CN107106686A

CN107106686A - Hbv和hdv感染的联合治疗

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Publication number: CN107106686A
Application number: CN201580054357.0A
Authority: CN
Inventors: A·亚里山德罗夫
Original assignee: Myr GmbH
Current assignee: Myr GmbH
Priority date: 2014-10-07
Filing date: 2015-10-07
Publication date: 2017-08-29
Anticipated expiration: 2035-10-07
Also published as: WO2016055534A3; EP3204030A2; KR20230156963A; EP3204030B1; WO2016055534A2; PT3204030T; CA2959465C; PL3204030T3; CA3175236A1; ES2922883T3; CA3175236C; CN107106686B; CA3175242A1; SI3204030T1; CA2959465A1; US20180228804A1; KR20170066339A; US20220040178A1; CN115920061A; EP4098273A1

Abstract

本发明提供一种组合物，其包含Na+‑牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的抑制剂和活性成分，所述活性成分选自核苷类似物如拉米夫定、替比夫定或恩替卡韦，核苷酸类似物如替诺福韦、阿德福韦和免疫调节剂如干扰素α。NTCP抑制剂抑制HBV/HDV进入细胞，并且优选衍生自HBV前S1肽。还提供了治疗HBV和HDV感染、乙型和丁型肝炎或慢性乙型肝炎和丁型肝炎的方法。

Description

HBV和HDV感染的联合治疗

发明领域

本发明涉及用于治疗由乙型肝炎病毒(HBV)和丁型肝炎病毒(HDV)引起的感染，特别是乙型和丁型肝炎的新型组合物。该组合物包含如下物质的组合：作为HBV/HDV进入抑制剂的药剂，和核苷酸/核苷类似物(NUC)或免疫调节剂如干扰素。

发明背景

与乙型肝炎病毒相关的流行病学和医学问题

乙型肝炎是由HBV引起的潜在的危及生命的肝脏感染。全球约有20亿人被HBV感染，而超过3.5亿人患有慢性肝脏感染(WHO资料页，2008)。

慢性乙型肝炎(CHB)是严重的全球公共卫生问题。HBV相关性慢性肝病每年造成120万人死亡，导致全世界第十大死因(Lavanchy，2004)。没有适当的治疗，长期感染的15-25％将由于慢性肝病的严重和致命并发症而过早死亡(CDC资料页，2006)。实际上，只有相对较小比例的受影响患者接受药物治疗。

与丁型肝炎病毒相关的流行病学和医学问题

长期HBV感染的约5％具有HDV共感染(Taylor，2006)。HDV是一种小的RNA病毒，需要HBV的辅助功能用于病毒体装配和繁殖，并利用HBV包膜进行病毒释放和感染新细胞。针对HBV的免疫也可以防止HDV感染。与单独的HBV感染相比，HDV的存在与肝脏疾病的更严重和快速的进展相关。在HBV/HDV共感染中，肝硬化和癌症发生早10-15年，共感染个体的5年死亡率是HBV单感染的两倍(德国HBV感染预防、诊断和治疗指南，2007)。

HDV共感染患者的治疗选择非常有限。只有干扰素在一小部分患者中表现出一定程度的疗效，其中有约25％的病毒学和生物化学响应。针对HBV的抗病毒药物对HDV无效(Taylor，2006)。

治疗目的

存在关于HBV感染的数个国家级指南，并且欧洲肝脏研究协会(EASL)临床实践指南最近已公布(“肝病学杂志”，2009年)。根据该指南，乙型肝炎治疗的目标是通过防止疾病进展为肝硬化、终末期肝病、肝癌和死亡而提高生活质量和生存质量。治疗的理想终点是伴有或不伴有抗HBs的血清转换的持续乙型肝炎病毒s抗原(HBsAg)损失。这与CHB的活动的完全和明确的缓解和改善的长期结果有关。然而，这一目标只能在少数可用治疗的患者中实现。因此，对于乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性患者来说，持久的HBeAg血清转换是下一个最理想的目标；在不能实现HBeAg血清转换的HBeAg阳性患者或HBeAg阴性患者中，维持不可检测的DNA水平是下一个最理想的目标。

HBV病毒

乙型肝炎病毒(HBV)是小型包膜DNA病毒，通过在受感染肝细胞的细胞质中的前基因组RNA转录物的逆转录来复制其基因组。它们分为家族肝炎病毒科(Hepadnaviridae)，且适应哺乳动物(灵长类动物和啮齿动物)和鸟类，导致急性和持续性感染。由HBV易感细胞系HepaRG和基于原代人肝细胞(PHH)和树鼩(Tupaia belangeri)初级肝细胞的系统的研究显示，病毒感染性可以分配到三种病毒包膜蛋白中的两种中的不同亚结构域。三种HBV包膜蛋白称为L(大)、M(中)和S(小)。它们形成蛋白质性质的外部病毒壳，其被嵌入内质网(ER)衍生的脂质双层中。它们的编码mRNA起源于一个开放阅读框架。由于它们的三个起始密码子是同相(in phase)的，它们共享C末端226个氨基酸长的S-结构域，其通过四个推定的跨膜螺旋(TM结构域)将蛋白质锚定在脂质双层中。S蛋白驱动颗粒形成，因此在病毒组装中起重要作用。S结构域进一步被证明参与病毒入侵。与S结构域的N末端连接，M和L蛋白具有两个亲水性延伸，一个为55个氨基酸，根据基因型，另一个为108个(基因型D)、118个(基因型E和G)或119个(基因型A，B，C，F，H)氨基酸，分别称为前S2(M)和前-S1(L)。所有肝炎病毒的L蛋白均含有N-肉豆蔻酰转移酶的识别基序，因此经历该修饰。L中缺乏典型的分泌信号，导致其前S结构域的初始细胞质取向。合成后，肉豆蔻酰化，以及TM螺旋向ER膜中的纳入，L的前S结构域穿过脂质双层，允许其部分在颗粒外部变得可及。在病毒粒子中，L、M和S蛋白的化学计量比为约1:1:4，而分泌更多的非感染性亚病毒颗粒(SVP)几乎仅包含S蛋白和仅有痕量的L蛋白。

已经在L、M和S蛋白内鉴定了病毒附着、特异性受体结合或融合的关键要素。发现L的肉豆蔻酰化对于病毒感染是强制性的(6,16)。然而，N末端肉豆蔻酸部分在抑制活性中的要求在某种程度上是可变的。通过其它疏水饱和和不饱和脂肪酸部分或甚至通过胆固醇代替肉豆蔻酸允许根据相对疏水性调节特异活性。因此，亲脂性本身且不是特定的脂质结构似乎在该分子的这部分中起关键作用。

在残基1至78的N末端前S1序列内的5个氨基酸的连续缺失消除了HBV感染性。相比之下，前S2结构域的大多数部分对于感染而言是非必要的。使用HDV，这些结果得到确认，表明这两种病毒共有非常相似的进入模式。进一步发现，作为HBV L蛋白或S蛋白的一部分的S结构域是病毒包膜的主要成分，是感染性所需的。在由残基1至78组成的前S1感染性决定簇内鉴定出两个可分离且不同的功能：一个与通过用肝细胞特异性受体的肽干扰的抑制活性相关，另一个涉及氨基酸49至78且尚不知晓。

目前的HBV疗法

用于治疗慢性HBV感染的批准药物属于两类：抗病毒剂和免疫调节剂如干扰素。

目前可用的所有HBV抗病毒药物均属于核苷/核苷酸类似物(NUC)类别，并作为聚合酶抑制剂。最近批准的恩替卡韦和替诺福韦被认为优于其它批准的药物(拉米夫定，阿德福韦酯和替比夫定)，这归因于治疗原初患者的较高效力以及对于抗性的较高遗传屏障。目前，所有经批准的抗HBV药物都表现出良好的安全性。

所有这些产品阻止病毒复制并导致血浆病毒DNA的快速降低。患者也可能从肝脏组织学的改善中获益。然而，HBV治疗的最终目标，HBsAg血清转换，在两年后只有4％的替诺福韦患者实现，而其它药物(德国HBV感染诊断和诊治指南，2007年)甚至更低。此外，70％的拉米夫定治疗患者在治疗5年后对药物产生耐药性。对于阿德福韦来说，耐药性发展较慢，18％的患者在4年后出现耐药。对于恩替卡韦，这一数字在对原初患者进行6年的治疗中为1.5％。然而，对于核苷/核苷酸类似物的耐药性的大批患者将在未来几年内积累，尤其是随着以前用拉米夫定治疗的患者发展出对恩替卡韦的较高水平的耐药性。逆转录酶抑制剂不阻止在原初肝细胞中建立cccDNA(共价闭合的环状DNA)。

干扰素-α(INFa)作为一种免疫调节剂，其作用模式复杂且尚不完全了解，其涉及激活免疫系统以消除感染的肝细胞。几种制剂以每周两次或三次的5-10mg单位的通常剂量进行销售。可获得的还有具有皮下贮库延迟释放的聚乙二醇化形式，其允许以更加患者友好的方式应用，每周仅一次。所有干扰素治疗均通过皮下注射给药。干扰素治疗慢性乙型肝炎的主要缺点是中度功效(治疗48周后，总体HBsAg血清学转换率约3-6％，不可检测的HBVDNA约20％，取决于HBV基因型：Lau等，2005；Fink等，2006)和显著副作用的组合。这些可能包括细胞因子综合征，严重抑郁症和自杀，并且由相当一部分患者群体所经历。干扰素是在HBV/HDV共感染中显示一些治疗效果的唯一治疗方法。然而，在该群体中的疗效相当有限，只有25％表现出持续的病毒学和生物化学反应(采访德国汉诺威医学院的H.Wedemeyer博士)。

因此，目前用于慢性乙型肝炎的疗法极少引起血清学治愈，因此通常需要用HBV聚合酶抑制剂进行长期治疗。缺乏用于大多数丁型肝炎患者的有效治疗方法。

HBV/HDV进入抑制剂

最近已经描述了一个新类别的抗HBV和HDV分子，病毒进入抑制剂。其假定的抗病毒作用机制是以高度特异性，高度稳定地结合到位于分化的肝细胞的基底侧膜的Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)，一种钠/胆汁酸共转运蛋白(也称为肝胆汁酸转运蛋白(LBAT))。NTCP结合导致病毒和细胞膜的生产性融合被破坏，从而防止细胞的感染。这种独特的作用机制允许解决两个最重要的医疗需求，即长期的HBV消除以及针对丁型肝炎(或丁型肝炎(delta))病毒(HDV)的抗病毒活性。

病毒进入抑制剂衍生自大(L)HBV表面蛋白的N末端结构域，前S1。HBV/HDV进入抑制剂的一个实例是衍生自大(L)HBV表面蛋白的前S1结构域的线性47-氨基酸化学合成的肽(商品名为Myrcludex B)，其由天然产生的L氨基酸组成，具有N-末端肉豆蔻酰部分和C-末端羧酰胺。

联合治疗

在医疗界，在有限的治疗疗程后，人们针对HBsAg损失的联合治疗有很大的兴趣。然而，在HBV和HDV感染中使用干扰素与核苷/核苷酸的组合试验的结果目前令人失望。因此，将聚乙二醇化的干扰素-α与核苷类似物拉米夫定组合不会产生功效的增加(Lau等，2005)。

总而言之，对HBV和HDV感染和所导致的疾病的进一步疗法的需求尚未被满足。特别地，这样的疗法应针对HBsAg损失，利用或不利用向抗HBs抗体的血清学转换，这是最接近完全治愈的效果。

发明内容

本发明基于以下发现：HBV/HDV前S1进入抑制剂与核苷酸/核苷类似物或免疫调节剂如干扰素的组合导致丁型肝炎中的HDV RNA和/或乙型和丁型肝炎中的HBsAg的降低或丧失。本发明提供了对于HBV/HDV感染、乙型或丁型肝炎或慢性乙型或丁型肝炎的新型联合疗法。

一方面，提供了包含Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的抑制剂和选自核苷酸类似物、核苷类似物和免疫调节剂的其它活性成分的合并物或组合物。合并物或组合物可以包含多于一种其它活性成分。组合物还可以包含药学上可接受的赋形剂，载体等。

NTCP抑制剂可以是小分子或前S1肽抑制剂，其中前S1肽抑制剂包含HBV病毒的前S1肽或其功能片段。可以例如基于其结合NTCP、抑制NTCP或抑制HBV/HDV细胞进入的能力来评估片段的功能性。优选的NTCP抑制剂是前S1肽抑制剂。

HBV病毒可能是任何HBV病毒，例如乙型肝炎病毒株α1、HBV株LSH、土拨鼠HBV、绒毛猴HBV(WMHBV)、HBV亚型AD、ADR、ADW、ADYW、AR或AYW或HBV基因型A至H。

前S1肽抑制剂可以至少包含HBV病毒的前S1肽的氨基酸2至9和/或11至15。或者，前S1肽抑制剂可以至少包含HBV病毒的前S1肽的氨基酸9至15或11至15。前S1肽抑制剂可包含HBV病毒的前S1肽的氨基酸2至48或2至21或由其组成。

示例性的前S1肽抑制剂包含HBV前-S1共有序列的位置2和48之间的氨基酸序列：

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFRA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG

(SEQ ID NO:12),或

HBV前-S1基因型C序列的2至48位的氨基酸序列：

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN QVG

(SEQ ID NO:14),或

HBV前-S1基因型C序列的2至48位的氨基酸序列，其中第46位具有氨基酸取代(Gin(Q)→Lys(K))：

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG

(SEQ ID NO:13),或

HBV前-S1基因型D序列的2至48位的氨基酸序列：

GQNL STSNP LGFFP DHQLD PAFRA NTANP DWDFN PNKDT WPDAN KVG(SEQ ID NO:5)。

前S1肽抑制剂可以在N末端被疏水部分修饰。疏水部分修饰可以通过酰化，例如用肉豆蔻酰或硬脂酰进行酰化。

优选的前S1肽抑制剂具有氨基酸序列：

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG(SEQ ID NO:13),

其中该肽在N末端被肉豆蔻酰修饰。

优选的前S1肽抑制剂是具有以下化学式的Myrcludex B：

N-肉豆蔻酰-甘氨酰-L-苏氨酰-L-天冬酰胺酰-L-亮氨酰-L-丝氨酰-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-天冬酰胺酰-L-脯氨酰-L-亮氨酰-甘氨酰-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-脯氨酰-L-天冬氨酰-L-组氨酰-L-谷氨酰胺酰-L-亮氨酰-L-天冬氨酰-L-脯氨酰-L-丙氨酰-L-苯丙氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-丝氨酰-L-天冬酰胺酰-L-天冬酰胺酰-L-脯氨酰-L-天冬氨酰-L-色氨酰-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-脯氨酰-L-天冬酰胺酰-L-赖氨酰-L-天冬氨酰-L-组氨酰-L-色氨酰-L-脯氨酰-L-谷氨酰-L-丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-赖氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰胺，乙酸盐。

可以在C末端或其它地方修饰该前S1肽抑制剂以保护该肽免于降解。可用于此目的的示例性部分是D-氨基酸、环状氨基酸、修饰的氨基酸、天然或合成聚合物如聚乙二醇(PEG)。

以下，可将上述的NTCP抑制剂(包括前S1肽抑制剂)称为抑制剂。该名称包括本发明的所有NTCP抑制剂，优选前S1肽抑制剂。

免疫调节剂可以是治疗性疫苗、佐剂或干扰素，例如干扰素α(IFNa)，例如干扰素α2a或干扰素α2b。组合物中的干扰素可以是聚乙二醇化的干扰素(PEG-IFN)。

核苷类似物可以是拉米夫定、替比夫定或恩替卡韦。

核苷酸类似物可以是替诺福韦或阿德福韦。

以下将上述其它活性成分称为其它活性成分或其它活性剂。该名称包括本发明的所有核苷类似物、核苷酸类似物和免疫调节剂。

在本发明的合并物或组合物中可以使用两种或更多种上述其它活性成分。

因此，提供包括以下成分的组合和组合物：

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和IFNa或PEG-IFNa；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和拉米夫定；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和替比夫定；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和恩替卡韦；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和替诺福韦；或

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和阿德福韦。

合并物或组合物中Myrcludex B的单位剂量可以为0.5mg至20mg，例如1mg，2mg，3mg，4mg，5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg，优选2mg，5mg或10mg。

合并物或组合物中的干扰素或聚乙二醇化的干扰素的联合剂量(unite dose)可以在10μg和300μg之间，例如10μg，30μg，50μg，70μg，90μg，100μg，120μg，130μg，140μg，150μg，160μg，170μg，180μg，190μg，200μg，210μg，220μg，230μg，240μg，250μg，260μg，270μg，280μg，290μg或300μg，优选为180μg。

合并物或组合物中拉米夫定的单位剂量可以为10mg至100mg，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg，优选100mg。

合并物或组合物中恩替卡韦的单位剂量可以为0.1mg至10mg，例如0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，7.0mg，8.0mg，9.0mg，10.0mg，优选0.5mg或1.0mg。

合并物或组合物中替比夫定的单位剂量可以为100mg至1000mg，例如100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1000mg mg，优选500mg，600mg或700mg。

合并物或组合物中替诺福韦的联合剂量可以为100mg至1000mg，例如100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1000mg mg，优选200mg，250mg，245mg或300mg。

合并物或组合物中阿德福韦的联合剂量可以为5mg至20mg，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg，优选10mg。

另一方面，本发明提供了用于治疗对象HBV或HDV感染、乙型肝炎、慢性乙型肝炎、丁型肝炎或慢性乙型肝炎的方法的如上定义的合并物或组合物。

另一方面，本发明提供了用于治疗对象中HBV或HDV感染、乙型肝炎、慢性乙型肝炎、丁型肝炎或慢性乙型肝炎的方法的前S1肽抑制剂，其中所述方法包括施用其它活性成分，其中所述其它活性成分选自免疫调节剂，优选干扰素；核苷酸类似物，优选替诺福韦或阿德福韦；和核苷类似物，优选拉米夫定、替比夫定和恩替卡韦。

另一方面，本发明提供一种治疗对象中HBV或HDV感染、乙型肝炎、慢性乙型肝炎、丁型肝炎或慢性戊型肝炎的方法，其包括向所述对象施用Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)，优选前S1肽抑制剂，以及选自核苷酸类似物、核苷类似物和免疫调节剂的其它活性成分。

所述抑制剂和所述其它活性成分可以作为上述合并物或组合物提供。在该方法中可以使用多于一种的其它活性成分。

因此，所述方法可以例如包括施用：

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和IFNa或PEG-IFNa；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和拉米夫定；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和替比夫定；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和恩替卡韦；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和替诺福韦；或

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和阿德福韦。

该方法可包括：

以0.5至20mg/天，例如每天1mg，2mg，3mg，4mg，5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg/天，优选2mg，5mg或10mg/天的剂量施用前S1肽抑制剂，用于针对HDV和HBV感染，

和，进一步施用一种或多种以下其它活性成分：

以每周10μg至300μg的剂量施用聚乙二醇化的干扰素，例如10μg，30μg，50μg，70μg，90μg，100μg，120μg，130μg，140μg，150μg，160μg，170μg，180μg，190μg，200μg，210μg，220μg，230μg，240μg，250μg，260μg，270μg，280μg，290μg或300μg/周，优选180μg/周。每周剂量可以每周施用一次或每周施用数次，例如每周或每天施用两次或三次，其剂量经确定例如加和为所述每周剂量。

拉米夫定，剂量为每天10mg至100mg，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg，优选为100mg/天；

恩替卡韦，剂量为每天0.1mg至10mg，例如0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，7.0mg，8.0mg，9.0mg，10.0mg/天，优选0.5mg或1.0mg/天；

替比夫定，剂量为每天100mg至1000mg，例如100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1000mg/天，优选500mg，600mg或700mg/天；

施用替诺福韦，剂量为每天100mg至1000mg，例如100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1000mg/天，优选200mg，250mg，245mg或300mg/天；

以每天5mg至20mg的剂量施用阿德福韦，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg/天，优选10mg/天；和/或

可以依次施用本发明的抑制剂和其它活性成分。例如，抑制剂可以施用至少一个周期或包含一个或多个周期(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10个周期)的疗程，然后施用其它活性成分至少一个周期或包含一个或多个周期(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10个周期)的疗程。一个周期的持续时间可以是1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12周。一个周期的持续时间可以至少是1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12周。一个疗程的持续时间可能是12周，24周，36周，48周，60周，1年，1.1年，1.2年，1.3年，1.4年，1.5年，1.6年，1.7年，1.8年，1.8年，1.9年，或2.0年，或3年，或4年。

本发明的抑制剂和其它活性成分可以同时/伴随施用。根据该给药方案，抑制剂的施用与其它活性成分的施用及时重叠。抑制剂和其它活性成分的施用的持续时间可以相同或基本相同。例如，抑制剂和其它活性成分可以施用至少一个周期或包含一个或多个周期(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10个周期)的疗程。一个周期的持续时间可以是1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12周。一个周期的持续时间可以至少是1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12周。一个过程的持续时间可能是12周，24周，36周，48周，60周，1年，1.1年，1.2年，1.3年，1.4年，1.5年，1.6年，1.7年，1.8年，1.8年，1.9年，或2.0年，或3年，或4年。例如，24周的MyrcludesB疗程可以与24周的PEG-IFNa疗程同时进行。种该给药方案中，Myrcludex B可以每天施用，而PEG-IFNa可以每周施用。在该给药方案中，可以同时施用抑制剂和其它活性成分，例如以基本上相同的时间或在单一组合物中。

取决于成分的类型，抑制剂和其它活性成分可以通过各种递送途径递送。给药途径包括肠内途径(例如，经口和直肠)，胃肠外途径(例如静脉内，肌肉内，皮下腹膜内)，局部途径。优选地，前S1肽抑制剂皮下递送。优选地，PEG-IFNa皮下递送。

该方法可用于人类治疗。

附图说明

图1.人类HBV基因型A至H和黑猩猩、大猩猩和绒毛猴乙型肝炎病毒的序列比对。短(残基2至48)和长(残基-11至48)源自HBV基因型A至H的共有序列，示于中间。相同的氨基酸用深灰色框标记。用于共有序列的不相同的氨基酸用浅灰色框标记。

发明详述

本发明基于以下发现：HBV/HDV前S1进入抑制剂与核苷酸/核苷类似物或免疫调节剂如干扰素的组合导致丁型肝炎中的HDV RNA和/或乙型和丁型肝炎中的HBsAg的降低或丧失。

一方面，本发明涉及合并物和组合物，优选药物组合物，其包含Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的抑制剂和至少一种其它活性成分，所述至少一种活性成分选自核苷酸类似物、核苷类似物和免疫调节剂。NTCP抑制剂可以抑制HBV/HDV细胞进入，也可以称为进入抑制剂。

合并物或组合物可以包含多于一种其它活性成分。组合物还可以包含药学上可接受的赋形剂，载体等。组合物也可以称为药物组合物。

在组合中，单独的活性成分，即所述Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)抑制剂和一种或多种所述活性成分在分开的小瓶中提供。在组合物中，单独的活性成分，即所述Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)抑制剂和一种或多种所述活性成分在单个小瓶中提供。

本发明的HBV/HDV进入抑制剂是能够抑制病毒进入细胞如肝细胞的化合物。特别地，HBV/HDV进入抑制剂能够结合并抑制细胞表面的NTCP受体。因此，HBV/HDV进入抑制剂优选为NTCP抑制剂。

在一个实施方案中，HBV/HDV进入抑制剂可以衍生自任何HBV病毒，特别是任何HBV株、基因型或亚型的大(L)HBV表面蛋白的N-末端结构域，前S1。HBV病毒株的例子有HBV病毒株α1，乙肝病毒株LSH(黑猩猩分离株)，土拨鼠HBV，绒毛猴HBV(WMHBV)。HBV亚型AD，ADR，ADW，ADYW，AR和AYW的例子。HBV基因型的实例是人类HBV的基因型A至H。根据标准的HBV命名法，前S1肽具有-11和108之间的氨基酸坐标。

图1中提供了各种人类基因型的位置-11和48之间的前S1肽的氨基酸以及从黑猩猩、大猩猩和绒毛猴分离的乙型肝炎病毒的前S1肽的相应序列的序列比对。HBV基因型A至H的比对显示，与基因型D相比，所有其它基因型均含有额外的10(E和G)或11(A，B，C，F和H)N末端前S1氨基酸。因此，取决于病毒株、基因型或亚型，病毒前S1肽可以具有不同的氨基酸坐标并因此具有不同的长度。

序列比对也表明各种基因型的前S1肽与肽长度共有保守区。高度保守的区域位于氨基酸位置9至21之间。此外，个体高度保守的氨基酸位于氨基酸2和6之间。这些保守序列也存在于从黑猩猩，大猩猩和绒毛猴分离的乙型肝炎病毒中。

实验证据表明，合成的HBV前S1衍生肽干扰HBV感染的能力取决于保守的前S1区域内部分氨基酸的存在(Schulze等，2010)。因此，对于肽活性而言重要的是前S1的氨基酸位置11和15之间的区域，特别是该区域内的氨基酸11,12,13,14和/或15。此外，在位置2和9之间的区域内的一些氨基酸的替代降低了前S1肽的HBV抑制活性，因此氨基酸9似乎是必需的。可能有助于HBV前S1衍生肽的抑制活性的其它区域是氨基酸2至8,16至20，并且在较不显着的程度上为34至48。

因此，前S1肽衍生的HBV/HDV进入抑制剂(以下称为前S1肽抑制剂)可以跨越HBV前-S1的氨基酸-11至108(整个HBV前-S1)或该区域内的任何部分。以下将参考标准的HBV氨基酸编号。特别地，前S1肽抑制剂可以跨越氨基酸-11至78。在一些基因型中，前10位(基因型E和G)或11(基因型A，B，C，F和H)氨基酸不存在。因此，前S1肽抑制剂可以跨越HBV的1至78个氨基酸。超过氨基酸48的，即氨基酸49至108的一个或多个氨基酸可以不存在。因此，前S1肽抑制剂可以跨越氨基酸-11至48。在-11至48的范围内，可以省去前1,2,3,4,5,6,7,8,9,10或11个氨基酸。因此，前S1肽抑制剂可以跨越氨基酸1至48。氨基酸1(Met)可能不存在。各种前S1肽抑制剂可以跨越氨基酸2至48，并任选地在C-末端包含其它氨基酸。在2至48的范围内，氨基酸2至21和34至48对于前S1肽抑制剂功能比21至33氨基酸更重要。氨基酸9至15，特别是11至15是最重要的。因此，前S1肽抑制剂可以由氨基酸2至48或其截短的部分组成。或者，前S1肽抑制剂可以包含氨基酸2至48或其截短部分。

截短部分可以通过从前S1肽的任一端的氨基酸缺失获得，并且具有46至5个氨基酸的长度。具体地，截短部分的长度可为47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6或5个氨基酸。

截短部分优选包含氨基酸9至15、10至15或11至15。截短部分优选由氨基酸11至15组成。通过加入侧接酸11至15的氨基酸可以逐渐延伸截短部分。例如，截短部分可以由氨基酸2至15、3至15、4至15、5至15、6至15、7至15、8至15、9至15或10至15组成。在该示例中可以使用任何氨基酸16至48来提供进一步的截短部分。

在另一个实例中，截短部分可以由氨基酸2至15、2至16、2至17、2至18、2至19、2至20、2至21、2至22、2至23、2至24、2至25、2至26、2至27、2至28、2至29、2至30、2至31、2至32、2至33、2至34、2至35、2至36、2至37、2至38、2至39、2至40、2至41 2至42、2至43、2至44、2至45、2至45、2至46、2至47或2至48组成。在该示例中可以使用氨基酸3至11的任何来提供进一步的截短部分。

截短部分的其它示例是氨基酸9至15、2至21、5至21、2至15、2至20、2至25、2至30、2至35、2至40。

前S1肽的截短部分可以是保留前S1肽在抑制HBV细胞进入、结合和/或抑制NTCT(一种必需的HBV受体)的功能的前S1肽的功能片段。

前S1肽抑制剂衍生自各种HBV病毒的前S1肽，例如各种基因型、毒株或亚型。特别地，前S1肽抑制剂可以衍生自基因型A，B，C，D，E，F，G或H的前S1或亚型AD，ADR，ADW，ADYW，AR和AYW的前S1。来自各种HBV病毒的前S1肽通常是同源物。来自各种物种的同源物具有结构和功能相似性，通常共有共同的进化祖先。可以设想，将来鉴定的其它基因型、菌株或亚型的前Sl同源物同样适合作为前S1肽抑制剂。

前S1肽抑制剂可以衍生自前S1共有序列(图1)。

各种基因型的氨基酸-11或-10或1(取决于基因型)和48之间的HBV前S1共有序列和结果序列的示例如下所示：

HBV前S1共有序列(位置(-11)至48)

(-11)-M GGWSS TPRKG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFRA NSNNP DWDFN PNKDHWPEAN KVG-48(SEQ ID NO:1)

HBV前S1基因型A序列(位置(-11)至48)

(-11)-M GGWSS KPRKG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PVKDDWPAAN QVG-48(SEQ ID NO:2)

HBV前S1基因型B序列(位置(-11)至48)

(-11)-M GGWSS KPRKG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFKA NSENP DWDLN PHKDNWPDAN KVG-48(SEQ ID NO:3)

HBV前S1基因型C序列(位置(-11)至48)

(-11)-M GGWSS KPRQG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDHWPEAN QVG-48(SEQ ID NO:4)

HBV前S1基因型D序列(位置(1)至48)

1-MGQNL STSNP LGFFP DHQLD PAFRA NTANP DWDFN PNKDT WPDAN KVG-48(SEQ IDNO:5)

HBV前S1基因型E序列(位置(-10)至48)

(-10)-MGLSW TVPLE WGKNI STTNP LGFFP DHQLD PAFRA NTRNP DWDHN PNKDHWTEAN KVG-48SEQ ID NO:6)

HBV前S1基因型F序列(位置(-11)至48)

(-11)-M GAPLS TTRRG MGQNL SVPNP LGFFP DHQLD PLFRA NSSSP DWDFN TNKDSWPMAN KVG-48(SEQ ID NO:7)

HBV前S1基因型G序列(位置(-10)至48)

(-10)-MGLSW TVPLE WGKNL SASNP LGFLP DHQLD PAFRA NTNNP DWDFN PKKDPWPEAN KVG-48(SEQ ID NO:8)

HBV前S1基因型H序列(位置(-11)至48)

(-11)-M GAPLS TARRG MGQNL SVPNP LGFFP DHQLD PLFRA NSSSP DWDFN TNKDNWPMAN KVG-48(SEQ ID NO:9)

以下提供了来自绒毛猴WMHBV的氨基酸1和48之间的前S1序列：

1-MGLNQ STFNP LGFFP SHQLD PLFKA NAGSA DWDKN PNKDP WPQAH DTA(SEQ IDNO:10)

前S1肽抑制剂可以含有一个或多个(例如，1,2,3,4,5,6,7,8,9或10个)氨基酸取代，其基本上不降低其HBV抑制活性。优选地，HBV抑制活性不应降低超过两个数量级。特别地，降低2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，17，18，19或20倍是容许的。HBV抑制活性可以根据IC₅₀或IC₉₀测量。氨基酸取代可以是保守的或非保守的。氨基酸取代优选不影响对于前S1肽抑制剂的HBV抑制活性重要的氨基酸。位于前S1跨越氨基酸2至21的高度保守部分内的单个氨基酸比该区域外的氨基酸对于活性更重要。在该区域内，氨基酸9至15甚至更为重要。其中，氨基酸9,11,12和13是最重要的。因此，氨基酸取代优选位于氨基酸11至15、9至15、5至15或2至15之外。氨基酸取代也可以位于氨基酸2至8、16至20或34至48之外。氨基酸取代可以位于氨基酸20至23、26至32内。

来自基因型C的前S1序列并含有第46位的氨基酸取代(Gin(Q)→Lys(K))的前S1序列的示例如下：

(-11)-M GGWSS KPRQG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDHWPEAN KVG-48(SEQ ID NO:11)。

优选的肽抑制剂基于HBV前Sl共有序列的氨基酸序列的位置2和48之间的前S1肽(根据标准HBV命名)：

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFRA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG(SEQ ID NO:12)。

其它优选的肽抑制剂基于HBV前Sl基因型C的氨基酸序列的位置2和48之间的前S1肽(根据标准HBV命名)：

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN QVG(SEQ ID NO:14)。

最优选的肽抑制剂基于含有第46位的氨基酸取代(Gin(Q)→Lys(K))的基因型C的氨基酸序列的位置2和48之间的前S1肽(根据标准HBV命名)：

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG(SEQ ID NO:13)。

前S1肽抑制剂可以是上述前S1抑制剂的N-末端或C-末端截短的部分，其至少为15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45或46个氨基酸。该部分保留其作为NTCP抑制剂、NTCP结合蛋白或HBV/HDV进入抑制剂的功能。

前S1肽抑制剂可具有跨基因型的抑制活性，即它们可以交叉抑制非前S1肽衍生来源的真实基因型的基因型。

前S1肽抑制剂优选是疏水性的。它们可以修饰有疏水部分。通过酰化进行疏水修饰是优选的。酰化可以用羧酸，脂肪酸或具有亲脂侧链的氨基酸进行酰化。或者，可以通过胆固醇，胆固醇衍生物，磷脂，糖脂，甘油酯，类固醇，陶瓷，异戊二烯衍生物，金刚烷，法呢醇，脂族基团或多芳族化合物来修饰前S1肽抑制剂。脂肪酸可以是饱和或不饱和脂肪酸，分支或非支链脂肪酸，优选具有8至22个碳原子。用于酰化的合适的脂肪酸的实例是肉豆蔻酸(D14)，硬脂酸(C18)，棕榈酸(C16)。疏水部分的变化允许调节特定的前S1肽活性。

疏水部分优选连接到前S1肽抑制剂的N末端。因此，疏水部分可以连接到前S1肽抑制剂的N-末端氨基酸，或与N-末端非常接近的氨基酸例如氨基酸-5，-4，-3，-2，-1，1，2，3，4或5连接。可以使用多于一个疏水部分来修饰前S1肽抑制剂。疏水部分可以相同或不同。疏水部分的连接优选通过共价结合，其可以通过氨基甲酸酯，酰胺，醚，二硫化物或本领域技术人员技能范围内的任何其它连接来实现。

优选的肽抑制剂是下述氨基酸序列的前S1肽

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG(SEQ ID NO:13),

其在N末端被肉豆蔻酰或硬脂酰修饰。

前S1肽抑制剂Myrcludex B的化学名称是

Myrcludex B的缩写化学名称是

肉豆蔻酰-Gly-Thr-Asn-Leu-Ser-Val-Pro-Asn-Pro-Leu-Gly-Phe-Phe-Pro-Asp-His-Gln-Leu-Asp-Pro-Ala-Phe-Gly-Ala-Asn-Ser-Asn-Asn-Pro-Asp-Trp-Asp-Phe-Asn-Pro-Asn-Lys-Asp-His-Trp-Pro-Glu-Ala-Asn-Lys-Val-Gly-NH2，乙酸盐。

可以进一步以常规方式修饰前S1肽抑制剂以改善肽的稳定性，例如，防止退化的稳定性。这种修饰可以包括采用酰胺，D-氨基酸，修饰的氨基酸，环状氨基酸，天然聚合物，合成聚合物或甘氨酸的修饰。

在另一个实施方案中，HBV/HDV进入抑制剂可以是小分子。

本发明的其它活性成分可以是免疫调节剂，核苷酸类似物或核苷类似物。

核苷类似物是含有核酸类似物和糖的核苷。用于治疗HBV或HDV的核苷类似物的实例是拉米夫定，替比夫定和恩替卡韦。其它核苷类似物可用于本发明的实践。

核苷酸类似物是含有核酸类似物、糖和一至三个磷酸基团的核苷酸。用于治疗HBV或HDV的核苷酸类似物的实例是替诺福韦和阿德福韦。其它核苷酸类似物可用于本发明的实践。

免疫调节剂，即具有调节对象的免疫系统活性的能力的活性成分的实例是干扰素，治疗性疫苗和佐剂。

干扰素可以是干扰素α，例如干扰素α2a或干扰素α2b。干扰素α2α和干扰素α2b的活性在HBV和HDV感染中可能相似。

干扰素可以是聚乙二醇化的，即连接到聚乙二醇(PEG)部分上。聚乙二醇化可以改善患者的药代动力学和方便性，但不影响干扰素的作用机制。此外，干扰素α2a和2b的活性在HBV和HDV感染中非常相似。

因此，提供包括以下成分的合并物和组合物：

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和IFNa或PEG-IFNa；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和拉米夫定；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和替比夫定；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和恩替卡韦；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和替诺福韦；或

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和阿德福韦。

合并物或组合物中前S1肽抑制剂如Myrcludex B的单位剂量可以为0.5mg至20mg，例如1mg，2mg，3mg，4mg，5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg，优选2mg，5mg或10mg。

合并物或组合物中的干扰素或聚乙二醇化的干扰素的联合剂量可以在10μg和300μg之间，例如10μg，30μg，50μg，70μg，90μg，100μg，120μg，130μg，140μg，150μg，160μg，170μg，180μg，190μg，200μg，210μg，220μg，230μg，240μg，250μg，260μg，270μg，280μg，290μg或300μg，优选为180μg。

合并物或组合物中拉米夫定的单位剂量可以为10mg至100mg，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg，优选50mg或100mg。

合并物或组合物中恩替卡韦的单位剂量可以为0.1mg至10mg，例如0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，7.0mg，8.0mg，9.0mg，或10.0mg，优选0.5mg或1.0mg。

本发明的示例性组合物或合并物包括：

1. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和180μg干扰素如聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)。干扰素的量也可以在10μg和300μg之间变化，并且可为例如10μg、30μg、50μg、70μg、90μg、100μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、或300μg。

2. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和180μg干扰素如聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)。干扰素的量也可以在10μg和300μg之间变化，并且可为例如10μg、30μg、50μg、70μg、90μg、100μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、或300μg。

3. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和180μg干扰素如聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)。干扰素的量也可以在10μg和300μg之间变化，并且可为例如10μg、30μg、50μg、70μg、90μg、100μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、或300μg。

4. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg拉米夫定。拉米夫定的量也可以在10至100mg之间变化，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg。

5. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg拉米夫定。拉米夫定的量也可以在10至100mg之间变化，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg。

6. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg拉米夫定。拉米夫定的量也可以在10至100mg之间变化，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg。

7. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和0.5mg或1.0mg恩替卡韦；恩替卡韦的量也可以在0.1至10mg之间变化，例如为0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，70.0mg，8.0mg，9.0mg或10.0mg。

8. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和0.5mg或1.0mg恩替卡韦；恩替卡韦的量也可以在0.1至10mg之间变化，例如为0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，70.0mg，8.0mg，9.0mg或10.0mg。

9. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和0.5mg或1.0mg恩替卡韦；恩替卡韦的量也可以在0.1至10mg之间变化，例如为0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，70.0mg，8.0mg，9.0mg或10.0mg。

10. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和600mg替比夫定；替比夫定的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。

11. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和600mg替比夫定；替比夫定的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。

12. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和600mg替比夫定；替比夫定的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。

13. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和200mg，245mg或300mg替诺福韦；替诺福韦的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。

14. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和200mg，245mg或300mg替诺福韦；替诺福韦的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。

15. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和200mg，245mg或300mg替诺福韦；替诺福韦的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。

16. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg阿德福韦；阿德福韦的量也可以在5至20mg之间变化，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg。

17. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg阿德福韦；阿德福韦的量也可以在5至20mg之间变化，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg。

18. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg阿德福韦；阿德福韦的量也可以在5至20mg之间变化，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg。

上述组合和组合物可用于治疗HBV或HDV感染、乙型肝炎或丁型肝炎的方法。

另一方面，本发明涉及通过NTCP抑制剂/HBV/HDV进入抑制剂和至少一种其它活性成分的组合来治疗HBV/HDV感染，乙型肝炎和丁型肝炎，以及慢性乙型和丁型肝炎，所述其它活性成分选自核苷酸类似物、核苷类似物和免疫调节剂。这种联合治疗导致病毒RNA下降，最终导致HBsAg水平的下降或HBsAg的丧失，这是完全治愈的标志，因此是HBV/HDV治疗的最终目标。

因此，该方法可以例如包括对需要HBV/HDV治疗的个体施用：

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和IFNa或PEG-IFNa；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和拉米夫定；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和替比夫定；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和恩替卡韦；

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和替诺福韦；或

前S1肽抑制剂如Myrcludex B和阿德福韦。

该方法可包括：

以0.5至20mg/天，例如1mg，2mg，3mg，4mg，5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg/天，优选2mg，5mg或10mg/天的剂量施用前S1肽抑制剂，用于针对HDV和HBV感染，

并进一步施用一种或多种以下其它活性成分：

以每周10μg至300μg的剂量施用干扰素例如聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IGNa)，例如10μg，30μg，50μg，70μg，90μg，100μg，120μg，130μg，140μg，150μg，160μg，170μg，180μg，190μg，200μg，210μg，220μg，230μg，240μg，250μg，260μg，270μg，280μg，290μg或300μg/周，优选180μg/周。每周剂量可以每周施用一次或每周施用数次，例如每周或每天施用两次或三次，其剂量经确定例如加和为所述每周剂量。

替诺福韦，剂量为每天100mg至1000mg，例如100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1000mg/天，优选200mg，250mg，245mg或300mg/天；

阿德福韦，剂量为每天5mg至20mg，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg/天，优选10mg/天；和/或

该方法可包括施用：

1. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和180μg干扰素如聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)。干扰素的量也可以在10μg和300μg之间变化，并且可为例如10μg、30μg、50μg、70μg、90μg、100μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、或300μg。前S1肽抑制剂和干扰素可以同时施用。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

2. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和180μg干扰素如聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)。干扰素的量也可以在10μg和300μg之间变化，并且可为例如10μg、30μg、50μg、70μg、90μg、100μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、或300μg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

3. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和180μg干扰素如聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)。干扰素的量也可以在10μg和300μg之间变化，并且可为例如10μg、30μg、50μg、70μg、90μg、100μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、或300μg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

4. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg拉米夫定。拉米夫定的量也可以在10至100mg之间变化，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

5. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg拉米夫定。拉米夫定的量也可以在10至100mg之间变化，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

6. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg拉米夫定。拉米夫定的量也可以在10至100mg之间变化，例如10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，90mg或100mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

7. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和0.5mg或1.0mg恩替卡韦。恩替卡韦的量也可以在0.1至10mg之间变化，例如为0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，70.0mg，8.0mg，9.0mg或10.0mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

8. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和0.5mg或1.0mg恩替卡韦。恩替卡韦的量也可以在0.1至10mg之间变化，例如为0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，70.0mg，8.0mg，9.0mg或10.0mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

9. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和0.5mg或1.0mg恩替卡韦。恩替卡韦的量也可以在0.1至10mg之间变化，例如为0.1mg，0.2mg，0.3mg，0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.8mg，0.9mg，1.0mg，2.0mg，3.0mg，4.0mg，5.0mg，6.0mg，70.0mg，8.0mg，9.0mg或10.0mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

10. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和600mg替比夫定。替比夫定的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

11. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和600mg替比夫定。替比夫定的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

12. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和600mg替比夫定。替比夫定的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

13. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和200mg，245mg或300mg替诺福韦。替诺福韦的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

14. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和200mg，245mg或300mg替诺福韦。替诺福韦的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

15. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和200mg，245mg或300mg替诺福韦。替诺福韦的量也可以在100至1000mg之间变化，例如100mg,200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg，800mg，900mg或1,000mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

16. 2mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg阿德福韦。阿德福韦的量也可以在5至20mg之间变化，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

17. 5mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg阿德福韦。阿德福韦的量也可以在5至20mg之间变化，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

18. 10mg前S1肽抑制剂如Myrcludex B和100mg阿德福韦。阿德福韦的量也可以在5至20mg之间变化，例如5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg。根据治疗进展和治疗结果，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

根据治疗进展和副作用，施用持续时间可以是24周或48周或更长。

在本发明的方法中，可以顺序施用本发明的抑制剂和其它活性成分。例如，抑制剂可以施用至少一个周期或包含一个或多个周期(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10个周期)，然后施用其它活性成分至少一个周期或包含一个或多个周期(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10个周期)。一个周期的持续时间可以是1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12周。一个周期的持续时间可以至少是1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12周。一个疗程的持续时间可能是12周，24周，36周，48周，60周，1年，1.1年，1.2年，1.3年，1.4年，1.5年，1.6年，1.7年，1.8年，1.8年，1.9年，或2.0年，或3年，或4年或更长。

在本发明的方法中，可以同时/并发施用本发明的抑制剂和其它活性成分。根据该给药方案，抑制剂的施用与其它活性成分的施用及时重叠。抑制剂和其它活性成分的施用的持续时间可以相同或基本相同。例如，抑制剂和其它活性成分可以施用至少一个周期或包含一个或多个周期(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10个周期)的过程。一个周期的持续时间可以是1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12周。一个周期的持续时间可以至少是1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12周。一个过程的持续时间可能是12周，24周，36周，48周，60周，1年，1.1年，1.2年，1.3年，1.4年，1.5年，1.6年，1.7年，1.8年，1.8年，1.9年，或2.0年，或3年，或4年。例如，24周的Myrcludes B疗程可以与24周的PEG-IFNa疗程同时进行。种该给药方案中，Myrcludex B可以每天施用，而PEG-IFNa可以每周施用。在该给药方案中，可以同时施用抑制剂和其它活性成分，例如以基本上相同的时间或在单一组合物中。

在本发明的方法中，根据成分的种类，抑制剂和其它活性成分可以通过各种递送途径递送。给药途径包括肠内途径(例如，直肠和直肠)，胃肠外途径(例如静脉内，肌肉内，皮下腹膜内)和局部途径。优选地，前S1肽抑制剂皮下递送。优选地，PEG-IFNa皮下递送。

本发明提供如上所述以各种剂量施用的活性成分的各种组合，如上所述的治疗方案和给药途径。例如，本发明提供以下治疗方案：

每天给予2mg Myrcludes B持续24周，与每周一次的180μg聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)联合给药。该疗程之后可以是每日2mg Myrcludex B再单独给药24周。两种活性成分可以皮下递送。在该示例中，每日Myrcludex B剂量也可以为5mg或10mg。

每天给予2mg Myrcludes B，与周剂量180μg聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)联合给药。治疗可能持续48周。在该示例中，每日Myrcludex B剂量也可以为5mg或10mg。

每天给予2mg Myrcludes B，与每天给予245mg替诺福韦联合给药。治疗可持续2年或更长时间(无限期)。在该示例中，每日Myrcludex B剂量也可以为5mg或10mg。

可每天给予2mg Myrcludes B，与每天给予245mg替诺福韦联合给药。治疗可持续至少48周。在该示例中，每日Myrcludex B剂量可以为5mg或10mg。

每天给予2mg Myrcludes B，与每天给予1.0mg恩替卡韦联合给药。治疗可持续2年或更长时间(无限期)。在该示例中，每日Myrcludex B剂量也可以为5mg或10mg。

可每天给予2mg Myrcludes B，与每天给予1.0mg恩替卡韦联合给药。治疗可能持续至少48周。在该示例中，每日Myrcludex B剂量可以为5mg或10mg。

在本发明的方法中，可以根据患者在治疗过程中发展的治疗进展和/或副作用来调整每种活性成分的剂量。

本发明明确地包括具体的组合或活性成分以及如申请的实施例中所述的给药方案。

将通过参考以下非限制性实施例来说明本发明。

实施例

实施例1：慢性HBV感染中Mycludex B的2期临床试验

目的：

临床试验的目的是评估Myrcludex B在具有活动性肝炎的HBsAg阳性患者中的安全性和耐受性以及抗病毒药效。

方法：

队列A：40名慢性HBV感染的HBeAg阴性患者(所有HBV DNA>2000IU/ml中位HBV DNA4.7log₁₀IU/ml；无肝硬化)治疗12周，每日一次，每次sc给予0.5mg，1mg，2mg，5mg或10mgMyrcludex B，持续12周(每剂量8名患者)。接受10mg的患者治疗延长至24周。

结果：

Myrcludex B耐受性良好，注射侧皮炎在接受10mg Myrcludex B的3例患者中发生，治疗后减退。在接受10mg Myrcludex B的患者中有6/8(75％)观察到12周时超过1log₁₀HBV DNA下降，而其余剂量组发生率较低(7/40；17％)。在22/40(55％)患者中标准化丙氨酸转氨酶(ALT)，中位ALT值从治疗前的76U/l降至第12周时的36U/l(p<0.001)。HBsAg水平无明显变化。

结论：

Myrcludex B是治疗慢性乙型肝炎(CHB)和慢性丁型肝炎(CHD)的候选药物。Myrcludex B耐受性良好。然而，Myrcludex B没有影响HBsAg水平。

实施例2：在HBV/HDV感染的细胞中进行Myrcludex B和恩替卡韦组合的体外研究

核苷类似物恩替卡韦在体外未改善Myrcludex B对HBV受体的抑制(通过用含有HBV/HDV的血清感染的HepaRG细胞的数量的免疫化学评估测量)：

表1：在不存在恩替卡韦和存在20μM恩替卡韦时使用增加浓度的Myrcludex B，用HDV阳性血清(血清1)感染HepaRG细胞后，通过HBcAg特异性IF测定感染后第6天的HBcAg阳性细胞数量。

Myrcludex B与任何核苷和核苷酸类似物的组合预期类似的结果，因为它们基本上具有相同的作用机制，即抑制HBV聚合酶。

实施例3：在HBV感染细胞中进行Myrcludex B和IFNa组合的体外研究

细胞培养物：原代人肝细胞(PHH)，HBV易感细胞系HepaRG，用HBV受体NTCP转染或转导的细胞系。

细胞培养物将被HBV感染。将对不同浓度的Myrcludex和干扰素的添加进行研究，以“治愈”细胞培养物的感染。

实施例4：在慢性HDV感染中对Myrcludex B和聚乙二醇化的IFNa的联合治疗进行的试点临床试验

Myrcludex B没有显示对体内HBsAg水平的影响(Myrcludex B作为单一疗法的临床试验)。干扰素对临床实践中HBsAg损失的影响非常小，在标准48周治疗后，约3％的患者失去HBsAg。因此，干扰素可以增强Myrcludex B对HBV或HDV感染的影响，降低HBsAg水平，最终达到HBsAg丧失，即HBV治疗的最终目标，这并非显而易见。

目的：

临床试验的目的是评估Myrcludex B与聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)在丁型肝炎患者中的安全性和耐受性以及抗病毒药效。特别是对病毒学参数(包括HBsAg下降和损失)的影响进行了研究。

方法：

队列B：24例丁型肝炎患者(代偿性肝病；12.5％肝硬化)。

组B1(“Myrcludex B单一疗法”)：8名患者安排24周治疗，每日2mg Myrcludex B，皮下递送。

组B2：(“PEG-IFNa单一疗法”)：8名患者安排24周治疗，每周180μg聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)，皮下递送。

组B3(“联合治疗”)：8名患者安排24周治疗，每日皮下递送2mg Myrcludex B，与每周皮下递送180μg聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)组合。

也将考虑在开始干扰素治疗之前的Myrcludex B的预处理和/或在干扰素治疗结束后Myrcludex B的后处理。

结果：

Myrcludex B耐受性良好。一名HDV患者(B3)出现银屑病恶化，导致停药。在组B1和组B3中，各有一个患者由于各种原因停止治疗。

在Myrcludex B单一疗法(B1组，Myrcludex B单药治疗)中，7名患者中有6名患者在第24周经历了>1log10HDV RNA下降，而在B2组(PEG-IFNa单一疗法)和B3组(组合治疗)中观察到7/7例患者产生该响应。

B1组(Myrcludex B单一疗法)和B2(PEG-IFNa单一疗法)的2/7例患者的HDV RNA变为阴性。相比之下，B3组(联合治疗)的5/7例患者(71％)中HDV RNA变为阴性。

6/7例患者(B1组)和4/7例(B3组)患者在第24周时和3/7例(B2组)患者在第12周时ALT值下降。

1例患者(B3组)和3例患者(B2组)在第24周时出现>0.5log10HBsAg下降。

结论：

Myrcludex B在具有或不具有HDV共感染的HBsAg阳性患者中是安全且耐受性良好的。HBV进入抑制与HBV DNA和HDV RNA的下降以及生化疾病活动性的改善有关。MyrcludexB/PEG-IFNa联合治疗可增强其效果，其中超过70％的患者观察到完全的HDV RNA消除。当用前S1细胞进入抑制剂治疗时，血清HDV RNA的减少是产病毒细胞数减少的指示，对病毒复制没有任何直接影响。在这项研究中，前S1肽抑制剂与干扰素的协同作用显示在HDV RNA水平上。这种效应将转化为长期的病毒抑制，也可用于HBV，并最终导致病毒消除。因此，观察到的HDV RNA下降以及病毒消除可以作为有效的丁型肝炎治疗的标志，预期以延长治疗持续时间用于HBsAg下降和有效的乙型肝炎治疗。

实施例5：在慢性HBV感染中进行Mcludex B和聚乙二醇化的IFNa的联合治疗的二期临床试验

目的：

临床试验的目的是评估Myrcludex B与聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)在慢性HBV感染的患者中的安全性和耐受性以及抗病毒药效。特别是对病毒学参数(包括HBsAg下降和损失)的影响进行了研究。

方法：

组1：聚乙二醇化的干扰素

组2：聚乙二醇化的干扰素和2mg Myrcludex B

组3：聚乙二醇化的干扰素与5mg Myrcludex B组合

组4：聚乙二醇化的干扰素与10mg Myrcludex B组合

用Myrcludex B和聚乙二醇化的干扰素组合治疗24周，接着是24周的Myrcludex B单独治疗。该组合将允许增加干扰素功效并减少治疗持续时间(48周是用干扰素治疗的标准)。

实施例6：在慢性HBV感染中进行Mcludex B和核苷/核苷酸类似物的联合治疗的二期临床试验

Myrcludex B不影响体内HbsAg水平(Myrcludex B作为单一疗法的临床试验)。核苷/核苷酸类似物的治疗导致HBsAg血清转换的比例非常小(两年治疗后的替诺福韦患者中为4％，其它药物甚至更低)。因此，核苷/核苷酸类似物可以增强Myrcludex B对HBV或HDV感染的影响，降低HBsAg水平，最终达到HBsAg丧失，即HBV治疗的最终目标，这并非显而易见。

目的：

临床试验的目的是评估Myrcludex B与核苷类似物(恩替卡韦)或核苷酸类似物(替诺福韦)的组合在慢性HBV感染患者中的安全性、耐受性和抗病毒效力。特别是对病毒学参数(包括HBsAg下降和损失)的影响进行了研究。

方法：

组1：核苷或核苷酸类似物

组2：核苷或核苷酸类似物与2mg Myrcludex B组合

组3：核苷或核苷酸类似物与5mg Myrcludex B组合

组4：核苷或核苷酸类似物与10mg Myrcludex B组合

上述组合中的活性成分的施用是同时的。

在初治患者和已经接受核苷或核苷酸类似物的患者中可以进行单独的试验。

将考虑在开始核苷或核苷酸类似物治疗之前用Myrcludex B进行预处理和/或在核苷或核苷酸类似物治疗结束后用Myrcludex B进行后处理。

实施例7:在慢性HDV感染中进行Mcludex B和聚乙二醇化的IFNa的联合治疗的二期临床试验

目的：

临床试验的目的是评估Myrcludex B与聚乙二醇化的干扰素α(PEG-IFNa)在慢性HDV感染的患者中的安全性和耐受性以及抗病毒药效。特别是对病毒学参数(包括HDV RNA损失、HBsAg下降和丧失)的影响进行了研究。

方法：

组1：聚乙二醇化的干扰素

组2：聚乙二醇化的干扰素和2mg Myrcludex B

组3：聚乙二醇化的干扰素与5mg Myrcludex B组合

组4：聚乙二醇化的干扰素与10mg Myrcludex B组合

序列表

<110> MYR有限公司 (伯格维德)

<120> HBV和HDV感染的联合治疗

<130> 103648PC

<150> EP14187865.2

<151> 2014-10-07

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 59

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> HBV前S1共有序列 (位置(-11)至48)

<400> 1

Met Gly Gly Trp Ser Ser Thr Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu

1 5 10 15

Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

20 25 30

Ala Phe Arg Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn

35 40 45

Lys Asp His Trp Pro Glu Ala Asn Lys Val Gly

50 55

<210> 2

<211> 59

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 2

Met Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu

1 5 10 15

Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

20 25 30

Ala Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Val

35 40 45

Lys Asp Asp Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly

50 55

<210> 3

<211> 59

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 3

Met Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu

1 5 10 15

Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

20 25 30

Ala Phe Lys Ala Asn Ser Glu Asn Pro Asp Trp Asp Leu Asn Pro His

35 40 45

Lys Asp Asn Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

50 55

<210> 4

<211> 59

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 4

Met Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Gln Gly Met Gly Thr Asn Leu

1 5 10 15

Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

20 25 30

Ala Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn

35 40 45

Lys Asp His Trp Pro Glu Ala Asn Gln Val Gly

50 55

<210> 5

<211> 48

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 5

Met Gly Gln Asn Leu Ser Thr Ser Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp

1 5 10 15

His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Thr Ala Asn Pro Asp Trp

20 25 30

Asp Phe Asn Pro Asn Lys Asp Thr Trp Pro Asp Ala Asn Lys Val Gly

35 40 45

<210> 6

<211> 58

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 6

Met Gly Leu Ser Trp Thr Val Pro Leu Glu Trp Gly Lys Asn Ile Ser

1 5 10 15

Thr Thr Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala

20 25 30

Phe Arg Ala Asn Thr Arg Asn Pro Asp Trp Asp His Asn Pro Asn Lys

35 40 45

Asp His Trp Thr Glu Ala Asn Lys Val Gly

50 55

<210> 7

<211> 59

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 7

Met Gly Ala Pro Leu Ser Thr Thr Arg Arg Gly Met Gly Gln Asn Leu

1 5 10 15

Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

20 25 30

Leu Phe Arg Ala Asn Ser Ser Ser Pro Asp Trp Asp Phe Asn Thr Asn

35 40 45

Lys Asp Ser Trp Pro Met Ala Asn Lys Val Gly

50 55

<210> 8

<211> 58

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 8

Met Gly Leu Ser Trp Thr Val Pro Leu Glu Trp Gly Lys Asn Leu Ser

1 5 10 15

Ala Ser Asn Pro Leu Gly Phe Leu Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala

20 25 30

Phe Arg Ala Asn Thr Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Lys Lys

35 40 45

Asp Pro Trp Pro Glu Ala Asn Lys Val Gly

50 55

<210> 9

<211> 59

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 9

Met Gly Ala Pro Leu Ser Thr Ala Arg Arg Gly Met Gly Gln Asn Leu

1 5 10 15

Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

20 25 30

Leu Phe Arg Ala Asn Ser Ser Ser Pro Asp Trp Asp Phe Asn Thr Asn

35 40 45

Lys Asp Asn Trp Pro Met Ala Asn Lys Val Gly

50 55

<210> 10

<211> 48

<212> PRT

<213> 绒毛猴乙肝病毒（Hepatitis B virus）

<400> 10

Met Gly Leu Asn Gln Ser Thr Phe Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Ser

1 5 10 15

His Gln Leu Asp Pro Leu Phe Lys Ala Asn Ala Gly Ser Ala Asp Trp

20 25 30

Asp Lys Asn Pro Asn Lys Asp Pro Trp Pro Gln Ala His Asp Thr Ala

35 40 45

<210> 11

<211> 59

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 位置46具有氨基酸取代 (Gln/Q -> Lys/K)的HBV前S1基因型C(位置(-11)至48)

<400> 11

Met Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Gln Gly Met Gly Thr Asn Leu

1 5 10 15

Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro

20 25 30

Ala Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn

35 40 45

Lys Asp His Trp Pro Glu Ala Asn Lys Val Gly

50 55

<210> 12

<211> 47

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> HBV前S1共有序列 (位置2至48)

<400> 12

Gly Thr Asn Leu Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His

1 5 10 15

Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp

20 25 30

Phe Asn Pro Asn Lys Asp His Trp Pro Glu Ala Asn Lys Val Gly

35 40 45

<210> 13

<211> 47

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 位置46具有氨基酸取代 (Gln/Q -> Lys/K)的HBV前S1基因型C(位置2至48)

<400> 13

Gly Thr Asn Leu Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His

1 5 10 15

Gln Leu Asp Pro Ala Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp

20 25 30

Phe Asn Pro Asn Lys Asp His Trp Pro Glu Ala Asn Lys Val Gly

35 40 45

<210> 14

<211> 47

<212> PRT

<213> 乙肝病毒（Hepatitis B Virus）

<400> 14

Gly Thr Asn Leu Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His

1 5 10 15

Gln Leu Asp Pro Ala Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp

20 25 30

Phe Asn Pro Asn Lys Asp His Trp Pro Glu Ala Asn Gln Val Gly

35 40 45

Claims

1.一种组合物或合并物，其包含Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的抑制剂，和选自免疫调节剂、核苷酸类似物和核苷类似物的其它活性成分。

2.如权利要求1所述的组合物或合并物，其中所述NTCP抑制剂是前S1肽抑制剂，其中所述前S1肽抑制剂包含HBV病毒的前S1肽或其功能片段，其中优选所述功能是结合至NTCP、抑制NTCP或抑制HBV/HDV细胞进入。

3.如权利要求2所述的组合物或合并物，其中所述HBV病毒是HBV株α1，HBV株LSH，土拨鼠HBV，绒毛猴HBV(WMHBV)，HBV亚型AD，ADR，ADW，ADYW，AR或AYW，或HBV基因型A，B，C，D，E，F，G或H。

4.权利要求2或3所述的组合物或合并物，其中所述前S1肽抑制剂包含以下部分或由以下部分组成：

HBV病毒的前S1肽的至少氨基酸2至9和11至15；或

HBV病毒的前S1肽的至少氨基酸2至9或11至15；或

HBV病毒的前S1肽的至少氨基酸9至15；或

HBV病毒的前S1肽的至少氨基酸11至15；或

HBV病毒的前S1肽的至少氨基酸2至48；或其至少20个氨基酸的截短部分；或

HBV病毒的前S1肽的氨基酸2至21；或。

5.如权利要求2至4所述的组合物或合并物，其中所述前S1肽抑制剂包含或由以下氨基酸序列组成：

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFRA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG(SEQ ID NO:12),或

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN QVG(SEQ ID NO:14),或

GTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG(SEQ ID NO:13)。

6.如权利要求2至5所述的组合物或合并物，其中所述前S1肽抑制剂在N末端被疏水部分修饰，其中所述疏水部分修饰优选为酰化，其中所述酰化优选是用肉豆蔻酰或硬脂酰进行的酰化。

7.如权利要求6所述的组合物或合并物，其中所述前S1肽抑制剂是N-肉豆蔻酰-甘氨酰-L-苏氨酰-L-天冬酰胺酰-L-亮氨酰-L-丝氨酰-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-天冬酰胺酰-L-脯氨酰-L-亮氨酰-甘氨酰-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-脯氨酰-L-天冬氨酰-L-组氨酰-L-谷氨酰胺酰-L-亮氨酰-L-天冬氨酰-L-脯氨酰-L-丙氨酰-L-苯丙氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-丝氨酰-L-天冬酰胺酰-L-天冬酰胺酰-L-脯氨酰-L-天冬氨酰-L-色氨酰-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-脯氨酰-L-天冬酰胺酰-L-赖氨酰-L-天冬氨酰-L-组氨酰-L-色氨酰-L-脯氨酰-L-谷氨酰-L-丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-赖氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰胺，或其乙酸盐。

8.如权利要求2至7所述的组合物或合并物，其中前S1肽抑制剂的单位剂量为0.5mg至20mg，优选2mg，5mg或10mg。

9.如权利要求1至8所述的组合物或合并物，其中所述免疫调节剂是干扰素，例如干扰素α，其中所述干扰素α优选为干扰素α2a或干扰素α2b，并且其中所述干扰素优选经聚乙二醇化。

10.如权利要求9所述的组合物或合并物，其中干扰素的单位剂量为10μg至300μg，优选为180μg。

11.权利要求1至10所述的组合物或合并物，其中所述核苷酸类似物是替诺福韦或阿德福韦。

12.如权利要求11所述的组合物或合并物，其中

替诺福韦的单位剂量为100mg至1000mg，优选200mg，250mg，245mg或300mg；和/或

阿德福韦的单位剂量为5mg至20mg，优选10mg。

13.权利要求1至12所述的组合物或合并物，其中所述核苷类似物是拉米夫定、替比夫定或恩替卡韦。

14.如权利要求13所述的组合物或合并物，其中

拉米夫定的单位剂量为10mg至100mg，优选为50mg或100mg；

替比夫定的单位剂量为100mg至1000mg，优选500mg，600mg或700mg；和/或

恩替卡韦的单位剂量为0.1mg至10mg，优选为0.5mg或1.0mg。

15.如权利要求1至14中任一项所述的组合物或合并物，其用于治疗对象中的HBV或HDV感染、乙型肝炎、慢性乙型肝炎、丁型肝炎或慢性丁型肝炎的方法。

16.用于如权利要求15所述用途的组合物或合并物，其中所述方法包括以每天0.5mg至20mg，优选每天2mg、5mg或10mg的剂量施用所述前S1肽抑制剂。

17.用于如权利要求15或16所述用途的组合物或合并物，其中所述方法包括施用：

干扰素，优选聚乙二醇化的干扰素α，剂量为每周10μg至300μg，优选每周180μg；和/或

拉米夫定，剂量为每天10mg至100mg，优选每天50mg或100mg；和/或

恩替卡韦，剂量为每天0.1mg至10mg，优选每天0.5或1.0mg；和/或

替比夫定，剂量为每天100mg至1000mg，优选每天500mg、600mg或700mg；和/或

替诺福韦，剂量为每天100mg至1000mg，优选每天200mg、245mg或300mg；和/或

阿德福韦，剂量为每天5至20mg，优选每天10mg。

18.如权利要求15至17中任一项所述用途的组合物或合并物，其中所述方法包括施用NTCP抑制剂和/或其它活性成分，持续12周，24周，36周，48周，60周，1年，1.1年，1.2年，1.3年，1.4年，1.5年，1.6年，1.7年，1.8年，1.8年，1.9年，或2.0年，或3年，或4年或更长。

19.用于如权利要求15至18所述用途的组合物或合并物，其中所述方法包括胃肠外施用NTCP抑制剂和/或其它活性成分，优选静脉内或皮下施用。

20.用于如权利要求15至19所述用途的组合物或合并物，其中所述对象是人。

21.如权利要求2-8中定义的前S1肽抑制剂，其用于治疗对象中HBV或HDV感染、乙型肝炎、慢性乙型肝炎、丁型肝炎或慢性丁型肝炎的方法，其中所述方法包括施用其它活性成分，其中所述其它活性成分选自免疫调节剂，优选干扰素；核苷酸类似物，优选替诺福韦或阿德福韦；和核苷类似物，优选拉米夫定、替比夫定和恩替卡韦。

22.用于如权利要求21所述用途的前S1肽抑制剂，其中所述方法如权利要求17至20所定义。

23.治疗对象中HBV或HDV感染、乙型肝炎、慢性乙型肝炎、丁型肝炎或慢性丁型肝炎的方法，包括向所述对象施用权利要求1至14所述的组合物或合并物。

24.如权利要求23的方法，其中所述方法包括向所述对象施用权利要求2至8中定义的前S1肽抑制剂与其它活性成分的组合，其中所述其它活性成分选自免疫调节剂，优选干扰素；核苷酸类似物，优选替诺福韦或阿德福韦；和核苷类似物，优选拉米夫定、替比夫定和恩替卡韦。

25.如权利要求23或24所述的方法，其中所述方法如权利要求17至20所定义。