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CN106727328A - 以药物‑磷脂‑胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法 - Google Patents

以药物‑磷脂‑胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法 Download PDF

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CN106727328A
CN106727328A CN201710004234.7A CN201710004234A CN106727328A CN 106727328 A CN106727328 A CN 106727328A CN 201710004234 A CN201710004234 A CN 201710004234A CN 106727328 A CN106727328 A CN 106727328A
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Abstract

本发明涉及以药物‑磷脂‑胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，包括：将处方量的磷脂分成第一用量的磷脂和第二用量的磷脂；取目标药物、第一用量的磷脂以及胆固醇，制得药物‑磷脂‑胆固醇三元复合物；取第二用量的磷脂制得磷脂水分散液；将第一步所得药物‑磷脂‑胆固醇三元复合物放入磷脂水分散液中，处理制得药物脂质体。本发明能减少有机溶剂的使用量，单次处理量大，工艺简单，生产效率高，易于工业化放大。

Description

以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法
技术领域
本发明涉及一种以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，属于药物制剂技术领域。
背景技术
据报道，目前新药开发中至少有40％的药物表现出低水溶性，由此可能导致不理想的口服生物利用度，或者难以开发成液体制剂(如注射剂等)，从而成为制约药物发展的瓶颈。提高难溶性药物溶解度的传统策略包括形成可溶性盐、调节pH、潜溶及增溶等。然而，对某些药物而言，即便使用以上方法有时仍难以达到适于临床使用的浓度，或者由于辅料的使用量过多而产生潜在的安全性风险。因此，研究者们一直在探寻更多、更安全的方法用于提高难溶性药物的溶解度。新的纳米给药系统，如脂质体、纳米粒、亚微乳、胶束等，成为其中一个重要的研究方向。
脂质体是纳米给药系统中最常见也是最早商业化的一种可用于注射的、较安全的给药系统。脂质体由单层或多层磷脂双分子层形成封闭囊状结构，既可以将水溶性药物包载于内部水相，也可以将脂溶性药物包封在磷脂双分子层中，因此对不同类别药物都具有较广泛的适用范围。脂质体与一般的药物剂型相比具有以下优势：(1)脂质体能降低药物毒性；(2)脂质体能保护被包封的药物；(3)脂质体具有一定的细胞亲和性与组织相容性。
脂质体的制备技术有很多，根据双分子层在水相中分散方式的差异，主要分为物理分散法、两相分散法等等。物理分散法的基本原理是将脂质材料和(或)脂溶性药物溶于有机溶剂中，除去溶剂使材料成膜，再与水相混合，采用诸如震荡、超声等方式使之水化形成脂质体。两相分散法是将油相溶液与水相溶液充分混合，再通过搅拌、通氮气的方式除去有机溶剂，得脂质体混悬液。以上方法中，普遍存在有机溶剂使用量多、除去困难，制备步骤耗时，生产效率低等缺陷，因而产品生产成本较高。
经检索发现，申请号为CN200810039032.7，公开号为CN101292957A，名称为《一种替尼泊苷磷脂复合物的脂质体制剂及其制备方法》的中国发明专利申请，其制备方法包括：(1)先将替尼泊苷和磷脂加到有机溶剂中，加热回流反应至溶液澄清透明，且磷脂与替尼泊苷的摩尔比为1-3:1；(2)将(1)所得溶液减压蒸发除去有机溶剂，并置真空干燥机中干燥，得替尼泊苷磷脂复合物粉末；(3)将替尼泊苷磷脂复合物粉末与磷脂、胆固醇按预定配比置容器中，加入有机溶剂，水浴加热搅拌使溶液澄清透明，然后减压蒸发除去有机溶剂，在容器壁上形成透明薄膜，加入缓冲液进行充分水化，得初步脂质体；(4)按常规药剂学方法制得制剂。
申请号为CN201610586554.3，申请公布号为CN106074390A，名称为《一种沙利度胺脂质体纳米制剂及其制备方法和应用》的中国发明专利申请，其制备方法包括：将沙利度胺、磷脂和胆固醇置于圆底烧瓶中，加入有机溶剂乙醇对上述物质进行溶解，然后在50℃水浴温度下减压旋转蒸发40min，除去有机溶剂，在瓶壁上会形成一层均匀透明的薄膜；加入生理盐水，摇匀，然后置于37℃振荡器中恒速振摇30min，形成沙利度胺磷脂复合物；取10ml上述沙利度胺磷脂复合物，置于25ml烧杯中，超声处理15min，即得沙利度胺脂质体纳米制剂。
然而，发明人经进一步研究发现，以上述专利为代表的现有技术中，虽然分别将磷脂与药物或将磷脂、胆固醇与药物反应形成了二元或三元复合物，但是在制备脂质体的过程中，都不可避免地采用了薄膜分散法，而薄膜分散法存在明显的不利之处：该法的有机溶剂使用量多、单次处理量少、生产设备占地面积大，因而生产效率低、生产成本高、不适合工业化。因此，亟需研发出有机溶剂使用量少，单次处理量大、避免采用占地面积过大的生产设备、提高生产效率的脂质体制备方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：克服现有技术存在的问题，提供一种以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，能减少有机溶剂的使用量，工艺简单，生产效率高，易于工业化放大。
本发明解决其技术问题的技术方案如下：
以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，包括以下步骤：
第一步、将处方量的磷脂分成第一用量的磷脂和第二用量的磷脂；取目标药物、第一用量的磷脂以及胆固醇置容器中，加入反应溶剂使物料完全溶解，持续保温搅拌，然后蒸发除去反应溶剂，所得产物在真空中放置，即得药物-磷脂-胆固醇三元复合物；
第二步、再取第二用量的磷脂置纯水中，经超声处理或以高速分散仪进行剪切后，得磷脂水分散液；
第三步、将第一步所得药物-磷脂-胆固醇三元复合物放入第二步所得的磷脂水分散液中，采用以下第一方式或第二方式进行处理，即得药物脂质体；
第一方式为：先以高速分散仪进行剪切，再以高压均质机进行循环均质；
第二方式为：先以探头进行超声处理，再以微孔滤膜进行过滤处理。
该制备方法中，仅在第一步制备药物-磷脂-胆固醇三元复合物时使用了少量有机溶剂，在其余步骤中不再使用任何有机溶剂，因此大幅减少了有机溶剂的使用量。此外，从第一步形成三元复合物至第三步获得脂质体，全程均不需要成膜，因此设备体积小，单次处理量大，生产工艺简单，生产效率高，易于工业化放大。
本发明进一步完善的技术方案如下：
优选地，第一步中，所述第一用量小于第二用量；第一用量磷脂的质量是目标药物质量的至少3倍，目标药物与胆固醇的质量比为1:(0.1-10)；
第二步中，第二用量磷脂的质量是第一步所得药物-磷脂-胆固醇三元复合物质量的至少3倍。
该优选方案中，将磷脂巧妙地分成前少后多两部分，通过对磷脂第一、第二用量的具体限定，确保药物-磷脂-胆固醇三元复合物的复合率，并确保脂质体的包封率；而且，第一用量磷脂量少也能进一步降低有机溶剂的使用量。
优选地，第一步中，保温温度范围为30℃-80℃，搅拌时间为1-8h；真空中放置的时间为8-16h。
优选地，第一步中，所述反应溶剂的使用量为能将物料完全溶解的最低用量的1-1.5倍；所述反应溶剂为四氢呋喃、丙酮、氯仿之一或其组合。
优选地，第一步所得药物-磷脂-胆固醇三元复合物呈粉末状固体或海绵状半固体。
优选地，第三步的第一方式中，剪切速度为1000-10000rpm，剪切时间为1-30min，均质压力为100-1000bar，均质循环次数为1-10次。
优选地，第三步的第二方式中，采用100-1000W探头进行超声，超声处理时间为1-60min，微孔滤膜的孔径为0.22-0.8μm。
优选地，第三步所得药物脂质体的粒径为25-500nm。
优选地，所述目标药物为非甾体抗炎药、抗原抗体蛋白、蛋白多肽类药物、金属离子、中药活性成分之一或其组合。
优选地，所述磷脂为二肉豆蔻磷脂酰胆碱、二肉豆蔻磷脂酰甘油、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂之一或其组合。
本发明先将药物与磷脂、胆固醇形成药物-磷脂-胆固醇三元复合物，再将上述三元复合物与磷脂反应制备成脂质体，其中，将药物与磷脂、胆固醇形成复合物可以改善许多药物的不良性质，特别是提高药物的亲水、亲油性质；以药物-磷脂-胆固醇三元复合物作为基础，通过利用磷脂水分散液，以高压均质或探头超声方法制备脂质体，能大幅减少有机溶剂的使用量，单次处理量大，工艺简单，生产效率高，易于工业化放大。
附图说明
图1为本发明实施例1采用高压均质法所得脂质体的透射电镜图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不限于所给出的例子。
本发明具体实施的以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，包括：
第一步、将处方量的磷脂分成第一用量的磷脂和第二用量的磷脂，第一用量小于第二用量；取目标药物、第一用量的磷脂以及胆固醇置容器中，加入反应溶剂使物料完全溶解，在30℃-80℃保温搅拌1-8h，然后蒸发除去反应溶剂，所得产物在真空中放置，真空中放置的时间为8-16h，即得呈粉末状固体或海绵状半固体的药物-磷脂-胆固醇三元复合物；第一用量磷脂的质量是目标药物质量的至少3倍，目标药物与胆固醇的质量比为1:(0.1-10)；反应溶剂的使用量为能将物料完全溶解的最低用量的1-1.5倍，反应溶剂为四氢呋喃、丙酮、氯仿之一或其组合。
第二步、再取第二用量的磷脂置纯水中，经超声处理或以高速分散仪进行剪切后，得磷脂水分散液；第二用量磷脂的质量是第一步所得药物-磷脂-胆固醇三元复合物质量的至少3倍。其中，超声处理既可以采用普通超声分散设备，也可以采用探头超声。
第三步、将第一步所得药物-磷脂-胆固醇三元复合物放入第二步所得的磷脂水分散液中，采用以下第一方式或第二方式进行处理，即得药物脂质体，粒径为25-500nm。
第一方式为：先以高速分散仪进行剪切，再以高压均质机进行循环均质；其中，剪切速度为1000-10000rpm，剪切时间为1-30min，均质压力为100-1000bar，均质循环次数为1-10次。
第二方式为：先以探头进行超声处理，再以微孔滤膜进行过滤处理；其中，采用100-1000W探头进行超声，超声处理时间为1-60min，微孔滤膜的孔径为0.22-0.8μm。
以上方法中，目标药物优选非甾体抗炎药、抗原抗体蛋白、蛋白多肽类药物、金属离子、中药活性成分之一或其组合；需要说明的是，目标药物也可以是除上述限定以外的其它药物，经实验证明，本发明方法具有广泛地普遍适用性。
磷脂为二肉豆蔻磷脂酰胆碱、二肉豆蔻磷脂酰甘油、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂之一或其组合。
实施例1
处方中各组分的质量体积浓度(g/ml)为：
黄芩素 0.8％
蛋黄卵磷脂 16.08％
胆固醇 1.36％
余量为纯水。
制备工艺：根据上述处方，称取黄芩素、胆固醇和3倍黄芩素质量的蛋黄卵磷脂(即黄芩素与第一用量蛋黄卵磷脂的质量比为1:3，黄芩素与胆固醇的质量比为1:1.7)，置于茄型瓶中，采用四氢呋喃作为反应溶剂使三者完全溶解，30℃保温搅拌1h后，蒸发除去溶剂，所得产物真空下保持12h，即得黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物，取出，避光，于阴凉处密封保存。这一步的实质是采取溶剂法制备黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物。
称取处方中剩余蛋黄卵磷脂(即第二用量蛋黄卵磷脂，第二用量蛋黄卵磷脂的质量是前步所得三元复合物质量的3倍)，超声分散于处方量纯水中，加入黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物，然后在高速分散仪中5000rpm高速剪切5min，再加入高压均质机中，在500bar均质压力下，循环3次，即得药物脂质体，或者用探头超声处理，探头超声功率550W，工作时间10min，所得溶液过0.45μm微孔滤膜，即得药物脂质体。最终脂质体中质量比黄芩素：蛋黄卵磷脂：胆固醇＝1:20.1:1.7。
本实施例采用高压均质法所得脂质体的透射电镜图如图1所示。由图可见，脂质体外观为球形或近球形，边缘光滑，无可见药物晶体颗粒，粒径在100nm左右。纳米粒表面显示出指纹状特征，表明存在脂质体的双分子层结构。
实施例2
处方中各组分的质量体积浓度(g/ml)为：
槲皮素 0.2％
蛋黄卵磷脂 4.49％
胆固醇 0.4％
余量为纯水。
制备工艺：根据上述处方，称取槲皮素、胆固醇和3.2倍槲皮素质量的蛋黄卵磷脂(即槲皮素与第一用量蛋黄卵磷脂的质量比为1:3.2，槲皮素与胆固醇的质量比为1:2)，置于茄型瓶中，采用四氢呋喃作为反应溶剂使三者完全溶解，55℃保温搅拌4h后，蒸发除去溶剂，所得产物真空下保持12h，即得槲皮素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物，取出，避光，于阴凉处密封保存。
称取处方中剩余蛋黄卵磷脂(即第二用量蛋黄卵磷脂，第二用量蛋黄卵磷脂的质量是前步所得三元复合物质量的约3.1倍)，超声分散于处方量纯水中，加入槲皮素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物，采用550W探头超声处理10min，所得溶液过0.45μm微孔滤膜，密封保存，即得药物脂质体。
实施例3
处方中各组分的质量体积浓度(g/ml)为：
吲哚美辛 0.5％
氢化大豆卵磷脂 16％
胆固醇 1.0％
余量为纯水。
制备工艺：根据上述处方，称取吲哚美辛、胆固醇和4倍吲哚美辛质量的氢化大豆卵磷脂(即吲哚美辛与第一用量氢化大豆卵磷脂的质量比为1:4，吲哚美辛与胆固醇的质量比为1:2)，置于茄型瓶中，采用氯仿作为反应溶剂使三者完全溶解，55℃保温搅拌4h后，蒸发除去溶剂，所得产物真空下保持12h，即得吲哚美辛-氢化大豆卵磷脂-胆固醇三元复合物，取出，避光，于阴凉处密封保存。
称取处方中剩余氢化大豆卵磷脂(即第二用量氢化大豆卵磷脂，第二用量氢化大豆卵磷脂的质量是前步所得三元复合物质量的4倍)，将氢化大豆卵磷脂超声分散于处方量纯水中，并与吲哚美辛-氢化大豆卵磷脂-胆固醇三元复合物混合，在高速分散仪中5000rpm高速剪切8min，再加入高压均质机中，在500bar均质压力下，循环5次，即得药物脂质体。
实施例4
处方中各组分的质量体积浓度(g/ml)为：
千层纸素 0.5％
大豆卵磷脂 16.2％
胆固醇 0.9％
余量为纯水。
制备工艺：根据上述处方，称取千层纸素、胆固醇和5倍千层纸素质量的大豆卵磷脂(即千层纸素与第一用量大豆卵磷脂的质量比为1:5，千层纸素与胆固醇的质量比为1:1.8)，置于茄型瓶中，采用丙酮作为反应溶剂使三者完全溶解，60℃保温搅拌3.5h后蒸发除去溶剂，所得产物真空下保持12h，即得千层纸素-大豆卵磷脂-胆固醇三元复合物，取出，避光，于阴凉处密封保存。
称取处方中剩余大豆卵磷脂(即第二用量大豆卵磷脂，第二用量大豆卵磷脂的质量是前步所得三元复合物质量的约3.5倍)，将大豆卵磷脂分散于处方量纯水中，并与千层纸素-大豆卵磷脂-胆固醇三元复合物混合，采用探头超声处理，探头超声功率550W，工作时间12min。所得溶液过0.45μm微孔滤膜，即得药物脂质体。
实施例5
背景技术中提及的申请号为CN200810039032.7，公开号为CN101292957A，名称为《一种替尼泊苷磷脂复合物的脂质体制剂及其制备方法》的中国发明专利申请，下称专利一，其方法的实质为：药物与磷脂溶于有机溶剂，加热回流，随后减压蒸发除去有机溶剂，再真空干燥得药物-磷脂二元复合物，药物-磷脂二元复合物与磷脂、胆固醇再通过薄膜分散法制备脂质体。
背景技术中提及的申请号为CN201610586554.3，申请公布号为CN106074390A，名称为《一种沙利度胺脂质体纳米制剂及其制备方法和应用》的中国发明专利申请，下称专利二，其方法的实质为：药物与磷脂、胆固醇通过薄膜分散法形成薄膜，再经生理盐水水化得药物-磷脂-胆固醇三元复合物，再将三元复合物超声处理得脂质体。
本发明方法完全不需要采用薄膜分散法，本发明方法实质：药物与磷脂、胆固醇溶于有机溶剂，保温搅拌，蒸发除去有机溶剂，得药物-磷脂-胆固醇三元复合物，制备磷脂水分散液，并加入药物-磷脂-胆固醇三元复合物，高压均质或探头超声制备脂质体。这样即可完全避免薄膜分散法的不利之处。
为比较各方法的实际效果，本实施例进行了对比实验，分为本发明方法组和薄膜分散法组，所用药物为黄芩素。
具体而言，本发明方法即指先将黄芩素与磷脂、胆固醇制备成黄芩素-磷脂-胆固醇三元复合物，再与磷脂水分散液形成脂质体。
薄膜分散法即先将黄芩素与磷脂、胆固醇加入二氯甲烷溶解，水浴加热后旋转蒸发除去有机溶剂形成均匀薄膜，水化，探头超声处理，制备得脂质体。考察各组的粒径、PDI、包封率以及外观，具体数据如下表所示：
由以上实验数据可知：
(1)与专利一、专利二所用薄膜分散法相比，本发明方法工艺简单、有机溶剂使用量少，无需占地面积大的生产设备。
(2)本发明方法制备所得脂质体的稳定性明显优于薄膜分散法。
实施例6
本发明将磷脂巧妙地分成前少后多两部分，并经过了如下实验的验证。
磷脂分为前、后两部分，前一部分用于制备药物-磷脂-胆固醇三元复合物，该步骤中磷脂与药物比例是关键参数，影响磷脂复合物的复合率；后一部分用于磷脂水分散液，此步骤中磷脂与三元复合物的质量比亦是关键工艺参数，影响脂质体的包封率。
(1)制备复合物时磷脂与药物反应投料比的筛选
以黄芩素为例。磷脂采用蛋黄卵磷脂。
采用溶剂法制备黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物：称取黄芩素和蛋黄卵磷脂、胆固醇，置于茄型瓶中，黄芩素与胆固醇的质量比为1:1，蛋黄卵磷脂与黄芩素的质量比分别为2:1、2.5:1、3:1、3.3:1、3.5:1；加入适量反应溶剂四氢呋喃使三者完全溶解，30℃保温搅拌1h后旋转蒸发除去溶剂，所得产物在真空下保持12h，取出产物，避光，保持干燥，于阴凉处保存，即得黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物。测定复合率。结果如下表所示。
蛋黄卵磷脂与黄芩素投料比(质量比)对复合率的影响(n＝3)
由此可见，随着黄芩素在复合体系中的质量比降低，复合率随之升高，当磷脂质量是黄芩素质量的3倍及以上时，复合率接近100％。
(2)制备脂质体时磷脂与三元复合物的质量比的筛选
以黄芩素为例。磷脂采用蛋黄卵磷脂。处方由黄芩素、蛋黄卵磷脂、胆固醇及纯水组成。
采用溶剂法制备黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物：称取黄芩素和蛋黄卵磷脂、胆固醇，置于茄型瓶中，黄芩素与胆固醇的质量比为1:1，蛋黄卵磷脂与黄芩素的质量比为3:1；加入适量反应溶剂四氢呋喃使三者完全溶解，30℃保温搅拌1h后旋转蒸发除去溶剂，所得产物在真空下保持12h，取出产物，避光，保持干燥，于阴凉处保存，即得黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物。
调节蛋黄卵磷脂与黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物的质量比分别为5:5、8:5、10:5、13:5、15:5、18:5、20:5和23:5(换算成蛋黄卵磷脂与黄芩素质量比则为8:1、11:1、13:1、16:1、18:1、21:1、23:1和26:1)，按黄芩素浓度80mg/ml计，分别称取蛋黄卵磷脂和黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物。将蛋黄卵磷脂分散于处方量纯水中得蛋黄卵磷脂水分散液，加入黄芩素-蛋黄卵磷脂-胆固醇三元复合物，在高速分散仪中5000rpm高速剪切5min，再加入高压均质机中，在500bar均质压力下，循环3次。测定所得脂质体的包封率、粒径和Zeta电位。
蛋黄卵磷脂与三元复合物的质量比对脂质体的包封率、粒径和Zeta电位的影响(n＝3)
由此可见：(i)在蛋黄卵磷脂与三元复合物的质量比为5:5-15:5范围内，随着蛋黄卵磷脂与三元复合物质量比的升高，包封率逐渐增加，当蛋黄卵磷脂与三元复合物质量比达到15:5(即蛋黄卵磷脂、黄芩素、胆固醇质量比为18:1:1)及以上时，包封率接近100％。
(ii)在蛋黄卵磷脂与三元复合物质量比为5:5-23:5时，脂质体粒径在102-112nm范围内。
(iii)在蛋黄卵磷脂与三元复合物质量比为5:5-23:5时，脂质体的Zeta电位均低于-25mV且较稳定。
(iv)综合上述结果可以确定，蛋黄卵磷脂与三元复合物质量比应为15:5即3:1及以上。
需要说明的是，本实施例中(1)、(2)两部分筛选实验还采用了其它药物、其它磷脂、以及其它符合本发明技术方案限定的处方进行验证，其结果均与以上结果相符。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

Claims (10)

1.以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，包括以下步骤：
第一步、将处方量的磷脂分成第一用量的磷脂和第二用量的磷脂；取目标药物、第一用量的磷脂以及胆固醇置容器中，加入反应溶剂使物料完全溶解，持续保温搅拌，然后蒸发除去反应溶剂，所得产物在真空中放置，即得药物-磷脂-胆固醇三元复合物；
第二步、再取第二用量的磷脂置纯水中，经超声处理或以高速分散仪进行剪切后，得磷脂水分散液；
第三步、将第一步所得药物-磷脂-胆固醇三元复合物放入第二步所得的磷脂水分散液中，采用以下第一方式或第二方式进行处理，即得药物脂质体；
第一方式为：先以高速分散仪进行剪切，再以高压均质机进行循环均质；
第二方式为：先以探头进行超声处理，再以微孔滤膜进行过滤处理。
2.根据权利要求1述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，第一步中，所述第一用量小于第二用量；第一用量磷脂的质量是目标药物质量的至少3倍，目标药物与胆固醇的质量比为1:(0.1-10)；
第二步中，第二用量磷脂的质量是第一步所得药物-磷脂-胆固醇三元复合物质量的至少3倍。
3.根据权利要求1述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，第一步中，保温温度范围为30℃-80℃，搅拌时间为1-8h；真空中放置的时间为8-16h。
4.根据权利要求1述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，第一步中，所述反应溶剂的使用量为能将物料完全溶解的最低用量的1-1.5倍；所述反应溶剂为四氢呋喃、丙酮、氯仿之一或其组合。
5.根据权利要求1述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，第一步所得药物-磷脂-胆固醇三元复合物呈粉末状固体或海绵状半固体。
6.根据权利要求1述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，第三步的第一方式中，剪切速度为1000-10000rpm，剪切时间为1-30min，均质压力为100-1000bar，均质循环次数为1-10次。
7.根据权利要求1述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，第三步的第二方式中，采用100-1000W超声探头，超声处理时间为1-60min，微孔滤膜的孔径为0.22-0.8μm。
8.根据权利要求1至7任一项述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，第三步所得药物脂质体的粒径为25-500nm。
9.根据权利要求1至7任一项述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，所述目标药物为非甾体抗炎药、抗原抗体蛋白、蛋白多肽类药物、金属离子、中药活性成分之一或其组合。
10.根据权利要求1至7任一项述及以药物-磷脂-胆固醇三元复合物为基础的脂质体制备方法，其特征是，所述磷脂为二肉豆蔻磷脂酰胆碱、二肉豆蔻磷脂酰甘油、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂之一或其组合。
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