CN105238799B

CN105238799B - 一种乳腺癌pik3ca突变基因及其应用

Info

Publication number: CN105238799B
Application number: CN201510675152.6A
Authority: CN
Inventors: 盛苗苗; 罗瑛; 周小龙; 唐文如; 王芳; 赵月光; 李珊珊
Original assignee: Kunming University of Science and Technology
Current assignee: Kunming University of Science and Technology
Filing date: 2015-10-19
Publication date: 2018-08-31
Anticipated expiration: 2035-10-19

Abstract

本发明公开了一种乳腺癌PIK3CA突变基因及其应用，该突变基因具有c.1658_1659GT>C突变位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；本发明通过直接测序法，对88例乳腺癌组织、19例乳腺癌癌旁组织以及22例正常人血液样本中PIK3CA基因突变进行检测，首次发现PIK3CA基因S553fs*7突变在乳腺癌组织中高达44.3%，而在乳腺癌癌旁组织和正常人血液样本中均无突变发生；提示此突变可用于辅助乳腺癌的早期诊断；因此，本发明对于临床上防治乳腺癌的发生发展具有重要意义。

Description

一种乳腺癌PIK3CA突变基因及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种乳腺癌中PIK3CA突变基因及其在辅助制备乳腺癌诊断试剂中的应用。

背景技术

乳腺癌，所有女性和家庭的梦魇。全球肿瘤流行病统计数据（GLOBOCAN）显示每年约有130万妇女患乳腺癌，45.8万人死于乳腺癌，无论是发达国家还是发展中国家，乳腺癌都是全世界妇女目前面临的最为常见的恶性肿瘤，也是引起女性死亡的重要病因。自90年代以来，中国的乳腺癌发病率增长速度是全球的2倍多，每年中国乳腺癌新发数量和死亡数量分别占全世界的12.2%和9.6%。目前，乳腺癌是中国女性发病率最高的癌症，癌症死亡原因位居第六，且年轻化趋势显著，预计到2021年，中国乳腺癌患者将高达250万（Fan, L. etal. 2014）。虽然早期检查及诊断技术的提高，手术及综合辅助治疗的进步，使得患者的预后有较明显改善，但是总生存率并不理想（Independent UK Panel on Breast CancerScreening. 2012）。对于特定的分子亚型，由于对药物的原发或继发耐药、甚至缺乏特定的治疗靶点，使得部分中晚期病人缺乏有效的治疗手段（Garcia-Closas, M. et al. 2014）。因此，寻找发生有效的肿瘤标志物对于提高乳腺癌的诊断和预测发生、发展及改善预后具有重要的临床指导意义。

肿瘤标志物可以有效地作为临床诊断依据，可以监听高位人群、早期诊断、指导治疗、判断治疗疗效、检测复发及转移，是肿瘤患者的重要检查指标。乳腺癌是一种全身性疾病、其发生和发展是一个涉及多因素、多环节的复杂过程，包括癌基因的激活以及抑癌基因的失活等。因此，基因突变在乳腺癌的发生、发展过程中起着非常重要的作用。PIK3CA基因是近年来被发现除p53突变和Her-2扩增之外最常见和最重要的乳腺癌中的突变基因，突变比率高达40%，其突变可导致多条信号通路在不同水平发生调控异常，从而促进肿瘤细胞的增殖和存活（Bachman, K. E. et al. 2004）。

磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）是一种可使肌醇环第三位羟基磷酸化的磷脂酰肌醇激酶，具有磷脂酰肌醇激酶和丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶双重活性（Fruman, D. A. et al.2014），调节细胞增殖、存活、迁移、凋亡和细胞周期等多种生物学功能。PIK3CA基因编码ⅠA类PI3K催化亚单位P110α，其定位于3q26．3，包含21个外显子（Volinia, S. et al. 1994）。KANG S等研究发现，PIK3CA基因在多种肿瘤中扮演着癌基因的角色，约30％的人类实体瘤存在PIK3CA基因的突变，其中80%-90%的突变发生在该基因的第9和第20外显子，分别对应该酶的螺旋区和激酶区。该区域的改变引起PIK3CA过表达、P110α活性增加，进而激活下游AKT等信号分子，导致成纤维细胞和乳腺上皮细胞的生长和转化，并抑制细胞凋亡，最终导致肿瘤发生（Vivanco, I. et al. 2002）。现有研究显示，应用PCR或基因测序的方法检测组织中PIK3CA基因的突变情况，可提高肿瘤诊断的敏感性；PIK3CA基因突变的肿瘤细胞对PI3K抑制剂更敏感，特异性地针对PIK3CA突变的靶向治疗可有效降低恶性肿瘤的发病率和死亡率。尽管PIK3CA突变对乳腺癌的诊治及预后的影响还需进一步研究，但从目前已有的研究数据可以看出PIK3CA高频突变和突变热点区域的发现对于乳腺癌基因诊断以及靶向治疗的选择具有重要的临床意义。

S553fs*7突变是PIK3CA基因突变之一，然而关于PIK3CA基因S553fs*7突变在乳腺癌中尚未被报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种乳腺癌中PIK3CA突变基因，该突变基因具有c.1658_1659GT>C突变位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，乳腺癌PIK3CA突变基因编码的突变蛋白S553fs*7氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

该突变蛋白具有图5所示的三维空间结构。

本发明另一目的是将上述乳腺癌中PIK3CA突变基因作为一种分子标记，即作为检测乳腺癌的分子标记物。

本发明还可将将乳腺癌PIK3CA突变基因应用在制备乳腺癌临床诊断产品中；

进一步地，在于提供一套检测PIK3CA基因突变的引物组合，一对特异扩增PIK3CA基因9号外显子的正向引物和反向引物，其正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

本发明将乳腺癌PIK3CA突变基因应用在制备用于乳腺癌临床诊断的检测试剂盒中，所述试剂盒包括核苷酸序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物。

所述试剂盒组分包含下列组分中的一种或几种：聚合酶、PCR反应缓冲液、正反向引物，纯水。

上述PCR反应总体系为25μL：其中，Pfu Mix混合液12.5μL，所述正向引物(5μM)的体积1μL，反向引物(5μM)的体积1μL，所述DNA模板1μL，其余为纯水。PCR反应条件为：①94℃，5min预变性；②94℃，30s变性；③55℃，30s退火；④72℃，35s延伸；循环②至④35次；⑤72℃，5min。

通过对乳腺癌组织、癌旁组织及正常人血液样本中PIK3CA基因突变检测，本发明首次发现了乳腺癌中PIK3CA基因S553fs*7突变，其对于临床乳腺癌早期筛查、指导临床用药以及监测肿瘤预后具有很好的实际应用价值。

附图说明

图1是本发明PIK3CA基因9号外显子突变分布情况示意图；

图2是本发明不同样本中PIK3CA基因第9外显子S553fs*7突变测序图；

图3是本发明不同样本中PIK3CA基因第9外显子S553fs*7突变比率；

图4是本发明PIK3CA基因结构域示意图；

图5是本发明PIK3CA基因S553fs*7突变前后空间构象对比图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，该领域的技术人员可以根据上述本发明内容对本发明做出一些非本质的改进和调整。下述实施例中，若非特异表明，所用试剂均为分析纯，所有试剂均可从商业渠道获得，百分比均为质量百分比。文中未注明具体条件的实验方法，通常按照《分子克隆实验指南》中所述常规条件，或试剂制造厂商所建议的条件实施。除非另行定义，文中所使用的所有专业和科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。

实施例1：乳腺癌及癌旁组织中DNA提取

1、实验材料

TES缓冲液（将一个 50mL离心管洗干净，高温高压灭菌后，加入 0.5mL 1M的Tris-HCL1mL 0.5M 的 EDTA 和2.5mL的10%SDS，加超纯水补足到 50mL，调 PH=8.0后室温保存），20mg/mL蛋白酶K，3M醋酸钠（pH=5.2），TE Buffer，苯酚，氯仿，异戊醇，无水乙醇，TE溶液。

2、实验方法

2.1 组织块解冻，剪取约0.5g组织，放入1.5mL离心管中，剪碎；

2.2 加入0.45mL TES缓冲液混匀，再加入50μL SDS（10%），5.0μL蛋白酶K（20mg/mL），充分混匀后，于56℃消化4-6h，每2h摇1次，至溶液清澈；

2.3 放置到室温，加入等体积饱和酚（500μL），颠倒混匀，12000rpm，离心10 min，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5mL离心管；

2.4 加入等体积酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的混合液，颠倒混匀，12000rpm，离心10min，取上层转移到新的1.5mL离心管中；

2.5 加入等体积氯仿：异戊醇=24：1的溶液，颠倒混匀，12000rpm，离心10 min，取上层清液到一个新的1.5mL离心管；

2.6 加入1/10体积的3M醋酸钠溶液和2倍体积预冷的无水乙醇沉淀DNA，上下颠倒混匀后放置于-20℃冰箱1h，12000rpm，4℃，离心10 min，弃乙醇；

2.7 加入75%的乙醇洗涤，8000rpm，离心5 min；

2.8小心的倒掉上清，在吸水纸上扣干残液，打开管盖，室温静置10min，待乙醇挥发干净，根据DNA的沉淀量加入适量的TE溶解DNA；４℃过夜溶解，测定浓度后，于-20℃保存待用。

实施例2：血液样本中DNA提取

1、实验材料

白细胞裂解液，红细胞裂解液，蛋白酶K（10mg/mL），苯酚，氯仿，异戊醇，无水乙醇，TE溶液。

2、实验方法

2.1 将4mL新鲜血液移至15mL离心管中，加入红细胞裂解液，上下颠倒混匀，4000g，4℃离心，15min；

2.2 去上清，反复洗血2-3次；

2.3 去上清，加入1mL白细胞裂解液，振荡混匀，均分至两个1.5mL的离心管中，一管于-80℃冻存待用；

2.4 另一管加入20μL蛋白酶K（10mg/mL），温和地翻转8次混匀，56℃温育过夜（直至没有肉眼可见的悬浮物），不时翻转混匀；

2.5加入等体积饱和酚（500μL），颠倒混匀，12000rpm，离心10 min，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5mL离心管；

2.6 加入等体积酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的溶液，颠倒混匀，12000rpm，离心10min，取上层转移到新的1.5mL离心管中；

2.7 加入等体积氯仿：异戊醇=24：1的溶液，颠倒混匀，12000rpm，离心10 min，取上层清液到一个新的1.5mL离心管；

2.8 加入1/10体积的3M醋酸钠溶液和2倍体积预冷的无水乙醇沉淀DNA，上下颠倒混匀后放置于-20℃冰箱1h。12000rpm，4℃，离心10 min，弃乙醇；

2.9 加入75%的乙醇洗涤，8000rpm，离心5 min；

3.0小心的倒掉上清，在吸水纸上扣干残液，打开管盖，室温静置10min，待乙醇挥发干净，根据DNA的沉淀量加入适量的TE溶解DNA，４℃过夜溶解，测定浓度后，于-20℃保存待用。

实施例3： PCR扩增PIK3CA基因9号外显子并测序

1、实验材料

2×Pfu Mix，实施例1、2中所提取的DNA模板，去离子水，扩增PIK3CA基因9号外显子的正反向引物（详见表1），PCR仪，1%的琼脂糖凝胶，电泳仪。

表1

引物名称	序列（5’-3’）
		For-SEQ ID NO:3	AGGGTTTTCCCAGTCACG TGCTTTTTCTGTAAATCATCTGTG
Rew-SEQ ID NO:4	AAACAGAGAATCTCCATTTTAGCACTT

2、实验方法

2.1 挑选实施例1、2中质量较好的DNA样本，包括88例乳腺癌组织DNA，19例乳腺癌癌旁组织DNA，22例正常人血液样本DNA；

2.2 配置如下表PCR反应体系：

表2

2×Pfu Mix	12.5μL
		For (5μM)	1μL
Rew(5μM)	1μL
		DNA模板	1μL
去离子水	补足至25μL

2.3 反应条件：①94℃，5min预变性；②94℃，30s变性；③55℃，30s退火；④72℃，35s延伸；循环②至④35次；⑤72℃，5min；

2.4 PCR反应结束后，铺1%的胶检测，并送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序；

3、实验结果

测序结果显示，在88例乳腺癌组织标本中共检测到41例PIK3CA基因9号外显子的突变，突变比率高达46.6%，其中E545A/K突变率为43.2%，S553fs*7突变率为44.3%（表3、4、5、6、7）。而在19例乳腺癌癌旁组织和22例正常人血液样本中均未检测到PIK3CA基因9号外显子的突变（见图1、图2、图3）。E545A/K为文献中已报道的热点突变位点，值得注意的是S553fs*7 的突变在 TCGA数据库中尚未报道。进一步的分析检索，仅有少量文献报道S553fs*7 的突变曾在肝癌、子宫内膜癌以及 B 细胞淋巴癌中发生。而在本研究中S553fs*7双位突变比率在所收集的乳腺癌中高达44.3%，S553fs*7 突变位于PIK3CA基因的螺旋区，其突变可以导致 PIK3CA 基因提前终止翻译，同时影响其螺旋区和激酶区的功能（图4）。

利用 Swissmodel 数据库（http://swissmodel.expasy.org/repository/）我们对PIK3CA 基因发生S553fs*7突变后其结构的改变进行了初步分析（图5）。结果显示，突变后其空间构象发生了明显改变，可能会因此对其下游激酶 PI3Ks 活性的调节机制以及相关的信号通路改变造成影响。提示PIK3CA基因S553fs*7突变与乳腺癌的发生发展密切相关。

表3

表4

表5

表6

表7

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 昆明理工大学

<120> 一种乳腺癌PIK3CA突变基因及其应用

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 3206

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

atgcctccac gaccatcatc aggtgaactg tggggcatcc acttgatgcc cccaagaatc 60

ctagtagaat gtttactacc aaatggaatg atagtgactt tagaatgcct ccgtgaggct 120

acattaataa ccataaagca tgaactattt aaagaagcaa gaaaataccc cctccatcaa 180

cttcttcaag atgaatcttc ttacattttc gtaagtgtta ctcaagaagc agaaagggaa 240

gaattttttg atgaaacaag acgactttgt gaccttcggc tttttcaacc ctttttaaaa 300

gtaattgaac cagtaggcaa ccgtgaagaa aagatcctca atcgagaaat tggttttgct 360

atcggcatgc cagtgtgtga atttgatatg gttaaagatc cagaagtaca ggacttccga 420

agaaatattc tgaacgtttg taaagaagct gtggatctta gggacctcaa ttcacctcat 480

agtagagcaa tgtatgtcta tcctccaaat gtagaatctt caccagaatt gccaaagcac 540

atatataata aattagataa agggcaaata atagtggtga tctgggtaat agtttctcca 600

aataatgaca agcagaagta tactctgaaa atcaaccatg actgtgtacc agaacaagta 660

attgctgaag caatcaggaa aaaaactcga agtatgttgc tatcctctga acaactaaaa 720

ctctgtgttt tagaatatca gggcaagtat attttaaaag tgtgtggatg tgatgaatac 780

ttcctagaaa aatatcctct gagtcagtat aagtatataa gaagctgtat aatgcttggg 840

aggatgccca atttgatgtt gatggctaaa gaaagccttt attctcaact gccaatggac 900

tgttttacaa tgccatctta ttccagacgc atttccacag ctacaccata tatgaatgga 960

gaaacatcta caaaatccct ttgggttata aatagtgcac tcagaataaa aattctttgt 1020

gcaacctacg tgaatgtaaa tattcgagac attgataaga tctatgttcg aacaggtatc 1080

taccatggag gagaaccctt atgtgacaat gtgaacactc aaagagtacc ttgttccaat 1140

cccaggtgga atgaatggct gaattatgat atatacattc ctgatcttcc tcgtgctgct 1200

cgactttgcc tttccatttg ctctgttaaa ggccgaaagg gtgctaaaga ggaacactgt 1260

ccattggcat ggggaaatat aaacttgttt gattacacag acactctagt atctggaaaa 1320

atggctttga atctttggcc agtacctcat ggattagaag atttgctgaa ccctattggt 1380

gttactggat caaatccaaa taaagaaact ccatgcttag agttggagtt tgactggttc 1440

agcagtgtgg taaagttccc agatatgtca gtgattgaag agcatgccaa ttggtctgta 1500

tcccgagaag caggatttag ctattcccac gcaggactga gtaacagact agctagagac 1560

aatgaattaa gggaaaatga caaagaacag ctcaaagcaa tttctacacg agatcctctc 1620

tctgaaatca ctgagcagga gaaagatttt ctatggacca cagacactat tgtgtaacta 1680

tccccgaaat tctacccaaa ttgcttctgt ctgttaaatg gaattctaga gatgaagtag 1740

cccagatgta ttgcttggta aaagattggc ctccaatcaa acctgaacag gctatggaac 1800

ttctggactg taattaccca gatcctatgg ttcgaggttt tgctgttcgg tgcttggaaa 1860

aatatttaac agatgacaaa ctttctcagt atttaattca gctagtacag gtcctaaaat 1920

atgaacaata tttggataac ttgcttgtga gatttttact gaagaaagca ttgactaatc 1980

aaaggattgg gcactttttc ttttggcatt taaaatctga gatgcacaat aaaacagtta 2040

gccagaggtt tggcctgctt ttggagtcct attgtcgtgc atgtgggatg tatttgaagc 2100

acctgaatag gcaagtcgag gcaatggaaa agctcattaa cttaactgac attctcaaac 2160

aggagaagaa ggatgaaaca caaaaggtac agatgaagtt tttagttgag caaatgaggc 2220

gaccagattt catggatgct ctacagggct ttctgtctcc tctaaaccct gctcatcaac 2280

taggaaacct caggcttgaa gagtgtcgaa ttatgtcctc tgcaaaaagg ccactgtggt 2340

tgaattggga gaacccagac atcatgtcag agttactgtt tcagaacaat gagatcatct 2400

ttaaaaatgg ggatgattta cggcaagata tgctaacact tcaaattatt cgtattatgg 2460

aaaatatctg gcaaaatcaa ggtcttgatc ttcgaatgtt accttatggt tgtctgtcaa 2520

tcggtgactg tgtgggactt attgaggtgg tgcgaaattc tcacactatt atgcaaattc 2580

agtgcaaagg cggcttgaaa ggtgcactgc agttcaacag ccacacacta catcagtggc 2640

tcaaagacaa gaacaaagga gaaatatatg atgcagccat tgacctgttt acacgttcat 2700

gtgctggata ctgtgtagct accttcattt tgggaattgg agatcgtcac aatagtaaca 2760

tcatggtgaa agacgatgga caactgtttc atatagattt tggacacttt ttggatcaca 2820

agaagaaaaa atttggttat aaacgagaac gtgtgccatt tgttttgaca caggatttct 2880

taatagtgat tagtaaagga gcccaagaat gcacaaagac aagagaattt gagaggtttc 2940

aggagatgtg ttacaaggct tatctagcta ttcgacagca tgccaatctc ttcataaatc 3000

ttttctcaat gatgcttggc tctggaatgc cagaactaca atcttttgat gacattgcat 3060

acattcgaaa gaccctagcc ttagataaaa ctgagcaaga ggctttggag tatttcatga 3120

aacaaatgaa tgatgcacat catggtggct ggacaacaaa aatggattgg atcttccaca 3180

caattaaaca gcatgcattg aactga 3206

<210> 2

<211> 558

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

Met Pro Pro Arg Pro Ser Ser Gly Glu Leu Trp Gly Ile His Leu Met

1 5 10 15

Pro Pro Arg Ile Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro Asn Gly Met Ile Val

20 25 30

Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile Thr Ile Lys His Glu

35 40 45

Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His Gln Leu Leu Gln Asp

50 55 60

Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln Glu Ala Glu Arg Glu

65 70 75 80

Glu Phe Phe Asp Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp Leu Arg Leu Phe Gln

85 90 95

Pro Phe Leu Lys Val Ile Glu Pro Val Gly Asn Arg Glu Glu Lys Ile

100 105 110

Leu Asn Arg Glu Ile Gly Phe Ala Ile Gly Met Pro Val Cys Glu Phe

115 120 125

Asp Met Val Lys Asp Pro Glu Val Gln Asp Phe Arg Arg Asn Ile Leu

130 135 140

Asn Val Cys Lys Glu Ala Val Asp Leu Arg Asp Leu Asn Ser Pro His

145 150 155 160

Ser Arg Ala Met Tyr Val Tyr Pro Pro Asn Val Glu Ser Ser Pro Glu

165 170 175

Leu Pro Lys His Ile Tyr Asn Lys Leu Asp Lys Gly Gln Ile Ile Val

180 185 190

Val Ile Trp Val Ile Val Ser Pro Asn Asn Asp Lys Gln Lys Tyr Thr

195 200 205

Leu Lys Ile Asn His Asp Cys Val Pro Glu Gln Val Ile Ala Glu Ala

210 215 220

Ile Arg Lys Lys Thr Arg Ser Met Leu Leu Ser Ser Glu Gln Leu Lys

225 230 235 240

Leu Cys Val Leu Glu Tyr Gln Gly Lys Tyr Ile Leu Lys Val Cys Gly

245 250 255

Cys Asp Glu Tyr Phe Leu Glu Lys Tyr Pro Leu Ser Gln Tyr Lys Tyr

260 265 270

Ile Arg Ser Cys Ile Met Leu Gly Arg Met Pro Asn Leu Met Leu Met

275 280 285

Ala Lys Glu Ser Leu Tyr Ser Gln Leu Pro Met Asp Cys Phe Thr Met

290 295 300

Pro Ser Tyr Ser Arg Arg Ile Ser Thr Ala Thr Pro Tyr Met Asn Gly

305 310 315 320

Glu Thr Ser Thr Lys Ser Leu Trp Val Ile Asn Ser Ala Leu Arg Ile

325 330 335

Lys Ile Leu Cys Ala Thr Tyr Val Asn Val Asn Ile Arg Asp Ile Asp

340 345 350

Lys Ile Tyr Val Arg Thr Gly Ile Tyr His Gly Gly Glu Pro Leu Cys

355 360 365

Asp Asn Val Asn Thr Gln Arg Val Pro Cys Ser Asn Pro Arg Trp Asn

370 375 380

Glu Trp Leu Asn Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asp Leu Pro Arg Ala Ala

385 390 395 400

Arg Leu Cys Leu Ser Ile Cys Ser Val Lys Gly Arg Lys Gly Ala Lys

405 410 415

Glu Glu His Cys Pro Leu Ala Trp Gly Asn Ile Asn Leu Phe Asp Tyr

420 425 430

Thr Asp Thr Leu Val Ser Gly Lys Met Ala Leu Asn Leu Trp Pro Val

435 440 445

Pro His Gly Leu Glu Asp Leu Leu Asn Pro Ile Gly Val Thr Gly Ser

450 455 460

Asn Pro Asn Lys Glu Thr Pro Cys Leu Glu Leu Glu Phe Asp Trp Phe

465 470 475 480

Ser Ser Val Val Lys Phe Pro Asp Met Ser Val Ile Glu Glu His Ala

485 490 495

Asn Trp Ser Val Ser Arg Glu Ala Gly Phe Ser Tyr Ser His Ala Gly

500 505 510

Leu Ser Asn Arg Leu Ala Arg Asp Asn Glu Leu Arg Glu Asn Asp Lys

515 520 525

Glu Gln Leu Lys Ala Ile Ser Thr Arg Asp Pro Leu Ser Glu Ile Thr

530 535 540

Glu Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Thr Thr Asp Thr Ile Val

545 550 555

<210> 3

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

agggttttcc cagtcacgtg ctttttctgt aaatcatctg tg 42

<210> 4

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

aaacagagaa tctccatttt agcactt 27

Claims

1.一种PIK3CA突变基因在制备乳腺癌临床诊断产品中的应用，其特征在于：该突变基因具有c.1658_1659GT>C突变位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种PIK3CA突变基因在制备用于乳腺癌临床诊断的检测试剂盒中的应用，其特征在于：该突变基因具有c.1658_1659GT>C突变位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述试剂盒包括核苷酸序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物。