CN106706815A

CN106706815A - 一种中药组合物三藤胶囊的含量检测方法

Info

Publication number: CN106706815A
Application number: CN201710164090.1A
Authority: CN
Inventors: 杨春欣; 梁健; 沈熊; 吕迁洲
Original assignee: Zhongshan Hospital Fudan University
Current assignee: Zhongshan Hospital Fudan University
Priority date: 2017-03-17
Filing date: 2017-03-17
Publication date: 2017-05-24

Abstract

本发明提供了一种中药组合物三藤胶囊的含量检测方法，所述三藤胶囊由雷公藤、红藤和鸡血藤3味中药组方,经提取、浓缩、加入赋形剂、干燥、粉碎后装入胶囊内所得，采用高效液相色谱法对雷公藤酯甲的含量进行测定。该检测方法包括色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液的制备、供试品溶液的制备以及测定法，本品每粒含雷公藤酯甲不得低于0.046mg。所述检测方法应符合胶囊剂项下的有关各项规定。本发明的优点是：原来三藤合剂只有鉴别，无质量检测标准，而本品选用对免疫系统起作用的雷公藤中主要有效成分雷公藤酯甲作为检测标准，正好与本品的制法和功能主治相符合。因此本品将含测指标成分确定为雷公藤酯甲。从而保证了检测结果的准确性。保证用药的安全性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合理。

Description

一种中药组合物三藤胶囊的含量检测方法

技术领域

本发明涉及中药制剂的质量控制领域，特别涉及中药组合物三藤胶囊的含量检测方法。

背景技术

三藤胶囊主要用于治疗各型红斑狼疮等疾病。该制剂组方合理、治疗病症明确、不良反应小。三藤胶囊作为中药雷公藤复方制剂，具有体积小、用量小、疗效高、副作用小，服用方便和质量稳定的优点。

三藤胶囊是由雷公藤100g、红藤100g、鸡血藤100g组方。以上3味，加6倍量90％乙醇，回流提取2小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至密度为1.24～1.26，加入糊精，混合，80℃干燥，得三藤干粉，装入0号胶囊内，即得三藤胶囊。本品为硬胶囊剂，除去胶囊壳后显黄褐色至棕褐色；气香，味微苦。功能主治：活血化瘀，治疗系统性红斑狼疮。

三藤胶囊系由院内制剂“三藤合剂”改剂型而得。原三藤合剂质量标准只有鉴别，无含量测定。该胶囊剂采用主要有效成分雷公藤酯甲(Wilforlide A)作为含量测定的标准品。雷公藤酯甲药理研究证明有免疫抑制作用。原剂型三藤合剂由于是水煎剂，成分比三藤胶囊更复杂，经采用高效液相法测定含量，雷公藤酯甲含量很低或测不到，因此对原剂型改剂型为胶囊剂，采用乙醇提取，可以提高雷公藤酯甲的含量，使三藤胶囊中雷公藤酯甲的含量每粒不低于0.046mg。因此需要一种三藤胶囊的含量检测方法。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种安全、检测准确性高的三藤胶囊的含量检测方法。

本发明的一种中药组合物三藤胶囊的含量检测方法，所述三藤胶囊由雷公藤、红藤和鸡血藤组方，所述检测方法包括如下步骤：

照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。

步骤A、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱；检测波长为210nm。理论板数按雷公藤酯甲计不低于3000。

步骤B、对照品溶液的制备：取雷公藤酯甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.34mg的溶液，即得；

步骤C、供试品溶液的制备：取三藤胶囊10粒，倒出内容物，混匀，精密称定1.33g，加氯仿40mL，超声提取两次，每次30min，滤纸过滤，残渣用10mL氯仿洗脱，回收滤液至1mL，加中性氧化铝(100～200目)1g，搅拌均匀，烘干，上中性氧化铝柱(100～200目，8g；内径1.5cm×长度15cm)，用乙酸乙酯100mL洗脱，收集洗脱液并回收至干，加甲醇适量使溶解，置2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

步骤D、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得

本品每粒含雷公藤酯甲(C₁₈H₁₆O₈)计，不得少于0.046mg。

所述三藤胶囊是由雷公藤100g、红藤100g、鸡血藤100g组方，以上3味，加6倍量90％乙醇，回流提取2小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至密度为1.24～1.26，加入糊精，混合，80℃干燥，得三藤干粉，装入0号胶囊内，即得三藤胶囊38粒；本品为硬胶囊剂，除去胶囊壳后显黄褐色至棕褐色；气香，味微苦。

所述检测方法应符合胶囊剂项下的有关各项规定。

本发明的优点是：原来三藤合剂无含量检测标准，而本品选用对免疫系统起作用的雷公藤中主要有效成分雷公藤酯甲作为检测标准，正好与本品的制法和功能主治相符合。因此本品将含测指标成分确定为雷公藤酯甲。从而保证了检测结果的准确性。保证用药的安全性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合理。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步说明，其目的仅在于更好地理解本发明的研究内容而非限制本发明的保护范围。

实施例：

本发明的一种中药组合物三藤胶囊的质量(含量)检测方法，包括如下步骤：

含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

步骤A、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水(A)-乙腈(B)(0～20min，A：35％，B：65％；20～70min，A：35％→0％，B：65％→100％)为流动相，即在0～20min时间段内，流动相A设定为35％，流动相B设定为65％；从20～70min时间段内，为梯度洗脱，流动相A设定为从35％逐渐减少至0％，流动相B设定为从65％逐渐增加至100％；检测波长为210nm。理论板数按雷公藤酯甲峰计算应不低于3000。

步骤C、供试品溶液的制备：取三藤胶囊10粒，倒出内容物，混匀，精密称定1.33g，加氯仿40mL，超声提取两次，每次30min，滤纸过滤，残渣用10mL氯仿洗脱，回收滤液至1mL，加中性氧化铝(100～200目)1g，搅拌均匀，烘干，上中性氧化铝柱(100～200目，8g；内径1.5cm×长度15cm)，用乙酸乙酯100mL洗脱，收集洗脱液并回收至干，加甲醇适量使溶解，置2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45νm微孔滤膜滤过，即得。

步骤D、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含雷公藤酯甲(C₁₈H₁₆O₈)不得低于0.046mg。

所述三藤胶囊是由雷公藤100g、红藤100g、鸡血藤100g组方，以上3味，加6倍量90％乙醇，回流提取2小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至密度为1.24～1.26，加入糊精，混合，80℃干燥，得三藤干粉，装入0号胶囊内，即得三藤胶囊；本品为硬胶囊剂，除去胶囊壳后显黄褐色至棕褐色；气香，味微苦。

所述检测方法应符合胶囊剂项下的有关各项规定。

以下通过试验例来进一步说明本发明的中药组合物三藤胶囊的质量检测方法的有益效果：

试验例：

含量测定按《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法测定。

1.仪器、对照品、试剂和试药

1.1本发明使用的仪器：Agilent 1200高效液相系统，包括：G1312A/30型泵，G1314D紫外/可见光检测器，G1329A型自动进样阀，G1316A/59柱温箱；ChemStationB.04.02工作站；EYELA旋转蒸发仪N1001型(日本东京理化器械株式会社制)；B2500S-MTH型超声波清洗仪；AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司制)

1.2对照品：雷公藤酯甲(Wilforlide A)(111597-200505)，对照品由中国食品药品检定研究院提供；

1.3试剂：乙腈(色谱纯，美国Merck公司生产)；其余试剂均为分析纯，试验用水为二次蒸馏水。中性氧化铝，上海五四化学试剂厂生产；微孔滤膜，孔径0.45_μm，上海半岛实业有限公司净化器材厂生产。

1.4试药：三藤胶囊样品是申请人在上海蔡同德堂中药制药厂的中试产品。

2.对照品溶液的制备

称取雷公藤酯甲(Wilforlide A)对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.34mg的溶液，即得。

3.色谱条件试验

分别以甲醇-水，乙腈-水，甲醇-0.04％磷酸或甲醇-乙腈-水系统为流动相。经试验，采用甲醇-0.04％磷酸和甲醇-乙腈-水系统分离时，雷公藤酯甲无明显出峰，甲醇-水系统分离效果不如采用乙腈-水系统。当乙腈-水梯度洗脱，流速为1ml/min，柱温为30℃时，供试品色谱峰分离度符合要求，保留时间合适。雷公藤酯甲峰与其它峰之间有良好的分离，且峰形好、柱效高，表明该流动相及相关色谱条件可作为本实验的色谱条件。确定如下色谱条件：

色谱柱：Phenomenex Hyper Clore BDS-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：水(A)-乙腈(B)(0～20min，A：35％，B：65％；20～70min，A：35％→0％，B：65％→100％)；流速：1ml·min；柱温：30℃；检测波长：210nm；进样量：10μl；

依照上述色谱条件测定，理论塔板数按雷公藤酯甲计不低于3000。

4.供试品溶液的制备选择

4.1提取方法考察

考察回流和超声2种提取方法对雷公藤酯甲的提取程度，结果显示超声提取和回流提取的程度一样，超声提取简单易操作，选择超声提取。

4.2提取溶剂考察

分别选择乙酸乙酯，氯仿，甲醇为提取溶剂，采用超声方法，结果显示氯仿提取时，雷公藤酯甲含量最高，杂质较少，因此选择氯仿提取。

4.3提取时间考察

分别考察15min，30min，60min提取时间对雷公藤酯甲的影响，结果显示提取30min就较为完全，因此选择30min。

4.4提取次数考察

分别考察提取1次，2次，3次的影响，结果显示提取2次时雷公藤酯甲较提取1次时含量增加，相较于提取3次无明显差异，为节约分析时间，因此选择提取2次。

综上考察，确定试品溶液的制备方法如下：

取三藤胶囊10粒，倒出内容物，混匀，精密称定1.33g，加氯仿40mL，超声提取两次，每次30min，滤纸过滤，残渣用10mL氯仿洗脱，回收滤液至1mL，加中性氧化铝(100～200目)1g，搅拌均匀，烘干，上中性氧化铝柱(100～200目，8g；内径1.5cm×长度15cm)，用乙酸乙酯100mL洗脱，收集洗脱液并回收至干，加甲醇适量使溶解，置2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45νm微孔滤膜滤过，即得。

5.线性关系的考察

精密吸取浓度为0.068mg/mL，0.17mg/mL，0.34mg/mL，0.51mg/mL，0.68mg/mL的雷公藤酯甲对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，按色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，雷公藤酯甲的量为横坐标绘制标准曲线，计算其回归方程为：y＝2698.5046x-1.7512，r＝0.9999(n＝5)，表明雷公藤酯甲在0.68μg～6.8μg范围内具有良好的线性关系，结果见下表1。

线性关系考察结果(表1)

6.精密度试验

精密吸取浓度为0.34mg/ml的对照品溶液各10μl，重复进样6次，按色谱条件测定其峰面积，结果如下表2：

精密度试验结果(表2)

平均峰面积＝938.0，RSD＝0.5％(n＝6)。由试验结果可知，仪器精密度良好。

7.重复性试验

取批号为20121231中试样品，按供试品制备方法制备6份供试品溶液，并按含量测定方法色谱条件测定其含量，结果如下表3：

重复性试验测定结果(表3)

平均含量＝0.0132，RSD＝1.76％(n＝6)。由试验结果可知，本方法重复性良好。

8.溶液稳定性试验

分别在0h、2h、4h、6h、8h、12h时精密进样10μl，并按含量测定项下色谱条件测定其峰面积，结果如下表4：

溶液稳定性试验结果(表4)

平均峰面积＝219.766，RSD＝1.78％(n＝6)。由试验结果可知，供试品溶液在12小时内稳定。

9.准确度试验

取已知含量的三藤胶囊10粒，倒出内容物，混匀，精密称定1.33g，分取9份，按照其实际含量的80％，100％，120％称取对照品制备储备液，加氯仿40mL，超声提取两次，每次30min，滤纸过滤，残渣用10mL氯仿洗脱，回收滤液至1mL，加中性氧化铝(100～200目)1g，搅拌均匀，烘干，上中性氧化铝柱(100～200目，8g；内径1.5cm×长度15cm)，用乙酸乙酯100mL洗脱，收集洗脱液并回收至干，加甲醇适量使溶解，置2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，即得。按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见下表5。

回收率试验测定结果(表5)

平均回收率＝98.17％，RSD＝1.31％(n＝9)。结果表明，本含量测定方法具有良好的回收率。

由上述试验结果可知，本方法准确度良好，能准确测定样品中雷公藤酯甲的含量。

10.雷公藤酯甲含量测定及含量低限的确定

10.1雷公藤酯甲含量测定

按上述含量测定方法测定3批中试样品中雷公藤酯甲(C₃₀H₄₆0₃)的含量，其测得结果见下表6：

中试样品含量测定(表6)

10.2含量低限的确定

由上述含量测定结果可知，3批成品的含量测定结果基本稳定，平均含量为0.0131％，将成品中雷公藤酯甲(C₁₈H₁₆O₈)的低限定为0.0104％，即每粒胶囊含雷公藤酯甲不低于0.046mg。

显然，本技术领域中的普通技术人员应当认识到，以上的实施例仅是用来说明本发明，而并非用作为对本发明的限定，只要在本发明的实质精神范围内，对以上所述实施例的变化、变型都将落在本发明的权利要求书范围。

Claims

1.一种中药组合物三藤胶囊的含量检测方法，所述三藤胶囊由雷公藤、红藤和鸡血藤组方，照高效液相色谱法测定，其特征在于，该检测方法包括：

步骤A、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-乙腈为流动相梯度洗脱；检测波长为210nm；理论板数按雷公藤酯甲计不低于3000；

步骤C、供试品溶液的制备：取三藤胶囊10粒，倒出内容物，混匀，精密称定1.33g，加氯仿40mL，超声提取两次，每次30min，滤纸过滤，残渣用10mL氯仿洗脱，回收滤液至1mL，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，烘干，上中性氧化铝柱；用乙酸乙酯100mL洗脱，收集洗脱液并回收至干，加甲醇适量使溶解，置2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，即得；其中中性氧化铝100～200目，中性氧化铝柱100～200目，8g，内径1.5cm×长度15cm；

步骤D、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含雷公藤酯甲不得低于0.046mg。

2.根据权利要求1所述的中药组合物三藤胶囊的含量检测方法，其特征在于，所述三藤胶囊是由雷公藤100g、红藤100g、鸡血藤100g组方，以上3味，加6倍量90％乙醇，回流提取2小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至密度为1.24～1.26，加入糊精，混合，80℃干燥，得三藤干粉，装入0号胶囊内，即得三藤胶囊；本品为硬胶囊剂，除去胶囊壳后显黄褐色至棕褐色；气香，味微苦。

3.根据权利要求1所述的中药组合物三藤胶囊的含量检测方法，其特征在于，所述检测方法应符合胶囊剂项下的有关各项规定。