CN107536725A - 一种含透明质酸混合物的多效口腔组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含透明质酸混合物的多效口腔护理组合物，其包括透明质酸混合物0.1～5.0份和柠檬酸梓0.5～2.0份，所述透明质酸混合物包括低分子量透明质酸、高分子量透明质酸，所述低分子量透明质酸与高分子量透明质酸的重量比为1：(0.5～2.0)。本发明还公开了上述多效口腔护理组合物的应用。与现有技术相比，本发明的组合物以不同分子量范围的透明质酸进行组合作为主要的活性成分，并同柠檬酸锌复配，起到协同增效的作用，具有抑菌、抗炎、修复的作用，赋予口腔日常保健、治疗预防疾病的功效。

Description

一种含透明质酸混合物的多效口腔组合物及其应用

技术领域

本发明涉及口腔护理技术领域，具体涉及具有抑制口腔致病菌、抗口腔黏膜炎症、修复口腔黏膜等多种功效的口腔护理组合物，以及该组合物的应用。

背景技术

透明质酸是一种酸性粘多糖，1934年美国哥伦比亚大学眼科教授Meyer等首先从牛眼玻璃体中分离出该物质。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能。国内外多项研究表明透明质酸在口腔中是构成牙周组织细胞外基质的重要成分，人的唾液中也含有透明质酸，能够提高唾液的润滑性能及口腔疾病治愈性能，并协助保护口腔粘膜。Pirnazar等人的研究表明透明质酸对口腔内的伴放线放线杆菌(被公认为与牙周炎密切相关，是牙周炎细菌病因学中研究最多的细菌之一)、口普氏菌、金黄色葡萄球菌等均有抑制作用。

透明质酸的口腔护理作用表现为，拔牙及种植手术后创面的抗炎、抗感染、抗水肿、抑制细菌生长作用；促进牙周组织创伤愈合、修复的作用；加快口腔粘膜疾病的治愈过程，缓解疼痛；解决由于口干症及粘膜灼热而带来的不适等。

现有技术中，已经有将透明质酸用于口腔护理产品中，如公开号为CN 104666112A的中国专利公开了一种生物活性透明质酸牙膏，用于牙龈炎和口咽腔粘膜炎的抗炎作用。公开号为CN 103462847 A的中国专利申请文献公开了一种口腔护理用漱口水，该漱口水含有透明质酸0.5～1.5％,用于口腔溃疡等口腔疾病的抑菌与消除口腔异味。公开号为CN105250332 A的中国专利申请文献公开了一种护龈固齿多效口腔治疗物及其应用，该多效口腔治疗物含有透明质酸钠0.1～1.5份，用于防治牙齿敏感、牙龈出血、口腔溃疡等口腔疾病的效果。公开号为CN 105213298 A的中国专利申请文献公开了一种口腔护理凝胶及其制备方法，其中，透明质酸钠重量占凝胶总重量的0.1％-2％，用于预防和缓解口腔问题，达到抗炎抑菌，促进口腔黏膜和组织的修复和再生，减低发炎和伤口渗出的效果。公开号为CN106176690 A的中国专利申请文献公开了透明质酸口腔护理膜及制备方法和应用，该口腔护理膜含透明质酸钠10％～50％，透明质酸锌10％～40％，水解透明质酸钠10％～40％，具有抑菌、修复细胞损伤等功效。公开号为CN 106344450 A的中国专利申请文献公开了一种透明质酸刷牙牙片及制备方法，其中结合透明质酸的抗炎活性与甘草和抗坏血酸来防止牙龈出血，消除红肿，全面解决牙齿过敏，防治牙龈炎、牙周炎和口咽腔粘膜炎等口腔炎症问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含透明质酸混合的多效口腔护理组合物，该组合物以不同分子量范围的透明质酸进行组合作为主要的活性成分，并同柠檬酸锌复配，起到协同增效的作用，具有抑菌、抗炎、修复的作用，赋予口腔日常保健、治疗预防疾病的功效。

本发明的技术方案如下：

一种含透明质酸混合物的多效口腔护理组合物，其包括透明质酸混合物和柠檬酸梓，所述透明质酸混合物包括低分子量透明质酸、高分子量透明质酸。

优选地，按重量份计，透明质酸混合物0.1～5.0份，柠檬酸锌0.5～2.0份。

优选地，所述低分子量透明质酸与高分子量透明质酸的重量比为1：(0.5～2.0)。

优选地，所述低分子量透明质酸的重均分子量为20～40kDa，所述高分子量透明质酸的重均分子量为120～140kDa。

本发明的另一目的在于提供上述多效口腔护理组合物的应用，将上述多效口腔护理组合物应用于口腔护理产品中，所述口腔护理产品包括牙膏、牙粉、漱口水、口喷。

优选地，柠檬酸锌在口腔护理产品中的含量按重量百分数计为0.5～2.0％，透明质酸在口腔护理产品中的含量按重量百分数计为0.1～5.0％。

优选地，上述多效口腔护理组合物应用于牙膏中，所述透明质酸混合物加入到牙膏的保湿剂中分散均匀后，再加入柠檬酸锌搅混均。

优选地，上述多效口腔护理组合物应用于牙膏中，所述牙膏采用如下制备方法：

S1：将甜味剂加入水中搅拌溶解；

S2：将增稠剂、透明质酸混合物加入到保湿剂中，分散均匀；

S3：将步骤S2分散均匀的溶液加入到步骤S1中，搅拌均匀；

S4：将柠檬酸锌加入到步骤S3中搅拌均匀；

S5：将表面活性剂加入到摩擦剂中搅拌均匀，得到均匀粉末；

S6：将步骤S5的均匀粉末，加入步骤S4中，搅拌均匀得到均匀膏体；

S7：将防腐剂加入香精中，水浴加热使香精溶解，得到均匀溶液；

S8：将步骤S7的均匀溶液加入步骤S6的均匀膏体中搅拌均匀，抽气。

或者，所述牙膏采用如下制备方法：

S1：将甜味剂和防腐剂加入水中搅拌溶解；

S2：将增稠剂、透明质酸混合物加入到保湿剂中，分散均匀；

S3：将步骤S2分散均匀的溶液加入到步骤S1中，搅拌均匀；

S4：将柠檬酸锌加入到步骤S3中搅拌均匀；

S5：将表面活性剂加入到摩擦剂中搅拌均匀，得到均匀粉末；

S6：将步骤S5的均匀粉末，加入步骤S4中，搅拌均匀得到均匀膏体；

S7：将步骤S6的均匀膏体抽气。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明将低分子量的透明质酸与高分子量的透明质酸复配形成混合物，起到功能复配的作用，低分子量的透明质酸具有良好的黏膜修复作用，高分子量的透明质酸具有良好的黏膜抗炎作用，同时透明质酸混合物与柠檬酸锌复配起到协同抑菌的作用，抑制口腔致病菌，达到维护口腔健康的作用。

2、本发明的组合物，通过体外试验验证，能够显著抑制口腔致病菌，抗口腔黏膜炎症和修复口腔黏膜。

附图说明

图1表示了对比例和实施例样品对RAW 264.7细胞增殖率的影响；

图2表示了对比例和实施例样品对LPS诱导RAW 264.7细胞产生NO的影响；

图3表示了对比例和实施例样品对LPS诱导RAW 264.7细胞产生IL-6的影响；

图4显示了对比例和实施例样品对L929细胞修复的结果。

具体实施方式

下面通过具体实施例子对本发明作进一步详细说明。

实施例1

一种含透明质酸混合物的多效口腔护理组合物，按重量份计，包括透明质酸混合物0.1～5.0、柠檬酸梓0.5～2.0份。所述透明质酸混合物包括低分子量透明质酸、高分子量透明质酸，所述低分子量透明质酸与高分子量透明质酸的重量比为1：(0.5～2.0)。所述低分子量透明质酸的重均分子量为20～40kDa，所述高分子量透明质酸的重均分子量为120～140kDa。

实施例2

将实施例1所述的多效口腔护理组合物应用于牙膏中，所述牙膏的组分包括：

所述保湿剂优选山梨醇、甘油、聚乙二醇中的一种或两种以上混合；

所述摩擦剂优选水合硅石、碳酸钙、磷酸氢钙中的一种或两种以上混合；

所述增稠剂优选羧甲基纤维素钠、黄原胶、羟丙基纤维素钠、卡拉胶、瓜尔胶中的一种或两种以上混合；

所述表面活性剂优选月桂醇硫酸酯钠、结晶焦磷酸钠中的一种或两种混合。

所述防腐剂为油溶性防腐剂。

所述牙膏采用如下制备方法：

S1：将甜味剂加入水中搅拌溶解；

S2：将增稠剂、透明质酸混合物加入到保湿剂中，分散均匀；

S3：将步骤S2分散均匀的溶液加入到步骤S1中，搅拌均匀；

S4：将柠檬酸锌加入到步骤S3中搅拌均匀；

S5：将表面活性剂加入到摩擦剂中搅拌均匀，得到均匀粉末；

S6：将步骤S5的均匀粉末，加入步骤S4中，搅拌均匀得到均匀膏体；

S7：将防腐剂加入香精中，水浴加热使香精溶解，得到均匀溶液；

S8：将步骤S7的均匀溶液加入步骤S6的均匀膏体中搅拌均匀，抽气。

实施例3

将实施例1所述的多效口腔护理组合物应用于牙膏中，所述牙膏的组分包括：

所述保湿剂优选山梨醇、甘油、聚乙二醇中的一种或两种以上混合；

所述摩擦剂优选水合硅石、碳酸钙、磷酸氢钙中的一种或两种以上混合；

所述增稠剂优选羧甲基纤维素钠、黄原胶、羟丙基纤维素钠、卡拉胶、瓜尔胶中的一种或两种以上混合；

所述表面活性剂优选月桂醇硫酸酯钠、结晶焦磷酸钠中的一种或两种混合。

所述防腐剂为水溶性防腐剂。

所述牙膏采用如下制备方法：

S1：将甜味剂和防腐剂加入水中搅拌溶解；

S2：将增稠剂、透明质酸混合物加入到保湿剂中，分散均匀；

S3：将步骤S2分散均匀的溶液加入到步骤S1中，搅拌均匀；

S4：将柠檬酸锌加入到步骤S3中搅拌均匀；

S5：将表面活性剂加入到摩擦剂中搅拌均匀，得到均匀粉末；

S6：将步骤S5的均匀粉末，加入步骤S4中，搅拌均匀得到均匀膏体；

S7：将步骤S6的均匀膏体抽气。

实施例4

将实施例1的多效口腔组合物应用于牙膏中，所述牙膏按重量份计，包括以下组分：

所述牙膏的制备方法参见实施例2。

实施例5

将实施例1的多效口腔组合物应用于牙膏中，所述牙膏按重量份计，包括以下组分：

所述牙膏的制备方法参见实施例2。

实施例6验证本发明多效口腔护理组合物的试验

对比例1：牙膏配方和制备方法参见实施例4，但透明质酸混合物为0份，柠檬酸锌为0份。

对比例2：牙膏配方和制备方法参见实施例4，但透明质酸混合物为0.5份分子量为20～40kDa的透明质酸，柠檬酸锌为0份。

对比例3：牙膏配方和制备方法参见实施例4，但透明质酸混合物为0.5份分子量为120～140kDa的透明质酸，柠檬酸锌为0份。

对比例4：牙膏配方和制备方法参见实施例4，但透明质酸混合物为0份，柠檬酸锌为0.5份。

(1)稳定性考察

对比例1、对比例2、对比例3、对比例4、实施例4和实施例5牙膏的稳定性(高温45℃)结果如表1所示。

表1

样品名称	7天	15天	1个月	2个月	3个月
						对比例1	正常	正常	正常	轻微分水	轻微分水
对比例2	正常	正常	正常	轻微分水	轻微分水
						对比例3	正常	正常	轻微分水	轻微分水	重度分水
对比例4	正常	正常	轻微分水	中度分水	重度分水
						实施例4	正常	正常	正常	正常	正常
实施例5	正常	正常	正常	正常	正常

(2)抑菌实验

A取口腔致病菌菌液0.2mL分别涂布于BHIA平板中，37℃厌氧培养48-72h；

B用2-3mL无菌PBS溶液分别洗脱BHIA平板，分别收集洗脱液作为测试用口腔致病菌溶液；

C向250mL的含有玻璃珠的无菌三角烧瓶中，分别加入75mL无菌PBS和25g牙膏样品，震荡三角瓶，使牙膏充分分散成匀浆溶液(25％)，然后吸取9mL牙膏浆加入无菌的玻璃试管中备用；

D将B中的洗脱液分别用无菌PBS溶液稀释至1×10⁶-5×10⁶CFU/mL浓度；

E空白组，各吸取1.0mL菌悬液(1×10⁶-5×10⁶CFU/mL)加入9mL无菌PBS溶液中漩涡振荡混匀，作用2min，然后吸取混合液进行适当稀释，厌氧培养72h后进行计数；

F实验组，各吸取1.0mL菌悬液(1×10⁶-5×10⁶CFU/mL)分别与9mL牙膏浆漩涡振荡混匀，作用2min。然后吸取混合液进行适当稀释，厌氧培养72h后进行计数；

G按下列公式计算杀菌率

实验结果如表2所示。

表2

(3)细胞毒性

采用MTT法检测原料或成品对RAW 264.7细胞生存能力的影响。选取对数生长期的RAW264.7细胞，消化收集细胞后，加入含有10％FBS的DMEM培养基中制成细胞悬浮液，以接种浓度25×10⁴个/mL的浓度接种于96孔板(100μL/孔)，同时设置空白调零孔(培养基铺板孔)和对照孔(DMSO处理孔)，5％CO₂，37℃培养过夜，加入样品进行处理(含5μg/mL LPS)，每个样品设5个复孔，5％CO₂，37℃孵育24h后小心吸出培养液，每孔加入50μL培养基配制的MTT溶液(5mg/mL，即0.5％MTT)；继续培养2h后，小心地吸去孔内培养液。每孔加入150μLDMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解；用酶标仪测量570nm处各孔的吸光值，细胞增殖率计算公式＝(对照组OD值－药物实验组OD值)/(对照组OD值-空白调零组OD值)×100％。

评价标准：细胞增殖率≥80％视为牙膏样品无细胞毒性。

实验结果见附图1。

试验结果显示，含有透明质酸的牙膏对细胞没有毒性，含柠檬酸锌的牙膏对细胞没有毒性。

(4)细胞抗炎试验

对LPS诱导RAW 264.7细胞产生NO的影响,采用Griess试剂法检测细胞培养基中的一氧化氮(NO)含量进行检测。

1)RAW 264.7细胞调整细胞浓度为50×10⁴个/mL，接种于24孔培养板内，每孔加1mL细胞悬浮液，置于37℃、5％CO₂培养箱内孵育。

2)24h后细胞贴壁，细胞用PBS冲洗，加入1mL不含血清的DMEM培养基。加药原料或成品1h后加LPS 1uL，终浓度为5μg/mL，24h收集上清。

3)使用碧云天一氧化氮检测试剂盒检测NO的含量

A用无血清培养基稀释标准品：0、1、2、5、10、20、40、60、100uM；

B 50μL/孔+50μL Griess Reagent I+50μL Griess Reagent II

C震荡3min，用酶标光度计检测540nm波长处的吸光光度值(OD值)，重复2次。NO的浓度依据NaNO₂标准曲线进行计算。药物试验组的结果换算为LPS对照组的百分比表示，如附图2。

实施例4与对比例2的显著性差别p<0.001,与对比例3的显著性差别p<0.05；实施例5与对比例2和对比例3的显著性差别都为p<0.001。试验结果显示，含有透明质酸混合物的牙膏比含有单一分子量透明质酸的具有显著减低NO产物，具有抗炎的功效。

ELISA检测细胞培养基中炎症相关活性因子的水平,本试验采用华美的小鼠ELISA试剂盒(双抗体夹心法)检测细胞培养基中IL-6。

1)上清液制备如上述一氧化氮(NO)测试实验。

2)样品处理：细胞培养上清：-80℃保存(2个月内)，使用前解冻，并1000×g，4℃，离心15min。

3)试验操作如ELISA试剂盒说明书所示。

4)试验结果，见附图3。

实施例4与对比例2的显著性差别p<0.01,与对比例3的显著性差别p<0.05；实施例5与对比例2的显著性差别都为p<0.001，与对比例3的显著性差别p<0.01。试验结果显示，含有透明质酸组合物的牙膏比含有单一分子量透明质酸的具有显著降低IL-6的含量，具有抗炎的功效。

(5)细胞损伤修复试验

制备密度为1×10⁶个/mL的细胞悬液，接种于35mm小皿中(2mL/皿，背面用画marker笔画横线标记)，培养至铺满板底。吸去细胞培养液，用200μL枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。加入2mL DMEM培养基和药物，以DMSO的阴性对照组，取0h，48h时间点进行拍照。注意不同时间点拍照时每个视野应拍同一个位置。

试验结果见附图4。

试验结果显示，含有透明质酸混合物的牙膏比含有单一分子量透明质酸的具有显著促进修复能力，具有损伤修复的功效。

(6)动物抗炎试验

将检疫合格后的78只SOF级小鼠随机分为6个组，每组13只，分别为：二甲苯模型对照组、样品1组、样品2组、样品3组和地塞米松磷酸钠注射液组。

小鼠检疫分组后，左耳不作处理为本底值，右耳内外两面总共涂30μL的二甲苯溶液，30min后除模型对照组外，受试组小鼠右耳两面涂抹0.1g的样品，地塞米松磷酸钠注射液组涂抹50μL的地塞米松磷酸钠注射液，注射液30min后涂抹第二次，涂样品1h后摘除小鼠眼球取血，颈椎脱臼处死小鼠，擦净样品，剪下双耳，取直径为8mm的耳片(左右耳同一部位)称重记录。同一只动物左右耳的重量差即为肿胀度。

肿胀度＝右耳耳片重量-左耳耳片重量

肿胀抑制率＝(模型对照组平均肿胀度-治疗组平均肿胀度)/模型对照组平均肿胀度×100％

试验结果显示，含有透明质酸组合物的牙膏比含有单一分子量透明质酸的具有显著抑制耳肿胀，具有抗炎的功效。

根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式，对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。

Claims (9)

1.一种含透明质酸混合物的多效口腔护理组合物，其特征在于：包括透明质酸混合物和柠檬酸梓，所述透明质酸混合物包括低分子量透明质酸、高分子量透明质酸。

2.如权利要求1所述的多效口腔护理组合物，其特征在于：按重量份计，透明质酸混合物0.1～5.0份，柠檬酸锌0.5～2.0份。

3.如权利要求1所述的多效口腔护理组合物，其特征在于：所述低分子量透明质酸与高分子量透明质酸的重量比为1：(0.5～2.0)。

4.如权利要求1所述的多效口腔护理组合物，其特征在于：所述低分子量透明质酸的重均分子量为20～40kDa，所述高分子量透明质酸的重均分子量为120～140kDa。

5.权利要求1至4任意一项所述的多效口腔护理组合物在口腔护理产品中的应用，所述口腔护理产品包括牙膏、牙粉、漱口水、口喷。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：柠檬酸锌在口腔护理产品中的含量按重量百分数计为0.5～2.0％，透明质酸在口腔护理产品中的含量按重量百分数计为0.1～5.0％。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述口腔护理产品为牙膏，所述透明质酸混合物加入到牙膏的保湿剂中分散均匀后，再加入柠檬酸锌搅混均。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述牙膏的制备方法如下：

S1：将甜味剂加入水中搅拌溶解；

S2：将增稠剂、透明质酸混合物加入到保湿剂中，分散均匀；

S3：将步骤S2分散均匀的溶液加入到步骤S1中，搅拌均匀；

S4：将柠檬酸锌加入到步骤S3中搅拌均匀；

S5：将表面活性剂加入到摩擦剂中搅拌均匀，得到均匀粉末；

S6：将步骤S5的均匀粉末，加入步骤S4中，搅拌均匀得到均匀膏体；

S7：将防腐剂加入香精中，水浴加热使香精溶解，得到均匀溶液；

S8：将步骤S7的均匀溶液加入步骤S6的均匀膏体中搅拌均匀，抽气。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述牙膏的制备方法如下：

S1：将甜味剂和防腐剂加入水中搅拌溶解；

S2：将增稠剂、透明质酸混合物加入到保湿剂中，分散均匀；

S3：将步骤S2分散均匀的溶液加入到步骤S1中，搅拌均匀；

S4：将柠檬酸锌加入到步骤S3中搅拌均匀；

S5：将表面活性剂加入到摩擦剂中搅拌均匀，得到均匀粉末；

S6：将步骤S5的均匀粉末，加入步骤S4中，搅拌均匀得到均匀膏体；

S7：将步骤S6的均匀膏体抽气。