CN105434406B

CN105434406B - 一种具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂及其制备方法

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Publication number: CN105434406B
Application number: CN201410419964.XA
Authority: CN
Inventors: 孙红日; 董祥玉; 孙晓东
Original assignee: Sheng Ji Mill Nanjing Bioengineering Co Ltd
Current assignee: Nanjing Foresight Bioengineering Co ltd
Priority date: 2014-08-22
Filing date: 2014-08-22
Publication date: 2018-03-27
Anticipated expiration: 2034-08-22
Also published as: CN105434406A

Abstract

本发明公开了一种具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂及其制备方法。番茄红素制剂的组成为：富含顺式番茄红素原料2.5～11重量份，常规药用辅料0.5～5.23重量份；所述的富含顺式番茄红素原料通过以下方法制备得到：(1)将番茄红素油树脂与β‑环糊精混合均匀，形成番茄红素‑β‑环糊精混合物，(2)在真空状态下，用加热处理或微波处理番茄红素‑β‑环糊精混合物，使其中的反式番茄红素转化为顺式番茄红素，直至水份小于10.0％得富含顺式番茄红素原料。本发明提供了一种具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂。该制剂中顺式番茄红素的百分含量达2％，且含量稳定，具有增强免疫力的效果。

Description

一种具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于制剂领域，涉及一种具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂及其制备方法。

背景技术

番茄红素是类胡萝卜素的一种，由11个共轭双键和2个非共轭双键组成的直链型多不饱和烯烃，分子式为C₄₀H₅₆，分子量536.85。番茄红素广泛存在于植物中，成熟的番茄、西瓜、胡萝卜、红色葡萄柚等红色果实等红色果实的含量较多，同时在人体的各种器官和组织中也广泛存在，其中血液、肾上腺、睾丸、肝脏等含有较多的番茄红素，由于番茄红素是一种脂溶性天然色素作为食品添加剂，具有极强的清除自由基、抗氧化的能力，其淬灭单线氧，清除自由基的能力是目前常用抗氧剂维生素E生物100倍，是β-胡萝卜素的2倍多，能够阻断亚硝胺的形成、诱导细胞分化、增强免疫力、抑制细胞增殖、减少DNA的损伤，受到广大消费者的欢迎，流行病学的研究的大量证据证实番茄红素对预防前列腺癌、乳腺癌、肝癌等恶性肿瘤方面具有重要的作用，因此番茄红素的研究逐渐受到重视。

最近研究发现番茄红素存在顺式和反式异构体，由于分子中存在较多的具有刚性的共轭双键，番茄红素在理论上有多达211种的空间异构体，实际可能存在的异构体种类也有72种，人体中最常见的番茄红素空间构型如图1所示，现有研究表明，食物(如番茄酱)中天然存在的番茄红素以全反式结构为主(90％～98％)，而人体的血清和肾上腺等组织中含有的番茄红素主要是以顺式结构(以下简称CIS结构)为主(79％～88％)，这表明顺式结构的番茄红素可能具有更高的生理活性——很多关于番茄制品中番茄红素顺式异构体含量及生理活性间关系研究的结果也证实了这一点：Boileau等进行体外实验发现，顺式异构体比较容易被细胞吸收，证实顺式结构的番茄红素的生理活性较全反式高；Bohm等也证实顺式异构体的抗氧化性好于全反式异构体，因此对天然番茄红素提取物(番茄红素油树脂或番茄酱)或经纯化的番茄红素进行了异构化处理，提高其中更具生理活性的顺式异构体的比例，可以显著提高产品的应用价值，具有显著的经济社会效益。

目前市售的番茄红素制剂基本是以番茄红素油树脂制成的软胶囊，主要存在以下：1、番茄红素不稳定，极易被氧化或见光分解而失去疗效；2、番茄红素主要以人体难以吸收的反式结构存在；3、番茄红素难溶于水，以油滴状态漂浮于胃液中，难以吸收。

由于番茄红素的特殊链状结构和不饱和双键的存在，导致其稳定性极差，容易发生顺反异构化和氧化降解，顺式结构由于具有更强的抗氧化活性，因此对光、热、氧更敏感；因此发明一种富含顺式番茄红素的番茄红素制剂，克服目前制剂的缺陷显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂。

本发明的另一目的是提供该制剂的制备方法。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂，番茄红素制剂的组成为：富含顺式番茄红素原料2.5～11重量份，常规药用辅料0.5～20.03重量份；所述的番茄红素制剂中顺式番茄红素质量百分含量为0.05～0.8％。

其中，番茄红素制剂的组成优选为：富含顺式番茄红素原料2.5～11重量份，常规药用辅料0.5～5.23重量份。

所述的制剂剂型优选为片剂。

所述的常规药用辅料为制备片剂时使用的辅料，优选自淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、交联聚维酮、聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、包衣粉中的1种或多种。

所述的富含顺式番茄红素原料优选通过以下方法制备得到：

(1)将番茄红素含量为1～20wt％的天然番茄红素油树脂与β-环糊精混合均匀，形成番茄红素-β-环糊精混合物，

(2)在真空状态下，用加热处理或微波处理番茄红素-β-环糊精混合物，使番茄红素-β-环糊精混合物中的反式番茄红素转化为顺式番茄红素，直至水份小于10.0％得富含顺式番茄红素原料。

所述的真空状态的真空度优选小于0.1Mpa，加热处理的温度优选50℃±5℃，微波处理的条件优选为7～10w/g，处理60～180min。

所述的具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂，优选将所述的富含顺式番茄红素原料与常规药用辅料混合，按照片剂制备方法制备得到所述的具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂。

本发明所述的具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂的制备方法，包含以下步骤：

(2)在真空状态下，用加热或微博处理番茄红素-β-环糊精混合物，使番茄红素-β-环糊精混合物中的反式番茄红素转化为顺式番茄红素，直至水份小于10.0％得富含顺式番茄红素原料；

(3)将所述的富含顺式番茄红素原料与常规药用辅料混合，按照片剂制备方法制备得到所述的具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂。

本发明推荐的制备方法如下：

将1重量份的番茄红素油树脂(含番茄红素1～20％)，与0.5～2.0重量份的水以及1.5重量份的β-环糊精混合均匀，在30～60℃条件下充分搅拌研磨30～60min，将上述湿料转移至真空干燥箱中，控制箱体内的真空度小于0.1Mpa，温度50℃±5℃，或者微波7～10w/g，处理60～180min直至湿料的水份小于10.0％，得富含顺式番茄红素原料。将富含顺式番茄红素原料2.5～11份与其余常用药用辅料0.5～5.23混合并按片剂常用的处理方法制备。

本方法优选方案如下：

将番茄红素油树脂(含番茄红素10％)1重量份与1重量份水以及1.5重量份β-环糊精混合均匀，在50℃条件下搅拌研磨60min，转移湿料至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波功率8w/g，处理90min，得富含顺式番茄红素原料。将上述得富含顺式番茄红素原料2.5份粉碎过筛后加入1重量份微晶纤维素、1重量份预胶化淀粉、0.01重量份羧甲基淀粉钠、0.01重量份二氧化硅、0.01重量份硬脂酸镁混合均匀，全粉末直接压片，制成片剂。

有益效果：

本发明克服了现有技术中的难点：

番茄红素不稳定，极易被氧化或见光分解而失去疗效；

番茄红素难溶于水，以油滴状态漂浮于胃液中，难以吸收的缺陷；

顺式番茄红素含量低，不易被人体利用；

顺式番茄红素稳定性差，不易长期保存。

本发明提供了一种易溶于水、易吸收、更利于被人体吸收的稳定的顺式番茄红素制剂，其具有增强免疫力的作用。该制剂中顺式番茄红素的百分含量达2％，且含量稳定。

附图说明

图1天然番茄红素油脂HPLC分析结果，全反式番茄红素(t_R＝33.8min)，占番茄红素总量的97.6％，顺式占2.4％。

图2处理后番茄红素样品HPLC分析结果，全反式番茄红素(t_R＝33.8min)，占番茄红素总量的85.0％，顺式占15.0％(40.2min、37min、29min峰面积之和)

具体实施方式

实施例1

将番茄红素油树脂(含番茄红素10％，其中顺式番茄红素占3.1％)100g与100g水以及150gβ-环糊精混合均匀，在50℃条件下搅拌研磨60min，转移湿料至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波功率8w/g，处理90min，所得产品中番茄红素/倍他环糊精混合物，将上述混合物2.5份粉碎过筛后加入1份微晶纤维素、1份预胶化淀粉、0.01份羧甲基淀粉钠、0.01份二氧化硅、0.01份硬脂酸镁混合均匀，全粉末直接压片，每片500mg，制成片剂备用，片剂中顺式番茄红素含量为：0.8％。

实施例2

(1)増溶实验

标准曲线：按GB14215-2008方法绘制苏丹I色素标准曲线，以吸光度值A对C(μg/ml)作图得标准曲线：A＝0.3074C+0.0105(r＝0.9999)，λ＝485nm。

取实施例1制备的番茄红素片以及10％番茄红素油树脂适量(约5g)，置于100ml容量瓶中，加入纯净水(约80ml)，超声15min，放冷至室温，定容，过滤，取滤液适量，甲苯萃取，稀释，于485nm测定吸光度，根据吸光度计算番茄红素溶解度以及増溶倍数。

番茄红素油树脂(10％)在室温条件下水中番茄红素溶解度为：0.086μg/ml

番茄红素片在室温条件下水中番茄红素溶解度为：4.958μg/ml

结果显示：番茄红素在片剂中较原料中在水中増溶了57倍。

产品中番茄红素顺反异构体含量检测方法：

样品制备溶液：参照GB/T22249-2008保健食品中番茄红素的测定方法，用焦性没食子酸-二氯甲烷溶液制备测试溶液。

顺反异构体含量测定色谱条件：

流动相：四氢呋喃/乙腈＝15/85(V/V)

色谱柱：COSMOSIL Cholester4.6×250mm，5μm

流速：1mL/min

柱温：25℃

进样量：20μL

检测波长：472nm

样品浓度：20μg/mL

分析结果采用面积归一法计算。

(2)片剂稳定性实验

将实施例1制备的番茄红素片，用铝塑袋包装，并分别置于60℃烘箱、RH90％±5％(饱和KNO₃溶液)的干燥器中、4500lx±500lx光线下，进行影响因素实验，评价指标：性状、气味、番茄红素总量，顺式番茄红素含量，详细结果见表1。

表1片剂影响因素试验

结果显示，本方法制备的富含顺式番茄红素的片剂稳定性较好。

实施例3实施例1片剂的药效学试验

1.实验动物及实验内容

18～22g健康雌性清洁级ICR小鼠(动物证号：SCXK(沪)2007-0005号)，分批按体重随机各分4组，每组10只，共分5批分别进行小鼠脾脏淋巴细胞转化试验和NK细胞活性测定；二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应(DTH)试验；抗体生成细胞检测和血清溶血素测定；小鼠碳廓清试验；小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。SPF级实验动物环境设施合格证：SYXK(苏)2012-0037.全部动物均给予灭菌鼠饲料和灭菌水自由取用。

2.剂量设计

成人(按60kg体重计)每日推荐摄入量为1000mg(总番茄红素为20mg、其中含顺式番茄红素不低于3.2mg)，相当于16.7mg/kg b.wt/d，实验设人体推荐量的10倍，即每日167mg/kg b.wt作为中剂量组，上下各1个剂量组：500mg/kg b.wt和83mg/kg b.wt作为高剂量组和低剂量组(分别相当于人体推荐量的30倍和5倍)。分别称取片剂500mg、1000mg、3000mg加入纯净水使之完全崩解，定容至120ml，经口灌胃小鼠，灌胃容积20ml/kg b.wt.，容积对照组以等容积纯净水灌胃，连续灌胃30d后测各项免疫指标。

3.结果

3.1样品对实验动物体重的影响

实验终末受试各剂量组小鼠体重和增重分别于溶剂对照组相比无统计学显著性差异(P＞0.05)。

3.2样品对脏器/体重比值的影响

实验终末受试各剂量组小鼠胸腺/体比值、脾/体比值与溶剂对照组相比无统计学显著性差异(P＞0.05)。

3.3细胞免疫

1、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)：各各受试物剂量组光密度差值均高于溶剂对照组，方差分析及两两比较显示低，中剂量组光密度差值与溶剂对照组相比有统计学极显著性和显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)，该项实验结果阳性。

2、二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发性变态反应(DHT)：各组小鼠耳廓肿胀度经方差分析无统计学显著差异(P＞0.05)，该项实验结果阴性。

一项实验的两个剂量组结果显阳性，提示优选方案产品能增强小鼠细胞免疫功能。

4.体液免疫功能实验

1、抗体生成细胞检测(琼脂糖平板法)：各受试物剂量组小鼠溶血斑数均高于溶剂对照组，方差分析及两两比较显示低、中剂量组溶血斑数与对照组相比有统计学显著差异(P＜0.05)，该项实验结果阳性。

2、血清溶血素测定：各小鼠血清半数溶血值(HC₅₀)经方差分析无统计学显著差异(P＞0.05)，该项实验结果阴性。

一项实验的两个剂量组结果显阳性，提示优选方案产品能增强小鼠体液免疫功能。

5.单核-巨噬细胞功能实验

(1)小鼠碳廓清实验：各组小鼠吞噬指数α值经方差分析无统计学显著差异(P＞0.05)，该项实验结果阴性。

(2)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法)：各组小鼠的单核——巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数经方差分析无统计学显著性差异(P＞0.05)，该项实验结果阴性。

6.NK细胞活性测定：

受试物各剂量组小鼠的NK细胞活性均高于溶剂对照组，经方差分析及两两比较有统计学显著性和极显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)，该项实验结果阳，提示本发明产品能增强小鼠NK细胞活性。

以上结果表明：体液免疫功能、细胞免疫功能和NK细胞活性三方面测定结果均为阳性，根据保健食品增强免疫力功能评价标准，本发明产品具有增强免疫力的功能。

实施例4

将番茄红素油树脂(含番茄红素1％，其中顺式番茄红素占比番茄红素总量的3.1％)100g与20g水以及150g倍他环糊精混合均匀，在30℃条件下搅拌研磨30min，转移湿料至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波工艺参数为7w/g，处理60min，得富含顺式番茄红素原料，其中顺式番茄红素占比番茄红素总量的15.2％。将上述的富含顺式番茄红素原料2.5份粉碎过筛后加入淀粉0.25份，糊精0.2份，交联聚维酮0.05份，混合均匀，用1％羧甲基纤维素钠溶液制软材，造20目粒，将上述湿粒转移至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波工艺参数为7w/g，处理30min，20目整粒，压片，每片500mg，制成的片剂中顺式番茄红素含量为：0.05％。

实施例5

将蕃茄红素油树脂(含番茄红素6％，其中顺式番茄红素占比番茄红素总量的2.4％)100g与50g水以及500g倍他环糊精混合均匀，在40℃条件下搅拌研磨40min，转移湿料至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波工艺参数为8w/g，处理90min，得富含顺式番茄红素原料，其中顺式番茄红素占比番茄红素总量的15.0％。将上述的富含顺式番茄红素原料6份粉碎过筛后加入乳糖1.5份，羧甲基淀粉钠0.05份，混合均匀，用1％聚维酮溶液制软材，造20目粒，将上述湿粒转移至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波工艺参数为7w/g，处理30min，20目整粒，加入二氧化硅0.05份，硬脂酸镁0.05份混合均匀，压片，每片500mg，制成的片剂中顺式番茄红素含量为：0.11％。

实施例6

将番茄红素油树脂(含番茄红素10％，其中顺式番茄红素占比番茄红素总量的3.8％)100g与100g水以及500g倍他环糊精混合均匀，在50℃条件下搅拌研磨50min，转移湿料至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波频率为工艺参数为9w/g，处理120min，得富含顺式番茄红素原料，其中顺式番茄红素占比番茄红素总量的12.6％。将上述的富含顺式番茄红素原料粉6份碎过筛后加入预胶化淀粉1.5份混合均匀，用2％甲基纤维素溶液制软材，造20目粒，将上述湿粒转移至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波工艺参数为7w/g，处理30min，20目整粒，加入二氧化硅0.05份，硬脂酸镁0.05份混合均匀，压片，每片500mg，制成的片剂中顺式番茄红素含量为：0.16％。

实施例7

将番茄红素油树脂(含番茄红素20％，其中顺式番茄红素占比番茄红素总量的4.1％)100g与200g水以及1000g倍他环糊精混合均匀，在60℃条件下搅拌研磨60min，转移湿料至微波真空干燥箱中，箱体内真空度达到0.1Mpa以下，开启微波，控制微波工艺参数为10w/g，处理180min，得富含顺式番茄红素原料，其中顺式番茄红素占比番茄红素总量的16.1％。将上述的富含顺式番茄红素原料11份粉碎过筛后加入微晶纤维素3份、预胶化淀粉1.5份、羧甲基淀粉钠0.1份、乙基纤维素0.1份，硬脂酸镁0.075份、二氧化硅0.075份混合均匀，粉末直接压片，每片485mg，制成片剂，用水溶性包衣粉约0.5份，包衣增重约3.0％至500mg/片，所得片剂的顺式番茄红素含量为：0.19％。

Claims

1.一种具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂的制备方法，其特征在于番茄红素制剂的组成为：富含顺式番茄红素原料2.5~11重量份，常规药用辅料0.5～20.03重量份；所述的顺式番茄红素制剂中顺式番茄红素质量百分含量为0.05~0.8%;

所述的制备方法包含以下步骤：

（1）将番茄红素含量为1～20wt%的天然番茄红素油树脂与β-环糊精混合均匀，

在30~60℃条件下充分搅拌研磨30～60min;

（2）在真空状态下，用加热处理或微波处理番茄红素-β-环糊精混合物，使番茄红素-β-环糊精混合物中的反式番茄红素转化为顺式番茄红素，直至水份小于10.0%得富含顺式番茄红素原料；所述的真空状态的真空度小于0.1Mpa，加热处理的温度50℃±5℃，微波处理的条件为7~10w/g，处理60 ~180min;

（3）将所述的富含顺式番茄红素原料与常规药用辅料混合，按照片剂制备方法制备得到所述的具有增强免疫力的顺式番茄红素制剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于番茄红素制剂的组成为：富含顺式番茄红素原料2.5~11重量份，常规药用辅料0.5～5.23重量份。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的常规药用辅料选自淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、交联聚维酮、聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、包衣粉中的1种或多种。