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CN107737365A - 一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法 - Google Patents

一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法 Download PDF

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CN107737365A
CN107737365A CN201710821293.3A CN201710821293A CN107737365A CN 107737365 A CN107737365 A CN 107737365A CN 201710821293 A CN201710821293 A CN 201710821293A CN 107737365 A CN107737365 A CN 107737365A
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CN
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culture
dressing
biocellulose
emulsion
skin repair
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Application number
CN201710821293.3A
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李喆
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Jiaxing University
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Suzhou Lanshi Medical Mstar Technology Ltd
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Publication date
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Abstract

本发明涉及一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法，制备方法为：将菌液加入到培养乳液中均匀分散后静置培养得到生物纤维素膜，经后处理后与药物成分复合得到激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，菌液为菌株在水中分散的体系，培养乳液为水包油型乳液，其中水相为菌株培养液，菌株是指能够生物合成纤维素纳米纤维的微生物。本发明的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法，制备方法简单易行、操作方便、成本低且绿色无污染，制备过程中材料自身结构易调控，最终得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的含水率高、载药率高，保水性好，与皮肤的贴敷性极佳，有极好的推广价值。

Description

一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法
技术领域
本发明属于医用材料领域，涉及一种生物纤维素敷料及其制备方法，具体涉及一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法。
背景技术
激光治疗已在欧美等发达国家得到普及，20世纪90年代初期，激光治疗术在我国一些大城市逐步开展起来，激光治疗前景被不断看好。目前，我国各大医院均已建立了激光医疗中心，80％的中小型医院成立了激光医疗科室。
激光治疗有传统手术治疗无法比拟的优越性，具有出血少、痛苦小、手术精度高、时间短和疤痕少等优点，是一种快速、高效且安全的治疗手段。激光治疗聚焦精确，激光为具有一定穿透力的单色光，主要作用于人体组织同时在人体组织的局部产生高热量，从而达到去除或破坏目标组织的目的，各种不同波长的脉冲激光可治疗各种血管性及色素沉着等皮肤病，如太田痣、鲜红斑痣、雀斑、老年斑和毛细血管扩张等，同时还可以用于去纹身、洗眼线、洗眉和治疗疤痕等，也可以针对不同年龄的患者解决色素增生类和血管类的皮肤疾病，改善或恢复先天造成的皮肤缺陷。随着激光治疗的普及，与之相关的激光治疗耗材也将具有广阔的市场。
目前在激光治疗过程中激光会与皮肤组织产生强烈的热效应，越靠近组织表面，皮肤升温越高，在1mm的深度范围内，温度可相差达几十度，这样往往会不可避免的造成皮肤表面及附近组织大面积的灼伤。通常在临床上表现为激光治疗手术后，治疗部位会出现轻微红肿及产生灼热感，同时，治疗部位的皮肤还会出现干燥和缺水现象，如不及时补水将加速皮肤老化。因此激光治疗术后对于皮肤的降温和补水是术后修复的关键，目前国内激光治疗术后为缓解治疗过程中产生的皮肤发热等不适症状，一般采用简单的冷水或温水清洗治疗部位或涂抹皮肤护理产品的方法。这些方法虽然能够缓解不适症状，但由于皮肤冷却时间过短，有效性差，且易造成细菌感染等问题，存在一定的安全隐患。
现在用于激光治疗术后皮肤修复的普遍的产品为水凝胶类降温贴。例如申请号为201310141257.4的专利公开了一种采用细菌纤维素制备的激光治疗术后修复面膜，具有上表面致密向下逐渐过渡到下表面疏松的结构。但该结构缺少微米级大孔，使用时的载药量与持水量较少，通常难以满足使用时间的要求；专利CN102973985B公开了一种具备疏密结构的多孔细菌纤维素皮肤修复材料及其制备方法，通过控制细菌纤维素的培养条件并在培养过程中加入缓释微球制备出一种具有类似人体皮肤“上密下疏”结构的多孔细菌纤维素皮肤修复材料。该方法首次提出了细菌纤维素双层疏密结构的原位发酵制备，但该方法中氧气分压的控制与缓释微球的制备，均较为复杂，且材料结构的控制参数复杂多变。
因此，研究一种含水率高、载药量高、保水性好、制备简便且制备过程中材料自身结构易调控的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法具有极其重要的意义。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中存在的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料含水率低、载药量低、保水性差、制备工艺复杂和制备过程中材料自身结构难以调控的问题，提供一种含水率高、载药量高、保水性好、制备简便且制备过程中材料自身结构易调控的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，将菌液加入到培养乳液中均匀分散后静置培养得到生物纤维素膜，经后处理后与药物成分复合得到激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料；所述菌液为菌株在水中分散的体系，所述培养乳液为水包油型乳液，其中水相为菌株培养液，所述菌株是指能够生物合成纤维素纳米纤维的微生物。
作为优选的技术方案：
如上所述的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，所述菌株培养液中各组分及其含量为：糖或糖醇2～5wt％，蛋白胨0.05～0.5wt％，酵母膏0.05～0.5wt％，柠檬酸0.01～0.1wt％，磷酸氢二钠0.02～0.2wt％，磷酸二氢钾0.01～0.1wt％，余量为水，所述糖为葡萄糖、果糖或蔗糖，所述糖醇为甘露醇；
(2)配制培养乳液和菌液；
将不同组分均质乳化后得到pH值为5～7的培养乳液，按重量份数计，所述培养乳液中各组分及其含量为：菌株培养液50～80份，油5～30份，乳化剂3～15份，增稠稳定剂5～22份；
将冷藏的菌株在室温解冻，并置于菌株培养液中，在28～32℃条件下摇床培养6～24h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在28～32℃条件下静置培养5～9天得到菌液，所述摇床培养时摇床的转速为50～150r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的10～100倍；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28～32℃条件下静置培养3～9天得到生物纤维素膜，所述菌液与培养乳液的体积比为1:10～100；
(4)后处理；
将生物纤维素膜浸泡至浓度为1～10wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.5～2小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素敷料基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材脱水至含水量为50～60wt％，然后浸泡在含10～30wt％药物成分的水溶液、精华液或乳液中，静置处理10～30min，经包装和灭菌得到激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料。
如上所述的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，步骤(2)中，所述油为花生油、椰子油、大豆油、葵花籽油或矿油中的一种以上；
所述乳化剂为聚山梨酯、蔗糖脂肪酸酯、氢化卵磷脂或聚氧乙烯氢化蓖麻油中的一种以上；
所述增稠稳定剂为卡波姆、明胶、海藻酸钠、琼脂、果胶、羧甲基纤维素钠或变性淀粉中的一种以上。
如上所述的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，步骤(2)中，所述菌株为葡糖醋杆菌、产醋杆菌、醋化杆菌、巴氏醋杆菌、葡萄糖杆菌、农杆菌、根瘤菌、八叠球菌、洋葱假单胞菌、椰毒假单胞菌或空肠弯曲菌中的一种以上；本发明中菌株的种类包括但不限于此，能够生物合成纤维素纳米纤维的微生物都可以作为本发明的菌株。
所述菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.0×105～3.0×109个/mL。
如上所述的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，步骤(5)中，所述脱水采用的方法为离心沥干、真空干燥或机械压榨；
所述药物成分提取物是指黄芩提取物、牡丹皮提取物、母菊花提取物、仙鹤草提取物、木瓜提取物、雪莲提取物、银耳提取物、白芨提取物、益母草提取物、百合提取物、丝瓜提取物、氨甲环酸、抗坏血酸或神经酰胺中的一种以上；
所述灭菌指采用高能射线辐照灭菌、压力蒸汽灭菌或电子束灭菌。
本发明还提供了一种如上所述的制备方法制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有双层结构，由上层致密部分和下层多孔疏松部分组成，双层结构的孔隙中填充有含药物成分的水溶液、精华液或乳液；
所述上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，上层致密部分的密度为30～50kg/m3；
所述下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，下层多孔疏松部分的密度为10～20kg/m3；相互连通的多孔网络可以保证生物信号、氧气和营养物质进入材料内部，提高细胞增殖和迁移速度，促进组织血管化和新生组织的形成；而具有高孔隙率和比表面积的纳米纤维材料能够影响细胞-材料的相互作用，促进物质传输，提高细胞黏附、增殖、分化以及基质表达等细胞行为的速度。本发明中皮肤修复生物纤维素敷料的下层多孔疏松部分是相互交错的生物纤维素纳米纤维构成的兼具微米多孔与纳米纤维的多孔疏松结构，具有上述多孔网络与纳米纤维材料共同的优势，能够促进细胞粘附和增殖，导向细胞进入材料内部，加快周围组织的血管化，从而显著加快皮肤创伤的修复。
所述上层致密部分与下层多孔疏松部分通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合，使本发明的生物纤维素敷料，无明显物理分层。
作为优选的技术方案：
如上所述的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，所述双层结构中含药物成分的水溶液、精华液或乳液的含量为1～3wt％；
所述激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为1～7mm，形状为方形、圆形、面膜形或眼膜形，其中上层致密部分的厚度为0.5～3mm。正常的人体皮肤厚度为0.5～4mm，而不同生理部位皮肤厚度差异性较大。因此，控制皮肤修复生物纤维素敷料的厚度有一定的必要性。本发明的生物纤维素皮肤修复生物纤维素敷料可以通过调节培养时间、菌株数目与培养乳液用量等精确调控敷料的厚度，同时改变培养体系黏度能够进一步调节双层结构的比例结构。上层致密部分厚度对于生物纤维素敷料的细胞阻隔作用、水蒸气透过率和力学性能等有显著影响；而下层多孔疏松部分结构能够影响材料的吸水性能、细胞增殖率和血管化等指标。因此，在材料设计时，应根据实际的用途综合考虑皮肤修复生物纤维素敷料的厚度以及上、下层比例。
如上所述的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，所述纤维素纳米纤维的平均直径为20～100nm。
如上所述的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，所述上层致密部分中纤维素纳米纤维之间的平均间距为100～300nm，所述下层多孔疏松部分的平均孔径为1～200μm。
发明机理：
本发明的目的是制备一种具有类似人体皮肤组织脱细胞基质的“上层致密、下层疏松多孔”双层结构的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料。生物纤维素膜的传统培养方法是将菌株均匀分散在水相的菌株培养液中，静态发酵，得到由生物纤维素纳米纤维互相交织形成的较为致密的三维网络结构，本发明采用水包油型乳液作为发酵体系，油相以微小液滴的形式被乳化剂包裹均匀分散在水相(菌株培养液)中，同时增稠剂的引入使得水相具有较高的黏度，在静置培养阶段，将菌液加入到培养乳液中，由于菌液与培养乳液中的水相(菌株培养液)均为水性液体，菌株将均匀分散在培养乳液的水相中，同时，由于乳化剂的保护以及水相黏度的影响，菌株很难进入到油相颗粒中去。在生物纤维素生化合成过程中，菌株细胞作为生物合成反应器，将营养物质在酶催化作用下生成纤维素微纤丝，菌株细胞携带着微纤丝束在培养乳液的水相中无规运动，由于油相液滴的空间位阻作用，菌种只能在水相中生物合成纤维素纤维，从而形成了生物纤维素下层多孔的结构，而在培养体系的上表面，由于表面张力以及油相液滴自身重力作用，水相在乳液液面上形成了薄层水相液面，在这一较小的区域内，菌株的培养与传统方式相似，因此，在培养体系的上表面形成了上层致密的生物纤维素薄膜。采用本发明的制备方法，由于菌株细胞是均匀分散在培养体系的水相中的，因此形成的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料为整体结构，上层致密部分与下层多孔疏松部分是由连续的、互相交织的纤维素纳米纤维通过分子内与分子间氢键结合而形成的，无明显的外力分层现象，同时培养乳液中的增稠剂能够调节培养系统粘度，控制油相液滴的分布与体系中的溶氧指数，从而进一步调节生物纤维素聚集体中上层致密部分与下层多孔疏松部分的结构。
有益效果：
(1)本发明的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，制备方法简单易行、操作方便、成本低且绿色无污染，制备过程中材料结构易调控，最终得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的含水率高，载药量高，保水性好，与皮肤的贴敷性极佳，有极好的推广价值；
(2)本发明的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，具有双层结构，能使敷料更好的伏贴在皮肤表面，上层致密部分可减少水分挥发，下层多孔疏松部分载药量大且持水量高，与皮肤接触后能够更有效的将天然成分提取物传递至皮肤，可以持续、快速和高效的补充皮肤水分；
(3)本发明的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，可迅速缓解皮肤干燥和缺水等现象，从而有效缓解了激光治疗术后皮肤产生的红、肿、灼热、水疱和渗血等不适症状。
附图说明
图1是本发明的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的截面示意图；
图2是本发明的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的截面扫描电镜图；
图3为图2中上层致密部分的表面扫描电镜图；
图4为图2中上层致密部分的截面扫描电镜图；
图5为图2中下层多孔疏松部分的截面扫描电镜图；
其中，1-上层致密部分，2-下层多孔疏松部分。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中葡萄糖的含量为2wt％，蛋白胨的含量为0.3wt％，酵母膏的含量为0.5wt％，柠檬酸的含量为0.05wt％，磷酸氢二钠的含量为0.02wt％，磷酸二氢钾的含量为0.1wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为50份的菌株培养液、6份的花生油、15份的聚山梨酯以及5份的明胶进行均质乳化后得到pH值为5的培养乳液；
将冷藏的葡糖醋杆菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在28℃条件下摇床培养24h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在32℃条件下静置培养7天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为100r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的20倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.0×105个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28℃条件下静置培养3天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:30；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为1wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.5小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材离心沥干至含水量为52wt％，然后浸泡在含10wt％的黄芩提取物的水溶液中，静置处理30min，经包装和采用高能射线辐照灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
如图1～2所示，采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分1和下层多孔疏松部分2所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为1wt％的含黄芩提取物的水溶液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。如图3和图4所示，上层致密部分1是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为33kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为100nm；如图5所示，下层多孔疏松部分2是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为20kg/m3，平均孔径为100μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为46nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为5mm，其中上层致密部分的厚度为1mm。
实施例2
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中果糖的含量为3wt％，蛋白胨的含量为0.10wt％，酵母膏的含量为0.05wt％，柠檬酸的含量为0.09wt％，磷酸氢二钠的含量为0.05wt％，磷酸二氢钾的含量为0.01wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为52份的菌株培养液、5份的椰子油、3份的蔗糖脂肪酸酯以及22份的海藻酸钠进行均质乳化后得到pH值为7的培养乳液；
将冷藏的产醋杆菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在28℃条件下摇床培养7h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在32℃条件下静置培养5天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为60r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的30倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为5.5×106个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在32℃条件下静置培养5天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:10；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为2wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.5小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材真空干燥至含水量为50wt％，然后浸泡在含15wt％的牡丹皮提取物的乳液中，静置处理25min，经包装和采用压力蒸汽灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为3wt％的含牡丹皮提取物的乳液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为30kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为150nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为10.5kg/m3，平均孔径为50μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为20nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为5mm，其中上层致密部分的厚度为2mm。
实施例3
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中蔗糖的含量为4wt％，蛋白胨的含量为0.4wt％，酵母膏的含量为0.15wt％，柠檬酸的含量为0.1wt％，磷酸氢二钠的含量为0.02wt％，磷酸二氢钾的含量为0.08wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为56份的菌株培养液、9份的大豆油、5份的氢化卵磷脂以及21份的卡波姆进行均质乳化后得到pH值为6的培养乳液；
将冷藏的醋化杆菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在29℃条件下摇床培养10h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在29℃条件下静置培养6天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为50r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的10倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.0×109个/mL。
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28℃条件下静置培养7天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:70；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为3wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.8小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材机械压榨至含水量为50wt％，然后浸泡在含20wt％的母菊花提取物的精华液中，静置处理20min，经包装和采用电子束灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为1.2wt％的含母菊花提取物的精华液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为38kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为200nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为10kg/m3，平均孔径为80μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为30nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为7mm，其中上层致密部分的厚度为0.5mm。
实施例4
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中甘露醇的含量为5wt％，蛋白胨的含量为0.05wt％，酵母膏的含量为0.1wt％，柠檬酸的含量为0.08wt％，磷酸氢二钠的含量为0.04wt％，磷酸二氢钾的含量为0.07wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为65份的菌株培养液、12份的矿油、7份的聚氧乙烯氢化蓖麻油以及17份的琼脂进行均质乳化后得到pH值为7的培养乳液；
将冷藏的巴氏醋杆菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在30℃条件下摇床培养6h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在28℃条件下静置培养9天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为90r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的40倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为6.2×108个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在30℃条件下静置培养4天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:90；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为4wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持2小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材离心沥干至含水量为55wt％，然后浸泡在含25wt％的仙鹤草提取物的水溶液中，静置处理15min，经包装和采用电子束灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为1.8wt％的含仙鹤草提取物的水溶液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为40kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为250nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为11kg/m3，平均孔径为20μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为28nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为3mm，其中上层致密部分的厚度为2mm。
实施例5
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中葡萄糖的含量为3.5wt％，蛋白胨的含量为0.25wt％，酵母膏的含量为0.2wt％，柠檬酸的含量为0.07wt％，磷酸氢二钠的含量为0.08wt％，磷酸二氢钾的含量为0.06wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为68份的菌株培养液、17份的葵花籽油、8份的聚山梨酯和蔗糖脂肪酸酯的混合物(质量比为2:1)以及22份的羧甲基纤维素钠进行均质乳化后得到pH值为6的培养乳液；
将冷藏的葡萄糖杆菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在29℃条件下摇床培养8h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在30℃条件下静置培养5天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为90r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的50倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.0×106个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在31℃条件下静置培养5天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:100；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为8wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.5小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材真空干燥至含水量为60wt％，然后浸泡在含30wt％的木瓜提取物的乳液中，静置处理10min，经包装和采用电子束灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为2wt％的含木瓜提取物的乳液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为41kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为300nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为13.5kg/m3，平均孔径为1μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为60nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为6mm，其中上层致密部分的厚度为3mm。
实施例6
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中果糖的含量为4.5wt％，蛋白胨的含量为0.5wt％，酵母膏的含量为0.25wt％，柠檬酸的含量为0.06wt％，磷酸氢二钠的含量为0.09wt％，磷酸二氢钾的含量为0.04wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为50份的菌株培养液、20份的椰子油和矿油的混合物(质量比为2:1)、12份的氢化卵磷脂和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物(质量比为1:1)以及13份的果胶进行均质乳化后得到pH值为6的培养乳液；
将冷藏的农杆菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在31℃条件下摇床培养11h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在30条件下静置培养6天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为110r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的60倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.6×106个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在29℃条件下静置培养9天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:10；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为10wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.6小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材机械压榨至含水量为53wt％，然后浸泡在含28wt％的雪莲提取物的精华液中，静置处理12min，经包装和采用高能射线辐照灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为1.2wt％的含雪莲提取物的精华液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为50kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为140nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为10kg/m3，平均孔径为125μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为49nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为1mm，其中上层致密部分的厚度为1.5mm。
实施例7
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中蔗糖的含量为3.5wt％，蛋白胨的含量为0.35wt％，酵母膏的含量为0.35wt％，柠檬酸的含量为0.05wt％，磷酸氢二钠的含量为0.11wt％，磷酸二氢钾的含量为0.05wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为60份的菌株培养液、23份的花生油、椰子油和矿油的混合物(质量比为1:2:1)、15份的聚山梨酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物(质量比为1:1)以及12份的变性淀粉进行均质乳化后得到pH值为7的培养乳液；
将冷藏的根瘤菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在32℃条件下摇床培养13h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在32℃条件下静置培养7天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为120r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的80倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为8.0×105个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在31℃条件下静置培养8天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:20；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为3wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持1.2小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材离心沥干至含水量为56wt％，然后浸泡在含22wt％的银耳提取物的水溶液中，静置处理11min，经包装和采用高能射线辐照灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为1.4wt％的含银耳提取物的水溶液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为49kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为185nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为15kg/m3，平均孔径为15μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为100nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为2mm，其中上层致密部分的厚度为0.5mm。
实施例8
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中甘露醇的含量为5wt％，蛋白胨的含量为0.15wt％，酵母膏的含量为0.3wt％，柠檬酸的含量为0.03wt％，磷酸氢二钠的含量为0.12wt％，磷酸二氢钾的含量为0.1wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为74份的菌株培养液、26份的大豆油、葵花籽油和矿油的混合物(质量比为2:1:1)、4份的聚山梨酯、蔗糖脂肪酸酯和氢化卵磷脂的混合物(质量比为2:1:2)以及10份的海藻酸钠、琼脂和果胶的混合物(质量比为1:1:2)进行均质乳化后得到pH值为5的培养乳液；
将冷藏的八叠球菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在32℃条件下摇床培养6h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在28℃条件下静置培养8天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为50r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的10倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为3.0×109个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在32℃条件下静置培养3天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:30；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为4wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持1.7小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材真空干燥至含水量为57wt％，然后浸泡在含17wt％的白芨提取物的精华液中，静置处理14min，经包装和采用压力蒸汽灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为1.8wt％的含白芨提取物的精华液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为31kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为220nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为18kg/m3，平均孔径为65μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为35nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为6mm，其中上层致密部分的厚度为1mm。
实施例9
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中甘露醇的含量为2wt％，蛋白胨的含量为0.2wt％，酵母膏的含量为0.4wt％，柠檬酸的含量为0.02wt％，磷酸氢二钠的含量为0.14wt％，磷酸二氢钾的含量为0.03wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为72份的菌株培养液、30份的花生油、椰子油、大豆油和矿油的混合物(质量比为1:2:2:1)、8份的蔗糖脂肪酸酯、氢化卵磷脂和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物(质量比为1:1:2)以及8份的明胶、海藻酸钠、卡波姆和变性淀粉的混合物(质量比为1:2:2:1)进行均质乳化后得到pH值为6的培养乳液；
将冷藏的洋葱假单胞菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在29℃条件下摇床培养15h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在31℃条件下静置培养9天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为130r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的85倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.0×105个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28℃条件下静置培养6天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:60；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为7wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.6小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材机械压榨至含水量为60wt％，然后浸泡在含13wt％的益母草提取物的水溶液中，静置处理18min，经包装和采用高能射线辐照灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为2.1wt％的含益母草提取物的水溶液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为30kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为270nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为16kg/m3，平均孔径为200μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为20nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为1mm，其中上层致密部分的厚度为0.7mm。
实施例10
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中甘露醇的含量为5wt％，蛋白胨的含量为0.10wt％，酵母膏的含量为0.45wt％，柠檬酸的含量为0.01wt％，磷酸氢二钠的含量为0.15wt％，磷酸二氢钾的含量为0.02wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为80份的菌株培养液、5份的花生油、椰子油、大豆油、矿油和葵花籽油的混合物(质量比为2:1:2:1:1)、3份的聚山梨酯、氢化卵磷脂和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物(质量比为1:2:2)以及6份的卡波姆、明胶、琼脂、羧甲基纤维素钠和变性淀粉的混合物(质量比为1:1:2:1:2)进行均质乳化后得到pH值为7的培养乳液；
将冷藏的椰毒假单胞菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在30℃条件下摇床培养22h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在32℃条件下静置培养9天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为140r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的90倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为4.8×108个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在29℃条件下静置培养5天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:80；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为1wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.8小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材离心沥干至含水量为51wt％，然后浸泡在含10wt％的百合提取物的精华液中，静置处理21min，经包装和采用电子束灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为3wt％的含百合提取物的精华液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为42kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为100nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为17.3kg/m3，平均孔径为1μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为78nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为4mm，其中上层致密部分的厚度为3mm。
实施例11
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中果糖的含量为4.8wt％，蛋白胨的含量为0.05wt％，酵母膏的含量为0.25wt％，柠檬酸的含量为0.01wt％的，磷酸氢二钠的含量为0.2wt％的，磷酸二氢钾的含量为0.01wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为56份的菌株培养液、15份的花生油和葵花籽油的混合物(质量比为1:1)、10份的聚山梨酯、蔗糖脂肪酸酯、氢化卵磷脂和聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物(质量比为1:1:2:1)以及5份的卡波姆、明胶、海藻酸钠、琼脂、果胶和羧甲基纤维素钠的混合物(质量比为2:1:1:2:2:1)进行均质乳化后得到pH值为5的培养乳液；
将冷藏的空肠弯曲菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在29℃条件下摇床培养24h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在31℃条件下静置培养6天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为150r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的100倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.0×106个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28℃条件下静置培养8天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:10；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为4wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.9小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材真空干燥至含水量为57wt％，然后浸泡在含11wt％的丝瓜提取物的水溶液中，静置处理15min，经包装和采用高能射线辐照灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为2.5wt％的含丝瓜提取物的水溶液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为50kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为115nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为10kg/m3，平均孔径为143μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为95nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为7mm，其中上层致密部分的厚度为3mm。
实施例12
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中葡萄糖的含量为2wt％，蛋白胨的含量为0.3wt％，酵母膏的含量为0.5wt％，柠檬酸的含量为0.05wt％，磷酸氢二钠的含量为0.02wt％，磷酸二氢钾的含量为0.1wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为50份的菌株培养液、6份的大豆油和葵花籽油的混合物(质量比为1:1)、15份的聚山梨酯以及5份的明胶和海藻酸钠的混合物(质量比为2:1)进行均质乳化后得到pH值为6的培养乳液；
将冷藏的洋葱假单胞在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在28℃条件下摇床培养24h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在32℃条件下静置培养7天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为100r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的10倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.0×105个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28℃条件下静置培养9天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:30；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为6wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持1.5小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材机械压榨至含水量为50wt％，然后浸泡在含29wt％的氨甲环酸的乳液中，静置处理10min，经包装和采用电子束灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为2.2wt％的含氨甲环酸的乳液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为45kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为270nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为15.6kg/m3，平均孔径为8μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为58nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为6mm，其中上层致密部分的厚度为2.5mm。
实施例13
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中蔗糖的含量为3wt％，蛋白胨的含量为0.3wt％，酵母膏的含量为0.5wt％，柠檬酸的含量为0.05wt％，磷酸氢二钠的含量为0.02wt％，磷酸二氢钾的含量为0.1wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为50份的菌株培养液、7份的葵花籽油、椰子油和矿油的混合物(质量比为1:1:2)、15份的蔗糖脂肪酸酯和氢化卵磷脂的混合物(质量比为2:2)以及20份的卡波姆进行均质乳化后得到pH值为5的培养乳液；
将冷藏的醋化杆菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在28℃条件下摇床培养24h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在32℃条件下静置培养8天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为100r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的20倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为5.6×106个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28℃条件下静置培养3天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:30；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为10wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.5小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材离心沥干至含水量为56wt％，然后浸泡在含14wt％的抗坏血酸的精华液中，静置处理30min，经包装和采用压力蒸汽灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为2.4wt％的含抗坏血酸的精华液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为36kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为200nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为20kg/m3，平均孔径为37μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为100nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为7mm，其中上层致密部分的厚度为0.5mm。
实施例14
一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，其中菌株培养液中甘露醇的含量为2wt％，蛋白胨的含量为0.3wt％，酵母膏的含量为0.25wt％，柠檬酸的含量为0.08wt％，磷酸氢二钠的含量为0.09wt％，磷酸二氢钾的含量为0.1wt％，余量为水；
(2)配制培养乳液和菌液；
将重量份数为75份的菌株培养液、10份的花生油和葵花籽油的混合物(质量比为2:1)、15份的聚氧乙烯氢化蓖麻油以及5份的琼脂和变性淀粉的混合物(质量比为2:1)进行均质乳化后得到pH值为7的培养乳液；
将冷藏的巴氏醋杆菌在室温下解冻，并置于菌株培养液中，在28℃条件下摇床培养24h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在32℃条件下静置培养7天得到菌液，其中摇床培养时摇床的转速为100r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的20倍，得到的菌液中单位体积内菌株细胞的数目为3.5×105个/mL；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28℃条件下静置培养3天得到生物纤维素膜，其中菌液与培养乳液的体积比为1:100；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为1wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持2小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素面膜基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材真空干燥至含水量为60wt％，然后浸泡在含26wt％的神经酰胺的乳液中，静置处理20min，经包装和采用压力蒸汽灭菌得到激光美容术后生物纤维素面膜。
采用上述步骤制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，双层结构的孔隙中填充有含量为1wt％的含神经酰胺的乳液，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，测得的密度为38kg/m3，纤维素纳米纤维之间的平均间距为160nm；下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，测得的密度为12.8kg/m3，平均孔径为120μm，其中纤维素纳米纤维的平均直径为55nm。
所得到的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为1mm，其中上层致密部分的厚度为0.6mm。
实施例15～20
一种生物纤维素皮肤修复材料的制备方法，具体步骤与实施例1基本一致，不同的是步骤(2)中冷藏的菌株种类和单位体积内菌株细胞的数目，步骤(5)水溶液中药物成分不同，具体如下表所示：
最终制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，由上层致密部分和下层多孔疏松部分所组成的双层结构，两者通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络。
测得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的性能如下表所示：

Claims (9)

1.一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，其特征是：将菌液加入到培养乳液中均匀分散后静置培养得到生物纤维素膜，经后处理后与药物成分复合得到激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料；所述菌液为菌株在水中分散的体系，所述培养乳液为水包油型乳液，其中水相为菌株培养液，所述菌株是指能够生物合成纤维素纳米纤维的微生物。
2.根据权利要求1所述的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)配制菌株培养液；
将不同组分混合均匀后得到菌株培养液，所述菌株培养液中各组分及其含量为：糖或糖醇2～5wt％，蛋白胨0.05～0.5wt％，酵母膏0.05～0.5wt％，柠檬酸0.01～0.1wt％，磷酸氢二钠0.02～0.2wt％，磷酸二氢钾0.01～0.1wt％，余量为水，所述糖为葡萄糖、果糖或蔗糖，所述糖醇为甘露醇；
(2)配制培养乳液和菌液；
将不同组分均质乳化后得到pH值为5～7的培养乳液，按重量份数计，所述培养乳液中各组分及其含量为：菌株培养液50～80份，油5～30份，乳化剂3～15份，增稠稳定剂5～22份；
将冷藏的菌株在室温解冻，并置于菌株培养液中，在28～32℃条件下摇床培养6～24h，补充加入菌株培养液并混合均匀，在28～32℃条件下静置培养5～9天得到菌液，所述摇床培养时摇床的转速为50～150r/min，补充加入的菌株培养液为原菌株培养液体积的10～100倍；
(3)静置培养；
将菌液加入到培养乳液中均匀分散后在28～32℃条件下静置培养3～9天得到生物纤维素膜，所述菌液与培养乳液的体积比为1:10～100；
(4)后处理；
将生物纤维素浸泡至浓度为1～10wt％的氢氧化钠溶液煮沸保持0.5～2小时，用纯净水清洗至pH值为7.0且材料内毒素<0.5EU/mL得到生物纤维素敷料基材；
(5)复合；
将生物纤维素敷料基材脱水至含水量为50～60wt％，然后浸泡在含10～30wt％药物成分的水溶液、精华液或乳液中，静置处理10～30min，经包装和灭菌得到激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料。
3.根据权利要求2所述的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述油为花生油、椰子油、大豆油、葵花籽油或矿油中的一种以上；
所述乳化剂为聚山梨酯、蔗糖脂肪酸酯、氢化卵磷脂或聚氧乙烯氢化蓖麻油中的一种以上；
所述增稠稳定剂为卡波姆、明胶、海藻酸钠、琼脂、果胶、羧甲基纤维素钠或变性淀粉中的一种以上。
4.根据权利要求2所述的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述菌株为葡糖醋杆菌、产醋杆菌、醋化杆菌、巴氏醋杆菌、葡萄糖杆菌、农杆菌、根瘤菌、八叠球菌、洋葱假单胞菌、椰毒假单胞菌或空肠弯曲菌中的一种以上；
所述菌液中单位体积内菌株细胞的数目为1.0×105～3.0×109个/mL。
5.根据权利要求2所述的一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述脱水采用的方法为离心沥干、真空干燥或机械压榨；
所述药物成分提取物是指黄芩提取物、牡丹皮提取物、母菊花提取物、仙鹤草提取物、木瓜提取物、雪莲提取物、银耳提取物、白芨提取物、益母草提取物、百合提取物、丝瓜提取物、氨甲环酸、抗坏血酸或神经酰胺中的一种以上；
所述灭菌指采用高能射线辐照灭菌、压力蒸汽灭菌或电子束灭菌。
6.采用如权利要求1～5任一项所述的制备方法制得的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，其特征是：激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料具有双层结构，由上层致密部分和下层多孔疏松部分组成，双层结构的孔隙中填充有含药物成分的水溶液、精华液或乳液；
所述上层致密部分是由纤维素纳米纤维层状重叠形成的相互交织的纳米纤维网络，上层致密部分的密度为30～50kg/m3；
所述下层多孔疏松部分是由纤维素纳米纤维组成的相互连通的多孔结构，同时其孔壁表面存在着纤维素纳米纤维网络，下层多孔疏松部分的密度为10～20kg/m3；
所述上层致密部分与下层多孔疏松部分通过β-1,4-葡萄糖链中的分子内与分子间氢键紧密结合。
7.根据权利要求6所述的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，其特征在于，所述双层结构中含药物成分的水溶液、精华液或乳液的含量为1～3wt％；
所述激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料的厚度为1～7mm，其中上层致密部分的厚度为0.5～3mm。
8.根据权利要求6所述的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，其特征在于，所述纤维素纳米纤维的平均直径为20～100nm。
9.根据权利要求6所述的激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料，其特征在于，所述上层致密部分中纤维素纳米纤维之间的平均间距为100～300nm，所述下层多孔疏松部分的平均孔径为1～200μm。
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