[go: up one dir, main page]

CN106048736A - 一种固相合成dna编码化合物库的方法 - Google Patents

一种固相合成dna编码化合物库的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106048736A
CN106048736A CN201610229301.0A CN201610229301A CN106048736A CN 106048736 A CN106048736 A CN 106048736A CN 201610229301 A CN201610229301 A CN 201610229301A CN 106048736 A CN106048736 A CN 106048736A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
reaction
solid
solvent
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610229301.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106048736B (zh
Inventor
李进
万金桥
刘观赛
钟丽娜
陈仰
王志
刘欣城
穆云
窦登峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chengdu Lead Drug Development Corp Ltd
Original Assignee
Chengdu Lead Drug Development Corp Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chengdu Lead Drug Development Corp Ltd filed Critical Chengdu Lead Drug Development Corp Ltd
Publication of CN106048736A publication Critical patent/CN106048736A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106048736B publication Critical patent/CN106048736B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
    • C40B40/06—Libraries containing nucleotides or polynucleotides, or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C12N15/1068—Template (nucleic acid) mediated chemical library synthesis, e.g. chemical and enzymatical DNA-templated organic molecule synthesis, libraries prepared by non ribosomal polypeptide synthesis [NRPS], DNA/RNA-polymerase mediated polypeptide synthesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B20/00—Methods specially adapted for identifying library members
    • C40B20/04—Identifying library members by means of a tag, label, or other readable or detectable entity associated with the library members, e.g. decoding processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
    • C40B50/04—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis using dynamic combinatorial chemistry techniques
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
    • C40B50/14—Solid phase synthesis, i.e. wherein one or more library building blocks are bound to a solid support during library creation; Particular methods of cleavage from the solid support
    • C40B50/16—Solid phase synthesis, i.e. wherein one or more library building blocks are bound to a solid support during library creation; Particular methods of cleavage from the solid support involving encoding steps
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B70/00—Tags or labels specially adapted for combinatorial chemistry or libraries, e.g. fluorescent tags or bar codes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Structural Engineering (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种固相合成DNA编码化合物库的方法，它包括以下步骤：a、固相载体G‑1与连接分子L‑1反应，制备L‑G‑1；b、DNA与连接分子L‑0反应，制备L‑2；c、L‑G‑1与L‑2反应，制备L‑G‑2；d、L‑G‑2脱去保护基团，得到L‑G‑2‑1；e、与合成砌块反应，DNA编码；f、切除固相载体，得到DNA编码的化合物库。与现有方法相比，本发明方法只需要通过简单的几次过滤洗涤操作即可完成反应的后处理纯化，操作简便，使得合成DNA编码化合物库的生产周期缩短了50％以上，显著提高了DNA编码化合物库的生产效率与唯一性以及最终产物的纯度，经济价值高，非常适合产业上的应用。

Description

一种固相合成DNA编码化合物库的方法
技术领域
本发明涉及一种固相合成DNA编码化合物库的方法。
背景技术
在药物研发，尤其是新药研发中，针对生物靶标的高通量筛选是快速获得先导化合物的主要手段之一。然而，基于单个分子的传统高通量筛选所需时间长、设备投入巨大、库化合物数量有限(数百万)，且化合物库的建成需要数十年的积累，限制了先导化合物的发现效率与可能性。近年来出现的DNA编码化合物库合成技术，结合了组合化学和分子生物学技术，在分子水平上将每个化合物加上一个DNA标签，能在极短的时间内合成高达亿级的化合物库。而且化合物能够通过基因测序的方法进行识别，大幅度地增加了化合物库的大小和合成效率，成为下一代化合物库筛选技术的趋势，并开始在国外制药行业广泛应用，产生了诸多积极的效果(Accounts of Chemical Research,2014,47,1247-1255)。
由于在DNA编码的化合物库中的每个化合物分子都含有一个独特、给定的DNA序列，化合物库的筛选过程是可以将千万甚至上亿的DNA编码化合物库作为一个整体，溶解在几十个微升的体积中，使用常规实验室的条件完成对生物靶标的高通量筛选。相比传统的高通量化合物筛选，无需使用昂贵的筛选设备和复杂的化合物库管理系统，极大地节约了设备投入和筛选成本。
1993年，Brenner等人受到遗传基因DNA标志(genetic DNA tag)的启发，利用微珠编码(encoding of beads)技术，让每个微珠只黏附一种化合物，在合成的进程中将其“过程”编码到微珠上，通过读取微珠上的编码以确定粘附在微珠上的化合物。这种固相条件下的“DNA编码组合化学合成方法”发表在美国化学会志上(J.Am.Chem.Soc.1993,115,9812-9813)。Brenner发表的方法局限于多肽库的合成，不能满足现代化药所需的多样小分子化合物库的合成。
Pehr B.Harbury等人随后也发展了一种固相条件下DNA编码化合物库的合成方法，并用于多肽的合成(PloS Biology 2004,2,1031-1038)。但其固相材料使用的是阴离子交换树脂DEAE琼脂糖凝胶。固相载体与DNA之间的作用力主要来源于离子相互作用。它在高浓度的盐体系里或其他影响离子相互作用的体系里很难稳定存在，这极大的限制了其在小分子化合物库的合成中的应用。
申请号：201210555548.3，发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”的专利申请公开了一种DNA编码化合物库的合成及编码技术：首先将DNA单链的始端序列的一端连接在合成砌块上，另一端与合成砌块的特异性标记序列串联连接，得到标记有一端游离的单链DNA的初始合成砌块；其次以得到的初始合成砌块为基础，用线性组合反应的方式合成化合物。合成过程中，每加入新的合成砌块，就在与初始合成砌块相连的单链DNA游离端串联连接所加入的合成砌块的特异性标记序列，使所述单链DNA逐渐延长；最后在合成结束后，在所述单链DNA游离端串联连接末端序列，得到单链DNA标记的化合物文库。该发明可以快速有效地合成并通过筛选、测序得到目的先导化合物。
虽然现有的DNA编码化合物库的合成及编码技术能很好的应用于先导药物的筛选，但是其也存在一些不足和局限：1)在很大程度上，用于编码的DNA适用于水相(或含与水互溶的有机溶剂的水相)反应，反应分子在纯有机溶剂中溶解度差，无法用于对水敏感的纯有机相化学反应，限制了可用于DNA编码化合物库的合成反应类型，降低了DNA编码化合物库的合成化学反应的速率。2)为促使合成反应各步接近完全转化，DNA编码化合物库的合成往往使用大大过量的小分子反应试剂，这些试剂很难从基于水相的DNA编码化合物库合成体系中完全分离出来。3)基于液相反应的化合物DNA库在库合成过程中，为了达到DNA化合物库的纯度要求，DNA库合成反应后的分离纯化步骤繁多且周期长。
目前，现有固相条件下的“DNA编码组合化学合成方法”局限于多肽合成，适用的化学反应类型比较有限。同时，固相载体与DNA之间的作用力主要来源于离子相互作用，它在高浓度的盐体系里或其他影响离子相互作用的体系里很难稳定存在，也极大地限制了其在小分子化合物库的合成中的应用。
因此，需要寻找一种步骤简便、成本低、周期短并适合有机溶剂体系的固相合成DNA编码化合物库的方法。
发明内容
为了解决上述问题，进一步优化DNA编码化合物库的合成及纯化方法，增加DNA编码化合物库的化学小分子结构的多样性，扩大其在新药筛选中的应用范围，本发明公开了一种固相合成DNA编码化合物库的方法。
名词解释：
合成砌块(Synthetic Building Block)，又叫合成子，是指具备各种理化性质以及特定生物化学性质的、在新药(西药、农药)研发过程中必须使用的小分子化合物。
固相载体：是指固相反应中用于负载的固相物质。
连接分子：也称为结合分子，是指将DNA、小分子化合物库和固相载体连接在一起的具有某种特定官能团的化合物。
CPG(Controlled Pore Glass)微孔玻璃小球，二氧化硅材质。CPG球体内部有很多不规则的孔道，孔隙网络庞大，孔道的大小称为孔径，孔径稳定。
本发明提供的一种固相合成DNA编码化合物库的方法，它包括以下步骤：
a、固相载体G-1与连接分子L-1反应，分离、纯化，得到L-G-1；
b、DNA与连接分子L-0反应，分离、纯化，得到L-2；
c、L-G-1与L-2反应，分离、纯化，得到L-G-2；
d、L-G-2脱去保护基团，得到L-G-2-1；
e、采用方法1、方法2、方法3、方法4或者其任意的组合：
方法1：
L-G-2-1与R1反应，分离、纯化，得到L-G-2-1-1；对L-G-2-1-1进行DNA编码，得到L-G-3-I；
或者；
方法2：
i、L-G-2-1与骨架分子反应，分离、纯化，得到L-G-2-2；
ii、L-G-2-2或L-G-2-2脱去保护基团后，与R1反应，分离、纯化，得到L-G-2-2-1；对L-G-2-2-1进行DNA编码，得到L-G-3-1；
或者；
方法3：
i、L-G-2-1与骨架分子反应，分离、纯化，得到L-G-2-2；
ii、L-G-2-2或L-G-2-2脱去保护基团后，与R1反应，分离、纯化，得到L-G-2-2-1；对L-G-2-2-1进行DNA编码，得到L-G-3-1；
iii、L-G-3-1或L-G-3-1脱去保护基团后，与R2反应，分离、纯化，得到L-G-3-1-1；对L-G-3-1-1进行DNA编码，得到L-G-3-2；
或者；
方法4：
i、L-G-2-1与骨架分子反应，分离、纯化，得到L-G-2-2；对L-G-2-2进行DNA编码，得到L-G-3-1；
ii、L-G-3-1或L-G-3-1脱去保护基团后，与R2反应，分离、纯化，得到L-G-3-1-1；对L-G-3-1-1进行DNA编码，得到L-G-3-2；
其中，R1、R2为合成砌块；
f、切除L-G-3-I、L-G-3-1和/或L-G-3-2的固相载体，得到L-D-T，即为DNA编码的化合物库。
进一步的，步骤a中，所述固相载体选自PEG树脂、PEGA树脂、无机物固相载体、PE薄片中的任意一种或多种。
进一步的，步骤a中，所述固相载体选自带有氨基活性官能团的固相载体；优选的，所述固相载体为
进一步的，步骤a中，所述连接分子L-1选自含有酯基、脂基、硫酯基、邻硝基苄基、香豆素基团、芳香甲酮基团、叠氮、羟基、巯基、巯醚基、羧基、醛基、氨基、胺基、酰胺基、烯基、炔基中任意一种或多种官能团的化合物；优选的，所述连接分子L-1为
进一步的，步骤a中，固相载体G-1与连接分子L-1的重量比为1：0.08～0.2；优选的，固相载体G-1与连接分子L-1的重量比为1：0.138。
进一步的，步骤a中，反应溶剂为卤烃类溶剂；优选的，反应溶剂为二氯甲烷。
进一步的，步骤a中，反应温度为15～25℃；反应时间为12～16小时。
进一步的，步骤a中，分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用DMF和二氯甲烷洗涤，即可。
进一步的，步骤a中，所述L-G-1为
进一步的，步骤b中，所述DNA为单链DNA。
进一步的，步骤b中，所述连接分子L-0选自含有酯基、脂基、硫酯基、邻硝基苄基、香豆素基团、芳香甲酮基团、叠氮、羟基、巯基、巯醚基、羧基、醛基、氨基、胺基、酰胺基、烯基、炔基中任意一种或多种官能团的化合物；优选的，所述连接分子L-0为
进一步的，步骤b中，反应是在缩合剂的条件下进行。
进一步的，步骤b中，所述缩合剂为2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪。
进一步的，步骤b中，DNA与连接分子L-0的摩尔比为1：50～300，连接分子L-0与缩合剂的摩尔比为1：1～2；优选的，DNA与连接分子L-0的摩尔比为1：100，连接分子L-0与缩合剂的摩尔比为1：1。
进一步的，步骤b中，反应温度为15～25℃；反应时间为12～16小时。
进一步的，步骤b中，分离、纯化的方法为：调节pH＝4～5，加入乙醇，于-20℃下沉淀后，离心，得到固体，洗涤，即可。
进一步的，步骤b中，所述L-2为
进一步的，步骤c中，反应是在有机溶剂的条件下进行；优选的，反应是在吡啶的条件下进行。
进一步的，步骤c中，L-G-1与L-2的摩尔比为2～10：1，L-G-1与吡啶的重量体积比为1：0.8～2.5mg/μL；优选的，L-G-1与L-2的摩尔比为5：1，L-G-1与吡啶的重量体积比为1：1mg/μL。
进一步的，步骤c中，反应温度为20～45℃；反应时间为14～30小时；优选的，反应温度为40℃；反应时间为21h。
进一步的，步骤c中，分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
进一步的，步骤c中，所述L-G-2为
进一步的，步骤d中，所述保护基团为氨基保护基团；优选的，所述保护基团为芴甲氧羰基。
进一步的，步骤d中，L-G-2是在哌啶、含氮类溶剂的条件下脱去保护基团，其中，所述L-G-2与哌啶的摩尔体积比为1：100～10000mol/L，所述哌啶与含氮类溶剂的体积比为1～4：5～20。
进一步的，步骤d中，所述L-G-2-1为
进一步的，步骤e中，DNA编码的方法为：标记序列i串联连接在L-G-2-1-1、L-G-2-2-1、L-G-3-1-1或L-G-2-2的DNA上，标记序列i特异标记Ri，其中，Ri为合成砌块，i＝1，2；合成过程中，每加入新的Ri，就在DNA或标记序列(i-1)上串联连接标记序列i，合成结束后，在标记序列i上连接末端序列，即可。
进一步的，步骤e中，所述R1、R2分别或同时选自多官能团化合物，多官能团独立地选自氨基、羧基、醛基、烯基、炔基、卤素、叠氮、羟基、巯基、苯基中的任意两种或两种以上；优选的，所述R1、R2分别或同时选自氨基酸、取代或未取代的二羧酸、取代或未取代的二胺、取代或未取代的烯烃、取代或未取代的炔烃、取代或未取代的醛、异氰酸酯；更优选的，所述R1、R2分别或同时选自异氰酸酯、苄醇或苯甲酸。
进一步的，步骤e中，所述骨架分子含有羟基、氨基、羧基、氰基、醛基中的任意一种或两种以上。
进一步的，步骤e中，所述骨架分子选自对羟基苯丙酸、对氨基苯甲酸、对羟基苯甘氨酸、N-芴甲氧羰基-甘氨酸、N-芴甲氧羰基-L-苯丙氨酸、叔丁基异腈、环己烷基异腈、3-甲基丁醛、环戊烷基醛、中的任意一种或两种以上。
进一步的，步骤e的方法1中，反应是在有机胺和有机溶剂的条件下进行；优选的，反应是在三乙胺和N,N-二甲基甲酰胺的条件下进行。
进一步的，步骤e的方法1中，L-G-2-1、R1、有机胺的摩尔比为1：50～500：50～500，L-G-2-1与有机溶剂的摩尔体积比为1：50～500nmol/μL；优选的，L-G-2-1、R1、有机胺的摩尔比为1:150:150，L-G-2-1与有机溶剂的摩尔体积比为1:240nmol/μL。
进一步的，步骤e的方法1中，反应温度为25℃～30℃，反应时间为12h～16h。
进一步的，步骤e的方法1中，分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
进一步的，步骤e的方法2或方法3中，步骤i的反应是在缩合剂、有机胺和有机溶剂的条件下进行；步骤e的方法4中，步骤i的反应是在有机溶剂的条件下进行；优选的，反应是在2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、N,N-二异丙基乙胺和含氮类溶剂的条件下进行；
所述L-G-2-1、骨架分子、缩合剂与有机胺的摩尔比为1：50～500：50～500：50～500；所述化合物L-G-2-1与含氮类溶剂的摩尔体积比为50～500nmol/μL。
进一步的，步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤i的反应温度为25℃～30℃；反应时间为12h～16h。
进一步的，步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤i分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
进一步的，步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤ii的反应是在有机胺或有机膦和有机溶剂的条件下进行；优选的，所述有机胺选自N,N-二异丙基乙胺或三乙胺；所述有机膦选自三苯基膦；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、醚类溶剂或含氮类溶剂；优选的，所述醚类溶剂选自四氢呋喃；所述含氮类溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺。
进一步的，步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤ii的反应温度为25℃～30℃；反应时间为12h～16h。
进一步的，步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤ii分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
进一步的，步骤e的方法2、方法3或方法4中，L-G-2-2或L-G-3-1脱去保护基团的方法为：L-G-2-2或L-G-3-1中加入哌啶，于25℃～30℃搅拌反应2h～6h，除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
进一步的，步骤e的方法3或方法4中，与R2反应是在有机胺和有机溶剂的条件下进行；优选的，所述有机胺选自N,N-二异丙基乙胺或三乙胺，有机溶剂选自卤烃类溶剂。
进一步的，步骤e的方法3或方法4中，与R2反应的反应温度为25℃～30℃，反应时间为12h～16h。
进一步的，步骤e的方法3或方法4中，步骤iii中分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
进一步的，步骤e中，
所述L-G-3-I为
所述L-G-2-2为
所述L-G-3-1为
其中，Rj为可以形成异氰酸酯的基团。
进一步的，步骤f中，切除固相载体的方法为：
①、取L-G-3-I、L-G-3-1和/或L-G-3-2，加入碱，反应，分离、纯化，即可；
或者；
②、取L-G-3-I、L-G-3-1和/或L-G-3-2，加入PBS缓冲溶液，光源下进行分解反应，分离、纯化，即可。
进一步的，①中，所述碱选自有机碱或无机碱；反应温度为30～60℃；反应时间为1～10小时；优选的，所述无机碱为氨水；反应温度为55℃；反应时间为1小时。
进一步的，②中，光源的波长为365nm；分解反应的反应温度为25℃～40℃；反应时间为1h～8h。
进一步的，①和/或②中，分离、纯化的方法为：用水和TEAA缓冲溶液洗涤，得到滤液；将滤液浓缩后，加入乙醇，于-20℃下沉淀后，离心，得到固体，洗涤，即可。
进一步的，步骤f中，所述L-D-T为
其中，Rj为可以形成异氰酸酯的基团；R1-a为CH2或C6H5CH2CH；R1-b为正丁基、异丁基、叔丁基或环己烷基；R1-c为正丙基、异丙基或环戊烷基；Rk为羧酸、醛、异氰酸酯中的任意一种与氨基反应生成的基团。
本发明还提供了一种DNA编码化合物库，它具有式Ⅰ所示的通式：
其中，
为化合物库的骨架分子；
Ri'选自氢或合成砌块；
E选自胺基、烯基、炔基、酰胺基、脂基、巯醚基或叠氮；
A选自羟基、巯基；
B选自R为氢、C1～C8烷基、C1～C8烯基或与B1中的原子成环；B1选自取代或未取代的炔基、氨基、羧基、醛基、叠氮或巯基；
表示DNA。
进一步的，所述骨架分子含有羟基、氨基、羧基、氰基、醛基中的任意一种或两种以上。
进一步的，所述骨架分子选自对羟基苯丙酸、对氨基苯甲酸、对羟基苯甘氨酸、N-芴甲氧羰基-甘氨酸、N-芴甲氧羰基-L-苯丙氨酸、叔丁基异腈、环己烷基异腈、3-甲基丁醛、环戊烷基醛、中的任意一种或两种以上。
进一步的，A的长度为10个～50个原子。
进一步的，它包括以下DNA编码化合物库：
其中，Rj为可以形成异氰酸酯的基团；R1-a为CH2或C6H5CH2CH；R1-b为正丁基、异丁基、叔丁基或环己烷基；R1-c为正丙基、异丙基或环戊烷基；Rk为任何羧酸、醛、异氰酸酯中的任意一种与氨基反应生成的基团。
与现有液相合成DNA编码化合物库的方法相比，本发明方法只需要通过简单的几次过滤洗涤操作即可完成反应的后处理纯化，操作简便，使得合成DNA编码化合物库的生产周期缩短了50％以上，显著提高了DNA编码化合物库的生产效率与唯一性以及最终产物的纯度，经济价值高，非常适合产业上的应用。
具体举例，进一步说明本发明的技术方案：
(1)、向G-1(0.5g,负载量:32μmol/g)中加入3mL含有化合物L-1(69mg,0.1mmol；生产厂家：Aldrich)的二氯甲烷溶液，置于室温下反应过夜；反应完毕后，过滤移除溶剂，得到固体；固体分别用DMF(2mL×3)和二氯甲烷(2mL×3)洗涤，直至LC-MS检测滤液中不含化合物L-1，得到L-G-1。
取部分L-G-1，用哌啶移除Fmoc保护基，利用游离氨基的紫外吸收定量，确定CPG负载量为14.5μmol/g。
(2)将单链DNA溶于30μL NaHCO3缓冲溶液中，依此加入20ml的L-0(1.0mg,3.0μmol；生产厂家：Aldrich)的DMSO溶液、10μL DMT-MM(0.83mg,3.0μmol)的水溶液，置于室温下反应过夜；反应完毕后，加入3M HCl溶液调节pH＝4～5，加入240μL乙醇，置于-20℃下沉淀2小时后离心，得到固体；固体用85％乙醇洗涤一次，得到L-2。
(3)向L-G-1(10mg,140nmol)中加入90μL含有L-2(28nmol)的水溶液和10μL吡啶，置于40℃下搅拌反应21小时；反应完毕后，过滤移除溶剂，得到固体；固体分别用蒸馏水和0.1M TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2。
(4)向L-G-2中加入含氮类溶剂和哌啶，于25℃～30℃搅拌反应4h～6h；反应完毕后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-1。
所述L-G-2与哌啶的摩尔体积比为1：(1～4)mol/ml；所述哌啶与含氮类溶剂的体积比为(1～4)：(5～20)；
(5)向L-G-2-1中加入带有羧酸官能团的骨架分子、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、N,N-二异丙基乙胺和卤烃类溶剂，于25℃～30℃搅拌反应12h～16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.a。
所述L-G-2-1、带有羧酸官能团的骨架分子、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯与N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为1：(1～2)：(1～2)：(2～4)；所述化合物L-G-2-1与卤烃类溶剂的质量体积比为1：(9～20)g/ml；
(6)向L-G-2-2.a中加入Ri(Ri为合成切块，可以选自异氰酸酯、苄醇或苯甲酸，i＝1、2或3)、N,N-二异丙基乙胺和卤烃类溶剂，于25℃～30℃搅拌反应12h～16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2-1.a；
在每步合成砌块化学反应纯化完成后，均采用申请号：201210555548.3，发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”的专利申请公开的DNA编码技术对本发明化合物库的R1、R2、R3对应进行生物酶催化的DNA编码，得到L-G-3-1.a。
(7)用碱或光切除的方法将L-G-3-1.a中的CPG切除，得到DNA编码的化合物库L-D-T-1。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
缩写：
Fmoc：芴甲氧羰基；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；DMSO：二甲基亚砜；DMT-MM：2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪；TEAA：乙酸三乙胺；DIEA：N,N-二异丙基乙胺。
实施例1
(1)、L-G-1的制备
向G-1(0.5g，CPG起始负载量：32μmol/g，来源：上海凌江实业发展有限公司)中加入3mL含有化合物L-1(69mg，0.1mmol；生产厂家：Aldrich)的二氯甲烷溶液，置于室温下反应过夜；反应完毕后，过滤移除溶剂，得到固体；固体分别用DMF(2mL×3)和二氯甲烷(2mL×3)洗涤，得到L-G-1。
取L-G-1，用哌啶移除Fmoc保护基，利用Fmoc的消除产物的紫外吸收定量，确定L-G-1负载量为14.5μmol/g，产率91％。
(2)、L-2的制备
将单链DNA(32.0nmol，分子量7663.9)(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAATTCTGGCACTCG)溶于30μL NaHCO3缓冲溶液中，依此加入20ml的L-0(1.0mg，3.0μmol；生产厂家：Aldrich)的DMSO溶液、10μL的DMT-MM(0.83mg，3.0μmol)的水溶液，置于室温下反应过夜；反应完毕后，加入3M的HCl溶液调节pH＝4～5，加入240μL乙醇，置于-20℃下沉淀2小时后离心，得到固体；固体用85％乙醇洗涤一次，得到L-2。使用OD紫外吸收定量，确定L-2物质的量为28.0nmol，产率80％。
MS(ESI)m/z 7979.6(M+1)+。
(3)、L-G-2的制备
向L-G-1(10mg,140nmol)中加入90μL含有L-2(28nmol)的水溶液和10μL吡啶，置于40℃下搅拌反应21小时；反应完毕后，过滤移除溶剂，得到固体；固体分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2。
(4)、L-G-2-1的制备
向L-G-2(8.0mg)中加入DMF(160μL)和哌啶(40μL)，于25℃～30℃搅拌反应6h；反应完毕后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-1。
取部分L-G-2-1(3.0mg)加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到DNA组分。使用OD紫外吸收定量，确定L-G-2-1中DNA物质的量为6.0nmol，产率65％。
MS(ESI)m/z 8251.0(M+1)+。
(5)、L-G-2-2.a的制备
向L-G-2-1中加入带有羧酸官能团的骨架分子、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、DIEA和DMF，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.a。
具体的，
向L-G-2-1(20mg)中加入对氨基苯甲酸(生产厂家：Alfa，4.15mg)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(生产厂家：Alfa，6.9mg)、DIEA(20μL)和DMF(60μL)，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.a。
取部分L-G-2-2.a(3.0mg)，加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到DNA组分。使用OD紫外吸收定量，确定L-G-2-2-2.a中DNA物质的量为4.5nmol，产率75％。
MS(ESI)m/z 8369.7(M+1)+。
(6)、L-G-3-1.a的制备
向L-G-2-2.a中加入Rj’(Rj’为合成砌块，选自Rj取代的异氰酸酯)、DIEA和DMF，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2-1.a；
L-G-2-2-1.a参照发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”(申请号：201210555548.3)中所述的DNA编码方法进行固相条件下的DNA编码(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAAGGCTGGCACTCG)，得到L-G-3-1.a；
编码结束后，固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液(4×100μL)和蒸馏水(4×100μL)洗涤，最后用100μL蒸馏水洗涤；洗涤结束后，取部分固体，加入50μL氨水，置于55℃下反应1小时；固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液和蒸馏水洗涤三次；将得到的滤液进行乙醇沉淀，冻干，用于琼脂糖电泳检测。
(7)、L-D-T-1化合物库合成
用碱或光切除的方法将L-G-3-1.a中的CPG切除，得到DNA编码的化合物库L-D-T-1。
实施例2
(1)按照实施例1中L-G-1的制备方法，得到L-G-1；
(2)按照实施例1中L-2的制备方法，得到L-2；
(3)按照实施例1中L-G-2的制备方法，得到L-G-2；
(4)按照实施例1中L-G-2-1的制备方法，得到L-G-2-1；
(5)L-G-3-1.b的制备
向L-G-2-1(5.0mg)中加入2-乙基苯异氰酸酯(1.47mg；生产厂家：Alfa)、三乙胺(5μL)和DMF(15μL)，于25℃～30℃反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-1-1.b；
取部分L-G-2-1-1.b(2.0mg)加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到DNA组分。使用OD紫外吸收定量，确定L-G-2-1-1.b中DNA物质的量为2.5nmol，产率63％。
MS(ESI)m/z 8395.4(M+1)+。
L-G-2-1-1.b参照发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”(申请号：201210555548.3)中所述的DNA编码方法进行固相条件下的DNA编码(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAACCCTGGCACTCG)，得到L-G-3-1.b；
编码结束后，固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液(4×100μL)和蒸馏水(4×100μL)洗涤，最后用100μL蒸馏水洗涤；洗涤结束后，取部分固体，加入50μL氨水，置于55℃下反应1小时；固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液和蒸馏水洗涤三次；将得到的滤液进行乙醇沉淀，冻干，用于琼脂糖电泳检测。
(6)按照类似实施例1中L-D-T-1的制备方法，得到L-D-T-2。
实施例3
(1)按照实施例1中L-G-1的制备方法，得到L-G-1；
(2)按照实施例1中L-2的制备方法，得到L-2；
(3)按照实施例1中L-G-2的制备方法，得到L-G-2；
(4)按照实施例1中L-G-2-1的制备方法，得到L-G-2-1；
(5)L-G-2-2.c的制备
向L-G-2-1(20mg)中加入对氨基苯甲酸(4.15mg，生产厂家：Alfa)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(6.9mg，生产厂家：Alfa)、DIEA(20μL)和DMF(60μL)，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.c；
取部分L-G-2-2.c(2.0mg)加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到DNA组分。使用OD紫外吸收定量，确定L-G-2-2.c中DNA物质的量为3.0nmol，产率75％。
MS(ESI)m/z 8369.7(M+1)+。
(6)L-G-3-1.c的制备
向L-G-2-2.c(10mg)中加入苯甲酸(2.0mg)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(6.9mg，生产厂家：Alfa)、DIEA(20μL)和DMF(60μL)，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2-1.c；
取部分L-G-2-2-1.c(2.0mg)加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到DNA组分。使用OD紫外吸收定量，确定L-G-2-2-1.c中DNA物质的量为1.5nmol，产率38％。
MS(ESI)m/z 8473.1(M+1)+。
L-G-2-2-1.c参照发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”(申请号：201210555548.3)中所述的DNA编码方法进行固相条件下的DNA编码(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAAATCTGGCACTCG)，得到L-G-3-1.c；
编码结束后，固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液(4×100μL)和蒸馏水(4×100μL)洗涤，最后用100μL蒸馏水洗涤；洗涤结束后，取部分固体，加入50μL氨水，置于55℃下反应1小时；固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液和蒸馏水洗涤三次；将得到的滤液进行乙醇沉淀，冻干，用于琼脂糖电泳检测。
(7)按照类似实施例1中L-D-T-1的制备方法，得到L-D-T-3。
实施例4
(1)按照实施例1中L-G-1的制备方法，得到L-G-1；
(2)按照实施例1中L-2的制备方法，得到L-2；
(3)按照实施例1中L-G-2的制备方法，得到L-G-2；
(4)按照实施例1中L-G-2-1的制备方法，得到L-G-2-1；
(5)L-G-2-2.d的制备
向L-G-2-1(20mg)中加入S-2(17.4mg，生产厂家：Alfa)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(6.9mg，生产厂家：Alfa)、DIEA(20μL)和DMF(60μL)，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.d；
取部分L-G-2-2.d(2.0mg)加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到DNA组分。使用OD紫外吸收定量，确定L-G-2-2.d中DNA物质的量为2.0nmol，产率50％。
MS(ESI)m/z 8698.0(M+1)+。
(6)、L-G-3-1.d的制备
向L-G-2-2.d(15mg)中加入哌啶(40μL)，于25℃～30℃搅拌反应6h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到固体；固体中加入Rj’(Rj’选自Rj取代的异氰酸酯,1.5mg)、三乙胺(10μL)和DMF(100μL)，于25℃～30℃反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2-1.d；
L-G-2-2-1.d参照发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”(申请号：201210555548.3)中所述的DNA编码方法进行固相条件下的DNA编码(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAATACTGGCACTCG)，得到L-G-3-1.d；
编码结束后，固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液(4×100μL)和蒸馏水(4×100μL)洗涤，最后用100μL蒸馏水洗涤；洗涤结束后，取部分固体，加入50μL氨水，置于55℃下反应1小时；固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液和蒸馏水洗涤三次；将得到的滤液进行乙醇沉淀，冻干，用于琼脂糖电泳检测。
(7)、L-D-T-4化合物库合成
取L-G-3-1.d(10mg)加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到L-D-T-4。
实施例5
(1)按照实施例1中L-G-1的制备方法，得到L-G-1；
(2)按照实施例1中L-2的制备方法，得到L-2；
(3)按照实施例1中L-G-2的制备方法，得到L-G-2；
(4)按照实施例1中L-G-2-1的制备方法，得到L-G-2-1；
(5)L-G-2-2.e的制备
向L-G-2-1中加入S-1、S-2和S-3以及DMF，于25～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.e。
具体的，
向L-G-2-1(20mg)中加入N-芴甲氧羰基-甘氨酸(S-1)(生产厂家：Alfa，14.8mg)、叔丁基异腈(S-2)(生产厂家：Alfa，4.2mg)、3-甲基丁醛(S-3)(生产厂家：Alfa，4.3mg)、和DMF(100μL)，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.e；
取部分上述L-G-2-2.e(2mg)，加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到DNA组分。使用OD紫外吸收定量，确定L-G-2-2.e中DNA物质的量为38nmol，产率76％。
MS(ESI)m/z 9111.4(M+1)+。
(6)、L-G-3-1.e的制备
L-G-2-2.e参照发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”(申请号：201210555548.3)中所述的DNA编码方法进行固相条件下的DNA编码(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAACGCTGGCACTCG)，得到L-G-2-2-1.e；编码结束后，固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液(4×100μL)和蒸馏水(4×100μL)洗涤，最后用100μL蒸馏水洗涤；洗涤结束后，取部分固体，加入50μL氨水，置于55℃下反应1小时；固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液和蒸馏水洗涤三次；将得到的滤液进行乙醇沉淀，冻干，用于琼脂糖电泳检测；
向L-G-2-2-1.e(10mg)中加入哌啶(40μL)，于25℃～30℃搅拌反应6h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到固体；固体加入Rk’(可选自官能团带羧酸、醛基或异氰酸酯的合成砌块)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(6.1mg，生产厂家：Alfa)、DIEA(20μL)和DMF(60μL)，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼，滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-3-1-1.e；
L-G-3-1-1.e参照发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”(申请号：201210555548.3)中所述的DNA编码方法进行固相条件下的DNA编码(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAAGCCTGGCACTCG)，得到L-G-3-1.e；编码结束后，固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液(4×100μL)和蒸馏水(4×100μL)洗涤，最后用100μL蒸馏水洗涤；洗涤结束后，取部分固体，加入50μL氨水，置于55℃下反应1小时；固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液和蒸馏水洗涤三次；将得到的滤液进行乙醇沉淀，冻干，用于琼脂糖电泳检测；
(7)、L-D-T-5化合物库合成
取L-G-3-1.e(2mg)，加入氨水(40μL)，置于55℃下反应1h，固体分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤数次，得到滤液；滤液浓缩，加入适量乙醇，置于-20℃下沉淀2h后离心，得到固体；固体用85％乙醇洗涤一次，得到DNA编码的化合物库L-D-T-5。
实施例6
(1)按照实施例1中L-G-1的制备方法，得到L-G-1；
(2)按照实施例1中L-2的制备方法，得到L-2；
(3)按照实施例1中L-G-2的制备方法，得到L-G-2；
(4)按照实施例1中L-G-2-1的制备方法，得到L-G-2-1；
(5)L-G-2-2.f的制备
向L-G-2-1中加入S-1、S-2和S-3以及DMF，于25～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.f。
具体的，
向L-G-2-1(20mg)中加入N-芴甲氧羰基-L-苯丙氨酸(S-1)(生产厂家：Alfa，15.1mg)、环己烷基异腈(S-2)(生产厂家：Alfa，4.8mg)、环戊烷基醛(S-3)(生产厂家：Alfa，4.1mg)、和DMF(100μL)，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-2-2.f；
取部分上述L-G-2-2.f(2mg)，加入150μL浓氨水，加热至55℃反应1小时切除固相载体，过滤后减压蒸除溶剂，固体分别用0.1M的TEAA缓冲液和蒸馏水洗涤三次。加入250μL乙醇和100μL醋酸-醋酸钠缓冲液(pH＝4.7，0.5M)在-20℃下沉淀得到DNA组分。使用OD紫外吸收定量，确定L-G-2-2.f中DNA物质的量为35nmol，产率70％。
MS(ESI)m/z 9241.9(M+1)+。
(6)、L-G-3-1.f的制备
L-G-2-2.f参照发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”(申请号：201210555548.3)中所述的DNA编码方法进行固相条件下的DNA编码(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAACGATGGCACTCG)，得到L-G-2-2-1.f；编码结束后，固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液(4×100μL)和蒸馏水(4×100μL)洗涤，最后用100μL蒸馏水洗涤；洗涤结束后，取部分固体，加入50μL氨水，置于55℃下反应1小时；固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液和蒸馏水洗涤三次；将得到的滤液进行乙醇沉淀，冻干，用于琼脂糖电泳检测；
向L-G-2-2-1.f(10mg)中加入哌啶(40μL)，于25℃～30℃搅拌反应6h后，过滤移除溶剂，得到滤饼；滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到固体；固体加入Rk’(可选自官能团带羧酸、醛基及异氰酸酯的合成砌块)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(6.1mg，生产厂家：Alfa)、DIEA(20μL)和DMF(60μL)，于25℃～30℃搅拌反应16h后，过滤移除溶剂，得到滤饼，滤饼分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤三次，得到L-G-3-1-1.f；
L-G-3-1-1.f参照发明名称：“一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒”(申请号：201210555548.3)中所述的DNA编码方法进行固相条件下的DNA编码(单链DNA的序列为GGAGCTTGTGAAGCGTGGCACTCG)，得到L-G-3-1.f；编码结束后，固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液(4×100μL)和蒸馏水(4×100μL)洗涤，最后用100μL蒸馏水洗涤；洗涤结束后，取部分固体，加入50μL氨水，置于55℃下反应1小时；固体分别用0.1M的TEAA缓冲溶液和蒸馏水洗涤三次；将得到的滤液进行乙醇沉淀，冻干，用于琼脂糖电泳检测；
(7)、L-D-T-6化合物库合成
取L-G-3-1.f(2mg)，加入氨水(40μL)，置于55℃下反应1h，固体分别用蒸馏水和0.1M的TEAA缓冲溶液洗涤数次，得到滤液；滤液浓缩，加入适量乙醇，置于-20℃下沉淀2h后离心，得到固体；固体用85％乙醇洗涤一次，得到DNA编码的化合物库L-D-T-6。
本发明方法可以实现在有机溶剂体系下DNA编码化合物库的合成，使在传统液相条件下DNA编码化合物库合成中无法实现的或合成效率较低的化学反应能够顺利进行反应，进一步地扩充编码化合物库的化学反应类型和化合物库多样性空间，扩充的反应类型包括：有机催化的羟醛缩合反应、烯烃复分解反应等，这些反应在传统的液相体系下DNA编码化合物库合成中效率极低，采用本发明方法能显著的提高其合成效率。
与现有液相合成DNA编码化合物库的方法相比，通过本发明CPG负载DNA编码化合物合成技术，只需要通过简单的几次过滤洗涤操作即可完成反应的后处理纯化，简化了化学合成反应和DNA编码反应的后处理，简化了分离纯化流程；使DNA编码化合物库合成周期缩短了50％以上，大大节约了成本；显著提高了纯化质量，提高了DNA编码的效率与唯一性以及最终产物的纯度。
本发明DNA编码化合物库的合成方法，有利于除去过量的DNA，降低了DNA编码化合物库合成过程中过量的DNA所造成的对后续筛选等工作的干扰，大大提高了新药筛选的靶向性和准确性。
本发明选择的连接分子，使CPG、DNA和小分子之间以合适的距离进行连接，各个功能块之间的分子键既可以在温和条件下形成，又能在温和条件下断开，实现了多种化学反应在DNA和CPG共同存在下可以顺利进行。

Claims (54)

1.一种固相合成DNA编码化合物库的方法，其特征在于：它包括以下步骤：
a、固相载体G-1与连接分子L-1反应，分离、纯化，得到L-G-1；
b、DNA与连接分子L-0反应，分离、纯化，得到L-2；
c、L-G-1与L-2反应，分离、纯化，得到L-G-2；
d、L-G-2脱去保护基团，得到L-G-2-1；
e、采用方法1、方法2、方法3、方法4或者其任意的组合：
方法1：
L-G-2-1与R1反应，分离、纯化，得到L-G-2-1-1；对L-G-2-1-1进行DNA编码，得到L-G-3-I；
或者；
方法2：
i、L-G-2-1与骨架分子反应，分离、纯化，得到L-G-2-2；
ii、L-G-2-2或L-G-2-2脱去保护基团后，与R1反应，分离、纯化，得到L-G-2-2-1；对L-G-2-2-1进行DNA编码，得到L-G-3-1；
或者；
方法3：
i、L-G-2-1与骨架分子反应，分离、纯化，得到L-G-2-2；
ii、L-G-2-2或L-G-2-2脱去保护基团后，与R1反应，分离、纯化，得到L-G-2-2-1；对L-G-2-2-1进行DNA编码，得到L-G-3-1；
iii、L-G-3-1或L-G-3-1脱去保护基团后，与R2反应，分离、纯化，得到L-G-3-1-1；对L-G-3-1-1进行DNA编码，得到L-G-3-2；
或者；
方法4：
i、L-G-2-1与骨架分子反应，分离、纯化，得到L-G-2-2；对L-G-2-2进行DNA编码，得到L-G-3-1；
ii、L-G-3-1或L-G-3-1脱去保护基团后，与R2反应，分离、纯化，得到L-G-3-1-1；对L-G-3-1-1进行DNA编码，得到L-G-3-2；
其中，R1、R2为合成砌块；
f、切除L-G-3-I、L-G-3-1和/或L-G-3-2的固相载体，得到L-D-T，即为DNA编码的化合物库。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述固相载体选自PEG树脂、PEGA树脂、无机物固相载体、PE薄片中的任意一种或多种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述固相载体选自带有氨基活性官能团的固相载体；优选的，所述固相载体为
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述连接分子L-1选自含有酯基、脂基、硫酯基、邻硝基苄基、香豆素基团、芳香甲酮基团、叠氮、羟基、巯基、巯醚基、羧基、醛基、氨基、胺基、酰胺基、烯基、炔基中任意一种或多种官能团的化合物；优选的，所述连接分子L-1为
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，固相载体G-1与连接分子L-1的重量比为1：0.08～0.2；优选的，固相载体G-1与连接分子L-1的重量比为1：0.138。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，反应溶剂为卤烃类溶剂；优选的，反应溶剂为二氯甲烷。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，反应温度为15～25℃；反应时间为12～16小时。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用DMF和二氯甲烷洗涤，即可。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述L-G-1为
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中，所述DNA为单链DNA。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中，所述连接分子L-0选自含有酯基、脂基、硫酯基、邻硝基苄基、香豆素基团、芳香甲酮基团、叠氮、羟基、巯基、巯醚基、羧基、醛基、氨基、胺基、酰胺基、烯基、炔基中任意一种或多种官能团的化合物；优选的，所述连接分子L-0为
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中，反应是在缩合剂的条件下进行。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于：步骤b中，所述缩合剂为2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪。
14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中，DNA与连接分子L-0的摩尔比为1：50～300，连接分子L-0与缩合剂的摩尔比为1：1～2；优选的，DNA与连接分子L-0的摩尔比为1：100，连接分子L-0与缩合剂的摩尔比为1：1。
15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中，反应温度为15～25℃；反应时间为12～16小时。
16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中，分离、纯化的方法为：调节pH＝4～5，加入乙醇，于-20℃下沉淀后，离心，得到固体，洗涤，即可。
17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中，所述L-2为
18.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，反应是在有机溶剂的条件下进行；优选的，反应是在吡啶的条件下进行。
19.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，L-G-1与L-2的摩尔比为2～10：1，L-G-1与吡啶的重量体积比为1：0.8～2.5mg/μL；优选的，L-G-1与L-2的摩尔比为5：1，L-G-1与吡啶的重量体积比为1：1mg/μL。
20.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，反应温度为20～45℃；反应时间为14～30小时；优选的，反应温度为40℃；反应时间为21h。
21.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
22.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述L-G-2为
23.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d中，所述保护基团为氨基保护基团；优选的，所述保护基团为芴甲氧羰基。
24.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d中，L-G-2是在哌啶、含氮类溶剂的条件下脱去保护基团，其中，所述L-G-2与哌啶的摩尔体积比为1：100～10000mol/L，所述哌啶与含氮类溶剂的体积比为1～4：5～20。
25.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d中，所述L-G-2-1为
26.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e中，DNA编码的方法为：标记序列i串联连接在L-G-2-1-1、L-G-2-2-1、L-G-3-1-1或L-G-2-2的DNA上，标记序列i特异标记Ri，其中，Ri为合成砌块，i＝1，2；合成过程中，每加入新的Ri，就在DNA或标记序列(i-1)上串联连接标记序列i，合成结束后，在标记序列i上连接末端序列，即可。
27.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e中，所述R1、R2分别或同时选自多官能团化合物，多官能团独立地选自氨基、羧基、醛基、烯基、炔基、卤素、叠氮、羟基、巯基、苯基中的任意两种或两种以上；优选的，所述R1、R2分别或同时选自氨基酸、取代或未取代的羧酸、取代或未取代的胺、取代或未取代的烯烃、取代或未取代的炔烃、取代或未取代的醛、异氰酸酯；更优选的，所述R1、R2分别或同时选自异氰酸酯、苄醇或苯甲酸。
28.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e中，所述骨架分子含有羟基、氨基、羧基、氰基、醛基中的任意一种或两种以上。
29.根据权利要求28所述的方法，其特征在于：步骤e中，所述骨架分子选自对羟基苯丙酸、对氨基苯甲酸、对羟基苯甘氨酸、N-芴甲氧羰基-甘氨酸、N-芴甲氧羰基-L-苯丙氨酸、叔丁基异腈、环己烷基异腈、3-甲基丁醛、环戊烷基醛、中的任意一种或两种以上。
30.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法1中，反应是在有机胺和有机溶剂的条件下进行；优选的，反应是在三乙胺和N,N-二甲基甲酰胺的条件下进行。
31.根据权利要求30所述的方法，其特征在于：步骤e的方法1中，L-G-2-1、R1、有机胺的摩尔比为1：50～500：50～500，L-G-2-1与有机溶剂的摩尔体积比为1：50～500nmol/μL；优选的，L-G-2-1、R1、有机胺的摩尔比为1:150:150，L-G-2-1与有机溶剂的摩尔体积比为1:240nmol/μL。
32.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法1中，反应温度为25℃～30℃，反应时间为12h～16h。
33.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法1中，分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
34.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法2或方法3中，步骤i的反应是在缩合剂、有机胺和有机溶剂的条件下进行；步骤e的方法4中，步骤i的反应是在有机溶剂的条件下进行；优选的，反应是在2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、N,N-二异丙基乙胺和含氮类溶剂的条件下进行；
所述L-G-2-1、骨架分子、缩合剂与有机胺的摩尔比为1：50～500：50～500：50～500；所述化合物L-G-2-1与含氮类溶剂的摩尔体积比为50～500nmol/μL。
35.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤i的反应温度为25℃～30℃；反应时间为12h～16h。
36.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤i分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
37.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤ii的反应是在有机胺或有机膦和有机溶剂的条件下进行；优选的，所述有机胺选自N,N-二异丙基乙胺或三乙胺；所述有机膦选自三苯基膦；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、醚类溶剂或含氮类溶剂；优选的，所述醚类溶剂选自四氢呋喃；所述含氮类溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺。
38.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤ii的反应温度为25℃～30℃；反应时间为12h～16h。
39.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法2或方法3或方法4中，步骤ii分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
40.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法2、方法3或方法4中，L-G-2-2或L-G-3-1脱去保护基团的方法为：L-G-2-2或L-G-3-1中加入哌啶，于25℃～30℃搅拌反应2h～6h，除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
41.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法3或方法4中，与R2反应是在有机胺和有机溶剂的条件下进行；优选的，所述有机胺选自N,N-二异丙基乙胺或三乙胺，有机溶剂选自卤烃类溶剂。
42.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法3或方法4中，与R2反应的反应温度为25℃～30℃，反应时间为12h～16h。
43.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e的方法3或方法4中，步骤iii中分离、纯化的方法为：除去溶剂，得到固体，固体用水和TEAA缓冲溶液洗涤，即可。
44.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤e中，
所述L-G-3-I为
所述L-G-2-2为
所述L-G-3-1为
其中，Rj为可以形成异氰酸酯的基团。
45.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤f中，切除固相载体的方法为：
①、取L-G-3-I、L-G-3-1和/或L-G-3-2，加入碱，反应，分离、纯化，即可；
或者；
②、取L-G-3-I、L-G-3-1和/或L-G-3-2，加入PBS缓冲溶液，光源下进行分解反应，分离、纯化，即可。
46.根据权利要求45所述的方法，其特征在于：①中，所述碱选自有机碱或无机碱；反应温度为30～60℃；反应时间为1～10小时；优选的，所述无机碱为氨水；反应温度为55℃；反应时间为1小时。
47.根据权利要求45所述的方法，其特征在于：②中，光源的波长为365nm；分解反应的反应温度为25℃～40℃；反应时间为1h～8h。
48.根据权利要求45所述的方法，其特征在于：①和/或②中，分离、纯化的方法为：用水和TEAA缓冲溶液洗涤，得到滤液；将滤液浓缩后，加入乙醇，于-20℃下沉淀后，离心，得到固体，洗涤，即可。
49.根据权利要求1～25任意一项所述的方法，其特征在于：步骤f中，所述L-D-T为
其中，Rj为可以形成异氰酸酯的基团；R1-a为CH2或C6H5CH2CH；R1-b为正丁基、异丁基、叔丁基或环己烷基；R1-c为正丙基、异丙基或环戊烷基；Rk为羧酸、醛、异氰酸酯中的任意一种与氨基反应生成的基团。
50.一种DNA编码化合物库，其特征在于：它具有式Ⅰ所示的通式：
其中，
为化合物库的骨架分子；
Ri'选自氢或合成砌块；
E选自胺基、烯基、炔基、酰胺基、脂基、巯醚基或叠氮；
A选自羟基、巯基；
B选自R为氢、C1～C8烷基、C1～C8烯基或与B1中的原子成环；B1选自取代或未取代的炔基、氨基、羧基、醛基、叠氮或巯基；
表示DNA。
51.根据权利要求50所述的DNA编码化合物库，其特征在于：所述骨架分子含有羟基、氨基、羧基、氰基、醛基中的任意一种或两种以上。
52.根据权利要求51所述的DNA编码化合物库，其特征在于：所述骨架分子选自对羟基苯丙酸、对氨基苯甲酸、对羟基苯甘氨酸、N-芴甲氧羰基-甘氨酸、N-芴甲氧羰基-L-苯丙氨酸、叔丁基异腈、环己烷基异腈、3-甲基丁醛、环戊烷基醛、中的任意一种或两种以上。
53.根据权利要求50所述的DNA编码化合物库，其特征在于：A的长度为10个～50个原子。
54.根据权利要求50的DNA编码化合物库，其特征在于：它包括以下DNA编码化合物库：
其中，Rj为可以形成异氰酸酯的基团；R1-a为CH2或C6H5CH2CH；R1-b为正丁基、异丁基、叔丁基或环己烷基；R1-c为正丙基、异丙基或环戊烷基；Rk为任何羧酸、醛、异氰酸酯中的任意一种与氨基反应生成的基团。
CN201610229301.0A 2015-04-14 2016-04-13 一种固相合成dna编码化合物库的方法 Active CN106048736B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510176488 2015-04-14
CN2015101764888 2015-04-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106048736A true CN106048736A (zh) 2016-10-26
CN106048736B CN106048736B (zh) 2019-09-03

Family

ID=57125641

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610229301.0A Active CN106048736B (zh) 2015-04-14 2016-04-13 一种固相合成dna编码化合物库的方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US10801022B2 (zh)
EP (1) EP3284851B1 (zh)
JP (1) JP6554180B6 (zh)
CN (1) CN106048736B (zh)
WO (1) WO2016165621A1 (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106979942A (zh) * 2017-05-04 2017-07-25 华中师范大学 一种对固相合成化合物组合库个体定量的拉曼光谱分析方法及其用途
CN108070009A (zh) * 2017-12-12 2018-05-25 上海药明康德新药开发有限公司 一种制备dna编码化合物文库的方法及起始头片段化合物和制得的dna编码化合物
CN108178790A (zh) * 2018-01-18 2018-06-19 上海药明康德新药开发有限公司 一种将细胞膜分离以便对跨膜蛋白进行dna编码化合物库筛选的方法
WO2018166532A1 (en) * 2017-03-17 2018-09-20 Hitgen Ltd. Methods and compositions for synthesis of encoded libraries
CN110079867A (zh) * 2019-04-12 2019-08-02 上海药明康德新药开发有限公司 DNA编码化合物库中On-DNA维蒂希反应方法及制得的On-DNA烯烃化合物
WO2019149198A1 (zh) * 2018-01-31 2019-08-08 成都先导药物开发股份有限公司 一种dna编码化合物库及化合物筛选方法
CN112175021A (zh) * 2019-07-02 2021-01-05 成都先导药物开发股份有限公司 一种合成On-DNA芳基苄位取代类化合物的方法
CN112575389A (zh) * 2019-09-30 2021-03-30 成都先导药物开发股份有限公司 一种dna编码化合物库的液相色谱纯化方法
CN112794874A (zh) * 2019-11-13 2021-05-14 成都先导药物开发股份有限公司 一种On-DNA Petasis反应的合成方法
CN112837757A (zh) * 2019-11-22 2021-05-25 成都先导药物开发股份有限公司 一种DNA编码化合物库构建中的On-DNA Aldol反应方法
CN112941637A (zh) * 2019-12-10 2021-06-11 成都先导药物开发股份有限公司 一种On-DNA Aldol反应方法
CN114478671A (zh) * 2022-01-28 2022-05-13 康龙化成(宁波)科技发展有限公司 一种脒基脲类先导化合物及其合成方法
CN115467029A (zh) * 2021-06-10 2022-12-13 亚飞（上海）生物医药科技有限公司 环状化合物库的化学关环构建方法及环状化合物库

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3284851B1 (en) * 2015-04-14 2020-12-23 Hitgen Inc. Method for solid-phase synthesis of dna-encoded chemical library
EP3472376A4 (en) 2016-06-16 2019-12-18 Richard Edward Watts OLIGONUCLEOTIDE CONTROLLED AND RECORDED COMBINATORY SYNTHESIS OF CODED PROBE MOLECULES
WO2018204420A1 (en) 2017-05-02 2018-11-08 Haystack Sciences Corporation Molecules for verifying oligonucleotide directed combinatorial synthesis and methods of making and using the same
WO2020118655A1 (zh) * 2018-12-14 2020-06-18 深圳华大生命科学研究院 核酸合成装置和纯化装置、其用途及核酸合成方法和纯化方法
CN109680342B (zh) * 2018-12-18 2021-09-28 上海药明康德新药开发有限公司 DNA编码化合物库中On-DNA芳硝基化合物还原成On-DNA芳胺化合物的方法
CA3144531A1 (en) * 2019-12-23 2021-07-01 Illumina, Inc. Nanoparticle with single site for template polynucleotide attachment
CN111620921B (zh) * 2020-05-25 2023-06-13 上海药明康德新药开发有限公司 DNA编码化合物库构建中通过氧化酰胺化制备On-DNA酰胺化合物的方法
EP4232578A1 (en) 2020-10-23 2023-08-30 ETH Zurich Self-purified nucleic acid encoded libraries
WO2022111536A1 (zh) * 2020-11-27 2022-06-02 成都先导药物开发股份有限公司 一种dna编码化合物库及化合物筛选方法
CN113735916B (zh) * 2021-09-17 2023-11-14 康龙化成(宁波)科技发展有限公司 一种将末端炔烃转化为酰胺的方法及其在基因编码库构建中的应用
CN115385974B (zh) * 2022-09-16 2025-02-11 康龙化成(宁波)科技发展有限公司 一种合成On-DNA芳基炔烃类先导化合物的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1612891A (zh) * 2002-04-11 2005-05-04 第一三得利制药株式会社 修饰肽的制造方法
CN102317513A (zh) * 2009-02-13 2012-01-11 X-化学有限公司 产生和筛选dna编码的库的方法
WO2013185042A2 (en) * 2012-06-08 2013-12-12 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona, Acting For And On Behalf Of Arizona State University Rapid affinity measurement of peptide ligands and reagents therefor
CN103882532A (zh) * 2012-12-20 2014-06-25 成都先导药物开发有限公司 一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒
CN104181221A (zh) * 2013-05-21 2014-12-03 成都先导药物开发有限公司 一种药物靶标捕获方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5573905A (en) * 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
AU2002312389A1 (en) * 2001-06-05 2002-12-16 Irm Llc Functional proteomic profiling
CA2495881C (en) * 2002-08-19 2014-07-08 The President And Fellows Of Harvard College Evolving new molecular function
EP1558744B1 (en) * 2002-10-30 2011-06-15 Nuevolution A/S Enzymatic encoding
US7972992B2 (en) * 2003-12-17 2011-07-05 Praecis Pharmaceuticals, Inc. Methods for synthesis of encoded libraries
DK1730277T3 (da) * 2004-03-22 2010-03-01 Nuevolution As Kodning ved ligering under anvendelse af byggebloksoligonukleotider
ES2675167T3 (es) * 2012-07-13 2018-07-09 X-Chem, Inc. Bibliotecas codificadas por ADN que tienen enlaces oligonucleotídicos codificantes no legibles por polimerasas
FI3650459T3 (fi) * 2015-02-24 2023-11-28 Hope City Kemiallisesti koodattuja spatiaalisesti osoitettuja kirjastojen seulonta-alustoja
EP3284851B1 (en) * 2015-04-14 2020-12-23 Hitgen Inc. Method for solid-phase synthesis of dna-encoded chemical library

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1612891A (zh) * 2002-04-11 2005-05-04 第一三得利制药株式会社 修饰肽的制造方法
CN102317513A (zh) * 2009-02-13 2012-01-11 X-化学有限公司 产生和筛选dna编码的库的方法
WO2013185042A2 (en) * 2012-06-08 2013-12-12 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona, Acting For And On Behalf Of Arizona State University Rapid affinity measurement of peptide ligands and reagents therefor
CN103882532A (zh) * 2012-12-20 2014-06-25 成都先导药物开发有限公司 一种先导化合物的合成及筛选方法与试剂盒
CN104181221A (zh) * 2013-05-21 2014-12-03 成都先导药物开发有限公司 一种药物靶标捕获方法

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018166532A1 (en) * 2017-03-17 2018-09-20 Hitgen Ltd. Methods and compositions for synthesis of encoded libraries
CN106979942A (zh) * 2017-05-04 2017-07-25 华中师范大学 一种对固相合成化合物组合库个体定量的拉曼光谱分析方法及其用途
CN108070009B (zh) * 2017-12-12 2021-04-13 上海药明康德新药开发有限公司 一种制备dna编码化合物文库的方法及起始头片段化合物和制得的dna编码化合物
CN108070009A (zh) * 2017-12-12 2018-05-25 上海药明康德新药开发有限公司 一种制备dna编码化合物文库的方法及起始头片段化合物和制得的dna编码化合物
CN108178790A (zh) * 2018-01-18 2018-06-19 上海药明康德新药开发有限公司 一种将细胞膜分离以便对跨膜蛋白进行dna编码化合物库筛选的方法
WO2019149198A1 (zh) * 2018-01-31 2019-08-08 成都先导药物开发股份有限公司 一种dna编码化合物库及化合物筛选方法
CN110079867A (zh) * 2019-04-12 2019-08-02 上海药明康德新药开发有限公司 DNA编码化合物库中On-DNA维蒂希反应方法及制得的On-DNA烯烃化合物
CN110079867B (zh) * 2019-04-12 2022-01-04 上海药明康德新药开发有限公司 DNA编码化合物库中On-DNA维蒂希反应方法及制得的On-DNA烯烃化合物
CN112175021A (zh) * 2019-07-02 2021-01-05 成都先导药物开发股份有限公司 一种合成On-DNA芳基苄位取代类化合物的方法
CN112175021B (zh) * 2019-07-02 2022-08-16 成都先导药物开发股份有限公司 一种合成On-DNA芳基苄位取代类化合物的方法
CN112575389A (zh) * 2019-09-30 2021-03-30 成都先导药物开发股份有限公司 一种dna编码化合物库的液相色谱纯化方法
CN112575389B (zh) * 2019-09-30 2023-09-19 成都先导药物开发股份有限公司 一种dna编码化合物库的液相色谱纯化方法
CN112794874A (zh) * 2019-11-13 2021-05-14 成都先导药物开发股份有限公司 一种On-DNA Petasis反应的合成方法
CN112837757A (zh) * 2019-11-22 2021-05-25 成都先导药物开发股份有限公司 一种DNA编码化合物库构建中的On-DNA Aldol反应方法
CN112837757B (zh) * 2019-11-22 2024-08-20 成都先导药物开发股份有限公司 一种DNA编码化合物库构建中的On-DNA Aldol反应方法
CN112941637A (zh) * 2019-12-10 2021-06-11 成都先导药物开发股份有限公司 一种On-DNA Aldol反应方法
CN115467029A (zh) * 2021-06-10 2022-12-13 亚飞（上海）生物医药科技有限公司 环状化合物库的化学关环构建方法及环状化合物库
CN114478671A (zh) * 2022-01-28 2022-05-13 康龙化成(宁波)科技发展有限公司 一种脒基脲类先导化合物及其合成方法
CN114478671B (zh) * 2022-01-28 2024-09-24 康龙化成(宁波)科技发展有限公司 一种脒基脲类先导化合物及其合成方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106048736B (zh) 2019-09-03
EP3284851A4 (en) 2018-12-05
JP6554180B6 (ja) 2019-09-11
WO2016165621A1 (zh) 2016-10-20
JP2018512438A (ja) 2018-05-17
EP3284851A1 (en) 2018-02-21
US10801022B2 (en) 2020-10-13
EP3284851B1 (en) 2020-12-23
JP6554180B2 (ja) 2019-07-31
US20180155710A1 (en) 2018-06-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106048736B (zh) 一种固相合成dna编码化合物库的方法
AU2022332278B2 (en) Compounds and methods for liquid phase synthesis
WO2007034812A1 (ja) 分離用担体、化合物の分離方法、及びこれを用いたペプチド合成方法
TW201024322A (en) Preparation method for nitrogen containing heterocyclic hexapeptide with high conversion rate
CN104861161B (zh) 一种制备端氨基聚乙二醇的方法
CN101516898B (zh) 含有磷的α-氨基酸的制造方法及其制造中间体
CN107892710B (zh) 一种易于回收循环使用的负载型铂配合物氧化剂及其制备方法和应用
JP2018525376A (ja) クロマノール誘導体の新規な製造方法
CN113200933B (zh) 不对称加成反应合成光学活性苯并羧酸酯类化合物的方法
CN103408572B (zh) 手性氨基硼酸衍生物及其制备方法和应用
CN103998455B (zh) 合成蛋白质的方法
JP3765573B2 (ja) ＰＮＡモノマーユニット合成のためのｔ−ブトキシカルボニルアミノエチルアミン、アミノ酸誘導体およびその中間体並びにそれらの製造方法
US12428385B2 (en) Composition of a lipophilic agent for solution phase synthesis of biomolecules
CN104478883B (zh) 一种c8-杂环烷基化嘌呤核苷类似物及其合成方法
KR102403904B1 (ko) 용액공정상 pna 올리고머의 제조방법
JP5711948B2 (ja) 固相担持型ｓｈ基選択的標識試薬
CN101835745B (zh) 二磺酸化合物的制法、不对称曼尼希催化剂、β-氨基羰基衍生物的制法及二磺酸盐
CA2667714C (en) Carbamoylation of amines, thiophenols, mercaptanes and phenols employing organic azides
CN1315874C (zh) 一种α－希夫碱衍生化β－环糊精的合成方法
CA2389953A1 (en) New functionalized polymeric reagents
CN105884636A (zh) α芳基氨基酸的制备方法
CA3126705C (en) Synthesis strategy for gap protecting group
JP3459986B2 (ja) ポリエチレングリコールリンカーを有するポリスチレン担持光学活性アンモニウム塩、その製造方法、それから成るポリマー担持型光学活性相間移動触媒及びその触媒を用いる化学反応方法
US9518039B2 (en) Polymer-fixed derivatives of dithiolane or dithiane
JPWO2015050199A1 (ja) 新規化合物、その製造方法及びその用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 610000 R&D Building 1001, No. 88 South Keyuan Road, Fengjiawan Industrial Park, Chengdu High-tech Zone, Sichuan Province

Applicant after: Chengdu Pioneer Drug Development Co., Ltd.

Address before: 610000 R&D Building 1001, No. 88 South Keyuan Road, Fengjiawan Industrial Park, Chengdu High-tech Zone, Sichuan Province

Applicant before: Chengdu lead drug development corporation, Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant