[go: up one dir, main page]

CN107714717A - 聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用 - Google Patents

聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107714717A
CN107714717A CN201710943160.3A CN201710943160A CN107714717A CN 107714717 A CN107714717 A CN 107714717A CN 201710943160 A CN201710943160 A CN 201710943160A CN 107714717 A CN107714717 A CN 107714717A
Authority
CN
China
Prior art keywords
colitis
group
mouse
polyinosinic acid
intervention
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710943160.3A
Other languages
English (en)
Inventor
马莉
胡田勇
刘江琦
胡文会
刘志强
杨平常
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201710943160.3A priority Critical patent/CN107714717A/zh
Publication of CN107714717A publication Critical patent/CN107714717A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/785—Polymers containing nitrogen
    • A61K31/787—Polymers containing nitrogen containing heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用，实验结果显示，经聚肌胞苷酸干预可明显降低DSS诱导的结肠炎肠道通透性，干预后的小鼠结肠黏膜损伤程度明显减轻，无明显充血水肿和大面积糜烂，表明聚肌胞苷酸在治疗和预防结肠炎方面具有很好的应用前景。

Description

聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用
技术领域
本发明涉及治疗或预防结肠炎领域，尤其是涉及聚肌胞苷酸在在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用。
背景技术
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)属于临床常见的炎性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)。其病因尚不十分清楚，一般认为与遗传易感性、免疫炎症、肠道菌群和精神心理因素等有关。UC主要侵犯结肠，病理表现为结肠黏膜损伤，充血水肿、糜烂、深层溃疡形成，腺体被破坏排列紊乱，黏膜及黏膜下层可见大量淋巴细胞、嗜中性粒细胞浸润，肠道通透性增加。临床表现为腹痛、腹泻、黏液脓血便等，其发病率西方国家较高约为24.3/10万，而近年来，随着人民生活水平的提高和环境的污染，UC发病率和患病率在我国呈明显增长趋势，严重影响患者生活和工作，给社会、经济带来巨大负担。研究显示，UC发病机制的关键是免疫系统针对肠道菌群及食物抗原的异常免疫反应，导致大量的炎性因子在肠道局部聚集引起的炎症损伤。溃疡性结肠炎尚缺乏特异性治疗手段，现有水杨酸制剂、糖皮质激素及免疫抑制剂类药物治疗的主要目的是达到临床缓解和避免并发症的发生，长期使用会给患者带来严重不良反应且疗效有限，因此寻找UC新的治疗手段已经成为了国内外研究的热点和难点。聚肌胞苷酸(Poly(I:C))是人工合成的核苷酸二聚物，能高效诱导干扰素的产生，抑制已感染的病毒的复制，另外还能加强吞噬细胞活性及改善机体免疫功能，具有抗病毒、抗肿瘤、增强淋巴细胞免疫功能和抑制核酸代谢的作用。但针对Poly(I:C)是否作为免疫刺激剂能够激活机体固有免疫反应，增强溃疡性结肠炎时肠道的免疫耐受功能，从而调控肠道失常的炎症反应仍有待进一步研究。
发明内容
为解决上述现有技术的缺陷和不足，本发明的目的是确定聚肌胞苷酸与溃疡性结肠炎之间的作用关系，提供一种聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
本发明以诱发急性溃疡性结肠炎的小鼠为实验对象，研究聚肌胞苷酸与溃疡性结肠炎之间的相互关系。
本发明提供一种聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用。
优选地，所述结肠炎为溃疡性结肠炎。
本发明的有益效果是：
诱发急性溃疡性结肠炎的小鼠结肠黏膜损伤较重，可见明显充血水肿、广泛大面积的糜烂、深层溃疡形成，腺体被破坏排列紊乱，黏膜及黏膜下层可见大量淋巴细胞、嗜中性粒细胞浸润，经聚肌胞苷酸注射治疗后的小鼠黏膜损伤程度明显减轻，结肠黏膜完整，部分可见轻度充血水肿和少量炎性细胞浸润，肠炎疾病活动指数(DAI)评分低于模型组，实验表明聚肌胞苷酸对诱导的结肠炎有一定的预防和治疗作用。同时模型组肠道通透性高于干预组和对照组，表明聚肌胞苷酸干预可通过降低结肠炎肠道通透性，从而改善小鼠的结肠炎症状。
附图说明
图1为干预组小鼠的处理过程图；
图2为正常组、模型组和干预组小鼠的体重变化图；
图3为正常组、模型组和干预组小鼠粪便隐血实验结果；
图4为正常组、模型组和干预组小鼠的DAI评分结果；
图5为正常组、模型组和干预组小鼠的肠道长度图；
图6为正常组、模型组和干预组小鼠的HE染色结果图(40×)；
图7为正常组、模型组和干预组小鼠的HE染色结果图(200×)；
图8为正常组、模型组和干预组小鼠的肠道通透性结果。
具体实施方式
以下将结合实施例和附图对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例
试验动物及分组
选用雌性，6-8周龄，C57BL/6健康小鼠36只，购于广东省医学实验动物中心。随机分成三组，每组12只，分为正常组、模型组和干预组，每组试验动物的处理方式如表1所示。试验后，每组处理后的动物6只用于灌胃，FITC-Dextran检测通透性后用于LPMC提取及HE染色，6只用于RNA提取、蛋白质提取，本实验采用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodiumsalt，DSS)(160110)对小鼠进行造模。
表1试验动物分组及处理
IBD模型的制备
模型组和干预组小鼠饮用浓度5％DSS溶液诱发急性溃疡性结肠炎，正常组小鼠正常饮水。于DSS饲养前-3,0,3天，腹腔注射 Poly(I:C)25ug/只。干预组在引用DSS诱发急性溃疡性结肠炎的-3,0,3 天，腹腔注射Poly(I:C)，注射量为25ug/只，处理过程如图1所示。
实验结果
小鼠体重变化
分别对三组小鼠的体重测量，其体重变化如图2所示，正常组小鼠大小便正常、体重增加、毛发有光泽、饮食、活动、精神状态均正常。相较于正常组的小鼠，模型组小鼠则在造模开始3天左右出现粘液稀便，且症状逐渐加重，5天左右症状更为严重，可见脓血便、消瘦、体重减轻、毛发无光泽、饮食明显减少、畏寒、懒动等症状，干预组小鼠在5天左右会出现粘液稀便，消瘦、体重减轻、毛发无光泽、饮食明显减少、畏寒、懒动等症状；脓血便、体重减轻、饮食明显减少、畏寒、懒动等结果表明模型组出现明显的结肠炎，表明IBD模型成功建立。
小鼠粪便隐血实验：
隐血实验评分标准：阴性(-)：3分钟后不显蓝绿色；弱阳性(+)： 30～60秒钟内显蓝色；阳性(++)：立即显蓝绿色；强阳性(+++)：立即显深蓝色。
对三组小鼠进行粪便隐血实验，结果如图3所示，实验结果显示模型组立即显深蓝色表现为强阳性，干预组在30秒后显示蓝绿色表现为弱阳性。结果表明，与正常组相比，模型组小鼠粪便隐血严重，干预组小鼠在经过Poly(I:C)治疗干预后粪便隐血症状明显好转。
小鼠DAI评分：
结肠炎损伤严重程度的评分标准:结合本实验，结肠炎疾病活动指数(DAI)评分参考Suthceland LR的标准进行，具体评分标准为：成形颗粒状类便，隐血实验阴性评分0；松散不粘附于肛门的半颗粒状类便，如隐血阴性评分1，隐血实验阳性评分2；粘附于肛门的液态类便，隐血实验阳性评分3，肉眼可见血便评分4。
对三组小鼠结肠炎损伤严重程度进行评估，于第1，3，5，7天计算3组小鼠的DAI，结果如图4所示。模型组的疾病活动指数评分 (disease activity index，DAI)显著高于对照组(P<0.01)，而Poly(I:C) 干预组显著低于模型照组(P<0.01)，结果显示，伴有体重下降模型组小鼠在造模后第3～5天开始出现懒动、稀便、粘液血便，干预组的 DAI较模型组降低，干预组体重改变较模型组无差异，干预组小鼠的症状状改善更明显，结果表明Poly(I:C)能明显改善小鼠的结肠炎损伤。
小鼠肠道长度变化：
于第8d，颈椎脱臼法处死三组小鼠，取整段结肠，对三组小鼠的结肠大体进行形态学观察，结果如图5所示。参见图5，实验结果显示模型组结肠变短，可见明显充血水肿、有大面积糜烂，与模型组相比干预组结肠水肿较轻，且糜烂面积小，表明Poly(I:C)具有明显的治疗疗效。
HE染色结果：
取三组小鼠结肠部分结肠组织，PBS冲洗干净，用甲酸溶液固定 24小时。
脱水与透明
脱水过程从低浓度乙醇逐步向高浓度乙醇进行。将标本先置于 70％乙醇短暂保存，既可脱水，同时对标本也有继续固定的作用。开始制片时，标本在80％乙醇中过夜后，依次浸入体积分数为95％乙醇Ⅰ、Ⅱ各2h，100％乙醇Ⅰ、Ⅱ各1.5h。二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明两次，各40min/次。透明过程中用肉眼观察透明程度，避免透明不足或过度。
包埋与切片
石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ1h，石蜡Ⅲ1.5h，常规浸蜡包埋(包埋蜡熔点58℃～60℃，切取5um厚度蜡片，42℃水浴锅内展片，常规烤片。
染色
苏木精﹣伊红(HE)染色：将烤好的蜡片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各10min，无水乙醇，95％乙醇逐步复水至70％乙醇，每级2min，进蒸馏水3min后，苏木精染色15min，1％盐酸酒精分化30s，流水冲洗20min，伊红染色2min，过水，95％乙醇2min，100％乙醇2min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5min，中性树胶封片。
组织学评分标准:①炎症:无:0分，轻度:1分，中度:2度，重度:3分；②杯状细胞:未见消失:0分，消失:1分；③病变深度:无: 0分，粘膜下层:1分，肌层:2分，浆膜层:3分；④溃疡:无:0分，糜烂:1分，溃疡:2分；⑤隐窝脓肿:无:0分，有:1分。
参见图6和图7，对照组小鼠结肠黏膜完整连续，腺体排列整齐，无水肿、溃疡及糜烂形成。而模型组(DSS组)小鼠结肠黏膜损伤较重，可见明显充血水肿、广泛大面积的糜烂、深层溃疡形成，腺体被破坏排列紊乱，黏膜及黏膜下层可见大量淋巴细胞、嗜中性粒细胞浸润。干预组小鼠镜下黏膜损伤程度明显减轻，结肠黏膜完整，部分可见轻度充血水肿和少量炎性细胞浸润，表明Poly(I:C)具有明显的治疗疗效。
肠道通透性
肠道通透性：按照0.6mg/g的量(即100g体重的小鼠用量为60mg FITC-Dextran(异硫氰酸荧光素-葡萄糖))对肠炎小鼠进行灌胃 FITC-Dextran，灌胃4小时后，取外周血，用分光光度计(490nm) 检测血清中FITC-Dextran含量。
对三组小鼠进行肠道通透性实验，结果如图8所示，结果显示，模型组小鼠的肠道通透性明显高于对照组和Poly(I:C)干预组，干预组与模型组对比，肠道通透性具有显著差异p<0.05，表明使用Poly(I:C) 干预可明显降低DSS诱导的结肠炎肠道通透性。

Claims (2)

1.聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用。
2.根据权利要求1的聚肌胞苷酸的应用，其特征在于，所述结肠炎为溃疡性结肠炎。
CN201710943160.3A 2017-10-11 2017-10-11 聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用 Pending CN107714717A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710943160.3A CN107714717A (zh) 2017-10-11 2017-10-11 聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710943160.3A CN107714717A (zh) 2017-10-11 2017-10-11 聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107714717A true CN107714717A (zh) 2018-02-23

Family

ID=61210901

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710943160.3A Pending CN107714717A (zh) 2017-10-11 2017-10-11 聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107714717A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101474165A (zh) * 2009-01-20 2009-07-08 南京农业大学 一种治疗畜禽疾病的多聚核苷酸微囊及其制备方法
CN102307586A (zh) * 2008-12-22 2012-01-04 都柏林伊丽莎白女皇神学院院长、研究员及专家协会 用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的化合物及方法
WO2016161372A1 (en) * 2015-04-01 2016-10-06 President And Fellows Of Harvard College Immunoconjugates for programming or reprogramming of cells
CN107429232A (zh) * 2015-01-26 2017-12-01 菲特治疗公司 免疫调节性提高的细胞及其使用和生产方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102307586A (zh) * 2008-12-22 2012-01-04 都柏林伊丽莎白女皇神学院院长、研究员及专家协会 用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的化合物及方法
CN101474165A (zh) * 2009-01-20 2009-07-08 南京农业大学 一种治疗畜禽疾病的多聚核苷酸微囊及其制备方法
CN107429232A (zh) * 2015-01-26 2017-12-01 菲特治疗公司 免疫调节性提高的细胞及其使用和生产方法
WO2016161372A1 (en) * 2015-04-01 2016-10-06 President And Fellows Of Harvard College Immunoconjugates for programming or reprogramming of cells

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
赵红伟等: "Poly I:C对结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响", 《国际消化病杂志》 *
赵红伟等: "Poly I:C对肠炎小鼠肠道黏膜IL-17的影响", 《中国煤炭工业医学杂志》 *
赵红伟等: "Poly IC对急性期溃疡性结肠炎小鼠免疫机制的影响", 《安徽卫生职业技术学院学报》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110227077A (zh) 氧化小檗碱在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用
Wu et al. Protective Effect of the Abelmoschus Manihot Flower Extract on DSS‐Induced Ulcerative Colitis in Mice
CN105878287A (zh) 一种美洲大蠊酶解物及其制备方法和应用
CN107714717A (zh) 聚肌胞苷酸在制备治疗或预防结肠炎的药物中的应用
CN108210503A (zh) 甘露糖在用于提高Treg细胞数量及其Foxp3因子表达水平的新用途
CN103285106A (zh) 一种治疗肠黏膜损伤的中药组合物及其制备方法和用途
CN102552851A (zh) 一种治疗慢性肠胃疾病的中药
CN101721528A (zh) 一种治疗慢性前列腺炎的药物组合物
CN110339320B (zh) 一种治疗脂肪肝的中药组合物
Dragomiretskaya et al. Use of antiviral therapy in patients with chronic hepatitis C
CN105250982A (zh) 一种用于治脾胃湿热型胃溃疡的药物
CN113827624B (zh) 一种榆黄蘑多糖及其应用
CN101940582B (zh) 龙胆苦苷在制备防治急性胰腺炎药物中的用途
CN108619302A (zh) 一种治疗老年性溃疡性结肠炎的中药汤
CN118059186B (zh) 治疗溃疡性结肠炎的中药组合物、药液、制备方法及应用
CN104367916B (zh) 一种治疗肾病综合症的中药制剂
CN108893488A (zh) 一种重组质粒、dna疫苗及其制备方法和应用
CN104547546A (zh) 一种补肾润肺的中药组合物及其不同剂型的制备方法
CN105395584B (zh) 片仔癀及其制剂在制备治疗多发性硬化症的药物中的应用
CN113499351B (zh) 用于治疗uc的红缘拟层孔菌提取物的提取方法及其应用
CN109550034A (zh) 一种治疗功能性消化不良的中药组合物及其制备方法
CN115666611B (zh) 治疗或降低酒精宿醉的药物组合物及其用途
CN111068010B (zh) 一种治疗难治性特发性膜性肾病的中药组合物及其应用
Jouriani et al. Targeting kidney inflammation in colitis: the role of probiotics, paraprobiotics, and autophagy
MM et al. Study on the Progress of Application of Qingxin Lianzi Drink in Paediatric Nephrotic Syndrome

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180223

RJ01 Rejection of invention patent application after publication