CN106501057A - 一种细胞标本石蜡包埋的改良技术 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特点是：制作方法包括将细胞标本经沉淀、固定、离心处理后，提取细胞标本进行常规固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋、切片、染色及封片。本发明的优势是操作便捷、无污染，标本处理及染色过程可与常规病理标本同时进行，不但能做常规检查，还能做免疫组化及特殊染色，实用效果良好，非常适合在各大医院推广使用。
Description
技术领域
本发明属于临床病理诊断、科研领域中对细胞学检测方法，具体为一种细胞标本石蜡包埋的改良技术。
背景技术
脱落细胞学检查是肿瘤诊断有效手段之一，普通涂片制作过程中吸取的少量胸腹水不能代表整个胸腹水的状况，且制作完毕之后剩余的胸腹水往往被遗弃，而细胞蜡块可以收集送检胸腹水中的绝大部分细胞，以便观察大部分细胞的形态，且细胞蜡块易于保存，大大提高了细胞病理学诊断的敏感性和特异性，弥补了常规细胞涂片制作有限而不够作多种染色的不足之处，可进行进一步研究和前瞻性研究。但细胞蜡块制作中前固定往往用10%中性福尔马林固定，固定时间长，细胞蜡块中细胞分散，不易成块，细胞丢失明显；且味道大，易对操作者身体造成严重损害。
如何提供一种细胞标本石蜡包埋的方法，不仅可以提高阳性结果的准确率，而且缩短制作时间，减少对操作者身体的损害，并可应用免疫组化行鉴别诊断。这是本发明面临的技术问题。
发明内容
本发明为解决上述问题，提供一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，不仅操作便捷，无污染，标本处理及染色过程可与常规病理标本同时进行，还提高了阳性结果的准确率，并可应用免疫组化及特殊染色行鉴别诊断。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特征在于，将沉淀细胞和95%乙醇吹匀，使沉淀细胞固定更加充分，固定时间大大减少，缩短了细胞蜡块的制作时间，提高了工作效率；收集到的细胞数量增多，增加了肿瘤细胞的阳性检出率；沉淀细胞静置固定呈块状，制片时不易飞片且切片视野集中，HE染色清晰，免疫组化染色定位准确；且乙醇无污染，对操作者身体无害。
以上述技术方案的一种改良：所述的细胞标本为胸腹水、纤支镜灌洗液、尿液、胸腹腔冲洗液标本、淋巴结、乳腺及甲状腺穿刺等标本的细胞蜡块，所述提取细胞标本的具体步骤如下：
（1）沉淀细胞标本：送检的积液标本量越多越好，一般在10～500ml之间，将标本在阴凉处静置5min
（2）离心细胞标本：轻轻倒去一半左右液体，若多于100ml应再次静置5min弃去一半，所余50ml左右的自然沉淀标本，分别置于5个容量为10ml离心管中，室温下3000转/min离心5～10min，吸干上清，用吸管吸取沉淀物上层细胞涂片
（3）固定细胞标本：将5个离心管的余液吸取到同一个10ml离心管中，室温下3000转/min离心5min后再次吸干上清，试管余液轻轻沿管壁加入95%乙醇，用吸管将沉淀细胞与乙醇吹匀，3000转/min，离心5min，室温下静置30min
（4）提取细胞标本：弃上清，用竹签轻轻将沉淀细胞取出，用包埋纸包好，放入脱水盒。
1、所述的常规固定、脱水、透明、浸蜡处理步骤为：
（1）35℃10%中性福尔马林固定1h
（2）水洗20～30 min
（3）35℃80%乙醇2h
（4）35℃95%乙醇2h
（5）35℃95%乙醇2h
（6）35℃无水乙醇2h
（7）35℃无水乙醇2h
（8）二甲苯45min
（9）二甲苯45min
（10）62℃石蜡30 min
（11）62℃石蜡60 min
（12）62℃石蜡90 min。
2、所述的石蜡包埋步骤：将包埋纸中的细胞块取出，放入盛有液体石蜡的包埋盒中，将成团的细胞打散后均匀的平铺在底部，待冷却后制成细胞蜡块，可得到细胞数量的最大面。
3、所述的细胞蜡块切片步骤：将上述经石蜡包埋的细胞蜡块在切片机上切成3微米的薄片，温度为65℃条件下，烤片时间为10min。
4、所述的染色包括HE染色和免疫组化染色：
所述HE染色步骤如下：
（1）取出烤干的切片，立即投入二甲苯Ⅰ(10min)→二甲苯Ⅱ(10min)→二甲苯Ⅲ(10min)，脱蜡时间长短取决于蜡是否彻底溶解。气温低可延长时间，气温高可适当缩短时间
（2）无水乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2min
（3）95%乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2min
（4）80%酒精，约2min
（5）水洗
（6）苏木素浸染，约8～15min
（7）1%盐酸乙醇分化2秒
（8）水洗
（9）自来水蓝化，约5min
（10）伊红浸染数秒
（11）80%乙醇中，约2min
（12）95%乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2～5min
（13）无水乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2～5min
（14）二甲苯Ⅰ→Ⅱ中透明，约2min
（15）封片：中性树胶，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。
对于部分需要进一步诊断的细胞蜡块，进行免疫组化染色，
所述免疫组化染色步骤如下：
（1）石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤2h
（2）脱蜡和水化：二甲苯Ⅰ(10min)→二甲苯Ⅱ(10min)→二甲苯Ⅲ(10min)→无水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5mi n×2)→80%乙醇(5min)
（3）蒸馏水冲洗1次5min
（4）PBS洗2次各5min
（5）抗原修复：压力锅开始喷气时，盖上气阀约1.5~2min，冷却，取下气阀，冷却至室温 （6）蒸馏水洗1次5min，PBS洗2次各5min
（7）加3% H2O2孵育10min(室温)
（8）PBS洗3次各5min
（9）滴加一抗，37℃孵育2～3h，或4℃过夜
（10）PBS冲洗3次各5min
（11）滴加二抗，室温下孵育20 min
（12）PBS洗3次各5min
（13）DAB显色5～20min，自来水充分冲洗
（14）苏木素复染2～3min，自来水充分冲洗
（15）1%盐酸乙醇分化2s，自来水充分冲洗
（16）80%(2min)→95%(5min×2次)→100%(5min×2次)→二甲苯Ⅰ(2min)→二甲苯Ⅱ(2min)
（17）封片：中性树胶，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。
本发明与现有技术相比的优点是：用95%乙醇取代10%中性福尔马林作为前固定液，对于操作者而言，味道小，对身体无害；对于细胞标本而言，将95%乙醇和沉淀细胞吹匀，使沉淀细胞固定更加充分，固定时间大大减少，缩短了细胞蜡块的制作时间，标本处理及染色过程可与常规病理标本同时进行，提高了工作效率；收集到的细胞量增多，增加了肿瘤细胞的阳性检出率；沉淀物静置固定呈块状，制片时不易飞片且切片视野集中，HE染色清晰，免疫组化染色定位准确。本方法操作简单、成本低、制片效果良好，适用于各类体液标本的制作，有较好的临床实用价值，值得推广。
具体实施方式：
下面结合具体事例对本发明进行进一步的阐述：
本发明是一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特点是：制作方法包括将细胞标本经沉淀、固定、离心处理后，提取细胞标本进行常规固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋、组织切片、染色。
实施例1：本发明细胞标本为胸腹水、纤支镜灌洗液、尿液、胸腹腔冲洗液标本、淋巴结、乳腺及甲状腺穿刺等标本的细胞蜡块，所述提取细胞标本的具体步骤如下：
（1）沉淀细胞标本：送检的积液标本量越多越好，一般在10～500ml之间，将标本在阴凉处静置5min
（2）离心细胞标本：轻轻倒去一半左右液体，若多于100ml应再次静置5min弃去一半，所余50ml左右的自然沉淀标本，分别置于5个容量为10ml离心管中，室温下3000转/min离心5～10min，吸干上清，用吸管吸取沉淀物上层细胞涂片
（3）固定细胞标本：将5个离心管的余液吸取到同一个10ml离心管中，室温下3000转/min离心5min后再次吸干上清，试管余液轻轻沿管壁加入95%乙醇，用吸管将沉淀细胞与乙醇吹匀，3000转/min，离心5min，室温下静置30min
（4）提取细胞标本：弃上清，用竹签轻轻将沉淀细胞取出，用包埋纸包好，放入脱水盒。
1、所述的常规固定、脱水、透明、浸蜡处理步骤为：
（1）35℃10%中性福尔马林固定1h
（2）水洗20～30 min
（3）35℃80%乙醇2h
（4）35℃95%乙醇2h
（5）35℃95%乙醇2h
（6）35℃无水乙醇2h
（7）35℃无水乙醇2h
（8）二甲苯45min
（9）二甲苯45min
（10）62℃石蜡30 min
（11）62℃石蜡60 min
（12）62℃石蜡90 min。
2、所述的石蜡包埋步骤：将包埋纸中的细胞块取出，放入盛有液体石蜡的包埋盒中，将成团的细胞打散后均匀的平铺在底部，待冷却后制成细胞蜡块，可得到细胞数量的最大面。
3、所述的细胞蜡块切片步骤：将上述经石蜡包埋的细胞蜡块在切片机上切成3微米的薄片，温度为65℃条件下，烤片时间为10min。
4、所述的染色包括HE染色和免疫组化染色，
所述HE染色步骤如下：
（1）取出烤干的切片，立即投入二甲苯Ⅰ(10min)→二甲苯Ⅱ(10min)→二甲苯Ⅲ(10min)，脱蜡时间长短取决于蜡是否彻底溶解。气温低可延长时间，气温高可适当缩短时间
（2）无水乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2min
（3）95%乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2min
（4）80%酒精，约2min
（5）水洗
（6）苏木素浸染，约8～15min
（7）1%盐酸乙醇分化2秒
（8）水洗
（9）自来水蓝化，约5min
（10）伊红浸染数秒
（11）80%乙醇中，约2min
（12）95%乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2～5min
（13）无水乙醇Ⅰ→Ⅱ，约2～5min
（14）二甲苯Ⅰ→Ⅱ中透明，约2min
（15）封片：中性树胶，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。
对于部分需要进一步诊断的细胞蜡块，进行免疫组化染色，
所述免疫组化染色步骤如下：
（1）石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤2h
（2）脱蜡和水化：二甲苯Ⅰ(10min)→二甲苯Ⅱ(10min)→二甲苯Ⅲ(10min)→无水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→80%乙醇(5min)
（3）蒸馏水冲洗1次5min
（4）PBS洗2次各5min
（5）抗原修复：压力锅开始喷气时，盖上气阀约1.5~2min，冷却，取下气阀，冷却至室温 （6）蒸馏水洗1次5min，PBS洗2次各5min
（7）加3%H2O2孵育10min(室温)
（8）PBS洗3次各5min
（9）滴加一抗，37℃孵育2～3h，或4℃过夜
（10）PBS冲洗3次各5min
（11）滴加二抗，室温下孵育20 min
（12）PBS洗3次各5min
（13）DAB显色5～20min，自来水充分冲洗
（14）苏木素复染2～3min，自来水充分冲洗
（15）1%盐酸乙醇分化2s，自来水充分冲洗
（16）80%(2min)→95%(5min×2次)→100%(5min×2次)→二甲苯Ⅰ(2min)→二甲苯Ⅱ(2min) （17）封片：中性树胶，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。
当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明并不限于上述举例，本技术领域的普通技术人员，在本发明的实质范围内做出的变化、改型、添加或替换，都应属于未发明的保护范围。
Claims (1)
1. 本发明提供一种细胞标本石蜡包埋的改良技术，其特点是：制作方法包括将细胞标本经沉淀、固定、离心处理后，提取细胞标本进行常规固定、脱水、透明、浸蜡处理，石蜡包埋、切片、染色及封片。
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|---|---|
| CN (1) | CN106501057A (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107831058A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-03-23 | 漳州卫生职业学院 | 基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块 |
| CN108020452A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-11 | 漳州卫生职业学院 | 基于血性胸腹水的细胞蜡块及其制备方法 |
| CN108048545A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-05-18 | 北京旌准医疗科技有限公司 | 一种体外诊断试剂质控品及其制备方法与应用 |
| CN108132176A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-08 | 漳州卫生职业学院 | 细胞蜡块及其直接制备方法 |
| CN108152100A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-12 | 漳州卫生职业学院 | 基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块 |
| CN108168969A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-15 | 漳州卫生职业学院 | 琼脂细胞蜡块及其制备方法 |
| CN109580306A (zh) * | 2018-12-13 | 2019-04-05 | 中南大学 | 一种淋巴结组织切片的制作方法 |
| CN111057446A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-24 | 嘉兴晶铸生物科技有限公司 | 一种uvled固化载玻片封固方法 |
| CN117629723A (zh) * | 2023-11-30 | 2024-03-01 | 中国人民解放军空军军医大学 | 一种用于贴壁/悬浮生长细胞的细胞蜡块切片制作方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1737526A (zh) * | 2005-07-20 | 2006-02-22 | 徐华 | 体液细胞块石蜡切片制作 |
| CN101144760A (zh) * | 2007-04-23 | 2008-03-19 | 中国农业大学 | 一种卵母细胞石蜡切片的制备方法 |
| CN102532610A (zh) * | 2011-12-23 | 2012-07-04 | 中山市康乃欣生物医疗科技有限公司 | 一种病理包埋剂及其制备方法和应用 |
| CN103518127A (zh) * | 2011-02-17 | 2014-01-15 | 文塔纳医疗系统公司 | 用于组织样品固定的方法 |
| CN103940658A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-07-23 | 青岛大学医学院附属医院 | 一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法 |
| CN104122132A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-10-29 | 北京海思特临床检验所有限公司 | 胸腹水恶性细胞的包埋方法 |
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2016
- 2016-03-29 CN CN201610185607.0A patent/CN106501057A/zh not_active Withdrawn
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1737526A (zh) * | 2005-07-20 | 2006-02-22 | 徐华 | 体液细胞块石蜡切片制作 |
| CN101144760A (zh) * | 2007-04-23 | 2008-03-19 | 中国农业大学 | 一种卵母细胞石蜡切片的制备方法 |
| CN103518127A (zh) * | 2011-02-17 | 2014-01-15 | 文塔纳医疗系统公司 | 用于组织样品固定的方法 |
| CN102532610A (zh) * | 2011-12-23 | 2012-07-04 | 中山市康乃欣生物医疗科技有限公司 | 一种病理包埋剂及其制备方法和应用 |
| CN103940658A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-07-23 | 青岛大学医学院附属医院 | 一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法 |
| CN104122132A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-10-29 | 北京海思特临床检验所有限公司 | 胸腹水恶性细胞的包埋方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 吴菡等: "乙醇固定时间在细胞蜡块技术中的应用", 《临床与实验病理学杂志》 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108048545A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-05-18 | 北京旌准医疗科技有限公司 | 一种体外诊断试剂质控品及其制备方法与应用 |
| CN107831058A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-03-23 | 漳州卫生职业学院 | 基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块 |
| CN108020452A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-11 | 漳州卫生职业学院 | 基于血性胸腹水的细胞蜡块及其制备方法 |
| CN108132176A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-08 | 漳州卫生职业学院 | 细胞蜡块及其直接制备方法 |
| CN108152100A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-12 | 漳州卫生职业学院 | 基于非血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块 |
| CN108168969A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-15 | 漳州卫生职业学院 | 琼脂细胞蜡块及其制备方法 |
| CN109580306A (zh) * | 2018-12-13 | 2019-04-05 | 中南大学 | 一种淋巴结组织切片的制作方法 |
| CN109580306B (zh) * | 2018-12-13 | 2021-05-11 | 中南大学 | 一种淋巴结组织切片的制作方法 |
| CN111057446A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-24 | 嘉兴晶铸生物科技有限公司 | 一种uvled固化载玻片封固方法 |
| CN117629723A (zh) * | 2023-11-30 | 2024-03-01 | 中国人民解放军空军军医大学 | 一种用于贴壁/悬浮生长细胞的细胞蜡块切片制作方法 |
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