CN104936604A

CN104936604A - N-甲基5-羟色胺和相关物质用于治疗/减少绝经期相关热潮红的发生

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Publication number: CN104936604A
Application number: CN201480005801.5A
Authority: CN
Inventors: 克里斯托弗·迈克尔·巴特; 迈克尔·韦泽
Original assignee: DSM IP Assets BV
Current assignee: DSM IP Assets BV
Priority date: 2013-01-25
Filing date: 2014-01-24
Publication date: 2015-09-23
Also published as: BR112015017583A2; US20140213536A1; EP2948159A1; JP2016506924A; KR20150108371A; US20150320783A1; WO2014115113A1

Abstract

Zanthoxylum piperitum(通常被称为日本辣椒)种子(包括其成熟种子)含有NMS前体/V-甲基5-羟色胺5-O-β-葡糖苷(“NMS-葡糖苷”)，其以充足的浓度存在并以充足的效率被代谢以提供有效量的NMS用于改善绝经期症状，包括热潮红/潮热。日本辣椒种子或日本辣椒种子提取物还可被用于富化NMS或NMS前体的其它来源以提供用于控制热潮红的营养品或食品补充剂。

Description

N-甲基5-羟色胺和相关物质用于治疗/减少绝经期相关热潮红的发生

发明简述

本发明涉及N-甲基5-羟色胺葡糖苷(“NMS-葡糖苷”)和/或N-甲基5-羟色胺(NMS)或其它NMS前体在治疗、预防或改善绝经期相关热潮红(也被称为潮热)中的用途。NMS-葡糖苷可获自植物来源，例如Zanthoxylum piperitum种子或种子提取物。本发明还涉及多种植物提取物(包括黑升麻)的用途，其已经用以下的至少一种加强：N-甲基5-羟色胺(“NMS”)、NMS-葡糖苷、Zanthoxylum piperitum种子、含NMS-葡糖苷的Zanthoxylum piperitum种子提取物、其它NMS前体或其混合物。

发明背景

黑升麻(被称为Actaea racemos和Cimicifuga ramcemosa二者)提取物含有许多未被完全了解的营养物。尽管如此，基于它减轻绝经期相关热潮红并改善情绪的传闻和有限的临床证据，人类已经使用黑升麻达几个世纪。黑升麻中的一种营养物N-甲基5-羟色胺(NMS)令人关注，因为关于这种成分的现有数据为以下主张提供了一些支持，即，某些黑升麻提取物可有益于改善热潮红。参见，例如，Powell等人2008J.Agric.Food Chem.56:11718。

5-羟色胺(5-HT)受体参与体温调节(特别是5-HT₇异构体；图1A)，且人类中的临床试验表明：选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)有效治疗热潮红的症状。这些发现证明：5-羟色胺信号传导在体温调节中有一些重要性。有趣的是，相较于其它5-HT受体，NMS优先结合5-HT₇受体；且它激活5-HT₇受体的亲和力(EC₅₀＝22nM；图1B)等价于5-羟色胺自身的亲和力。然而，单一黑升麻剂量中可能的NMS浓度(80mg黑升麻提取物中～30ppm)仅能递送2.4μg NMS。在60-kg人类女性中，该剂量大致转化为最高0.18nM的浓度。该NMR浓度对结合5-HT₇足够高，但它可能不足以独立地对5-HT₇(图1B)或5-HT转运体(SERT；图1C)产生功能性作用。因为黑升麻提取的效率在生产批次之间可不同，所以该剂量问题可为临床研究中利用黑升麻时观察到的混合结果提供一些解释。此外，黑升麻提取物被标准化为黄肉楠碱含量，而非NMS。

减轻绝经期症状所需的NMS剂量很可能高于黑升麻所能提供的剂量，因此，本领域需要能用于改善绝经期症状(例如热潮红)的NMS天然来源。

发明详述

依照本发明，已发现：Zanthoxylum piperitum(通常被称为日本辣椒)种子(包括其成熟种子)含有NMS前体N-甲基5-羟色胺5-O-β-葡糖苷(“NMS-葡糖苷”)，其以充足的浓度存在并以充足的效率被代谢以提供有效量的NMS用于改善绝经期症状，包括热潮红/潮热。因此，本发明的一方面是日本辣椒种子或含有NMS-葡糖苷的日本辣椒种子提取物在食品补充剂或营养品中用于控制绝经期症状的用途。

因此：

a)日本辣椒种子或者含有NMS或NMS-葡糖苷的日本辣椒种子提取物或者其混合物；或者

b)NMS-葡糖苷

c)含有NMS或NMS-葡糖苷的其它植物来源或其混合物

d)无论何种来源的能够被代谢成NMS的其它NMS前体

可以以有效量单独或以混合物使用以减轻绝经期症状(包括热潮红)，或者可与NMS组合使用以使所述组合为改善热潮红的有效量。

可用于本发明中的NMS可以是植物制品(例如提取物)的一部分。一种潜在来源是黑升麻，但日本辣椒由于已知较高浓度的NMS前体而成为优选的来源。或者，可使用无论何种来源的合成NMS。

因此，本发明还提供

a)无论何种物种的任何植物提取物，其含有最低有效剂量的NMS、NMS前体；或其混合物；

b)包含最低有效剂量的NMS或NMS前体的组合物的用途，无论NMS是否来源于植物提取物；

c)植物提取物的用途，所述植物提取物天然含有NMS或NMS前体，但低于有效剂量，其中已加入额外的NMS或前体以使NMS或前体的总量达到有效量；

d)上述的组合；

e)任意上述a-d与有益于控制绝经期、围绝经期和/或绝经后期症状的其它成分的组合的用途。

本发明还提供预防、治疗、改善和/或降低绝经期、围绝经期和/或绝经后期症状的严重性或发生的方法，所述方法包括：

施用有效量的成分至经历所述症状的女性或绝经期、围绝经期和/或绝经后期的女性，所述成分选自：NMS-葡糖苷、NMS、Zanthoxylumpiperitum种子、包含NMS-葡糖苷的Zanthoxylum piperitum种子提取物、草酸NMS、NMS氢氯化物、NMS二氢氯化物；和其混合物。

本发明还涉及植物提取物(优选地黑升麻和日本辣椒)的混合物，其共同含有有效量的至少一种选自以下的活性成分：NMS、NMS前体或其混合物。

本发明的另一方面是食品补充剂或营养品，其中有效对抗绝经期症状的唯一活性成分是NMS、NMS前体或其混合物。

日本辣椒Zanthoxylum piperitum含有为黑升麻多50倍的NMS(以其前体形式，例如NMS-葡糖苷)，其也可被用作本发明的一部分。因此，Zanthoxylum可作为NMS的可行替代来源。

本发明的另一方面是NMS、NMS-葡糖苷或其它NMS前体(单独地或以混合物)作为营养品或药物组合物中针对热潮红的唯一成分的用途。

还考虑了Zanthoxylum提取物与葛藤和大豆提取物，或染料木黄酮组合的用途。

定义

当在本文中使用时，应用下述定义：

“NMS前体”是吸收后转变成NMS的化合物。该定义中包括的具体化合物为：草酸NMS、NMS氢氯化物、NMS二氢氯化物和NMS葡糖苷。“其它NMS前体”指的是除了NMS-葡糖苷之外的NMS前体。

“预防”并非旨在保证所有可能的热潮红不发生。相反，它被用来表示经历热潮红的风险降低，发病率降低，严重性减轻，且/或一般而言的与它们有关的不适得到改善。它还可被用于表示：经历热潮红之间的时间间隔增加。

“围绝经期”是绝经期(停止月经期至少12个月)之前的一段时间，其具有一个或更多个如下特征：雌激素水平不均衡地上升/下降、月经周期不排卵、经历绝经期症状(例如热潮红、睡眠问题、情绪变化、骨质疏松或阴道干燥)但仍然经历月经周期。这通常出现在40多岁女性中。

“绝经期”是女性不再有月经期的点。卵巢已经停止产生卵以及产生大部分其雌激素。当女性已连续12个月无月经期时，即诊断为“绝经期”。

“绝经后期”：绝经期之后的时间。当女性已一整年无月经期时，她被认为处于绝经后期。

附图简述

图1.N-甲基5-羟色胺(NMS)可通过5-HT₇受体减轻热潮红并可通过抑制5-羟色胺摄取改善情绪。A)在野生型(WT)动物中，当5-HT₇受体被激活时，其降低体温；但在5-HT₇敲除(KO)动物中，5-HT₇激动剂不降低体温(Hedlund等人,2004)。B)NMS最大程度激活5-HT₇受体出现在50-100nM且EC₅₀为～22nM。C)NMS最大程度抑制5-羟色胺再摄取转运体出现在1-10M且IC₅₀为～500nM(亲和力比百忧解(Prozac)低100倍；Powell等人,2008)。

图2.评估膳食NMS对绝经期动物模型中的热潮红和情绪相关行为的影响的研究设计。使动物经受手术诱导的绝经期(卵巢切除术；OVX)并饲喂含不同水平NMS的膳食。然后，检测动物在开放场地的活动活性、在高架十字迷宫(elevated plus maze)上的焦虑状行为和在游泳试验中的抑郁状行为。然后利用静脉内(i.v.)降钙素基因相关肽(CGRP)诱导热潮红并监测皮肤温度。CGRP挑战后2小时，收集组织。缩略语：s.c.，皮下；st.，直身体重换算(straight body weight conversion)；BSA，体表面积换算；BC 540，黑升麻商业剂量；cAMP，环腺苷单磷酸；V_max，酶反应的最大速度；SERT，5-羟色胺转运体；IC₅₀，最高半抑制浓度；I_max，最高抑制浓度。

图3.在实验诱导的热潮红期间，皮肤温度的代表性原始数据和基线-校正数据。未接受膳食处理的动物(0ug/kg/d NMS)具有最高基础温度和超过它们的计算基线的最高CGRP反应。通过其膳食接受0.48或18.5ug/kg/dNMS的动物展示出比未经处理的对照更低的基础温度和更低的CGRP反应。接受皮下雌二醇且不接受膳食NMS的动物(正对照)具有最低的基础温度和最低的CGRP反应。

图4.膳食NMS降低了基线皮肤温度并减弱了CGRP诱导的热潮红反应。与未经处理的对照相比，接受18.5ug/kg/d NMS的组具有降低的基础皮肤温度。当利用重复测量ANOVA分析基线校正数据并利用单向ANOVA分析曲线下面积时，检测到NMS对热潮红反应的类似效果。将不具有与其相关的日内(within-day)对照的处理组从分析中除去。统计参数在图中。误差线代表平均数标准误差(SEM)。在Tukey’s事后检验中，不共有共同字母的处理彼此具有显著性差异(p<0.05)。

图5.N-甲基5-羟色胺(NMS)提高了去卵巢雌性大鼠中的循环(血浆)雌二醇水平，这暗示：NMS调节17β-雌二醇的非卵巢合成和/或分泌。A)膳食补充NMS以剂量依赖性方式增加血浆雌二醇。补充雌二醇的动物具有最高水平的血浆雌二醇。B)日内对照数据。将补充雌二醇组(较高)和未补充雌二醇组(较低)的ANOVA参数插入每幅图中。在Tukey事后检验中，不共有共同字母的处理彼此具有显著性差异(p<0.05)。误差线代表SEM。

图6.在切除卵巢雌性大鼠中，膳食NMS未改变体重且未使子宫增重(uterotrophic)。A)补充NMS组和对照膳食组之间无平均体重差异；与所有其它组相比，在整个实验过程中，植入(implant)雌二醇的动物具有显著降低的体重。B和C)当贯穿研究或在研究结束时检验时，作为原始重量百分比的重量变化在膳食处理组之间无差异，例外是植入雌二醇的动物。D)补充80天后，NMS未改变子宫重量；与切除卵巢对照和所有补充NMS的组相比，植入雌二醇的动物具有显著较高的子宫重量。在适当情况下，通过重复测量ANOVA或单向ANOVA判定组之间的显著性差异(p<0.05)，随后进行Tukey事后检验(***，p<0.001)。当检测到显著的主效果时，将ANOVA参数插入每幅图中。误差线代表SEM。

图7.膳食NMS未改变切除卵巢雌性大鼠中的情绪行为测量。A)在强迫游泳试验(FST；总试验时间为600s)的第二阶段期间，植入雌二醇的动物不动的时间较少(抗抑郁状行为)。B)在FST的第二阶段期间，攀爬时间在组之间无显著差异。C)在开放场地(用于焦虑状行为和运动的试验)，在30分钟的试验期间，在场地(arena)中行进的总距离在组之间无差异。D)在高架十字迷宫中(用于焦虑状行为的试验)所有组中的总探索行为都低，且在开放臂花费的时间(镇静行为)在组之间无差异。通过单向ANOVA和随后的Tukey’s事后检验(*，p<0.05)判定组之间的显著性差异(p<0.05)。当检测到显著的主效果时，将ANOVA参数插入各图中。误差线代表SEM。

图8.用于评估来自碾磨的Zanthoxylum种子的膳食NMS-葡糖苷对绝经期动物模型中的热潮红和情绪相关行为的影响的随访研究设计。如第一研究(图2)，使动物经受手术诱导的绝经期(卵巢切除术；OVX)。在该第二研究中，饲喂一些动物重复2次剂量NMS的膳食，同时饲喂其它动物碾磨的Zanthoxylum种子以提供等效剂量的NMS-葡糖苷。然后，检验动物在开放场地的运动活性、在高架十字迷宫上的焦虑状行为和在游泳试验中的抑郁状行为。然后利用静脉内(i.v.)降钙素基因相关肽(CGRP)诱导热潮红并监测皮肤温度。CGRP挑战后2小时，收集组织。

图9.来自碾磨的Zanthoxylum种子的膳食NMS-葡糖苷以类似于雌二醇和NMS的方式减弱了CGRP诱导的热潮红反应。A)重复测量ANOVA检测到：接受Zanthoxylum种子的动物具有降低的热潮红反应，其与未经处理的对照显著不同，但等效于给予雌二醇或等效剂量的化学合成草酸NMS的动物。B)当利用单向ANOVA分析曲线下面积时，检测到了对热潮红反应的类似效果。统计参数在图中。误差线代表平均数标准误差(SEM)。在Tukey’s事后检验中，不共有共同字母的处理彼此具有显著性差异(p<0.05)。

图10.类似于第一研究，随访研究证明：Zanthoxylum种子和NMS未改变情绪行为测量。在A)开放场地(用于焦虑状行为和运动的试验)、B)高架十字迷宫(用于焦虑状行为的试验)或C)强迫游泳试验(用于抑郁状行为的试验)中，未检测到显著处理效果。误差线代表SEM。

图11.来自Zanthoxylum种子的膳食NMS-葡糖苷未使切除卵巢雌性大鼠的子宫增重，但可已改变体重。A)类似于第一研究，Zanthoxylum种子和NMS未改变子宫重量，但正如预期，接受雌二醇的动物具有比切除卵巢对照和所有其它组显著更高的子宫重量。B)经过一段时间，作为原始重量百分比的重量变化在对照和补充辣椒组或补充NMS组之间存在差异。与所有其它组相比，在实验过程中，植入雌二醇的动物具有显著较低的体重。C)然而，如同第一研究，当在研究结束时检验时，作为原始重量百分比的总重量变化在膳食处理之间无差异，例外是植入雌二醇的动物。在适当情况下，通过重复测量ANOVA或单向ANOVA判定组之间的显著性差异(p<0.05)。在Tukey’s事后检验中，不共有共同字母的处理彼此具有显著性差异(p<0.05)。为了简化的目的，将ANOVA参数从(B)和(C)中去除。误差线代表SEM。

此处报告的研究聚焦于膳食NMS和NMS-葡糖苷对绝经期动物模型中的热潮红反应和情绪相关行为的影响。如图2和图8中的研究设计所示，使动物经受手术诱导的绝经期并饲喂含不同水平NMS或NMS-葡糖苷的膳食。我们检验了被补充动物在开放场地的运动活性、在高架十字迷宫上的焦虑状行为和在游泳试验中的抑郁状行为。然后，我们实验诱导了热潮红反应并监测动物的皮肤温度变化。这项工作的总体目标是为NMS或NMS-葡糖苷作为膳食补充剂用于绝经期女性，或经历绝经期症状的围绝经期或绝经后期阶段的女性、或期望降低经历所述症状的风险的女性提供支持数据。

NMS、NMS-葡糖苷或其它NMS前体的植物来源

可用作NMS、NMS-葡糖苷和/或其它NMS前体的来源的植物包括：Zanthoxylum物种，例如Z.piperitum、Z.simulans、Z.bungeanum、Z.schinifolium、Z.nitidum、Z.rhetsa、Z.alatum、Z.acanthopodium和/或Z.americanum。优选的来源是Z.piperitum.。

此外，还已知柑橘类植物含有NMS前体，因此也可以使用Citrusbergamia(佛手柑)、柠檬、橙子、橘子(mandarin orange)、番石榴蜜柑(chinotto)、香橼。柑橘类植物中的化合物可发现于叶子、皮、内果皮和种子中。

也可以使用Collema属的地衣，包括C.cristatum、C.callopismum、C.flaccidum和C.fuscovirens。

可通过简单地挤压、研磨或粉化来制备种子以供使用。可根据本领域众所周知的方法制造提取物，例如，通过(an)利用溶剂(例如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二乙醚、正己烷、二氯甲烷)，或利用超临界流体(例如二氧化碳(纯净的或与其它溶剂例如醇混合)或氧化二氮提取；(b)水蒸馏以获得精油；或(c)利用热气(例如氮气)提取/蒸馏。

根据本发明的种子的摄取不同于仅仅作为香料或调味品(例如许多亚洲或受亚洲影响的(Asian-inspired)食物菜肴中所使用的)的种子的摄取，因为本发明考虑在缺乏伴随(accompanying)食物的情况下使用NMS-葡糖苷。因此，本发明明确排除与食物混合的NMS-葡糖苷或NMS-葡糖苷前体(例如在加香料的餐食或小吃中)的摄取。

剂量

成年人的每日剂量中需要存在的NMS“有效剂量”为至少5微克至225毫克、优选地50微克至100毫克；更优选地100微克至75毫克。或者，有效剂量为每天至少5、10、25、50、100、200、250、500、750、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000或4500微克。或者，所述量为每天至少500微克，且优选地更高。

对于日本辣椒种子，“有效剂量”为每天50-20000mg种子；优选地每天约80-2500mg种子或更高。

对于NMS-葡糖苷，成年人的每日剂量中应该存在的“有效剂量”为至少5微克至225毫克、优选地50微克至100毫克；更优选地100微克至75毫克。或者，有效剂量为每天至少5、10、25、50、100、200、250、500、750、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000或5500微克。或者，所述量为每天至少600微克，且优选地更高。

对于其它NMS-前体，有效量将被计算为产生有效量的NMS(如上所述)所需前体的量。

可使用带有质谱检测的液相色谱证实NMS和NMS-葡糖苷的含量。可执行类似于Yanase等人,2010中的提取方法。

可以单次剂量或可在一整天中以多次较小剂量(例如每天2次、每天3次)或以另一种方便的剂量方案摄取如前所述的活性成分的每日剂量。推荐定期消耗，即持续至少一周，优选地持续至少一个月，更优选地持续能够被称为“长期”的时间段，即长于一个月的持续时间。

制剂

根据本发明的膳食补充剂和营养品组合物可以是任何适于施用至人类的草本制剂(galenic)形式，尤其是任何通常用于经口施用的形式，例如，固体形式，例如片剂、丸剂、颗粒、糖衣丸、胶囊和泡腾制剂(例如粉末和片剂)，或液体形式，例如溶液、乳剂或悬浮液例如饮料、糊剂和油质悬浮液。可将糊剂封装在硬壳或软壳胶囊中，其中所述胶囊的特点为：例如(鱼、猪、家禽、奶牛)明胶、植物蛋白或木质磺酸盐的基质。其它应用形式的实例是用于经皮、肠胃外或可注射施用的形式。膳食补充剂和营养品组合物的形式可以为控释(缓释)制剂。

根据本发明的膳食和营养品组合物还可含有保护性水胶体(例如树胶、蛋白质、改性淀粉)、粘合剂、成膜剂、包封剂/材料、壁/壳材料、基质化合物、包衣、乳化剂、表面活化剂、增溶剂(油、脂肪、蜡、卵磷脂等)、吸附剂、载剂、填充剂、共-化合物(co-compound)、分散剂、润湿剂、加工助剂(溶剂)、流化剂、掩味剂、增重剂、成胶剂(jellyfyingagent)、凝胶形成剂、抗氧化剂和抗微生物剂。

提供下列非限制性实施例以更好阐释本发明。

实施例

方法

动物达到约60天龄，在整个研究期间对其施用特殊膳食(至约160天龄)。由Dyets Inc.(Bethlehem,PA)配制并提供膳食，所述膳食基于改良的AIN-93G膳食。随意饲喂这些膳食。到达后2周，在约80天龄，切去动物的卵巢，允许其恢复3周，然后对其施用限定的膳食。在第一研究中，这些膳食含有0、0.08、0.48、3.2、18.5、185或3700μg/kg/天的NMS二氢氯化物(图2)。在第二次随访研究中，膳食不含NMS(对照)、包含草酸NMS(18.5或55.5g/kg/d)、或包含提供等效剂量的NMS-葡糖苷的量的碾磨的Zanthoxylum种子(18.5或55.5g/kg/d；图8)。使用带有质谱检测的液相色谱证实NMS和NMS-葡糖苷的含量。提取方法类似于Yanase等人,2010的那些。

在第一行为评估(开放场地)之前，持续2周饲喂所有膳食。正对照动物接受填充有晶体状17β-雌二醇和胆固醇混合物的5.0mm皮下硅橡胶胶囊植入物(25％，内径0.058英寸，内径0.077英寸；Dow Corning#508-006)。然后检验动物的运动活性(开放场地)并在间隔两周的两个行为试验(高架十字迷宫和游泳试验)中评估情绪。最终行为任务(游泳试验)后2周，麻醉动物并检验它们对实验诱导的热潮红的生理反应。温度监测完成后，收获组织，同时动物仍然被麻醉。

卵巢切除术。到达后2周，通过吸入异氟醚麻醉每只动物，剃去背部中腰区域的毛并利用外科擦洗液(scrub)、碘和醇擦洗。然后，将动物放置在覆盖有无菌布/垫的温热垫上，腹部躺卧且尾巴朝向外科医生。在胸腔的尾部边缘和尾巴的基部中间开2-3cm的背部中线皮肤切口。在右侧和左侧脊髓和腹部中线之间距离约1/3处在肌肉壁内开5.5-10mm长的单个横切口。穿过肌肉壁从腹内去除卵巢和输卵管。将止血钳夹在输卵管和子宫之间的子宫脉管系统周围并用可溶解的缝合线结扎子宫脉管系统。利用穿过卵巢附近的输卵管的单切口，移除每个卵巢和部分输卵管。移除止血钳并将剩余组织放回腹膜腔中。以类似方式移除另一侧的卵巢。不缝合肌肉切口。使用无菌创伤夹使皮肤伤口闭合。每天监测动物的感染迹象或发病。

动物处理。在行为分析之前，持续4天每天处理大鼠。这包含：将动物从其笼子中温和地移出，并保持它在实验者膝部的毛巾上无拘无束，从而允许动物探索。这使动物适应实验者的处理。所有行为试验发生在邻近聚居(colony)室的房间，在试验之前使动物过夜适应试验室。

开放场地任务。在开放场地检验动物以测量总体运动活性和基础焦虑状态。在开放场地试验中，将每只大鼠放在由测量为100×100×40cm的场地组成的新环境中。将大鼠放置在室(chamber)中部并用数码相机记录开放场地行为持续30分钟并通过软件(AnyMaze,Stoelting Co.,Inc)测量。分析下述参数：a)总行进距离；b)在中心的时间；c)中心进入；和d)排泄粪便的次数。

高架十字迷宫任务。在高架十字迷宫上检验动物以测量焦虑相关行为。将十字迷宫升高至超过地板～85cm，其由具有相同尺寸(50×10cm)的2个开放臂和2个闭合臂组成。闭合臂被40cm高的壁包围，臂由黑色丙烯酸厚片构成，其从中心平台(10×10cm)发散以形成十字(LafayetteInstruments,Lafayette,IN)。将每只大鼠放置在中心平台中并面对开放臂中的一个，然后用视频捕获软件(AnyMaze)在5分钟的试验期期间记录其行为。利用视频分析(AnyMaze)评估在开放和闭合臂上的时间量和进入开放和闭合臂的次数。此外，实验者还通过花费在后腿站起(rearing)、修饰(grooming)上的时间，和出现伸展姿势(stretch-attend posture)的次数和头越过开放臂的边缘的次数对动物实时评分。

游泳试验。在游泳试验中检验每只大鼠的抑郁状行为。在连续2天内进行该试验，因为它是对感知到的无法逃脱处境的适应性反应的测量。第一个试验为使动物意识到这是无法逃脱处境，第二个试验测量动物的消极应对程度，其源自不愿意保持在无法逃脱处境中努力。典型的抗抑郁剂限制消极应对(不动性)的量并提高积极应对(游泳/攀爬)的量。在第一天(0800h-1300h)，通过下述方法使动物适应试验：将它们放置在填充30cm新鲜水(25℃)的有机玻璃圆柱状容器(45cm×20cm)中持续15分钟，然后用毛巾干燥它们并使其返回它们的居住笼中。在第二天(24小时后)，如下进行试验：总游泳时间为5分钟，然后用毛巾干燥大鼠并使其返回它们的居住笼中。通过固定在圆柱体上方的天花板上并与笔记本电脑相连的数码摄像机记录这两个试验。通过行为软件(Anymaze,Stoelting Co.)实时测量花费在游泳和不动上的总时间，并由远离捕获视频的盲实验者在事后评分。游泳被定义为：不破坏水面的前肢和后肢的运动。不动性被定义为：缺乏除了动物保持其头部在水之上所需的轻微运动之外的任何运动。攀爬被定义为：破坏水面的前肢快速运动。

热潮红研究。利用腹膜内共注射尿烷(750mg/kg)和α-氯醛糖(60mg/kg)来麻醉动物。这种麻醉是优选的，因为它通常不导致与利用异氟烷、戊巴比妥或氯胺酮/甲苯噻嗪时观察到的相同程度的体温过低。此外，异氟烷已显示出抑制CGRP诱导的热潮红。将热敏电阻器探针(ADIInstruments,Colorado Springs,CO)绑在一只后足的足底面。40分钟后，在麻醉诱导的体温过低已稳定后，记录基础皮肤温度。然后，在实验的剩余部分期间，以5秒的间隔监测温度。然后，通过尾静脉注射溶解在盐水中的降钙素基因相关肽(CGRP；10μg/kg,i.v.)。由于仪器通量的限制，同时最多检测8只动物。笼伴(cage mate)总是一起检测以避免单房(single-housing)压力和潜在的压力激素对体温的影响。因此，在任何一个给定的日内，仅能检测4组。这导致10个8只动物的群组(cohort)[每天一个8只动物的集合，持续2周(10个工作日)]以及一些处理组缺乏日内对照。这种一些组缺乏日内对照随后对热潮红反应的最终分析造成干扰，因此将这些组从热潮红分析中除去。

结果

如图1-11中所详述：

A)来自碾磨的Zanthoxylum种子的NMS-葡糖苷以类似于雌激素(即，雌二醇)和化学合成NMS的方式减弱了热潮红反应。

B)Zanthoxylum种子不影响总体重量增加、子宫生长或情绪相关行为。这些发现类似于利用化学合成NMS的那些。

C)当使用计算人等效剂量(HED)的体表面积(BSA)法时，NMS关于体温调节效应的HED为约150-840μg/d。数据表明：优化给定产品中的NMS含量能够提供绝经期热潮红的减轻而无子宫生长相关的风险。

D)在随访研究中，碾磨的日本辣椒种子中的NMS-葡糖苷等效于化学合成NMS，且当使用BSA计算时，其HED＝150-540μg/d(0.7-3.2g种子/d)。

E)NMS使非子宫雌二醇分泌增至3倍，这可解释来自Zanthoxylum种子的NMS-葡糖苷的一些效应。

Claims

1.有效量的n-甲基5-羟色胺葡糖苷(“NMS-葡糖苷”)或NMS-前体在预防或改善绝经期相关热潮红中的用途。

2.根据权利要求1的用途，其中NMS-葡糖苷或NMS-前体存在于植物来源。

3.根据权利要求1或2的用途，其中所述植物来源是Zanthoxylumpiperitum种子或Zanthoxylum piperitum种子提取物。

4.根据权利要求1-3中任一项的用途，其中所述Zanthoxylum piperitum种子是成熟种子。

5.根据权利要求1-4中任一项的用途，其中NMS-葡糖苷存在于食品补充剂或营养品中。

6.根据权利要求1-5中任一项的用途，其中还使用n-甲基5-羟色胺(“NMS”)。

7.减少绝经期热潮红的频率或减轻绝经期热潮红的严重性的方法，其包括：向有此需要的女性施用有效量的NMS-葡糖苷或NMS-前体或它们的混合物。

8.根据权利要求7的方法，其中所述NMS-葡糖苷来自植物来源。

9.根据权利要求8的方法，其中所述NMS-葡糖苷存在于Zanthoxylumpiperitum种子或Zanthoxylum piperitum种子提取物中。

10.根据权利要求9的方法，其中所述Zanthoxylum piperitum种子是成熟种子。

11.根据权利要求7的方法，其中NMS-葡糖苷存在于食品补充剂或营养品中。

12.根据权利要求7的方法，其中还施用NMS。

13.天然地含有NMS-葡糖苷或NMS的植物的提取物，其已被标准化为含有有效量的NMS-葡糖苷或NMS以使其减少绝经期相关热潮红的发生。

14.包含NMS-葡糖苷的食品补充剂或营养品。

15.根据权利要求14的食品补充剂，其还包含NMS。