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CN106456771B - 用于抗lyst免疫调节的组合物和方法 - Google Patents

用于抗lyst免疫调节的组合物和方法 Download PDF

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CN106456771B CN201580029580.XA CN201580029580A CN106456771B CN 106456771 B CN106456771 B CN 106456771B CN 201580029580 A CN201580029580 A CN 201580029580A CN 106456771 B CN106456771 B CN 106456771B
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维杜·加格
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Nationwide Childrens Hospital Inc
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Abstract

在组织损伤部位处的发炎和促凝血机制的过度或反复活化促进发展疤痕组织，其可引起内膜增生和纤维化疾病。已确立LYST蛋白的抑制与组织损伤部位处的减少的炎性反应和减少的血小板活化相关。描述用于抑制LYST蛋白的表达和功能的组合物和方法。所述组合物和方法可适用于通过改变巨噬细胞、血小板和自然杀伤细胞功能来调节会促进形成新内膜和纤维增生病症的免疫过程，从而形成促再生免疫反应。

Description

用于抗LYST免疫调节的组合物和方法
相关申请案的交叉引用
本申请案要求2014年5月2日提交的标题为“用于抗LYST免疫调节的组合物和方法(Compositions and Methods For Anti-Lyst Immunomodulation)”的美国临时申请案第61/987,910号的优先权，所述申请案的内容以全文引用的方式并入。
序列表的引用
序列表于2015年5月4日提交，呈文本文件形式，名称为“NWCH100PCT_ST25.txt”，创建于2015年5月1日，且大小为51,000字节，所述序列表以引用的方式并入本文中。
关于联邦政府赞助的研究或开发的声明
本发明在政府支持下在由美国国家卫生研究院(National Institutes ofHealth)授予克里斯托弗·布鲁尔(Christopher Breuer)的NIH拨款R01HL098228下进行。政府拥有本发明中的某些权利。
技术领域
本发明的领域大体上涉及用于增强血管组织再生以及减少与新内膜增生和纤维增生疾病相关的发病率和死亡率的组合物、装置和方法。
背景技术
组织修复是一个复杂、逐步进行的过程，其有助于对来自损伤部位处的局部促炎性细胞的刺激性细胞因子信号传导起反应从而有序的移除和替换死亡或受损细胞(温(Wynn)和拜伦(Baron),《肝病论文集(Semin Liver Dis.)》,30(3):245-257(2010)；温,《临床研究(Clin.Invest.)》117:524-529(2007))。然而，当组织修复反应不当或持续长时间(例如对慢性疾病或反复损伤起反应)时，正常的再生机制可导致由损伤部位处的过度新组织生长和细胞外基质(ECM)组分累积引起的病理学状态。
在血管损伤部位处的发炎和促凝血机制的过度或反复活化被认为会显著促进内膜增生的发展。在病理学条件下，血管损伤使得内皮细胞层剥脱，且触发一系列特征在于产生各种生长因子和炎性细胞因子的急性和慢性炎性反应(穆拉卡米(Murakami),《美国生理学杂志肺细胞分子生理学(Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.)》,272:L197-L202(1997)；科特兰(Cotran)等人,《美国肾脏病学会杂志(J Am Soc Nephrol)》,1:225-235(1990))。在针对冠状动脉和/或外周动脉疾病的外科手术(如血管成形术和支架术、手术旁路或动脉内膜剥除术)之后发生的内膜增生可在高达80％患者中引起血管再狭窄(西达尔(Seedial)等人,《血管手术杂志(J Vasc Surg.)》,57(5):1403-1414(2013)；格拉戈夫(Glagov),《循环(Circulation)》,89:2888-2891(1994))。已展示新内膜形成可因血管内存在外来物质(如假体)而加速，且不受控制的新内膜增生为限制心血管介入的长期临床效率的主要障碍(弗兰克(Frank)等人,《当前脂质学观点(Curr.Opin.Lipidol)》,15:523(2004))。另外，新内膜形成与数种增殖心血管病的发展和进展相关，包括动脉粥样硬化、高血压和糖尿病性血管并发症。
内皮细胞层的再生抑制新内膜的发展且有助于血管修复(包特斯(Bauters)等人,《心血管疾病进展(Prog.Cardiovasc.Dis.)》,40:107-116(1997)；金利(Kinlay)等人,《当前脂质学观点》,12:383(2001))。然而，目前可用的抗新内膜药物无差别地阻断内皮细胞(EC)和平滑肌细胞(SMC)两者的增殖，引起重新内皮化(re-endothelialiazation)受损且延长创伤愈合过程。仍然存在开发对SMC敏感的抗增殖策略的需求。
对反复组织损伤的未经调节的炎性反应还可引起组织和器官(如皮肤、肝、心和肺)的病理学纤维化(黄(Huang)和小川(Ogawa),《结缔组织研究(Connect Tissue Res.)》,53(3):187-196(2012))。肝脏组织的慢性破坏和发炎引起ECM蛋白累积，其导致过度疤痕形成且扭曲肝脏架构，这又引起肝硬化和肝衰竭(拜特尔(Battler)和勃伦那(Brenner),《临床研究杂志(J Clin Invest.)》,115:209-218(2005))。同样地，纤维化组织在肺内的过度沉积引起肺架构的进行性结疤和不可逆破坏，其最终引起器官功能障碍、气体交换扰乱以及因呼吸衰竭死亡。
活化的血小板增加白细胞粘附到受损内皮，且经由趋化因子沉积在内皮上促进白细胞活化。这允许白细胞牢固地附着到血管壁且转移到内皮下组织中。然而，还已知血小板衍生趋化因子在新内膜增殖、动脉损伤后的再狭窄和动脉粥样硬化中起作用(钱德拉塞卡尔(Chandrasekar)等人,《美国心脏病学会杂志(J Am College Cardiology)》,第35卷,第3期,第555-562页(2000))。具有异常血小板功能的某些患者群体，包括患有肾病、糖尿病和高脂质血症的患者群体也处在增加的再狭窄风险中。
纤维增生病症在美国为发病率和死亡率的主要原因(比特曼(Bitterman)和亨克(Henke),《胸(Chest)》,99(3):s81-s84(1991))。具体来说，肝病和肺纤维化疾病通常难以治疗且带来高死亡率。已确立的肝硬化具有34-66％的10年死亡率，且仅在美国每年造成约27,000例死亡。特发性肺纤维化(IPF)的发生率经评估为每100,000例在14与42.7例之间，且在近30年中这一数据在每十年计一直升高(奥尔森(Olson)等人,《美国呼吸与重症护理医学(Am J Respir Crit Care Med.)》176:277-2843(2007)；格里宾(Gribbin)等人,《胸部(Thorax)》,61:980-985(2006))。目前，肝脏或肺纤维化的最有效治疗为器官移植。
因此，本发明的目标为提供用于在个体中调节免疫过程以减少或预防新内膜形成、狭窄、再狭窄或其组合的组合物、装置、移植物和其使用方法。
本发明的目标还为提供用以在个体中减少或预防不当或有害血小板活化的组合物、装置、移植物和其使用方法。
本发明的目标还为提供用于在个体中减少或预防对可植入假体的免疫反应的组合物、方法和装置。
本发明的进一步目标为提供用以在个体中促进愈合且抑制疤痕形成、粘连和纤维增生疾病的组合物、方法和装置。
发明内容
已确立溶酶体运输调节剂(lysosomal trafficking regulator；“LYST”)蛋白的抑制与组织损伤部位处的减少的炎性反应相关。描述用于抑制LYST蛋白的表达和功能的组合物和方法。所述组合物和方法可适用于通过改变巨噬细胞、血小板和自然杀伤细胞功能来调节会促进形成新内膜和纤维增生病症的免疫过程，从而形成促再生免疫反应。
公开包括呈有效减少或预防个体的疤痕组织形成的量的一种或多种LYST抑制剂的组合物。还公开包括呈有效减少或预防个体的血小板活化的量的一种或多种LYST抑制剂的组合物。
通常，所述组合物包括生理学上可接受的载剂。在优选实施例中，一种或多种LYST抑制剂的量不妨碍个体的血管新组织形成。通常，所述组合物包括量在每千克人类体重0.1mg与1000mg之间的一种或多种LYST抑制剂。
在一个实施例中，一种或多种LYST抑制剂为抗体。
在另一实施例中，一种或多种LYST抑制剂为功能核酸。例示性功能核酸包括反义分子、siRNA、miRNA、适体、核酶、形成三链体的分子、RNAi和外部引导序列。一种或多种功能核酸可表达自表达载体。
在一些实施例中，一种或多种LYST抑制剂的组合物包括递送媒剂。例示性递送媒剂包括纳米粒子、微米粒子、胶束、合成脂蛋白粒子、脂质体和碳纳米管。所公开的组合物还可包括一种或多种其他治疗剂。公开包括一种或多种LYST抑制剂的血管移植物和医疗装置。在一些实施例中，将一种或多种LYST抑制剂的组合物涂布在移植物或装置上或结合到移植物或装置中。例示性医疗装置包括支架、植入物、针、插管、导管、分流器、气囊和瓣膜。医疗装置可为支架，诸如洗脱一种或多种LYST抑制剂的组合物的药物洗脱支架。例示性血管移植物包括自体、保藏自体、同种异体、异种或合成移植物。
还提供减少或预防个体的疤痕组织形成的方法，其包括向有需要的个体投与包括一种或多种LYST抑制剂的组合物。在个体中减少或预防静脉血栓形成或动脉血栓形成的发展的方法包括向有需要的个体投与包括一种或多种LYST抑制剂的组合物。在一些实施例中，个体处于正在显现或已显现再狭窄或其他血管增殖病症的风险中。在其他实施例中，个体已经历、正在经历或将经历血管创伤、血管成形术、血管手术或移植动脉病。所述方法可相对于未经治疗的对照个体在个体中促进愈合；减少或预防肥大性疤痕、瘢痕瘤或粘连的发展；减少或预防肝纤维化、肺纤维化、心纤维化或肾纤维化；减少或预防新内膜形成、狭窄或再狭窄；或其任何组合。所述方法可促进一种或多种假体装置的整合但阻止其囊封：所述假体装置如起搏器、神经刺激器、起搏器导线、替换心脏瓣膜和人工关节或其组件。所述方法可相对于未经治疗的对照个体有效在个体中治疗或预防血管植入物的植入部位、血管损伤部位或手术部位处的新内膜形成。所述方法可相对于未经治疗的对照个体在个体中有效减少或预防血小板衍生生长因子、转化生长因子β或其任何组合的表达。
附图说明
图1为展示在植入到米色小鼠(bg；黑色图式)和野生型小鼠(WT；灰色图式)中之后两周生物可降解导管移植物内的导管的直径(mm)的直方图。米色小鼠和野生型小鼠分别N＝10和N＝25。
图2为展示在植入之后两周，分别从米色小鼠(Bg；灰色图式)和野生型小鼠(WT；黑色图式)取出的生物可降解导管移植物内的巨噬细胞数目(细胞/HPF)的直方图。P＝0.0048。
图3为展示野生型(WT)和米色(Bg)小鼠的外显子52上的LYST基因中的核苷酸序列之间的差异(在顶部)的示意图。WT和Bg小鼠的LYST蛋白的氨基酸序列之间的相应差异还展示在氨基酸序列比对中(中间)。氨基酸序列比对(在底部)展示来自人类、小鼠和大鼠的LYST多肽的氨基酸序列之中的保守性。米色(Bg)小鼠的LYST内的缺失的位置利用*指示。核酸和氨基酸使用相应的标准单字母代码呈现。
图4为直方图，展示在分别获自野生型小鼠(WT-1(1)；WT-2(2))、米色小鼠(米色-1(3)；米色-2(4))或标准“原始”细胞株(5)的细胞中，使用5种不同寡核苷酸引物(LYST-1、LYST-3、LYST-4、LYST-5和LYST-6)中的每一者扩增的，对应于LYST基因产物的mRNA的相对水平。
图5为展示在2周植入之后分别在C57BL/6(野生型)小鼠和C57BL/6Lysttmlb基因敲除小鼠(n＝5)中的狭窄发生率(％)的直方图。***p＝0.0001。
图6为展示分别在静息(对照)和凝血酶活化的C57BL/6(野生型)小鼠以及C57BL/6米色(Bg)小鼠中分泌自PRP的血小板衍生生长因子(PDGF)的量(μg/ml)的直方图。将来自每一组(n＝7)的分泌的PDGF的总浓度与静息、非活化的对照(n＝5)相比。
具体实施方式
I.定义
术语“狭窄”是指在血管壁(内皮)损伤之后发生的血管的异常变窄。在一些实施例中，狭窄涉及管腔的圆周减小50％或更大。术语“再狭窄”是指在介入程序之后血管或合成移植物的管腔的先前狭窄部位或变窄处的狭窄。如本文中所用，再狭窄涵盖阻塞。引起狭窄或再狭窄的例示性损伤包括动脉粥样硬化病灶的创伤(如在血管成形术或支架的情况下可见)、病灶的切除术(如在动脉内膜剥除术的情况下可见)、外部创伤(例如夹叉夹紧损伤)或手术吻合术。
术语“新内膜狭窄”是指由新内膜形成引起的血管的异常变窄。
术语“新内膜”是指对来自受损内皮细胞的信号起反应在血管中形成的内膜(内部衬壁)的再生或增厚层。
术语“疤痕组织”和“疤痕”是指在损伤之后产生以替代受损组织的纤维组织。
术语“纤维增生病症”、“FPD”和“纤维化疾病”可互换地使用且包括由结缔组织的异常和过度沉积引起的良性和恶性疾病或病况。
术语“血小板活化”为对内皮的组织损伤(如破坏或中断)起反应引起循环血小板的粘附和聚集的逐步生理过程。血小板活化引起趋化性因子(如血小板衍生生长因子(PDGF)和转化生长因子β(TGFβ))的表达和分泌。
“医药学上可接受的载剂”涵盖标准医药载剂中的任一种，如磷酸盐缓冲盐水溶液、水和乳液，如油/水或水/油乳液，和各种类型的湿润剂。
“抑制(inhibit)”或所述词的其他形式(如“抑制(inhibiting)”或“抑制(inhibition)”)意指阻碍或限制具体特征。应理解，这通常相对于一些标准或预期值的，即，其为相对的，但不必总是参考标准或相对值。举例来说，“抑制LYST”意指相对于标准或对照，阻碍、干扰或限制LYST基因的活性。“抑制LYST”还可意指相对于标准或对照，阻碍或限制LYST蛋白的合成、表达或功能。
“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”意指向具有非所需情况(例如再狭窄或纤维增生病症)的个体或体系投与组合物。所述病况可包括疾病。“预防(prevention)”或“预防(preventing)”意指向处于所述情况风险中的个体或体系投与组合物。所述情况可为易患疾病。向个体投与组合物的作用(治疗和/或预防)可为(但不限于)病况的具体症状的停止，病况症状的减少或预防，病况严重度的减小，病况的完全除去，具体事件或特征的发展或进展的稳定或延迟，或将发生的具体事件或特征的几率降到最低。
除非另外明确指示，否则如本文所用的术语“抗体”以最广泛的意义使用。因此，“抗体”可为天然存在或人造的，如利用常规融合瘤技术产生的单克隆抗体。抗体包括单克隆和多克隆抗体，以及含有这些抗体的抗原结合域和/或一个或多个互补决定区的片段。“抗体”是指任何形式的抗体或其抗原结合片段，且包括单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段。
II.组合物
已确立，组织修复的过程可通过操纵LYST基因的表达和功能来介导。确切地说，LYST基因产物功能的失去引起某些免疫细胞的功能异常，导致免疫功能丧失和增生性病症的相关减少。可通过调节LYST基因或LYST蛋白影响的免疫细胞包括先天性免疫细胞、巨噬细胞和血小板。
先天性免疫细胞
包括发炎、移除受损细胞和碎片以及新组织发展和其他创伤修复机制的先天性免疫过程是对损伤的生理反应的重要组成部分。组织修复具有四个不同阶段，包括：a)凝血/凝集；b)发炎；c)成纤维细胞迁移/增殖；和d)其中恢复正常组织架构的最终重塑期。在组织损伤之后的最早阶段中，上皮细胞和/或内皮细胞释放炎性介体，所述炎性介体引发抗纤维蛋白溶解凝集级联，触发凝血和临时细胞外基质(ECM)的发展。血小板的聚集和后续脱颗粒促进血管扩张且增加渗透性，允许炎性细胞(如嗜中性白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和嗜酸性细胞)高效募集到受损组织。嗜中性白细胞为创伤愈合最早阶段中最丰富的炎性细胞，但在嗜中性白细胞脱颗粒之后被巨噬细胞快速替换。活化的巨噬细胞和嗜中性白细胞清除创伤，消除任何侵入生物体，且产生多种会扩大发炎性反应以及触发成纤维细胞增殖和募集的细胞因子和趋化因子。在活化后，成纤维细胞转化成分泌α-平滑肌肌动蛋白和ECM组分的肌成纤维细胞。最后，在重塑期中，上皮/内皮细胞分裂且迁移在临时基质之上以再生受损组织。因此，愈合和新组织生成是一个精细调节过程，其平衡再生组织和增厚血管壁的需求，且不过度增厚和狭窄或纤维化。
巨噬细胞
已展示，循环单核细胞和浸润性巨噬细胞的存在对于创伤愈合和新组织发展来说至关重要(阿萨(Arras)等人,《临床研究杂志(J Clin Invest)》,101(1):40-50(1998))。然而，组织损伤部位处的巨噬细胞浸润程度还与增生性调节异常和新内膜形成相关(日比野(Hibino)等人,《美国实验生物学学会联合会杂志(FASEB J.)》25(12):4253-63(2011))。另外，许多研究已指示，巨噬细胞和成纤维细胞是参与纤维化发病机制的主要效应细胞(综述在温,《自然综述·免疫学(Nat Rev Immunol.)》4(8):583-94(2004)中)。
在血管破坏之后，炎性单核细胞(人类中的CD16-hi、CD64-hi和CD14-hi；小鼠中的CD115+、CD11b+和Ly6c-hi)募集到受损组织，且在暴露于局部生长因子、促炎性细胞因子和微生物化合物后，分化成活化的巨噬细胞(人类中的Emr1-hi；小鼠中的F4/80-hi)(盖斯曼(Geissmann)等人,《科学(Science)》327:656-661(2010))。过度巨噬细胞浸润引起狭窄，而巨噬细胞浸润的完全抑制会预防新组织形成(日比野等人,《美国实验生物学学会联合会杂志》25(12):4253-63(2011))。
巨噬细胞的极化活化的两种不同状态已经定义：经典活化的(M1)巨噬细胞表型和替代活化的(M2)巨噬细胞表型(戈登(Gordon)和泰勒(Taylor),《自然综述·免疫学》5:953-964(2005)；曼托瓦尼(Mantovani)等人,《免疫学趋势(Trends Immunol.)》23:549-555(2002))。经典活化的(M1)巨噬细胞的作用为TH1细胞免疫反应中的效应细胞，而替代活化的(M2)巨噬细胞似乎参与免疫抑制和创伤愈合/组织修复。M1和M2巨噬细胞具有不同趋化因子和趋化因子受体谱，且M1分泌吸引TH1细胞的趋化因子CXCL9和CXCL10，以及M2巨噬细胞表达趋化因子CCL17、CCL22和CCL24。
M2巨噬细胞的存在已与新内膜发展和狭窄相关(日比野等人,《美国实验生物学学会联合会杂志》25(12):4253-63(2011))。在组织移植物植入之后的某些时间点下的巨噬细胞浸润程度、新组织形成和狭窄之间的相关性提供经由调节巨噬细胞活性预防狭窄的手段。
另外，巨噬细胞通常接近产生胶原蛋白的肌成纤维细胞细胞定位，且已展示单核细胞衍生的巨噬细胞决定性地使损伤之后的炎性反应保持为纤维化的先决条件(温和拜伦,《肝病论文集》,30(3):245-257(2010))。巨噬细胞产生会活化成纤维细胞的促纤维化介体，包括血小板衍生生长因子(PDGF，一种强力趋化性因子)和转化生长因子β(TGF-β)。确切地说，巨噬细胞的非经典M2(CD14+、CD16+)子集的显著增加已与罹患慢性肝病的患者的促炎性细胞因子和临床进展相关。在纤维化进展期间，单核细胞衍生的巨噬细胞释放细胞因子，使慢性发炎不断进行下去，以及直接活化肝星状细胞(HSC)，导致其增殖且转分化成产生胶原蛋白的肌成纤维细胞(齐默尔曼(Zimmermann)等人,《公共科学图书馆·综合(PLOSOne)》,5(6):e11049(2010))。
血小板
聚集的血小板通过分泌化学物质来辅助血管修复，所述化学物质将成纤维细胞从周围结缔组织吸引到受伤区域中以愈合创伤或在失调的炎性反应的情况下形成疤痕组织。对组织损伤起反应，血小板变得活化且释放众多刺激细胞外基质沉积的生长因子，如血小板衍生生长因子(PDGF，一种强力趋化性因子)以及转化生长因子β(TGF-β)。这两种生长因子已展示出在结缔组织的修复和再生中起到重要作用。PDGF充当主要有丝分裂原和化学引诱剂，其显著加强成纤维细胞和炎性细胞的内流，以及刺激细胞增殖和基因表达。PDGF允许白细胞牢固地附着到血管壁且最终转移到内皮下组织中。然而，还已知血小板衍生的趋化因子诱导平滑肌细胞(SMC)增殖且在新内膜增殖和器官纤维化中起作用(钱德拉塞卡尔等人,《美国心脏病学会杂志》,第35卷,第3期,第555-562页(2000))。PDGF和其受体的表达增加与硬皮病肺和皮肤组织相关。确切地说，在硬皮病肺和皮肤成纤维细胞中存在自分泌PDGF-受体介导的信号传导环的证据，暗示硬皮病中的慢性纤维化中的TGF-β和PDGF两种路径(特罗扬诺夫斯卡(Trojanowska),《风湿病学(Rheumatology)》；47:v2-v4(2008))。另外，PDGF信号传导的失调与心血管适应症(如肺高血压和动脉粥样硬化)相关。
对损伤诱导的PDGF起反应的中层平滑肌细胞(SMC)增殖和迁移为促进新内膜增厚的必需事件(芬格勒(Fingerle)等人,《美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci.)》,86:8412(1989)；克洛斯(Clowes)等人,《循环研究(Circ.Res.)》,56:139-145(1985))，其最终引起血管变窄和狭窄。
由血小板释放的其他愈合相关的生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、血小板衍生表皮生长因子和血管内皮生长因子。
因此，LYST基因和LYST蛋白的抑制剂可形成促再生免疫环境，增强创伤愈合且预防增生性病症(如内膜增生)、过度疤痕组织和纤维化疾病的发展。LYST的调节还可调节血小板活性和功能。因此，LYST基因和/或LYST蛋白的抑制剂可用于减少或预防血小板的生物学功能(如血小板凝集)和血小板衍生生长因子(PDGF)的产生/表达。
公开了通过阻断LYST蛋白的表达和/或功能来促进组织再生且预防或减少特征在于形成过度疤痕组织的疾病的组合物。
A.LYST
溶酶体运输调节剂(LYST)基因产物为普遍存在的蛋白，其与胞内物质转运到溶酶体中相关。已确立，减少或抑制LYST蛋白的功能的突变会干扰巨噬细胞的正常功能且还影响自然杀伤(NK)细胞和血小板的生物学活性。据相信，LYST蛋白的调节提供调节引起血管增殖病症、新内膜形成。纤维化和过度结疤的免疫过程的手段。
1.LYST基因
人类LYST基因位于染色体1(区段1q42.1-q42.2；碱基对235,661,030到235,883,707)(巴拉(Barrat)等人,《美国人类遗传学杂志(Am.J.Hum.Genet)》,59:625-632(1996))。本领域中已知LYST基因产物的核酸序列。参见例如，NCBI参考序列：NM000081.3，智人(Homosapiens)溶酶体运输调节剂(LYST)，转录物变异体1，mRNA，其提供核酸序列：
Figure BDA0001169512800000111
Figure BDA0001169512800000121
Figure BDA0001169512800000131
Figure BDA0001169512800000141
Figure BDA0001169512800000151
Figure BDA0001169512800000161
Figure BDA0001169512800000171
Figure BDA0001169512800000181
Figure BDA0001169512800000191
Figure BDA0001169512800000201
Figure BDA0001169512800000211
(SEQ ID NO:1)。还公开了与SEQ ID NO:1具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％氨基酸序列一致性的核苷酸序列。
2.LYST蛋白
LYST多肽为3,801个氨基酸的细胞质蛋白(也称为溶酶体运输调节剂，CHS蛋白，CHS1或LYST蛋白)，分子量为约429kDa(巴尔博萨(Barbosa)等人,《自然(Nature)》,382(6588):262-265(1996))。
LYST蛋白以三种同工型中的一种存在且预测会采用螺旋结构(巴尔博萨等人,《自然》,382(6588):262-265(1996))。
LYST蛋白在哺乳动物物种中高度保守，且在所有细胞类型中以低水平表达，但在成年和胚胎胸腺外周血液白细胞、骨髓和成年大脑的数个区域中丰富地表达(参见多塔(Dotta)等人,《Orphanet罕见疾病杂志(Orphanet Journal of Rare Diseases)》,8:168(2013)的综述和其中的参考文献)。
本领域中已知人类LYST蛋白的氨基酸序列。参见例如，GenBank登录号U67615：
Figure BDA0001169512800000221
Figure BDA0001169512800000231
Figure BDA0001169512800000241
公开了与SEQ ID NO:2具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％氨基酸序列一致性的LYST多肽。
尽管LYST蛋白已与许多不同的细胞活性相关，尤其在内体和溶酶体中的胞内蛋白运输方面，但LYST蛋白的生物学功能很大程度上仍然未知。
LYST基因产物的异常表达和功能已涉及许多病理学病症，包括自体免疫疾病、过度增殖病症和血小板功能障碍。确切地说，LYST基因中的突变与人类疾病薛迪克-东氏综合症(Chediak-Higashi syndrome，CHS)相关(巴拉等人,《美国人类遗传学杂志》,59:625-632(1996))。在CHS患者中，LYST基因在编码域的核苷酸117-118处含有框移突变。
CHS为罕见的溶酶体储存病症，其特征在于色素过少、重度免疫缺陷、出血倾向、神经异常、多种细胞类型中进入和来自溶酶体和巨包涵体的异常胞内转运。已在患有薛迪克-东氏综合症的人中鉴别出LYST基因中的至少30种突变。这些突变损害溶酶体运输调节剂蛋白的正常功能，其破坏细胞内的溶酶体和相关结构的大小、结构和功能。具有LYST突变的人在整个体内在细胞中具有异常大的溶酶体和相关结构。这些增大的结构干扰正常细胞功能。免疫系统细胞(如巨噬细胞)中增大的溶酶体阻止这些细胞对细菌和其他外来侵入者恰当地起反应；较大核周溶酶体以管状方式配置在患有CHS的人的巨噬细胞内。受影响的嗜中性白细胞和单核细胞具有正常细胞约40％的趋化性和迁移性能力。受影响的患者还具有出血的倾向，归因于血小板功能障碍。由于对趋化性刺激的反应降低，发生故障的免疫系统不可保护身体免于重度、复发性感染。CHS通常是致命的，因为患者免疫功能不全且不能建立对感染的有效免疫反应。
在米色(Bg)小鼠品系中，LYST的小鼠同系物(“Lyst”)通过妨碍功能Lyst蛋白表达的缺失来破坏。发现与野生型小鼠相比，Bg小鼠展现出增生性疾病减少，包括在植入血管组织移植物之后狭窄的速率较低。Bg小鼠中的功能异常Lyst蛋白的作用是高度巨噬细胞特异性的，如通过骨髓移植实验所测定(参见实例)。
C.LYST的抑制剂
已确立，LYST蛋白的阻断可减少或预防会在损伤之后引起血管增殖病症、纤维增生疾病和过度疤痕组织的免疫过程。公开了抑制或减少LYST蛋白的转录、翻译或功能的免疫调节因子。
LYST的抑制剂可结合于LYST基因或LYST蛋白，且直接或间接阻断LYST蛋白的生物学功能。抑制剂还可阻断构成LYST的下游生物学功能的一个或多个信号传导路径的生物学功能。在一些实施例中，LYST的抑制剂通过防止LYST蛋白的内源性配体与LYST蛋白相互作用或直接结合于LYST蛋白来起作用。抑制剂可阻断涉及LYST蛋白的蛋白质-蛋白质相互作用，或其可预防或减少LYST蛋白和配体的复合物的功能活性。直接结合于LYST蛋白的抑制剂可通过LYST蛋白上活性位点的直接阻塞或经由间接阻塞(如通过LYST相互作用的硬脂酸阻断)来起作用。举例来说，在一些实施例中，抑制剂阻碍或阻隔蛋白相互作用域(如由WD40重复基序的串联拷贝形成的螺线管蛋白域)的功能。在其他实施例中，抑制剂结合于在空间上与活性位点不同的位置。
结合于LYST蛋白的抑制剂可通过包括(但不限于)以下的机制妨碍LYST功能：诱导二聚，诱导寡聚，诱导构象变化，妨碍催化功能，诱导降解，诱导被免疫细胞摄取，妨碍被目标细胞摄取，妨碍配体结合，妨碍磷酸化，诱导变性，妨碍一种或多种翻译后修饰或以其他方式改变LYST蛋白的天然三级结构。
应理解，细胞信号传导路径通过LYST的启动或转导可能需要配体结合于LYST蛋白。因此，阻断涉及LYST的信号转导路径和任选地妨碍LYST与其受体共接合的蛋白、抗体或小分子为适用的免疫调节因子。下文论述的LYST抑制剂的类别包括抗体和功能核酸。
1.抗体
公开了通过直接结合到LYST蛋白、其配体或其辅助分子来抑制LYST功能的抗体。任何特异性抗体均可用于本文提供的方法和组合物。抗体可包括抗原结合位点，其结合到LYST蛋白上的表位。抗体与LYST的结合可经由一种或多种不同机制抑制或减少LYST蛋白的功能。
在一些实施例中，抗体或抗原结合片段特异性结合到由SEQ ID NO:2的氨基酸序列编码的蛋白内的表位。表位可为线性表位，且可包括SEQ ID NO:2的一级序列的一个或多个连续氨基酸。在其他实施例中，抗体或其抗原结合片段可结合构象表位，其包括LYST蛋白的3-D表面特征、形状或三级结构。在一些实施例中，3-D表面特征可包括来自SEQ ID NO:2的任何数量的氨基酸，或同系物、直系同源物、旁系同源物或其变异体中的相应残基。
在一些实施例中，特异性结合到由SEQ ID NO:2的氨基酸序列编码的蛋白内的表位的抗体或抗原结合片段可仅在由SEQ ID NO:2的氨基酸序列编码的蛋白不被配体或小分子结合时结合。
各种类型的抗体和抗体片段可以用于所公开的组合物和方法，包括任何类别的整个免疫球蛋白、其片段和至少含有抗体的抗原结合可变域的合成蛋白。抗体可为IgG抗体，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。抗体可呈抗原结合片段形式，包括Fab片段、F(ab')2片段、单链可变区等。抗体可为多克隆或单克隆(mAb)。单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中一部分重链和/或轻链与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或子类别的抗体中的相应序列相同或同源，而所述链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或子类别的抗体中的相应序列以及此类抗体的片段(只要其特异性结合目标抗原和/或展现所需生物活性即可)相同或同源(美国专利第4,816,567号；和莫里森(Morrison)等人,《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》,81:6851-6855(1984))。所公开的抗体还可通过重组手段，例如通过氨基酸的缺失、添加或取代加以修饰，以增加抗体在介导所需功能方面的功效。取代可为保守取代。举例来说，抗体的恒定区中的至少一个氨基酸可经不同残基置换(参见例如，美国专利第5,624,821号；美国专利第6,194,551号；WO9958572；和安格尔(Angal)等人,《分子免疫学(Mol.Immunol.)》30:105-08(1993))。在一些情况下，作出改变以减少非所需活性，例如补体依赖性细胞毒性。抗体可为对至少两个不同抗原表位具有结合特异性的双特异性抗体。在一个实施例中，表位来自相同抗原。在另一实施例中，表位来自两种不同抗原。双特异性抗体可包括双特异性抗体片段(参见例如，霍林格(Hollinger)等人,《美国国家科学院院刊》,90:6444-48(1993)；格鲁伯(Gruber)等人,《免疫学杂志(J.Immunol)》,152:5368(1994))。
结合人类蛋白的多种抗体可购自多个来源，例如，美国加利福尼亚州的圣克鲁兹生物技术(Santa Cruz Biotechnology,CA,USA)，目录号sc-136746)。抗体可以通过本领域中已知的任何方式产生。抗体生成和产生的例示性描述方式包括戴尔维(Delves),《抗体产生：必需技术(Antibody Production:Essential Techniques)》(威利(Wiley),1997)；谢泼德(Shephard)等人,《单克隆抗体(Monoclonal Antibodies)》(牛津大学出版社(OxfordUniversity Press),2000)；戈丁(Goding),《单克隆抗体：原理和实践(MonoclonalAntibodies:Principles And Practice)》(学术出版社(Academic Press),1993)；和《免疫学最新方案(Current Protocols In Immunology)》(约翰·威利父子公司(John Wiley&Sons),最新版)。完整Ig分子的片段可使用本领域中熟知的方法产生，包括酶消化和重组方式。
2.功能核酸
公开了抑制LYST基因产物的转录、翻译或功能的功能核酸。功能核酸为具有特定功能(如结合目标分子或催化特定反应)的核酸分子。如下文较详细论述，功能核酸分子可划分为以下非限制性类别：反义分子、siRNA、miRNA、适体、核酶、形成三链体的分子、RNAi和外部引导序列。功能核酸分子可充当目标分子具有的比活性的效应剂、抑制剂、调节剂和刺激剂，或功能核酸分子可具有独立于任何其他分子的重生活性。
功能核酸分子可与任何大分子，如DNA、RNA、多肽或碳水化合物链相互作用。因此，功能核酸可与LYST多肽的mRNA或基因组DNA相互作用，或其可与LYST多肽自身相互作用。通常，功能核酸经设计以基于目标分子与功能核酸分子之间的序列同源性与其他核酸相互作用。在其他情况下，功能核酸分子与目标分子之间的特异性识别不基于功能核酸分子与目标分子之间的序列同源性，而更确切地是基于形成允许特异性识别发生的三级结构。因此，所公开的组合物可包括一种或多种经设计以减少LYST蛋白的表达或功能的功能核酸。
在一些实施例中，组合物包括功能核酸或多肽，其经设计以靶向且减少或抑制LYST mRNA的表达或翻译；或减少或抑制LYST蛋白的表达，减少其活性，或增加其降解。在一些实施例中，组合物包括适用于功能核酸体内表达的载体。
在一些实施例中，功能核酸或多肽经设计以靶向编码SEQ ID NO:2的氨基酸序列的核酸的区段、或其互补序列或其变异体，所述变异体具有与编码SEQ ID NO:2的氨基酸序列的核酸65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致的核酸序列。
在其他实施例中，功能核酸或多肽经设计以靶向SEQ ID NO:1的核酸序列的区段、或其互补序列或其变异体，所述变异体具有与SEQ ID NO:1至少65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％一致的核酸序列。
在一些实施例中，功能核酸与SEQ ID NO:1的核酸或其互补序列例如在严格条件下杂交。在一些实施例中，功能核酸与编码SEQ ID NO:2的核酸序列或其互补序列例如在严格条件下杂交。
制造和使用用于体内表达所公开的功能核酸(如反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、EGS、核酶和适体)的载体的方法为本领域中已知。
i.反义分子
功能核酸可为反义分子。反义分子经设计以经由典型或非典型碱基配对与目标核酸分子相互作用。反义分子与目标分子的相互作用经设计以经由例如RNA酶H介导的RNA-DNA混合降解促进目标分子的破坏。或者，反义分子经设计以中断通常将发生于目标分子上的处理功能，如转录或复制。反义分子可基于目标分子的序列经设计。存在许多通过发现目标分子的最可进入区域而使反义效率最佳化的方法。例示性方法包括使用DMS和DEPC的体外选择实验和DNA修饰研究。优选的是，反义分子以小于或等于10-6、10-8、10-10或10-12的解离常数(Kd)结合LYST目标分子。
ii.适体
功能核酸可为适体。适体为与目标分子相互作用，优选地以特定方式相互作用的分子。通常，适体为长度在15-50个碱基范围内的小核酸，其折叠成经定义的二级和三级结构，如茎-环或G-四联体。适体可结合小分子(如ATP和茶碱)以及大分子(如逆转录酶和凝血酶)。适体可以低于10-12M的Kd极紧密地与目标分子结合。优选的是，适体以低于10-6、10-8、10-10或10-12的Kd结合LYST目标分子。适体可以极高特异性程度结合目标分子。举例来说，已分离适体，其在目标分子与仅分子上单一位置不同的另一分子之间的结合亲和力方面具有大于10,000倍差异。优选的是，适体与LYST目标分子的Kd比与背景结合分子的Kd低至少10、100、1000、10,000或100,000倍。优选地，当进行分子(如多肽)的比较时，背景分子为不同多肽。
iii.核酶
功能核酸可为核酶。核酶为能够催化分子内或分子间化学反应的核酸分子。优选的是，核酶催化分子间反应。公开了基于天然系统中发现的核酶的催化核酸酶或核酸聚合酶型反应的不同类型核酶，如锤头核酶。还公开了并非在天然系统中发现的，但已经工程化以从头催化特定反应的核酶。优选的核酶裂解RNA或DNA底物，并且更优选地裂解RNA底物。核酶通常经由识别并结合目标底物与后续裂解来裂解核酸底物。这种识别通常大多基于典型或非典型碱基对相互作用。这种特性使得核酶成为靶向核酸特异性裂解的尤其良好候选物，因为对目标底物的识别是基于目标底物序列。
iv.形成三链体的寡核苷酸
功能核酸可为形成三链体的寡核苷酸分子。形成三链体的功能核酸分子为可与双链或单链核酸相互作用的分子。当三链体分子与目标区域相互作用时，形成称作三链体的结构，其中存在取决于沃森-克里克(Watson-Crick)和胡斯坦(Hoogsteen)碱基配对而形成复合物的DNA的三条链。三链体分子由于其可以高亲和力和特异性结合目标区域而为优选的。优选的是形成三链体的分子以低于10-6、10-8、10-10或10-12的Kd结合目标分子。
v.外部引导序列
功能核酸可为外部引导序列。外部引导序列(EGS)为结合目标核酸分子形成复合物的分子，所述复合物由RNA酶P识别，所述RNA酶P接着裂解目标分子。EGS可经设计以特异性靶向所选RNA分子。RNA酶P有助于处理细胞内的转移RNA(tRNA)。细菌RNA酶P可经募集以通过使用使目标RNA:EGS复合物模拟天然tRNA底物的EGS来裂解实际上任何RNA序列。类似地，真核EGS/RNA酶P引导的RNA裂解可用于裂解真核细胞内的所需目标。如何制造和使用EGS分子以促进多种不同目标分子裂解的代表性实例为本领域中已知。
vi.RNA干扰
在一些实施例中，功能核酸经由RNA干扰(siRNA)诱导基因沉默。LYST基因的表达可经由RNA干扰以高度特异性方式有效地沉默。
基因沉默最初是在添加双链RNA(dsRNA)的情况下观察到的(法尔(Fire)等人(1998)《自然》,391:806-11；那波利(Napoli)等人(1990)《植物细胞(Plant Cell)》2:279-89；汉农(Hannon),(2002)《自然》,418:244-51)。一旦dsRNA进入细胞，其就被称为切丁酶(Dicer)的RNA酶III样酶裂解成长度为21-23个核苷酸的双链小干扰RNA(siRNA)，其3'末端含有2个核苷酸突出物(艾尔巴希尔(Elbashir)等人,《基因与发育(Genes Dev.)》,15:188-200(2001)；伯恩斯坦(Bernstein)等人,《自然》,409:363-6(2001)；哈蒙德(Hammond)等人,《自然》,404:293-6(2000)；尼凯宁(Nykanen)等人,《细胞(Cell)》,107:309-21(2001)；马丁尼兹(Martinez)等人,《细胞》,110:563-74(2002))。iRNA或siRNA的效应或其用途不限于任何类型的机制。
在一个实例中，siRNA在siRNA与目标LYST RNA两者之间的序列一致性区域内触发同源LYST RNA分子，如LYST mRNA的特异性降解。
序列特异性基因沉默可使用模拟通过酶切丁酶产生的siRNA的合成短双链RNA在哺乳动物细胞中实现(艾尔巴希尔等人,《自然》,411:494-498(2001))(乌-太(Ui-Tei)等人,《欧洲生物化学学会联合会快报(FEBS Lett)》,479:79-82(2000))。
siRNA可为化学或体外合成的或可为处理到细胞内部的siRNA中的短双链发夹样RNA(shRNA)。举例来说，WO 02/44321公开当与3'突出末端碱基配对时能够序列特异性降解目标mRNA的siRNA，制造这些siRNA的方法以引用的方式并入本文中。合成siRNA一般使用算法和常规DNA/RNA合成器设计。供应商包括安必逊(Ambion)(德克萨斯州奥斯汀(Austin,Texas))、化学基因(ChemGenes)(马萨诸塞州亚什兰(Ashland,Massachusetts))、达尔马肯(Dharmacon)(科罗拉多州拉斐特(Lafayette,Colorado))、格伦研究(Glen Research)(弗吉尼亚州斯特林(Sterling,Virginia))、MWB生物技术(MWB Biotech)(德国埃伯斯贝格(Esbersberg,Germany))、普罗丽格(Proligo)(科罗拉多州博尔德(Boulder,Colorado))和凯杰(Qiagen)(荷兰文托(Vento,The Netherlands))。siRNA也可使用试剂盒，如安必逊
Figure BDA0001169512800000321
siRNA构筑试剂盒体外合成。在一些实施例中，组合物包括表达功能核酸的载体。从载体产生siRNA更通常经由短发夹RNA酶(shRNA)的转录进行。用于产生包括shRNA的载体的试剂盒是可获得的，如英格奈克斯(Imgenex)的GENESUPPRESSORTM构筑试剂盒和英杰(Invitrogen)的BLOCK-ITTM诱导型RNAi质粒和慢病毒载体。在一些实施例中，功能核酸为siRNA、shRNA或miRNA。
B.赋形剂、递送媒剂和装置
LYST抑制剂可在存在或不存在递送媒剂的辅助下投与并吸收到个体的细胞中。用于所公开抑制剂的适当递送媒剂为本领域中已知的且可经选择以适合具体抑制剂。在一个优选实施例中，抑制剂通过静脉内、皮下、腹膜内或局部注射递送。典型载剂为盐水、磷酸盐缓冲盐水和其他可注射载剂。
公开具有或不具有递送媒剂的包括一种或多种LYST抑制剂的调配物。所公开的LYST抑制剂可调配到包括一种或多种医药学上可接受的载剂的医药组合物中。根据抑制剂和既定用途，医药组合物可经调配以用于不同投与机制。公开了医药组合物，其经调配以便通过肠胃外(肌肉内、腹膜内、静脉内(IV)或皮下注射)、表面或经皮(被动地或使用离子导入疗法或电致孔)投与途径或使用生物溶蚀性插入物投与。
1.肠胃外投与
在一些实施例中，一种或多种LYST抑制剂和任选地递送媒剂经调配以便以水溶液形式通过肠胃外注射投与。调配物还可呈悬浮液或乳液形式。通常，提供医药组合物，其包括有效量的活性剂、靶向部分和任选的递送媒剂，且任选地包括医药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或载剂。此类组合物包括稀释液无菌水；具有各种缓冲剂内含物(例如Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、pH和离子强度的缓冲盐水；和任选地添加剂，如清洁剂和增溶剂(例如
Figure BDA0001169512800000322
也称为聚山梨醇酯20或80)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠)和防腐剂(例如硫柳汞、苯甲醇)和增量物质(例如乳糖、甘露糖醇)。非水性溶剂或媒剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油和玉米油)、明胶以及可注射有机酯(如油酸乙酯)。调配物可以冻干并在即将使用之前再溶解/再悬浮。调配物可以通过例如经由细菌截留过滤器过滤、通过将灭菌剂并入到组合物中、通过照射组合物或通过加热组合物加以灭菌。
2.经肺和经粘膜投与
在其他实施例中，一种或多种LYST抑制剂和任选地递送媒剂经调配以便投与粘膜，如口部、眼睛、肺、鼻、口腔(舌下、颊内)、阴道或直肠粘膜。
投与粘膜的调配物将通常为喷雾干燥药物粒子，其可结合到片剂、凝胶、胶囊、悬浮液或乳液中。标准药物赋形剂可购自任何调配者。
在一个实施例中，调配用于经肺递送(如鼻内投与或经口吸入)的化合物。呼吸道是参与大气与血流之间的气体交换的结构。上气道和下气道称为传导性气道。末端细支气管分裂成呼吸性小支气管，其接着通向最终呼吸区(肺泡或深肺)。深肺或肺泡是吸入的治疗性气雾剂进行全身性药物递送的主要目标。在肺中具活性的治疗剂可全身性地投与并且通过经肺吸收来靶向。如本文所用的术语气雾剂是指粒子的精细雾状物的任何制剂，其可以呈溶液或悬浮液形式，无论其是否使用推进剂来产生。气雾剂可以使用标准技术(如超声作用或高压处理)来产生。
用于经肺调配物的载剂可以划分成用于干粉调配物和用于以溶液形式投与的载剂。用于将治疗剂递送到呼吸道的气雾剂是本领域中已知的。对于经由上呼吸道投与，可以将调配物调配到溶液(例如水或等张盐水，被缓冲或未缓冲的)中，或调配成悬浮液，用于作为滴剂或作为喷雾进行鼻内投与。优选地，此类溶液或悬浮液相对于经鼻分泌物是等张的并且具有介于例如约pH 4.0到约pH 7.4或pH 6.0到pH 7.0范围内的大致相同的pH。缓冲液在生理学上应是相容的并且简单举例来说包括磷酸盐缓冲液。本领域普通技术人员可以容易地确定用于经鼻和/或上呼吸道投与的无害水溶液的适合盐水内含物和pH。
组合物可在吸入时递送到肺且在以气雾剂或空气动力学直径小于约5微米的喷雾干燥粒子形式递送时横跨肺上皮衬壁到达血流。
具有大粒径的干粉调配物(“DPF”)具有改善的可流动性特征(如较少聚集)、较容易气溶胶化并且潜在地吞噬作用较小。通常产生的用于吸入疗法的干粉气雾剂的平均直径基本上在小于5微米范围内，不过优选范围是空气动力学直径在一与十微米之间。已将大“载剂”粒子(不含药物)与治疗性气雾剂共递送以帮助实现除其他可能益处以外的高效气溶胶化。用于经肺递送的调配物包括单层磷脂囊泡、脂质体或脂蛋白粒子。含有核酸的调配物和制备此类调配物的方法是本领域普通技术人员熟知的。可使用大范围的经设计以经肺递送治疗产品的机械装置，包括(但不限于)喷雾器、定量吸入器和粉末吸入器，其全部为本领域中熟习此项技术者熟悉的。
3.表面和经皮投与
活性剂和任选的递送媒剂可表面施用。表面投与可包括直接施用至血管或组织或假体，例如在手术期间，或通过直接投与皮肤进行。
还可制备经皮调配物。这些将通常为软膏、洗剂、喷雾剂或贴片，其全部可使用标准技术制备。经皮调配物可包括渗透增强剂。用于表面或经皮投与的标准药物赋形剂可购自任何调配者。
4.控制递送基质
可以制造控制释放聚合装置用于在植入聚合装置(棒、圆柱、膜、盘)或注射(微米粒子)之后长期全身性地释放。基质可呈微米粒子(如微球体)形式，其中LYST抑制剂分散在固体聚合基质或微胶囊内，其中核心具有与聚合外壳相比不同的物质，且一种或多种LYST抑制剂分散或悬浮于核心中，其在性质上可为液体或固体。除非本文中特别地定义，否则微米粒子、微球体和微胶囊可互换地使用。或者，聚合物可以浇铸成介于数纳米到四厘米范围内的薄板或薄膜、通过研磨或其他标准技术产生的粉末或甚至是如水凝胶的凝胶形式。
非生物可降解或生物可降解的基质可用于递送所公开的LYST抑制剂，不过生物可降解的基质为优选的。这些基质是天然或合成聚合物，但是合成聚合物是优选的，这归因于更好的降解和释放曲线特征。基于希望在哪一阶段释放来选择聚合物。在一些情况下，线性释放可以是最有用的，但是在其他情况下，脉冲释放或“大量释放”可以提供更有效的结果。聚合物可以呈水凝胶(通常吸收高达约90重量％的水)形式，并且可以任选地与多价离子或聚合物交联。
基质可以通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取以及本领域的普通技术人员已知的其他方法形成。生物溶蚀性微球体可以使用为了制造用于药物递送的微球体所开发的方法中的任一种来制备，例如如通过马西威兹(Mathiowitz)和兰格(Langer),《控制释放杂志(J.Controlled Release)》,5:13-22(1987)；马西威兹等人,《反应性聚合物(ReactivePolymers)》,6:275-283(1987)；以及马西威兹等人,《应用聚合物科学杂志(J.Appl.Polymer Sci.)》,35:755-774(1988)所描述。所述装置可经调配以便局部释放，从而治疗植入或注射区域，其将通常递送远低于治疗整个身体的剂量的剂量。所述装置还可经调配用于局部或全身递送。
本领域中已知经设计以将负荷(如药物和抗体)递送到血管、血管平滑肌细胞或部位或凝块或血栓的微米粒子和纳米粒子。参见例如，威克莱恩(Wickline)等人,《动脉硬化、血栓和血管生物学(Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology)》,26:435-441(2006),在线公开(2005年12月)和美国公开申请案第2002/0168320号、第2003/0086867号、第2003/0129136号、第2004/0058951号、第2004/0115192号、第2006/0147380号、第2006/0239919号、第2007/0140965号、第2007/0202040号、第2007/0258908号、第2008/0175792号、第2008/0247943号和第2013/0064765号。
举例来说，先前被视为人工血液替代物的全氟化碳纳米粒子已发展成用于分子成像和靶向药物递送的平台技术，即，所谓的“治疗诊断学”技术。这些标称直径250nm的脂质囊封的粒子可静脉内投与且通常因大小受限于完整血管。
在一些实施例中，递送媒剂为脂质体。如果LYST抑制剂为抗体、蛋白或小分子，那么优选的递送媒剂可为脂质体。公开了用于将所公开的LYST抑制剂直接递送到某些细胞类型(例如巨噬细胞)的脂质体。巨噬细胞可内化脂质体，引起一种或多种抑制剂递送到巨噬细胞的胞内区室。适用于制造脂质体的方法、材料和脂质为本领域中已知的。脂质体递送媒剂可购自多个来源。脂质体可由单一脂质双层(即，脂质体可为单层)或若干同心脂质双层(即，脂质体可为多层)形成。脂质体可由单一脂质形成；然而，在一些实施例中，脂质体由超过一种脂质的组合形成。脂质可在生理pH下为中性、阴离子性或阳离子性的。
适合的中性和阴离子性脂质包括固醇和脂质，如胆固醇、磷脂、溶血脂质、溶血磷脂和鞘脂。中性和阴离子性脂质包括(但不限于)磷脂酰胆碱(PC)(如卵PC、大豆PC)，包括1,2-二酰基-甘油-3-磷酸胆碱；磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油、磷脂酰环己六醇(PI)；糖脂；磷酸鞘酯，如神经鞘磷脂；神经鞘糖脂(也称为1-神经酰胺基葡糖苷)，如神经酰胺吡喃半乳糖苷、神经节苷脂和脑苷脂；脂肪酸，含有羧酸基的固醇，如胆固醇或其衍生物；和1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺，包括1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺或1,2-二油酰基甘油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、1,2-双十六烷基磷酸乙酰胺(DHPE)、1,2-二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、1,2-二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)和1,2-二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)。三甲基铵盐，也称为TAP脂质，例如作为甲基硫酸盐。适合的TAP脂质包括(但不限于)DOTAP(二油酰基-)、DMTAP(二肉豆蔻酰基-)、DPTAP(二棕榈酰基-)和DSTAP(二硬脂酰基-)。其他适合的阳离子性脂质包括溴化二甲基二(十八基)铵(DDAB)、1,2-二酰氧基-3-三甲基铵丙烷、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N-二甲基胺(DODAP)。其他适合的脂质包括上文所述的中性、阴离子性和阳离子性脂质的聚乙二醇化衍生物。一种或多种聚乙二醇化脂质衍生物的并入可产生在表面上呈现聚乙二醇链的脂质体。所得脂质体可具有与表面上缺乏PEG链的脂质体相比在体内增加的稳定性和循环时间。
如果LYST抑制剂为核酸或载体，那么递送媒剂可为病毒载体，例如市售制剂，如腺病毒载体(量子生物技术公司(Quantum Biotechnologies,Inc.)，加拿大魁北克拉维尔(Laval,Quebec,Canada))。病毒载体递送可经由病毒系统，如可包装重组逆转录病毒基因组的逆转录病毒载体系统(参见例如，帕斯坦(Pastan)等人,(1988)《美国国家科学院院刊》85:4486；米勒(Miller)等人,(1986)《分子与细胞生物学(Mol.Cell.Biol.)》6:2895)。重组逆转录病毒可接着用于感染细胞且由此将编码LYST抑制剂的核酸递送到经感染细胞。将经改变核酸引入到哺乳动物细胞中的确切方法当然不限于使用逆转录病毒载体。其他技术广泛可用于这一程序，包括使用腺病毒载体(三谷(Mitani)等人,《人类基因治疗(Hum.GeneTher.)》5:941-948(1994))、腺相关病毒(AAV)载体(古德曼(Goodman)等人,《血液(Blood)》84:1492-1500(1994))、慢病毒载体(奈迪尼(Naidini)等人,《科学(Science)》272:263-267(1996))、假模式化逆转录病毒载体(阿格拉沃(Agrawal)等人,《实验血液学(Exper.Hematol.)》24:738-747(1996))。
还可使用物理转导技术，如脂质体递送和受体介导的机制和其他内饮作用机制(参见例如，施华森伯格(Schwartzenberger)等人,《血液(Blood)》87:472-478(1996))。市售脂质体制剂，如LIPOFECTIN、LIPOFECTAMINE(马里兰州盖瑟斯堡的吉毕科公司(GIBCO-BRL,Inc.,Gaithersburg,Md.))、SUPERFECT(德国希尔登的凯杰公司(Qiagen,Inc.Hilden,Germany))和TRANSFECTAM(威斯康星州麦迪逊的普洛麦格生物技术公司(PromegaBiotec,Inc.,Madison,Wis.))以及根据本领域中标准程序开发的其他脂质体为熟知的。另外，所公开的核酸或载体可通过电致孔(其技术可从金托尼克公司(Genetronics,Inc.)(加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego,Calif.)获得)以及借助于声致穿孔或超声处理机器(亚利桑那州图森的依玛阿克斯医药公司(ImaRx Pharmaceutical Corp.,Tucson,Ariz.))在体内递送。所公开的组合物和方法可与这些或其他常用基因转移方法中的任一种结合使用。
5.移植物和医疗装置
所公开的通过抑制LYST进行免疫调节的组合物可涂布在医疗装置上或结合到医疗装置中，或可用于离体预处理可植入血管移植物。
移植物
LYST抑制剂可用于在植入个体之前离体预处理血管移植物。包括一种或多种LYST抑制剂和任选地递送媒剂的组合物可施用到组织中，通过用以确保其粘附组织或移植物且分布在整个组织或移植物中的最优位置以便药物治疗的方法。在一些实施例中，一种或多种LYST抑制剂使用经设计以实现以下功能的纳米粒子、微米粒子、脂质体、胶束、乳液、凝胶或包衣递送：粘附到所关注的区域，携带足够的药物负载以提供用于长时间段的局部治疗，以所需速率或时程释放LYST抑制剂，渗透到组织或移植物中以达到最优程度，或其组合。
用于手术的移植物还可通过将细胞离体接种在生物可降解骨架上来形成。移植物可为自体的，例如隐静脉或桡动脉；保藏自体，例如冷冻保存的静脉；同种异体的；异种的；或合成的，例如编织聚酯、聚氨基甲酸酯
Figure BDA0001169512800000381
聚四氟乙烯(PTFE)、
Figure BDA0001169512800000382
或聚乙烯对苯二甲酸酯
Figure BDA0001169512800000383
使用乳房内、桡骨或下腹动脉的动脉同种移植物为适用和耐用血管导管的实例。下文论述例示性移植物。
组织工程化血管移植物
公开了包括一种或多种LYST抑制剂的组织工程化血管移植物(TEVG)。组织工程化的血管移植物(TEVG)具有用于推进先天性心脏手术领域的巨大前景，其中其生长能力可以其最大潜能使用。举例来说，TEVG可经设计用作连接经历经改良的丰坦手术(Fontansurgery)的患者中的下腔静脉与肺动脉的血管导管。评估TEVG在25名具有单心室心脏异常的患者中的用途的试点研究的长期(>10年)结果未展示出移植相关死亡或移植失败。还证实了TEVG的生长能力使得其成为具有生长能力的首个人造移植物。主要的移植相关并发症为狭窄，影响约30％患者，其中16％(4/25)需要血管成形术来治疗严重狭窄。
在一个实施例中，TEVG由从聚乙醇酸纤维管制造的生物可降解管状骨架形成。所述管可用共聚物涂布，如50:50比率的聚乳酸(PLA)和聚己内酯。骨架可在植入到个体中之前用细胞接种。在一些实施例中，细胞为来自既定接收方的自体细胞。
已确立，巨噬细胞过度浸润到组织工程化的血管移植物(TEVG)中会促进结疤，引起血管增厚、阻塞和狭窄。因此，本文所述的组合物和方法可用于以局部方式且以受控制方式将一种或多种LYST抑制剂递送到TEVG，从而预防或抑制巨噬细胞浸润。
旁路移植物
公开了包括一种或多种LYST抑制剂的旁路移植物。旁路手术的常见形式涉及从腿切除隐静脉以便自体移植到冠状动脉。在相当大数目的情况中，这些移植物失效，很大程度上归因于由新内膜增生引起的再狭窄。本文所述的组合物和方法可用于以局部方式且以受控制方式将一种或多种LYST抑制剂递送到自体移植物。抑制剂可在手术之前、在手术时和/或在手术之后立即投与。在隐静脉切除术之后，在胸腔打开和准备移植物植入期间，组织可(且通常)持续数小时悬浮于盐水中。包括一种或多种LYST抑制剂和任选的靶向信号、递送媒剂或其组合的组合物在这一时间段期间可与隐静脉一起培育。
动静脉移植物
公开了包括一种或多种LYST抑制剂的动静脉移植物。在美国，终末期肾脏疾病逐渐增加。血液透析通路的发病率仍然是患者的主要生活质量问题；其对社会还代表相当大成本。天然动静脉瘘(AVF)仍然是所选导管以提供血液透析的通路且当与其他选择(如假体AVG)相比时提供优异结果。令人遗憾的是，每一个体受到可建立的天然AVF数目的限制，归因于适合部位和血管的数目有限。通路部位有限，因为患有终末期肾脏疾病的患者通常具有重度合并症，需要深入的静脉穿刺以用于生命的诊断和疗法。在耗尽主要AVF的所有选择的患者中，新通路部位必须使用AV移植物。这些移植物因新内膜增生而易遭受再狭窄，限制其有效性。可在手术时在移植物上培育包括一种或多种LYST抑制剂且任选地包括靶向信号、递送媒剂或其组合的组合物。
医疗装置
在一些实施例中，将包括一种或多种LYST抑制剂的组合物涂布在医疗装置或其组件上或结合到医疗装置或其组件中(如结合到血管支架中的聚合储集器中)，以减少或抑制个体的血管增殖病症，如新内膜形成。装置可为暂时插入到个体中的装置，或永久植入的装置。在一些实施例中，装置为手术装置。
医疗装置的实例包括(但不限于)针、插管、导管、分流器、气囊和植入物，如支架和瓣膜。
在一些实施例中，LYST抑制剂或医药组合物可经调配以允许其结合在医疗装置上，其可将抑制剂直接施加到部位以预防或治疗如再狭窄或其他血管增殖病症的病况。LYST抑制剂或其医药组合物可通过将其包括在医疗装置上的涂层内来调配。存在各种可使用的包衣，如聚合物包衣，其可在规定的时间段内释放抑制剂。抑制剂或其医药组合物可直接包埋在医疗装置内。在一些实施例中，LYST抑制剂涂布在装置之上或之内的递送媒剂(如有助于其释放和递送的微米粒子或脂质体)中。
支架
在一些实施例中，医疗装置为血管植入物，如支架。支架用于药品以预防或消除血管限制。支架可插入到受限制血管中，使得受限制血管增宽。使用此类血管植入物的经验指示，邻近细胞的过度生长也引起血管的限制，尤其在植入物的末端处，其引起植入物的有效性减少。如果将支架插入到人类动脉中以用于消除动脉硬化狭窄，那么内膜增生可在一年内在血管植入物的末端处发生且引起再生的狭窄。
因此，在一些实施例中，支架涂布或装载有包括LYST抑制剂和任选地递送媒剂的组合物。
许多支架为市售的或或另外本领域中知晓的。从适合材料的薄管，或从具有适合材料且辊轧成管的薄板，可形成(即，蚀刻或切割)支架。
适用于支架的材料包括(但不限于)不锈钢、铱、铂、金、钨、钽、钯、银、铌、锆、铝、铜、铟、钌、钼、铌、锡、钴、镍、锌、铁、镓、锰、铬、钛、铝、钒和碳以及其组合、合金和/或叠层。举例来说，支架可由以下形成：钴合金，如L605或
Figure BDA0001169512800000401
镍钛诺(镍-钛形状记忆合金)、ABI(钯-银合金)、
Figure BDA0001169512800000402
(钴-铬-镍合金)等。还预期，支架可由层压在一起的两种或更多种材料(如与
Figure BDA0001169512800000403
层压的钽)形成。支架还可由具有不同金属、合金或其他材料的同心层的线材形成。支架的实施例还可由中空管或已经其他材料填充的管形成。上述材料和叠层打算作为实例且并不打算以任何方式具限制性。
支架可为药物洗脱支架。本领域中已知将治疗性物质同时递送到治疗部位同时为壁组织提供人工径向支持物的各种药物洗脱支架。包括支架的管腔内装置可在其外表面上涂布有如药物释放剂、生长因子、抗体等的物质。也已开发具有中空管状结构的支架，所述中空管状结构具有经由侧壁切割的孔洞或孔口以允许药物从中心管腔洗脱。尽管支架的中空性质允许中心管腔装载有经由支架侧壁中的孔口或孔洞递送的药物溶液，但中空管状结构可能不具有适合于在血管中提供充足骨架的机械强度。
公开了洗脱LYST抑制剂的支架。在一些实施例中，装置还涂布或浸渍有LYST抑制剂和一种或多种其他治疗剂，包括(但不限于)抗血小板剂、抗凝血剂、抗微生物剂和抗代谢剂。
可与本文中所公开的组合物和方法一起使用的例示性支架包括(但不限于)描述于以下各项中的支架：美国专利第5,891,108号、第6,918,929号、第6,923,828号、第6,945,992号、第6,986,785号、第7,060,090号、第7,144,419号、第7,163,555号、第7,323,008号、第7,651,527号、第7,655,034号、第7,678,141号、第7,744,645号、第7,942,917号、第8,001,925号、第8,001,925号、第8,034,099号、第8,048,149号、第8,066,760号、第8,100,960号、第8,157,855号、第8,172,893号、第8,182,524号、第8,187,284号、第8,187,322号、第8,197,528号、第8,206,432号、第8,221,490号、第8,231,669号、第8,236,044号、第8,252,048号、第8,252,065号、第8,257,425号、第8,257,431号、第8,292,945号、第8,298,278号、第8,298,280号、第8,348,991号、第8,348,992号、第8,348,993号、第8,353,952号、第8,359,998号、第8,361,140号、第8,372,134号、第8,372,138号、第8,377,112号、第8,388,676号、第8,398,695号、第8,414,637号、第8,414,639号和第8,414,656号。
生物假体
多种其他假体装置可包括一种或多种LYST抑制剂，包括(但不限于)心脏瓣膜、人工关节、起搏器、留置导管和美容植入物。
据相信，所公开的LYST抑制剂可减少或预防与生物假体的存在相关的炎性反应和纤维增生病症。因此，在一些实施例中，生物假体涂布或装载有包括LYST抑制剂和任选地递送媒剂的组合物。
IV.使用方法
提供了使用所公开的LYST抑制剂的方法。所述方法可包括向个体投与有效量的包括一种或多种LYST抑制剂的组合物，从而预防、减少或抑制个体中LYST的表达或功能；用有效量的包括LYST抑制剂的组合物预处理医疗装置或血管移植物，从而在所述装置或移植物插入或植入到个体中之后预防、减少或抑制新内膜形成；或其组合。
A.待治疗的病症和疾病
LYST抑制剂可用于改变免疫功能，包括(但不限于)巨噬细胞、血小板和自然杀伤细胞功能，形成促再生免疫环境。使用LYST抑制剂的方法包括(但不限于)，经设计以抑制或阻断LYST蛋白的转录、翻译或功能的方法可用于调节免疫反应。在一些实施例中，所述方法促进血管新组织形成，抑制新内膜形成且改进血管开放性，例如在血管手术之后。提供了使用LYST抑制剂来预防生物和合成血管导管两者中的内膜和新内膜增生的方法。所述方法可减少或预防TEVG狭窄且改进TEVG功能。
另外，LYST抑制剂对于促进组织再生、改进创伤愈合以及调节外来身体反应可具有更广影响。因此，还描述了使用LYST抑制剂作为再生药品应用的佐剂的方法。在一些实施例中，使用LYST抑制剂的方法可促进愈合且预防疤痕形成，例如在腹部手术之后促进愈合且预防粘连。
所述方法可调节由于组织损伤产生的血小板衍生生长因子(PDGF)的量。因此，所述方法可治疗与PDGF的过度或不当表达相关的疾病。
所述方法还可预防或治疗由过度纤维化引起的疾病，例如肝、肺或心的纤维化疾病。最终，抗LYST疗法的方法可产生免疫调节，其改变外来身体反应且促进生物假体的整合但阻止其囊封，由此改进装置(如起搏器或神经刺激器)的功能和寿命或者替换心脏瓣膜或人工关节的整合。
在优选实施例中，一种或多种LYST抑制剂有效减少、抑制或延迟个体的疾病、病症或病况的一种或多种症状。所公开的LYST抑制剂具有多种治疗和预防用途，例如，其可用于治疗或预防在损伤或各种外科手术之后的血管增殖病症、结疤和纤维化疾病。描述了使用一种或多种LYST抑制剂来治疗特征在于存在过度疤痕或纤维化组织的疾病的方法。还提供了使用一种或多种LYST抑制剂的方法，其用于抗血小板疗法，例如用于治疗由异常、过度或另外不当的血小板活性或PDGF信号传导引起的疾病。
血管增殖病症
在一些实施例中，所公开的LYST抑制剂可用于治疗预防血管增殖病症。此类病症的实例包括(但不限于)与动脉粥样硬化有关的血管增殖；在血管内装置植入之后的血管增殖；在血管吻合部位处的血管增殖，如通常在血管再形成程序或A-V分流之后发生；在颈动脉动脉内膜剥除术之后的血管增殖；和移植血管病变。
提供了通过投与一种或多种LYST抑制剂来治疗或预防血管增殖病症的方法。与对照相比，所述方法通常减少或抑制巨噬细胞浸润或巨噬细胞从M1表型转化成M2表型或这两者。在一些实施例中，所述方法减少或抑制巨噬细胞增殖，而不减少或抑制血管新组织发展。个体可能具有狭窄、再狭窄或其他血管增殖病症，或被鉴别为处于再狭窄或其他血管增殖病症的风险中，例如已经历、正在经历或将经历血管创伤、血管成形术、手术或移植动脉病等的个体。以下更详细地论述可使用所公开的组合物治疗的疾病、病症和病况。
血管损伤
在一些实施例中，一种或多种LYST抑制剂可在血管创伤之前、之时或之后施用。
血管损伤触发事件的级联，包括内皮细胞剥脱或功能障碍，发炎以及血管平滑肌细胞(VSMC)的活化和增殖。功能异常内皮细胞、炎性细胞、血小板和VSMC释放多种生长因子和细胞因子。这些生长因子和细胞因子介导化学吸引、细胞迁移、增殖、细胞凋亡和基质调节，且涉及许多血管增殖病症。
血管增殖疾病和病症可因对血管壁的机械、生物化学或免疫损伤开始。典型血管创伤包括与钝器和穿透损伤两者相关的血管创伤，包括(但不限于)撕裂、刺伤、压伤、枪伤、刀伤、职业损伤、摔倒和机动车事故以及医疗介入(如手术或血管成形术)。
在一些实施例中，个体已经历、正在经历或将经历手术。手术可包括侵入性、微创或经皮手术。举例来说，在一些实施例中，个体正在做手术以治疗或修复腹主动脉瘤、颈动脉狭窄、曲张静脉、外周动脉闭塞疾病、急性肢体缺血或主动脉剥离。常见血管手术包括(但不限于)开放性腹主动脉瘤修复、血管内动脉瘤修复(EVAR)、颈动脉动脉内膜剥除术、颈动脉支架术、静脉剥离、硬化疗法和泡沫硬化疗法、静脉内激光治疗、射频静脉消融、点式微创静脉切除术、伴有/不伴有支架术的血管成形术、旁路手术动脉内膜剥除术、粥样斑块切除术、气囊栓子切除术、血栓摘除术、旁路手术、开放性修复、胸血管内动脉瘤修复(TEVAR)。外科医生可在手术时、在手术之前或在手术之后向手术部位施用一种或多种LYST抑制剂，从而增强创伤愈合过程，或预防血管增殖病症(如引起狭窄或再狭窄的血管增殖病症)的发展。
内膜增生
内膜增生为对血管内皮损伤的生理性愈合反应。对内皮细胞层的损伤触发一系列急性和慢性炎性反应，所述反应触发血小板聚集、血纤维蛋白沉积且吸引白细胞到所述区域(穆拉卡米等人,《美国生理学杂志(Am J Physiol)》,272:L197-L202(1997)；科特兰等人,《美国肾脏病学会杂志》,1:225-235(1990))。因此，引起新血管形成和内膜增生的再生过程似乎为免疫介导的现象，与所提出的单核细胞-巨噬细胞在其他人类血管生物过程(如静脉移植物适应)中的作用相似(拉特利夫(Ratliff)和迈尔斯(Myles),《病理及实验室医药学志(Arch.Pathol.Lab.Med.)》113:772-776(1989)；莫塔尼(Motwani)和托波尔(Topol),《循环》97:916-931(1998))。
狭窄
内膜增生可引起血管的内膜层增厚，导致血管狭窄的并发症。炎性和促凝血机制的活化被认为显著促进狭窄的起始和发展。在介于数周到数个月范围内的一段时间内，来自受损血管的内侧区域的平滑肌细胞再定位到内膜区域。这些细胞增殖且沉积细胞外基质以在损伤部位处在类似于疤痕形成的过程中形成新内膜(芬格勒(Fingerle)等人,《美国国家科学院院刊》,86:8412(1989)；克洛斯(Clowes)等人,《循环研究》,56:139-145(1985))。因此，稳健的愈合反应引起血管壁内部增厚(内膜增生)且最终减小血管管腔，引起狭窄。内膜增生的形成可通过血管内存在外来物质(如假体)加速，且可由血管内介入(包括血管成形术、旁路和移植动脉病等)引起(格拉戈夫,《循环》,89:2888-2891(1994))。
因此，提供了使用所公开的LYST抑制剂预防内膜增生和狭窄的方法。
再狭窄
提供了预防或减少冠状动脉血管或外周循环系统的再狭窄的方法。血管的再狭窄通常归因于内膜增生。可插入手术装置(如支架)以打开狭窄的血管，然而这因为支架自身可刺激进一步内膜增生也是成问题的。另外，增生的内膜组织可经由裸露支架的间隙生长且使血管再狭窄。尽管覆盖的支架可预防这种情况发生，但内膜增生可在最刺激血管壁的支架末端处再发生。具有支架中再狭窄的患者处于严重并发症的风险中，因为来自内膜增生的狭窄通常难以治疗。不同于软动脉粥样化斑块，这些狭窄稳固且需要用气囊长期较高膨胀压力来扩张。狭窄通常会复发，且血管的反复扩张引起反复的内膜损伤且使内膜愈合反应长存。
因此，所公开的组合物、装置或移植物可以有效减少或抑制新内膜形成的量投与个体以减少或抑制平滑肌细胞增殖、迁移和其组合，且由此治疗或预防个体的再狭窄和其他血管增殖病症。在一些实施例中，移植物和装置的开放性可使用含有LYST抑制剂的组合物增加。因此，提供了在植入之前或之后向装置和移植物或向个体投与含有LYST抑制剂的组合物的方法。
动脉粥样硬化
动脉粥样硬化涉及多种过程，包括发炎、血管增殖和基质改变(综述在迪早(Dzau)等人,《自然·医学(Nat Med)》,.8(11)(2002)中)。在动脉粥样硬化中，VSMC引起发炎、来自血液的脂蛋白的滞留以及构成斑块的纤维沉积物的发展。已展示，发炎介导所有阶段的动脉粥样硬化：在动脉粥样化斑块的发展中，VSMC产生促炎性介体，如单核细胞化学引诱剂蛋白，且合成会引起来自血液的脂蛋白滞留的基质分子；以及在斑块发展之后，局部炎性环境可诱导胶原蛋白酶表达且抑制蛋白水解抑制剂的表达，使得纤维盖不牢固且易遭受破裂。因此，在一些实施例中，所公开的LYST抑制剂用于治疗、减少、抑制或预防个体的血管增殖病症。
血管成形术
在一些实施例中，个体已经历、正在经历或将经历血管成形术。血管成形术是使变窄或阻塞的动脉(如由于动脉粥样硬化而阻塞的动脉)机械加宽的技术。通常，血管成形术包括将称为气囊式导管的引导线上的空且塌陷的气囊插入到个体的血管中，其穿过变窄的位置且接着膨胀到固定大小。气囊迫使内部白细胞/凝血斑块沉积物和周围肌肉壁扩张，使血管打开以便改善流动，且接着将气囊放气且抽出。支架可能或可能不在鼓起时插入以确保血管保持开放。血管成形术包括外周血管成形术(即，冠状动脉外部的血管，如在腹部或腿部)、冠状动脉成形术、肾动脉血管成形术、颈动脉血管成形术和脑动脉血管成形术。
在一些实施例中，个体已经历、正在经历或将经历经皮经管腔冠状动脉成形术(PTCA)。使用PTCA已极大地减少经历心肌梗塞的患者的死亡数目(菲施曼(Fischman)等人,《新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)》,331:496-501(1994)；埃莱齐(Elezi)等人,《循环》98:1875-1880(1998)；班尼特(Bennett)和奥沙利文(O'Sullivan),《药理学与治疗学(PharmacolTher.)》,91:149-166(2001))。在PTCA期间，动脉壁的初始直径扩张若干倍，以试图增加管腔直径且改善流动。令人遗憾的是，这种技术受到以下困扰：血管重新变窄或再狭窄发生率较高，在所述程序6个月内在30-40％患者中发生(安德森(Anderson)等人,《介入心脏病学杂志(J Interv.Cardiol.)》,6:187-202(1993)；菲施曼等人,《新英格兰医学杂志》,331:496-501(1994)；埃莱齐等人,《循环》98:1875-1880(1998)；班尼特和奥沙利文,《药理学与治疗学》,91:149-166(2001)；哈肯坎普(Heckenkamp)等人,《心血管手术杂志(JCardiovasc.Surg.)》(托里诺(Torino)),43:349-357(2002))。
在成功的PTCA之后预防再狭窄仍然是治疗阻塞性冠状动脉疾病中最具挑战性的任务之一。试图改善这种增殖反应涉及使用冠状动脉支架，其已显著改善介入冠状动脉血管再形成程序之后的短期和长期结果。尽管在部署支架的情况下再狭窄率减小，但再狭窄仍然在6个月内在15-30％患者中发生(菲施曼等人,《新英格兰医学杂志》,331:496-501(1994)；埃莱齐等人,《循环》98:1875-1880(1998))。预期此支架中再狭窄的发生率会增加，因为冠状动脉支架术变得更常见且用于较不理想的病灶。所公开的LYST抑制剂可用于治疗或预防血管成形术之后的再狭窄、腹部粘连和结疤。
移植动脉病
在一些实施例中，个体已经历、正在经历或将经历移植。慢性移植动脉病(CTA)是心脏或肾脏移植之后晚期同种移植损失的主要原因(泰勒(Taylor)等人,《心肺移植杂志(J.Heart Lung Transplant)》,24:945-955(2005)，伯克(Burke)等人,《移植(Transplantation)》,60:1413-1417(1995)；科内尔(Cornell)和科尔文(Colvin),《肾脏病和高血压现状(Curr.Opin.Nephrol Hyper tens.)》,14:229-234(2005))。因此，在一些实施例中，所公开的LYST抑制剂用于减少、抑制或预防移植接受体的移植动脉病。
过度结疤
所公开的LYST抑制剂可用于治疗、延迟或预防结疤，包括形成瘢痕瘤和腹部粘连，例如在损伤、疾病或外科手术之后。
提供了使用一种或多种LYST抑制剂来减少损伤或手术部位处血管生长的量的方法。在一些实施例中，所述方法预防或减少形成会引起结疤、瘢痕瘤或粘连的高密度细胞和结缔组织。优选地，一种或多种LYST抑制剂的量不妨碍创伤愈合。
肥大性疤痕
在一些实施例中，所公开的LYST抑制剂用于治疗、减少、抑制或预防增生性瘢痕的发展。过度结疤可在组织反应与正常修复和愈合所需的疤痕组织的量不成比例时发生。当深度创伤涉及相当大的真皮损失时，增生性瘢痕组织可沉积在创伤部位处。疤痕组织含有高密度细胞、体积增加的结缔组织和由血管数目增加引起的血管供应增加。增生性瘢痕可由于组织修复的重塑期中的缺陷发生(埃利希氏(Ehrlich)和凯利(Kelley),《整形外科(Plast Reconstr Surg.)》,90:993-998(1992))。
所公开的LYST抑制剂可用于减小或预防创伤区域中血管的发展，从而减少、延迟或预防肥大性疤痕的发展。
瘢痕瘤
在一些实施例中，所公开的LYST抑制剂用于治疗、减少、抑制或预防瘢痕瘤疤痕的发展。瘢痕瘤疤痕为超出损伤边界的凸起或增厚疤痕，且其可在长时间段内继续发展和增大。在瘢痕瘤生长的发展期间，用于创伤修复的胶原蛋白过度生长，产生大于初始疤痕许多倍的团块。
LYST抑制剂可用于预防与皮肤损伤(例如耳穿孔、撕裂、烧伤、疫苗接种或炎性过程)相关的瘢痕瘤发展。视需要可局部或表面施用LYST抑制剂。
粘连
粘连为在组织与器官之间形成的纤维带，通常由于手术期间的损伤形成。其可被认为是结缔组织通常不连接的内部疤痕组织，通常跨假想空间(如腹膜腔)。在腹部手术或创伤之后，纤维蛋白溶解酶的产生或活性可由于损伤而受损，且产生纤维蛋白粘连。如果允许这种情况发生，那么组织修复细胞(如巨噬细胞、成纤维细胞和其他血管细胞)会渗透纤维蛋白粘附以沉积胶原蛋白和其他基质物质，从而形成永久的纤维粘连。
可利用所公开的LYST抑制剂治疗、减少或预防的例示性粘连包括腹部粘连、盆腔粘连(包括由子宫内膜异位引起的骨盆粘连)、心包粘连、硬膜外粘连和腱鞘周粘连。粘连的症状可包括腹痛、阻滞、慢性盆腔疼痛、痉挛、恶心、灵活性受限和粘连部位处的发炎或肿胀。
其他纤维增生疾病
在一些实施例中，可施用一种或多种LYST抑制剂来治疗纤维增生疾病。
纤维化是对发炎和/或伤害起反应，过量纤维结缔组织沉积在器官或组织中(温,《自然综述·免疫学》4(8):583-594(2004))。受损组织的修复涉及在组织损伤部位处产生细胞外基质组分。巨噬细胞和受损组织释放细胞因子和TGFβ，其刺激细胞铺设结缔组织，包括胶原蛋白和葡糖胺聚糖。然而，这一过程的调节异常可引起这一结缔组织的过度沉积，其可消除下层器官的结构和功能，产生纤维化疾病的病理。纤维化可在体内许多组织中发生，包括肝、肺、心和肾。提供了治疗主要器官纤维化和纤维增生病症的方法。
肝硬化
肝脏的纤维化引起肝损害，因为肝细胞在称为硬化的过程中被非功能疤痕组织替换(益冈(Masuoka)等人《纽约科学院年鉴(AnnNYAcad.Sci.)》,1281:106-122(2013))。肝纤维化和所引起的硬化代表实际上所有慢性肝病的最终共同路径，且可引起肝衰竭、肝癌和肝脏相关的死亡。肝硬化因疤痕组织代替正常实质而发生。在急性肝损伤(例如病毒肝炎)之后，在与发炎性反应相关的过程中，实质细胞再生且替换坏死或凋亡细胞。如果肝脏损伤持续，那么肝脏再生过程最终失效，且肝细胞经丰富的细胞外基质(包括纤维状胶原蛋白)取代。晚期纤维化的特征在于纤维状胶原蛋白(主要是胶原蛋白I和胶原蛋白III)中富含的细胞外基质蛋白的累积(综述在伊戴尔(Iredale),《临床研究杂志》,117(3):529-548(2007)；拜特尔和勃伦那,《临床研究杂志》,115(2):209-218(2005)中)。活化肝星状细胞(HSC)以分泌胶原蛋白的炎性细胞在纤维化肝病中为重要因子。逐渐增加的单核细胞数目与疾病进展相关，特别是与非硬化进展到硬化疾病相关。
提供了治疗个体的肝纤维化的方法，其包括向个体投与有效量的一种或多种LYST抑制剂，以相对于未经治疗的对照个体减少、降低、限制或预防肝病的一种或多种症状。肝病的典型症状包括(但不限于)增加的腹部肿块、疲劳、腹痛、恶病质、黄疸、包括淋巴阻滞的阻塞性综合症和腹水积累、贫血以及背痛(孙(Sun)等人,《临床肿瘤护理杂志(ClinJ.Oncol.Nurs.)》,12:759-766(2008))。在一些实施例中，一种或多种LYST抑制剂相对于未经治疗的对照个体在患有肝病的个体中改善肝脏功能，减少发炎，减少纤维化或其组合。
肺纤维化
肺纤维化的特征在于过量纤维组织沉积在肺中，造成肺泡空间的显著架构扭曲和损失，导致器官衰竭和最终因呼吸衰竭死亡。肺纤维化涉及正常肺实质与纤维化组织的逐渐交换，引起氧扩散能力的不可逆降低。
肺纤维化(也称为隐源性致纤维化性肺泡炎)与间质肺疾病(ILD)相关，如结缔组织疾病或慢性发炎性疾病(例如类风湿性关节炎)、感染、特发性肺病和恶性疾病。环境暴露于吸入的毒素、药物和放射疗法也与肺纤维化相关。
提供了治疗或预防个体的肺纤维化的方法，其包括向个体投与有效量的一种或多种LYST抑制剂以相对于未经治疗的对照个体减少、降低、限制或预防肺纤维化的一种或多种症状。典型症状包括慢性干咳、呼吸短促、疲乏和无力、胸部不适、食欲不振和体重减轻。在一些实施例中，一种或多种LYST抑制剂相对于未经治疗的对照个体在患有肺纤维化的个体中改善呼吸功能、减少发炎、减少纤维化或其组合。
其他纤维化疾病
提供了治疗或预防个体的特征在于过度纤维化的疾病的方法，其包括向个体投与有效量的一种或多种LYST抑制剂以相对于未经治疗的对照个体减少、降低、限制或预防过度纤维化的一种或多种症状。可利用所公开的方法治疗的例示性疾病和病症包括肾硬化、硬皮病、夏普氏综合症(Sharp'ssyndrome)、神经纤维瘤、骨髓纤维化、全身性硬化症、杜普征氏挛缩(Dupuytren's contracture)和黄斑变性。另外，提供了治疗与手术并发症、化学治疗剂相关的结疤和纤维化、或其他药物诱发性纤维化、辐射诱导的纤维化、由损伤和烧伤引起的纤维化的方法。
与血小板功能相关的疾病
提供了治疗或预防特征在于过度或有害血小板活化和/或血小板衍生生长因子(PDGF)介导的信号传导的疾病的方法。因为血小板在血液凝结过程中起到至关重要的作用，所以针对血小板的疗法在对抗心脏和大脑的血管疾病的战斗中是最重要的部分。血小板的不当或过度活化可在完整血管内引起凝块形成(血栓)。自由断裂且开始围绕身体行进的凝块(血栓栓塞)可导致血管堵塞或阻塞、血液停滞、缺血、中风和/或死亡。
已确立，减少的LYST引起血小板活化减少和PDGF的表达减少(参见实例7)。因此，LYST抑制剂可以用作抗血小板药物，以减少或预防有害血小板凝集和血栓形成。提供了治疗或预防个体的特征在于有害或过度血小板活化的疾病的方法，包括向个体投与有效量的一种或多种LYST抑制剂，以相对于未经治疗的对照个体减少、降低、限制或预防有害或过度血小板凝集的一种或多种症状。因此，LYST抑制剂可用于治疗或预防与不当或有害血小板功能相关的疾病或病症。由血小板的不当/有害活化引起的病症的实例包括血小板超聚集或增加的平均血小板体积(MPV)和血小板增多动脉血栓；静脉血栓(布-加综合症(Budd-Chiari syndrome)；海绵窦血栓；脑静脉窦血栓；深静脉血栓；佩吉特-施罗特疾病(Paget-Schroetter disease)；门静脉血栓；颈静脉血栓；肾静脉血栓)；以及微循环血栓。动脉血栓可部分或完全地阻碍血液流动，引起下游缺血、中风或心肌梗塞。
血小板衍生生长因子(PDGF)的增加或不受控制的过度表达和不受控制的PDGF信号传导已涉及癌细胞的生长、血管新生和癌转移以及与如肿瘤的发展、存活和癌转移相关的疾病(综述在安德烈(Andrae)等人,《基因与发育(Genes Dev.)》,22:第1276-1312页(2008)中)。已展示，抑制PDGF会减少神经胶质瘤细胞生长。PDGFR介导的信号传导的数种抑制剂(如伊马替尼(imatinib))已进入治疗多种恶性疾病的临床试验。因此，一种或多种LYST抑制剂可用于治疗或预防与增加或上调的PDGF表达和/或不受控制的PDGF信号传导相关的任何疾病。例示性疾病包括癌症，如胶质母细胞瘤(例如退行性寡突神经胶质细胞瘤)和肉瘤(真皮肉瘤；食道鳞状细胞肉瘤)，以及视网膜血管疾病(例如缺血性视网膜病变)。
B.治疗方法
LYST的抑制可以经由局部或全身递送用作治疗性机制。在一些实施例中，组合物是全身性投与的。递送媒剂可经选择且用于将抑制剂靶向具体位置或细胞类型。在其他实施例中，抑制剂使用装置或移植物(如上文所论述的那些)直接投与血管。在其他实施例中，投与途径将抑制剂直接靶向特定器官或损伤的局部部位。
已确立，血管增殖的过程和发炎相关。据相信，LYST缓和促进增生性病症的免疫过程，如再狭窄过程。早期药物介入可排除长期疗法和与长期疗法相关的任何潜在不良副作用。举例来说，本文中所公开的组合物可减少或预防新内膜形成，但允许出现新组织生长。以下更详细地论述使用所公开的LYST抑制剂(任选地包括递送媒剂)治疗和预防疾病和病症的方法。
对照
LYST抑制剂的作用可与对照相比。适合的对照为本领域中已知且包括例如未经治疗的细胞或未经治疗的个体。在一些实施例中，对照为来自经治疗个体或未经治疗个体的未经治疗的组织。优选地，对照的细胞或组织来源于与经治疗细胞或组织相同的组织。在一些实施例中，未经治疗的对照个体罹患与所治疗个体相同的疾病或病况。举例来说，在一些实施例中，将受抗LYST治疗影响的一种或多种药理学或生理学标记物或路径与未经治疗的对照细胞或未经治疗的对照个体中的相同药理学或生理学标记物或路径比较。举例来说，抗LYST治疗的个体可与用其他新内膜形成抑制剂(如雷帕霉素(rapamycin))治疗的个体比较。用其他新内膜形成抑制剂治疗的个体与用LYST抑制剂治疗的个体相比可具有更大的术后狭窄发生率或减少的新血管组织形成。
包括一种或多种LYST抑制剂的医药组合物可以多种方式投与，取决于需要局部还是全身治疗，且取决于待治疗的区域。举例来说，所公开的组合物可静脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、腔内或经皮投与。组合物可肠胃外(例如静脉内)、通过肌肉内注射、通过腹膜内注射、经皮、体外、表面等投与，包括表面鼻内投与或通过吸入剂投与。
组合物的肠胃外投与(如果使用)通常特征为注射。可注射调配物可以常规形式制备，作为液体溶液或悬浮液，适用于在注射之前悬浮在液体中的溶液的固体形式，或作为乳液。还论述了涉及使用缓慢释放或持续释放系统使得恒定剂量得以维持的投与。
在某些实施例中，组合物经局部投与，例如通过直接注射到待治疗的部位。药物的局部递送可减少与全身递送相关的副作用或毒性，且可因增加的局部剂量而产生增强的治疗结果。
提供了局部(即，经由局部药物递送，LDD)投与所公开的LYST抑制剂的方法。在某些实施例中，LYST抑制剂可直接投与所治疗组织，如动脉或静脉，且不造成不良全身作用。在其他实施例中，组合物经注射或另外直接投与到一个或多个手术部位。通常，局部注射造成大于可通过全身性投与实现的增加的局部组合物浓度。在优选实施例中，组合物通过局部注射或表面投与直接递送到组织、假体、移植物或医疗装置。在一些实施例中，LYST抑制剂局部递送产生比通过全身性投与相同化合物实现的大两倍、10倍、100倍、500倍、1000倍或超过1000倍的浓度。在一些实施例中，局部投与的LYST抑制剂在递送部位处在一段时间内以恒定速率稳定地释放。优选地，稳定释放维持LYST抑制剂在递送部位处的所需浓度。
在处于疾病症状发作之前、期间或之后的时间段期间，或在一种或多种疾病症状发作之前、期间或之后的时间段的任何组合，可投与所公开的LYST抑制剂。举例来说，个体可在疾病症状发作之前每1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35或48天投与一种或多种剂量的组合物。个体可在疾病症状发作之后每1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35或48天投与一种或多种剂量的组合物。在一些实施例中，投与多种剂量的组合物，随后疾病病况明显改善。举例来说，在一些实施例中，个体历经1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35或48天或数周的时间段，接受1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、35或48天，随后疾病或病况明显改善。
因此，取决于待治疗的疾病或病症，在相对于诊断、预后、手术或损伤的不同时间，可投与所公开的包括一种或多种LYST抑制剂的组合物。抗LYST疗法的开始时机应基于个体的需求确定，且可在手术或损伤时到手术或损伤后一天或多天、数周或数月范围内变化。提供了使用调配物以便延迟释放LYST抑制剂的方法。在一些实施例中，使用抑制剂的疗法可在血管新组织生长出现时停止。
在一些实施例中，单一剂量的一种或多种LYST抑制剂以一种或多种推注剂量形式向个体递送，以将一种或多种抑制剂的血液浓度提高到所需水平。推注可通过任何方式给予，如经由注射给予。推注剂量的放置可变化，取决于所需作用和待治疗的目标器官或组织。在一个特定实施例中，推注在投与其他剂型(如脉冲式释放剂量形式)之前给予。因此，可使用用于立即、延迟或脉冲式释放的调配物的组合，将一种或多种LYST抑制剂的所需血液浓度维持所需时间段。
在粘连的情况下，正常解剖学结构之间的结缔组织的沉积是不必要的，并且因此预防血管组织发展并非有害的。因此，为了预防和减少粘连，LYST抑制剂将通常在手术时或手术后不久(例如在一周内)施用。在处于新内膜形成风险中的外科手术的情况下，例如组织移植物或支架的狭窄或再狭窄，可在手术时投与一种或多种LYST抑制剂。在涉及皮肤的损伤或手术的情况下，LYST抑制剂可在皮肤表面重新形成上皮之后施用。
涂布在移植物和装置上
通过将一种或多种抑制剂结合到医疗装置(如支架或其他假体)中，通过将抑制剂装载到所述装置的结构或密封材料之中或之上，可局部递送一种或多种LYST抑制剂。抑制剂的释放速率可利用许多方法控制，包括改变以下各项中的一项或多项：可吸收材料与药剂的比率，可吸收材料的分子量、抑制剂的组成、可吸收聚合物的组成、涂层厚度、涂层数目和其相对厚度、抑制剂浓度和/或抑制剂与装置或密封材料的物理或化学结合或连接。也可施用聚合物和其他材料(包括可吸收聚合物)的表涂层以控制一种或多种抑制剂的释放速率。
在一些实施例中，装置或移植物组织上存在的LYST抑制剂的量可通过改变递送媒剂来调整。还可调整抑制剂在整个组织中的渗透。以此方式，可小心地控制在植入部位处局部释放的药物的量。通常，LYST抑制剂或带有抑制剂的递送媒剂与装置或移植材料离体接触。接触可在不存在或存在轻度搅动或本领域中已知的其他方法下进行，以确保抑制剂附着于或渗透装置或移植物组织。搅动可例如通过在定轨振荡器上培育，或通过垂直旋转，如通过在杂交炉的垂直传送带中培育来实现。可改变培育方案以影响粒子在装置或移植物上的定位。递送媒剂(如粒子)附着于装置或移植物的量和定位还可通过改变媒剂上存在的附着和靶向配体(如所描述的那些)的类型和密度来改变。用于将药物离体递送到血管移植物的例示性组合物和方法论述在美国公开申请案第2006/0002971号、第2010/0151436号和美国专利第7,534,448号中。
在有或没有要求进一步侵入性程序(如放置血管移植物或支架)的情况下，组合物和方法可用于将LYST抑制剂局部递送到移植物。
C.剂量和有效量
在一些体内方法中，LYST抑制剂的组合物以治疗有效量投与个体。如本文中所用的术语“有效量”或“治疗有效量”意指足以治疗、抑制或缓解待治疗病症的一种或多种症状或以其他方式提供所需药理和/或生理效应的剂量。确切剂量将根据多种因素改变，如个体因变量(例如年龄、免疫系统、健康状况等)、疾病或病症和所实现的治疗。
关于所有所公开的化合物，随着进一步研究的进行，将呈现关于用于治疗不同患者的不同病况的恰当剂量水平的信息，并且考虑接受体的治疗背景、年龄和一般健康状况，普通技术人员将能够确定恰当的剂量。所选择的剂量取决于所需治疗作用、投与途径和所需治疗持续时间。通常，在每天每千克体重0.001mg与100mg之间的剂量水平投与哺乳动物，最佳为人类。一般来说，关于静脉内注射或输液，剂量可以更低。优选地，组合物经调配以实现在需要治疗的部位处在约1与约1000μM之间的LYST抑制剂血清水平。
在一些实施例中，LYST抑制剂有效预防免疫细胞(如巨噬细胞、血小板和NK细胞)的正常生物学活性。举例来说，一种或多种抑制剂的量可有效减少或预防巨噬细胞的迁移性或趋化性活性。
在一个实施例中，一种或多种LYST抑制剂的量有效预防或减少个体的新内膜形成。在一个优选实施例中，与未经治疗的对照比较，一种或多种LYST抑制剂的量不妨碍个体的创伤愈合或新组织形成。优选地，与未经治疗的对照比较，一种或多种LYST抑制剂的量在个体中有效预防或减少新内膜形成且增强创伤愈合。
在另一实施例中，一种或多种LYST抑制剂的量有效降低损伤或手术部位处血管生长的量，预防或降低会引起纤维化、结疤、瘢痕瘤或粘连的高密度细胞和结缔组织的形成。优选地，一种或多种LYST抑制剂的量不妨碍创伤愈合。
在另一实施例中，一种或多种LYST抑制剂的量有效降低或抑制血小板活化。举例来说，LYST抑制剂的量可有效预防或抑制损伤或手术部位处的不当血小板凝集和趋化因子分泌。在另一实施例中，一种或多种LYST抑制剂的量有效降低损伤或手术部位处对凝血酶活化起反应由细胞产生或分泌的血小板衍生生长因子(PDGF)和/或转化生长因子β(TGFβ)的量。一种或多种LYST抑制剂可有效减少PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C或PDGF-D的产生或分泌。因此，一种或多种LYST抑制剂可有效减少血清中生物活性PDGF的量。举例来说，相对于在未经治疗的对照中的量，PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-CC、PDGF-DD或PGDF-AB的量可减少。因此，一种或多种LYST抑制剂可有效减少或预防因PDGF或因由PDGF控制的下游信号传导事件出现的一种或多种生物学活性。举例来说，一种或多种LYST抑制剂可有效减少或预防一种或多种酪氨酸激酶受体的活化，如PDGF受体α(PDGFRα)；PDGF受体β(PDGFRβ)；和/或PDGF受体αβ(PDGFαβ)。通过减少或预防一种或多种PDGF的活性，LYST抑制剂可减少或预防对数种控制细胞活性(包括细胞增殖、趋化性和肌动蛋白再组织)的信号传导路径的PDGF介导的诱导。
在另一实施例中，一种或多种LYST抑制剂的量有效预防或降低会引起纤维化、结疤、瘢痕瘤或粘连的高密度细胞和结缔组织的形成。优选地，一种或多种LYST抑制剂的量不妨碍创伤愈合。
D.组合疗法
所公开的包括LYST抑制剂的组合物、装置和移植物可单独或与一种或多种其他活性剂组合投与，作为治疗性或预防性治疗方案的一部分。举例来说，组合物可在第一天、第二天、第三天或第四天或其组合投与。组合物可与第二活性剂同日或不同日投与。
术语“组合(combination)”或“组合(combined)”用于指伴随性、同时或连续投与两种或更多种药剂。因此，可以伴随地(例如，以混合物形式)、单独但同时地(例如，通过单独的静脉内管线进入同一个体中)或依次地(例如，首次给予化合物或药剂中的一种，接着是第二种)投与所述组合。
其他治疗剂可为其他抗新内膜剂、化学治疗剂、抗体、抗生素、抗病毒剂、甾体和非甾体消炎剂、常规免疫治疗剂、免疫抑制剂、细胞因子、趋化因子和/或生长因子、抗增生剂或抗迁移剂(其经设计以用于治疗或预防新内膜形成或再狭窄)、影响迁移和细胞外基质产生的药剂、影响血小板沉积或血栓形成的药剂以及促进血管愈合和重新内皮化的药剂，描述在坦圭(Tanguay)等人《可生物降解支架、心脏科诊所的现状(Current Status ofBiodegradable Stents,Cardiology Clinics)》,12:699-713(1994)，J.E.苏泽(J.E.Sousa),P.W.塞吕(P.W.Serruys)和M.A.科斯塔(M.A.Costa),《循环》107(2003)2274(第I部分),2283(第II部分)，K.J.萨卢(K.J.Salu),J.M.博斯曼斯(J.M.Bosmans),H.布尔特(H.Bult)和C.J.弗因特(C.J.Vrints),《心脏病学报(Acta Cardiol)》59(2004)51中。
例示性抗凝血酶药剂包括(但不限于)肝素(包括低分子肝素)、R-水蛭素(R-Hirudin)、水蛭肽(Hirulog)、阿加曲班(Argatroban)、依非加群(Efegatran)、蜱抗凝血肽(Tick anticoagulant peptide)和Ppack。
例示性抗增殖剂包括(但不限于)太平洋紫杉醇(Paclitaxel，紫杉醇(Taxol))、QP-2长春新碱(QP-2Vincristin)、甲氨喋呤(Methotrexat)、血管抑肽(Angiopeptin)、丝裂霉素(Mitomycin)、BCP 678、反义c-myc、ABT578、放射菌素-D、RestenASE、1-氯-脱氧腺苷、PCNA核酶和塞内昔布(Celecoxib)。
调节细胞复制/增殖的例示性药剂包括雷帕霉素目标(target of rapamycin，TOR)抑制剂(包括西罗莫司(sirolimus)、依维莫司(everolimus)和ABT-578)，太平洋紫杉醇和抗瘤形成剂，包括烷基化剂(例如环磷酰胺(cyclophosphamide)、二氯甲二乙胺(mechlorethamine)、氯芥苯丁酸(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、丙卡巴肼(procarbazine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、六甲蜜胺(altretamine)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin))，抗肿瘤抗生素(例如博莱霉素(bleomycin)、放射菌素D、光神霉素(mithramycin)、丝裂霉素C(mitomycin C)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrine)、拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、多柔比星(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、艾达霉素(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)和米托蒽醌)，抗代谢物(例如脱氧柯福霉素(deoxycoformycin)、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤、2-氯去氧腺苷、羟脲、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、卡培他滨(capecitabine)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、氮杂胞苷(azacytidine)、吉西他滨(gemcitabine)、氟达拉宾磷酸盐(fludarabine phosphate)和天冬酰胺酶)、抗有丝分裂剂(例如长春新碱、长春碱(vinblastine)、长春瑞滨(vinorelbine)、多西他赛(docetaxel)、雌莫司汀(estramustine))和分子靶向剂(例如伊马替尼(imatinib)、维甲酸(tretinoin)、贝瑟罗汀(bexarotene)、贝伐单抗(bevacizumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、奥格米星(ogomicin)和地尼白介素(denileukin diftitox))。
例示性抗再狭窄剂包括(但不限于)免疫调节剂，如西罗莫司(雷帕霉素)、他克莫司、Biorest、咪唑立宾(Mizoribin)、环孢素、干扰素γ1b、来氟米特(Leflunomid)、曲尼司特(Tranilast)、皮质类固醇(Corticosteroide)、霉酚酸(Mycophenolic acid)和双磷酸脂(Biphosphonate)。
例示性抗迁移剂和细胞外基质调节剂包括(但不限于)卤夫酮(Halofuginone)、丙基羟化酶抑制剂、C蛋白酶抑制剂、MMP抑制剂、巴马司他(Batimastat)、普罗布可(Probucol)。抗血小板剂的实例包括(但不限于)肝素。
在一些实施例中，其他治疗剂为N-3,4-三羟基苯甲酰胺或其医药学上可接受的盐或酯，地多西(didox)、酰亚胺酯(imidate)或羟脲，如美国专利第8,029,815号中所述。
可以向个体局部或全身性地投与其他治疗剂，或将其涂布或结合到装置或移植物之上或之中。其他治疗性试剂可通过相同或不同途径和通过不同方式投与。举例来说，一种或多种LYST抑制剂可与通过不同方式(如全身性地)递送的以下各项中的一种或多种组合局部递送：太平洋紫杉醇、紫杉德(taxotere)和其他紫杉烷类化合物、甲氨蝶呤、蒽环霉素如多柔比星、依维莫司、西罗莫司、雷帕霉素或雷帕霉素衍生物。
在其他实施例中，一种或多种LYST抑制剂可以用于减少或预防与使用一种或多种其他治疗剂相关的非所需副作用。举例来说，一种或多种LYST抑制剂可与抗肿瘤剂博莱霉素一起使用，以预防与博莱霉素相关的肺纤维化。
将通过参考以下非限制性实例进一步理解本发明。
实例
实例1：米色突变减少组织移植物中的狭窄
方法和材料
组织工程化的血管移植物(TEVG)通过以下方式开发：将自体骨髓衍生的单核细胞接种在由聚乙醇酸纤维管制造的生物可降解管状骨架上，所述聚乙醇酸纤维管涂布有聚乳酸和聚己内酯的50:50共聚物。
开发用于评估TEVG功能的鼠类模型，以努力阐明构成TEVG形成基础的细胞和分子机制。下腔静脉(IVC)插入移植物模型为经验证的模型，其用于研究血管移植物在与丰坦循环相似的低压、高流动循环系统中的用途。这种模型广泛地用于研究TEVG中的新组织形成。
将由PGA-PCL/LA构成的生物可降解导管移植物分别植入到野生型小鼠和米色突变体小鼠的下腔静脉中，且无细胞接种。移植物在手术之后2周取出，分割且测量血管的直径并评估开放性。
结果
取决于小鼠的品系，当TEVG以IVC插入移植物形式植入时，观察到狭窄率的显著变化。确切地说，应注意，在具有米色突变的小鼠中植入的TEVG具有格外低的狭窄率。在C57B6(野生型小鼠)(N＝25)和米色突变体(N＝10)两者中比较以IVC插入移植物形式植入的TEVG的开放性和内腔直径(表1)。野生型小鼠展现80％狭窄，且内腔直径经测量为0.33mm，而米色小鼠展现10％狭窄率，且内腔直径经测量为0.71mm(T检验<0.001且卡方0.0002)(图1)。
表1：从米色(Bg)和野生型(Wt)小鼠取出的TEVG的开放性和内腔直径的差异
Gunze 21G n 直径 SD 开放性(>0.45mm) 开放性(％)
米色 10 0.71 0.16 9 90
Lyst-tm1b 5 0.73 0.17 5 100
WT 25 0.33 0.17 5 20
实例2：米色突变减少巨噬细胞浸润到组织移植物中
方法和材料
先前已使用鼠类模型展示出，血管新组织形成由来源于宿主的细胞产生，且血管新组织形成的过程利用免疫系统，特别是来源于宿主的巨噬细胞协调。过度巨噬细胞浸润引起狭窄，而巨噬细胞浸润的抑制预防新组织形成。
测量上文实例1中所述的米色和野生型小鼠两者的取出的移植物中的巨噬细胞数目。使用对CD31细胞标记物具有特异性的抗体，在每一移植物的组织切片上进行免疫组织化学以表征每一组中的内皮细胞的数目和形态。
结果
在手术之后2周，在米色小鼠中植入的TEVG与在野生型小鼠中植入的TEVG相比展现显著更少的巨噬细胞浸润。参见图2。值得注意的是，内皮细胞的免疫组织化学(使用对CD31具有特异性的抗体)不展示出来自野生型和米色小鼠的移植物切片之间的任何差异，指示新组织形成在两个组中是类似的。
实例3：米色表型从LYST基因中的突变产生
方法和材料
米色突变由LYST基因的自发突变产生(图3)。为了分析蛋白表达，设计6种不同引物(分别命名为LYST1、LYST3、LYST4、LYST5和LYST6)以覆盖全部LYST基因区域。LYST-5引物覆盖外显子52的区域，其包括在米色小鼠基因型中鉴别出的氨基酸突变。原始细胞用作标准以计算相对mRNA水平。
结果
鉴别出米色小鼠中引起米色表型的特定突变。全长LYST基因编码3801个氨基酸的多肽。LYST的突变在外显子52上出现，引起氨基酸异亮氨酸缺失(ile3741del)(图3)。
分子分析展示出，在两组之间的mRNA的表达方面无显著差异。尽管野生型和突变体蛋白的转录水平等效，但无突变体蛋白的翻译。
另外，根据免疫组织化学和蛋白印迹法，LYST蛋白表达在米色突变体小鼠中耗乏(图4)。这些结果指示，米色小鼠中的LYST基因突变影响在从基因翻译之后的蛋白修饰水平。
实例4：LYST基因中的米色突变改变免疫过程
方法和材料
测试米色突变通过调节免疫系统来抑制TEVG狭窄形成的假设。将骨髓从C57B6(野生型)小鼠移植到米色突变体小鼠中，且反之亦然。进行FACS分析，以测定米色和野生型小鼠中的LYST单核细胞百分比。另外，与野生型相比，在米色突变体小鼠中，在用血纤维蛋白刺激后的血小板活化能力降低。
结果
在用来自米色小鼠的骨髓移植的野生型小鼠中展示出TEVG狭窄的显著抑制。类似地，当将TEVG植入用来自野生型小鼠的骨髓移植的米色小鼠中时，其展现较高TEVG狭窄率。这些发现指示米色突变经由其对免疫系统的作用来抑制TEVG狭窄。分别来自野生型和米色小鼠的单核细胞和巨噬细胞的FACS分析展示出表型群体中的差异。展示分析流式细胞仪的代表结果的一系列散点图展示出分别来自WT3、WT4、bg3和bg4小鼠的CD115(Y轴)和CD11b(X轴)染色的单核细胞比例。还测定了分别来自WT3、WT4、bg3和bg4小鼠的LYC6和F4/80染色的细胞的分布。计算命名为LYC6“高”和LYC6“低”的细胞百分比。结果代表在用硫乙醇酸酯刺激之后3天的腹膜巨噬细胞，经选通以排除死细胞和残渣。
散点图展示分析流式细胞仪的代表结果，绘制分别来自野生型小鼠和米色小鼠的PE-A染色的细胞(Y轴)对FITC-A荧光(X轴)。在用血纤维蛋白刺激之后，在血小板活化之后，选通细胞以排除死细胞和残渣。在用硫乙醇酸酯刺激之后3天，在腹膜巨噬细胞中，LY6C“高”单核细胞的数目在野生型组(WT3，WT4)中较高，而Ly6C“低”单核细胞的数目在米色组(bg 3，bg)中较高。
FACS分析还展示出，在用血纤维蛋白刺激细胞后，与野生型小鼠相比，在米色突变体小鼠中，血小板活化的能力降低。
实例5：LYST介导的免疫调节可使用LYST蛋白的抗体获得
方法和材料
阻断LYST蛋白的作用使用抗LYST抗体研究。C57B6小鼠用抗LYST抗体处理，且接着用TEVG植入。在手术前1天以及手术后1周，在三个不同治疗组中的每一组中，将抗LYST抗体注射到野生型小鼠的腹膜中(0mg/kg(对照)、10mg/kg或50mg/kg)。在手术后2周，将小鼠处死，且取出移植物和脾。使用移植物的苏木精(Hematoxylin)和伊红(eosin)染色(HE染色)进行组织学。脾组织使用对LYST蛋白具有特异性的抗体通过蛋白印迹法分析，以测定每一处理组中LYST蛋白的相对有效量。
结果
抗LYST抗体的全身注射展示出移植物开放性以剂量依赖性方式改善。观察到巨噬细胞浸润的明显抑制和TEVG狭窄降低。开放性的这种剂量依赖性增加伴随着脾组织内在LYST蛋白存在下的剂量依赖性减少，如通过免疫组织化学所测定。因此，已确立引起新组织形成改善和TEVG狭窄形成抑制的免疫调节的方法。
实例6：缺乏功能Lyst基因的转基因小鼠并不展现TEVG的狭窄
方法和材料
产生缺乏功能LYST蛋白的C57BL/6转基因小鼠。将这些小鼠命名为C57BL/6Lysttmlb。用于产生这种基因敲除品系的技术使用LacZ报导体。LacZ的PCR证实基因敲除模型。
为了测定C57BL/6Lysttmlb基因敲除小鼠是否将在TEVG植入之后出现狭窄，5只C57BL/6Lysttmlb小鼠和5只C57BL/6野生型小鼠用未接种的TEVG植入。在植入后2周，取出并检查TEVG。
结果
在植入2周后，100％在Lysttmlb基因敲除小鼠(n＝5)中植入的未接种组织工程化血管移植物(TEVG)开放(参见图5；表1)。相比之下，C57BL/6野生型小鼠展现约90％狭窄发生率。
实例7：Lyst对活化起反应调节血小板功能
方法和材料
应理解，Lyst蛋白与血小板功能有关，且薛迪克-东氏综合症(人类相关)的特征为“血小板储存池缺陷”。富血小板血浆(PRP)获自米色(Bg)和野生型(WT)小鼠。样品通过凝血酶活化且将来自每一组(n＝7)的分泌PDGF(血小板衍生生长因子)的总浓度与静息、非活化对照(n＝5)比较。
结果
在活化和静息两组中，凝血酶活化引起PDGF的显著更大浓度。然而，在与野生型相比时，来自活化血小板的PDGF分泌在米色组中显著降低(参见图6)。因此，Lyst活性的减少也减少PDGF，指示减少Lyst活性的药剂还可用作抗血小板剂。
序列表
<110> 国家儿童医院研究所
克里斯多夫·布罗伊尔
日比野成俊
维杜·加格
卡梅隆·贝斯特
<120> 用于抗LYST免疫调节的组合物和方法
<130> NWCH 100 PCT
<150> US 61/987910
<151> 2014-05-02
<160> 2
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 13503
<212> DNA
<213> 智人
<400> 1
gtgcgcggcg gcggcggcag cggcgtcggc tcggggttct ccgggagagg gggagtgcgc 60
ggcggccgca gctgccacaa accaggtgaa gctttgttct aagaatattt gtttcatcta 120
gtttatgagt ccaaatgata tagactgtaa atgtcacagc agtggtgaaa gactgctcgg 180
tcatgagcac cgacagtaac tcactggcac gtgaatttct gaccgatgtc aaccggcttt 240
gcaatgcagt ggtccagagg gtggaggcca gggaggaaga agaggaggag acgcacatgg 300
caacccttgg acagtacctt gtccatggtc gaggatttct attacttacc aagctaaatt 360
ctataattga tcaggcattg acatgtagag aagaactcct gactcttctt ctgtctctcc 420
ttccactggt atggaagata cctgtccaag aagaaaaggc aacagatttt aacctaccgc 480
tctcagcaga tataatcctg accaaagaaa agaactcaag ttcacaaaga tccactcagg 540
aaaaattaca tttagaagga agtgccctgt ctagtcaggt ttctgcaaaa gtaaatgttt 600
ttcgaaaaag cagacgacag cgtaaaatta cccatcgcta ttctgtaaga gatgcaagaa 660
agacacagct ctccacctca gattcagaag ccaattcaga tgaaaaaggc atagcaatga 720
ataagcatag aaggccccat ctgctgcatc attttttaac atcgtttcct aaacaagacc 780
accccaaagc taaacttgac cgcttagcaa ccaaagaaca gactcctcca gatgctatgg 840
ctttggaaaa ttccagagag attattccaa gacaggggtc aaacactgac attttaagtg 900
agccagctgc cttgtctgtt atcagtaaca tgaacaattc tccatttgac ttatgtcatg 960
ttttgttatc tttattagaa aaagtttgta agtttgacgt taccttgaat cataattctc 1020
ctttagcagc cagtgtagtg cccacactaa ctgaattcct agcaggcttt ggggactgct 1080
gcagtctgag cgacaacttg gagagtcgag tagtttctgc aggttggacc gaagaaccgg 1140
tggctttgat tcaaaggatg ctctttcgaa cagtgttgca tcttctgtca gtagatgtta 1200
gtactgcaga gatgatgcca gaaaatctta ggaaaaattt aactgaattg cttagagcag 1260
ctttaaaaat tagaatatgc ctagaaaagc agcctgaccc ttttgcacca agacaaaaga 1320
aaacactgca ggaggttcag gaagattttg tgttttcaaa gtatcgtcat agagcccttc 1380
ttttacctga gcttttggaa ggagttcttc agattctgat ctgttgtctt caaagtgcag 1440
cttcaaatcc cttctacttc agtcaagcca tggatttggt tcaagaattc attcagcatc 1500
atggatttaa tttatttgaa acagcagttc ttcaaatgga atggctggtt ttaagagatg 1560
gagttcctcc cgaggcctca gagcatttga aagccctaat aaatagtgtg atgaaaataa 1620
tgagcactgt caaaaaagtg aaatcagagc aacttcatca ttcgatgtgt acaagaaaaa 1680
ggcacagacg atgtgaatat tctcatttta tgcatcatca ccgagatctc tcaggtcttc 1740
tggtttcggc ttttaaaaac caggtttcca aaaacccatt tgaagagact gcagatggag 1800
atgtttatta tcctgagcgg tgctgttgca ttgcagtgtg tgcccatcag tgcttgcgct 1860
tactacagca ggcttccttg agcagcactt gtgtccagat cctatcgggt gttcataaca 1920
ttggaatatg ctgttgtatg gatcccaaat ctgtaatcat tcctttgctc catgctttta 1980
aattgccagc actgaaaaat tttcagcagc atatattgaa tatccttaac aaacttattt 2040
tggatcagtt aggaggagca gagatatcac caaaaattaa aaaagcagct tgtaatattt 2100
gtactgttga ctctgaccaa ctagcccaat tagaagagac actgcaggga aacttatgtg 2160
atgctgaact ctcctcaagt ttatccagtc cttcttacag atttcaaggg atcctgccca 2220
gcagtggatc tgaagatttg ttgtggaaat gggatgcttt aaaggcttat cagaactttg 2280
tttttgaaga agacagatta catagtatac agattgcaaa tcacatttgc aatttaatcc 2340
agaaaggcaa tatagttgtt cagtggaaat tatataatta catatttaat cctgtgctcc 2400
aaagaggagt tgaattagca catcattgtc aacacctaag cgttacttca gctcaaagtc 2460
atgtatgtag ccatcataac cagtgcttgc ctcaggacgt gcttcagatt tatgtaaaaa 2520
ctctgcctat cctgcttaaa tccagggtaa taagagattt gtttttgagt tgtaatggag 2580
taagtcaaat aatcgaatta aattgcttaa atggtattcg aagtcattct ctaaaagcat 2640
ttgaaactct gataatcagc ctaggggagc aacagaaaga tgcctcagtt ccagatattg 2700
atgggataga cattgaacag aaggagttgt cctctgtaca tgtgggtact tcttttcatc 2760
atcagcaagc ttattcagat tctcctcaga gtctcagcaa attttatgct ggcctcaaag 2820
aagcttatcc aaagagacgg aagactgtta accaagatgt tcatatcaac acaataaacc 2880
tattcctctg tgtggctttt ttatgcgtaa gtaaagaagc agagtctgac agggagtcgg 2940
ccaatgactc agaagatact tctggctatg acagcacagc cagcgagcct ttaagtcata 3000
tgctgccatg tatatctctc gagagccttg tcttgccttc tcctgaacat atgcaccaag 3060
cagcagacat ttggtctatg tgtcgttgga tctacatgtt gagttcagtg ttccagaaac 3120
agttttatag gcttggtggt ttccgagtat gccataagtt aatatttatg ataatacaga 3180
aactgttcag aagtcacaaa gaggagcaag gaaaaaagga gggagataca agtgtaaatg 3240
aaaaccagga tttaaacaga atttctcaac ctaagagaac tatgaaggaa gatttattat 3300
ctttggctat aaaaagtgac cccataccat cagaactagg tagtctaaaa aagagtgctg 3360
acagtttagg taaattagag ttacagcata tttcttccat aaatgtggaa gaagtttcag 3420
ctactgaagc cgctcccgag gaagcaaagc tatttacaag tcaagaaagt gagacctcac 3480
ttcaaagtat acgacttttg gaagcccttc tggccatttg tcttcatggt gccagaacta 3540
gtcaacagaa gatggaattg gagttaccta atcagaactt gtctgtggaa agtatattat 3600
ttgaaatgag ggaccatctt tcccagtcaa aggtgattga aacacaacta gcaaagcctt 3660
tatttgatgc cctgcttcga gttgccctcg ggaattattc agcagatttt gaacataatg 3720
atgctatgac tgagaagagt catcaatctg cagaagaatt gtcatcccag cctggtgatt 3780
tttcagaaga agctgaggat tctcagtgtt gtagttttaa acttttagtt gaagaagaag 3840
gttacgaagc agatagtgaa agcaatcctg aagatggcga aacccaggat gatggggtag 3900
acttaaagtc tgaaacagaa ggtttcagtg catcaagcag tccaaatgac ttactcgaaa 3960
acctcactca aggggaaata atttatcctg agatttgtat gctggaatta aatttgcttt 4020
ctgctagtaa agccaaactt gatgtgcttg cccatgtatt tgagagtttt ttgaaaatta 4080
ttaggcagaa agaaaagaat gtttttctgc tcatgcaaca gggaactgtg aaaaatcttt 4140
taggagggtt cttgagtatt ttaacacagg atgattctga ttttcaagca tgccagagag 4200
tattggtgga tcttttggta tctttgatga gttcaagaac atgttcagaa gagctaaccc 4260
ttcttttgag aatatttctg gagaaatctc cttgtacaaa aattcttctt ctgggtattc 4320
tgaaaattat tgaaagtgat actactatga gcccttcaca gtatctaacc ttccctttac 4380
tgcacgctcc aaatttaagc aacggtgttt catcacaaaa gtatcctggg attttaaaca 4440
gtaaggccat gggtttattg agaagagcac gagtttcacg gagcaagaaa gaggctgata 4500
gagagagttt tccccatcgg ctgctttcat cttggcacat agccccagtc cacctgccgt 4560
tgctggggca aaactgctgg ccacacctat cagaaggttt cagtgtttcc ctgtggttta 4620
atgtggagtg tatccatgaa gctgagagta ctacagaaaa aggaaagaag ataaagaaaa 4680
gaaacaaatc attaatttta ccagatagca gttttgatgg tacagagagc gacagaccag 4740
aaggtgcaga gtacataaat cctggtgaaa gactcataga agaaggatgt attcatataa 4800
tttcactggg atccaaagcg ttgatgatcc aagtgtgggc tgatccccac aatgccactc 4860
ttatctttcg tgtgtgcatg gattcaaatg atgacatgaa agctgtttta ctagcacagg 4920
ttgaatcaca ggagaatatt ttcctcccaa gcaaatggca acatttagta ctcacctact 4980
tacagcagcc ccaagggaaa aggaggattc atgggaaaat ctccatatgg gtctctggac 5040
agaggaagcc tgatgttact ttggatttta tgcttccaag aaaaacaagt ttgtcatctg 5100
atagcaataa aacattttgc atgattggcc attgtttatc atcccaagaa gagtttttgc 5160
agttggctgg aaaatgggac ctgggaaatt tgcttctctt caacggagct aaggttggtt 5220
cacaagaggc cttttatctg tatgcttgtg gacccaacca tacatctgta atgccatgta 5280
agtatggcaa gccagtcaat gactactcca aatatattaa taaagaaatt ttgcgatgtg 5340
aacaaatcag agaacttttt atgaccaaga aagatgtgga tattggtctc ttaattgaaa 5400
gtctttcagt tgtttataca acttactgtc ctgctcagta taccatctat gaaccagtga 5460
ttagacttaa aggtcaaatg aaaacccaac tctctcaaag acccttcagc tcaaaagaag 5520
ttcagagcat cttattagaa cctcatcatc taaagaatct ccaacctact gaatataaaa 5580
ctattcaagg cattctgcac gaaattggtg gaactggcat atttgttttt ctctttgcca 5640
gggttgttga actcagtagc tgtgaagaaa ctcaagcatt agcactgcga gttatactct 5700
cattaattaa atacaaccaa caaagagtac atgaattaga aaattgtaat ggactttcta 5760
tgattcatca ggtgttgatc aaacaaaaat gcattgttgg gttttacatt ttgaagaccc 5820
ttcttgaagg atgctgtggt gaagatatta tttatatgaa tgagaatgga gagtttaagt 5880
tggatgtaga ctctaatgct ataatccaag atgttaagct gttagaggaa ctattgcttg 5940
actggaagat atggagtaaa gcagagcaag gtgtttggga aactttgcta gcagctctag 6000
aagtcctcat cagagcagat caccaccagc agatgtttaa tattaagcag ttattgaaag 6060
ctcaagtggt tcatcacttt ctactgactt gtcaggtttt gcaggaatac aaagaggggc 6120
aactcacacc catgccccga gaggtttgta gatcatttgt gaaaattata gcagaagtcc 6180
ttggatctcc tccagatttg gaattattga caattatctt caatttcctt ttagcagttc 6240
accctcctac taatacttac gtttgtcaca atcccacgaa cttctacttt tctttgcaca 6300
tagatggcaa gatctttcag gagaaagtgc ggtcaatcat gtacctgagg cattccagca 6360
gtggaggaag gtcccttatg agccctggat ttatggtaat aagcccatct ggttttactg 6420
cttcaccata tgaaggagag aattcctcta atattattcc acaacagatg gccgcccata 6480
tgctgcgttc tagaagccta ccagcattcc ctacttcttc actactaacg caatcacaaa 6540
aactgactgg aagtttgggt tgtagtatcg acaggttaca aaatattgca gatacttatg 6600
ttgccaccca atcaaagaaa caaaattctt tggggagttc cgacacactg aaaaaaggca 6660
aagaggacgc attcatcagt agctgtgagt ctgcaaaaac tgtttgtgaa atggaagctg 6720
tcctctcagc ccaggtctct gtcagtgatg tcccaaaggg agtgctggga tttccagtgg 6780
tcaaagcaga tcataaacag ttgggagcag aacccaggtc agaagatgac agtcctgggg 6840
atgagtcctg cccacgccga cctgattacc taaagggatt ggcctccttc cagcgaagcc 6900
acagcactat tgcaagcctt gggctagctt ttccttcaca gaacggatct gcagctgttg 6960
gccgttggcc aagtcttgtt gatagaaaca ctgatgattg ggaaaacttt gcctattctc 7020
ttggttatga gccaaattac aaccgaactg caagtgctca cagtgtaact gaagactgtt 7080
tggtacctat atgctgtgga ttatatgaac tcctaagtgg ggttcttctt atcctgcctg 7140
atgttttgct tgaagatgtg atggacaagc ttattcaagc agatacactt ttggtcctcg 7200
ttaaccaccc atcaccagct atacaacaag gtgttattaa actattagat gcatattttg 7260
ctagagcatc taaggaacaa aaagataaat ttctgaagaa tcgtggattt tccttgctag 7320
ccaaccagtt gtatcttcat cgaggaactc aagaattgtt agaatgcttc atcgaaatgt 7380
tctttggtcg acatattggc cttgatgaag aatttgatct ggaagatgtg agaaacatgg 7440
gattgtttca gaagtggtct gtcattccta ttctgggact aatagagacc tctctatatg 7500
acaacatact cttgcataat gctcttttac ttcttctcca aattttaaat tcttgttcta 7560
aggtagcaga tatgttgctg gataatggtc tactctatgt gttatgtaat acagtagcag 7620
ccctgaatgg attagaaaag aacattccca tgagtgaata taaattgctt gcttgtgata 7680
tacagcaact tttcatagca gttacaattc atgcttgcag ttcctcaggc tcacaatatt 7740
ttagggttat tgaagacctt attgtaatgc ttggatatct tcaaaatagc aaaaacaaga 7800
ggacacaaaa tatggctgtt gcactacagc ttagagttct ccaggctgct atggaattta 7860
taaggaccac cgcaaatcat gactctgaaa acctcacaga ttcactccag tcaccttctg 7920
ctccccatca tgcagtagtt caaaagcgga aaagcattgc tggtcctcga aaatttcccc 7980
ttgctcaaac tgaatcgctt ctgatgaaaa tgcgttcagt ggcaaatgat gagcttcatg 8040
tgatgatgca acggagaatg agccaagaga accctagcca agcaactgaa acggaacttg 8100
cgcagagact acagaggctc actgttttag cagtcaacag gattatttat caagaattta 8160
attcagacat tattgacatt ttgagaactc cagaaaatgt aactcaaagc aagacctcag 8220
ttttccagac cgaaatttct gaggaaaata ttcatcatga acagtcttct gttttcaatc 8280
catttcagaa agaaattttt acatatctgg tagaaggatt caaagtatct attggttcaa 8340
gtaaagccag tggttccaag cagcaatgga ctaaaattct gtggtcttgt aaggagacct 8400
tccgaatgca gcttgggaga ctactagtgc atattttgtc gccagcccac gctgcacaag 8460
agagaaagca aatttttgaa atagttcatg aaccaaatca tcaggaaata ctacgagact 8520
gtctcagccc atccctacaa catggagcca agttagtttt gtatttgtca gagttgatac 8580
ataatcacca aggtgaattg actgaagaag agctaggcac agcagaactg cttatgaatg 8640
ctttgaagtt atgtggtcac aagtgcatcc ctcccagtgc atcaacaaaa gcagacctta 8700
ttaaaatgat caaagaggaa caaaagaaat atgaaactga agaaggagtg aataaagctg 8760
cttggcagaa aacagttaac aataatcaac aaagtctctt tcagcgtctg gattcaaaat 8820
caaaggatat atctaaaata gctgcagata tcacccaggc agtgtctctc tcccaaggaa 8880
atgagagaaa aaaggtgatc cagcatatta gaggaatgta taaagtagat ttgagtgcca 8940
gcagacattg gcaggaactt attcagcagc tgacacatga tagagcagta tggtatgacc 9000
ccatctacta tccaacctca tggcagttgg atccaacaga agggccaaat cgagagagga 9060
gacgtttaca gagatgttat ttaactattc caaataagta tctccttagg gatagacaga 9120
aatcagaaga tgttgtcaaa ccaccactct cttacctgtt tgaagacaaa actcattctt 9180
ctttctcttc tactgtcaaa gacaaagctg caagtgaatc tataagagtg aatcgaagat 9240
gcatcagtgt tgcaccatct agagagacag ctggtgaatt gttactaggt aaatgtggaa 9300
tgtattttgt ggaagataat gcttctgata cagttgaaag ttcgagcctt cagggagagt 9360
tggaaccagc atcattttcc tggacatatg aagaaattaa agaagttcac aagcgttggt 9420
ggcaattgag agataatgct gtagaaatct ttctaacaaa tggcagaaca ctcctgttgg 9480
catttgataa caccaaggtt cgtgatgatg tataccacaa tatactcaca aataacctcc 9540
ctaatcttct ggaatatggt aacatcaccg ctctgacaaa tttatggtat actgggcaaa 9600
ttactaattt tgaatatttg actcacttaa acaaacatgc tggccgatcc ttcaatgatc 9660
tcatgcagta tcctgtgttc ccatttatac ttgctgacta cgttagtgag acacttgacc 9720
tcaatgatct gttgatatac agaaatctct ctaaacctat agctgttcag tataaagaaa 9780
aagaagatcg ttatgtggac acatacaagt acttggagga agagtaccgc aaaggagcca 9840
gagaagatga ccccatgcct cccgtgcagc cctatcacta tggctcccac tattccaata 9900
gcggcactgt gcttcacttc ctggtcagga tgcctccttt cactaaaatg tttttagcct 9960
atcaagatca aagttttgac attccagaca gaacttttca ttctacaaat acaacttggc 10020
gactctcatc ttttgaatct atgactgatg tgaaagaact tatcccagag tttttctatc 10080
ttccagagtt cctagttaac cgtgaaggtt ttgattttgg tgtgcgtcag aatggtgaac 10140
gggttaatca cgtcaacctt cccccttggg cgcgtaatga tcctcgtctt tttatcctca 10200
tccatcggca ggctctagag tctgactacg tgtcgcagaa catctgtcag tggattgact 10260
tggtgtttgg gtataagcaa aaggggaagg cttctgttca agcgatcaat gtttttcatc 10320
ctgctacata ttttggaatg gatgtctctg cagttgaaga tccagttcag agacgagcgc 10380
tagaaaccat gataaaaacc tacgggcaga ctccccgtca gctgttccac atggcccatg 10440
tgagcagacc tggagccaag ctcaatattg aaggagagct tccagctgct gtggggttgc 10500
tagtgcagtt tgctttcagg gagacccgag aacaggtcaa agaaatcacc tatccgagtc 10560
ctttgtcatg gataaaaggc ttgaaatggg gggaatacgt gggttccccc agtgctccag 10620
tacctgtggt ctgcttcagc cagccccacg gagaaagatt tggctctctc caggctctgc 10680
ccaccagagc aatctgtggt ttgtcacgga atttctgtct tctgatgaca tatagcaagg 10740
aacaaggtgt gagaagcatg aacagtacgg acattcagtg gtcagccatc ctgagctggg 10800
gatatgctga taatatttta aggttgaaga gtaaacaaag tgagcctcca gtaaacttta 10860
ttcaaagttc acaacagtac caggtgacta gttgtgcttg ggtgcctgac agttgccagc 10920
tgtttactgg aagcaaatgc ggtgtcatca cagcctacac aaacagattt acaagcagca 10980
cgccatcaga aatagaaatg gagactcaaa tacatctcta tggtcacaca gaagagataa 11040
ccagcttatt tgtttgcaaa ccatacagta tactgataag tgtgagcaga gacggaacct 11100
gcatcatatg ggatttaaac aggttatgct atgtacaaag tctggcggga cacaaaagcc 11160
ctgtcacagc tgtctctgcc agtgaaacct caggtgatat tgctactgtg tgtgattcag 11220
ctggcggagg cagtgacctc agactctgga cggtgaacgg ggatctcgtt ggacatgtcc 11280
actgcaggga gatcatctgt tccgtggctt tctccaacca gcctgaggga gtatctatca 11340
atgtaatcgc tgggggatta gaaaatggaa ttgtaaggtt atggagcaca tgggacttaa 11400
agcctgtgag agaaattaca tttcccaaat caaataagcc catcatcagc cttacatttt 11460
cttgtgatgg ccaccatttg tacacagcaa acagtgatgg gaccgtgatt gcctggtgtc 11520
ggaaggacca gcagcgcttg aaacagccaa tgttctattc cttccttagc agctatgcag 11580
ccgggtgaat gcgaatgaac ttcacgttct ccaaagcact ttaactccaa actagatttg 11640
ttgacttcac cagttttagg aggttgaacc taaagaaatg gatgactgga caaaccatcc 11700
aaataatgat aaagtctatt catctgcaca aaattctgaa gagtcacatg atcctaagag 11760
gaaagttctg ttctatttta gtgataatct ggaagattgt gtcaatatgc actagccaac 11820
aagttttaag cctcgcatgg tacattaaaa tgatattctt aaaatttttt cccaccaagg 11880
tattccaaag aaaatattaa ggtctcccct ttttctatga ttccaaaagg accagtagaa 11940
tttaaattgg ttggttgatt gtttatataa aacacactaa aattatattt taaaagttta 12000
ctgccatgaa atactcctcc caccacacac acatgctcca aaagaggaaa gaaaaaaaga 12060
taatttttag gacttgataa ttgctttctt tgagaagcaa attattcagt aggtgcctct 12120
gtaccaaata ttttatggaa tatctaaata ctaaaataaa ctatgaatga atctcaaaat 12180
taggcagttt ttgccagttg ctttcttagc tcaaaggaga accagaattt ttttgacagc 12240
cacaaacaag aatacaggta tcttggattt cagacacatt ctgtttcttc ataaaaattt 12300
tacttaaaat ctgtaacgct agatattgac tatccttagt tgagtcactg aggtttaaac 12360
acaatggtaa gtcttaaagt ctgctattta cagagcattg aatctgtacc aatttgcaat 12420
agaaagcctt cagtatgcaa gaagtttgca tgggtattaa gaacacagcc taaataaggc 12480
atttgatcta atctgcagga agaattttct tccccaaaac agaattataa aagcttactt 12540
taaacaggag gcagaataat tcttttagga aaccatttca ttctgtttct actaacctat 12600
accatctgag aattctagga agaataataa aatctcgtgt attccacagc aaacttacat 12660
accataaaga cagaattcct aaacatcttg gagccgtctg tctctcccat atgatggctg 12720
tctgtatatt tttacttggg gtgctgcttt attggctttg aaaacactgt cagataagct 12780
cagtaatatg ttaccatggg ataaaaatat gtatccctgc ctaagaataa cttgtgcatt 12840
tgttatggaa atttaattca tatggtgttt acagtactac ttttgtaact tccagacttt 12900
ctaaaacatt ctgcttaaaa accatataaa atataattcc aaagtctctg ctgtcaagat 12960
agattcgaga gaaagcacgt ggccatgtat gctttaacct taaactgcat acacatgtag 13020
tgatacctag gctgcattta gatcaccgtg tgctcaggcc aggtgtgaat cctgaggtcc 13080
atggaggtgc agagatgaga ttactcctat tcacgttgaa gtgatttgct ttgttaacaa 13140
aaaattgcag ctattgtcta gctttcattt ttttactgag aactttaaat tagtccccta 13200
ttagaatagg gttgctactc atcttttttt aaaaaccgaa tttcatcatt tatctaaaga 13260
gaaaatatgc agaataactg gtcttgttaa gagtgcaata ttatattttt atgtaaaaat 13320
aaaaattaat ttggggggat tatttattca gcatgaaacc taatatgtat atgtttgaaa 13380
tacttcataa tgtgcatgtt gtagcaaaca tttctgtaaa ttatcacaag ctctgttacc 13440
tttatataca ctgcctcttc aatttggaaa taaatttcat aaaaatagat gtaaacaaaa 13500
aaa 13503
<210> 2
<211> 3801
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Met Ser Thr Asp Ser Asn Ser Leu Ala Arg Glu Phe Leu Thr Asp Val
1 5 10 15
Asn Arg Leu Cys Asn Ala Val Val Gln Arg Val Glu Ala Arg Glu Glu
20 25 30
Glu Glu Glu Glu Thr His Met Ala Thr Leu Gly Gln Tyr Leu Val His
35 40 45
Gly Arg Gly Phe Leu Leu Leu Thr Lys Leu Asn Ser Ile Ile Asp Gln
50 55 60
Ala Leu Thr Cys Arg Glu Glu Leu Leu Thr Leu Leu Leu Ser Leu Leu
65 70 75 80
Pro Leu Val Trp Lys Ile Pro Val Gln Glu Glu Lys Ala Thr Asp Phe
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Asn Leu Pro Leu Ser Ala Asp Ile Ile Leu Thr Lys Glu Lys Asn Ser
100 105 110
Ser Ser Gln Arg Ser Thr Gln Glu Lys Leu His Leu Glu Gly Ser Ala
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Leu Ser Ser Gln Val Ser Ala Lys Val Asn Val Phe Arg Lys Ser Arg
130 135 140
Arg Gln Arg Lys Ile Thr His Arg Tyr Ser Val Arg Asp Ala Arg Lys
145 150 155 160
Thr Gln Leu Ser Thr Ser Asp Ser Glu Ala Asn Ser Asp Glu Lys Gly
165 170 175
Ile Ala Met Asn Lys His Arg Arg Pro His Leu Leu His His Phe Leu
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Thr Ser Phe Pro Lys Gln Asp His Pro Lys Ala Lys Leu Asp Arg Leu
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210 215 220
Arg Glu Ile Ile Pro Arg Gln Gly Ser Asn Thr Asp Ile Leu Ser Glu
225 230 235 240
Pro Ala Ala Leu Ser Val Ile Ser Asn Met Asn Asn Ser Pro Phe Asp
245 250 255
Leu Cys His Val Leu Leu Ser Leu Leu Glu Lys Val Cys Lys Phe Asp
260 265 270
Val Thr Leu Asn His Asn Ser Pro Leu Ala Ala Ser Val Val Pro Thr
275 280 285
Leu Thr Glu Phe Leu Ala Gly Phe Gly Asp Cys Cys Ser Leu Ser Asp
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Asn Leu Glu Ser Arg Val Val Ser Ala Gly Trp Thr Glu Glu Pro Val
305 310 315 320
Ala Leu Ile Gln Arg Met Leu Phe Arg Thr Val Leu His Leu Leu Ser
325 330 335
Val Asp Val Ser Thr Ala Glu Met Met Pro Glu Asn Leu Arg Lys Asn
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Leu Thr Glu Leu Leu Arg Ala Ala Leu Lys Ile Arg Ile Cys Leu Glu
355 360 365
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Val Gln Glu Asp Phe Val Phe Ser Lys Tyr Arg His Arg Ala Leu Leu
385 390 395 400
Leu Pro Glu Leu Leu Glu Gly Val Leu Gln Ile Leu Ile Cys Cys Leu
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420 425 430
Val Gln Glu Phe Ile Gln His His Gly Phe Asn Leu Phe Glu Thr Ala
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Val Leu Gln Met Glu Trp Leu Val Leu Arg Asp Gly Val Pro Pro Glu
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Ala Ser Glu His Leu Lys Ala Leu Ile Asn Ser Val Met Lys Ile Met
465 470 475 480
Ser Thr Val Lys Lys Val Lys Ser Glu Gln Leu His His Ser Met Cys
485 490 495
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500 505 510
His Arg Asp Leu Ser Gly Leu Leu Val Ser Ala Phe Lys Asn Gln Val
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Ser Lys Asn Pro Phe Glu Glu Thr Ala Asp Gly Asp Val Tyr Tyr Pro
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Glu Arg Cys Cys Cys Ile Ala Val Cys Ala His Gln Cys Leu Arg Leu
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Ile Pro Leu Leu His Ala Phe Lys Leu Pro Ala Leu Lys Asn Phe Gln
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Gly Ala Glu Ile Ser Pro Lys Ile Lys Lys Ala Ala Cys Asn Ile Cys
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Thr Val Asp Ser Asp Gln Leu Ala Gln Leu Glu Glu Thr Leu Gln Gly
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Asn Leu Cys Asp Ala Glu Leu Ser Ser Ser Leu Ser Ser Pro Ser Tyr
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Ser Leu Lys Lys Ser Ala Asp Ser Leu Gly Lys Leu Glu Leu Gln
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Thr Gln Asp Asp Gly Val Asp Leu Lys Ser Glu Thr Glu Gly Phe
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Ser Ala Ser Ser Ser Pro Asn Asp Leu Leu Glu Asn Leu Thr Gln
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Leu Leu Met Gln Gln Gly Thr Val Lys Asn Leu Leu Gly Gly Phe
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Leu Ser Ile Leu Thr Gln Asp Asp Ser Asp Phe Gln Ala Cys Gln
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Ser Gln Glu Glu Phe Leu Gln Leu Ala Gly Lys Trp Asp Leu Gly
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Asn Leu Leu Leu Phe Asn Gly Ala Lys Val Gly Ser Gln Glu Ala
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Val Tyr Thr Thr Tyr Cys Pro Ala Gln Tyr Thr Ile Tyr Glu Pro
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Ile Leu His Glu Ile Gly Gly Thr Gly Ile Phe Val Phe Leu Phe
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Ala Arg Val Val Glu Leu Ser Ser Cys Glu Glu Thr Gln Ala Leu
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Ala Leu Arg Val Ile Leu Ser Leu Ile Lys Tyr Asn Gln Gln Arg
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Val His Glu Leu Glu Asn Cys Asn Gly Leu Ser Met Ile His Gln
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Val Leu Ile Lys Gln Lys Cys Ile Val Gly Phe Tyr Ile Leu Lys
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Leu Glu Val Leu Ile Arg Ala Asp His His Gln Gln Met Phe Asn
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Ile Lys Gln Leu Leu Lys Ala Gln Val Val His His Phe Leu Leu
1955 1960 1965
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1985 1990 1995
Val Leu Gly Ser Pro Pro Asp Leu Glu Leu Leu Thr Ile Ile Phe
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His Asn Pro Thr Asn Phe Tyr Phe Ser Leu His Ile Asp Gly Lys
2030 2035 2040
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2045 2050 2055
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2060 2065 2070
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Ser Asn Ile Ile Pro Gln Gln Met Ala Ala His Met Leu Arg Ser
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3455 3460 3465
Trp Gly Glu Tyr Val Gly Ser Pro Ser Ala Pro Val Pro Val Val
3470 3475 3480
Cys Phe Ser Gln Pro His Gly Glu Arg Phe Gly Ser Leu Gln Ala
3485 3490 3495
Leu Pro Thr Arg Ala Ile Cys Gly Leu Ser Arg Asn Phe Cys Leu
3500 3505 3510
Leu Met Thr Tyr Ser Lys Glu Gln Gly Val Arg Ser Met Asn Ser
3515 3520 3525
Thr Asp Ile Gln Trp Ser Ala Ile Leu Ser Trp Gly Tyr Ala Asp
3530 3535 3540
Asn Ile Leu Arg Leu Lys Ser Lys Gln Ser Glu Pro Pro Val Asn
3545 3550 3555
Phe Ile Gln Ser Ser Gln Gln Tyr Gln Val Thr Ser Cys Ala Trp
3560 3565 3570
Val Pro Asp Ser Cys Gln Leu Phe Thr Gly Ser Lys Cys Gly Val
3575 3580 3585
Ile Thr Ala Tyr Thr Asn Arg Phe Thr Ser Ser Thr Pro Ser Glu
3590 3595 3600
Ile Glu Met Glu Thr Gln Ile His Leu Tyr Gly His Thr Glu Glu
3605 3610 3615
Ile Thr Ser Leu Phe Val Cys Lys Pro Tyr Ser Ile Leu Ile Ser
3620 3625 3630
Val Ser Arg Asp Gly Thr Cys Ile Ile Trp Asp Leu Asn Arg Leu
3635 3640 3645
Cys Tyr Val Gln Ser Leu Ala Gly His Lys Ser Pro Val Thr Ala
3650 3655 3660
Val Ser Ala Ser Glu Thr Ser Gly Asp Ile Ala Thr Val Cys Asp
3665 3670 3675
Ser Ala Gly Gly Gly Ser Asp Leu Arg Leu Trp Thr Val Asn Gly
3680 3685 3690
Asp Leu Val Gly His Val His Cys Arg Glu Ile Ile Cys Ser Val
3695 3700 3705
Ala Phe Ser Asn Gln Pro Glu Gly Val Ser Ile Asn Val Ile Ala
3710 3715 3720
Gly Gly Leu Glu Asn Gly Ile Val Arg Leu Trp Ser Thr Trp Asp
3725 3730 3735
Leu Lys Pro Val Arg Glu Ile Thr Phe Pro Lys Ser Asn Lys Pro
3740 3745 3750
Ile Ile Ser Leu Thr Phe Ser Cys Asp Gly His His Leu Tyr Thr
3755 3760 3765
Ala Asn Ser Asp Gly Thr Val Ile Ala Trp Cys Arg Lys Asp Gln
3770 3775 3780
Gln Arg Leu Lys Gln Pro Met Phe Tyr Ser Phe Leu Ser Ser Tyr
3785 3790 3795
Ala Ala Gly
3800

Claims (33)

1.一种医药组合物在制备用于减少或预防个体的疤痕形成或狭窄的药物中的应用，所述医药组合物包含：
a)一种或多种溶酶体运输调节剂LYST的抑制剂，其量在个体中有效减少巨噬细胞浸润或减少或预防自然杀伤细胞活化和/或血小板活化，和
b)生理学上可接受的载剂；其中所述一种或多种LYST抑制剂为抗体或具有LYST抗体的至少一个抗原结合可变域的抗体片段而且所述一种或多种LYST抑制剂的量不妨碍所述个体的血管新组织形成，
其中所述医药组合物呈剂量调配物形式，递送一种或多种量在每千克人类体重0.1mg与1000mg之间的LYST抑制剂。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述医药组合物的剂量有效减少巨噬细胞浸润。
3.根据权利要求1所述的应用，其中所述医药组合物的剂量有效减少或预防血小板活化。
4.根据权利要求1所述的应用，其中所述医药组合物进一步包含选自由以下组成的群组的递送媒剂：纳米粒子、微米粒子、胶束、乳液、合成脂蛋白粒子、脂质体、碳纳米管、凝胶和包衣。
5.根据权利要求1所述的应用，其中所述医药组合物进一步包含一种或多种选自由以下组成的群组的其他治疗剂：抗新内膜剂、甾体和非甾体消炎剂、常规免疫治疗剂、免疫抑制剂和细胞因子。
6.根据权利要求1所述的应用，其中所述医药组合物进一步包含一种或多种化学治疗剂。
7.根据权利要求1所述的应用，其中所述医药组合物进一步包含一种或多种趋化因子和生长因子。
8.一种血管移植物或医疗装置，其包含一种组合物，所述组合物包含：
a)一种或多种溶酶体运输调节剂LYST的抑制剂，其量在个体中有效减少巨噬细胞浸润或减少或预防自然杀伤细胞活化和/或血小板活化，和
b)生理学上可接受的载剂；其中所述一种或多种LYST抑制剂为抗体或具有LYST抗体的至少一个抗原结合可变域的抗体片段而且所述一种或多种LYST抑制剂的量不妨碍所述个体的血管新组织形成，
其中在疤痕形成或狭窄前向所述个体施用有效量的所述组合物。
9.根据权利要求8所述的血管移植物或医疗装置，其中所述组合物涂布在所述血管移植物或医疗装置上或结合到所述血管移植物或医疗装置中。
10.根据权利要求8所述的血管移植物或医疗装置，其中所述医疗装置是植入物。
11.根据权利要求10所述的血管移植物或医疗装置，其中所述植入物选自由以下组成的群组：支架、针、插管、导管、分流器、气囊和瓣膜。
12.根据权利要求10所述的血管移植物或医疗装置，其中所述医疗装置为支架。
13.根据权利要求12所述的血管移植物或医疗装置，其中所述支架为洗脱所述组合物的药物洗脱支架。
14.根据权利要求8所述的血管移植物或医疗装置，其中所述血管移植物为自体、同种异体、异种或合成移植物。
15.根据权利要求14所述的血管移植物或医疗装置，其中所述血管移植物为保藏自体移植物。
16.根据权利要求1所述的应用，其中所述药物任选地与一种或多种的其他治疗剂组合投与到有需要的个体中以减少疤痕形成，其中所述一种或多种的其他治疗剂选自由以下组成的群组：抗新内膜剂、甾体和非甾体消炎剂、常规免疫治疗剂、免疫抑制剂和细胞因子。
17.根据权利要求1所述的应用，其中所述药物任选地与一种或多种的化学治疗剂组合投与到有需要的个体中以减少疤痕形成。
18.根据权利要求1所述的应用，其中所述药物任选地与一种或多种的趋化因子或生长因子组合投与到有需要的个体中以减少疤痕形成。
19.有效量的根据权利要求1所述的医药组合物在制备用于在个体中减少巨噬细胞浸润、或减少或预防自然杀伤细胞活化和/或血小板活化的药物的应用，其中所述药物任选地与根据权利要求5-7中任一项所述的治疗剂中的任一种组合投与到有需要的个体中以预防心肌梗塞。
20.有效量的根据权利要求1所述的医药组合物在制备用于在个体中减少巨噬细胞浸润、减少或预防自然杀伤细胞活化和/或血小板活化的药物的应用，其中所述药物任选地与根据权利要求5-7中任一项所述的治疗剂中的任一种组合投与到有需要的个体中以减少肝纤维化。
21.有效量的根据权利要求1所述的医药组合物在制备用于在个体中减少巨噬细胞浸润、减少或预防自然杀伤细胞活化和/或血小板活化的药物的应用，其中所述药物任选地与根据权利要求5-7中任一项所述的治疗剂中的任一种组合投与到有需要的个体中以减少瘢痕瘤或粘连。
22.有效量的根据权利要求1所述的医药组合物在制备用于在个体中减少或预防血小板活化和动脉或静脉血栓形成的药物的应用。
23.根据权利要求16或19所述的应用，其中所述个体处于再狭窄或其他血管增殖病症的风险中或患有再狭窄或其他血管增殖病症。
24.根据权利要求16或19所述的应用，其中所述个体已经历、正在经历或将经历血管创伤、血管成形术、血管手术或移植动脉病。
25.根据权利要求16到22中任一项所述的应用，其中所述医药组合物或权利要求8到14中任一项所述的血管移植物或医疗装置用于相对于未经治疗的对照个体在个体中减少或预防疤痕组织的形成；促进愈合；减少或预防肥大性疤痕、瘢痕瘤或粘连的发展；减少或预防肝纤维化、肺纤维化、心纤维化或肾纤维化；减少或预防新内膜形成、狭窄或再狭窄；减少或预防血栓形成；或其任何组合。
26.根据权利要求16所述的应用，其中减少或预防疤痕组织的形成促进一种或多种生物假体装置的整合但阻止其囊封，所述生物假体装置为：起搏器、神经刺激器、替换心脏瓣膜和人工关节。
27.根据权利要求16所述的应用，其中减少或预防疤痕组织的形成相对于未经治疗的对照个体有效在个体中治疗或预防在血管植入物的植入部位、血管损伤部位或手术部位处形成新内膜。
28.根据权利要求16到22中任一项所述的应用，其中所述医药组合物或装置用于相对于未经治疗的对照个体在个体中减少或预防血小板衍生生长因子、转化生长因子β或其任何组合的表达。
29.根据权利要求1到5中任一项所述的医药组合物在制备用于减少血管移植物的狭窄或再狭窄的药物的应用，其中所述药物用于在将所述移植物植入到个体中之前离体处理所述移植物。
30.一种组合物，其用于减少或预防个体的疤痕形成或狭窄的方法，所述组合物包含：
a)一种或多种溶酶体运输调节剂LYST的抑制剂，其量在个体中有效减少巨噬细胞浸润、或减少或预防自然杀伤细胞活化和/或血小板活化，和
b)生理学上可接受的载剂，
其中所述一种或多种LYST抑制剂的量允许受试者中的正常创伤愈合；
其中所述组合物呈剂量调配物形式，递送一种或多种量在每千克人类体重0.1mg与1000mg之间的LYST抑制剂；其中一种或多种LYST抑制剂为抗体或具有LYST抗体的至少一个抗原结合可变域的抗体片段。
31.根据权利要求30所述的组合物，其剂量有效减少巨噬细胞浸润。
32.根据权利要求30所述的组合物，其剂量有效减少或预防血小板活化。
33.根据权利要求30到32中任一项所述的组合物，其进一步包含选自由以下组成的群组的递送媒剂：纳米粒子、微米粒子、胶束、乳液、合成脂蛋白粒子、脂质体、碳纳米管、凝胶或包衣。
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