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CN106723319A - 醒酒卷烟及其制备方法 - Google Patents

醒酒卷烟及其制备方法 Download PDF

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CN106723319A
CN106723319A CN201611233553.7A CN201611233553A CN106723319A CN 106723319 A CN106723319 A CN 106723319A CN 201611233553 A CN201611233553 A CN 201611233553A CN 106723319 A CN106723319 A CN 106723319A
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CN
China
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ethanol
group
kudzu
extract
hovenia dulcis
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Application number
CN201611233553.7A
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English (en)
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陶红
黄菲
潘晓薇
周瑢
陆鸣
陆一鸣
曾静
伍锦鸣
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China Tobacco Guangdong Industrial Co Ltd
Original Assignee
China Tobacco Guangdong Industrial Co Ltd
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    • A24B15/00—Chemical features or treatment of tobacco; Tobacco substitutes, e.g. in liquid form
    • A24B15/18—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes
    • A24B15/28—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes by chemical substances
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Abstract

本发明公开了一种醒酒卷烟及其制备方法。本发明所述醒酒卷烟是在烟丝中添加葛花、葛根和/或枳椇子丝；或者在烟丝中添加葛花、葛根和/或枳椇子乙醇提取物制得。本发明以枳椇子、葛花和/或葛根与烟丝为伍，获得了显著、稳定的醒酒应用技术效果，实现“导中药入烟，不失烟之本”，尤其适合于“烟酒不分家”的消费者。

Description

醒酒卷烟及其制备方法
技术领域
本发明涉及卷烟技术领域，更具体地，涉及一种醒酒卷烟及其制备方法。
背景技术
酒在祖国医学中是被极其重视的，中医学很早就发现酒能通血脉、行药势，不但用来炮制药物，更把酒作为方剂中常用之品。在祖国医学文献中，有关酒的记载比比皆是，其中不少本草书籍更是从利弊两方面对酒作了详细阐述。古人言“酒乃水米造作，本应无害。然必由曲糵酝酿，或水火蒸熬，湿从燥化，故大热有毒”。实际上，用来酿酒的谷物和水果经发酵后，会转变成乙醇、甲醇、醇油、氰化物、铅、锰等物质，其中醇油、甲醇、氰化物对人的身体危害很大，所以说酒是一把“双刃剑”，饮酒可谓既有利于健康又有害于健康。
日常生活中，酒确实是人们平常生活中不可或缺的，喜欢饮酒者众。但随着生活水平的不断提高，人们的健康意识将越来越强，“酒与健康”问题已引起了广泛的关注，过量饮酒有害健康是一个不可否认的事实。醉酒指的是急性乙醇中毒，因为乙醇在进入人体后将在2～3小时内被人体全部吸收、由于过量饮酒、使乙醇在体内吸收率大于其在肝脏内氧化代谢率、因而大量的乙醇经血液循环进入人体的大脑内、作用于中枢神经系统、从而产生醉酒(张维嘉，2001)。人在短时间大量饮酒，可致急性中毒。轻者可见烦躁多语，恶心呕吐，或失去自制。重者可见昏迷，面色苍白，呼吸缓慢，体温下降，有可能因呼吸衰竭而死亡(刘健等，2000)。长期持续过量饮酒，引起慢性酒精中毒，会引发多种躯体疾病，其中消化道溃疡最普遍，其次是肝脏疾病，脑血管意外，小脑共济失调和周围神经系统病变。有资料表明食道癌、肝癌发病率的升高似乎也与饮酒有关。可见，过量次酒，对人体器官有着广泛的刺激性并产生危害性。
中国拥有极其丰富的中草药资源，又拥有完善的祖国医学理论体系，所以应该充分利用这一得天独厚的资源优势和中医独一无二的理论体系，探索研究中草药在保护饮酒人士健康方面的重要作用。
烟草本身是一种药用植物，是茄科植物烟草(Nicotiana tabacum)的全草。中国古代吸烟最早始于防治疾病，后来才演变为一种嗜好。《本草汇言》载:“烟草，通利九窍之药也，能御霜露风雨之寒，辟山蛊鬼邪之气……如气滞、寒滞、饮滞，一切寒凝不通之病，吸此即通”；正因为烟草属于药用植物，故包含中草药在内的药用植物与烟草对人体的效应存在兼容、互补之处，如：1990年2月9日的《山西日报》载：“大宁县曲峨中心医院医生党清泉，将中草药与烟丝混合，治疗时，点燃配方吸上几口，每日5次治疗颈淋巴结核病，效果显著，治愈率95％以上”。在《景岳全书》载：“烟草，味辛气温，性微热。……其气上行，则温心、肺，下行则温肝、脾、肾。烟草用以治表，善逐一切阴邪寒毒，山岚瘴气风湿，邪闭膝理，筋骨疼痛，诚顷刻取效之神剂；用以治里，善壮胃气、进饮食、祛寒滞阴浊、消膨胀宿食、止呕吐霍乱、除积诸虫、解郁结、止疼痛”。
豆科葛根(Radix Puerariae)味甘辛凉，入脾，胃经，其气轻清，升阳解肌，生津除烦止渴，降逆止呕，有很强的解酒作用。葛根中的解酒成份为异黄酮类葛根素及大豆甙元等，是乙醇代谢的增强剂，可以提高人体对乙醇的耐受量，降低血中乙醇含量。另有学者对大鼠连用乙醇(8g/kg·d)30、60及90d后的多项生理指标进行检验，发现其肝脏指数增大，肝细胞匀浆中的ADH、谷胱甘 肽硫转移酶(GSTs)活性降低，病理学检验发现乙醇使肝细胞出现脂肪变性、片状颗粒变性及点状细胞坏死，服用葛根水提液可以对抗上述现象的发生。
豆科葛花(Flos Puerariae)历代多被作为解酒之专药而极少用于其他疾病的治疗。国内学者对葛花醇提物进行了实验。探讨了葛花醇提物对大鼠酒精性肝损伤的预防作用研究，结果显示大鼠的肝组织脂肪变性和炎性浸润均较模型组有所减轻，血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)较模型组显著降低，总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量较模型组显著升高，肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性较模型组显著升高，丙二醛(MDA)含量显著低于模型组，谷胱甘肽(GSH)含量较模型组也明显升高。研究表明，葛花醇提物具有明显预防酒精性肝损伤的作用。
鼠李科枳椇子(Hovenia dulcis)味甘酸性平，入心、脾经，除烦止渴止呕，也是传统的解酒药物。研究表明，枳椇子提取物可降低酒后血中乙醇浓度，增强肝中乙醇脱氢酶ADH活性，其机制可能是抑制了消化道对乙醇的吸收，加强乙醇在胃肠道的首过效应，从而降低血中乙醇浓度，减轻乙醇对人体神经系统、消化系统等损害，起到有效的降醇解酒作用。
现有技术通常将枳椇子、葛花、葛根中的一种、两种或三种与其他中草药相配合得到解酒组合物。未见将且只将枳椇子、葛花、葛根三味药材君臣为伍的相关解酒应用的研究报道。
“导中药入烟，不失烟之本”，是为药用植物用于卷烟减害提供了一条在世界范围内独具特色的新途径，将成为中式卷烟的特色，可充分发挥本草特色、低害特色、中国特色。
中国有至少3.5亿以上的烟民，其中不少又同时是饮酒爱好者。如何将烟草结合现有中草药，发挥烟剂作为中药治病的一种有效形式的内涵，在不失烟草特色和良好吸味、吃味等本质前提下，结合中草药在解酒醒酒方面有效运用，是目前面临的技术难题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对烟草结合中草药尤其是枳椇子、葛花、葛根在解酒方面联合应用的技术不足，提供一种醒酒卷烟。
本发明要解决的另一技术问题是提供所述醒酒卷烟的制备方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
提供一种醒酒卷烟，是在烟丝中添加葛花、葛根和/或枳椇子丝；或者在烟丝中添加葛花、葛根和/或枳椇子乙醇提取物制得。
优选地，所述醒酒卷烟是在烟丝中添加葛花、葛根和枳椇子丝；或者在烟丝中添加葛花、葛根和枳椇子乙醇提取物制得。
进一步优选地，本发明醒酒卷烟是在烟丝中添加葛花、葛根和枳椇子乙醇提取物制得。
更优选地，所述葛花、葛根和枳椇子丝的质量比例为1:1:1。
更优选地，所述枳椇子的乙醇提取物、葛花的乙醇提取物和葛根的乙醇提取物的质量比例为1:1:1。
优选地，所述葛花、葛根和/或枳椇子丝的添加量为烟丝质量的20％～55％确定。
进一步优选地，所述葛花、葛根和/或枳椇子丝的粗细按照确定。
优选地，所述葛花、葛根和/或枳椇子乙醇提取物的添加量为烟丝质量的1‰～2‰确定。
优选地，所述枳椇子的乙醇提取物是用乙醇经索式提取器回流提取枳椇子，4个小时得到提取液，提取温度为90℃；将提取液用旋转蒸发仪浓缩至膏状，再加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末得到。所述粉末4℃保存。
进一步优选地，所述枳椇子经65℃烘干后粉碎，过50目筛再用乙醇提取。
优选地，所述葛花的乙醇提取物是用乙醇经索式提取器回流提取葛花4个小时，得到提取液，提取温度为90℃；将提取液用旋转蒸发仪浓缩至膏状，再加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末得到。所述粉末4℃保存。
进一步优选地，所述葛花经65℃烘干后粉碎，过50目筛再用乙醇提取。
优选地，所述葛根的乙醇提取物是用乙醇经索式提取器回流提取葛根4个小时，得到提取液，提取温度为90℃；将提取液用旋转蒸发仪浓缩至膏状，再加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末得到。所述粉末4℃保存。
进一步优选地，所述葛根经65℃烘干后粉碎，过50目筛再用乙醇提取。
优选地，所述乙醇提取采用的乙醇的体积比浓度为75％。
优选地，所述旋转蒸发仪浓缩条件均为60rpm下，浓缩操作温度为50℃。
优选地，所述再加入无水乙醇将水分带出是加入少量的无水乙醇，经旋转蒸发仪再60rpm、温度为50℃的浓缩条件下浓缩，带出水分。
本发明同时提供所述醒酒卷烟的应用，所述醒酒卷烟于喝酒前或喝酒后使用，可降低饮酒者全血乙醇浓度，显著缩短醉酒时间。
本发明同时提供了所述醒酒卷烟的制备方法，包括以下步骤：
S1.准备葛花、葛根和/或枳椇子丝或其乙醇提取物粉；
将烟叶切丝；
S2.将葛花、葛根和/或枳椇子丝与烟丝混合，卷制而成醒酒卷烟；
或将葛花、葛根和/或枳椇子的乙醇提取物粉用去离子水溶解后喷洒在烟丝上，烘干，卷制而成醒酒卷烟。
优选地，步骤S2所述去离子水的用量按照20g枳椇子、葛花和/或葛根的乙醇提取物粉用3mL去离子水溶解。
本发明具有以下有益效果：
本发明以枳椇子、葛花和/或葛根与烟丝为伍，获得了显著、稳定的醒酒应用技术效果，“导中药入烟，不失烟之本”，尤其适合于“烟酒不分家”的消费者。
本发明优选将三种中草药按照特定比例与烟丝相配。本发明从药物的效果相关性及功能仔细研究，以“上下分消其湿”立法，以葛花为君药，其性辛甘平，入脾胃二经，功能解表化湿、并取“火郁发之”之意，以化郁热，枳椇子为君药，其性甘平，入心、脾经，利尿祛湿，除烦止渴，最能解酒毒；葛花、枳椇子为君药，一个解表化湿，一个利水祛湿，发汗与利尿并举，与李东垣“上下分消其湿”的解酒大法相合，也与方剂统计的结果相吻合，并且在现代的药理研究中，这二味药物皆有明确的解酒作用，本发明将它们作为君药是合适的；葛根甘辛凉，助葛花发汗解酒，并能健脾益气，预防酒毒伤脾，用以做臣药。
在此基础上，本发明进一步将三者按科学的比例进行提取处理后精确配伍，发挥协同作用，产生了“1+1>2”的显著增效作用，成功获得了组分简单明了、技术效果优良的醒酒卷烟。
综上所述，本发明创造性地在卷烟中加入具有醒酒功能的葛花、葛根和/或枳椇子，选定的中草药与烟草结合应用后在醒酒方面具有显著的效果。
但是本发明进一步要解决的技术关键是颜色、吃味、香气等方面的问题， 使本发明卷烟不是用药味取代卷烟香气。因此在研制过程中，尽管所选定添加的中草药结合烟丝有显著的醒酒医疗效果，但由于葛花、葛根和/或枳椇子叶片小，与烟叶混合在颜色、吃味方面都有较多的问题需要解决，实施起来比较复杂。经过反复试验，本发明提供最优选的技术方案是采取将中草药原料经乙醇提取后浓缩成浸膏乃至粉末，再用到配方中去的办法。这样一方面可以控制加入药液的浓度和比例，达到医疗效果，另一方面也可以改进吃味，协调香气，达到了卷烟的品质要求。
附图说明
图1 HPLC测定葛根素标准品中葛根素含量的结果。
图2 HPLC测定本发明葛根提取物粉末中葛根素含量的结果。
图3 HPLC测定鸢尾苷标准品中鸢尾苷含量的结果。
图4 HPLC测定本发明葛花提取物粉末中鸢尾苷含量结果。
图5 HPLC测定槲皮素标准品中槲皮素含量的结果。
图6 HPLC测定本发明枳椇子提取物粉末中槲皮素含量结果。
图7不同配比解酒组合物对小鼠耐受时间的影响结果(图中*表示与阴性对照相比，P<0.05)。
图8不同配比解酒组合物对小鼠醉酒时间的影响结果。
图9不同配比解酒组合物对小鼠耐受时间的影响结果(图中*表示与阴性对照相比，P<0.05)。
图10不同配比解酒组合物对小鼠醉酒时间的影响结果。
图11不同配比解酒组合物对小鼠耐受时间的影响结果。
图12不同配比解酒组合物对小鼠醉酒时间的影响结果。
图13不同配比解酒组合物对小鼠耐受时间的影响结果。
图14不同配比解酒组合物对小鼠醉酒时间的影响结果(图中*表示与阴性对照相比，P<0.05)。
图15不同配比解酒组合物对小鼠醉酒时间的影响结果。
图16不同配比解酒组合物对小鼠醉酒时间的影响结果(*表示与阴性对照相比，P<0.05；**表示与阴性对照相比，P<0.01)。
图17解酒组合物不同剂量对小鼠耐受时间和醉酒时间的影响结果(*表示与阴性对照相比，P<0.05)。
图18标准品样品色谱图。
图19待测样品的色谱图。
图20各组小鼠血中乙醇浓度—时间曲线图。
图21各组小鼠肝中乙醇脱氢酶活性变化曲线图。
图22实验小鼠的肝组织切片图。
图23酒精性肝损伤小鼠的死亡情况。
图24醒酒烟剂先酒后烟对小鼠耐受时间和醉酒时间的影响结果。
图25醒酒烟剂先烟后酒对小鼠耐受时间和醉酒时间的影响结果。
图26标准品的气相色谱图。
图27实施例5待测样品的气相色谱图。
图28各组小鼠血中乙醇浓度—时间曲线。
图29自制卷烟对小鼠血中乙醇脱氢酶—时间曲线。
图30不同剂量中草药醒酒烟剂先酒后烟对小鼠耐受时间和醉酒时间的影响结果(*表示与对照组相比，P<0.05；**表示与对照组相比，P<0.01)。
图31不同剂量中草药醒酒烟剂先烟后酒对小鼠耐受时间和醉酒时间的影响结果(*表示与对照组相比，P<0.05；**表示与对照组相比，P<0.01)。
图32标准品的气相色谱图。
图33实施例6待测样品的气相色谱图。
图34各组小鼠血中乙醇浓度—时间曲线。
图35各组小鼠血中乙醇脱氢酶—时间曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明。除非特别说明，本发明实施例采用的方法均为本领域常规方法。
本发明拟在中药解酒组合物(由葛花、葛根、枳椇子提取物组成)的工作基础上，利用动物醉酒模型研究该中草药提取物的解酒特性。
实施例1动物醉酒实验模型建立
为使动物醉酒及解酒实验的结果具有科学性和重复性，本建立实验用酒剂量与动物醉酒现象关系的动物醉酒实验模型，用于对解酒物质的研究与评价。所建模型的具体内容主要是确定适宜的小鼠醉酒灌胃剂量和确定小鼠致死灌胃剂量。
1实验材料
SPF级昆明小鼠，体重20～25g，雄性，上海斯莱克实验动物有限责任公司(购于第二军医大学实验动物中心)。
2主要试剂与仪器
56°红星二锅头(北京红星股份有限公司)，小鼠灌胃器，一毫升注射器，计时器，每小格1cm的铁丝网(用于攀附实验)。
3实验方法
3.1实验动物小鼠购得后，先在动物房适应3天。动物室温度25℃，湿度为60％，通风良好。小鼠采用分笼词养，每天早晚各喂食(饲料)一次，自由进食和饮水。3天后开始正式实验。
3.2观察指标及判断方法
以如下观察指标来判断小鼠醉酒状态，建立动物醉酒模型，并确定最佳灌胃浓度：
(1)醉酒指标：以小鼠爬行不稳、后腹拖地、毛松散、闭眼不动为醉酒指标
(2)醒酒指标：以小鼠活动自如、灵活、精神、毛滑顺为醒酒指标。
(3)睡眠潜伏期：又称耐受时间，指从灌酒至入睡的时间。
(4)睡眠(醉酒)时间：又称维持时间，指从入睡到苏醒的时间。
(5)攀附时间：即小鼠攀附在网上的时间，指将小鼠放在网上到小鼠从网上掉落的时间段。
其中通过翻正反射判断小鼠是否醉酒，正常小鼠是不能接受翻转的，但醉酒的小鼠可以将其任意翻转。据此，可用来判断小鼠是否醉酒。故，实验用小鼠是否醉酒以翻正反射是否消失为标准。小鼠灌酒后，将其轻轻放在动物箱内，若小鼠保持背向下的姿势30s以上，则认为其醉酒，醉酒后如果翻正反射恢复即为醒酒。
3.3动物醉酒模型的建立
70只昆明小鼠，实验前将动物禁食12h，将小鼠随机分为7组，每组10只，分别按0.13mL/10g、0.14mL/10g、0.15mL/10g、0.16mL/10g、0.17mL/10g、0.18mL/10g、0.19mL/10g灌胃。灌胃后小鼠立即放在垂直的铁丝网上，记录攀附时 间，耐受时间，醉酒时间，醉酒只数，死亡只数。
4实验结果与分析
将小鼠分7组，分别灌胃0.13mL-0.19mL白酒/10g体重，考察小鼠攀附时间、耐受时间、醉酒时间、醉酒率、死亡率与醉酒灌胃剂量的关系，结果见表1。
表1不同剂量酒精灌胃对小鼠的影响
综合以上指标：白酒灌胃量达到0.18mL/10g以上剂量即有小鼠发生急性酒精中毒死亡，0.19mL/10g组醉酒致死率较高，而其他指标与0.17～0.18mL/10g组相比不明显；在0.13～0.18mL/10g范围内，随着灌胃体积的增加，小鼠的醉酒时间，醉酒率和死亡率都明显增高；耐受时间降低。而攀附时间与灌胃剂量不成相关性。根据醉酒模型和后续实验的需要，选择0.17mL/10g组作为后续实验的灌胃体积，该组的耐受时间和醉酒时间作为后续实验的参考时间。
实施例2枳椇子、葛花、葛根提取物的制备
2.1中草药原料
葛根、葛花、枳椇子，分别购自上海雷允上北区药业股份有限公司中达大药房。
2.2主要试剂与仪器
无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司)、75％乙醇、去离子水(MiliQ纯水)、乙腈、甲醇、0.1％磷酸、粉碎机、50目筛、旋转蒸发仪、索式提取器、65℃烘箱。
葛根素标准品制备：精密称取葛根素标准品(购自上海源叶生物科技有限公司)1.97mg，60℃干燥8h，用30％乙醇稀释至2mL，取1mL定容于10mL量瓶中，即得0.0985mg/mL葛根素对照品溶液。
鸢尾苷标准品制备：精密称取鸢尾苷标准品(购自上海源叶生物科技有限公司)1.03mg，60℃干燥8h，用80％乙醇稀释至2mL，即得0.515mg/mL鸢尾苷对照品溶液。
槲皮素标准品制备：精密称取槲皮素标准品(购自上海源叶生物科技有限公司)1.025mg，60℃干燥8h，用30％乙醇稀释至1mL，即得1.025mg/mL葛根素对照 品溶液。
2.3实验方法
2.3.1中草药复方活性物质的提取：
(1)粉碎：葛花、葛根、枳椇子65℃烘干，用粉碎机粉碎。
(2)葛花有效成分的提取：称取过50目筛的葛花粉末约20g，精密称定；用75％乙醇或水索式提取器回流提取四个小时，温度为90℃。用旋转蒸发仪浓缩提取液至膏状，加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末，4℃保存。
(3)葛根有效成分的提取：称取过50目筛的葛根粉末约20g，精密称定；用75％乙醇或水加热回流提取四个小时，温度为90℃。用旋转蒸发仪浓缩提取液至膏状，加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末，4℃保存。
(4)枳椇子有效成分的提取：称取过50目筛的枳椇子粉末约20g，精密称定；用75％乙醇或水加热回流提取四个小时，温度为90℃。用旋转蒸发仪浓缩提取液至膏状，加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末，4℃保存。
2.3.2高效液相色谱测定有效成分:
⑴葛根素提取物有效成分的测定
①色谱条件:固定相：K.romasil C18键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5m)，流动相：甲醇一水(25:75)，流速：1.0mL/min，温度：30℃，波长：250nm。
②样品溶液的制备：精密称取葛根提取物1.91mg，用30％乙醇稀释至2mL，得到样品溶液。
③样品测定：分别精密吸取葛根素标准品溶液和样品溶液各30ul，外标法计算有效成分的含量。
⑵葛花提取物有效成分的测定
①色谱条件:固定相：K.romasil C18键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5m)，流动相：乙腈一水(0min，15:85；30min，50：50；35min，50:50；36min，15:85)，流速：1.0mL/min，温度：30℃，波长：265nm。
②样品溶液的制备：精密称取葛花提取物6.38mg，用80％乙醇稀释至2mL，得到样品溶液。
③样品测定：分别精密吸取鸢尾苷标准品溶液和样品溶液各30ul，外标法计算有效成分的含量。
⑶枳椇子提取物有效成分的测定
①色谱条件:固定相：K.romasil C18键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5m)，流动相：乙腈—0.1％磷酸(50:50)，流速：1.0mL/min，温度：30℃，波长：370nm。
②样品溶液的制备：精密称取枳椇子提取物5.023mg，用30％乙醇稀释至1mL，得到样品溶液。
③样品测定：分别精密吸取槲皮素标准品溶液和样品溶液各30ul，外标法计算有效成分的含量。
3测定结果及分析
3.1提取溶剂的选择和比较
葛根中的有效成份主要是异黄酮类如葛根素、大豆苷、大豆苷元等，其中还含有蛋白质、生物碱以及大量的纤维素、淀粉、果胶等多糖物质，它们与异黄酮类物质在水、乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂溶解度有所不同。但从经济、安全等因素考虑，本次实验选择水和75％浓度的乙醇作为溶剂。
表2溶剂对葛根、葛花和枳椇子浸提效果的影响
由表2可以看出水作为溶剂对葛根、葛花及枳椇子进行总异黄酮的提取率较低，且固液分离比较困难，费时费力，原因是药物中的蛋白质、生物碱、淀粉、纤维素、果胶等在水中有一定溶解度，造成溶液黏稠，分离困难，杂质增多。用一定浓度的乙醇作为溶剂，可以使葛根中的非异黄酮类成分(杂质)部分沉淀，所以醇提法葛根、葛花及枳椇子总黄酮的提取率相对较高，其固液分离也容易很多，并且乙醇作为溶剂成本低，安全性大，利于食品及药品工业生产。因此醇提法是较好的一种方法，乙醇也就成为首选提取溶剂。
3.2总黄酮粗提物中有效成分测定
(1)葛根提取物有效成分的测定：见图2所示，20g葛根中得到1.1395g提取物粉末，葛根素的含量为0.2237g；每g葛根中葛根素的含量为1.12％，每g提取物粉末中葛根素含量19.63％。标准品中葛根素测定结果见图1所示。
(2)葛花提取物有效成分的测定：见图4所示，20g葛花中得到提取物粉末2.6278g，鸢尾苷的含量为0.2880g；每g葛花中鸢尾苷的含量为1.44％，每g提取物粉末中鸢尾苷含量为10.96％。标准品中鸢尾苷测定结果见图3所示。
(3)枳椇子提取物有效成分测定：见见图6所示，20g枳椇子得到提取物粉末1.4708g，槲皮素的含量为3.6476mg；每g枳椇子中槲皮素含量0.0182％，每g提取物粉末中槲皮素含量为0.2480％。标准品中槲皮素测定结果见图5所示。
经过3次(重复)提取及有效成分的HPLC含量测定，结果稳定，并建立了葛根、葛花、枳椇子最佳的、效果最稳定的提取工艺为：65℃烘干，粉碎机粉碎→50目筛过筛→称量→75％乙醇，索式提取器回流提取，4h，90℃→旋转蒸发仪浓缩，60rpm，50℃→膏状→少量无水乙醇，多次→旋转蒸发仪浓缩，60rpm，50℃→粉末状提取物有效成分，4℃保存。
实施例3最佳增效配比实验
1供试材料
昆明小鼠(KM小鼠)，体重20～25g，雄性，上海斯莱克实验动物有限责任公司(购于第二军医大学实验动物中心)。
56度红星二锅头(北京红星股份有限公司)、去离子水、小鼠灌胃器、一毫升注射器、EP管、移液枪，枪头。
阳性对照品玉米肽溶液的制备：取玉米肽0.9g溶于3mL去离子水中，得到0.3g/mL的玉米肽溶液；
阳性对照品海王金樽溶液的制备：取海王金樽3片(上海德康医药商店)，粉碎，溶于4mL去离子水中，得到0.75g/mL的海王金樽溶液。
2动物及其管理
小鼠购得后，先在动物房适应3天。动物室温度25℃，湿度为60％，通风良好。小鼠采用分笼词养，每天早晚各添加饲料一次，自由进食和饮水。3天后开始正式:实验。
3中草药解酒组合物的配比
将20g枳椇子、葛花、葛根提取物粉末分别用3mL去离子水溶解，按所需不同配比制成不同实验组溶液：
(1)葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)：用移液枪各取1mL置于5mL EP管里，充分混匀即得；
(2)葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶2)：用移液枪取葛花0.5mL，葛根枳椇 子各1mL置于5mL EP管里，充分混匀即得；
(3)葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶1)：用移液枪取葛根1mL，葛根、枳椇子各0.5mL置于5mL EP管里，充分混匀即得；
(4)葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶2)：用移液枪取枳椇子1mL，葛根、葛花各0.5mL置于5mL EP管里，充分混匀即得；
(5)葛根∶枳椇子(1∶1)的制备：用移液枪取葛根和枳椇子各1mL，置于5mL EP管里，充分混匀即得；
(6)葛根∶葛花(1∶1)的制备：用移液枪取葛根和葛花各1mL，葛根置于5mL EP管里，充分混匀即得。
4实验方法
中草药醒酒复方不同配比动物实验
(1)取昆明小鼠32只，随机分为阴性对照组、阳性对照组(0.75g/mL海王金樽溶液)、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶2)，共4组，每组8只，实验前禁食12h，称重，记录重量，阴性对照组灌胃0.1mL去离子水，阳性对照组和给药组各灌胃相应的药物0.1mL/只，半小时后每组灌胃56℃红星二锅头0.17mL/10g，观察并记录小鼠的耐受时间、醉酒时间、醉酒只数，死亡只数。
(2)取昆明小鼠24只，随机分为阴性对照组、葛根∶枳椇子(1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)，共3组，每组8只，实验前禁食12h，称重，记录重量。灌胃量及观察指标同上。
(3)取昆明小鼠40只，随机分为阴性对照组、葛根∶葛花(1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶2)，共5组，每组8只，实验前禁食12h，称重，记录重量。灌胃量及观察指标同上。
(4)取昆明小鼠40只，随机分为阴性对照组、阳性对照组(海王金樽)、玉米肽组、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)，每组10只，实验前禁食12h，称重，记录重量，灌胃量及观察指标同上。
(5)取昆明小鼠72只，随机分为阴性对照组、阳性对照组(海王金樽)、玉米肽组、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)，每组18只，实验前禁食12h，称重，记录重量，灌胃量及观察指标同上。
5实验结果及分析
中草药醒酒复方不同配比实验结果：采用SPSS中的t检验，表示，P<0.05有统计学意义。
(1)表3及图7、图8得知：葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶2)、阳性对照组(海王金樽)与阴性对照组相比，耐受时间均有显著性差异；醉酒时间无显著性差异，但有减少趋势，可能和样本量有关。
表3不同配比中草药醒酒复方的解酒效果
(2)由图9、图10知：葛根∶枳椇子(1∶1)与阴性对照相比，耐受时间与醉酒时间均有显著性差异；葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)与阴性对照相比，醉酒时间与耐受时间均无显著性差异。
(3)由表4及图11、图12知：给药组与阴性对照相比，耐受时间与醉酒时间均无显著性差异，但是醉酒时间有减小的趋势，且1:1:1组醉酒率最低。
表4不同配比中草药醒酒复方的解酒效果
(4)由表5及图13、图14得知：葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)、阳性对照组(海王金樽)与阴性对照组相比，醉酒时间有显著性差异；但所有给药组与阴性对照组相比，耐受时间均无显著性差异。
表5不同配比中草药醒酒复方的解酒效果
(5)由表6及图15、图16得知：阳性对照(海王金樽)、玉米肽组、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)与阴性对照组相比，醉酒时间有显著性差异，且葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)差异更为显著(P<0.01)。但是各给药组的耐受时间与阴性对照相比，均无显著性差异。
表6不同配比中草药醒酒复方的解酒效果
本发明研究及大量实验证明，不同配比动物实验可知，以葛根、葛花、枳椇子三种成分为解酒组成的组合物解酒效果良好；从小鼠醉酒动物模型的耐受时间和醉酒时间观察，确定最佳配伍为按照质量比计，葛根∶葛花∶枳椇子＝1∶1∶1。
实施例4应用试验
1材料与仪器
1.1供试材料
昆明小鼠(KM小鼠)，体重20～25g，雄性，上海斯莱克实验动物有限责任 公司(购于第二军医大学实验动物中心)。
56度红星二锅头(北京红星股份有限公司)、去离子水、小鼠灌胃器、一毫升注射器、5mL EP管、移液枪，枪头。
海王金樽溶液的制备：取海王金樽(上海德康医药商店)，粉碎，溶于去离子水中，得到0.75g/mL的海王金樽溶液。
葛根、葛花、枳椇子，分别购自雷允上北区药业股份有限公司中达大药房。1.2主要试剂与仪器
无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司)、75％乙醇、去离子水(MiliQ纯水)、粉碎机、50目筛、旋转蒸发仪、索式提取器、65℃烘箱、56度红星二锅头(北京红星股份有限公司)、去离子水、小鼠灌胃器、一毫升注射器、5mL EP管、移液枪，枪头、海王金樽。
乙醇脱氢酶试剂盒(购自南京建成生物科技有限公司)(其余同乙醇含量测定)
Thermo Fisher Trace GC Ultra气相色谱仪，Agilent DB-1色谱柱，气相色谱柱为程序升温法，在40℃维持1min，以20℃/min的速度升至160℃，在160℃维持3min，程序升温所需时间为10min；左边进样口温度为150℃，左边载气流速2mL/min，右边进样口相同。右边检测器为火焰离子化检测器，流速(mL/min)为空气：燃气(H2)：尾吹气＝350：35：30，传输线的温度为250℃，顶空进样量1mL。
2动物及其管理
小鼠购得后，先在动物房适应3天。动物室温度25℃，湿度为60％，通风良好。小鼠采用分笼词养，每天早晚各添加饲料一次，自由进食和饮水。3天后开始正式实验。
3解酒组合物的配制
将20g枳椇子、葛花、葛根提取物粉末分别用3mL去离子水溶解，配成葛根∶葛花∶枳椇子质量比为1∶1∶1的混合溶液。
4实验方法
4.1中草药醒酒复方的醒酒效果
取昆明小鼠60只，随机分为模型组、阳性对照组(0.75g/mL海王金樽溶液)、低剂量组，高剂量组，每组15只，实验前禁食12h，称重，记录重量，每组灌胃56℃红星二锅头0.17mL/10g，半小时后，模型组灌胃0.1mL/只，去离子水，阳性对照组给予海王金樽溶液0.1mL，低剂量组和高剂量组分别给予中草药复方0.1mL/只和0.2mL/只，观察并记录小鼠的耐受时间、醉酒时间、醉酒只数，死亡只数。
4.2小鼠血液中的乙醇含量影响
取小鼠96只，将小鼠随机分为4组(按时间动态观察组)，每组24只，再均分为空白组，模型组，中草药复方低剂量和高剂量组，共4组。实验前禁食12h，禁食不禁水，称重，记录重量。实验时，空白组和模型组给予蒸馏水0.1mL/只，低剂量组给予葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)药物0.1mL/只，高剂量组给予葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)药物0.2mL/只。半小时后，除空白组外均灌胃0.17mL/10g 56℃红星二锅头。空白组给予相应的蒸馏水。于酒后0.5h、1h、2h、3h眼眶取血，取血完毕后，解剖小鼠，取出肝脏，用生理盐水浸洗，滤纸吸干后取左肝叶边缘肝脏组织备用(空白组小鼠只摘取肝脏组织备用)。
摘除眼球采血：采血时，用左手固定小鼠，左手拇指、食指尽量将动物眼 周皮肤往颈后压，尽量使眼球突出，右手用眼科弯镊迅速夹住眼球根部，将眼球摘除，将动物头朝下，提起动物，血液很快从眼眶内流入已准备好的容器中。此法一般只适用于一次性采血，由于取血过程中小鼠并未死亡，心脏在不断跳动，常用于小鼠大量采血。取血完毕后，静置，4000r/min，离心10min，取血清部分用于顶空气相色谱法测定血醇浓度。
4.3对乙醇脱氢酶的活性影响
利用乙醇脱氢酶(ADH)催化氧化型辅酶Ⅰ反应的原理，通过测定340nm处吸光度的变化率得出其酶活性。
准确称取备用肝组织重量，按照重量体积比(克：毫升)1:9的比例加入生理盐水，制备成10％的匀浆，2500r/min离心10分钟，取上清进行测定。
表7测定过程
加入样本的同时开始计时，充分混匀，15秒后，340nm处，0.5cm光径，测定OD值A1，迅速将反应液置于37℃水浴锅中，10分15秒时取出，测定OD值A2。定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol产物的酶量定义为一个酶活力单位。组织中乙醇脱氢酶计算公式：
4.4酒精性肝损伤实验
昆明小鼠80只随机分为模型组，海王金樽阳性对照组，葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)低剂量组和高剂量组，每组20只，禁食12小时后，称重，记录重量。实验时，模型组给予蒸馏水0.1mL/只，海王金樽组给予海王金樽(0.75g/mL)0.1mL/只，葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)低剂量给予药物0.1mL/只，高剂量组给予药物0.2mL/只，半小时后，各组均灌胃0.1mL/10g 56℃红星二锅头，每日1次，连续15日，于末次给酒后2小时自眼眶采血，取血完毕后，解剖小鼠，取出肝脏，用生理盐水浸洗，滤纸吸干后取左肝叶边缘肝脏组织，用10％的福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色，光镜观察。
5实验结果及分析
5.1中草药醒酒复方的醒酒效果
将提前禁食12小时的小鼠分组称重后，按照前述的步骤进行实验操作，记录耐受时间和醉酒时间，数据统计汇总于表8和图17。实验结果：采用SPSS中的t检验(x±s表示，P<0.05有统计学意义)。
表8中草药醒酒复方的醒酒效果
结果分析：阳性对照组(海王金樽)、低剂量组及高剂量组与模型组相比，醉酒时间均有显著性差异(P<0.05)；耐受时间只有低剂量组有显著性差异，海王金樽阳性对照组和高剂量组均无显著性差异。
5.2顶空气相法测定小鼠血液中的乙醇含量。
5.2.1气相色谱检测结果及标准品对照见图18和图19所示。
5.2.2中草药醒酒复方对小鼠血中乙醇浓度的影响
乙醇为低分子脂溶性物质，摄入的乙醇可通过滤过和简单扩散方式从胃肠道吸收。人体摄入含乙醇的饮料后数分钟内即可在外周血中测得乙醇的存在，急性酒精中毒患者症状表现与血中乙醇浓度有直接关系，血中乙醇浓度升高越快，其反应越严重，酒精中毒的程度越深。因此，检验血中乙醇浓度是评价治疗酒精中毒药物的重要和客观指标之一。
分别测定小鼠从灌胃酒的时刻开始计时后，分别于30min、60min、90min、120min、180min时测量血液中的乙醇浓度，分析中草药解酒复方不同剂量对小鼠血中乙醇浓度影响结果见表9和图20。
表9中草药不同剂量对小鼠血中乙醇浓度影响(单位：g/mL)
注：*为有显著性差异(P<0.05)
结果分析：酒后0.5h，与模型组比较，低剂量组和高剂量组均无显著性差异(P>0.05)；酒后1h，与模型组比较，低剂量组和高剂量组乙醇浓度均有下降的趋势，且高剂量组有显著性差异(P<0.05)(乙醇浓度下降20％以上)；酒后2h，与模型组比较，低剂量组和高剂量组乙醇浓度均有下降的趋势，且低剂量组和高剂量组均有显著性差异(P<0.05)(乙醇浓度下降20％以上)；酒后3h，与模型组比较，低剂量组和高剂量组乙醇浓度均有下降的趋势。
任何一种毒物(或药物)进入体内后，其原形及代谢产物均随时间不断运动变化，这些变化很复杂。本发明在实验设计时设立了血中乙醇浓度--时间曲线，由曲线的变化趋势动态观察不同剂量的中药复方提取物对酒后不同时间点血中乙醇浓度的影响，结果显示解酒组合物治疗组小鼠血中乙醇浓度在所测定的四个时间点均比模型组低，且在1h和2h具有显著差异(p<0.05)。此外，还显示小鼠血中乙醇浓度在酒后60分钟达到吸收高峰，然后进入分解代谢阶段。在所观察的30分钟～60分钟内，治疗组小鼠血中乙醇浓度---时间曲线峰值降低，曲线上升斜率减小。本发明解酒组合物对急性酒精中毒具有良好的治疗作用。
5.3乙醇脱氢酶的活性测定
实验已经证实本发明解酒组合物能够降低急性酒精中毒小鼠血浆中乙醇浓度，为了了解其是否通过增强与酒精代谢相关的酶活性而达到解酒的效果，本实施例通过检测肝组织浆上清液中ADH活性变化来探求中草药水提液对与酒精代谢相关酶活性的影响，进一步揭示其解酒的机制。小鼠肝中乙醇脱氢酶活 性检测结果检表10及图21所示。
酒后0.5h，与模型组比较，低剂量组和高剂量组有升高的趋势；酒后1h和2h，与模型组比较，低剂量组和高剂量组均有升高的趋势，且低剂量组有显著性差异(P＜0.05)；；酒后3h，与模型组比较，低剂量组和高剂量组均有升高的趋势，且低剂量组和高剂量组有显著性差异。(P＜0.05)。
表10各组小鼠肝中乙醇脱氢酶活性比较(单位：U/mL)
时间/h 模型组 低剂量组 高剂量组
0.5 180.6±39.3 216.9±68.6 192±36.6
1 191.2±28.7 253.3±37* 211.8±34.6
2 177.5±34.7 237.9±38.1* 220.2±53.83
3 140.9±49.4 233.4±33.7* 212.4±38.8*
注：*为有显著性差异(P＜0.05)
实验证明，炎性细胞浸润可能是酒精性肝病最早期的病理改变，随着时间的延长会发展为脂肪变性。低剂量组和高剂量组灌胃小鼠肝组织和空白对照小鼠肝组织相差无几，说明本发明解酒组合物本身对肝脏无毒害作用，并对于小鼠有一定的保护作用。
在灌胃过程中，统计了因肝损伤而死亡的小鼠数量，结果见表11和图23。由表11及图23可知，在15天之内，与模型组相比，海王金樽组，低剂量组，高剂量组小鼠死亡率均降低，且高剂量组更加明显。
表11酒精性肝损伤小鼠的死亡情况
分组 只数 死亡数 死亡率
模型组 17 12 70.6％
海王金樽组 18 10 55.5％
低剂量组 19 8 42.1％
高剂量组 19 6 31.5％
实施例5醒酒卷烟
实验材料与动物管理参照前述实施例。
1.中草药醒酒烟剂制备
实验所用烟剂分为两种：①号受试烟剂和自制卷烟。
其中，自制卷烟组为将20g枳椇子、葛花和葛根的醇提粉末分别用3mL去离子水溶解，配成葛根∶葛花∶枳椇子＝1∶1∶1的中草药醒酒复方，按小鼠的灌胃剂量喷洒在烟丝上，烘干，用虎牌拉烟机制成的卷烟。①号受试烟剂为纯烟丝(与自制卷烟采用的烟丝相同)，由广东中烟工业有限责任公司提供。
2.主要仪器与设备
动物气体染毒仪、单通道智能吸烟机、56度红星二锅头(北京红星股份有限公司)、计时器、小鼠灌胃器、一毫升注射器、EP管、移液枪、枪头。
3.实验方法
取昆明小鼠40只，随机分为先酒后烟组和先烟后酒组，每组20只，再将每组随机分为①号受试烟组和自制卷烟组。每组10只，实验前禁食12h，称重，记录重量。实验开始时，先酒后烟组，先按0.17mL/10g给予56℃红星二锅头，再立即置于动物气体染毒仪的暴露腔内暴露一小时，控制腔内烟雾浓度为45％～55％，稀释流量20L/min。先烟后酒组先烟雾暴露一小时(条件同上)，半小时后，按0.17mL/10g给予56℃红星二锅头。观察并记录小鼠的耐受时间、醉酒时间、醉酒只数，死亡只数。
4.实验结果及分析：
表12醒酒烟剂先酒后烟醒酒效果
组别 平均耐受时间(min) 平均醉酒时间(min) 醉酒率 死亡率
①号受试烟组 46.4±42.4 889.6±217.3 100％ 20％
自制卷烟组 46.3±42.2 576.8±79.4* 70％ 20％
表13醒酒烟剂先烟后酒醒酒效果
组别 平均耐受时间(min) 平均醉酒时间(min) 醉酒率 死亡率
①号受试烟组 17.7±24.9 1076.0±282.8 100％ 0
自制卷烟组 55.6±23.9* 575.6±310.1* 100％ 10％
由表12及图24得知：自制卷烟组和①号受试烟组相比，耐受时间没有明显变化，醉酒时间显著下降且有显著性差异(P＜0.05)；由表13及图25得知：自制卷烟组和①号受试烟组相比，耐受时间有显著升高，醉酒时间有显著下降，且耐受时间和醉酒时间都有显著性差异(P＜0.05)。
5.顶空气相法测定小鼠血液中的乙醇含量
实验材料：动物气体染毒仪、单通道智能吸烟机、56度红星二锅头(北京红星股份有限公司)、计时器、小鼠灌胃器、一毫升注射器、5mL EP管、移液枪、枪头、丙酮、乙醇、①号受试烟组和自制卷烟组。
仪器及色谱条件：Thermo Fisher Trace GC Ultra气相色谱仪，Agilent DB-1色谱柱，气相色谱柱为程序升温法，在40℃维持1min，以20℃/min的速度升至160℃，在160℃维持3min，程序升温所需时间为10min；左边进样口温度为150℃，左边载气流速2mL/min，右边进样口相同。右边检测器为火焰离子化检测器，流速(mL/min)为空气∶燃气(H2)∶尾吹气＝350∶35∶30，传输线的温度为250℃，顶空进样量1mL。丙酮为内参。
实验方法：取小鼠80只，将小鼠随机分为5组(按时间动态观察组)，每组16只，再均分为①号烟组及自制卷烟组。实验前禁食12h，禁食不禁水，称重，记录重量。均置于动物气体染毒仪的暴露腔内，控制腔内烟雾浓度为45％～55％，稀释流量20L/min，烟雾暴露处理半小时。半小时后，均灌胃0.17mL/10g56℃红星二锅头。于酒后0.5h、1h、3h，5h眼眶取血，取血完毕后，解剖小鼠，取出肝脏，用生理盐水浸洗，滤纸吸干后取左肝叶边缘肝脏组织备用(空白组小鼠只摘取肝脏组织备用)。
实验结果及分析：见表14和图28所示，酒后0.5h，与①号受试烟组比较， 自制烟组血醇浓度有下降的趋势且有显著性差异(P<0.05)；酒后1h，与①号受试烟组比较，自制烟组有下降的趋势但无显著性差异(P>0.05)；酒后3h，与①号受试烟组比较，自制烟组血醇浓度有下降的趋势且有显著性差异(P<0.05)；酒后5h，与①号受试烟组比较，自制烟组无显著性差异(P>0.05)。
表14中草药自制卷烟对小鼠血醇浓度的影响
分组 ①号受试烟组 自制卷烟组
0.5 329.7±61.0 236.1±80.6*
1 388.8±71.3 348.8±82.5
3 398.7±45.5 353.5±29.9*
5 338.9±39.6 344.1±45.8
6.乙醇脱氢酶的活性测定(实验方法同前述实施例)
乙醇脱氢酶试剂盒(购自南京建成生物科技有限公司)(其余同乙醇含量测
定)。利用乙醇脱氢酶(ADH)催化氧化型辅酶Ⅰ反应的原理，通过测定340nm处吸光度的变化率得出其酶活性。
准确称取备用肝组织重量，按照重量体积比(克：毫升)1:9的比例加入生理盐水，制备成10％的匀浆，2500r/min离心10分钟，取上清进行测定。见表15所示：
表15
加入样本的同时开始计时，充分混匀，15秒后，340nm处，0.5cm光径，测定OD值A1，迅速将反应液置于37℃水浴锅中，10分15秒时取出，测定OD值A2。定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol产物的酶量定义为一个酶活力单位。组织中乙醇脱氢酶计算公式：
实验结果及分析：表16和图29可知：酒后0.5h，1h，2h，自制烟丝与①号受试烟组比较，没有显著性差异；3h，5h，AHD活性显著升高且有显著性差异。
表16各组小鼠肝中乙醇脱氢酶活性比较(单位：U/mgprot)
注：*为有显著性差异(P<0.05)
时间/h ①号受试烟组 自制卷烟组
0.5 2.51±1.49 2.89±1.01
1 2.23±1.36 2.11±1.30
3 1.49±0.54 6.45±1.96*
5 2.33±1.38 7.23±1.24*
实施例6中药材的添加比例实验
1.本实施例以葛花单独切丝，与烟丝混合，制成药烟。添加比例分别为20％，55％。②号受试烟为纯烟丝，③号受试药烟为添加20％葛花丝，④号受试药烟为添加55％葛花丝，手工卷制。实验动物和仪器等同实施例5。
取昆明小鼠80只，随机分为先酒后烟组和先烟后酒组，每组40只，再将每组随机分为模型组(A组)，复方组(葛根：葛花：枳椇子＝1:1:1，B组)，②号受试烟组(C组)，③号受试烟组(D组)，④号受试烟组(E组)。每组8只，实验前禁食12h，称重，记录重量。实验开始时，先酒后烟组，先按0.17mL/10g给予56℃红星二锅头，再立即置于动物气体染毒仪的暴露腔内暴露一小时，控制腔内烟雾浓度为45％～55％，稀释流量20L/min。先烟后酒组先烟雾暴露一小时(条件同上)，半小时后，按0.17mL/10g给予56℃红星二锅头。观察并记录小鼠的耐受时间、醉酒时间、醉酒只数，死亡只数。
取小鼠120只，将小鼠随机分为5组(按时间动态观察组)，每组24只，再均分为②号受试烟组(C组)，③号受试烟组(D组)，④号受试烟组(E组)。实验前禁食12h，禁食不禁水，称重，记录重量。均置于动物气体染毒仪的暴露腔内，控制腔内烟雾浓度为45％～55％，稀释流量20L/min，烟雾暴露处理1小时。1小时后，均灌胃0.17mL/10g 56℃红星二锅头。于酒后0.5h、1h、2h、3h，5h眼眶取血，取血完毕后，解剖小鼠，取出肝脏，用生理盐水浸洗，滤纸吸干后取左肝叶边缘肝脏组织备用(空白组小鼠只摘取肝脏组织备用)。
实验结果及分析：实验结果采用SPSS中的t检验(x±s表示，P<0.05有统计学意义)。结果分析：由图30、图31(*表示与阴性对照相比，P<0.05)、表17和表8可知，醒酒复方组与模型组相比，耐受时间与醉酒时间均有显著性差异(P<0.05)。④号受试烟剂与②号受试烟剂相比，耐受时间与醉酒时间均有显著性差异(P<0.05)，③号受试烟剂均无显著性差异。
复方组与模型组相比，耐受时间有增长的趋势，醉酒时间有下降的趋势。由于方差较大，故没有显著性差异。③号受试烟剂与②号受试烟剂相比，耐受时间有增长的趋势，醉酒时间有下降的趋势且有显著性差异。④号受试烟剂耐受及醉酒时间与②号受试烟剂相比均有显著性差异。
表17中草药醒酒烟剂先酒后烟的醒酒效果
组别 平均耐受时间(min) 平均醉酒时间(min)
A组 50.8±15.9 429±79.9
B组 75.2±12.5 323.7±73.5*
C组 29.9±10.1 460.1±71.1
D组 30.5±9.6 451±79.4
E组 40.6±13.2* 373.8±69.3*
表18不同剂量中草药醒酒烟剂先烟后酒的醒酒效果
组别 平均耐受时间(min) 平均醉酒时间(min) 醉酒率
A组 49.2±38.6 369.5±108.2 68.7％
B组 70.9±51.3 307.3±77.1 62.5％
C组 36.5±25.6 461.4±101.8 93.7％
D组 45±25.3 379.6±70.4 93.7％
E组 66.6±37.4 354.7±122.4 75％
2.顶空气相法测定小鼠血液中的乙醇含量(检测方法和试验方法同实施例5)
表19不同剂量中草药烟剂对小鼠血醇浓度的影响
分组 C组 D组 E组
0.5 378.2±90.5 317.2±106.1 327.9±86.2
1 439.6±61.1 425.8±66.0 437.0±55.8
2 505.1±66.9 439.1±28.62* 432.2±50.1*
3 458.7±50.6 430.5±47.5 395.1±42.2*
5 395.3±12.1 324.3±50.3* 312.1±73.5*
结果分析：由表19和图34可见，酒后0.5h，与①号受试烟组比较，②号受试烟组及③号受试烟组血醇浓度有下降的趋势但各组均无显著性差异(P＞0.05)；酒后1h，与①号受试烟组比较，②号受试烟组有下降的趋势但无显著性差异(P＞0.05)，③号受试烟组无明显变化；酒后2h，与①号受试烟组比较，②号受试烟组及③号受试烟组血醇浓度均有下降的趋势，且有显著性差异(P＜0.05)；酒后3h，与①号受试烟组比较，②号受试烟组及③号受试烟组血醇浓度有下降的趋势且③号受试烟组有显著性差异；酒后5h，与①号受试烟组比较，②号受试烟组及③号受试烟组血醇浓度有下降的趋势，且有显著性差异(P＜0.05)。
3.乙醇脱氢酶的活性测定(检测方法和试验方法同实施例5)
表20各组小鼠肝中乙醇脱氢酶活性比较(单位：U/mgprot)
分组 C组 D组 E组
0 0 0 0
0.5 5.19±1.45 4.89±0.92 11.3±2.3*
1 5.61±1.50 6.93±1.74 11.8±0.92*
2 8.23±2.55 7.85±2.35 10.53±2.20
3 6.93±1.54 7.14±2.50 12.1±3.10*
5 3.85±1.22 6.78±3.81 5.85±3.17
注：*为有显著性差异(P＜0.05)
由表20和图35可见，④号受试烟组与②号受试烟组比较，酒后乙醇脱氢酶的活性没有明显，分析认为为样本量太小且方差过大导致没有统计学意义。③号受试烟组与②号受试烟组比较，酒后乙醇脱氢酶的活性有上升的趋势且0.5h，1h，3h均有显著性差异(P＜0.05)；
实施例7醒酒卷烟的评吸试验
选用两种不同的市售卷烟烟丝，由广东中烟工业有限责任公司提供，其中1#、3#号受试烟为空白烟丝，2#、4#号受试烟分别为1#、3#号喷加解酒中草药提取物，提取物与烟丝的重量比均为1‰。
将1#、2#、3#、4#号受试烟组交由十名专业评吸员经行评吸。评吸结果如下：
1#号受试烟组：光泽油润(5.0)，香气充足(28.0)，较谐调(5.0)，微有杂气(10.5)，口腔略有刺激性(17.5)，余味较纯净舒适(22.0)。
2#号受试烟组：光泽油润(5.0)，香气充足(28.3)，较谐调(5.0)，微有杂气(10.3)，口腔略有刺激性(17.5)，余味较纯净舒适(22.1)。
3#号受试烟组：光泽油润(5.0)，香气充足(28.5)，较谐调(5.0)，微有杂气(10.5)，口腔略有刺激性(17.5)，余味较纯净舒适(22.0)。
4#号受试烟组：光泽油润(5.0)，香气充足(28.7)，较谐调(5.0)，微有杂气(10.6)，口腔略有刺激性(17.6)，余味较纯净舒适(22.1)。

Claims (10)

1.一种醒酒卷烟，其特征在于，是在烟丝中添加葛花、葛根和/或枳椇子丝；或者在烟丝中添加葛花、葛根和/或枳椇子乙醇提取物制得。
2.根据权利要求1所述醒酒卷烟，其特征在于，所述葛花、葛根和/或枳椇子丝的添加量为烟丝质量的20%～55%确定；或所述葛花、葛根和/或枳椇子乙醇提取物的添加量为烟丝质量的1‰～2‰确定。
3.根据权利要求1或2所述醒酒卷烟，其特征在于，所述醒酒卷烟是在烟丝中添加葛花、葛根和枳椇子丝；或者在烟丝中添加葛花、葛根和枳椇子乙醇提取物制得。
4.根据权利要求3所述醒酒卷烟，其特征在于，所述葛花、葛根和枳椇子丝的质量比例为1:1:1。
5.根据权利要求3所述醒酒卷烟，其特征在于，所述枳椇子的乙醇提取物、葛花的乙醇提取物和葛根的乙醇提取物的质量比例为1:1:1。
6.根据权利要求1、2或5所述醒酒卷烟，其特征在于，所述枳椇子的乙醇提取物是用乙醇经索式提取器回流提取枳椇子，4个小时得到提取液，提取温度为90℃；将提取液用旋转蒸发仪浓缩至膏状，再加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末得到。
7.根据权利要求1、2或5所述醒酒卷烟，其特征在于，所述葛花的乙醇提取物是用乙醇经索式提取器回流提取葛花4个小时，得到提取液，提取温度为90℃；将提取液用旋转蒸发仪浓缩至膏状，再加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末得到。
8.根据权利要求1、2或5所述醒酒卷烟，其特征在于，所述葛根的乙醇提取物是用乙醇经索式提取器回流提取葛根4个小时，得到提取液，提取温度为90℃；将提取液用旋转蒸发仪浓缩至膏状，再加入无水乙醇将水分带出，浓缩至粉末得到。
9.根据权利要求6、7或8所述醒酒卷烟，其特征在于，所述乙醇提取采用的乙醇的体积比浓度为75%。
10.权利要1求1至9任一项所述醒酒卷烟的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.准备葛花、葛根和/或枳椇子丝或其乙醇提取物粉；
将烟叶切丝；
S2.将葛花、葛根和/或枳椇子丝与烟丝混合，卷制而成醒酒卷烟；
或将葛花、葛根和/或枳椇子的乙醇提取物粉用去离子水溶解后喷洒在烟丝上，烘干，卷制而成醒酒卷烟。
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