所述抗干扰液为包含20～100ppm非极性氨基酸和500～1000ppm聚山梨酯-80降解物的水溶液。
进一步地，所述聚山梨酯-80降解物由以下步骤制得：
往100ml摇瓶内加入聚山梨酯-80溶液，接种2～5wt％浓度为800～1000cfu/mL的绿色木霉，设置温度为30～35℃，转速为120r/min，培养15d，离心，取上清；依次对上清进行微滤、阳离子交换和灭菌，制得聚山梨酯-80降解物。
进一步地，所述非极性氨基酸选自亮氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸中的一种。
进一步地，所述非极性氨基酸选自亮氨酸。
在进行PCR检测前一般要对样本中的核酸进行提取，因为一般认为样本中存在的其他杂质会影响后续PCR的扩增反应，而牛血清白蛋白(BSA)目前已经被公开可以在PCR扩增前加入样品中用于抵抗杂质与DNA结合，防止杂质对后续的PCR反应产生负面影响的作用，但是发明人发现加入了BSA后，在后续PCR扩增反应中还是会出现杂质与DNA结合影响扩增反应，从而导致无法正确分型的情况，并且BSA在pH较高(8.0以上)的处理液中容易水解，不能稳定持久地发挥抵抗杂质的产生的负影响的作用。针对上述技术问题，发明人经过大量的资料调研和长期的创造性劳动，研究出一种抗干扰组合物，意外地发现，在这种抗干扰组合物存在的前提下，能够显著提高SNP分型的准确度，并且，其还具有稳定BSA的作用，取得了意料不到的技术效果。
本发明具有以下优点：
1)本发明提出了一种直接实时定量PCR对口腔拭子样本SNP分型的方法，其无需进行核酸提取，简化了操作过程，节约了时间和成本，适于大范围推广应用。
2)本发明提供了一种抗干扰液，在这种抗干扰组合物存在的前提下，能够显著提高SNP分型的准确度，并且，其还具有稳定BSA的作用，取得了意料不到的技术效果。
附图说明
图1～4为本发明实施例2所述检测方法应用于口腔拭子样品的直接实时定量PCR进行SNP分型检测结果，图1～4分别为1～4号样本的试验结果；
图5为本发明实施例2所述检测方法应用于口腔拭子样品的实时定量PCR重复性检测结果；
图6～9为本发明实施例2方法以及增加了核酸提取步骤方法的检测结果图，图中，1～4号样本为增加了核酸提取步骤的检测结果，1’～4’号样本为本发明实施例1方法的检测结果。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
野生型、突变型检测探针以及上下游引物均购自英潍捷基(上海)贸易有限公司，野生型探针序列为：FAM-TGCTCCCCGCGTGGCC-BHQ1；突变型检测探针序列为：VIC-CTCCCCCCGTGGCCCCT-BHQ1，上游引物序列为：CACTGAAGACCCAGGTCCAGATGA；下游引物序列为：GCCGGTGTAGGAGCTGCTGG。
实施例1、聚山梨酯-80降解物的制备
往100ml摇瓶内加入聚山梨酯-80溶液，接种3wt％浓度为1000cfu/mL的绿色木霉，设置温度为30℃，转速为120r/min，培养15d，离心，取上清；依次对上清进行微滤、732型阳离子交换树脂交换和灭菌，制得聚山梨酯-80降解物。
实施例2、针对口腔拭子样本的基于PCR的SNP基因分型方法
A)配置口腔拭子处理液：其中处理液由以下组分及其用量组成：50mmol/L Tris-HCl、15mmol/L(NH4)2SO4、5mmol/L MgCl2·6H2O、5umol/L EDTA、0.1mg/mlBSA、0.5wt％NP40以及0.2wt％抗干扰液，pH为8.8；其中抗干扰液为包含50ppm亮氨酸和800ppm聚山梨酯-80降解物的水溶液；
B)取保存于口腔拭子保存液中的4例人口腔拭子样本各20ul，加入到含有50ul步骤A)处理液的离心管中，分别作为1号样本、2号样本、3号样本和4号样本，涡旋混匀，短暂离心；
C)将上述步骤B)得到的4个样本各取2ul，加入到20ul SNP位点PCR检测反应液中；其中，所述PCR检测反应液包含由英潍捷基(上海)贸易有限公司提供的SNP特异野生型和突变型检测探针500nmol/L、Taq酶0.5～1.5u、特异性SNP上下游引物200nmol/L、pH＝8.0的PCR buffer10umol/L、dNTP 100umol/L、(NH4)2SO410mmol/L、MgSO42mmol/L、KCl 50mmol/L以及1mg/mlBSA；在实时荧光定量PCR仪(ABI StepOnePlus)上进行扩增，扩增步骤为：95℃15min，一个循环；95℃15s，65℃1min，在65℃终点检测荧光信号，40个循环。
试验结果如图1～4所示，图1～4分别为1～4号样本的试验结果，结果表明按照本实施例1的方法进行操作，可以有效准确清晰地对SNP进行分型。
实施例3、针对口腔拭子样本的基于PCR的SNP基因分型方法
实施例3与实施例2的区别在于，所述抗干扰液为包含20ppm亮氨酸和1000ppm聚山梨酯-80降解物的水溶液，其余参数及操作如实施例1所示。
实施例4、针对口腔拭子样本的基于PCR的SNP基因分型方法
实施例4与实施例2的区别在于，所述抗干扰液为包含100ppm亮氨酸和500ppm聚山梨酯-80降解物的水溶液，其余参数及操作如实施例1所示。
实施例5、重复性检测
A)配置口腔拭子处理液：其中处理液由以下组分及其用量组成：50mmol/L Tris-HCl、15mmol/L(NH4)2SO4、5mmol/L MgCl2·6H2O、5umol/L EDTA、0.1mg/mlBSA、0.5wt％NP40以及0.2wt％抗干扰液，pH为8.8；其中抗干扰液为包含50ppm亮氨酸和800ppm聚山梨酯-80降解物的水溶液；
B)取保存于口腔拭子保存液中的1例人口腔拭子样本平均分成3份，每份取20ul，加入到含有50ul步骤A)处理液的离心管中，分别作为Ⅰ号样本、Ⅱ号样本和Ⅲ号样本，涡旋混匀，短暂离心；
C)将上述步骤B)得到的3个样本各取2ul，加入到20ul SNP位点PCR检测反应液中；其中，所述PCR检测反应液包含SNP特异野生型和突变型检测探针500nmol/L、Taq酶0.5～1.5u、特异性SNP上下游引物200nmol/L、pH＝8.0的PCR buffer10umol/L、dNTP 100umol/L、(NH4)2SO410mmol/L、MgSO42mmol/L、KCl 50mmol/L以及1mg/mlBSA；在实时荧光定量PCR仪(ABI Step OnePlus)上进行扩增，扩增步骤为：95℃15min，一个循环；95℃15s，65℃1min，在65℃终点检测荧光信号，40个循环。
试验结果如图5所示，从图中可以看出，本发明检测方法重复性良好。
实施例6、对比试验
取正常人口腔拭子样本，对其SNP位点进行按照本发明实施例2检测方法检测，同时设置对比试验组(加入了核酸提取步骤)，考察两者分型结果，具体试验方法如下：
1)配置口腔拭子处理液：其中处理液由以下组分及其用量组成：50mmol/L Tris-HCl、15mmol/L(NH4)2SO4、5mmol/L MgCl2·6H2O、5umol/L EDTA、0.1mg/mlBSA、0.5wt％NP40以及0.2wt％抗干扰液，pH为8.8；其中抗干扰液为包含50ppm亮氨酸和800ppm聚山梨酯80降解物的水溶液；
2)取保存于口腔拭子保存液中的4例人口腔拭子样本各20ul，加入到含有50ul步骤1)处理液的离心管中，分别作为1’号样本、2’号样本、3’号样本和4’号样本，涡旋混匀，短暂离心；取相同的4例样本按照口腔拭子DNA提取试剂盒说明书进行DNA提取，提取的样本标记为1号样本、2号样本、3号样本和4号样本；
3)将上述步骤2)得到的8个样本各取2ul，分别加入到20ul SNP位点PCR检测反应液中；其中，所述PCR检测反应液包含SNP特异野生型和突变型检测探针500nmol/L、Taq酶0.5～1.5u、特异性SNP上下游引物200nmol/L、pH＝8.0的PCR buffer10umol/L、dNTP100umol/L、(NH4)2SO410mmol/L、MgSO42mmol/L、KCl 50mmol/L以及1mg/ml的BSA；在实时荧光定量PCR仪(ABI StepOnePlus)上进行扩增，扩增步骤为：95℃15min，一个循环；95℃15s，65℃1min，在65℃终点检测荧光信号，40个循环。
试验结果如图6～9所示，从图中可以看出，按照本发明检测方法与加入了核酸提取步骤的方法检测结果无明显差异，这说明，按照本实施例的方法进行操作，省略了核酸提取步骤，也能有效准确、清晰地对SNP进行分型，节省了大量的经济及人工、时间成本，取得了显著的进步。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种针对口腔拭子的基于PCR的SNP基因分型方法，其特征在于，包括以下步骤：
A)取处理液加入离心管中，加入口腔拭子样本，涡旋混匀，离心；
B)取上述离心后的样本，加入到SNP位点检测反应液中，在实时荧光定量PCR仪上进行扩增，60～65℃检测荧光信号，根据各荧光通道Ct值差值，得出样本目标SNP基因型；
其中，所述处理液为50～100mmol/L Tris-HCl、10～30mmol/L(NH4)2SO4、1～10mmol/LMgCl2·6H2O、1～10umol/L EDTA、0.1～0.5mg/mlBSA、0.1～0.5wt％NP40以及0.1～0.5wt％抗干扰液，pH为8.8。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述处理液为55～100mmol/L Tris-HCl、15～30mmol/L(NH4)2SO4、3～10mmol/L MgCl2·6H2O、3～10umol/L EDTA、0.2～0.5mg/mlBSA、0.2～0.5wt％NP40以及0.2～0.3wt％抗干扰液，pH为8.8。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SNP检测反应液为：SNP特异检测探针100～900nmol/L、Taq酶0.5～1.5u、特异性SNP上下游引物100～300nmol/L、pH＝8.0～8.5的PCR buffer 50～250umol/L、dNTP 50～250umol/L、(NH4)2SO45～20mmol/L、MgSO41.5～5mmol/L、KCl 50～150mmol/L以及1～3mg/mlBSA。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述特异性检测探针包括野生型探针，其报告基团可选自FAM、VIC和Cy5荧光基团中的一种；突变型探针，其报告基团可选自FAM、VIC和Cy5荧光基团中的一种。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤A)中样本与处理液的体积比为1:1～1:5。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗干扰液为包含20～100ppm非极性氨基酸和500～1000ppm聚山梨酯-80降解物的水溶液。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述抗干扰液为包含50ppm非极性氨基酸和800ppm聚山梨酯-80降解物的水溶液。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述聚山梨酯-80降解物由以下步骤制得：
往100ml摇瓶内加入聚山梨酯-80溶液，接种2～5wt％浓度为800～1000cfu/mL的绿色木霉，设置温度为30～35℃，转速为120r/min，培养15d，离心，取上清；依次对上清进行微滤、阳离子交换和灭菌，制得聚山梨酯-80降解物。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述非极性氨基酸选自亮氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸中的一种。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述非极性氨基酸选自亮氨酸。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109486903A (zh) * 2018-12-25 2019-03-19 广州海思医疗科技有限公司 一种用于将拭子上的细胞洗脱、裂解释放核酸的洗脱裂解液、试剂盒和方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102177250A (zh) * 2008-06-30 2011-09-07 生命科技公司 由粗制核酸样品直接扩增的方法
CN103764827A (zh) * 2011-07-04 2014-04-30 恰根有限公司 可用于分离和／或纯化核酸的试剂
CN104293933A (zh) * 2014-09-27 2015-01-21 杭州师范大学 用于rs8099917单核苷酸多态性的直接荧光PCR检测试剂盒及应用
CN106350512A (zh) * 2016-11-24 2017-01-25 深圳华大基因股份有限公司 一种真核细胞核酸提取方法
CN106498074A (zh) * 2016-11-25 2017-03-15 金磁（苏州）纳米科技有限公司 免提取直接扩增的人mthfr基因snp分型快速试纸条检测方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102177250A (zh) * 2008-06-30 2011-09-07 生命科技公司 由粗制核酸样品直接扩增的方法
CN103764827A (zh) * 2011-07-04 2014-04-30 恰根有限公司 可用于分离和／或纯化核酸的试剂
CN104293933A (zh) * 2014-09-27 2015-01-21 杭州师范大学 用于rs8099917单核苷酸多态性的直接荧光PCR检测试剂盒及应用
CN106350512A (zh) * 2016-11-24 2017-01-25 深圳华大基因股份有限公司 一种真核细胞核酸提取方法
CN106498074A (zh) * 2016-11-25 2017-03-15 金磁（苏州）纳米科技有限公司 免提取直接扩增的人mthfr基因snp分型快速试纸条检测方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴婷等: "纳米磁珠法与试剂盒法分析载脂蛋白E基因的多态性", 《中国组织工程研究》 *
官景渠等: "表面活性剂在环境中的生物降解", 《环境科学》 *
朱伟锋等: "盐析法快速提取口腔拭子DNA", 《第二军医大学学报》 *
朱伟锋等: "碱裂解法快速提取口腔拭子DNA对CHRNA3基因多态性的研究", 《重庆医学》 *
杨电等: "口腔拭子DNA检验的实时定量研究", 《刑事技术》 *
潘涛等: "四种DNA提取试剂盒提取效果的比较", 《实用医技杂志》 *
赵磊等: "吐温80降解菌的分离及其性能的初步研究", 《环境科学与技术》 *
陆祖军等: "一株真菌降解吐温80的性能", 《广西师范大学学报：自然科学版》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109486903A (zh) * 2018-12-25 2019-03-19 广州海思医疗科技有限公司 一种用于将拭子上的细胞洗脱、裂解释放核酸的洗脱裂解液、试剂盒和方法

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