CN107261126A - 酶组合物及其用于创伤愈合的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于创伤愈合的组合物和使用该组合物的方法。该组合物包含一种或多种消化酶，例如，一种或多种蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。该组合物可以被配制为局部药物组合物，并且可用于在不存在瘢痕形成的情况下通过刺激表皮细胞而快速愈合。该组合物可沉积短期纤维化并帮助防止创伤重新裂开。该组合物可改善白细胞的募集，从而通过酶的抗生效应诱导或增强生长因子和免疫系统的激活。该组合物可增强超出正常生理学修复过程之外的表皮完整性。该组合物的施用可导致用酶治疗的创伤区域上更强的毛发再生长以及减少的脱发。该组合物的施用可以不引起变态反应并且不引起生物损伤或烧伤。

Description

酶组合物及其用于创伤愈合的用途

本申请是申请号为201380018617.X、申请日为2013年2月1日、发明名称为“酶组合物及其用于创伤愈合的用途”的中国专利申请的分案申请。

交叉引用

本申请要求于2012年2月2日提交的美国临时申请No.61/594,015的权益，该临时申请通过引用整体并入本文。

背景技术

组织中的创伤愈合是一个复杂的修复过程。如果创伤没有以有序或及时的顺序愈合，或者如果愈合过程没有产生结构完整性，则认为该创伤是慢性的。尽管在重组生长因子和生物工程皮肤方面取得了进展，但是多达50％的已存在超过一年的慢性创伤对于治疗仍具有抗性。

皮肤溃疡可能是最常见的慢性创伤类型。这些创伤可因多种因素而产生或延续，这些因素包括血管功能不全(静脉的或动脉的)、长期炎症、压迫性坏死、物理因素、感染和癌症。然而，70％的皮肤创伤起因于压力性溃疡、糖尿病足溃疡和静脉性溃疡。通常，向创伤区域施加诸如莫匹罗星、甲硝唑、多粘菌素B、新孢霉素(Neosporin)或杆菌肽这样的抗生素，以避免在其存在时可进一步恶化病况的细菌感染。然而，这种做法可能能够清除细菌感染，但不一定能导致创伤的愈合。此外，这些化学合成的药物常常对使用者造成耐受性或副作用。慢性创伤及其治疗在所需医护的成本、时间及关注方面是医疗保健系统的巨大负担。生产力的损失以及生活质量的下降是不可估量的。

在正常情况下，急性创伤愈合的过程可分为三个阶段。最初的炎症阶段，而后是强健组织重塑和增生(增生阶段)，之后为成熟阶段，其中相继发生上皮重新形成、皮肤血管生成和创伤闭合。上皮重新形成涉及上皮组织(主要是角质形成细胞)的迁移和增殖。血管生成是从已有血管生长成新血管，并受包括生长因子多肽在内的多种可溶性细胞因子以及细胞-细胞和细胞-基质相互作用的调节。慢性创伤表现出不同于正常急性创伤的愈合特征，因为它们通常在较长的时间内保持发炎状态。最常在患有糖尿病、静脉瘀滞疾病的人以及难以行动的患者中观察到无法愈合的创伤。

发明背景中的任何内容均不应理解为对现有技术的承认。

发明内容

本发明涉及使用药物组合物对创伤的治疗，该药物组合物包含一种或多种分解食物组分的消化酶，例如胰酶或其他消化道酶(例如，猪胰酶)或者源自植物、真菌或微生物的酶。如本文所使用的，药物组合物可用于人或兽医学适应症。因此，该药物组合物可用于人或其他哺乳动物群体(例如，猪、马、牛、绵羊、山羊、猴子、大鼠、小鼠、猫、狗、美洲驼、大熊猫、狮、虎、河马、犀牛、长颈鹿、仓鼠、沙鼠等)或禽类群体(例如，鸭、鹅、鸡、火鸡、鸵鸟等)的治疗性治疗。待治疗的哺乳动物还可以包括所有兽亚纲动物(胎生哺乳动物)和单孔类动物(卵生哺乳动物)。此外，本方法还可用于所有其他形式的脊椎动物和无脊椎动物，包括但不限于鱼、爬行动物和两栖动物。

该药物组合物可以独立使用和/或与其他创伤愈合剂联合使用。因此，本发明的一个目的是提供一种治疗禽类或哺乳动物的创伤的方法，该方法包括向禽类或哺乳动物施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含一种或多种消化酶和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述一种或多种消化酶包含一种或多种酶，例如蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、蔗糖酶、麦芽糖酶、木瓜蛋白酶、脂肪酶及其组合。在一些实施方案中，所述一种或多种消化酶包含一种或多种胰酶。所述一种或多种消化酶可源自动物来源、微生物来源、植物来源、真菌来源，或为合成制备的。在某些实施方案中，该酶为源自猪的酶。在一些实施方案中，动物来源为猪胰脏。

在另一个实施方案中，该治疗组合物可以是胰液素(pancreatin)。

在另一个实施方案中，该治疗组合物可以是固体形式的胰液素。

在另一个实施方案中，该治疗组合物可以是结晶形式的胰液素。

在一个非限制性实例中，该组合物在白凡士林基质中包含蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。在一些实施方案中，该药物组合物包含至少一种淀粉酶、含有胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的混合物以及至少一种脂肪酶。在一些实施方案中，该药物组合物包含至少一种蛋白酶和至少一种脂肪酶，且其中总蛋白酶与总脂肪酶(以USP单位计)之比为约1:1到约20:1。在一些实施方案中，该药物制剂包含单独的或组合的蛋白酶、脂肪酶和/或淀粉酶。

在一些实施方案中，该组合物可包含一种或多种其他创伤愈合剂。或者，在其他实施方案中，该组合物可与一种或多种其他创伤愈合剂一起施用。在一些实施方案中，该药物组合物是用于局部给药的剂型，其中该组合物是水溶液、乳剂、乳膏剂、软膏剂、悬浮液、凝胶剂、洗剂、脂质体悬浮液或其任意组合。

还提供了一种在具有创伤的个体中促进创伤愈合和/或减少瘢痕形成的方法，该方法包括向该个体施用包含一种或多种消化酶的药物组合物。所述创伤可以是急性创伤或慢性创伤(例如，手术创伤或外伤性创伤)。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，瘢痕形成至少减少约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，瘢痕形成至少减少约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，瘢痕形成至少减少约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，瘢痕形成至少减少约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

还提供了将所述组合物施用至创伤上的方法，其中该组合物可用于刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统激活(酶的抗生效应)、诱导更强的毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性，或其组合。

本文提供了局部创伤愈合药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种消化酶和一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含约25至约700,000USP单位的蛋白酶、约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

在一个实施方案中，所述表皮生理反应包括表皮增生、短期纤维化沉积、白细胞的募集和/或免疫系统的激活。

在一个实施方案中，治疗有效量的一种或多种消化酶基本上由蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶组成。

在一个实施方案中，该组合物不用于治疗金黄色葡萄球菌(S.aureus)或大肠杆菌(E.coli)感染。

在一个实施方案中，该组合物为胰液素。在一个实施方案中，所述一种或多种消化酶还包含选自纤维素酶、蔗糖酶、麦芽糖酶和木瓜蛋白酶的一种或多种酶。在一个实施方案中，所述一种或多种消化酶包含一种或多种胰酶。在一个实施方案中，所述一种或多种消化酶包含源自猪的酶。在一个实施方案中，所述蛋白酶包含胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶。在一个实施方案中，所述一种或多种消化酶独立地源自动物来源、微生物来源、植物来源、真菌来源，或为合成制备的。在一个实施方案中，该组合物包含至少一种淀粉酶、包含胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的蛋白酶混合物和至少一种脂肪酶。在一个实施方案中，总蛋白酶与总脂肪酶(以USP单位计)之比为约1:1至约20:1。在另一个实施方案中，蛋白酶与脂肪酶(以USP单位计)之比为约4:1至约10:1。在另一个实施方案中，蛋白酶与脂肪酶与淀粉酶之比为7:1:4。

在一个实施方案中，该组合物在约30克白凡士林的基质中包含约122,130USP单位的蛋白酶、约17,110USP单位的脂肪酶和约73,750USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，该组合物在约30克白凡士林的基质中包含约238,050USP单位的蛋白酶、约33,350USP单位的脂肪酶和约143,750USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，该组合物在约30克白凡士林的基质中包含约459,540USP单位的蛋白酶、约64,380USP单位的脂肪酶和约277,500USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，该组合物刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)、诱导更强的毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性，或其组合。

在另一个实施方案中，该组合物不会导致变态反应、瘢痕形成、生物损伤、烧伤或其组合。

该组合物可以是选自乳膏剂、洗剂、乳剂、粉剂、液体剂、凝胶剂及其任意组合的剂型。

所述一种或多种赋形剂可以是水、盐水、林格溶液、右旋糖溶液以及乙醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、聚乙二醇(PEG)、磷酸盐、醋酸盐、明胶、胶原蛋白、植物油、白凡士林或其组合的溶液。

该组合物还可以包含一种或多种合适的防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、抗微生物剂、缓冲剂或其组合。

本文提供了一种治愈受试者的创伤的方法，该方法包括向创伤上施加用于创伤愈合的局部药物组合物，该局部药物组合物包含治疗有效量的一种或多种消化酶和一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含约25至约700,000USP单位的蛋白酶、约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

一种治愈受试者的创伤的方法，包括施用用于创伤愈合的局部药物组合物，该局部药物组合物包含治疗有效量的一种或多种消化酶和任选的一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含至少约100,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约70,000USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，所述消化酶包含至少约200,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约140,000USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，所述消化酶包含至少约450,000USP单位的蛋白酶、至少约60,000USP单位的脂肪酶和至少约270,000USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，所述消化酶包含至少约122,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约73,000USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，所述消化酶包含至少约238,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约143,000USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，所述消化酶包含至少约459,000USP单位的蛋白酶、至少约64,000USP单位的脂肪酶和至少约277,000USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

在另一个实施方案中，所述组合物中蛋白酶与脂肪酶与淀粉酶之比为7:1:4。

在一个实施方案中，所述一种或多种赋形剂包含白凡士林。

在一个实施方案中，该组合物基本上由蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶组成。在一个实施方案中，该组合物包含胰液素。在一个实施方案中，该组合物中的组合物消化酶基本上由蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶组成。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，受试者在施用所述包含消化酶的组合物后表现出至少快约2倍的创伤愈合改善。

在一个实施方案中，与未用所述组合物治疗的受试者相比，受试者在施用所述组合物后表现出至少快约2倍的创伤愈合改善。

在另一个实施方案中，由施用此类组合物产生的表皮生理反应包括表皮增生、短期纤维化沉积、白细胞的募集和/或免疫系统的激活。

本文提供了一种在受试者中刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统激活(酶的抗生效应)、诱导毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性或其组合的方法，该方法包括用治疗有效量的包含一种或多种消化酶和一种或多种赋形剂的组合物接触创伤，其中所述消化酶包含约25至约700,000USP单位的蛋白酶和约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶。

本文提供了一种治愈受试者的创伤的方法，该方法包括施加用于创伤愈合的局部药物组合物，该局部药物组合物包含治疗有效量的一种或多种消化酶和任选的一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含至少约100,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约70,000USP单位的淀粉酶。

在一个实施方案中，所述消化酶包含至少约200,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约140,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，所述消化酶包含至少约450,000USP单位的蛋白酶、至少约60,000USP单位的脂肪酶和至少约270,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，所述消化酶包含至少约122,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约73,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，所述消化酶包含至少约238,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约143,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，所述消化酶包含至少约459,000USP单位的蛋白酶、至少约64,000USP单位的脂肪酶和至少约277,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

本文提供了一种通过向受试者施用基本上由一种或多种消化酶和一种或多种赋形剂组成的组合物来促进创伤愈合的方法，其中所述消化酶在白凡士林基质中包含约25至约700,000USP单位的蛋白酶和约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶，其中与施用安慰剂相比，瘢痕形成至少减少约2倍。

在本文所述的任何组合物和方法的一个方面，组合物中蛋白酶与脂肪酶与淀粉酶之比可以是7:1:4。

在一个实施方案中，所述消化酶包含至少约105,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约60,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，所述消化酶包含至少约210,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约120,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，所述消化酶包含至少约119,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约68,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，所述消化酶包含至少约224,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约132,000USP单位的淀粉酶。

援引并入

本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度等同于每个单独的出版物、专利或专利申请被特别地和单独地指出通过引用而并入。

附图说明

本发明的新特征在随附的权利要求中具体阐述。通过参考以下对在其中利用到本发明原理的示例说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好的理解，在附图中：

图1A-B图示了在动物1001A研究第8天对创伤的治疗的代表性结果。图1A提供了对照动物1001A(1)在第8天的H&E染色；擦伤的皮肤未观察到异常所见。图1B提供了中剂量动物1001A(3)在第8天的H&E染色；擦伤的皮肤观察到轻度上皮增生。

图2A-B图示了在动物1002A研究第8天对创伤的治疗的代表性结果。图2A提供了低剂量动物1002A(2)在第8天的H&E染色；擦伤的皮肤观察到最低程度的上皮增生。图2B提供了高剂量动物1002A(4)在第8天的H&E染色；擦伤的皮肤观察到轻度上皮增生。

图3A-D图示了在动物1003A研究第8天对创伤的治疗的代表性结果。图3A提供了对照动物1003A(5)在第8天的H&E染色；未擦伤的皮肤未观察到异常所见。图3B提供了低剂量动物1003A(6)在第8天的H&E染色；未擦伤的皮肤未观察到异常所见。图3C提供了中剂量动物1003A(7)在第8天的H&E染色；未擦伤的皮肤未观察到异常所见。图3D提供了高剂量动物1003A(8)在第8天的H&E染色；未擦伤的皮肤观察到轻度上皮增生。

图4A-D图示了在动物1005A研究第13天对创伤的治疗的代表性结果。图4A提供了对照动物1005A(5)在第13天的H&E染色；未擦伤的皮肤未观察到异常所见。图4B提供了低剂量动物1005A(6)在第13天的H&E染色；未擦伤的皮肤未观察到异常所见。图4C提供了中剂量动物1005A(7)在第13天的H&E染色；未擦伤的皮肤未观察到异常所见。图4D提供了高剂量动物1005A(8)在第13天的H&E染色；未擦伤的皮肤未观察到异常所见；200X分辨率。

图5A-D图示了在动物1006A研究第13天对创伤的治疗的代表性结果。图5A提供了对照动物1006A(1)在第13天的H&E染色；擦伤的皮肤未观察到异常所见。图5B提供了低剂量动物1006A(2)在第13天的H&E染色；擦伤的皮肤未观察到异常所见。图5C提供了中剂量动物1006A(1)在第13天的H&E染色；擦伤的皮肤未观察到异常所见。图5D提供了高剂量动物1006A(4)在第13天的H&E染色；未擦伤的皮肤未观察到异常所见。

具体实施方式

本发明人第一次发现本文所述的酶组合物在促进创伤愈合中是有效的。此外，该酶组合物可刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)、诱导更强的毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性，或其组合。

本文提供了一种药物组合物，其包含源自猪的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶，并且具有一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。

本文还提供了一种创伤愈合方法，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的组合物。

术语“给药”或“施用”是指将组合物或药物组合物的剂量给予受试者或患者的方法。

如本文所用的“受试者”或“患者”或“个体”是指人或非人类哺乳动物，例如，狗、猫、小鼠、大鼠、牛、羊、猪、山羊、非人灵长类或禽类(例如，鸡、火鸡、鸵鸟等)以及任何其他脊椎动物或无脊椎动物。术语“哺乳动物”以其通常的生物学含义使用。因此，其具体地包括人、牛、马、狗和猫，但也包括许多其他物种，包括但不限于美洲驼、大熊猫、狮、虎、河马、犀牛、长颈鹿、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、兔等)或灵长类动物(例如，猴子、大猩猩、黑猩猩等)以及包括兽亚纲动物和单孔类动物的所有其他形式。在一个实施方案中，待治疗的哺乳动物为人。

本文所用的“治疗”、“疗治”或“处理”是指出于治疗目的施用药物组合物。术语“治疗性处理”是指向患者施用治疗，从而导致治疗上有益的效果。

“治疗有效量”或“药学有效量”通常是足以获得期望的效果并可以根据疾病状况的性质和严重程度、受试者的性质以及组合物的效力而变化的量。该量可进一步取决于受试者的身高、体重、性别、年龄和医疗史。在一个实施方案中，治疗有效剂量或治疗有效量将足以刺激或增大上皮和/或内皮创伤愈合反应，并因此诱导或增强创伤愈合。

术语“药学上可接受的”是指可施用于哺乳动物而无异常毒性的化合物和组合物。合适的赋形剂包括但不限于水、盐水、林格溶液、右旋糖溶液，和乙醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、聚乙二醇(PEG)、磷酸盐、醋酸盐、明胶、胶原蛋白、植物油、白凡士林等或其组合的溶液。此外可包括一种或多种合适的防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、抗微生物剂和缓冲剂，例如，BHA、BHT、柠檬酸、抗坏血酸、四环素等，及其组合。此外，可包括本领域常用的众多佐剂。在文献中，例如在Merck Index,Merck&Company,Rahway,N.J中描述了这些以及其他此类组合物。例如，在Gilman等人.(Eds.)(2006)；Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics,第11版,TheMcGraw-Hill Companies中描述了对于药物组合物中包含多种组分的考虑。

如本文所用的术语“创伤愈合”是指增大、改善、增加或诱导创伤的闭合、愈合或修复。例如，如果与未治疗的创伤或用安慰剂物质处理的创伤相比，用本文所述组合物治疗的创伤的愈合时间缩短了约5％、约10％、约20％、约25％、约30％、约40％、约50％、约75％或更多，则认为促进了创伤愈合。相反，瘢痕形成的程度可用于确定是否促进了创伤愈合。如本文所述的创伤愈合还包括刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)、诱导更强的毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性，或其组合。

创伤可以是在哺乳动物的任何部位发现的内部创伤或外部创伤。创伤是一种类型的物理创伤，其中皮肤或组织的完整性由于例如外力、不良健康状况、衰老、暴露于阳光、热或化学反应或由于受到内部生理过程的损害而遭到破坏。如果组织外层受损，则认为该创伤是开放性创伤。

创伤还可以由诸如开放心脏手术、器官移植、截肢术和假肢植入(如关节和髋关节置换)等外科手术引起。

创伤可以是开放性创伤或闭合性创伤。

开放性创伤是指皮肤破损的创伤。开放性创伤包括，例如，切口(即，皮肤由例如切割工具(例如，小刀、剃刀等)损伤的创伤)、撕裂伤(即，皮肤通常由钝器或不锋利的工具损伤的创伤)、擦伤(例如，通常为刮掉了皮肤最上层的浅创伤)、刺伤(通常是由刺穿皮肤的物体如钉或针造成的)、贯通性创伤(例如，由诸如小刀等物体造成的)以及枪伤。

闭合性创伤通常是皮肤未破损的创伤。闭合性创伤包括例如由损害皮下组织的钝力外伤导致的挫伤(或撞伤)、由血管损伤(其进而导致血液在皮肤下汇集)导致的血肿、由长期施加的较大力或极大力导致的挤压伤、急性和慢性创伤。

创伤的非限制性实例为：烧伤是由于暴露于热、电、辐射(例如，晒伤和激光手术)或腐蚀性化学品导致的损伤，由于衰老或环境导致的皮肤创伤(这包括例如开裂、干性皮肤、皮肤粗糙等)，由于损伤组织的外力导致的创伤，溃疡(皮肤或黏膜表面上的病变)。糖尿病中的创伤通常为由神经损伤导致的麻木(糖尿病神经病变)以及腿部和足部的低血流量而造成的足损伤。最严重的损伤是足溃疡。糖尿病足溃疡具有非常高的感染风险，并且有时是无法治愈的。无法治愈的足溃疡是糖尿病、卧位创伤、褥疮(压疮)(即，对身体任何部分尤其是骨或软骨区域上的部分的未减轻压力所导致的损伤)患者的截肢的常见原因。

在一个实施方案中，上文所述的药物组合物用于创伤愈合、刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)、诱导更强的毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性，或其组合。

本文所述的组合物不引起变态反应、瘢痕形成、生物损伤、烧伤或其组合。

在一个实施方案中，该组合物用于治疗急性或慢性创伤。

急性创伤是由对完好皮肤的外部损伤导致的，并且可根据导致创伤的物体而分为不同的类型：例如，切口或切伤、撕裂伤、擦伤和擦破、烧伤、由刺穿皮肤的物体如钉或针导致的刺伤、由诸如插入身体的刀等物体导致的贯通伤、由击入或穿过身体的子弹或类似射弹导致的枪伤。急性创伤还可以是闭合性创伤，如挫伤或撞伤、血肿、由长期施加的较大力或极大力导致的挤压伤。其他急性创伤起因于皮肤疾病如银屑病、痤疮和湿疹。

慢性创伤最常见的是由与最终损害真皮或上皮组织完整性的素因性状况相关的内源性机制所导致的。常见的慢性创伤为：静脉性馈疡，其通常发生在腿部并且主要影响老年人；糖尿病性溃疡，其为慢性创伤的另一主要病因；压力性溃疡，其通常发生在患有诸如约束身体部分运动的麻痹等病况的患者中，该身体部分经常承受压力，如足跟、肩胛骨和骶骨；角膜溃疡，最常见的是由细菌、病毒、真菌或变形虫感染引起的；以及消化道溃疡。所有慢性创伤均愈合缓慢并且以不可预知的方式愈合。

因此，本文所述的组合物可用于激活血管生成，从而促进创伤的愈合。

该组合物可以是水溶液、乳剂、乳膏、软膏、洗剂、悬浮液、凝胶、脂质体悬浮液等。用于局部给药的组合物的其他非限制性实例包括但不限于洗剂、药膏、凝胶、乳膏、香膏、酊剂、糊剂、酏剂、贴剂、喷雾剂、洗眼剂、滴剂、悬浮液、分散体、水凝胶、软膏、乳剂或粉剂。其他局部制剂包括气雾剂、绷带、敷料材料、藻酸盐敷料和其他创伤敷料。

组合物

如本文所述使用的组合物可包含一种或多种消化酶。不受理论约束，据认为该组合物中的消化酶可治愈创伤、刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)、诱导更强的毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性，或其组合。

本文描述的消化酶是可以分解食物的一种或多种组分(例如，蛋白、脂肪、碳水化合物)的酶。该消化酶可以是动物来源的酶(例如，胰腺或其他消化道酶)，或植物、真菌或微生物来源的酶，或者可以是合成制备的。许多消化酶是可商购获得的，或者可通过本领域普通技术人员公知的方法从其他来源分离及纯化。也可使用标准试验评估该酶的酶活性。

所述消化酶可以以酶类型的任意组合和酶来源的任意组合而使用。在一些实施方案中，所述一种或多种消化酶包含一种或多种选自下组的酶：蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、蔗糖酶、麦芽糖酶、木瓜蛋白酶(例如来自木瓜)、菠萝蛋白酶(例如来自菠萝)、水解酶和脂肪酶。在一些实施方案中，所述一种或多种消化酶包含一种或多种胰酶。在一些实施方案中，所述组合物包含一种或多种蛋白酶、一种或多种脂肪酶和一种或多种淀粉酶。在一些实施方案中，所述一种或多种蛋白酶包含胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶。在一些实施方案中，本文描述的组合物由或者基本上由一种或多种消化酶组成。

在某些实施方案中，所述组合物可包含至少一种淀粉酶、至少两种蛋白酶和至少一种脂肪酶。在某些实施方案中，所述组合物还可包含一种或多种水解酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜(papaya)、纤维素酶、胰液素、蔗糖酶和麦芽糖酶。

如所指出的，所述一种或多种消化酶可以源自于动物来源。在一些实施方案中，该动物来源是猪，例如猪胰。猪胰酶提取物和制剂是本领域普通技术人员已知的，并且可以商购获得或可使用已知方法制备。例如，胰酶组合物可从Scientific Protein Laboratories购买(称为PEC)。例如，可以通过生产和/或加工方法或通过向组合物中选择性加入外源性酶、活化剂或抑制剂来调节胰酶组合物或本文的任何组合物，以改变其中所包含的一种或多种消化酶的量，例如脂肪酶、淀粉酶或蛋白酶含量。

欲在本文所述的组合物和方法中使用的消化酶包括，例如，胰酶。存在两种类型的胰酶，它们具有美国药典(U.S.P.)命名：胰液素和胰脂肪酶。胰液素是一种含有酶(主要是淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶)的物质，获自猪Sus scrofa Linne var.domesticus Gray(猪科(Suidae))或牛Bos Taurus Linne(牛科(Bocidae))的胰脏。每mg胰液素含有不少于25USP单位的淀粉酶活性、不少于2USP单位的脂肪酶活性和不少于25USP的蛋白酶活性。在下文的实施例1中提供了有关胰液素的更多信息。与之相比，胰脂肪酶USP是指一种奶油色的无定形粉末，具有微弱的、特有的(肉样的)但不讨厌的气味，其含有不少于24USP单位/mg的量的脂肪酶；不少于100USP单位/mg的量的蛋白酶；和不少于100USP单位/mg的量的淀粉酶；具有不超过5％的脂肪和不超过5％的干燥损失。

在某些情况下，可能希望蛋白酶活性相对高于脂肪酶。因此，在一些实施方案中，所述组合物包含至少一种蛋白酶和至少一种脂肪酶，其中总蛋白酶与总脂肪酶(以USP单位计)之比为约1:1到约20:1，包括约1:1、约2:1、约3:1、约4:1、约5:1、约6:1、约7:1、约8:1、约9:1、约10:1、约11:1、约12:1、约13:1、约14:1、约15:1、约16:1、约17:1、约18:1、约19:1和约20:1，以及其间的所有数值。在一些实施方案中，蛋白酶与脂肪酶之比为约4:1到约10:1，包括约4:1、约5:1、约6:1、约7:1、约8:1、约9:1和约10:1，以及其间的所有数值。

在某些情况下，改变给定组合物中的特定酶活性的量可能是有用的。可通过技术人员已知的多种方法，例如通过增大特定酶的量，或通过调节组合物的组分，例如，通过使用稳定剂、抑制剂和活化剂，来调节一种或多种消化酶的活性。在一些实施方案中，本文描述的组合物包含一种或多种蛋白酶，该蛋白酶的活性为每mg组合物约0.05到约400USP单位，或其间的任意值(例如，每mg约0.1、约0.2、约0.25、约0.5、约1、约2、约5、约10、约15、约20、约25、约30、约35、约40、约45、约50、约55、约60、约65、约75、100、约150、约200、约250、约300、约350USP单位)。在一些实施方案中，本文描述的组合物包含一种或多种脂肪酶，该脂肪酶的活性为每mg组合物约0.005到约80单位，或其间的任意值(例如，每mg约0.01、约0.02、约0.025、约0.03、约0.04、约0.05、约0.06、约0.08、约0.1、约0.2、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约12、约14、约16、约18、约20、约22、约25、约28、约30、约35、约38、约40、约45、约48、约50、约52、约55、约58、约60、约63、约66、约68、约70、约72、约75、约78或约80USP单位)。在一些实施方案中，本文描述的组合物包含一种或多种淀粉酶，该淀粉酶的活性为每mg组合物约0.05到约500USP单位，或其间的任意值(例如，每mg约0.1、约0.2、约0.25、约0.5、约1、约2、约5、约10、约15、约20、约25、约30、约35、约40、约45、约50、约55、约60、约65、约75、约100、约150、约200、约250、约300、约350、约400或约450USP单位)。在一些实施方案中，本文描述的组合物包含上述活性范围的一种或多种蛋白酶、上述活性范围的一种或多种脂肪酶和上述活性范围的一种或多种淀粉酶。一个示例性的实施方案包括活性在约150-250USP单位/mg范围内的一种或多种蛋白酶、活性在约20-40USP单位/mg范围内的一种或多种脂肪酶和活性在约200-300USP单位/mg范围内的一种或多种淀粉酶。

在一些实施方案中，可以配制组合物以稳定一种或多种消化酶，例如，保护所述酶的酶活性。稳定化技术可限制或阻止组合物中一种或多种酶的自动降解并帮助维持酶活性、延长保质期并有助于组合物活性对温度、湿度和储藏条件变化的耐受性。在其他应用中，可以利用赋形剂、pH、酶抑制剂等的变化来帮助酶稳定。适当的稳定化技术取决于组合物的预定应用、组合物的形式、预定的递送位置/活性及其他因素，并且可由本领域技术人员确定。

某些有用的酶活性稳定剂包括在溶液中提供游离钙的来源的化合物，例如钙盐；烷基醇或支链醇类，例如乙醇和异丙醇；烷醇胺类，例如三乙醇胺；酸类，例如有机酸类；以及石油馏出物的混合物。

在某些实施方案中，酶活性稳定剂可以是选自下组的组合物：(1)已知可有效稳定液体水溶液中的酶的组合物，包括酶稳定化合物和系统，(2)选择的“胶束抑制剂”，以及(1)和(2)的混合物。在一些实施方案中，活性稳定剂是适当浓度的硼阴离子。在一些情况下，活性稳定剂在多元醇中被溶剂化，并且可以与形成酶稳定系统的酶稳定增效剂或辅剂组合。优选的“胶束抑制剂”包括已知改变以及抑制胶束形成的物质，并且可选自水可混溶的溶剂，例如C₁-C₆烷醇类、C₁-C₆二醇类、C₂-C₂₄烷撑二醇醚类、烷撑二醇烷基醚类及其混合物。特别优选的胶束抑制剂是改变胶束形成的二(丙二醇)甲醚(“DPM”)及其类似物。

“酶稳定系统”的一个例子是硼化合物(例如硼酸)，其在过去已经单独使用，或者与选定的其他辅剂和/或增效剂(例如多官能氨基化合物、抗氧化剂等)组合使用，以保护储存中的和多种产品中的蛋白水解酶及其他酶。

本文描述的组合物中含有的其他添加剂可以由本领域技术人员确定，并且将基于许多特征，包括预定应用，例如人类应用还是兽医应用；所需的释放曲线；所需的药代动力学；安全性；稳定性；和物理特性(气味、颜色、味道、倾倒性、气雾化)。适当的制剂成分、赋形剂、粘合剂、填充剂、调味剂、着色剂等可通过本领域技术人员已知的方法来确定和评价。

本文提供了一种用于创伤愈合的组合物，其包含：在白凡士林基质中的约25至700,000USP单位的蛋白酶和2至100,000USP单位的脂肪酶和25至400,000USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，本文提供了一种用于创伤愈合的组合物，其包含：在30克白凡士林基质中的122,130USP单位的蛋白酶、17,110USP单位的脂肪酶和73,750USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，本文提供了一种用于创伤愈合的组合物，其包含：在30克白凡士林基质中的238,050USP单位的蛋白酶、33,350USP单位的脂肪酶和143,750USP单位的淀粉酶。

在另一个实施方案中，本文提供了一种用于创伤愈合的组合物，其包含：在30克白凡士林基质中的459,540USP单位的蛋白酶、64,380USP单位的脂肪酶和277,500USP单位的淀粉酶。

用于人类或兽医用途的组合物

本文描述的组合物可以配制成药物组合物，例如，可以包括用一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂配制的如前所述的组合物。该药物组合物可用于人和其他动物如哺乳动物和禽类的创伤愈合。

本文的药物组合物的施用可以是局部的。

在药物组合物中，有效浓度的一种或多种消化酶与合适的药用赋形剂或载体混合。该组合物中消化酶的浓度对于在施用后递送一定的量是有效的，该量在创伤愈合和刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)、诱导更强的毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性或其组合中有用的。在一个非限制性实例中，组合物在白凡士林基质中包含蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。

消化酶以一定的量包含在药学上可接受的载体中，该量足以对所治疗的患者发挥治疗上有效的作用，而没有不良副作用。治疗上有效的浓度可通过在体外和体内测试消化酶，然后由其推算到人用剂量来根据经验确定。

药物组合物中的消化酶浓度取决于酶的吸收、失活和排泄速率、酶的物理化学特性、剂量日程表、剂型和施用量以及本领域技术人员已知的其他因素。

药物组合物可立刻施用，或者可以分成若干较小的剂量以便分时段施用。应理解，治疗的精确剂量和持续时间随创伤而变化，并且可以通过使用已知的测试方案或通过从体内或体外试验数据外推来根据经验确定。需注意，浓度和剂量值也可以随创伤的严重程度而变化。还应理解，对于任何特定受试者而言，应该随时间的推移根据个人需要和施用组合物或监督组合物施用的人的专业判断来调整具体的剂量方案，并且应理解，本文所列的浓度范围仅是示例性的而非意在限制所请求保护的组合物的范围或实践。在一些实施方案中，提供了适合于精确剂量的单次给药或多剂量给药的单位剂型形式的组合物。

一旦混合或加入消化酶，所得混合物就可以是适合于局部给药的形式。所得混合物的形式取决于许多因素，包括预定的给药方式和消化酶在选定的载体或介质中的溶解度。

所述组合物可以单独施用，或更普遍地，与常规药物载体、赋形剂等组合施用。术语“赋形剂”在本文中用来描述除了在本文所述的和本领域已知的组合物中使用的化合物(酶)以外的任何成分。

对于本领域技术人员来说，制备此类剂型的方法是已知的或将是显而易见的；例如，参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版(LippincottWilliams&Wilkins.2005)。

用于创伤愈合的适当剂量取决于患者(物种、年龄、体重、健康状态)、创伤的严重程度、制剂的类型以及本领域普通技术人员已知的其他因素。应注意，浓度和剂量值可随着创伤的严重程度而改变。还应理解，对于任何特定患者而言，应该随时间的推移根据个人需要和施用组合物或监督组合物施用的人的专业判断来调整具体的剂量方案。

在一些实施方案中，每剂药物组合物包含：约10,000至约400,000USP单位的淀粉酶，包括约10,000、约15,000、约20,000、约25,000、约30,000、约35,000、约40,000、约45,000、约50,000、约55,000、约60,000、约70,000、约75,000、约80,000、约85,000、约90,000、约100,000、约150,000、约200,000、约250,000、约300,000、约350,000和约400,000USP单位以及其间的所有值；约10,000至约700,000USP单位的蛋白酶，包括约10,000、约15,000、约20,000、约25,000、约30,000、约35,000、约40,000、约45,000、约50,000、约55,000、约60,000、约65,000、约70,000、约75,000、约80,000、约85,000、约90,000、约95,000、约100,000、约105,000、约110,000、约115,000、约120,000、约125,000、约130,000、约135,000、约140,000、约145,000、约150,000、约155,000、约160,000、约165,000、约170,000、约200,000、约250,000、约300,000、约350,000、约400,000、约450,000、约500,000、约550,000、约600,000、约650,000和约700,000USP单位以及其间的所有值；和约4,000至约100,000USP单位的脂肪酶，包括4,000、5,000、10,000、15,000、20,000、25,000、30,000、35,000、45,000、55,000、60,000、70,000、80,000、90,000、95,000和100,000USP单位以及其间的所有值。药物组合物可以包含以下的一种或多种：约2至约20mg的胰凝乳蛋白酶，包括约2.0、约2.5、约3.0、约3.5、约4.0、约4.5、约5.0、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19和约20mg以及其间的所有值；约30至约100mg的胰蛋白酶，包括约30、约35、约40、约45、约50、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95和约100mg，包括其间的所有值；约3,000至约10,000USP单位的木瓜蛋白酶，包括约3,000、约4,000、约5,000、约6,000、约7,000、约8,000、约9,000和约10,000USP，以及其间的所有值；和约30至约60mg的木瓜，包括约30、约35、约40、约45、约50、约55和约60mg，以及其间的所有值。

关于组合物的特定剂型的其他信息提供于下。

可以如针对局部(local)给药所述制备局部(topical)混合物。所得混合物可以是溶液、悬浮液、乳剂等，并且可以配制成乳膏剂、凝胶剂、软膏剂、乳剂、粉剂、溶液、酏剂、洗剂、悬浮液、酊剂、糊剂、泡沫、气雾剂、冲洗剂、喷雾剂、栓剂、绷带、皮肤贴剂或适于局部给药的任何其他制剂。

消化酶可配制用于局部应用，如以凝胶剂、乳膏剂和洗剂的形式局部应用于皮肤和黏膜。局部给药预期用于透皮递送，并且还用于向眼睛或黏膜给药。

可以借助于任何适当的粉末基质例如滑石、乳糖、淀粉等形成粉剂。溶液可以用水性或非水性基质配制，也可包含一种或多种分散剂、悬浮剂、增溶剂等。使用分子量和浓度水平能有效形成消化酶的水性或非水性溶液或悬浮液的粘稠溶液或胶态凝胶的聚合物制备局部凝胶。可以制备局部凝胶的聚合物包括聚磷酸酯类、聚乙二醇类、高分子量聚乳酸类、羟丙基纤维素类、壳聚糖、聚苯乙烯磺酸盐类等。

例如，通过在水性或油性基质中加入适当的增稠剂、胶凝剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、悬浮剂或稠度调节剂等来配制软膏剂、乳膏剂和洗剂。基质包括水、醇或油，例如液体石蜡、矿物油或植物油，例如花生油或蓖麻油。可根据基质的性质使用的增稠剂包括软石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇、丙二醇、聚乙二醇类、聚磷酸酯类、聚乳酸类、羟乙基纤维素类、羟基丙基纤维素类、纤维素胶、丙烯酸酯聚合物类、亲水性胶凝剂、壳聚糖、聚苯乙烯磺酸盐、矿脂、羊毛脂、氢化羊毛脂、蜂蜡等。

软膏剂、糊剂、乳膏剂、凝胶剂和洗剂还可包含赋形剂，例如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨润土、硅酸、滑石、氧化锌及其混合物。粉剂和喷雾剂还可包含赋形剂，例如硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。溶液、悬浮液或分散体可以通过常规用于制备局部施用气雾剂的任何已知方法转变为气雾剂或喷雾剂。通常，这样的方法包括加压或提供通常用惰性载气给溶液、悬浮液或分散体的容器加压的手段，并使压缩气体通过小孔。喷雾剂和气雾剂还可以含有常用推进剂，例如，氯氟烃或挥发性未取代烃，例如丁烷和丙烷。

在本文所述组合物中使用的赋形剂包括在可用于治疗目的的组合物中使用的任何赋形剂。一种或多种赋形剂可包含，例如，水、盐水、林格溶液、右旋糖、乙醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、聚乙二醇(PEG)、磷酸盐、醋酸盐、明胶、胶原蛋白、植物油、白凡士林或其组合。

其他赋形剂包括但不限于以可达制剂总重量的约10wt％的水平存在的促进皮肤吸收的化合物，例如二甲亚砜(DMSO)、脂肪酸偏甘油酯等。脂肪酸偏甘油酯的例子包括但不限于可从SASOL North America,Inc.,Houston,Texas获得的IMWITOR 742和IMWITOR 308。局部制剂还可以任选地包含改善美容可接受性的非活性成分，包括但不限于湿润剂、表面活性剂、香料、着色剂、润滑剂、填充剂等。

在一些情况下，组合物还可以进一步包含一种或多种合适的防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、抗微生物剂、缓冲剂或其组合。

合适的防腐剂包括但不限于酸、醇、二醇、对羟基苯甲酸酯、含有四价氮的化合物、异噻唑啉酮、释放乙醛的化合物和卤代化合物。在一个实施方案中，本文使用的防腐剂包括但不限于咪唑烷基脲、重氮烷基脲、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯或其组合。对于本发明的目的有用的防腐剂的其他实例可见于Steinberg,D.“Frequency of Use of Preservatives 2007”.Cosmet.Toilet.117,41-44(2002)和“Preservative Encyclopedia”Cosmet.Toilet.117,80-96(2002)。

可利用多种酸、碱和缓冲液来调节和/或维持在本发明方法中有用的组合物的pH。可用于调节和/或维持pH的材料的实例包括但不限于磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；氨、碳酸钠、氢氧化钠、三乙醇胺、盐酸、磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸等。

本文中使用的合适的抗氧化剂包括但不限于抗坏血酸和甲硫氨酸。

这些成分以安全有效的量存在于局部美容可接受的载体中，其可以是多种不同的形式。

药学上可接受的局部载体以重量计通常总共占上述步骤一的组合物的约0.1％至约95％、约70％至约91％或约80％至约90％。

本文使用的合适的表面活性剂包括但不限于(例如，20或80)、聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)、(例如，F68)、聚乙二醇(PEG)等。

可通过撒布粉末、喷射气雾剂或通过用患者或保健提供者的指尖或其他常规施用工具如药签或药擦将软膏剂、乳膏剂、洗剂、溶液或凝胶薄膜涂抹在皮肤的所需区域上来直接施用局部组合物。产品可以首先施加到皮肤上然后用指尖或敷药器涂抹，或施加到指尖上然后涂抹在皮肤上。组合物也可以任选地首先涂在局部施药工具(例如绷带、药签、潮湿的织造或非织造药擦等)的表面上，然后将其施加于皮肤的部分，以接受该组合物。

可利用在使用的成分、其量以及制备方法方面对于本领域普通技术人员来说基本上为常规手段的基础制剂来制备局部组合物，所有这些方面不需要进一步描述。可基于除良好的皮肤相容性之外还具有迄今尚未认识到的创伤愈合活性的乳剂制剂将局部组合物制备成乳膏剂或洗剂。

供本文所述使用的组合物不限于局部乳膏剂或洗剂制剂。局部制剂还可配制为粉剂、喷雾剂、洗剂、乳膏剂、水性和非水性溶液、液体、油剂、凝胶剂、软膏剂、糊剂、药膏、乳剂和悬浮液；这样的组合物将含有一定量的消化酶和任选的一种或多种其他创伤愈合剂，总浓度为约0.125％至约25％(重量)或更多，从而再次意识到最优剂量可能仅相差0.05％(重量)，使得代表性乳膏剂和洗剂实施方案将包括在该范围内的每个0.05％(重量)浓度的增量。

局部组合物可用于治疗皮肤感染和创伤感染，如表面创伤和贯通性创伤。适于治疗的创伤包括急性和慢性创伤，例如，皮肤擦伤、皮肤或表面切伤、褥疮、烧伤和手术创伤。

本文同样感兴趣的还有冻干粉，可将其进行重构以作为溶液、乳剂和其他混合物进行给药。还可将它们重构并配制为凝胶剂。

通过将本文所提供的消化酶溶解在合适的溶剂中来制备无菌冻干粉。该溶剂可含有改善稳定性的赋形剂或该粉剂或由该粉剂制备的重构溶液的其他药理成分。可使用的赋形剂包括但不限于右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他合适的试剂。溶剂还可含有缓冲液，如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾或本领域技术人员已知的(在一个实施方案中)处于大约中性pH的其他此类缓冲液。在对溶液的后续无菌过滤后于本领域技术人员已知的标准条件下进行冻干提供了期望的制剂。在一个实施方案中，将所得溶液分配至小瓶中进行冻干。每个小瓶将含有单剂量或多剂量的消化酶。冻干粉可储存在合适的条件下，如约4℃至室温下。

为了重构，将冻干粉加至无菌水或其他合适的载体中。精确的量取决于所选择的消化酶。这样的量可根据经验进行确定。

联合治疗

本文所述的组合物可进一步包含一种或多种其他创伤愈合剂。或者，本文所述的组合物可与一种或多种其他创伤愈合剂联合使用。

这样的其他创伤愈合剂包括但不限于生长因子、细胞因子、酶和细胞外基质成分。例如，对内皮下细胞外基质的胶原酶处理联合使用酶可协同加速内皮迁移和增殖，达到高于在不存在酶的情况下进行胶原酶处理的诱导影响的水平。

在这样的组合物中还可包含实现创伤修复的药剂以增强创伤愈合过程。此类药剂包括生长因子家族的成员，如胰岛素样生长因子(IGF-1)、血小板衍生的生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子β(TGF-β)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胸腺素α1(Tα1)和血管内皮生长因子(VEGF)。在一个实施方案中，该药剂为转化生长因子β(TGF-β)或TGF-β超家族的其他成员。在另一个实施方案中，组合物还包含止血物质、生长因子、抗感染物质、止痛物质、抗炎物质或其组合。

治疗方法

本文所述的药物组合物可用于治疗任何具有急性或慢性创伤的患者。该药物组合物可以是如先前所述的任何合适的剂型(即，单剂量或多剂量)。

本文所述的药物组合物可在具有感染性创伤的患者中减少瘢痕形成并促进创伤愈合。此外，本文所述的药物组合物可用于刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)、诱导更强的毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性，或其组合。在其他实施方案中，本文所述的药物组合物可单独使用和/或与其他治疗性创伤愈合剂联合使用。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，瘢痕形成至少减少约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，瘢痕形成至少减少约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，瘢痕形成至少减少约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，瘢痕形成至少减少约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，创伤愈合至少增加约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，创伤愈合至少增加约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，创伤愈合至少增加约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，创伤愈合至少增加约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，上皮细胞被刺激至少约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，上皮细胞被刺激至少约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，上皮细胞被刺激至少约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，上皮细胞被刺激至少约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，短期纤维化沉积至少增加约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，短期纤维化沉积至少增加约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，短期纤维化沉积至少增加约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，短期纤维化沉积至少增加约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，毛发再生长至少增加约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，毛发再生长至少增加约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，毛发再生长至少增加约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，毛发再生长至少增加约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，脱发至少减少约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，脱发至少减少约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，脱发至少减少约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，脱发至少减少约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，白细胞募集至少增加约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与用安慰剂处理的受试者相比，白细胞募集至少增加约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

在一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，白细胞募集至少增加约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约7.5倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍或更多。在另一个实施方案中，与未接受本文所述组合物治疗的受试者相比，白细胞募集至少增加约2％、约3％、约4％、约5％、约7.5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。

可通过本领域普通技术人员已知的方法评估本文所述的组合物的多种活性。例如，可以使用标准酶测定法来评估酶活性。在下面的实施例中描述了其他测定法。

实施例

为了使本领域技术人员能够更好地实施本文所述的组合物和方法，出于说明目的提供以下实施例。

进行以下研究来确定在白凡士林等基质中低、中和高剂量浓度的胰酶复合物中的测试物CM-wh001的毒性和毒代动力学曲线：局部施用至兔背部的每一侧(左侧擦伤，右侧未擦伤)5天，随后是允许评估愈合和任何变化的可逆性的观察期。三(3)只动物(1001A、1002A和1003A)在最后一次治疗2天后送去尸检。剩余的3只兔(1004A、1005A和1006A)在最后一次治疗七(7)天后送去尸检。对每个测试部位进行评估。

本研究按照ITR加拿大标准操作程序(SOP)进行。

选择局部给药作为给药途径，因为这是在人类中用于治疗创伤并评估其治愈情况的治疗途径。

选择兔是因为它们是多家监管机构为此种类型研究推荐的非啮齿类物种，并且其背景数据可以获得。

本研究的方案由ITR的动物照护委员会(ACC)进行审核和评估。ACC对本方案的接受记录在ITR的文件中。本研究中使用的所有动物均根据由加拿大动物照护委员会出版的“实验动物照护及使用指南(Guide to the Care and Use of Experimental Animals)”现行版和NIH出版物“实验室动物照护及使用指南(Guide for the Care and Use ofLaboratory Animals)”中概述的原则进行照护。本报告中描述的研究没有不必要地重复先前的实验。到达ITR后，对所有动物称重并由临床兽医指定的技师进行详细的身体检查。健康状态数据并未报告，但保留在研究文件中。将每只动物单独关在配备有酌情添加水瓶的自动供水系统的不锈钢丝网底兔笼中。必要时用夹子将笼门锁适当固定。随机分组后，用颜色编码的笼牌清楚地标记每个笼子，笼牌上标明研究、组别和动物编号以及性别。每只动物在到达后用永久性记号笔在右耳内侧上进行独特标识(必要时更新)。控制动物室环境(目标范围：温度18.5±3℃，相对湿度50±20％，12小时光、12小时暗，以及每小时最少10次换气)。持续监测温度和相对湿度，记录保留在ITR。除了在到达当天之外，动物每天可以获得标准的、合格的商业兔粮(Teklad Global High Fiber Rabbit Diet#2031)(到达后第一天60g，到达后第二天120g，到达后第三天180g，之后200g)。在预处理和治疗期，定期给予动物混合有用于增强食欲的小胡萝卜和/或苜蓿的商业兔粮丸粒。

除指定程序如从笼子中取出进行给药或观察期间外，为动物提供任意的市政自来水(通过反渗透法纯化、紫外线照射并用0.2μm滤器进一步过滤)。对市政自来水(由城市采集)和来自动物室的反渗水(由ITR采集)的定期分析由Exova Canada,Pointe-Claire,Quebec,Canada进行，结果保留在ITR的文件中。可以认为，在饮食和水中没有将会干扰对研究目标的评估的已知污染物。在研究过程中，为动物提供非饮食物品(即，)作为ITR环境富集计划的一部分。

在接收动物和开始治疗之间允许有34天的驯化期以使兔适应室内环境。在开始治疗之前，使所有兔适应实验程序(即，处理)最少连续3天。

在选择合适的研究动物之前，将兔背部的适当区域(大约14cm x 20cm)剪掉接近皮肤的毛发。在开始治疗前一天对该区域再次剪毛。每个皮肤测试部位为大约6cm²(2cm x3cm)的区域，该区域位于无活跃毛发生长和既有损伤的皮肤区域上，并且尽可能在背部的高处以使动物难以摄取到测试材料。选定的给药区域用无毒性的不褪色墨点在部位的每一角标记，以便于在存活时观察和在尸检时识别。

在第1天(即，第一次治疗之前)仅左侧擦伤。在擦伤前至少15分钟，但不超过30分钟，用局部麻醉药处理每个擦伤测试部位。使用无菌手术刀片在测试部位上轻轻划动以产生网格状图案从而获得擦伤。其目的是不产生深创伤而只是轻轻切开表皮，以便使一些澄清的组织液溢出。偶尔释放少量血液，但这并不常见。注意确保所有部位和动物由一个人进行类似擦伤。

对给药区域进行重新标记，必要时剪切以允许仅进行Draize评分。在剪除皮肤测试部位时尽所有可能确保不对皮肤造成损害。

方案

每天通过用带有手套的指尖局部施用将测试(低剂量、中剂量和高剂量)和对照(无活性)制剂施用于6只雄性兔，连续施用5天。将化合物施用于兔背部的每一侧，左侧擦伤，右侧未擦伤，如表1中所示。施用于每只动物的重量/体积为0.2gm(在每一部位)。

测试制剂：

CM-wh001为高蛋白酶浓缩物，由在白凡士林基质中的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶组成，是为治疗创伤而开发的。根据其施用不会导致任何腐蚀作用的原则来选择测试制剂的稀释度。在这些稀释度下对人类完好皮肤的特设测试(ad hoc testing)(n＝4)未显示刺激证据。

低剂量：在30克白凡士林中含有122,130USP单位的蛋白酶、17,110USP单位的脂肪酶和73,750USP单位的淀粉酶。

中剂量：在30克白凡士林中含有238,050USP单位的蛋白酶、33,350USP单位的脂肪酶和143,750USP单位的淀粉酶。

高剂量：在30克白凡士林中含有459,540USP单位的蛋白酶、64,380USP单位的脂肪酶和277,500USP单位的淀粉酶。

对照制剂：

白凡士林(无色软膏)

给药日程表：

·第0天：体重测量，剃毛，及详细临床检查(DCE)；

·第1天：擦伤皮肤并施加第一治疗。给药后1小时和4小时评估并记录皮肤变化；

·第2天：观察皮肤变化并施加治疗；

·第3天：观察皮肤变化并施加治疗；

·第4天：观察皮肤变化并施加治疗；

·第5天：观察皮肤变化并进行最后一次治疗；

·第6天：观察皮肤变化；

·第7天：观察皮肤变化；

·第8天：观察皮肤变化，详细临床检查，体重测量，对编号为1001A、1002A和1003A的动物进行尸检；

·第9天：观察皮肤变化；

·第10天：观察皮肤变化；

·第11天：观察皮肤变化；

·第12天：观察皮肤变化；和

·第13天：观察皮肤变化，详细临床检查，体重测量，对编号为1004A、1005A和1006A的动物进行尸检。

表1：每只动物的治疗部位的示意图

简言之，通过皮肤施用将测试和对照安慰剂制品施用至剪毛的背部，连续施用5天(即，第1、2、3、4和5天)。将适当体积的测试或安慰剂制品施加至皮肤测试部位，并在皮肤表面上均匀地涂抹。这使用带手套的手指来完成，并且确保没有过量残留物保留在手套上。对于每个剂量和动物要更换手套。在每个给药日对所有剂量使用相同的皮肤测试部位。

在每次治疗后用一层纱布覆盖皮肤测试区域，并利用Elastoplast型绷带固定就位。尽力确保在工作日进行给药，以便保持动物室中的正常光暗循环。在研究的所有阶段，每天进行一次死亡率检查。在驯化期每天一次，在治疗和观察期每天早上每天一次，记录笼侧的临床体征(例如，不健康、行为改变等)。其健康状态被判断为能确保进行其他评价的动物由临床兽医或助理临床兽医来检查。

对每只兔的DCE在预处理时进行一次，在治疗期间进行一次，并且在尸检之前的第8天和第13天进行。在治疗期间和停止治疗后2天(即，第8天)观察动物1001A、1002A和1003A。在治疗期间和停止治疗后7天(即，第13天)观察动物1004A、1005A和1006A。

在第1天给药后1小时和4小时两次，然后在每次后续给药前每天，评估并记录皮肤变化。在停止治疗后，在尸检之前对所有六只动物评估并记录皮肤变化，在第6、7、8天对动物1001A、1002A和1003A进行，然后每天(第9天到第13天)对动物1004A、1005A和1006A进行。在研究期间，监测动物可能的死亡率、临床体征(例如，疾病和行为的改变)和皮肤测试部位的Draize评分。

使用以下修改的Draize评分方案记录皮肤观察结果：

在Draize评分期间参照对照部位对愈合进行评估。使用以下等级对愈合进行评估：

愈合评估	得分
		不存在愈合	0
存在轻微愈合	1
		存在中等愈合	2
存在完全愈合	3

对皮肤测试部位的变化的评估不只局限于上述评分系统。此外，还应特别关注以下变化：

在分组前记录一次并且在预处理期间记录一次所有动物的体重。到给药前1天和结束时(尸检前)记录所有动物的体重。通过静脉注射过量的戊巴比妥钠，随后横切大血管进行放血，使兔安乐死。对于每只兔，尸检包括皮肤测试部位的切除。皮肤测试部位和动物ID保持在中性缓冲的10％福尔马林中。对所有动物的所有测试部位进行组织病理学检查。

没有动物因为治疗而死亡，在治疗期间或治疗后也没有动物表现出任何疾病体征或异常行为。本研究中CM-wh001的施用对动物的体重没有任何不利影响。

组织病理学程序

切片制备

通过使用常规方法在石蜡中包埋、切片并用苏木精和伊红进行染色来制备用于显微镜检查的皮肤测试部位的切片。

对所有动物进行组织学处理。

组织病理学检查

对所有动物的所有测试部位进行组织病理学检查。

数据采集

在进行本研究期间使用以下计算机化系统：(1)存活时数据采集(Provantis)和(2)死亡后数据采集(Provantis)。

数据评估与统计学

在研究期间获得的数值数据和非数值数据仅作为个体值酌情报告，并不进行统计分析。

标准操作程序

所有程序均按照ITR标准操作程序进行，并且保存在ITR的文件中。与ITR标准操作程序相比的差异被记录在原始数据中。

结果

临床体征(表2-4)

没有可归因于测试品CM-wh001的局部施用的临床体征(例如，不健康、行为变化等)。

给药部位如下：

给药部位1和2 对照

给药部位3和4 低剂量CM-wh001

给药部位5和6 中剂量CM-wh001

给药部位7和8 高剂量CM-wh001

表2：笼侧观察结果(预处理期)

表3：笼侧观察结果(治疗期)

表4(详细的临床检查)

严重程度代码：X＝不存在异常

体重(表5)

局部施用三种浓度的CM-wh001后对动物的体重没有影响。

表5：体重(个体值、平均值和SD)

皮肤观察结果

利用Draize评分用以上列出的评估值对皮肤变化进行评估。

皮肤评估：DRAIZE评分系统

给药部位1

NR＝未记录

皮肤评估：DRAIZE评分系统

给药部位2

NR＝未记录

皮肤评估：DRAIZE评分系统

给药部位3

NR＝未记录

b＝在擦伤部位上出现的瘢痕形成

皮肤评估：DRAIZE评分系统

给药部位4

NR＝未记录

皮肤评估：DRAIZE评分系统

给药部位5

NR＝未记录

b＝在擦伤部位上出现瘢痕形成

c＝小区域1cm/1cm

d＝小区域，约1.5cm/1.5cm

b＝在擦伤部位上出现瘢痕形成

c＝小区域1cm/1cm

d＝小区域，约1.5cm/1.5cm

皮肤评估：DRAIZE评分系统

给药部位6

NR＝未记录

皮肤评估：DRAIZE评分系统

给药部位7

NR＝未记录

b＝在擦伤部位上出现瘢痕形成

c＝小区域1cm/1cm

d＝小区域，约1.5cm/1.5cm

e＝约2cm/2cm的区域

b＝在擦伤部位上出现瘢痕形成

c＝小区域1cm/1cm

d＝小区域，约1.5cm/1.5cm

e＝约2cm/2cm的区域

皮肤评估：DRAIZE评分系统

给药部位8

NR＝未记录

首次治疗(第一天)后1小时和4小时及在整个观察期对未擦伤的安慰剂对照部位(部位2)的评估并没有显示出任何皮肤变化。

在首次治疗(第一天)后1小时和4小时，在用安慰剂处理的擦伤部位(部位1)注意到非常轻微至界限清楚的红斑，但这与擦伤有关。到第二天这种皮肤变化大大减轻，并且愈合评估提示大多数动物表现出完全愈合。

在整个治疗和观察期，根据目视检查，除了少数孤立的变化外，用CM-wh001治疗的未擦伤部位(部位4、6和8)均表现出对治疗无反应。

在第一天的给药后1小时和4小时时间点，对左侧的CM-wh001治疗的擦伤部位(部位3、5和7)的评估显示出非常轻微至界限清楚的红斑，这是由于与在相应安慰剂部位观察到的类似的擦伤。

对于用低剂量CM-wh001治疗的擦伤部位(部位3)，这些变化到包括愈合评估的第2天消退，并且在余下的治疗和观察期内通常是正常的。在第7天仅有一只动物(1004A)在该部位上有明显的瘢痕形成，但这可能没有意义，因为在这种情况之前或之后均没有记录到。

在用中剂量CM-wh001治疗的擦伤部位(部位5)，这些部位到第3天已经恢复正常，仅3/6只兔子显示出非常轻微的红斑，并且所有动物通过愈合评估均显示为正常的。然而，到第5天，在3/6只动物中记录到一些结痂(在1-1.5cm²之间)，其中一只动物在形成擦伤的情况下显示出瘢痕形成。这些变化持续到第7天，但是减轻，而到第8天(停止给药后3天)，动物看上去恢复正常，仅有2/6只动物表现出非常轻微的红斑。其余动物观察至第13天，仅出现被认为是偶然事件的偶尔的红斑和水肿个例。

在用高剂量CM-wh001治疗的擦伤部位(部位7)，这些部位表现出向正常状态发展，其中非常轻微的红斑的发生率降低，并且大多数动物通过愈合评估显示为正常的。然而，到第5天，在5/6只动物中记录到一些结痂(在1-2cm²之间)，其中两只动物表现出张力缺失(被定义为弹性丧失的皮肤褶皱)。到第7天，受到影响的动物的数目已经减至3/6，其中有两只动物显示出结痂，一只有瘢痕形成。在第8天，在这两只动物中观察到结痂，而在第11天，注意到存活的动物是正常的。

肉眼所见(见下表)

第8天致死的动物

在研究的第8天，对前3只兔子(1001A、1002A和1003A)实施安乐死。在动物中仅仅注意到左侧高剂量给药部位7(3/3)的擦伤皮肤和右侧高剂量给药部位8(1/3)的未擦伤皮肤的深色变色。

这种肉眼可见的(gross)病理学发现(擦伤皮肤的深色变色)与表皮增生和/或浅表性皮肤炎症的显微镜所见相关。在一个右侧对照给药部位存在被视为偶然事件的几个暗红色区域。在左侧较低剂量(低剂量和中剂量)给药部位的擦伤皮肤中和左侧对照部位上不存在皮肤的深色变色。在擦伤或未擦伤的治疗或对照部位没有其他肉眼可见的病理学发现。

第13天致死的动物

在擦伤或未擦伤的治疗或对照皮肤部位上没有出现肉眼可见的病理学发现。

显微镜所见(见下表)

第8天致死的动物

擦伤的皮肤(左侧给药部位)

在用测试品和安慰剂制品治疗后的为期2天的观察期结束时(即第8天)，对照擦伤皮肤(左侧给药部位)在组织学上表现正常(3/3)，与未擦伤的对照皮肤(右侧给药部位)类似。这一观察结果表明对照皮肤擦伤的愈合，伴随着表皮的恢复(无增生)，并且没有浅表性皮肤炎症的证据。

在擦伤的皮肤部位注意到无裂隙(unbreached)(再上皮化)皮肤的CM-wh001相关的、剂量依赖的表皮增生，伴有浅表性急性至亚急性皮肤炎症，作为CM-wh001的低剂量局部施用的最低程度发现(3/3)，CM-wh001的中剂量局部施用的最低程度至轻度发现(3/3)，和CM-wh001的高剂量局部施用的轻度至中度发现(3/3)。在左侧擦伤皮肤部位的这一发现(伴有浅表性皮肤炎症的表皮增生)不指示局部毒性，而是提示CM-wh001局部施用对表皮角质形成细胞增殖的局部组织兴奋或刺激，这可能与相对于正常恢复过程的恢复的表皮完整性有关。

由于到研究的第8天表皮显示无裂隙(再上皮化)，因此这一发现(伴有浅表性皮肤炎症的表皮增生)也表明，利用CM-wh001的局部施用，擦伤皮肤的完整性得以恢复，尽管是通过增生(不是表皮复原，如对照擦伤皮肤部位)。CM-wh001相关的表皮增生更进一步的特征是基底角质形成细胞的增生(基底增生)，通常具有增强的有丝分裂活性、棘层的扩张(棘层增厚)和颗粒层的膨胀(颗粒层增厚)。因此，CM-wh001相关的表皮增生也可被认为是增大的、但有利的表皮生理反应，其由CM-wh001的局部施用引起，并且可用来支持皮肤擦伤愈合部位的修复表皮的强度。

未擦伤的皮肤(右侧给药部位)

对于CM-wh001的高剂量局部施用，在未擦伤皮肤部位注意到无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001相关的、最低程度至轻度表皮增生，伴有或没有最低程度的浅表性急性至亚急性皮肤炎症(2/3)。在未擦伤皮肤部位的这一发现(伴有浅表性皮肤炎症的表皮增生)不指示局部毒性，而是提示CM-wh001局部施用对表皮角质形成细胞增殖的局部组织兴奋或刺激。

与高剂量局部施用CM-wh001治疗的擦伤皮肤相比，在类似的高剂量未擦伤皮肤部位中的这一发现(伴有浅表性皮肤炎症的表皮增生)在严重程度上(对于未擦伤皮肤为最低程度至轻度，而对于擦伤皮肤为轻度至中度)和发生率上(对于未擦伤皮肤为2/3，而对于擦伤皮肤为3/3)降低。该观察结果提示，在CM-wh001高剂量局部施用时，擦伤皮肤部位的表皮增生可能是由皮肤擦伤本身和用CM-wh001治疗擦伤皮肤的协调(协同)影响所引起的。

到研究的第8天，对照、低剂量和中剂量CM-wh001治疗的未擦伤皮肤部位在组织学上表现为正常。

第13天致死的(Terminal)动物

擦伤的皮肤(左侧给药部位)

到第13天，在CM-wh001治疗的擦伤皮肤部位注意到的伴有浅表性急性到亚急性皮肤炎症的无裂隙(再上皮化)皮肤的剂量依赖性表皮增生已经消退(resolved)。在为期7天的观察期结束时，这些皮肤部位在组织学上表现为正常，且类似于对照擦伤部位。这一观察结果提示在针对为期7天的观察期保留的动物中的皮肤擦伤愈合，伴有表皮的恢复，并且没有表明皮肤炎症的证据。

未擦伤的皮肤(右侧给药部位)

到第13天，对于CM-wh001的高剂量8％活性局部施用，在未擦伤皮肤部位注意到的伴有或没有浅表性急性至亚急性皮肤炎症的无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001-相关的表皮增生已经消退。在为期7天的观察期后，这些消退的皮肤部位在组织学上表现正常，并且类似于对照未擦伤部位。

其他发现：

在皮肤测试部位观察到从无变化到症状消退的一系列变化。这允许在给药结束时(即第5天)和在目视评估恢复到正常后再次在部位之间进行比较。

安慰剂对照擦伤和未擦伤部位显示没有皮肤变化和擦伤的正常愈合。类似地，所有浓度下的未擦伤皮肤部位(部位4、6和8)在整个研究中通常保持正常。

对每日治疗、持续5天的动物进行的皮肤测试部位变化的评估，揭示在未擦伤部位通常没有皮肤变化。

对每日治疗、持续5天的动物进行的皮肤测试部位变化的评估，揭示在所有擦伤皮肤测试部位(部位3、5和7)出现非常轻微的至界限清楚的红斑。在第1天的给药后1小时和4小时时间点在测试部位和对照部位观察到相似的红斑结果，但这是擦伤的结果。

低剂量CM-wh001治疗

如愈合评估所表明的，对于用低剂量CM-wh001治疗的擦伤部位(部位3)，到第2天红斑消退。在治疗和观察期的剩余时间，该部位通常正常。

在第7天，一只动物(1004A)在该部位具有明显的瘢痕形成，但这可能没有意义，因为在这种情况之前或之后均没有记录到。

中剂量CM-wh001治疗

在中剂量CM-wh001治疗的擦伤部位(部位5)，到第3天皮肤已经恢复正常，仅有3/6只兔子显示出非常轻微的红斑，并且所有动物通过愈合评估均显示为正常的。

在第5天，在3/6只动物中记录到一些结痂(在1-1.5cm²之间)，其中一只动物在形成擦伤的情况下显示出瘢痕形成。这些变化持续到第7天，但是随后减轻，并且到第8天(停止给药后3天)，皮肤看上去恢复正常，仅有2/6只动物显示出非常轻微的红斑。对于观察至第13天的其余动物，仅出现被认为是偶然事件的红斑和水肿的个例。

高剂量CM-wh001治疗

在用高剂量CM-wh001治疗的擦伤部位(部位7)，皮肤显示出向正常状态发展，其中红斑的发生率降低，并且大多数动物通过愈合评估显示为正常的。

到第5天，在5/6只动物中记录到一些结痂(在1-2cm²之间)，其中两只动物显示出张力缺失(被定义为弹性丧失的皮肤褶皱)。到第7天，受到影响的动物的数目已经减至3/6，其中有两只显示出结痂，一只有瘢痕形成。在第8天，在两只动物中观察到结痂，而在第11天，注意到存活的动物是正常的。

其他

擦伤皮肤测试部位的变化需要改变终止日程。在两天对动物和皮肤组织学进行评估：第一次在第8天，选择代表最差和最佳情况的动物；第二次在第13天处死，使用受到类似影响的动物。

(i)第8天

在研究的第8天，对前3只兔子(1001A、1002A和1003A)实施安乐死。在动物中，仅肉眼注意到左侧高剂量给药部位7(3/3)的擦伤皮肤和右侧高剂量给药部位8(1/3)的未擦伤皮肤的深色变色。

这种肉眼可见的病理学发现(擦伤皮肤的深色变色)与表皮增生和/或浅表性皮肤炎症的显微镜所见有关。在一个右侧对照给药部位(部位2)存在被视为偶然事件的几个暗红色区域。在左侧低剂量给药部位(部位3)和中剂量给药部位(部位3)的擦伤皮肤以及左侧对照部位(部位1)不存在皮肤的深色变色。在擦伤和未擦伤治疗或对照皮肤部位都没有其他肉眼可见的病理学发现。类似地，在第13天评估的动物的擦伤或未擦伤治疗部位或对照皮肤部位均不存在肉眼可见的病理学发现。

到研究的第8天，在3/3只动物中，对照擦伤皮肤(部位1)在组织学上表现为正常的，并且类似于对照未擦伤皮肤(部位2)。此观察结果提示对照皮肤擦伤的愈合，伴随着表皮的恢复(无增生)，并且没有浅表性皮肤炎症的证据。

在擦伤皮肤部位注意到伴有浅表性急性至亚急性皮肤炎症的无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001-相关的、剂量依赖的表皮增生，如下：

·CM-wh001低剂量局部施用的最低程度发现(3/3)，

·CM-wh001中剂量局部施用的最低程度到轻度发现(3/3)，和

·CM-wh001高剂量局部施用的轻度到中度发现(3/3)。

在左侧擦伤皮肤部位的这一发现(伴有浅表性皮肤炎症的表皮增生)不指示局部毒性，而是提示CM-wh001局部施用对表皮角质形成细胞增殖的局部组织兴奋或刺激。由于到研究第8天表皮显示无裂隙(再上皮化)，因此这一发现(伴有浅表性皮肤炎症的表皮增生)也表明，利用CM-wh001的局部施用，擦伤皮肤的完整性得以恢复，尽管是增生性的(不是表皮复原，如对照擦伤皮肤部位)。与相对于创伤的表皮复原相反，增生性恢复被证明是超出正常恢复过程之外的、进一步加强创伤部位的表皮的现象。

CM-wh001相关的表皮增生更进一步的特征是基底角质形成细胞的增生(基底增生)，通常具有增强的有丝分裂活性、棘层的扩张(棘层增厚)和颗粒层的膨胀(颗粒层增厚)。因此，CM-wh001相关的表皮增生可被认为是增大的、但有利的表皮生理反应，其由CM-wh001的局部施用引起，这可用来支持皮肤擦伤愈合部位的修复表皮的强度。

高剂量治疗的未擦伤皮肤(右侧给药部位)：在3只动物的2只中观察到CM-wh001相关的最低程度至轻度皮肤表皮增生，伴有或没有最低程度的浅表性急性至亚急性皮肤炎症。这一发现不指示局部毒性，而是提示CM-wh001局部施用对表皮角质形成细胞增殖的局部组织兴奋或刺激。

与高剂量局部施用CM-wh001治疗的擦伤皮肤相比，在类似的高剂量未擦伤皮肤部位中的这一发现(伴有浅表性皮肤炎症的表皮增生)在严重程度上(对于未擦伤皮肤为最低程度至轻度，而对于擦伤皮肤为轻度至中度)和发生率上(对于未擦伤皮肤为2/3，而对于擦伤皮肤为3/3)降低。

该观察结果提示，CM-wh001的高剂量局部施用诱导擦伤皮肤部位的表皮增生，这表明增强的表皮的恢复超出了正常恢复进程。增强的表皮恢复导致表皮层对进一步的损伤具有更大的抵抗力。

在第8天，对照、低剂量和中剂量CM-wh001治疗的未擦伤皮肤部位在组织学上表现为正常的。

组织病理学揭示，在观察期结束时(即第8天)，在任何动物中均没有局部组织(皮肤)毒性的证据。总的来说，第8天的结果提示CM-wh001诱导的对表皮角质形成细胞增殖(增生)的局部组织兴奋或刺激，或由CM-wh001局部施用引起的增大的、但期望的表皮生理反应。

(ii)第13天

在研究的第13天，对动物1004A、1005A和1006A实施安乐死。

擦伤部位：到研究的第13天，在CM-wh001治疗的擦伤皮肤部位的无裂隙(再上皮化)皮肤的剂量依赖性表皮增生(浅表性急性至亚急性皮肤炎症)已经消退。

这些皮肤部位在组织学上表现为正常的，并且类似于对照擦伤部位。这一观察结果提示CM-wh001诱导的皮肤擦伤的愈合，伴随表皮的恢复，并且没有浅表性皮肤炎症的证据。

未擦伤部位：对于右侧给药部位，针对CM-wh001高剂量局部施用观察到的无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001相关的表皮增生(伴有或没有浅表性急性至亚急性皮肤炎症)已经消退。这些消退的皮肤部位在组织学上表现为正常的，并且类似于对照未擦伤部位。

CM-wh001的局部施用未导致终点参数中死亡率或测试品相关变化。

在研究的第13天，在CM-wh001治疗的擦伤或未擦伤皮肤部位存在无裂隙(再上皮化)皮肤的表皮增生和浅表性急性至亚急性皮肤炎症的消退，这指示皮肤擦伤的愈合伴随着表皮的恢复，并且没有浅表性皮肤炎症的证据。

组织病理学揭示在观察期结束时(即第13天)，在任何动物中都没有局部组织(皮肤)毒性的证据。到第13天，在CM-wh001治疗的擦伤或未擦伤皮肤部位存在无裂隙(再上皮化)皮肤的表皮增生和浅表性急性至亚急性皮肤炎症的消退，这指示皮肤擦伤的愈合伴随着表皮的恢复，并且没有浅表性皮肤炎症的证据。

结论

向兔子背部的每一侧(左侧擦伤，右侧未擦伤)局部施用测试品CM-wh001共5天，随后对前3只兔子(1001A、1002A和1003A)进行为期2天的观察期，并对余下的3只兔子(1004A、1005A和1006A)进行为期7天的观察期，显示如下结果：

在研究的第8天和第13天，在任何动物中都没有局部组织(皮肤)毒性的证据。

研究的第8天：对照擦伤皮肤(左侧给药部位)在组织学上表现为正常的(3/3)，并且类似于对照未擦伤皮肤(右侧给药部位)(3/3)；这一观察结果提示对照皮肤擦伤的愈合，伴随表皮的恢复(无增生)，并且没有浅表性皮肤炎症的证据。

研究的第8天：在擦伤皮肤部位注意到无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001相关的、剂量依赖的表皮增生，伴有浅表性急性至亚急性皮肤炎症，作为CM-wh001低剂量局部施用的最低程度发现(3/3)、CM-wh001中剂量局部施用的最低程度至轻度发现(3/3)、CM-wh001高剂量局部施用的轻度至中度发现(3/3)，这提示CM-wh001诱导的对表皮角质形成细胞增殖(增生)的局部组织兴奋或刺激；CM-wh001相关的表皮增生也可被认为是增大的、但有利的表皮生理反应，其由CM-wh001的局部施用引起，并且可用来支持皮肤擦伤愈合部位的修复表皮的强度。

研究的第8天：组织学证据表明，在CM-wh001的高剂量局部施用时，皮肤擦伤本身和用CM-wh001治疗擦伤皮肤的协调(协同)影响可能已经诱导擦伤皮肤部位的表皮增生。

研究的第8天：对于CM-wh001的高剂量局部施用，仅在未擦伤皮肤部位注意到无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001相关的、最低程度至轻微表皮增生，伴有或没有最低程度的浅表性急性至亚急性皮肤炎症(2/3)。

研究的第13天：在CM-wh001治疗的擦伤或未擦伤皮肤部位，存在无裂隙(再上皮化)皮肤的表皮增生和浅表性急性至亚急性皮肤炎症的消退；这种消退指示皮肤擦伤的愈合，伴随着表皮的恢复，并且没有浅表性皮肤炎症的证据。

到第8天，在擦伤皮肤部位注意到无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001-相关的、剂量依赖的表皮增生，伴有浅表性急性至亚急性皮肤炎症，作为CM-wh001低剂量局部施用的最低程度发现(3/3)、CM-wh001中剂量局部施用的最低程度至轻度发现(3/3)和CM-wh001高剂量局部施用的轻度至中度发现(3/3)。这些结果提示CM-wh001诱导的对表皮角质形成细胞增殖(增生)的局部组织兴奋或刺激。CM-wh001相关的表皮增生也可被认为是增大的、但有利的表皮生理反应，其由CM-wh001的局部施用引起，并且可用来支持超出了正常恢复进程之外的、皮肤擦伤愈合部位的修复表皮的强度。

到第8天的组织学证据提示，在CM-wh001的高剂量局部施用时，皮肤擦伤本身和用CM-wh001治疗擦伤皮肤的协调(协同)影响可能已引起擦伤皮肤部位的表皮增生。此外，对于CM-wh001的高剂量局部施用，仅在未擦伤给药部位注意到无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001-相关的、最低程度至轻微表皮增生，伴有或没有最低程度的浅表性急性至亚急性皮肤炎症(2/3)。

到研究的第13天，在CM-wh001治疗的擦伤或未擦伤皮肤部位存在无裂隙(再上皮化)皮肤的表皮增生和浅表性急性至亚急性皮肤炎症的消退，这指示皮肤擦伤的愈合，伴随着表皮的恢复，并且没有浅表性皮肤炎症的证据。

总之，到第8天在擦伤皮肤部位注意到的伴有浅表性急性至亚急性皮肤炎症的无裂隙(再上皮化)皮肤的CM-wh001相关的、剂量依赖的表皮增生，提示CM-wh001诱导的对表皮角质形成细胞增殖(增生)的局部组织兴奋或刺激，或由CM-wh001局部施用引起的增大的、但期望的表皮生理反应。到第13天，在CM-wh001治疗的擦伤或未擦伤皮肤部位存在无裂隙(再上皮化)皮肤的表皮增生和浅表性急性至亚急性皮肤炎症的消退，这指示皮肤擦伤的愈合，伴随着表皮的恢复，且没有浅表性皮肤炎症的证据。

肉眼可见的病理学的发生率–第8天致死

研究动物的数目 3

完成研究的动物数目 (3)

左侧对照给药部位(部位1)

提交的 (3)

无可见损伤 3

左侧低剂量给药部位(部位3)

提交的 (3)

无可见损伤 3

左侧中剂量给药部位(部位5)

提交的 (3)

无可见损伤 3

左侧高剂量给药部位(部位7)

提交的 (3)

无可见损伤 0

深色变色；皮肤 3

右侧对照给药部位(部位2)

提交的 (3)

无可见损伤 2

深色区域；红色；皮肤；少数 1

右侧低剂量给药部位(部位4)

提交的 (3)

无可见损伤 3

右侧中剂量给药部位(部位6)

提交的 (3)

无可见损伤 3

右侧高剂量给药部位(部位8)

提交的 (3)

无可见损伤 2

深色变色；皮肤 1

肉眼可见的病理学的发生率–第13天致死

研究动物的数目：3

完成研究的动物数目：(3)

左侧对照给药部位(部位1)

提交的 (3)

无可见损伤 3

左侧低剂量给药部位(部位3)

提交的 (3)

无可见损伤 3

左侧中剂量给药部位(部位5)

提交的 (3)

无可见损伤 3

左侧高剂量给药部位(部位7)

提交的 (3)

无可见损伤 3

右侧对照给药部位(部位2)

提交的 (3)

无可见损伤 3

右侧低剂量给药部位(部位4)

提交的 (3)

无可见损伤 3

右侧中剂量给药部位(部位6)

提交的 (3)

无可见损伤 3

右侧高剂量给药部位(部位8)

提交的 (3)

无可见损伤 3

组织病理学发生率–第8天致死

观察结果：Neo-Plastic和非Neo-Plastic

研究动物的数目：3

完成研究的动物的数目：(3)

左侧对照给药部位(部位1)

检查的 (3)

在正常限度内 3

左侧低剂量给药部位(部位3)

左侧中剂量给药部位(部位5)

左侧高剂量给药部位(部位7)

右侧对照给药部位(部位2)

检查的 (3)

在正常限度内 3右侧低剂量给药部位(部位4)

检查的 (3)

在正常限度内 3右侧中剂量给药部位(部位6)

检查的 (3)

在正常限度内 3

右侧高剂量给药部位(部位8)

组织病理学发生率–第13天致死

观察结果：Neo-Plastic和非Neo-Plastic

研究动物的数目：3

完成研究的动物的数目：(3)

左侧对照给药部位(部位1)

检查的 (3)

在正常限度内 3

左侧低剂量给药部位(部位3)

检查的 (3)

在正常限度内 3

左侧中剂量给药部位(部位5)

检查的 (3)

在正常限度内 3

左侧高剂量给药部位(部位7)

检查的 (3)

在正常限度内 3

右侧对照给药部位(部位2)

检查的 (3)

在正常限度内 3

右侧低剂量给药部位(部位4)

检查的 (3)

在正常限度内 3

右侧中剂量给药部位(部位6)

检查的 (3)

在正常限度内 3

右侧高剂量给药部位(部位8)

检查的 (3)

在正常限度内 3

个体动物数据(动物参考号：1001A)

组：1

性别：雄性

物种：兔

品系：New Zealand White

测试材料：剂量：组1 途径：皮肤 研究类型：耐受性研究

死亡日期：12/01/11 研究天数(周)：8(2) 死亡方式：致死

尸检日期：12/01/11**尸检完成**

**检查完成**

终末体重：3kg

其余任何方案需要的组织(已对其进行检查)无可见损伤

组织病理学观察结果：

左侧低剂量给药部位

表皮增生：最低程度的：节段性至多病灶，无裂隙(unabreached)表皮

棘层增厚：最低程度的

皮肤炎症：浅表性；最低程度的：急性至亚急性，多病灶

基底增生：最低程度的

颗粒层增厚：最低程度的

左侧中剂量给药部位

表皮增生：轻度，节段性至多病灶，无裂隙表皮

浅表性皮肤炎；轻度：急性至亚急性，多病灶

棘层增厚：轻度；

颗粒层增厚：轻度；和

基底增生；轻度，有丝分裂活性增强。

左侧高剂量给药部位

皮肤：深色变色(G)；

棘层增厚：轻度；

颗粒层增厚：轻度；和

增生：基底；轻度，有丝分裂活性增强。

左侧高剂量给药部位

增生：表皮；轻度，和节段性至多病灶，无裂隙表皮。

皮肤：深色变色(G)；和

皮肤炎症：浅表性；轻度：急性至亚急性，多病灶。

棘层增厚：轻度；

增生：基底；轻度：有丝分裂活性增强；和

颗粒层增厚：轻度

右侧高剂量给药部位

增生：表皮；最低程度的：节段性，无裂隙表皮

棘层增厚：最低程度的

增生：基底；最低程度的

颗粒层增厚：最低程度的

无相关损伤

与尸检数据无关

右侧对照给药部位

皮肤；深色区域；少数；红色(G)

以下组织在正常限度内：左侧对照给药部位；右侧对照给药部位；右侧低剂量给药部位；和右侧中剂量给药部位。

使用的代码：(G)＝肉眼可见的发现；(TGL)＝可追踪的肉眼可见的损伤；和(H)＝组织学发现

个体动物数据(动物参考号：1002A)

组：1

性别：雄性

物种：兔

品系：New Zealand White

测试材料：剂量：组1 途径：皮肤 研究类型：耐受性研究

死亡日期：12/01/11 研究天数(周)：8(2) 死亡方式：致死

尸检日期：12/01/11**尸检完成**

**检查完成**

终末体重：3kg

其余任何方案需要的组织(已对其进行检查)无可见损伤

组织病理学观察结果

左侧低剂量给药部位；

表皮增生；最低程度的：节段性至多病灶，无裂隙表皮

棘层增厚；最低程度的

浅表性皮肤炎；轻度：急性至亚急性，多病灶

基底增生；最低程度的

颗粒层增厚；最低程度的

左侧中剂量给药部位；

表皮增生；轻度：节段性至多病灶，无裂隙表皮

浅表性皮肤炎症；轻度：急性至亚急性，多病灶

棘层增厚；轻度

颗粒层增厚；轻度

基底增生；轻度

左侧高剂量给药部位；

表皮增生；中度：节段性至多病灶，无裂隙表皮

左侧高剂量给药部位；

皮肤；深色变色(G)

浅表性皮肤炎；轻度：急性至亚急性，多病灶

左侧高剂量给药部位；

皮肤；深色变色(G)

棘层增厚；中度

基底增生；中度：有丝分裂活性增强

颗粒层增厚；中度

无相关损伤；

与尸检数据无关

右侧高剂量给药部位；

皮肤；深色变色(G)

以下组织在正常限度内：左侧对照给药部位；右侧对照给药部位；右侧低剂量给药部位；右侧中剂量给药部位；和右侧高剂量给药部位。

使用的代码：(G)＝肉眼可见的发现；(TGL)＝可追踪的肉眼可见的损伤；和(H)＝组织学发现

个体动物数据(动物参考号：1003A)

组：1

性别：雄性

物种：兔

品系：New Zealand White

测试材料：剂量：组1 途径：皮肤 研究类型：耐受性研究

死亡日期：12/01/11 研究天数(周)：8(2) 死亡方式：致死

尸检日期：12/01/11**尸检完成**

**检查完成**

终末体重：3.1kg

其余任何方案需要的组织(已对其进行检查)无可见损伤

组织病理学观察结果:

左侧低剂量给药部位；

表皮增生；最低程度的：节段性至多病灶，无裂隙表皮

棘层增厚；最低程度的

浅表性皮肤炎症；最低程度的：急性至亚急性，多病灶

基底增生；最低程度的

颗粒层增厚；最低程度的

左侧中剂量给药部位；

表皮增生；最低程度的：节段性至多病灶，无裂隙表皮

浅表性皮肤炎症；最低程度的：急性至亚急性，多病灶

棘层增厚；最低程度的

颗粒层增厚；最低程度的

基底增生；最低程度的

左侧高剂量给药部位；

表皮增生；轻度：节段性至多病灶，无裂隙表皮

左侧高剂量给药部位；

皮肤；深色变色(G)

浅表性皮肤炎；最低程度的：急性至亚急性，多病灶

左侧高剂量给药部位；

皮肤；深色变色(G)

棘层增厚；轻度

基底增生；轻度

颗粒层增厚；轻度

右侧高剂量给药部位；

急性至亚急性，多病灶

表皮增生；轻度：节段性至多病灶，无裂隙表皮

棘层增厚；轻度

基底增生；轻度

颗粒层增厚；轻度

浅表性皮肤炎症；最低程度的

以下组织在正常限度内：左侧对照给药部位；右侧对照给药部位；右侧低剂量给药部位；和右侧中剂量给药部位。

使用的代码：(G)＝肉眼可见的发现；(TGL)＝可追踪的肉眼可见的损伤；和(H)＝组织学发现

个体动物数据(动物参考号：1004A)

组：1

性别：雄性

物种：兔

品系：New Zealand White

测试材料：剂量：组1 途径：皮肤 研究类型：耐受性研究

死亡日期：17/01/11 研究天数(周)：13(2) 死亡方式：致死

尸检日期：17/01/11**尸检完成**

**检查完成**

终末体重：2.9kg

肉眼可见的病理学观察结果：无

其余任何方案需要的组织(已对其进行检查)无可见损伤

组织病理学观察结果：无

以下组织在正常限度内：左侧对照给药部位；左侧低剂量给药部位；左侧中剂量给药部位；左侧高剂量给药部位；右侧对照给药部位；右侧低剂量给药部位；右侧中剂量给药部位；和右侧高剂量给药部位。

个体动物数据(动物参考号：1005A)

组：1

性别：雄性

物种：兔子

品系：New Zealand White

测试材料：剂量：组1 途径：皮肤 研究类型：耐受性研究

死亡日期：17/01/11 研究天数(周)：13(2) 死亡方式：致死

尸检日期：17/01/11**尸检完成**

**检查完成**

终末体重：3.1kg

肉眼可见的病理学观察结果：无

其余任何方案需要的组织(已对其进行检查)无可见损伤

组织病理学观察结果：无

以下组织在正常限度内：左侧对照给药部位；左侧低剂量给药部位；左侧中剂量给药部位；左侧高剂量给药部位；右侧对照给药部位；右侧低剂量给药部位；右侧中剂量给药部位；和右侧高剂量给药部位。

个体动物数据(动物参考号：1006A)

组：1

性别：雄性

物种：兔

品系：New Zealand White

测试材料：剂量：组1 途径：皮肤 研究类型：耐受性研究

死亡日期：17/01/11 研究天数(周)：13(2) 死亡方式：致死

尸检日期：17/01/11**尸检完成**

**检查完成**

终末体重：3.1kg

肉眼可见的病理学观察结果：无

其余任何方案需要的组织(已对其进行检查)无可见损伤

组织病理学观察结果：无

以下组织在正常限度内：左侧对照给药部位；左侧低剂量给药部位；左侧中剂量给药部位；左侧高剂量给药部位；右侧对照给药部位；右侧低剂量给药部位；右侧中剂量给药部位；和右侧高剂量给药部位。

本发明可以非限制性地由如下各项描述。

项1.一种局部创伤愈合药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种消化酶和一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含约25至约700,000USP单位的蛋白酶、约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

项2.一种局部创伤愈合药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种消化酶和任选的一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含至少约100,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约70,000USP单位的淀粉酶。

项3.根据项2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约200,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约140,000USP单位的淀粉酶。

项4.根据项2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约450,000USP单位的蛋白酶、至少约60,000USP单位的脂肪酶和至少约270,000USP单位的淀粉酶。

项5.根据项2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约122,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约73,000USP单位的淀粉酶。

项6.根据项2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约238,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约143,000USP单位的淀粉酶。

项7.根据项2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约459,000USP单位的蛋白酶、至少约64,000USP单位的脂肪酶和至少约277,000USP单位的淀粉酶。

项8.根据项2-7所述的组合物，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

项9.根据项1-8中任一项所述的组合物，其中所述治疗有效量的一种或多种消化酶基本上由蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶组成。

项10.根据项1-9中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种消化酶还包含选自纤维素酶、蔗糖酶、麦芽糖酶和木瓜蛋白酶的一种或多种酶。

项11.根据项1-10中任一项所述的组合物，其中所述组合物不用于治疗金黄色葡萄球菌或大肠杆菌感染。

项12.根据项1-11中任一项所述的组合物，其中所述组合物为胰液素。

项13.根据项1-12中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种消化酶包含一种或多种胰酶。

项14.根据项1-13中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种消化酶包含源自猪的酶。

项15.根据项1-14中任一项所述的组合物，其中所述蛋白酶包含胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶。

项16.根据项1-15中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种消化酶独立地源自动物来源、微生物来源、植物来源、真菌来源或为合成制备的。

项17.根据项1-16中任一项所述的组合物，其中所述组合物刺激表皮细胞，导致短期纤维化沉积，防止创伤重新裂开，募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)，诱导更强的毛发再生长，减少脱发，增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性，或其组合。

项18.根据项1-17中任一项所述的组合物，其中所述表皮生理反应包括表皮增生、短期纤维化沉积、白细胞的募集和/或免疫系统的激活。

项19.根据项1-18中任一项所述的组合物，其中所述组合物不引起变态反应、瘢痕形成、生物损伤、烧伤或其组合。

项20.根据项1-19中任一项所述的组合物，其中所述创伤是哺乳动物的创伤。

项21.根据项20所述的组合物，其中所述哺乳动物为人、猪、马、牛、狗、猫、猴子、大猩猩、黑猩猩、大鼠、小鼠、兔、绵羊、山羊、美洲驼、大熊猫、狮、虎、鸵鸟、河马、犀牛、长颈鹿、仓鼠或沙鼠。

项22.根据项1-21中任一项所述的组合物，其中所述创伤是禽类的创伤。

项23.根据项22所述的组合物，其中所述禽类为鸡、鸭、火鸡、鸵鸟或鹅。

项24.根据项1-23中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少一种淀粉酶、包含胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的蛋白酶混合物和至少一种脂肪酶。

项25.根据项1-24中任一项所述的组合物，其中所述药物组合物包含至少一种蛋白酶和至少一种脂肪酶，并且其中总蛋白酶与总脂肪酶(以USP单位计)之比为约1:1至约20:1。

项26.根据项25所述的组合物，其中蛋白酶与脂肪酶(以USP单位计)之比为约4:1至约10:1。

项27.根据项1-24中任一项所述的组合物，其中蛋白酶与脂肪酶与淀粉酶之比为7:1:4。

项28.根据项27所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约105,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约60,000USP单位的淀粉酶。

项29.根据项27所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约210,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约120,000USP单位的淀粉酶。

项30.根据项27所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约119,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约68,000USP单位的淀粉酶。

项31.根据项27所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约224,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约132,000USP单位的淀粉酶。

项32.根据项1-31中任一项所述的组合物，其中所述组合物为选自乳膏剂、洗剂、乳剂、粉剂、液体剂、凝胶剂及其任意组合的剂量制剂。

项33.根据项1-32中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种赋形剂包含水、盐水、林格溶液、右旋糖、乙醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、聚乙二醇(PEG)、磷酸盐、醋酸盐、明胶、胶原蛋白、植物油、白凡士林，或其组合。

项34.根据项1-33中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含一种或多种合适的防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、抗微生物剂、缓冲剂或其组合。

项35.一种局部创伤愈合组合物，其包含：在白凡士林基质中的约25至约700,000USP单位的蛋白酶、约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶。

项36.一种局部创伤愈合组合物，其包含：在约30克白凡士林基质中的约122,130USP单位的蛋白酶、约17,110USP单位的脂肪酶和约73,750USP单位的淀粉酶。

项37.一种局部创伤愈合组合物，其包含：在约30克白凡士林基质中的约238,050USP单位的蛋白酶、约33,350USP单位的脂肪酶和约143,750USP单位的淀粉酶。

项38.一种局部创伤愈合组合物，其包含：在约30克白凡士林基质中的约459,540USP单位的蛋白酶、约64,380USP单位的脂肪酶和约277,500USP单位的淀粉酶。

项39.如项1-38中任一项所述的组合物在配制用于创伤愈合的药物中的用途。

项40.一种治愈受试者的创伤的方法，该方法包括将用于创伤愈合的局部药物组合物施加于创伤，该局部药物组合物包含治疗有效量的一种或多种消化酶和一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含约25至约700,000USP单位的蛋白酶、约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

项41.一种治愈受试者的创伤的方法，该方法包括施加用于创伤愈合的局部药物组合物，该局部药物组合物包含治疗有效量的一种或多种消化酶和任选的一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含至少约100,000USP单位的蛋白酶，至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约70,000USP单位的淀粉酶。

项42.根据项41所述的方法，其中所述消化酶包含至少约200,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约140,000USP单位的淀粉酶。

项43.根据项41所述的方法，其中所述消化酶包含至少约450,000USP单位的蛋白酶、至少约60,000USP单位的脂肪酶和至少约270,000USP单位的淀粉酶。

项44.根据项41所述的方法，其中所述消化酶包含至少约122,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约73,000USP单位的淀粉酶。

项45.根据项41所述的方法，其中所述消化酶包含至少约238,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约143,000USP单位的淀粉酶。

项46.根据项41所述的方法，其中所述消化酶包含至少约459,000USP单位的蛋白酶、至少约64,000USP单位的脂肪酶和至少约277,000USP单位的淀粉酶。

项47.根据项40-46中任一项所述的方法，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

项48.根据项40或41所述的方法，其中所述组合物中蛋白酶与脂肪酶与淀粉酶之比为7:1:4。

项49.根据项48所述的方法，其中所述消化酶包含至少约105,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约60,000USP单位的淀粉酶。

项50.根据项48所述的方法，其中所述消化酶包含至少约210,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约120,000USP单位的淀粉酶。

项51.根据项48所述的方法，其中所述消化酶包含至少约119,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约68,000USP单位的淀粉酶。

项52.根据项48所述的方法，其中所述消化酶包含至少约224,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约132,000USP单位的淀粉酶。

项53.根据项40-52中任一项所述的方法，其中所述一种或多种赋形剂包含水、盐水、林格溶液、右旋糖、乙醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、聚乙二醇(PEG)、磷酸盐、醋酸盐、明胶、胶原蛋白、植物油、白凡士林，或其组合。

项54.根据项40或41所述的方法，其中所述组合物包含胰液素。

项55.根据项40-54中任一项所述的方法，其中与用安慰剂处理的受试者相比，所述受试者在施用所述包含消化酶的组合物之后表现出至少快约2倍的创伤愈合改善。

项56.根据项40或41所述的方法，其中所述组合物基本上由胰液素组成。

项57.根据项40-56中任一项所述的方法，其中与未用所述组合物治疗的受试者相比，所述受试者在施用所述组合物之后表现出至少快约2倍的创伤愈合改善。

项58.根据项40-57中任一项所述的方法，其中所述组合物基本上由消化酶组成。

项59.根据项40-58中任一项所述的方法，其中所述组合物包含：在白凡士林基质中的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。

项60.根据项40-58中任一项所述的方法，其中所述赋形剂为白凡士林。

项61.根据项40-560中任一项所述的方法，其中所述创伤为外科创伤。

项62.根据项40-61中任一项所述的方法，其中所述表皮生理反应包括表皮增生、短期纤维化沉积、白细胞的募集和/或免疫系统的激活。

项63.一种用于在受试者中刺激表皮细胞、导致短期纤维化沉积、防止创伤重新裂开、募集白细胞以帮助生长因子和免疫系统的激活(酶的抗生效应)、诱导毛发再生长、减少脱发、增强超出正常修复过程之外的表皮修复和完整性或其组合的方法，该方法包括用治疗有效量的包含一种或多种消化酶和一种或多种赋形剂的组合物接触创伤，其中所述消化酶包含约25至约700,000USP单位的蛋白酶、约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶。

项64.一种治愈受试者的创伤的方法，该方法包括施加用于创伤愈合的局部药物组合物，该局部药物组合物包含治疗有效量的一种或多种消化酶和任选的一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含至少约100,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约70,000USP单位的淀粉酶。

项65.根据项64所述的方法，其中所述消化酶包含至少约200,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约140,000USP单位的淀粉酶。

项66.根据项64所述的方法，其中所述消化酶包含至少约450,000USP单位的蛋白酶、至少约60,000USP单位的脂肪酶和至少约270,000USP单位的淀粉酶。

项67.根据项64所述的方法，其中所述消化酶包含至少约122,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约73,000USP单位的淀粉酶。

项68.根据项64所述的方法，其中所述消化酶包含至少约238,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约143,000USP单位的淀粉酶。

项69.根据项64所述的方法，其中所述消化酶包含至少约459,000USP单位的蛋白酶、至少约64,000USP单位的脂肪酶和至少约277,000USP单位的淀粉酶。

项70.根据项63-61中任一项所述的方法，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

项71.根据项63-70中任一项所述的方法，其中所述组合物包含：蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。

项72.根据项63或4所述的方法，其中所述组合物包含：在白凡士林基质中的约25至约700,000USP单位的蛋白酶、约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶。

项73.根据项63或64所述的方法，其中所述创伤是外科创伤。

项74.根据项63或64所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

项75.根据项74所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

项76.根据项63或64所述的方法，其中所述组合物在约30克白凡士林的基质中包含约122,130USP单位的蛋白酶、约17,110USP单位的脂肪酶和约73,750USP单位的淀粉酶。

项77.根据项63或64所述的方法，其中所述组合物在约30克白凡士林的基质中包含约238,050USP单位的蛋白酶、约33,350USP单位的脂肪酶和约143,750USP单位的淀粉酶。

项78.根据项63或64所述的方法，其中所述组合物在约30克白凡士林的基质中包含约459,540USP单位的蛋白酶、约64,380USP单位的脂肪酶和约277,500USP单位的淀粉酶。

项79.根据项63-78中任一项所述的方法，其中所述一种或多种赋形剂包含水、盐水、林格溶液、右旋糖、乙醇、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、聚乙二醇(PEG)、磷酸盐、醋酸盐、明胶、胶原蛋白、植物油、白凡士林，或其组合。

项80.根据项63或64所述的方法，其中所述组合物包含胰液素。

项81.根据项63或64所述的方法，其中所述组合物基本上由胰液素组成。

项82.根据项63或64所述的方法，其中所述组合物中蛋白酶与脂肪酶与淀粉酶之比为7:1:4。

项83.根据项82所述的方法，其中所述消化酶包含至少约105,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约60,000USP单位的淀粉酶。

项84.根据项82所述的方法，其中所述消化酶包含至少约210,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约120,000USP单位的淀粉酶。

项85.根据项82所述的方法，其中所述消化酶包含至少约119,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约68,000USP单位的淀粉酶。

项86.根据项82所述的方法，其中所述消化酶包含至少约224,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约132,000USP单位的淀粉酶。

虽然本文已经示出和描述了优选的实施方案，但本领域技术人员将会明白这些实施方案仅以举例的方式提供。在不背离这些实施方案的情况下，本领域技术人员将会想到许多变更、变化和替代。应当理解，本文所述实施方案的多种替代方案可用于实施本文所述的方法。以下权利要求旨在限定实施方案的范围，由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等价方案。

Claims (10)

1.一种局部创伤愈合药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种消化酶和一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含约25至约700,000USP单位的蛋白酶、约2至约100,000USP单位的脂肪酶和约25至约400,000USP单位的淀粉酶，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

2.一种局部创伤愈合药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种消化酶和任选的一种或多种赋形剂，其中所述消化酶包含至少约100,000USP单位的蛋白酶、至少约15,000USP单位的脂肪酶和至少约70,000USP单位的淀粉酶。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约200,000USP单位的蛋白酶、至少约30,000USP单位的脂肪酶和至少约140,000USP单位的淀粉酶。

4.根据权利要求2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约450,000USP单位的蛋白酶、至少约60,000USP单位的脂肪酶和至少约270,000USP单位的淀粉酶。

5.根据权利要求2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约122,000USP单位的蛋白酶、至少约17,000USP单位的脂肪酶和至少约73,000USP单位的淀粉酶。

6.根据权利要求2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约238,000USP单位的蛋白酶、至少约33,000USP单位的脂肪酶和至少约143,000USP单位的淀粉酶。

7.根据权利要求2所述的组合物，其中所述消化酶包含至少约459,000USP单位的蛋白酶、至少约64,000USP单位的脂肪酶和至少约277,000USP单位的淀粉酶。

8.根据权利要求2-7所述的组合物，其中所述治疗有效量的所述一种或多种消化酶足以诱导有利的表皮生理反应。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述治疗有效量的一种或多种消化酶基本上由蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶组成。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种消化酶还包含选自纤维素酶、蔗糖酶、麦芽糖酶和木瓜蛋白酶的一种或多种酶。