CN107430135B

CN107430135B - 一种预测受试者的肥胖风险的方法

Info

Publication number: CN107430135B
Application number: CN201680009442.XA
Authority: CN
Inventors: 安德烈亚斯·贝格曼; 奥勒·米兰德
Original assignee: Sphingotec GmbH
Current assignee: Qirento Dx Co ltd
Priority date: 2015-02-27
Filing date: 2016-02-26
Publication date: 2019-09-10
Anticipated expiration: 2036-02-26
Also published as: RU2017129810A; US20210011034A1; WO2016066862A3; SG10202003170YA; ES2781084T3; CN107430135A; RU2745751C2; EP3262421B1; JP2018511784A; US20180246127A1; US11340240B2; CA2977494A1; WO2016066862A2; RU2021107639A; JP6760947B2; SG11201706460QA; EP3262421A2; RU2017129810A3; US10900978B2; HK1244314A1

Abstract

本发明的主题是一种用于测定受试者的脂肪加工活性和/或预测受试者的肥胖风险的方法，其包括以下步骤：测定从所述受试者获得的体液中原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段的水平；和将所述原神经降压素或其片段的水平与所述受试者的脂肪加工活性和/或肥胖发生风险关联，其中提高的水平指示提高的脂肪加工活性和/或预测提高的产生肥胖的风险。

Description

一种预测受试者的肥胖风险的方法

本发明的主题是一种用于测定受试者的脂肪加工活性和/或用于预测受试者的肥胖风险的方法，其包括以下步骤：

·通过免疫分析测定从所述受试者获得的体液中原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平，或

·测定从所述受试者获得的体液中原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段的水平；以及

·将所述原神经降压素1-117或其片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平与所述受试者的脂肪加工活性和/或肥胖发生风险关联，其中提高的水平指示提高的脂肪加工活性和/或预测提高的肥胖风险

并且其中受试者在从所述受试者采集体液样品时不肥胖。

神经降压素是一种13-氨基酸神经肽，其衍生自前原神经降压素前体并且按化学计量与稳定的117-氨基酸肽原神经降压素(P-NT)一起释放，并且成熟激素结合于三种不同受体：神经降压素受体1和2(Ntsr1和Ntsr2)，其为G蛋白偶合受体；和神经降压素受体3(Ntsr3)，其为非G蛋白偶合受体并且被称为Sortillin-1(SORT1)。

神经降压素从小肠外周以及从下丘脑中心释放。神经降压素的外周分泌受食物摄入、尤其受脂肪刺激，并且已知调节胃肠运动以及胰腺和胆汁分泌。有趣地，神经降压素作为食欲抑制激素参与食欲控制，因为其在于大鼠中中心(脑室内)和外周(腹膜内)注射后使食物摄入急剧减少，这种作用似乎主要通过神经降压素-1受体(Ntsr1)介导。相较于正常重量人类受试者，在肥胖的人类受试者中，液体脂肪膳食后餐后血浆神经降压素浓度降低(Wisen等人,1992,Reg Peptides 39(1):43-54)，并且在肥胖的人类受试者中观察到比瘦对照低的空腹神经降压素水平(Weiss等人,2001,Obes Surg 11:735-739)，表明肥胖的情况下神经降压素分泌的调节是紊乱的。然而，还没有大型研究来调查神经降压素是否与产生肥胖的风险有关以及如何有关。

本发明的主题在于调查NT预测非肥胖受试者的肥胖风险的预后能力。为了解决这个问题，我们在15年的追踪期间在所述的瑞典前瞻性群组研究(Swedish prospectivecohort study)(马尔默饮食和癌症研究(Diet and Cancer Study))中测量了空腹血浆中原神经降压素的稳定片段和肥胖的这个生物标志物的相关基线水平。

非肥胖受试者的肥胖风险可以与所述受试者的脂肪加工活性关联。因此，测定体液中原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平可以测定脂肪加工活性。

并且其中受试者在从所述受试者采集体液样品时不肥胖。

脂肪加工活性定义为脂肪在人体中的吸收、代谢和/或储存。脂肪加工活性与身体摄取脂肪同义，或与储存被摄取并且转化的脂肪的能力同义。具有较高脂肪加工活性的女性具有较高的变肥胖的风险。

饮食脂肪由各种极性和非极性脂质组成。甘油三酯(TAG)是饮食中的主要脂肪，其提供了来源于饮食脂肪的总能量的90-95％。饮食脂肪还包括磷脂、固醇(例如胆固醇)以及多种其它脂质(例如脂溶性维生素)。脂质消化在口腔中通过暴露于舌脂肪酶开始，舌脂肪酶由舌中的腺体分泌来开始消化甘油三酯的过程。在胃中通过舌酶与胃酶两者的作用继续消化。胃还是饮食脂肪和脂溶性维生素乳化的主要场所，其中蠕动是主要促成因素。脂质粗乳液以小脂质液滴的形式进入十二指肠，接着与胆汁和胰汁混合而进行化学和物理形式的显著改变。继续在十二指肠中进行乳化以及水解和胶束化来准备跨越肠壁吸收。胆汁和胰汁提供胰脂肪酶、胆盐和共脂肪酶，其共同用于确保脂质消化和吸收的效率。TAG主要在空肠上段被胰脂肪酶消化。游离脂肪酸从肠腔吸收到肠上皮细胞中并且用于中性脂肪的生物合成。进入肠上皮细胞内后，TAG水解产物必须横越细胞质到达内质网(ER)，在内质网中其用于合成复合脂质。

肠分泌的主要脂蛋白是VLDL和乳糜微粒。其中，乳糜微粒仅在肠中合成来向血液传输饮食脂肪和脂溶性维生素。乳糜微粒主要是富含TAG的极大的球形颗粒，其还含有PL、胆固醇、维生素E、维生素A以及蛋白质。脂蛋白核心含有TAG、胆固醇酯和脂溶性维生素，而表面含有磷脂(主要磷脂酰胆碱)、游离胆固醇和蛋白质的单层。

当其循环时，乳糜微粒的甘油三酯通过脂蛋白脂肪酶进行水解，脂蛋白脂肪酶是一种位于肌肉和脂肪组织的毛细血管内皮细胞表面上的酶。循环的乳糜微粒的半衰期是5-10分钟。乳糜微粒水解使得从乳糜微粒核心释放脂肪酸和甘油，以及从这些颗粒的表面涂层释放未酯化的胆固醇。主要在脂肪、肌肉和心脏组织中进行去脂，所述组织吸收并且氧化或储存由脂蛋白脂肪酶释放的脂肪酸。

从肠吸收离开的脂肪酸、胆固醇和胆酸分别以粪便脂肪酸以及中性和酸性固醇形式分泌。

在具有有效的脂肪加工活性的受试者中，胃肠道吸收的脂肪的比例较低，吸收的量的脂肪几乎完全代谢并且没有或仅少量的脂肪被传输并且储存在受试者的脂肪细胞中。相比之下，在具有无效脂肪加工活性的受试者中，胃肠道的脂肪吸收比例高，但吸收的脂肪代谢程度较小，并且较多的脂肪被传输并且储存在受试者的脂肪细胞中。

如本文所用的术语“受试者”指活人或非人类有机体。优选地，在本文中，受试者是人类受试者。在本发明的一个特定实施方式中，所述受试者是非糖尿病受试者。在本发明的另一个特定实施方式中，所述受试者是非IFG(非前期糖尿病)受试者。在本发明的另一个特定实施方式中，受试者未患代谢综合征。在本发明的另一个特定实施方式中，受试者未患心脏病。在本发明的另一个特定实施方式中，受试者未患癌症。在本发明的另一个特定实施方式中，受试者是女性受试者。

术语“心脏病”包括心肌梗塞、缺血性心脏病、中风、心力衰竭(急性或慢性心力衰竭)、心房纤维性颤动以及心房扑动。

术语“新出现肥胖的风险”与“肥胖风险”同义，其中受试者在从所述受试者采集体液样品时不肥胖。

在本发明的一个实施方式中，体液中原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平是原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的空腹水平。空腹水平是指血液取样前10小时或优选12小时不摄取食物。

因为原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的空腹水平不是通过新摄取的脂肪引起，所以似乎在一个实施方式中，空腹水平是定量所述受试者的脂肪加工活性的量度。这可能是说明为什么一些受试者在其加工大量所摄取脂肪时容易变胖，而具有低水平的原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的其它个体具有低水平的脂肪加工活性的缺少的环节。而且测定非空腹样品中的原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽可以是脂肪加工活性的指标，因为一些受试者的水平提高比其它人由相同量的所摄取脂肪引起的水平提高要高。在后一种情形下，可以在基线下在脂肪摄取之前和在脂肪摄取之后测量原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽，而在脂肪摄取后，具有提高的脂肪加工活性的受试者将与较大量的释放的原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽反应。

因此，本发明的一个实施方式是一种用于测定受试者的脂肪加工活性和/或用于预测受试者的肥胖风险的方法，其包括以下步骤：

·通过免疫分析测定从所述受试者获得的非空腹体液样品或空腹体液样品中原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平，或

·测定从所述受试者获得的非空腹体液样品或空腹体液样品中原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段的水平；以及

·给予所述受试者脂肪

·通过免疫分析测定在脂肪摄取后从所述受试者获得的体液样品中原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平，或

·测定在脂肪摄取后从所述受试者获得的体液样品中原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段的水平；以及

·计算脂肪摄取之后与之前之间的差值，以及

·将脂肪摄取之后与之前的原神经降压素1-117或其片段或包含原神经降压素1-117的肽的所述水平之间的所述差值与所述受试者的脂肪加工活性和/或肥胖发生风险关联，其中较高的差值指示提高的脂肪加工活性和/或预测提高的肥胖风险

并且其中受试者在从所述受试者采集体液样品时不肥胖。

这意味着脂肪摄取之前的原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平与脂肪摄取之后的所述水平之间的差值可以指示脂肪加工活性。脂肪摄取之前的所述受试者的状态可以是空腹或非空腹。将标准化的量的脂肪给予所述受试者(口服脂肪耐量测试)，例如含有特定量的脂肪的特定量的奶油。实施例4中示出一些个体对脂肪摄取的反应比其它人敏感，因此具有较高的脂肪加工活性。

从所述受试者获得的体液中原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平从小肠释放出，所述水平用来预测产生新出现的肥胖的风险并且指示脂肪加工活性。从小肠释放神经降压素受食物摄入、尤其受脂肪刺激(Go和Demol 1981.Peptides(增刊2):267-269)，并且已知调节胃肠运动以及胰腺和胆汁分泌(Reinecke 1985.Prog Histochem Cytochem 16:1-172)。原神经降压素1-117和其片段或包含原神经降压素1-117的肽用作释放的神经降压素的替代标记物，因为神经降压素、原神经降压素1-117和其片段或包含原神经降压素1-117的肽以等摩尔量从原神经降压素释放。

本发明令人惊讶地发现，神经降压素/原神经降压素1-117或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的外周分泌指示受试者产生新出现的肥胖的易感性，并且是脂肪加工活性的量度。因此，作为降低脂肪摄取的饮食手段可以降低所述受试者中的所述风险。

从所述受试者获得的体液中原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含PNT 1-117的肽的水平与产生肥胖的风险以及脂肪加工活性之间的关联是连续的，即水平较高，风险越大。

出于可行性，本领域技术人员可以使用阈值。

术语“提高的水平”是指高于某一阈值水平的水平。

阈值水平可以通过测量来自确实产生某种病状(例如肥胖)的受试者的样品和来自未产生所述病状的受试者的样品来测定。测定阈值的一种可能方法是计算接受者表现特征曲线(ROC曲线)，绘制变量相对于其在“正常”群体(例如未产生肥胖病状的受试者)和“疾病”群体(例如产生肥胖病状的受试者)中的相对频率的值。产生或未产生某种病状的受试者的标记水平的分布可能重叠。在此类情况下，测试不能以100％准确性绝对地区分“正常”与“疾病”，并且重叠区指示在此区域中，所述测试不能区分正常与“疾病”。选择一个阈值，高于(或低于，根据标记物如何随“疾病”变化而定)此阈值时测试被认为是异常的，并且低于此阈值测试被认为是正常的。ROC曲线下面积是感知的测量允许正确识别病状的概率的量度。即使在测试结果未必产生精确数字时也可以使用ROC曲线。只要可以将结果分级，就可以产生ROC曲线。举例来说，对于“疾病”样品的测试结果可以根据程度分级(例如1＝低，2＝正常，并且3＝高)。可以关联此分级来产生“正常”群体，并且产生ROC曲线。这些方法是本领域中众所周知的(Hanley等人,1982.Radiology 143:29-36)。优选地，选择一个阈值来提供大于约0.5、更优选大于约0.7、更佳大于约0.8、甚至更优选大于约0.85并且最优选大于约0.9的ROC曲线面积。在本发明的情形下，术语“约”指既定测量值的+/-5％。ROC曲线的横轴表示(1-特异性)，其随着假阳性率而增加。曲线的纵轴表示敏感性，其随着真阳性率而增加。因此，对于所选的特定截止值，可以测定(1-特异性)的值，并且可以获得相应敏感性。ROC曲线下面积是测量的标记水平允许正确识别疾病或病状的概率的量度。因此，可以使用ROC曲线下面积确定测试的有效性。优势率是有效大小的量度，其描述两个二进制数据值(例如事件在测试阴性组中出现的优势与其在测试阳性组中出现的优势的比率)之间的相关或非独立性的强度。

阈值水平可以例如从卡普兰-迈耶分析(Kaplan-Meier analysis)获得，其中将疾病的出现率或严重病状和/或死亡的概率与例如相应标记物在群体中的四分位数关联。根据此分析，标记水平高于第75百分位的受试者具有显著提高的产生根据本发明的疾病的风险。调整了典型风险因数的考克斯回归分析(Cox regression analysis)进一步支持了此结果。相对于所有其它受试者的最高的四分位数与产生疾病的风险提高或与根据本发明的严重病状和/或死亡的概率明显高度相关。

其它优选的截止值例如是参比群体的第90、95或99百分位。使用高于第75百分位的百分位会降低识别的假阳性受试者的数目，但可能错过识别出具有中等但仍然提高的风险的受试者。因此，可以根据是否认为识别大部分具有风险的受试者但代价是也识别“假阳性”更适当，或是否认为主要识别具有高风险的受试者但代价是错过数个具有中等危险的受试者更适当来调节截止值。

通过使用个体的标记水平值和其它预后实验和临床参数来计算个体风险的其它数学可能方法例如NRI(净再分类指数)或IDI(综合区别指数)。这些指数可以根据Pencina(Pencina MJ等人:Evaluating the added predictive ability of a new marker:fromarea under the ROC curve to reclassification and beyond.Stat Med.2008；27:157-172)计算。

体液可以选自血液、血清、血浆、尿液、脑脊髓液(CSF)和唾液。在一个特定实施方式中，体液可以选自血液、血清、血浆。

本发明的数据表明原神经降压素或其片段、尤其原神经降压素1-117或其片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平与新出现的肥胖的产生并且与脂肪加工活性之间的强相关性。

体液中可以测定的原神经降压素的片段可以是例如

SEQ ID NO:1(原神经降压素1-147)

SDSEEEMKAL EADFLTNMHT SKISKAHVPS WKMTLLNVCS LVNNLNSPAE ETGEVHEEELVARRKLPTAL DGFSLEAMLT IYQLHKICHS RAFQHWELIQ EDILDTGNDK NGKEEVIKRK IPYILKRQLYENKPRRPYIL KRDSYYY

SEQ ID NO:2(原神经降压素1-125(大神经介肽N))

SDSEEEMKAL EADFLTNMHT SKISKAHVPS WKMTLLNVCS LVNNLNSPAE ETGEVHEEELVARRKLPTAL DGFSLEAMLT IYQLHKICHS RAFQHWELIQ EDILDTGNDK NGKEEVI KR KIPYIL

SEQ ID NO:3(神经介肽N:)

KIPYIL

SEQ ID NO:4(神经降压素)

pyroQLYENKPRRP YIL

SEQ ID NO:5(原神经降压素1-117)

SDSEEEMKAL EADFLTNMHT SKISKAHVPS WKMTLLNVCS LVNNLNSPAE ETGEVHEEELVARRKLPTAL DGFSLEAMLT IYQLHKICHS RAFQHWELIQ EDILDTGNDK NGKEEVI

SEQ ID NO:6(原神经降压素1-132)

SDSEEEMKAL EADFLTNMHT SKISKAHVPS WKMTLLNVCS LVNNLNSPAE ETGEVHEEELVARRKLPTAL DGFSLEAMLT IYQLHKICHS RAFQHWELIQ EDILDTGNDK NGKEEVIKRK IPYILKRQLYEN

SEQ ID NO:7(原神经降压素1-140(大神经降压素))

SDSEEEMKAL EADFLTNMHT SKISKAHVPS WKMTLLNVCS LVNNLNSPAE ETGEVHEEELVARRKLPTAL DGFSLEAMLT IYQLHKICHS RAFQHWELIQ EDILDTGNDK NGKEEVIKRKIPYILKRQLYENKPRRPYIL

SEQ ID NO:8(原神经降压素120-140)

KIPYILKRQ L YENKPRRPYI L

SEQ ID NO:9(原神经降压素120-147)

KIPYILKRQL YENKPRRPYIL KRDSYYY

SEQ ID NO:10(原神经降压素128-147)

QLYENKPRRP YILKRDSYYY。

在根据本发明的方法的一个更特定实施方式中，测定原神经降压素1-117的水平。

在一个特定实施方式中，通过免疫分析测量原神经降压素、尤其原神经降压素1-117或其片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平。更具体来说，如Ernst等人,Peptides27(2006)1787-1793中所述使用免疫分析。在一个特定实施方式中，测定原神经降压素1-117的免疫反应性，其中免疫反应性是指以下内容：

测定原神经降压素或其片段的水平可以是指测定对原神经降压素或其片段(包括神经降压素和神经介肽N)的免疫反应性。用于测定原神经降压素或其片段(根据结合区而定包括神经降压素和神经介肽N)的结合剂可以结合于上文呈现的分子中的超过一个。这对于本领域技术人员是显而易见的。

因此，根据本发明，通过使用至少一种结合于任何上述肽和肽片段(即原神经降压素(pro-NT)和根据序列1至10中的任一个的片段)的胺基酸序列内的区域的结合剂来测定从所述受试者获得的体液中免疫反应性分析物的水平；并且与具有临床相关性的特定实施方式关联。

在根据本发明的方法的一个更特定实施方式中，测定pro-NT 1-117的水平(SEQID NO.5：原神经降压素1-117)。在一个更特定实施方式中，通过使用至少一种结合于pro-NT 1-117的结合剂来测定免疫反应性分析物的水平，并且与根据本发明的具有临床相关性的特定实施方式关联。

在本发明的另一个实施方式中，测定对原神经降压素或其片段(不包括神经降压素和神经介肽N)的免疫反应性。

可以适用于测定原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平的免疫分析可以包括实施例2中概述的步骤。可以适用于测定原神经降压素或其具有至少5个氨基酸的片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平的免疫分析可以包括针对原神经降压素1-117内的表位的至少一种抗体或至少两种抗体。这些抗体中的至少一种可以进行标记。所有阈值和值必须依据根据实施例2使用的测试和校准来获得。本领域技术人员可能知晓阈值的绝对值可能受所用校准的影响。这意味着本文中所提供的所有值和阈值均应该在本文(实施例2)中所用校准的情景下理解。人类pro-NT-校准器可购自ICI-Diagnostics,Berlin,Germany。或者，该分析可以通过合成或重组的pro-NT 1-117或其片段校准(还参见Ernst等人,2006)。

在本发明的一个实施方式中，其可能是所谓的POC测试(护理点(point-of-care))，也就是说，允许在少于1小时内在患者附近无需全自动分析系统来执行测试的测试技术。这种技术的一个实例是免疫色谱测试技术。

在本发明的一个实施方式中，此类分析是使用任何种类的检测技术的夹心免疫分析，该检测技术包括(但不限于)酶标记、化学发光标记、电化学发光标记，优选全自动分析。在本发明的一个实施方式中，此类分析是酶标记的夹心分析。自动或全自动分析的实例包括可以用于以下系统之一的分析：RocheAbbottSiemensBrahmsBiomerieuxAlere

已知各种免疫分析并且其可以用于本发明的分析和方法，这些免疫分析包括：放射免疫分析(“RIA”)、均相酶放大免疫分析(“EMIT”)、酶联免疫吸附分析(“ELISA”)、酶蛋白复活免疫分析(“ARIS”)、试纸条免疫分析(dipstick immunoassay)以及免疫色谱分析。

在本发明的一个实施方式中，所述两种结合剂中的至少一种被标记成能被检测到。

优选的检测方法包括各种格式的免疫分析，如放射免疫分析(RIA)、化学发光和荧光免疫分析、酶联免疫分析(ELISA)、基于Luminex的微珠阵列、蛋白质微阵列分析以及快速测试格式，如免疫色谱条测试。

在一个优选实施方式中，所述标记选自化学发光标记、酶标记、荧光标记、放射性碘标记。

分析可以是均相或非均相分析、竞争性和非竞争性分析。在一个实施方式中，分析为夹心分析的形式，其是一种非竞争性免疫分析，其中待检测和/或定量的分子结合于第一抗体并且结合于第二抗体。第一抗体可以结合于固相(例如微珠、孔或其它容器的表面、芯片或条带)，并且第二抗体是例如用染料、用放射性同位素或反应性或催化活性部分标记的抗体。接着通过适当方法测量结合于分析物的标记的抗体的量。涉及“夹心分析”的一般组合物和程序是公认的并且是技术人员已知的。

在另一个实施方式中，分析包括两个捕捉分子，优选均以分散液形式存在于液体反应混合物中的抗体，其中第一标记组分连接于第一捕获分子，其中所述第一标记组分是基于荧光或化学发光淬灭或扩增的标记系统的一部分，并且所述标记系统的第二标记组分连接于第二捕获分子，使得两个捕捉分子结合于分析物之后，产生可测量信号，从而允许检测在包含样品的溶液中形成的夹心复合物。

在另一个实施方式中，所述标记系统包含稀土穴状化合物或稀土螯合物以及荧光染料或化学发光染料，特别是花青型染料。

在本发明的上下文中，基于荧光的分析包括使用染料，其可以例如选自FAM(5-或6-羧基荧光素)、VIC、NED、荧光素、异硫氰酸荧光素(FITC)、IRD-700/800、花青染料(如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、Cy7)、氧杂蒽、6-羧基-2',4',7',4,7-六氯荧光素(HEX)、TET、6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素(JOE)、N,N,N',N'-四甲基-6-羧基罗丹明(TAMRA)、6-羧基-X-罗丹明(ROX)、5-羧基罗丹明-6G(R6G5)、6-羧基罗丹明-6G(RG6)、罗丹明、罗丹明绿、罗丹明红、罗丹明110、BODIPY染料(如BODIPY TMR)、俄勒冈绿、香豆素(如伞形酮)、苯甲酰亚胺(如赫克斯特33258(Hoechst 33258))；菲啶，如得克萨斯红、雅吉瓦黄、AlexaFluor、PET、溴化乙锭、吖啶染料、咔唑染料、吩恶嗪染料、紫菜碱染料、聚甲炔染料等。

在本发明的上下文中，基于化学发光的分析包括基于(24)中对于化学发光材料所述的物理原理使用染料。优选的化学发光染料是吖啶酯。

如本文所提及，“分析”或“诊断分析”可以具有诊断领域中所用的任何类型。此类分析可以基于待检测的分析物与一种或多种具有某种亲和力的捕捉探针的结合。关于捕捉分子与目标分子或所关注分子之间的相互作用，亲和力常数优选大于10⁸M^-1。

在本发明的上下文中，“结合剂分子”是可以用于结合来自样品的目标分子或所关注分子即分析物(即在本发明的上下文中，原神经降压素和其片段)的分子。因此，结合剂分子必须在空间上与表面特征两者(如表面电荷、疏水性、亲水性、路易斯(lewis)供体和/或受体存在与否)上被适当地定形来特异性结合目标分子或所关注分子。因此，结合可以例如用以下相互作用介导：离子、范德华力(van-der-Waals)、π-π、σ-π、疏水性或氢键相互作用或捕捉分子与目标分子或所关注分子之间的上述相互作用中的两种或多于两种的组合。在本发明的上下文中，结合剂分子可以例如选自核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白质、抗体、肽或糖蛋白。优选地，结合剂分子是抗体，包括其对目标或所关注分子具有足够亲和力的片段，并且包括重组抗体或重组抗体片段，以及以化学方法和/或生物化学方法修饰的所述抗体或片段的衍生物，其衍生自变体链且长度为至少12个其氨基酸。

化学发光标记可以是吖啶酯标记、类固醇标记(包括异鲁米诺(isoluminol)标记)等。

酶标记可以是乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)、碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙胺酸氨基转移酶(ALT)、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等。

在本发明的一个实施方式中，所述两种结合剂中的至少一种结合于固相，如磁性颗粒和聚苯乙烯表面。

用于确定受试者产生新出现的肥胖的风险的阈值高于60pmol/Lpro-NT，优选高于90pmol/L，更优选高于123pmol/L。在一个特定实施方式中，所述阈值高于180pmol/L或高于190pmol/L。这些阈值与上述校准方法有关。高于所述阈值的pro-NT值是指该受试者具有提高的产生新出现的肥胖的风险。

肥胖定义为身体质量指数≥30kg/m²。

非肥胖受试者定义为身体质量指数<30kg/m²。

新出现的肥胖定义为某个追踪时间后非肥胖受试者产生的肥胖。

身体质量指数(BMI)定义为体重(公斤)除以身高(米)的平方。

追踪时间长达1年，优选长达2年，更优选长达5年，甚至更优选长达10年，甚至更优选长达15年，甚至更优选长达16.5年，最优选长达18年。

糖尿病的定义如下：有医师诊断史，或正服用抗糖尿病药，或在基线检查时空腹全血葡萄糖>/＝6.1mmol/l(其对应于血浆中>/＝7.0mmol/l)。

前期糖尿病或空腹血糖受损(IFG)定义为全血空腹血浆葡萄糖在>/＝5.4与<6.1mmol/l之间(其对应于血浆中6.1-6.9mmol/l)。

在根据本发明的方法的一个特定实施方式中，所述受试者是空腹全血葡萄糖小于5.4mmol/l(其对应于血浆中<6.1mmol/l)的非糖尿病受试者。世界卫生组织标准(Alberti和Zimmet.1998.Diabet Med.15:539-553；World HealthOrganization.1999.Definition,diagnosis and classification of diabetesmellitus and its complications:report of a WHO Consultation.Part 1:diagnosisand classification of diabetes mellitus.Geneva,Switzerland:World HealthOrganization)定义了代谢综合征，其需要存在通过以下症状之一识别的胰岛素抗性：(1)II型糖尿病；(2)空腹血糖受损；(3)糖耐量受损；或(4)在高胰岛素、血糖正常情况和以下情况中的两种的情况下，对于具有正常空腹葡萄糖水平(<110mg/dL)者，葡萄糖摄取低于研究的背景群体的最低四分位数：(1)血压：≥140/90mmHg；(2)血脂异常：甘油三酯(TG)：≥1.695mmol/L，并且高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)≤0.9mmol/L(男性)，≤1.0mmol/L(女性)；(3)中心型肥胖：腰:臀比>0.90(男性)；>0.85(女性)，或身体质量指数>30kg/m²；(4)微量白蛋白尿：尿白蛋白排泄率≥20μg/min或白蛋白:肌酸酐比率≥30mg/g。

受试者可能具有正常血压(BP正常血压(BP))。所述受试者可能具有正常血压/高血压。

正常血压/高血压(HBP)的定义如下：

HBP：收缩BP>/＝140mmHg或舒张BP>/＝90mmHg或正服用抗高血压药。具有正常血压(BP)的受试者都是其它受试者，即收缩BP<140mmHg或舒张BP<90mmHg或未服用抗高血压药的受试者。

在根据本发明的方法的一个特定实施方式中，预测受试者产生新出现的肥胖的风险通过另外测定和使用至少一个实验参数或选自如下的其它标记物的水平改善：空腹全血或血浆葡萄糖、甘油三酯、HDL胆固醇或其亚馏分、LDL胆固醇或其亚馏分、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、胰岛素、CRP、估算的小球滤过率(eGFR)。

在根据本发明的方法的一个特定实施方式中，另外测定至少一个选自如下的临床参数：年龄、性别、收缩压、舒张压、抗高血压治疗(AHT)、腰围、腰臀比、当前的吸烟者、糖尿病遗传性、癌症遗传性以及以前的心血管疾病(CVD)。

本发明的另一个实施方式是一种测定脂肪加工活性和/或预测新出现的肥胖的风险的方法，其中原神经降压素或其片段的水平单独或与其它预后有用的实验或临床参数结合通过可以选自以下备选方案的方法用于测定脂肪加工活性和/或预测受试者中新出现的肥胖的风险：

-与表面上健康的受试者群体的预测定样品集合中原神经降压素或其片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平的中位数比较，

-与表面上健康的受试者群体的预测定样品集合中原神经降压素或其片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平的分位数比较，

-基于考克斯比例危险分析(Cox Proportional Hazards analysis)的计算或通过使用风险指数计算(如NRI(净再分类指数)或IDI(综合区别指数))。

在本发明的一个实施方式中，样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊髓液样品、唾液样品和尿液样品或任何上述样品的提取物。在根据本发明的方法的一个特定实施方式中，原神经降压素或长度为至少5个氨基酸的其片段或包含原神经降压素1-117的肽的水平通过诊断分析、优选通过免疫分析来测定。

在根据本发明的方法的一个特定实施方式中，方法执行超过一次以监测产生新出现的肥胖的风险或监测治疗所述受试者的治疗过程来降低受试者产生新出现的肥胖的风险，其中所述受试者不肥胖。

在根据本发明的方法的一个特定实施方式中，执行所述监测以评估所述受试者对所采取的预防性和/或治疗性措施的响应。

在根据本发明的方法的一个特定实施方式中，使用该方法以将所述受试者划分到风险组中。

本发明还涵盖用于执行根据本发明的方法的护理点装置(point-of-caredevice)。

本发明还涵盖一种用于执行根据本发明的方法的分析和/或试剂盒。

实施例

实施例1

抗体的产生

用于免疫的肽/结合物：

合成用于免疫的肽(JPT Technologies,Berlin,Germany)，其具有另外的N端半胱氨酸残基来使所述肽结合于牛血清白蛋白(BSA)。通过使用硫基-SMCC(Perbio-Science,Bonn,Germany)使肽与BSA共价连接。根据Perbio的手册执行耦合程序。

标记的抗体(LA)肽(P-NT 1-19)：

H-CSDSEEEMKALEADFLTNMH-NH2

固相抗体(SPA)肽(P-NT 44-62)：

H-CNLNSPAEETGEVHEEELVA-NH2

抗体根据以下方法产生：

在第0天和第14天用100μg肽-BSA-结合物(在100μl完全弗氏佐剂中乳化)使BALB/c小鼠免疫，并且在第21天和第28天用50μg肽-BSA-结合物(在100μl不完全弗氏佐剂中)使其免疫。执行融合实验前三天，动物接受溶解在100μl盐水中的50μg结合物，该结合物以一次腹膜内注射和一次静脉内注射形式给予。

在37℃下使来自免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系SP2/0的细胞与1ml 50％聚乙二醇融合30s。洗涤后，将细胞接种在96孔细胞培养板中。通过在HAT培养基(补充有20％胎牛血清和HAT补充物的RPMI 1640培养基)中生长而选择杂交克隆。两周后，用HT培养基替换HAT培养基，传三代，接着返回到标准细胞培养基。

融合后三周，针对抗原特异性IgG抗体对细胞培养物上清液进行初次筛选。将测试阳性的微量培养物转移到24孔板中进行增殖。再测试后，使用限制稀释技术将所选培养物克隆并且再克隆，并且测定同种型。(Lane,R.D.“A short-duration polyethylene glycolfusiontechnique for increasing production of monoclonal antibody-secretinghybridomas”,J.Immunol.Meth.81:223-228；(1985),Ziegler,B.等人,“Glutamatedecarboxylase(GAD)is not detectable on the surface of rat islet cellsexamined by cytofluorometry and complement-dependent antibody-mediatedcytotoxicity of monoclonal GAD antibodies”,Horm.Metab.Res.28:11-15,(1996))。

单克隆抗体产生

借助于标准抗体产生方法(Marx等人,Monoclonal Antibody Production,ATLA25,121,1997)产生抗体并且借助于蛋白A-色谱纯化。基于SDS凝胶电泳分析，抗体纯度>95％。

实施例2

用于定量人类原神经降压素的免疫分析

所用技术是基于吖啶酯标记的夹心涂布的管发光免疫分析。

标记化合物(示踪剂)：将100μg(100μl)LA(1mg/ml的PBS溶液，pH 7.4)与10μl吖啶NHS-酯(1mg/ml的乙腈溶液，InVent GmbH,Germany)(EP0353971)混合并且在室温下培育20min。通过在Bio-Sil SEC 400-5(Bio-Rad Laboratories,Inc.,USA)上进行凝胶过滤HPLC来纯化标记的LA。用(300mmol/l磷酸钾、100mmol/l NaCl、10mmol/l Na-EDTA、5g/l牛血清白蛋白，pH 7.0)稀释纯化的LA。最终浓度是每200μl约800.000相对光单位(RLU)标记化合物(约20ng标记抗体)。吖啶酯化学发光通过使用AutoLumat LB 953(BertholdTechnologies GmbH&Co.KG)测量。

固相：用SPA(1.5μg SPA/0.3ml 100mmol/l NaCl、50mmol/l TRIS/HCl，pH 7.8)涂布(在室温下18h)聚苯乙烯管(Greiner Bio-One International AG,Austria)。用5％牛血清白蛋白阻断后，用PBS(pH 7.4)洗涤管并且真空干燥。

校准：

使用含有pro-NT的人类血清的稀释液校准分析。用马血清(Biochrom AG,Deutschland)(分析标准品)稀释具有高pro-NT免疫反应性的人类血清的库(InVentDiagostika,Hennigsdorf,Germany)。

通过使用人类pro-NT-校准器(ICI-Diagnostics,Berlin,Germany)校准标准品。或者，该分析可以通过合成或重组的pro-NT 1-117或其片段校准(也参见Ernst等人,2006)。

pro-NT免疫分析：

吸取50μl样品(或校准品)到涂有SPA的管中，添加标记的LA(200μl)后，将管在18-25℃下培育16-22h。通过用洗涤液(20mMPBS，pH 7.4，0.1％Triton X-100)洗涤5次(每次1ml)去除未结合的示踪剂。

通过使用AutoLumat LB 953测量管结合的LA。

图1示出了典型的P-NT剂量/信号曲线。

实施例3

群体研究

马尔默饮食和癌症(MDC)研究是一个基于群体的前瞻性流行病学群组，其具有28,449名男性(出生于1923-1945年)和女性(出生于1923-1950年)，来自瑞典(Sweden)南部的马尔默市，其在1991年至1996年之间进行基线检查(Minisymposium:The MalmoDiet and Cancer Study.Design,biological bank and biomarker programme.J InternMed 233,39-79(1993))。在1991年至1994年之间，从这个群组随机选择6,103人参与MDC心血管群组(MDC-CC)，其被设计来研究颈动脉疾病的流行病学(Persson等人,2008.Atherosclerosis 200:191-198)。基线检查时的空腹血浆样品可以用于分析原神经降压素(pro-NT)并且在MDC-CC中的总共4,632名参与者中成功测量。其中，4,626名参与者获得可用于BMI的全部数据，4,625名参与者获得可用于腰围的全部数据，并且4,468名参与者获得可用于使用胰岛素抗性的体内平衡模型评估(HOMA-IR)(空腹血糖浓度×空腹血浆胰岛素浓度/22.5)(Matthews等人,1985.Diabetologia 28:412-419)来估算胰岛素抗性程度的全部数据。BMI定义为体重(公斤)除以身高(米)的平方，并且肥胖定义为BMI≥30kg/m²。腹部肥胖定义为根据国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation)定义(Alberti等人,2006.Diabet Med 23:469-489)，腰围≥94cm(男性)和≥80cm(女性)。认为胰岛素抗性存在于属于MDC-CC中HOMA-IR值前25％的受试者中。‘新出现的肥胖’定义为16.5±1.5年的平均追踪时间后再检查并且诊断患有肥胖的非肥胖MDC-CC参与者中产生的肥胖。

在储存的空腹血浆样本中使用新近的化学发光夹心免疫分析测量在MDC-CC基线检查时立即冷冻到-80℃的pro-NT来如前述检测pro-NT前体片段(pro-NT 1-117)(Ernst等人,2006.Peptides 27:1787-1793)。在基线检查时在结合国家标准化和质量控制系统(Enhorning等人,2010.Circulation 121:2102-2108)的马尔默大学医院临床化学部(theDepartment of Clinical Chemistry,University Hospital)进行血糖和血浆胰岛素的分析。在具有BMI和pro-NT的基线数据的4,626名受试者中，在平均追踪16.5±1.5年后再检查2,900名受试者而具有新的BMI测量结果。在分析易发生的肥胖时，我们排除了在基线检查时已经肥胖的受试者，留下总共2,606名非肥胖受试者分析pro-NT与易发生的肥胖的关系。所有参与者都提供了书面的知情同意书并且研究经隆德大学(LundUniversity)的道德委员会(Lund,Sweden)批准。

统计分析

在MDC-CC基线检查时将所有受试者根据其空腹pro-NT值分成增长的四分位数。在横截面分析中，我们使用年龄和性别调节的逻辑回归模型将pro-NT的基线四分位数与肥胖、腹部肥胖和胰岛素抗性的二分结果相关联。在易发生的肥胖的分析中，我们使用基线年龄，性别和BMI调节的逻辑回归将pro-NT的基线四分位数与易发生的肥胖的二分结果相关联。数据以优势率(95％置信区间)形式提供，并且将属于pro-NT的最低四分位数的受试者定义为参比组(优势率＝1)。‘趋势的P值’表示四分位数1-4中线性趋势的P值。

研究结果

我们测量了基于群体的马尔默饮食和癌症研究心血管群组的4,632名中等年龄受试者的空腹血浆中的pro-NT水平(表1)。在pro-NT的四分位数中年龄和性别调节的肥胖、腹部肥胖和胰岛素抗性的可能性显著提高(表2)。在非肥胖受试者中，在16.5±1.5年的平均追踪时间期间产生肥胖的风险随着pro-NT四分位数逐步提高，而与基线身体质量指数、年龄和性别无关。在四分位数1中，pro-NT中值浓度是60.1pmol/L(范围3.3-75.9pmol/L)，在四分位数2中是89.3pmol/L(范围75.9-105pmol/L)，在四分位数3中是123pmol/L(范围105-149pmol/L)并且在四分位数4中是190pmol/L(范围149-1155pmol/L)。基线pro-NT水平的最高四分位数中的非肥胖受试者产生肥胖的风险是最低四分位数中的受试者的超过两倍(OR2.06(95％置信区间是1.38-3.06))(表2)。

我们使用方程中的相同变量研究了不同亚组来预测新出现的肥胖(表3)，排除在基线时分别具有如下情况的受试者：患有糖尿病(DM)和空腹血糖受损(IFG)、进行高血压/抗高血压疗法(AHT)、患有代谢综合征(MeSy)、eGFR<60(ml/min/1.73m²)、具有癌症遗传性、发病的癌症、吸烟者。最高pro-NT水平四分位数中无上述任一情况的非肥胖受试者再次示出了产生肥胖的风险是最低pro-NT四分位数中受试者的超过两倍(表3)。最高pro-NT水平四分位数中无任一这些情况的非肥胖受试者(超级健康受试者)甚至示出了产生肥胖的提高的风险是最低pro-NT四分位数中受试者的超过3倍。

实施例4

口服脂肪摄取测试(“奶油测试”)之前和之后的PNT浓度

选择总共54名患者，其中19名健康对照受试者和35名诊断患有心力衰竭的患者。受试者空腹至少10小时并且摄入标准化的富含脂肪的饮料溶液(含有30％脂肪的奶油)。在基线时和奶油摄取后1小时、2小时和3小时采集血液。通过上述免疫分析测量原神经降压素。将基线pro-NT定义为100％并且将三个不同时间点时的水平与其相关联。在健康对照与患有HF的患者两者中，奶油摄入后1小时pro-NT都显著提高，并且在2小时和3小时后减少，但未达到基线水平(图2)。此外，在所有三个时间点，在健康对照与患有HF的患者之间，pro-NT的相对浓度明显不同(p<0.05)。

表1

马尔默饮食和癌症心血管群组(MDC-CC)的临床特征

特征	值	N
			年龄(岁)	57.7±6.0	4,626
女性，n(％)	2661(57.5)	4,626
			身体质量指数(kg/m<sup>2</sup>)	25.8±3.9	4,626
腰围(cm)	84.0±12.9	4,625
			空腹血糖(mM)	5.2±1.4	4,468
空腹胰岛素浓度(mU/L)	7.0(4.0-9.0)	4,468
			HOMA-IR	1.5(0.9-2.2)	4,468

对于正态分布的变量，数据以平均值±标准偏差的形式给出，对于空腹胰岛素浓度，以中位数和四分位距的形式给出。分类数据以数字(百分比)形式提供。“N”表示具有全部数据的数量，因此包括在分析中。“HOMA-IR”代表胰岛素抗性的体内平衡模型评估(空腹血浆胰岛素浓度×空腹血糖浓度/22.5)。

表2

原神经降压素(pro-NT)的空腹血浆浓度与肥胖和胰岛素抗性的发病率的关系以及在马尔默饮食和癌症心血管群组中与长期追踪期间新出现的肥胖的发生率的关系

‘N/N病例’表示‘分析中的受试者总数/所讨论疾病的病例数’。‘pro-NT’表示MDC-CC基线检查时原神经降压素的空腹血浆浓度。‘pro-NT四分位数1-4’定义pro-NT的MDC-CC群体四分位数(最低到最高)。数据以优势率(95％置信区间)形式提供，并且将属于pro-NT的最低四分位数的受试者定义为参比组(优势率＝1)。‘趋势的P值’表示四分位数1-4中线性趋势的P值。发病是指所述受试者在基线时已经患有“所讨论的疾病”，而患有发病的肥胖的受试者在新出现的肥胖的风险预测分析中被排除。

表3

在马尔默饮食和癌症心血管群组中，原神经降压素(pro-NT)的空腹血浆浓度与长期追踪期间患者的不同亚组中新出现的肥胖的发生率的关系

‘N/N病例’表示‘分析中的受试者总数/所讨论疾病的病例数’。‘pro-NT’表示MDC-CC基线检查时原神经降压素的空腹血浆浓度。‘pro-NT四分位数1-4’定义pro-NT的MDC-CC群体四分位数(最低到最高)。数据以优势率(95％置信区间)形式提供，并且将属于pro-NT的最低四分位数的受试者定义为参比组(优势率＝1)。‘趋势的P值’表示四分位数1-4中线性趋势的P值。

无癌症遗传性是指在基线时家族史中无已知的癌症，无发病的癌症是指在基线时未诊断到癌症，无发病的心脏病是指在基线时无心肌梗塞、缺血性心脏病、中风、心力衰竭(急性或慢性心力衰竭)、心房纤维性颤动和心房扑动，BP＝血压，AHT＝抗高血压疗法，eGFR＝估算的小球滤过率，IFG＝空腹血糖受损，DM＝糖尿病，MeSy＝代谢综合征。

表4

健康对照受试者和患有心力衰竭(HF)的受试者中基线(空腹)时和奶油摄入后1小时、2小时和3小时的原神经降压素浓度

PNT值以相对于基线值的％给出，对于两个组，基线值都分别定义为100％。

附图说明

图1示出了典型的P-NT剂量/信号曲线。

图2示出了奶油摄取之前和之后患有心力衰竭的患者和对照组中的PNT水平。

序列表

<110> 思芬构技术有限公司

<120> 一种预测受试者的肥胖风险的方法

<130> S75040WO

<150> EP 15 156 995.1

<151> 2015-02-27

<150> EP 15 164 910.0

<150> 2015-04-23

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 147

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Ser Asp Ser Glu Glu Glu Met Lys Ala Leu Glu Ala Asp Phe Leu Thr

1 5 10 15

Asn Met His Thr Ser Lys Ile Ser Lys Ala His Val Pro Ser Trp Lys

20 25 30

Met Thr Leu Leu Asn Val Cys Ser Leu Val Asn Asn Leu Asn Ser Pro

35 40 45

Ala Glu Glu Thr Gly Glu Val His Glu Glu Glu Leu Val Ala Arg Arg

50 55 60

Lys Leu Pro Thr Ala Leu Asp Gly Phe Ser Leu Glu Ala Met Leu Thr

65 70 75 80

Ile Tyr Gln Leu His Lys Ile Cys His Ser Arg Ala Phe Gln His Trp

85 90 95

Glu Leu Ile Gln Glu Asp Ile Leu Asp Thr Gly Asn Asp Lys Asn Gly

100 105 110

Lys Glu Glu Val Ile Lys Arg Lys Ile Pro Tyr Ile Leu Lys Arg Gln

115 120 125

Leu Tyr Glu Asn Lys Pro Arg Arg Pro Tyr Ile Leu Lys Arg Asp Ser

130 135 140

Tyr Tyr Tyr

145

<210> 2

<211> 125

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

Ser Asp Ser Glu Glu Glu Met Lys Ala Leu Glu Ala Asp Phe Leu Thr

1 5 10 15

Asn Met His Thr Ser Lys Ile Ser Lys Ala His Val Pro Ser Trp Lys

20 25 30

Met Thr Leu Leu Asn Val Cys Ser Leu Val Asn Asn Leu Asn Ser Pro

35 40 45

Ala Glu Glu Thr Gly Glu Val His Glu Glu Glu Leu Val Ala Arg Arg

50 55 60

Lys Leu Pro Thr Ala Leu Asp Gly Phe Ser Leu Glu Ala Met Leu Thr

65 70 75 80

Ile Tyr Gln Leu His Lys Ile Cys His Ser Arg Ala Phe Gln His Trp

85 90 95

Glu Leu Ile Gln Glu Asp Ile Leu Asp Thr Gly Asn Asp Lys Asn Gly

100 105 110

Lys Glu Glu Val Ile Lys Arg Lys Ile Pro Tyr Ile Leu

115 120 125

<210> 3

<211> 6

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Lys Ile Pro Tyr Ile Leu

1 5

<210> 4

<211> 13

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 4

Gln Leu Tyr Glu Asn Lys Pro Arg Arg Pro Tyr Ile Leu

1 5 10

<210> 5

<211> 117

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 5

Ser Asp Ser Glu Glu Glu Met Lys Ala Leu Glu Ala Asp Phe Leu Thr

1 5 10 15

Asn Met His Thr Ser Lys Ile Ser Lys Ala His Val Pro Ser Trp Lys

20 25 30

Met Thr Leu Leu Asn Val Cys Ser Leu Val Asn Asn Leu Asn Ser Pro

35 40 45

Ala Glu Glu Thr Gly Glu Val His Glu Glu Glu Leu Val Ala Arg Arg

50 55 60

Lys Leu Pro Thr Ala Leu Asp Gly Phe Ser Leu Glu Ala Met Leu Thr

65 70 75 80

Ile Tyr Gln Leu His Lys Ile Cys His Ser Arg Ala Phe Gln His Trp

85 90 95

Glu Leu Ile Gln Glu Asp Ile Leu Asp Thr Gly Asn Asp Lys Asn Gly

100 105 110

Lys Glu Glu Val Ile

115

<210> 6

<211> 132

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 6

Ser Asp Ser Glu Glu Glu Met Lys Ala Leu Glu Ala Asp Phe Leu Thr

1 5 10 15

Asn Met His Thr Ser Lys Ile Ser Lys Ala His Val Pro Ser Trp Lys

20 25 30

Met Thr Leu Leu Asn Val Cys Ser Leu Val Asn Asn Leu Asn Ser Pro

35 40 45

Ala Glu Glu Thr Gly Glu Val His Glu Glu Glu Leu Val Ala Arg Arg

50 55 60

Lys Leu Pro Thr Ala Leu Asp Gly Phe Ser Leu Glu Ala Met Leu Thr

65 70 75 80

Ile Tyr Gln Leu His Lys Ile Cys His Ser Arg Ala Phe Gln His Trp

85 90 95

Glu Leu Ile Gln Glu Asp Ile Leu Asp Thr Gly Asn Asp Lys Asn Gly

100 105 110

Lys Glu Glu Val Ile Lys Arg Lys Ile Pro Tyr Ile Leu Lys Arg Gln

115 120 125

Leu Tyr Glu Asn

130

<210> 7

<211> 140

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 7

Ser Asp Ser Glu Glu Glu Met Lys Ala Leu Glu Ala Asp Phe Leu Thr

1 5 10 15

Asn Met His Thr Ser Lys Ile Ser Lys Ala His Val Pro Ser Trp Lys

20 25 30

Met Thr Leu Leu Asn Val Cys Ser Leu Val Asn Asn Leu Asn Ser Pro

35 40 45

Ala Glu Glu Thr Gly Glu Val His Glu Glu Glu Leu Val Ala Arg Arg

50 55 60

Lys Leu Pro Thr Ala Leu Asp Gly Phe Ser Leu Glu Ala Met Leu Thr

65 70 75 80

Ile Tyr Gln Leu His Lys Ile Cys His Ser Arg Ala Phe Gln His Trp

85 90 95

Glu Leu Ile Gln Glu Asp Ile Leu Asp Thr Gly Asn Asp Lys Asn Gly

100 105 110

Lys Glu Glu Val Ile Lys Arg Lys Ile Pro Tyr Ile Leu Lys Arg Gln

115 120 125

Leu Tyr Glu Asn Lys Pro Arg Arg Pro Tyr Ile Leu

130 135 140

<210> 8

<211> 21

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 8

Lys Ile Pro Tyr Ile Leu Lys Arg Gln Leu Tyr Glu Asn Lys Pro Arg

1 5 10 15

Arg Pro Tyr Ile Leu

20

<210> 9

<211> 28

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 9

Lys Ile Pro Tyr Ile Leu Lys Arg Gln Leu Tyr Glu Asn Lys Pro Arg

1 5 10 15

Arg Pro Tyr Ile Leu Lys Arg Asp Ser Tyr Tyr Tyr

20 25

<210> 10

<211> 20

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 10

Gln Leu Tyr Glu Asn Lys Pro Arg Arg Pro Tyr Ile Leu Lys Arg Asp

1 5 10 15

Ser Tyr Tyr Tyr

20

<210> 11

<211> 23

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 11

His Cys Ser Asp Ser Glu Glu Glu Met Lys Ala Leu Glu Ala Asp Phe

1 5 10 15

Leu Thr Asn Met His Asn His

20

<210> 12

<211> 23

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 12

His Cys Asn Leu Asn Ser Pro Ala Glu Glu Thr Gly Glu Val His Glu

1 5 10 15

Glu Glu Leu Val Ala Asn His

20

Claims

1.结合于原神经降压素1-117的结合剂在制备通过包括以下步骤的方法测定受试者的脂肪加工活性和/或预测受试者的肥胖风险的试剂、试剂盒或装置中的用途：

·测定从所述受试者获得的体液中原神经降压素1-117的水平；以及

·将所述原神经降压素1-117的水平与所述受试者的脂肪加工活性和/或肥胖发生风险关联，其中提高的水平指示提高的脂肪加工活性和/或预测提高的肥胖风险，

其中受试者在从所述受试者采集体液样品时不肥胖；所述体液选自血液、血清和血浆；所述脂肪加工活性是指脂肪在人体中的吸收、代谢和/或储存的能力，并且与身体摄取脂肪的能力同义或与储存被摄取并且转化的脂肪的能力同义。

2.根据权利要求1所述的用途，其中通过免疫分析测定从所述受试者获得的体液中原神经降压素1-117的水平。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述受试者是非前期糖尿病受试者。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述受试者是非IFG受试者。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中测定原神经降压素1-117的空腹水平。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述受试者未患糖尿病，空腹全血葡萄糖小于6.1mmol/l但大于5.4mmol/l。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述受试者未患癌症。

8.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中在从所述受试者采集所述体液样品时所述受试者无急性心血管事件诊断史，其中所述心血管事件选自心肌梗塞、中风、急性心力衰竭和与心肌梗塞、中风或急性心力衰竭有关的心血管性死亡。

9.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述受试者未患代谢综合征。

10.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述受试者是空腹全血葡萄糖小于5.4mmol/l的受试者。

11.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中肥胖风险与罹患糖尿病和/或代谢综合征的风险无关。

12.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中另外测定至少一个选自如下的临床参数：年龄、性别、收缩压、舒张压、抗高血压治疗(AHT)、腰围、腰臀比、当前的吸烟者、糖尿病遗传性以及以前的心血管疾病(CVD)。

13.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中执行所述方法超过一次以监测肥胖发生风险。

14.根据权利要求13所述的用途，其中执行所述监测以评估所述受试者对所采取的预防性和/或治疗性措施的响应。

15.根据权利要求13所述的用途，其中执行所述监测以将所述受试者分层到风险组中。

16.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述提高的水平是指高于某个阈值水平的水平。