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CN104684554B - 用于治疗疼痛的氮杂吲唑或二氮杂吲唑型衍生物 - Google Patents

用于治疗疼痛的氮杂吲唑或二氮杂吲唑型衍生物 Download PDF

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CN104684554B
CN104684554B CN201380049411.3A CN201380049411A CN104684554B CN 104684554 B CN104684554 B CN 104684554B CN 201380049411 A CN201380049411 A CN 201380049411A CN 104684554 B CN104684554 B CN 104684554B
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Abstract

本发明涉及如下式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其互变异构体，或其立体异构体或任何比例的立体异构体混合物，例如对映异构体混合物，尤其是外消旋混合物；其用于治疗疼痛。

Description

用于治疗疼痛的氮杂吲唑或二氮杂吲唑型衍生物
技术领域
本发明涉及用于治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛的氮杂吲唑和二氮杂吲唑稠合的双环衍生物。
背景技术
疼痛是用于描述生物接受的且大脑感知的异常感觉和痛苦的术语。这是与组织损伤有关的不愉快的感觉和情绪体验，或者依据该损伤被描述的现在的或潜在的不愉快的感觉和情绪体验。疼痛可以是急性的或慢性的并且与各种病理学相关。
已经描述了疼痛源的数种机制。
—伤害性疼痛：这是对侵害身体响应的警报信号，例如由烧伤、创伤、挫伤、带状疱疹、手术或拔牙引起的疼痛。信息被发送至大脑以提醒其该攻击。
—炎性疼痛与急性或慢性炎症相关，因为在感染、关节炎或克罗恩氏病中可以发现炎性疼痛。
—神经性疼痛：其是神经损伤后的疼痛。该损害引起外周或中枢神经系统的故障。其可以是中枢源，例如脑损害或破坏后的神经性疼痛，或者外周神经性疼痛例如由于腰椎间盘突出导致的坐骨神经痛。
—原发性疼痛：其是起因很难解释的疼痛综合征。测试是正常的，但疼痛是存在的。该疼痛存在于表现出，例如功能性综合征如纤维肌痛或肠道易激综合征的患者中。
—精神性疼痛：其是精神源(丧亡、抑郁、创伤等)的疼痛。其尤其是抑郁症中发现的慢性疼痛。
疼痛有时是混合源的：伤害性和炎性疼痛，例如癌症中的疼痛。
镇痛药或止痛药是用于减轻疼痛的药物。世界卫生组织(WHO)将其分为三个级别：
—1级包括非阿片类镇痛药(扑热息痛、抗炎药)。它们被用于轻度至中度的疼痛；
—2级包括弱阿片类(例如可待因)。它们被用于中度至重度疼痛，或者当1级止痛药对疼痛减轻不起作用时；
—3级包括强阿片类(例如吗啡)。这些药物被用于急性疼痛，或者当2级镇痛药对疼痛减轻不起作用时。
其它种类的药物也用于治疗某些疼痛，例如用于神经性疼痛的神经松弛药或抗抑郁药，或者用于偏头痛的曲普坦类。
不管WHO镇痛药的级别，疼痛的类型或起源，考虑到目前治疗的有限功效或副作用，发现用于疼痛的新治疗的需要是不可避免的。例如，根据WHO的I级镇痛药(其包括扑热息痛、阿司匹林、非类固醇类抗炎药(NSAID)和环加氧酶抑制剂)通常对剧烈疼痛无效，但是耐受性良好，虽然可能发生胃部副作用。然而，2型环加氧酶选择性抑制剂，如罗非考昔()已经显示出严重的心血管危险。阿片类例如吗啡及其衍生物对某些极性疼痛或严重的慢性疼痛有效，但是可以在治疗初期引起困倦、恶心和呕吐，然后在服药过量中引起便秘或呼吸抑制。重复或长期使用阿片类可以导致对镇痛效果的耐受(其要求更高剂量，接近毒性剂量)、依赖性和中止治疗的戒断综合征。阿片类及其衍生物对低至中等强度的神经性疼痛和慢性疼痛不是非常有效。
蛋白激酶是在细胞信号传导中起重要作用的酶。它们参与数生理过程例如细胞增殖、有丝分裂、分化、细胞侵袭和移动，和凋亡。
由蛋白激酶控制的生理机制的失调对许多病症(尤其包括癌症和疼痛)的出现和发展至关重要。
在本发明范围内特别感兴趣的是，原肌球蛋白(tropomyosine)相关激酶(Trk)的酪氨酸受体激酶已经与急性或慢性疼痛相关。Trk是参与神经系统发展的受体酪氨酸激酶。Trk受体家族由三个成员组成：TrkA、TrkB和TrkC，其由称为神经营养因子的特定配体激活。已经描述了Trk蛋白及其相关的配体在疼痛发展中起作用(Sah等人.2003Nat Rev DrugDiscovery.2:460-472)。
例如，在先天性对疼痛不敏感的患者中已经描述了TrkA受体基因中的突变(Indo等人,1996,Nat Genet.13:485-488；Indo等人,2001,Hum Mutations,18:308-318)。TrkA在伤害感受性神经元(传达疼痛信息的神经元)中表达，并且影响参与疼痛信息传递的钠通道的电生理特性(Fang等人,J.Neurosci.25:4868-4878)。数篇综述文章强调TrkA及其配体神经生长因子(NGF)在疼痛初期在伤害感受性神经元水平，特别是在炎性疼痛状态，例如风湿性疾病如骨关节炎、下背痛、腰椎间盘突出和神经根压迫中的作用(Hefti等人,2006；Trends Pharmacol Sci.27:85-91；Pezet和McMahon,2006,Ann Rev Neurosci.29:507-538；Cheng和Ji,2008,Neurochem Res.33:1970-1978；Seidel等人2010,Semin ArthritisRheum.40:109-126)。
TrkB及其配体脑衍生神经营养因子(BDNF)也已经与慢性疼痛相关。BDNF在初级感觉神经元中合成并且顺行性转运至脊髓中的初级传入神经的中心电端(Obata等人,2006,Neurosci Res.55:1-10)。由脊髓中小神经胶质细胞合成的BDNF引起神经元阴离子梯度的变化，导致神经损伤之后的疼痛传递的去抑制(Coull等人,2005,Nature,438:1017-1021)。该结果表明阻断BDNF/TrkB通路对治疗神经性疼痛有用。脊椎上的BDNF还在疼痛易化中起作用(Guo等人,2006,J Neurosci.26:126-137)。在纤维肌痛中还已经报导了增加的BDNF血清浓度(Laske等人,2006,J Psychiatric Res,41:600-605)。已经综述了BDNF/TrkB信号传导在疼痛调节中的作用(Merighi等人,200885:297-317)。
可以通过可溶性Trk受体或中和抗体阻断TrkA或TrkB通路。这种策略已经在动物中证实对NGF/TrkA通路有效，其中其减少与骨癌相关的疼痛(Sevcik等人,2005,Pain 115:128-141)或非炎性关节痛(McNamee等人,2010Pain 149:386-392)。他尼珠(Tanezumab)是一种对抗NGF的重组人源化单克隆抗体，最近被测试用于治疗人类中与数种病症相关的急性和慢性疼痛(Cattaneo,2010,Curr Opin Mol Ther 12:94-106)。然而，该治疗必须经重复的静脉内输液而施用。其它形式的治疗，例如具有口服生物利用度的小Trk抑制剂分子是非常需要的。
文献中报道的Trk抑制剂的数量是有限的，而且到目前为止还没有一个对抗疼痛的药物，虽然Trk抑制剂已经在临床前实验模型中，尤其是骨癌疼痛模型中(Ghilardi等人.2010,Mol Pain 6:87)和慢性炎性疼痛模型中(Winckler等人.2009,8th InternationalAssociation for the Study of Pain Research Symposium,Poster#348)证明了镇痛功效。
因此需要能够抑制Trk的化合物。
Wang等人的文章(Expert Opin.Ther.Patents 2009,19(3),305-319)综述了从2002年起关于Trk抑制剂及其治疗癌症和疼痛的用途的专利申请。所述的化合物没有一个是氮杂吲唑或二氮杂吲唑化合物。
WO 2008/112695描述了作为蛋白激酶(例如Trk)抑制剂的6位被取代的5-氮杂吲唑或5,7-二氮杂吲唑型化合物。然而，在该申请中没有呈现证明抑制任何蛋白激酶，特别是蛋白激酶Trk的生物结果。而且，该申请从未指明这些化合物可以治疗或预防疼痛。
WO 2004/113303尤其描述了作为蛋白激酶JNK抑制剂的6位被取代的5-氮杂吲唑型化合物。该文献从未提及该类化合物还可以抑制蛋白激酶Trk。
WO 2007/023110尤其描述了作为蛋白激酶p38抑制剂的氮杂吲唑或二氮杂吲唑型化合物。该文献从未提及该类化合物还可以抑制蛋白激酶Trk。
WO 2008/089307描述了作为A5去饱和酶活性抑制剂的氮杂吲唑或二氮杂吲唑型化合物。该文献从未提及该类化合物还可以抑制蛋白激酶Trk。
发明内容
本发明化合物具有抑制或调节Trk蛋白的酶活性的性质。因此，所述化合物可以用作治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛的药物。
而且，根据本发明的化合物特别令人感兴趣，因为发明人能够表明它们抑制或调节一种以上Trk蛋白的活性。因此它们允许同时治疗数个起源的疼痛(例如，在癌症情况下观察的炎性疼痛联合伤害性疼痛)。
更特别地，本发明的目的因此是一种如下通式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其互变异构体，其立体异构体或任何比例的立体异构体混合物，例如对映异构体混合物，尤其是外消旋混合物，
其中：
-Y1和Y4各自彼此独立地代表CH基团或氮原子，
-Y2代表氮原子或CH或C-X-Ar基团，
-Y2代表氮原子或C-X-Ar或C-W基团，
条件是：
■Y1、Y2、Y3和Y4基团中至少一个且至多两个代表氮原子，
■Y2和Y4不能同时代表氮原子，
■当Y2＝C-X-Ar时，那么Y3代表氮原子或C-W基团，和
■当Y2＝CH或N时，那么Y3代表C-X-Ar基团，
-Ar代表芳基或杂芳基基团，其任选被选自卤原子、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)卤代硫代烷氧基、CN、NO2、OR11、SR12、NR13R14、CO2R15、CONR16R17、SO2R18、SO2NR19R20、COR21、NR22COR23、NR24SO2R25和R26NR27R28中的一个或多个基团取代，和/或任选稠合成杂环，
-X代表选自O、S、S(O)、S(O)2、NR4、S(NR4)、S(O)(NR4)、S(O)2(NR4)、NR4S、NR4S(O)、NR4S(O)2、CH2、CH2S、CH2S(O)、CH2S(O)2、SCH2、S(O)CH2、S(O)2CH2、CH2CH2、CH＝CH、C≡C、CH2O、OCH2、NR4CH2和CH2NR4的二价基团，
-W代表R5、SR5、OR5或NR5R6基团，
-U代表CH2或NH基团，其中一个或多个氢原子可以被(C1-C6)烷基基团取代，
-V代表C(O)、C(S)或CH2，
-n代表0或1，
-R1代表氢原子，或OR7或NR7R8基团，
-R2代表氢原子、任选被取代的杂环、NO2、OR9或NR9R10，
-R3、R4、R11至R25和R27至R28各自彼此独立地代表氢原子或(C1-C6)烷基基团，
-R5和R6各自彼此独立地代表氢原子或(C1-C6)烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的苄基基团，
-R7、R8、R9和R10各自彼此独立地代表氢原子或任选被取代的(C1-C6)烷基或(C3-C12)环烷基基团或任选被取代的杂环，并且
-R26代表(C1-C6)烷基，
其用于治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛。
在前述定义中，在它们形成稳定化合物的范围内，取代基或变量的所有组合是可能的。
并且，应当注意Y2和Y3中至少一个但只有一个代表C-X-Ar基团。
在一个优选的实施方案中，本发明的目的是一种如下通式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其互变异构体，或其立体异构体或任何比例的立体异构体混合物，例如对映异构体混合物，尤其是外消旋混合物，
其中：
-Y1和Y4各自彼此独立地代表CH基团或氮原子，条件是Y1和Y4中至少一个代表氮原子，
-Y2代表C-X-Ar基团，
-Y3代表C-W基团，
-Ar代表芳基或杂芳基基团，其任选被选自卤原子、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)卤代硫代烷氧基、CN、NO2、OR11、SR12、NR13R14、CO2R15、CONR16R17、SO2R18、SO2NR19R20、COR21、NR22COR23、NR24SO2R25和R26NR27R28中的一个或多个基团取代，和/或任选稠合成杂环，
-X代表选自O、S、S(O)、S(O)2、NR4、S(NR4)、S(O)(NR4)、S(O)2(NR4)、NR4S、NR4S(O)、NR4S(O)2、CH2、CH2S、CH2S(O)、CH2S(O)2、SCH2、S(O)CH2、S(O)2CH2、CH2CH2、CH＝CH、C≡C、CH2O、OCH2、NR4CH2和CH2NR4的二价基团，
-W代表R5、SR5、OR5或NR5R6基团，
-U代表CH2或NH基团，其中一个或多个氢原子可以被(C1-C6)烷基基团替换，
-V代表C(O)、C(S)或CH2，
-n代表0或1，
-R1代表氢原子，或OR7或NR7R8基团，
-R2代表氢原子、任选被取代的杂环、NO2、OR9或NR9R10，
-R3、R4、R11至R25和R27至R28各自彼此独立地代表氢原子或(C1-C6)烷基基团，
-R5和R6各自彼此独立地代表氢原子或(C1-C6)烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的苄基基团，
-R7、R8、R9和R10各自彼此独立地代表氢原子或任选被取代的(C1-C6)烷基或(C3-C12)环烷基基团或任选被取代的杂环，并且
-R26代表(C1-C6)烷基基团，
其用于治疗或预防疼痛。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“(C1-C6)烷基”是指包含1至6个碳原子的饱和直链或支链烃链。其可以为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基或己基基团。
术语“(C1-C6)烷氧基”是指经氧原子与分子的其余部分连接的(C1-C6)烷基链。可以提及的例子为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基或叔丁氧基基团。
术语“(C1-C6)硫代烷氧基”是指经硫原子与分子的其余部分连接的(C1-C6)烷基链。可以提及的例子为硫代甲氧基、硫代乙氧基、硫代丙氧基、硫代异丙氧基、硫代丁氧基或硫代-叔丁氧基基团。
术语“(C1-C6)卤代烷基”是指如上所定义的(C1-C6)烷基链，其中一个或多个氢原子被如上所定义的卤原子替换。特别地，其为三氟甲基基团。
术语“(C1-C6)卤代烷氧基”是指如上所定义的(C1-C6)烷氧基链，其中一个或多个氢原子被如上所定义的卤原子替换。特别地，其为三氟甲氧基基团。
术语“(C1-C6)卤代硫代烷氧基”是指如上所定义的(C1-C6)硫代烷氧基链，其中一个或多个氢原子被如上所定义的卤原子替换。特别地，其为三氟硫代甲氧基基团。
术语“(C3-C12)环烷基”是指包含3至12个碳原子且包含一个或多个环，特别是稠合环的环状烃系统。可以提及的例子为金刚烷基或环己基基团。
术语“芳基”是指芳香烃基团，其优选包含6至14个碳原子且包含一个或多个稠合环，例如苯基或萘基基团。有利地，其为苯基基团。
术语“杂芳基”是指包含5至7个环原子的单环芳香基团或者包含8至11个环原子的双环芳香基团，其中1至4个环原子为独立地选自硫、氮和氧原子的杂原子，且其中其它环原子为碳原子。杂芳基基团的例子包括呋喃基、噻吩基、吡啶基和苯并噻吩基基团。
术语“杂环”是指包含4至7个环原子的稳定单环，或者包含8至11个环原子的稳定双环，其可以是饱和或不饱和的，其中1至4个环原子为独立地选自硫、氮和氧原子的杂原子，且其中其它环原子为碳原子。可提及的例子为呋喃、吡咯、噻吩、噻唑、异噻唑、噁二唑、咪唑、噁唑、异噁唑、吡啶、哌啶、吡嗪、哌嗪、四氢呋喃、嘧啶、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、苯并呋喃、苯并噻吩、二氢吲哚、中氮茚、苯并噻唑、苯并噻吩基、苯并吡喃、苯并噁唑、苯并[1,3]二氧杂环戊烯、苯并异噁唑、苯并咪唑、色满、色烯、二氢苯并呋喃、二氢苯并噻吩基、二氢异噁唑、异喹啉、二氢苯并[1,4]二氧六环、咪唑并[1,2-a]吡啶、呋喃并[2,3-c]吡啶、2.3-二氢-1H-茚、[1,3]二氧杂环戊烯[4,5-c]吡啶、吡咯并[1,2-c]嘧啶、吡咯并[1,2-a]嘧啶、四氢萘、苯并[b][1,4]噁嗪。
在本发明上下文中，“任选被取代的”是指涉及的基团任选被一个或多个取代基取代，所述取代基可以特别地选自卤原子、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)卤代硫代烷氧基、CN、NO2、OR11、SR12、NR13R14、CO2R15、CONR16R17、SO2R18、SO2NR19R20、COR21、NR22COR23、NR24SO2R25和R26NR27R28，其R11至R28如上所定义。
在本发明中，“药学可接受”是指其用于药物组合物的制备时通常是安全的、无毒的，既不是生物学上也不是其它方面不合需要的，并且其适合于兽用和人类药用。
化合物的“药学上可接受的盐或溶剂化物”是指如本文定义的药学可接受的盐和溶剂化物，并且其具有母体化合物所需的药物活性。
本发明化合物用于治疗用途的可接受的盐包括本发明化合物常规的无毒盐，例如与药学上可接受的有机或无机酸形成的盐，或者与药学上可接受的有机或无机碱形成的盐。可提及的例子为衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸的盐，以及衍生自有机酸如乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硬脂酸和乳酸的盐。可提及的例子为衍生自无机碱如苏打、碳酸钾或氢氧化钙的盐，以及衍生自有机碱如赖氨酸或精氨酸的盐。
可以根据本领域技术人员熟知的常规化学方法，由包含碱性或酸性部分的本发明化合物和相应的酸或碱合成这些盐。
本发明化合物用于治疗用途的可接受的溶剂化物包括常规溶剂化物，例如在制备本发明化合物最后步骤中由于溶剂的存在而形成的盐。可提及的例子为由于水或乙醇的存在而形成的溶剂化物。
在本发明上下文中，“立体异构体”是指几何异构体或光学异构体。
几何异构体由在双键的取代基的不同位置导致，其可以具有Z或E构型。
光学异构体尤其由包含四个不同取代基的碳原子上的取代基的空间上的不同位置导致。该碳原子因此构成手性或非对称中心。光学异构体包括非对映异构体和对映异构体。彼此为镜像但不重叠的光学异构体为对映异构体。彼此不为镜像的光学异构体为非对映异构体。
在本发明上下文中，“互变异构体”是指通过质子转移，即通过氢原子迁移和双键位置的改变获得的化合物的结构异构体。化合物的不同互变异构体通常为可相互转化的并且在溶液中成比例处于平衡状态，其可以根据使用的溶剂、温度或pH而变化。
根据第一个实施方案，Y4＝N。
有利地，Y2＝C-X-Ar和Y3优选代表C-W基团。
特别地：
-Y1＝CH或N，有利地为CH，
-Y2＝C-X-Ar，
-Y3＝C-W，并且
-Y4＝N。
根据第二个实施方案，Y1和/或Y4代表氮原子。
在这种情况下，Y2和Y3优选不代表氮原子。
特别地：
-Y1和/或Y4＝N，
-Y2＝CH或C-X-Ar，并且
-Y3＝C-W或C-X-Ar。
特别地：
-Y1代表CH基团，
-Y4代表氮原子，
-Y2代表CH或C-X-Ar基团，并且
-Y3代表C-X-Ar或C-W基团，
条件是：
■当Y2＝C-X-Ar时，那么Y3代表C-W基团，并且
■当Y2＝CH时，那么Y2代表C-X-Ar基团。
有利地，X代表选自O、S、S(O)、S(O)2、NR4、CH2、CH2S、CH2S(O)、CH2S(O)2、NHS(O)2、SCH2、S(O)CH2、S(O)2CH2、S(O)2NH、CH2CH2、CH＝CH、C≡C、CH2O、OCH2、NR4CH2和CH2NR4的二价基团。
特别地，X代表选自S、S(O)、S(O)2、NR4、CH2、CH2S、CH2S(O)、CH2S(O)2、NHS(O)2、SCH2、S(O)CH2、S(O)2CH2、S(O)2NH、CH2CH2、C≡C、CH2O、OCH2、NR4CH2和CH2NR4的二价基团。
更特别地，X可以选自S、S(O)、S(O)2、CH2、CH2S、CH2S(O)、CH2S(O)2、NHS(O)2、SCH2、S(O)CH2、S(O)2CH2、S(O)2NH、CH2CH2、CH＝CH和C≡C。
特别地，X可以选自S、S(O)2、CH2、SCH2、S(O)2CH2、S(O)2NH、CH2S、CH2S(O)2、NHS(O)2、CH2CH2和C≡C。
X尤其可以选自S、S(O)、S(O)2、NR4、CH2、SCH2、S(O)CH2、S(O)2CH2、S(O)2NH、CH2CH2、C≡C、OCH2和NR4CH2；尤其选自S、S(O)2、CH2、SCH2、S(O)2CH2、S(O)2NH、CH2CH2和C≡C，其中这些基团中的第一个原子与C-X-Ar链的C原子相连。
X可以特别地为S、S(O)2、SCH2、S(O)2CH2、S(O)2NH、CH2S、CH2S(O)2或NHS(O)2，尤其为S、S(O)2、SCH2、S(O)2CH2或S(O)2NH，其中这些基团中的第一个原子与C-X-Ar链的C原子相连。
有利地，Ar代表杂芳基基团例如吡啶，或者芳基基团例如苯基，其任选被选自卤原子、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)卤代硫代烷氧基、CN、NO2、OR11、SR12、NR13R14、CO2R15、CONR16R17、SO2R18、SO2NR19R20、COR21、NR22COR23和NR24SO2R25的一个或多个基团取代；和/或任选稠合成杂环。
更特别地，Ar可以代表芳基基团例如苯基，其任选被选自卤原子、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)卤代硫代烷氧基、CN、NO2、OR11、SR12、NR13R14、CO2R15、CONR16R17、SO2R18、SO2NR19R20、COR21、NR22COR23和NR24SO2R25的一个或多个基团取代。
Ar尤其可以代表芳基基团例如苯基，其任选被选自卤原子、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基和CONR16R17的一个或多个基团取代，特别是任选被选自卤原子如氟、(C1-C6)烷基如甲基和CONR16R17如CONH2的一个或多个基团取代。
Ar还可以代表吡啶基团。
Ar尤其可以选自如下基团：
尤其选自如下基团：
特别选自如下基团：
Ar可以有利地代表如下基团：
W可以有利地代表R5、SR5、OR5或NR5R6基团，优选R5、OR5或NR5R6，其中R5和R6彼此独立地代表氢原子或(C1-C6)烷基基团。
W可以特别地代表H、OMe、Me、OH或NH2，尤其是H。
有利地，R3代表氢原子。
U可以更特别地代表CH2或NH基团。
有利地，n可以代表0。
V可以更特别地代表C(O)或C(S)基团，有利地是C(O)基团。
根据本发明一个特别的实施方案：
-R3＝H，
-U＝CH2或NH，
-V＝C(O)或C(S)，尤其是C(O)，并且
-n＝0或1，尤其是0。
根据本发明另一个特别的实施方案：
-V＝C(O)或C(S)，尤其是C(O)，并且
-n＝0。
根据本发明另一个特别的实施方案：
-R3＝H，
-V＝C(O)或C(S)，尤其是C(O)，并且
-n＝0。
R1可以更特别地代表氢原子或NR7R8基团，其中R7尤其代表氢原子且R8尤其代表任选被取代的(C3-C12)环烷基基团或任选被取代的杂环。
(C3-C12)环烷基基团可以特别是环己基。其可以被一个或多个卤原子取代。其可以特别为如下基团：
杂环基团可以特别是四氢呋喃，尤其是未取代的。其因此可以为如下基团：
因此，R1可以更特别地代表一个如下基团：
尤其是H和有利地是
R2可以更特别地代表任选被取代的杂环(尤其被(C1-C6)烷基或NH2取代)、NO2或NR9R10，其中尤其地R9＝R10＝H或者R9和R10各自代表H或任选被取代的(C1-C6)烷基。
R2可以特别地代表任选被取代的杂环，尤其是被(C1-C6)烷基或NH2取代。杂环特别可以是5或6元包含至少一个氮原子，特别是一个或两个氮原子的杂环。因此，杂环可以选自哌嗪、哌啶和吡咯烷。
R2可以尤其地代表一个如下基团：
NH2、NH(CH2)3NMe2、NMe(CH2)3NMe2、NO2、 尤其是NH2、NO2、 特别是更特别是
本发明的化合物可以选自下表中列出的化合物：
本发明还涉及如上所定义的式(I)化合物在制备药物中的用途，所述药物尤其旨在治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛。
本发明还涉及一种治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛的方法，其包括向需要其的患者施用有效量的如上所定义的式(I)化合物。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含至少一种如上所定义的式(I)化合物，和至少一种药学上可接受的赋形剂，其用于治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛。
根据本发明的用于治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛的药物组合物尤其可以配制用于口服施用或用于注射，其中所述组合物旨在用于哺乳动物，包括人类。
可以单位剂量形式，与标准药物载体混合，将活性成分施用于动物或人类。作为活性成分的本发明化合物可以每天0.01mg至1000mg的剂量范围使用，以每天一次的单个剂量给予或以全天数个剂量施用，例如以相等剂量每天两次施用。每天施用的剂量有利地为5mg至500mg，甚至更有利地为10mg至200mg。由本领域技术人员决定，也许有必要使用这些范围之外的剂量。
根据本发明的用于治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛的药物组合物可以进一步包含至少一种其他活性成分，例如抗癌药。
本发明另一个目的是一种用于治疗或预防疼痛，特别是与至少一种Trk蛋白相关的疼痛的药物组合物，其包含：
(i)至少一种如上所定义的式(I)化合物，和
(ii)至少一种其他活性成分，例如抗癌药，
作为组合产品同时、分别或依次使用。
在本发明上下文中，术语“治疗”是指逆转或减轻疼痛。
根据本发明的术语“疼痛”是指任何类型的疼痛，特别是伤害性疼痛、炎性疼痛、神经性疼痛、原发性疼痛或精神性疼痛，优选炎性疼痛或神经性疼痛。根据本发明的疼痛还可以是两种或多种该类型疼痛的组合，例如炎性疼痛和伤害性疼痛的组合。
根据本发明的疼痛可以来自于任何来源。在一个实施方案中，根据本发明的疼痛起因于癌症，例如骨癌。在另一个实施方案中，根据本发明的疼痛起因于神经损伤，例如在神经性疼痛中发生。在另一个实施方案中，根据本发明的疼痛起因于炎症状态，例如在风湿性疾病如骨关节炎、下背痛、腰椎间盘突出和神经根压迫中发生。在另一个实施方案中，根据本发明的疼痛与功能性障碍例如纤维肌痛有关。
根据本发明，“Trk蛋白”是指Ttrk家族的任何成员，例如TrkA(特别地描述于GenBank，编号AB019488)、TrkB(特别地描述于GenBank，编号AAB33109.1)和TrkC(特别地描述于GenBank，编号CAA12029.1)，优选为TrkA。
根据本发明的Trk蛋白可以是其自然形式或修饰形式。术语“修饰形式”是指野生型蛋白的突变形式。突变可以是点突变，其也可以是在Trk蛋白序列中缺失或插入一个或多个氨基酸。可替代地，根据本发明的修饰的Trk蛋白可以是例如染色体重排之后获得的融合蛋白。修饰的Trk蛋白还可以由可变剪切产生。
根据本发明表述“与至少一种Trk蛋白相关的”是指待治疗的疼痛通过穿过一种或多种Trk蛋白的信号传导通路重现。特别地，当疼痛为炎性或神经性疼痛时，其被认为与Trk蛋白相关。Trk信号传导通路为技术人员所熟知。
根据本发明的化合物具有抑制或调节一种或多种Trk蛋白，优选一种以上Trk蛋白的性质。
根据本发明的抑制或调节Trk蛋白活性是指根据本发明的化合物能够调节至少一种Trk蛋白的活化，其导致Trk信号通路的降低，也许是失活，其本身导致痛感的降低。例如，根据本发明的化合物允许5％以上或约5％，尤其是10％以上或约10％，特别是50％以上或约50％的Trk蛋白活性的减少。
可以通过各种方法，尤其是下面图解1a和1b总结的方法制备根据本发明的式(I)化合物。
图解1a
Ri＝NO2,卤素,OH,OMe,SMe,S(O)Me,SO2Me,OMs,OTf或OTs
Rj＝H或N保护基
Rn＝Hal,OMs,OTs或OTf
(Tf代表–SO2CF3基团，和Ts代表甲苯磺酰基基团)
图解1b
方法A：
根据方法A，通过通式(V)化合物的初步合成获得式(I)化合物，所述通式(V)化合物特征在于具有环外伯胺的卤代杂双环。经由通式(II)或(III)中间体的合成获得这些化合物。
方法A1：
下面的图解2(碘化的化合物)或3(溴化的化合物)呈现的方法A1，描述了获得通式(V)化合物的一般性方法，其中W如通式(I)描述中所定义，尤其是H、(C1-C6)烷基或芳基，且Rj＝H或N-保护基。
图解2
在图解2的情况下，由相应的羟基烟腈通过依次使用碘化剂如N-碘代琥珀酰亚胺(NIS)，或者分子碘，以及无机碱例如K2CO3或Na2CO3，尤其在极性溶剂如热DMF中，接着用纯的或在高沸点非极性溶剂中稀释的磷酰氯处理，或者用本领域技术人员熟知的任何其它等价氯化剂处理来获得任选被取代的2-氯-5-碘烟腈(IIa)。反应温度为-20℃至200℃之间。然后在任选携带N-保护基如三苯甲基、叔丁基或BOC的肼存在下，通过优选在加热下的反应，将由此获得的化合物(IIa)转化为任选被取代的5-碘-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(Va)。
可以通过使用如下文献：Witherington等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.,2003,13,1577-1580和Lijuan Chen等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.,2010,20,4273-4278描述的方法获得如图解1a所述的通式(V)的溴化类似物。由于便利的原因，通过使用如下图解3呈现的反应次序获得这些化合物。
图解3
例如通过于-20℃至混合物沸点之间的温度，在甲醇中的甲醇钠反应获得任选官能化的2-甲氧基-烟腈。可替代地，可以通过2-羟基烟腈的甲基化或者如上所述的其它方法获得该化合物。典型地，使用乙酸中的二溴于20℃至110℃之间的温度进行2-甲氧基-烟腈的溴化。典型地，于20℃至100℃之间的温度在极性溶剂如水、乙醇、四氢呋喃(THF)或任何其它具有相当性质的溶剂存在下，通过与过量的官能化或非官能化的肼的反应进行吡唑的形成。可代替地，也可以使用盐水或水合形式的肼，无需溶剂。
方法A2：
方法A2涉及以下图解4呈现的官能化的吡唑并吡嗪的合成，其中Rj＝H或N-保护基，Hal＝卤素，特别地，W＝H、(C1-C6)烷基或芳基。
图解4
典型地，由相应的3-氨基吡嗪-2-羧酸甲酯通过在N-碘代琥珀酰亚胺或分子碘存在下任选在辅因子如KIO3、AgCO2CF3、Ag2SO4、AlCl3、CuCl2或HgO存在下的碘化，接着尤其于0℃至100℃之间的温度使用极性溶剂如水、甲醇或THF中氨将甲酯官能团转化为甲酰胺，经两个步骤获得任选官能化的3-氨基-6-碘吡嗪-2-甲酰胺。然后在有机碱如吡啶存在下通过使用脱水剂如，特别是CCl4/PPh3、SOCl2、PhSO2Cl、P2O5、TsCl、COCl2、DCC/py(N,N’-二环己基碳二亚胺/吡啶)或(COCl)2(视情况而定)将任选官能化的3-氨基-6-碘吡嗪-2-甲酰胺的甲酰胺官能团转化为腈。优选的方法涉及使用二甲基甲酰胺(DMF)中的磷酰氯。通过用酸如盐酸水溶液或任何其它具有等同性质的试剂处理进行二甲基甲脒(dimethylformimidamide)官能团的脱保护。通过本领域技术人员公知的桑德迈尔反应，接着通过在官能化或非官能化的肼存在下，在上面方法所述的条件下的反应进行吡唑环的形成。可替代地，通过使用例如酸性介质或任何其它等同试剂中的氯化锡使重氮盐(桑德迈尔反应的中间体)还原从而形成肼官能团，其可以在热效应下经历分子内环合。
方法A3：
方法A3旨在获得通式(V)衍生物，该衍生物特征在于吡唑并吡啶双环的6位的可变官能团。其详述于下面图解5中。
(Alk＝(C1-C6)烷基、Ar＝芳基、CH2Ar＝苯基、H＝卤素)
图解5
根据尤其Litrivnor等人.Russ.Chem.Bull.,1999,48(1),195-196和Tsann-LongSu等人.J.Med.Chem.,1988,31,1209-1215描述的方法，氰基硫代乙酰胺与不同取代的3-乙氧基丙烯酸乙酯的反应有可能经两个步骤获得2位携带可变官能团的5-氰基-6-(甲硫基)烟酸乙酯。典型地，这些合成的第一个步骤在无水极性溶剂例如乙醇中于0℃至70℃之间的温度在有机碱如甲基吗啉、三乙胺、DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)或DBU(1,8-二氮杂双环[5,4,0]十一碳-7-烯)存在下进行。典型地，分子内环合和烷基化的第二个步骤通过加热至20℃至100℃之间温度的中间体硫代酰胺的极性溶剂例如乙醇的溶液，在合适的烷基化试剂如烷基卤化物或二烷基硫酸酯存在下进行。
典型地，根据本领域技术人员熟知的方法，尤其是使用热氢氧化锂，由相应乙酯的皂化获得2位取代的5-氰基-6-(甲硫基)烟酸。通过加热处理在高沸点溶剂如二苯醚中于150℃至250℃之间的温度进行这些化合物的脱羧。
卤化反应主要旨在获得碘化的、溴化的或氯化的衍生物，更特别是碘化的衍生物。典型地，后者通过在银盐例如Ag2SO4存在下在极性溶剂如乙醇中于0℃至70℃之间的温度的分子碘处理而获得。还可以考虑可替代的方法，尤其是那些基于其它盐如KIO3、AgCO2CF3、AlCl3、CuCl2或HgO，或其它碘化试剂如N-碘代琥珀酰亚胺的方法。根据本领域技术人员熟知的方法，可想到的溴化方法典型地取决于试剂如N-溴代琥珀酰亚胺或二溴。
在W＝OH的情况下(典型地由2-(乙氧基亚甲基)丙二酸二乙酯)的使用导致)，相应的化合物通过烷基化反应受到保护。尤其通过使用碘甲烷或溴甲烷，以及二氧六环、THF、乙腈或丙酮中的碳酸银，或者任何其它等同试剂如硫酸二甲酯进行该反应。使获得的5-卤素-2-(甲硫基)烟腈经历硫代甲氧基官能团的氧化，典型地使用m-CPBA(m-氯过氧苯甲酸)，硫酸氢钾或其它任何等同物，以导致相应亚砜的形成。这些化合物(其可以包含变化量的相应砜)在任选取代的肼存在下参与反应以形成相应的携带6位可变官能团的5-卤素-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。
方法A4:
方法A4旨在由通式(III)化合物经中间体形成的式(IV)化合物而获得通式(V)的衍生物。典型地，由图解6呈现的途径获得这些化合物。如下文献阐明使用的方法：Gueiffier等人.Heterocycles,1999,51(7),1661-1667；Gui-Dong Zhu等人.Bioorg.Med.Chem.,2007,15,2441-2452。
图解6
使通式(IIIa)化合物(预先通过一种或另一种本领域技术人员熟知的方法乙酰化)于0℃至40℃之间变化的温度，在水或乙酸中，经历亚硝酸异戊酯、亚硝酸钠或任何其它等同有机或无机亚硝酸盐的作用，典型地持续1至3天变化的时间。在酸性条件下，例如通过使用盐酸使由此获得的通式(IVa)化合物脱保护，之后使其于0℃至25℃之间变化的温度经历硝化试剂如浓硝酸或硫酸中的硝酸钾的作用。
应当注意，通常通式(IIIa)化合物有可能直接转化为脱保护的化合物(IVb)。
典型地，通过使用盐酸中的SnCl2使由此获得的硝基吡唑还原成通式(Ve)的氨基吡唑。可替代的方法包括在酸性条件下使用铁、锌或锡，以及在铂、镍或Pd/C络合物存在下在氢气氛下或在等同试剂如环己二烯、环己烯、硼氢化钠或肼存在下的催化氢化的方法。
方法B：
根据方法B，通过通式(VI)化合物的初步合成获得式(I)化合物，所述通式(VI)化合物特征在于具有环外胺的官能化的杂双环。经过通式(VI)中间体的合成获得这些化合物。
方法B1：
下面图解7呈现了方法B1，其中W尤其代表H、(C1-C6)烷基、芳基或苄基。
图解7
典型地，由相应的2,6-二氯-3-硝基吡啶或2,6-二氯-3-硝基吡嗪通过如下依次反应：与氰化物盐如氰化铜，在高沸点极性溶剂如N-甲基吡咯烷酮中，于100℃至200℃之间的温度反应；接着与极性溶剂中的含水连二亚硫酸钠反应来获得任选5位官能化的3-硝基-6-硫代-1,6-二氢吡啶-2-腈和3-硝基-6-硫代-1,6-二氢吡嗪-2-腈衍生物。然后根据本领域技术人员熟知的方法，例如在碱性介质中使用取代的溴苄，烷基化这些化合物。优选的方案包括使用非质子的和无水的极性溶剂如丙酮(在其沸点引入)和有机碱如吡啶、三乙胺或DIPEA，或无机碱如碳酸钠、碳酸钾或碳酸钙。优选通过使用盐酸中的SnCl2进行将硝基官能团还原成胺的反应。可替代的方法包括在酸性条件下使用铁、锌或锡，以及在铂、镍或Pd/C络合物存在下在氢气氛下或在等同试剂如环己二烯、环己烯、硼氢化钠或肼存在下的催化氢化的方法。
在某些情况下，还原反应的产物除了具有伯胺还具有由腈官能团水解产生的甲酰胺官能团。可以通过经使用磷酰氯在DMF存在下使甲酰胺脱水形成腈或本领域技术人员熟知的任何其它方法进行相应的3-氨基-2-氰基吡啶或3-氨基吡嗪-2-腈的分离。最后，优选通过形成重氮化合物，接着将其还原成腈和通过加热反应介质激活分子内环合进行氨基吡唑环的形成，所述重氮化合物通过在低温的亚硝酸异戊酯、亚硝酸钠或任何其它等同有机或无机腈，在水、盐酸、乙酸或硫酸中，于0℃至20℃变化的温度的依次反应来获得。优选使用氯化锡在酸性条件下进行还原反应，但还可以通过催化氢化或本领域技术人员熟知的任何其它方法进行还原反应。在最后一步的替代中，可想到中间体重氮化合物经历桑德迈尔反应，反应期间通过与足量盐如NaI的反应使该官能团被卤原子如碘取代。如果该选择是优选的，那么通过使用官能化或非官能化的肼，在极性溶剂如乙醇中，于25℃至150℃的温度进行氨基吡唑环的形成。
方法B2：
可替代地，可以利用芳香亲核取代反应官能化6位的吡啶或吡嗪环。在这种情况下，使用的亲核试剂为苯酚、苯硫酚、苄醇或苄硫醇以及官能化或非官能化的苯胺或苄胺。下面呈现一般性反应图解8a，尤其地其中W＝H、(C1-C6)烷基、苯基或苄基。
图解8a
在X＝O或S情况下，在合适的亲核试剂，醇或硫醇存在下，在极性溶剂如乙腈中，在无机碱如碳酸钾或碳酸钠存在下，5位任选被取代的6-氯-3-硝基-2-氰基吡啶和6-氯-3-硝基吡嗪-2-腈反应。还可以考虑溶剂如DMSO(二甲基亚砜)、DMF(二甲基甲酰胺)、丙酮、THF(四氢呋喃)或吡啶。如果需要，这些反应可以通过铜的作用催化，还可以无需溶剂来进行。典型地，优选的方案涉及20℃至150℃之间的温度。
可替代地，还可能使用碱如吡啶、DIPEA、二异丙胺、三乙胺、DBU、叔丁醇钾、NEt3或NaH。
在X＝N的情况下，甲苯是优选的溶剂且三乙胺(NEt3)是碱性条件的选择。
后面直至得到通式(VIIb)化合物的步骤与上面方法B1提及的步骤相同。
方法B3：
下面图解8b呈现的方法B3是方法B2的变体，其特征在于由酸或酯形式的硼酸苄酯(benzyl boronate)和6-氯-3-硝基-2-氰基吡啶或6-氯-3-硝基吡嗪-2-腈衍生物之间的催化偶联反应产生第一个步骤。本领域技术人员还熟知使用可替代的催化剂或苄基衍生物的催化偶联反应也是可能的。其中可以考虑基于锡络合物的施蒂勒(Stille)反应，或基于有机锌化合物的反应。
图解8b
例如由相应的苄基氯和二氧六环中的八甲基-双-二氧硼戊环在乙酸钾和Pt(dppf)Cl2(dppf＝1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁)存在下，预先获得任选被取代的2-苄基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环。在溶剂如甲苯、苯、THF或二氧六环中，将该化合物与5位任选被取代的6-氯-3-硝基-2-氰基吡啶，6-氯-3-硝基吡嗪-2-腈或6位任选被取代的5-氯-2-硝基烟腈和钯催化剂如Pd(dppf)Cl2或Pd(PPh3)4，有机碱如三乙胺或醇化物，或无机碱如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯放在一起。优选的反应温度在20℃至100℃之间。这些反应的产物对应于取代的6-苄基-3-硝基-2-氰基吡啶、6-苄基-3-硝基吡嗪-2-腈或5-苄基-2-硝基烟腈衍生物，其中后面的转化步骤重复上面的方法B1。
方法B4：
下面图解9呈现的方法B4提供特征在于任选官能化的芳基磺酰胺官能团的吡唑并吡啶和吡唑并吡嗪双环，其中Rl＝(C1-C6)烷基，尤其地W＝H、(C1-C6)烷基、芳基或苄基。
图解9
可以根据Levett P.C.等人,Org.Proc.Res.Dev.,2002,6(6),767-772；WO 01/98284和WO 2008/010964描述的方法获得该反应次序中所需的2-氯-5-(氯磺酰基)烟酸乙酯衍生物。
典型地，在非质子溶剂如二氯甲烷、THF、丙酮或乙腈中，在有机碱如三乙胺(NEt3)、吡啶或DIPEA存在下，通过混合感兴趣的2-氯-5-(氯磺酰基)烟酸酯和任选被官能化的伯或仲苯胺进行磺酰胺的形成。还可以考虑使用无机碱如碳酸钠或碳酸钾。最佳的反应温度在0℃至70℃之间。
尤其地，通过使用THF/水混合物中的氢氧化锂，由此获得的产物的皂化反应提供相应的2-氯-5-(N-苯基氨磺酰基)烟酸。
通过在回流下使用甲苯中的亚硫酰氯处理，或者通过本领域技术人员熟知的任何其它脱氯化氢方法制备相应的酰氯。这些中间体与氨水的反应能够形成官能化的2-氯-5-(N-苯基氨磺酰基)烟酰胺，其然后于75℃至150℃之间的温度，尤其通过使用POCl3参与脱水反应。还可以考虑替代性使用试剂如P2O5或三氟乙酸酐和吡啶。
最后，在官能化或非官能化的肼存在下，在极性溶剂如乙醇中，于25℃至150℃之间的温度，使通式(VIh)的这些衍生物反应形成相应的通式(VIId)的衍生物。
方法B5：
下面图解10呈现的方法B5提供特征在于任选官能化的苄醚官能团的吡唑并吡啶双环，其中尤其地W＝H、(C1-C6)烷基、芳基或苄基。
图解10
下面描述的方法受J.Baldwin等人,J.Heterocyclic.Chem.,1980,17(3),445-448工作的启示。典型地，通过使用任选官能化的苄基卤化物，在碱存在下将6位任选官能化的5-羟基烟腈衍生物烷基化。优选的方法要求使用极性非质子溶剂如DMF和碱如NaH。最佳的反应温度在20℃至100℃之间。可替代地，可以使用的溶剂包括，例如THF、DMSO、二氧六环、乙腈、二氯甲烷或丙酮，可以使用的碱如tBuOK、DIPEA、吡啶、三乙胺、DBU或碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯。
典型地，通过使用二氯甲烷中的m-CPBA于室温进行吡啶环向吡啶-N-氧化物的氧化。虽然如此，许多可替代的方法是可想到的，尤其是在铼催化剂、过硼酸钠存在下，在乙酸或尿素-过氧化氢络合物存在下，基于使用过碳酸钠的方法。
使用磷酰氯处理这些吡啶-N-氧化物衍生物导致相应地2-氯烟腈(VI)的形成。
在极性溶剂如异丙醇或乙醇中，加热下，它们与官能化或非官能化的肼的反应导致所需的吡唑并吡啶双环(VIIe)的形成。
方法B6：
下面图解10a呈现的方法B6提供特征在于反向的磺酰胺官能团的任选官能化的吡唑并吡啶和吡唑并吡嗪双环，其中尤其地W＝H、(C1-C6)烷基、芳基或苄基。
图解10a
下面描述的方法在于在碱(其可以任选被引入用作溶剂或共溶剂)存在下，由芳香胺和芳基磺酰基卤化物，或任何其它等同试剂形成磺酰胺官能团。可替代地，芳基磺酰基卤化物或其等同物可以原位产生。
在极性溶剂如异丙醇或乙醇中，加热下，它们与官能化或非官能化的肼的反应导致所需的吡唑并吡啶和吡唑并吡嗪双环(VIIf)的形成。
方法C：
方法C旨在制备如图解1中所述的通式(XI)化合物。
方法C1：
下面图解11呈现的方法C1旨在制备6位官能化的吡唑并吡啶和吡唑并吡嗪，其中Rn＝卤素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲烷磺酸酯，X＝O、S、NH、N-(C1-C-)烷基，和针对(Xc)和(Xd)的任选的CH2，且Rj＝H或N-保护基。
该方法还可以用于进行包含二价X基团，尤其对应于ArX基团的分子的合成，所述ArX基团代表：-ArCH2NH-、-ArCH2N(R4)-、-ArCH2O-、-ArCH2S-、-ArCH2CH2-、-ArCHCH-或-ArCC-。
图解11
典型地，在磷酰氯存在下，使用或不使用溶剂，于70℃至180℃之间变化的温度，使6-羟基-2-(甲硫基)烟腈或5-羟基-3-(甲硫基)吡嗪-2-腈经历脱氯化氢反应。如果使用溶剂，那么优选高沸点非极性溶剂如甲苯或二甲苯。可替代地，能够通过经由形成相应的甲苯磺酸酯、甲磺酸酯或三氟甲烷磺酸酯使其衍生为磺酸酯，活化6-羟基-2-(甲硫基)烟腈和5-羟基-3-(甲硫基)吡嗪-2-腈。如果该选择是优选的，那么在溶剂如甲苯、二氯甲烷、THF、乙腈、丙酮或二氧六环中，在有机或无机碱存在下，使用甲苯磺酰氯、甲磺酰氯或三氟甲磺酰氯提供这些衍生物。
分别获得的6-氯-2(甲硫基)烟腈和5-氯-3-(甲硫基)吡嗪-2-腈，或它们的磺酸酯类似物(如果该选择是优选的)，然后在芳香亲核取代情况下与亲核试剂如苯酚、苯胺或苯硫酚反应。在这种情况下，在极性溶剂如DMSO、DMF、丙酮、THF或乙腈中，在碱如叔丁醇钾或NaH存在下进行反应。如果需要，这些反应可以通过铜的作用催化，还可以无需溶剂来进行。典型地，优选的方案涉及20℃至150℃之间的温度。
可替代地，还可以使用有机碱如吡啶、二异丙胺、三乙胺或DBU，或者无机碱如碳酸钠或碳酸钾。
可替代地，式(IXb)化合物可以引起催化偶联反应如铃木(Suzuki)反应。在这种情况下，在溶剂如甲苯、苯、THF或二氧六环中，将这些化合物与前面方法B3已描述的任选被取代的2-苄基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环，钯催化剂如Pd(dppf)Cl2或Pd(PPh3)4，有机碱如三乙胺或醇化物，或无机碱如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯放在一起。优选的反应温度在20℃至100℃之间。
然后将由这些方法中的一个或另一个获得的衍生物氧化，典型地通过使用m-CPBA或硫酸氢钾以形成相应的二甲基亚砜或二甲基砜。在氨基吡唑环形成的反应中通过使用任选被取代的肼，在极性溶剂如乙醇中，于25℃至150℃之间的温度，原样使用这些化合物(有时以混合物形式获得)。
可替代地，能够修饰反应次序，尤其是颠倒合成步骤。
方法C2：
下面图解12呈现的方法C2旨在制备6位官能化的吡唑并吡啶和吡唑并哒嗪，其中X＝O、S、NH、N-(C1-C-)烷基，或CH2且Rj＝H或N-保护基。
图解12
典型地，通过使用m-CPBA或硫酸氢钾，将6-羟基-4-(甲硫基)烟腈或6-羟基-4-(甲硫基)哒嗪-3-腈衍生物氧化成相应地二甲基亚砜或二甲基砜。在氨基吡唑环形成的反应中，通过使用任选被取代的肼，在极性溶剂如乙醇中，于25℃至150℃之间的温度，原样使用这些化合物(有时以混合物形式获得)。
典型地，在磷酰氯存在下，使用或不使用溶剂，于70℃至180℃之间变化的温度，使由此获得的吡唑并吡啶和吡唑并哒嗪经历脱氯化氢反应。如果使用溶剂，那么优选高沸点非极性溶剂如甲苯或二甲苯。分别获得的任选取代的6-氯-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺和6-氯-吡唑并[4,3-c]哒嗪-3-胺然后在芳香亲核取代情况下与亲核试剂如苯酚、苯胺或苯硫酚反应。在这种情况下，在极性溶剂如DMSO、DMF、丙酮、THF或乙腈中，在碱如叔丁醇钾或NaH存在下进行反应。如果需要，这些反应可以通过铜的作用催化，还可以无需溶剂来进行。典型地，优选的方案涉及20℃至150℃之间的温度。
可替代地，还可以使用有机碱如吡啶、二异丙胺、三乙胺或DBU，或者无机碱如碳酸钠或碳酸钾。
可替代地，式(XIVa)化合物可以引起催化偶联反应如铃木(Suzuki)反应。在这种情况下，在溶剂如甲苯、苯、THF或二氧六环中，将这些化合物与前面方法B3中如上描述的任选取代的2-苄基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环，钯催化剂如Pd(dppf)Cl2或Pd(PPh3)4，有机碱如三乙胺或醇化物，或无机碱如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯放在一起。优选的反应温度在20℃至100℃之间。
方法C3：
下面图解12a呈现的方法C3是方法C1的变体，其基于通过阴离子亲核试剂如苯酚盐或苯硫酚盐，或通过有机金属如苯甲基氯化锌的2,6-二氯烟腈的立体选择性官能化。在后者的情况中，该反应例如被钯(II)络合物催化。如前面方法A1中所述，进行由此获得的氯化烟腈向相应的吡唑并吡啶的转化，在这种情况下其中Y1＝CH。
图解12a
方法D：
这些方法的目的是通过使用各种催化偶联方法合成通式(I)或(VII)的化合物。
方法D1：
下面图解13呈现的方法D1使用了由钯络合物催化的原位制备的有机锌化合物和芳基溴之间的偶联反应，如J.A.C.S.,1984,106,158中所述。
图解13
在非质子极性溶剂如THF或二氧六环中，在催化量的钯络合物如(dppf)2PdCl2·CH2Cl2存在下，将任选被取代的3-氨基-二氮杂吲唑或3-氨基-氮杂吲唑与任选被取代的苄基氯化锌(zinc benzyl chloride)放在一起。偶联反应在25℃至100℃之间的温度进行。
方法D2：
下面图解14呈现的方法D2使用了由铜络合物催化的硫醇(特别是苯硫酚或苄硫醇)和芳基碘之间的偶联反应，如Gueiffier A.等人,Tetrahedron,2006,62,6042-6049中所述。
图解14
典型地，该反应在高沸点极性溶剂如2-丙醇中，在催化量的聚乙二醇、金属盐如碘化亚铜(CuI)和过量的无机碱如碳酸钾、碳酸钙或碳酸钠存在下进行。典型地，反应温度在50℃至100℃之间变化。
方法D3：
下面图解15呈现的方法D3使用了由铜和钯络合物催化的乙炔衍生物和芳基卤化物之间的偶联反应，如Sonogashira,K.et al.in Tetrahedron Lett.,1975,16,4467-4470中所述。
图解15
典型地，该反应如下进行：在惰性气氛中杂芳基卤化物与化学计量的任选被取代的乙炔基苯在催化量的钯络合物，例如PdCl2(PPh3)2或Pd(PPh3)4，催化量的铜盐，例如CuI，和有机碱如三乙胺或DIPEA，或无机碱如碳酸钾或碳酸铯存在下反应。该方案通常涉及在溶剂(包括DMF、THF、二氧六环或乙醚)中反应温度在20℃至45℃之间。
方法E：
方法E的方案旨在，通过使其与任选原位产生的特征在于亲电官能团的中间体(如酰氯、异氰酸酯、异硫氰酸酯或醛)反应，官能化氨基吡唑环的环外胺。
方法E1：
下面图解16呈现的方法E1旨在将氨基吡唑化合物的环外伯胺官能团转化为酰胺官能团。
图解16
由相应的3-氨基吡唑通过加入足量的酰氯合成这些化合物，所述酰氯通过使用草酰氯和催化量的DMF在溶剂如四氢呋喃中预先制备。通过使用可替代的方法，如本领域技术人员熟知的基于使用亚硫酰氯或磷酰氯的方法来获得这些酰氯。典型地，在非质子溶剂如四氢呋喃、甲苯或二氯甲烷中，在碱如DIPEA、吡啶或三乙胺存在下，进行酰氯和氨基吡唑的缩合。
可替代地，能够使用碱(特别是吡啶)作为溶剂。
可替代地，可以根据熟知的肖顿-鲍曼(Schotten-Baumann)方法在两相系统中进行该类型的反应。
可替代地，可以由相应的3-氨基吡唑和感兴趣的酸通过使用肽偶联条件，于-20℃至100℃温度，在非质子溶剂如四氢呋喃、二氧六环、二氯甲烷或任何具有相似性质的溶剂中进行酰胺键的形成，所述肽偶联条件使用试剂如HOBt(羟基苯并三唑)、TBTU(O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸)、HATU(2-(1H-7-偶氮苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯)、EDCI(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)或羰基二咪唑。
方法E2：
根据下面图解17通过还原胺化反应合成特征在于氨基吡唑环的3位存在仲胺的衍生物。
图解17
典型地，通过在溶剂如DCE(二氯乙烷)、THF或乙腈中，任选在一定量水、TFA(三氟乙酸)或乙酸存在下，混合足量的化学计量的氨基吡唑和醛，通过逐次加入还原试剂如NaBH4、NaBH(OAc)3或NaBH3CN，进行还原胺化反应。这些反应典型地在室温进行。
方法E3：
通过下面图解18呈现的氨基吡唑与异氰酸酯或异硫氰酸酯的反应获得携带3-脲基或3-硫代脲基官能团的衍生物，所述异氰酸酯或异硫氰酸酯根据本领域技术人员熟知的方法获得。
图解18
在一个典型的反应中，反应混合物在极性或非极性非质子溶剂如二氯甲烷、丙酮、DMF、DMA、乙腈、THF或二氧六环中制备，所述溶剂的温度在20℃至所选择的溶剂的沸点之间。如果需要，求助于弱亲核性有机或无机碱可能证明是必要的。在这种情况下，氯化钠是可能的选择。
方法F：合成后脱保护和修饰
方法F1：脱保护
通过有机碱如三乙胺或吡啶作用，在极性溶剂如甲醇、乙醇或THF中，于所用溶剂的回流温度去除三氟乙酸酯保护基。
通过强酸(典型地TFA)作用，在非极性溶剂如二氯甲烷或DCE中，移去吡唑环携带的叔丁基或三苯甲基保护基。
方法F2：炔烃还原
图解19
典型地，通过催化氢化，在氢气氛中，在催化剂如PtO2、Pt、Pd/C、Ni或Rh存在下，进行二芳基炔烃还原成二芳基烷烃的反应。可替代地，可以想到在催化剂如Cp2TiCl2存在下或不存在下使用DIBAL-H(二异丁基氢化铝)。
方法F3：硫化物向砜和亚砜的氧化
图解20
典型地，通过在极性溶剂混合物如THF/MeOH或DMF/水中使用硫酸氢钾进行硫化物向亚砜的氧化反应。典型地，最佳的反应温度在25℃至50℃之间。
许多可替代的方法是可供使用的，且一些可能生成半氧化的衍生物，即亚砜。这类可替代的方法包括使用m-CPBA、二氯甲烷中的KMnO4/MnO2、两相介质中的H2O2(30％)以及尿素络合物(UHP)形式的相转移催化剂或催化剂的存在。
H2O2和金属络合物如Sc(OTf)3的组合使用部分促进氧化衍生物。
其它已知的方法包括，例如，使用CAN/NaBrO3(CAN＝硝酸铈铵)。
下面的实施例和附图解释本发明，而不以任何方式限制其保护范围。
附图说明
图1A代表通过腹膜内途径以不同剂量施用于小鼠的化合物30对NGF-诱导的痛觉过敏(时间延迟)的抑制作用的柱状图。
图1B代表通过口服途径以不同剂量施用于小鼠的化合物30对NGF-诱导的痛觉过敏(时间延迟)的抑制作用的柱状图。
图2A代表通过腹膜内途径以不同剂量向大鼠施用化合物30之后与自发退缩数量有关的图形。
图2B代表以不同剂量向大鼠口服施用化合物30之后与机械性痛觉超敏测量有关的图形。
图3A代表以2.5mg/kg剂量施用化合物30的盐水溶液之后肢体使用分数随时间变化的柱状图。
图3B代表以2.5mg/kg剂量施用化合物30的盐水溶液之后轻触诱发的退缩随时间变化的柱状图。
具体实施方式
实施例
使用如下缩略词：
I、根据本发明的化合物的合成
方法A1的实施例
实施例1：5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
实例1a：2-羟基-5-碘烟腈
于室温将9g(0.5eq)N-碘代琥珀酰亚胺加入至10g(83mmol)2-羟基烟腈的150ml无水二甲基甲酰胺溶液中。于60℃搅拌反应混合物。搅拌30分钟之后，加入9g(0.5eq)N-碘代琥珀酰亚胺，然后于60℃搅拌反应混合物5小时。蒸发溶剂，将形成的沉淀物过滤，用水和乙醚冲洗，然后真空干燥以得到米黄色粉末形式的18.5g(90％)2-羟基-5-碘烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)246.93
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.79(1H,s,OH),8.36(1H,d,CH芳香的),8.04(1H,d,CH芳香的)。
实施例1b：2-氯-5-碘烟腈
于0℃将30.7ml(329mmol)磷酰氯和6滴硫酸加入至9g(6.6mmol)2-羟基-5-碘烟腈中。于110℃加热反应混合物5小时，然后于室温过夜。将反应混合物倒至含有冰和少量水的烧杯中，并形成了沉淀物。允许混合物逐渐回到室温，然后过滤并用水冲洗。干燥固体以得到6.8g(70％)2-氯-5-碘烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)265.45
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):9.61(1H,d,CH芳香的),9.14(1H,d,CH芳香的)。
实施例1：5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
于室温将肼(3.86ml,79mmol)加入至7g(26.5mmol)2-氯-5-碘烟腈的25ml 2-丙醇的溶液中。于85℃加热反应混合物7小时，然后于室温过夜。将悬浮的固体过滤，用异丙醇然后用醚冲洗，并在烘箱于50℃干燥以得到6g(87％)5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)260.95
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.12(1H,bs,NH),8.51(1H,d,CH芳香的),8.45(1H,d,CH芳香的),5.64(2H,bs,NH2)。
通过相同的方法获得如下化合物。
**1H NMR,DMSO-d6,实施例1-2:8.55(1H,bs,CH芳香的),8.42(1H,bs,CH芳香的),6.33(1H,bs,CH芳香的),1.57(9H,s,CH)；1-3:11.92(1H,s,NH),8.55(1H,s,CH芳香的),5.59(2H,bs,NH2),2.66(3H,s,CH3)。
实施例2：5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
实例2a：2-甲氧基-烟腈
将4.98g(217mmol)钠加入至80ml无水甲醇中。于室温搅拌反应介质10分钟，然后于0℃加入10g(72.2mmol)2-氯烟腈。于25℃搅拌反应介质16小时。于0℃通过缓慢加入水水解该反应。返回至室温之后，将得到的沉淀物过滤，用水冲洗，然后于50℃干燥以获得黄色固体形式的7.85g(81％)2-甲氧基-烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)135.04
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.46-8.48(1H,dd,CH芳香的),8.25-8.27(1H,dd,CH芳香的),7.17-7.20(1H,dd,CH芳香的),3.99(3H,s,CH3)。
实例2b：5-溴-2-甲氧基-烟腈
于0℃将12.23g(149mmol)乙酸钠，然后将7.66ml(149mmol)溴加入至10g(74.6mmol)2-甲氧基-烟腈的29ml乙酸溶液中。于70℃加热反应混合物过夜。返回至室温之后，将反应介质加入至冰浴中，将得到的沉淀物过滤，用水冲洗，然后于50℃干燥以获得白色固体形式的11.6g(73％)5-溴-2-甲氧基-烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)214.95
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.61(1H,d,CH芳香的),8.60(1H,d,CH芳香的),3.98(3H,s,CH3)
实施例2：5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
于室温将35ml(23.47mmol)肼加入至5g(23.47mmol)5-溴-2-甲氧基烟腈中。于100℃保持反应介质3小时。返回至室温之后，将得到的沉淀物过滤，用水冲洗，然后于50℃干燥以获得黄色固体形式的3.6g(72％)5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)214.05
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.18(1H,s,NH),8.38(1H,d,CH芳香的),8.37(1H,d,CH芳香的),5.66(2H,s,NH)。
方法A2的实施例
实施例3：5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺
实例3a：3-氨基-6-碘吡嗪-2-羧酸甲酯
于室温将1.5当量的N-碘代琥珀酰亚胺加入至5g(32.7mmol)3-氨基吡嗪-2-羧酸甲酯的25ml二甲基甲酰胺溶液中。于65℃加热反应介质1小时，加入0.5当量的N-碘代琥珀酰亚胺并于65℃保持24小时。返回至室温之后，蒸发溶剂，然后用二氯甲烷萃取产物数次。将有机相合并，用10％亚硫酸氢钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩以获得黄色固体形式的8g(88％)3-氨基-6-碘吡嗪-2-羧酸甲酯。
LCMS(EI,m/z):(M+1)280
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.50(1H,s,CH芳香的),7.50(2H,bs,NH2),3.20(3H,s,CH3)。
实施例3b：3-氨基-6-碘吡嗪-2-甲酰胺
磁力搅拌下将30ml氨水加入至15g(53.8mmol)3-氨基-6-碘吡嗪-2-羧酸甲酯的150ml甲醇溶液中。于25℃搅拌反应介质48小时。蒸发溶剂之后，将得到的沉淀物过滤，用水冲洗，然后于50℃干燥以获得米黄色固体形式的12.50g 3-氨基-6-碘吡嗪-2-甲酰胺(88％)。
LCMS(EI,m/z):(M+1)265.02
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.35(1H,s,CH芳香的),7.85(1H,bs,NH),7.60(3H,bs,NH),3.25(3H,s,CH3)。
实施例3c：N’-(3-氰基-5-碘吡嗪-2-基)-N,N-二甲基甲脒
于0℃将13.59ml(146mmol)磷酰氯逐滴加入至11g(41.7mmol)3-氨基-6-碘吡嗪-2-甲酰胺的80ml二甲基甲酰胺溶液中。于室温搅拌反应混合物过夜，然后倒入至含有冰和少量水的烧杯中。使用1N苏打溶液将pH调节至8，形成了沉淀物。逐渐将混合物返回至室温，然后将形成的固体过滤，用水冲洗并于50℃干燥以获得米黄色固体形式的10.50g N’-(3-氰基-5-碘吡嗪-2-基)-N,N-二甲基甲脒(84％)。
LCMS(EI,m/z):(M+1)302.07
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.69(1H,s,CH芳香的),8.67(1H,s,CH乙基),3.20(3H,s,CH3),3.11(3H,s,CH3)。
实施例3d：3-氨基-6-碘吡嗪-2-甲腈
将77ml(77mmol)1M盐酸溶液加入至7.7g(25.6mmol)N’-(3-氰基-5-碘吡嗪-2-基)-N,N-二甲基甲脒。于50℃加热反应介质4小时，然后于室温搅拌过夜。将形成的沉淀物过滤，用水冲洗并于50℃干燥以获得米黄色固体形式的6g(95％)3-氨基-6-碘吡嗪-2-甲腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)247.0
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.49(1H,s,CH芳香的),7.53(2H,bs,NH2)。
实施例3e：3-氯-6-碘吡嗪-2-甲腈
于-5℃将64.3ml盐酸加入至7.7g(31.3mmol)3-氨基-6-碘吡嗪-2-甲腈中。在该温度，将溶解于9ml水中的亚硝酸钠溶液(4.32g，62.6mmol)加入至反应混合物中，并于-50℃搅拌4小时，然后于室温过夜。将另一当量的亚硝酸钠加入至反应混合物中，将形成的沉淀物过滤，用水冲洗并于50℃干燥以获得米黄色固体形式的3.65g(44％)3-氯-6-碘吡嗪-2-甲腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)266.49
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):9.13(1H,s,CH芳香的)
实施例3：5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺
将0.74ml(9.8mmol)肼加入至2.6g(9.80mmol)3-氯-6-碘吡嗪-2-甲腈的15ml丁醇溶液中。于110℃加热反应混合物5小时，然后置于室温过夜。将悬浮的固体过滤，用丁醇冲洗，然后在烘箱中于50℃干燥以获得褐色固体形式的2.2g(86％)5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)262.02
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.59(1H,bs,NH),8.60(1H,d,CH芳香的),5.83(2H,bs,NH2)。
方法A3的实施例
实施例4：5-碘-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
实例4a：5-氰基-2-羟基-6-(甲硫基)烟酸乙酯
依据Ya.Yu.Yakunin等人,Russian Chemical Bulletin,1999,48(1),195-6的过程得到5-氰基-2-羟基-6-(甲硫基)烟酸乙酯，总产率34％。
LCMS(EI,m/z):(M-1)237.22
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.72(1H,bs,OH),8.40(1H,s,CH芳香的),4.29(2H,q,CH2),2.64(3H,s,CH3),1.30(3H,t,CH3)。
实施例4b:5-氰基-2-羟基-6-(甲硫基)烟酸
于室温将4.16g(2eq)氢氧化锂一水合物加入至11.8g(49.5mmol)5-氰基-2-羟基-6-(甲硫基)烟酸乙酯的100ml乙醇和100ml水的溶液中。于60℃搅拌反应混合物2小时。蒸发乙醇并加入1N苏打水溶液。用乙酸乙酯洗涤水相，然后通过加入1N氯化氢水溶液(pH＝1)再次酸化。将形成的沉淀物过滤，用水和乙醚冲洗，然后真空下干燥以获得褐色粉末形式的9.9g(95％)5-氰基-2-羟基-6-(甲硫基)烟酸。
LCMS(EI,m/z):(M-1)209.09
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.32(1H,s,CH芳香的),2.61(3H,s,CH3)。
实施例4c:6-羟基-2-(甲硫基)烟腈
于250℃将6g(28.5mmol)5-氰基-2-羟基-6-(甲硫基)烟酸的35ml二苯醚溶液搅拌4小时。返回至室温之后，加入100ml环己烷并将反应介质研磨30分钟。将形成的固体过滤，用环己烷彻底冲洗，然后真空下干燥以获得褐色粉末形式的2.87g(60％)6-羟基-2-(甲硫基)烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)167.12
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.16(1H,bs,OH),7.92(1H,d,CH芳香的),6.46(1H,d,CH芳香的),2.59(3H,s,CH3)。
实施例4d:6-羟基-5-碘-2-(甲硫基)烟腈
将6g(1.6eq)硫酸银和4.58g(1.5eq)碘依次加入至2g(12mmol)6-羟基-2-(甲硫基)烟腈的200ml乙醇溶液中。于室温搅拌反应介质2小时。将固体过滤并用甲醇彻底冲洗残余物。将滤液蒸发，然后用乙酸乙酯吸收。将有机相用水洗涤三次，经硫酸镁干燥并蒸发以获得黄色粉末形式的3.18g(90％)6-羟基-5-碘-2-(甲硫基)烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)292.93
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.96(1H,bs,OH),8.38(1H,s,CH芳香的),2.62(3H,s,CH3)。
实施例4e:5-碘-6-甲氧基-2-(甲硫基)烟腈
将905μl(2eq)碘甲烷和2.1g(1.05eq)碳酸银依次加入至2.12g(7.26mmol)6-羟基-5-碘-2-(甲硫基)烟腈的20ml 1,4-二氧六环溶液中。于60℃搅拌反应介质5小时。将固体过滤并用甲醇彻底冲洗残余物。蒸发滤液，并通过硅胶柱色谱法(4:6二氯甲烷/环己烷作为洗脱剂)纯化残余物以获得白色粉末形式的1.52g(68％)5-碘-6-甲氧基-2-(甲硫基)烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)306.95
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.50(1H,s,CH芳香的),4.04(3H,s,CH3),2.63(3H,s,CH3)。
实施例4f:5-碘-6-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)烟腈
将1.42g(1.1eq)70％3-氯过氧苯甲酸加入至1.6g(5.23mmol)5-碘-6-甲氧基-2-(甲硫基)烟腈的20ml二氯甲烷溶液中。于室温搅拌反应介质1小时。加入乙酸乙酯，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发以获得白色粉末形式的1.63g(97％)5-碘-6-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)烟腈，所述白色粉末还可能包含很少比例(<20％)的5-碘-6-甲氧基-2-(甲基磺酰基)烟腈。如果需要，所述混合物原样用于后面的步骤。
LCMS(EI,m/z):(M+1)322.95
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.86(1H,s,CH芳香的),4.05(3H,s,CH3),2.95(3H,s,CH3)。
实施例4:5-碘-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
将294μl(1.2eq)肼一水合物加入至1.63g(5.05mmol)5-碘-6-甲氧基-2-(甲基亚磺酰基)烟腈的30ml 2-丙醇溶液中。于80℃搅拌反应介质9小时。返回至室温之后，将形成的固体过滤，并用水冲洗以获得白色粉末形式的1.14g(78％)5-碘-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)291.00
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.87(1H,s,NH),8.49(1H,s,CH芳香的),5.49(2H,bs,NH2),3.90(3H,s,CH3)。
实施例5:5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺
实施例5a:4-甲基吗啉鎓(morpholinium)(2,4)-乙基-5-氨基-2,4-二氰基-5-巯基-2,4-戊二烯酸酯
根据V.D.Dyachenko等人,Chemistry of Heterocyclic Compounds,2005,41(4),503-10描述的过程制备4-甲基吗啉鎓(2,4)-乙基-5-氨基-2,4-二氰基-5-巯基-2,4-戊二烯酸酯，产率为50％。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):9.60(1H,bs,NH),8.66(1H,s,CH),8.33(1H,bs,NH),7.43(1H,bs,NH),4.08(2H,q,CH2),3.82-4.02(2H,m,CH2),3.55-3.78(2H,m,CH2),3.24-3.42(2H,m,CH2),3.98-3.17(2H,m,CH2),2.81(3H,s,CH3),1.19(3H,t,CH3)。
实施例5b:2-氨基-5-氰基-6-(甲硫基)烟酸乙酯
将2.73ml(1eq)碘甲烷加入至14.2g(43.8mmol)4-甲基吗啉鎓(2,4)-乙基-5-氨基-2,4-二氰基-5-巯基-2,4-戊二烯酸酯的78ml N,N-二甲基甲酰胺溶液中。于室温搅拌反应混合物1小时，然后于75℃搅拌20小时。返回至室温之后，加入水，将形成的固体过滤并在真空下干燥以获得米黄色粉末形式的10.31g(100％)2-氨基-5-氰基-6-(甲硫基)烟酸乙酯。
LCMS(EI,m/z):(M+1)238.20
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.25(1H,s,CH芳香的),8.19(1H,bs,NH),7.99(1H,bs,NH),4.27(2H,q,CH2),2.58(3H,s,CH3),1.31(3H,t,CH3)。
实施例5c:2-氨基-5-氰基-6-(甲硫基)烟酸
于室温将3.08g(2eq)氢氧化锂一水合物加入至8.7g(36.7mmol)2-氨基-5-氰基-6-(甲硫基)烟酸乙酯的87ml乙醇和87ml水的溶液中。于60℃搅拌反应混合物2小时。蒸发乙醇并加入1N苏打水溶液。用乙酸乙酯洗涤水相，然后通过加入1N氯化氢水溶液再次酸化(pH＝1)。将形成的沉淀物过滤，用水和乙醚冲洗，然后真空下干燥以获得褐色粉末形式的7.67g(定量的)2-氨基-5-氰基-6-(甲硫基)烟酸。
LCMS(EI,m/z):(M+1)210.16
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.28(1H,bs,CO2H),8.21(1H,s,CH芳香的),8.13(2H,bs,NH2),2.57(3H,s,CH3)。
实施例5d:6-氨基-2-(甲硫基)烟腈
于255℃将3g(14.3mmol)2-氨基-5-氰基-6-(甲硫基)烟酸的30ml二苯醚溶液搅拌60小时。返回至室温之后，加入60ml环己烷并将反应介质研磨30分钟。将形成的固体过滤，然后用环己烷彻底冲洗。将固体再溶解于乙酸乙酯中，然后将有机相用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，然后蒸发以获得褐色粉末形式的1.32g(55％)6-氨基-2-(甲硫基)烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)166.13
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.58(1H,d,CH芳香的),7.12(2H,bs,NH2),6.20(1H,d,CH芳香的),2.51(3H,s,CH3)。
实施例5e:6-氨基-5-碘-2-(甲硫基)烟腈
将3.75g(1.5eq)硫酸银和2.85g(1.4eq)碘依次加入至1.32g(8.02mmol)6-氨基-2-(甲硫基)烟腈的65ml乙醇溶液中。于室温搅拌反应介质3小时。将固体过滤并用甲醇彻底冲洗残余物。蒸发滤液并再溶解于乙酸乙酯中。将有机相用水洗涤三次，经硫酸镁干燥并蒸发以获得褐色粉末形式的1.89g(81％)6-氨基-5-碘-2-(甲硫基)烟腈。
LCMS(EI,m/z):(M+1)291.99
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.13(1H,s,CH芳香的),7.19(1H,平坦宽单峰,NH2),2.51(3H,s,CH3)。
实施例5f:6-氨基-5-碘-2-(甲基亚磺酰基)烟腈
将1.77g(1.1eq)70％3-氯过氧苯甲酸加入至1.89g(6.51mmol)6-氨基-5-碘-2-(甲硫基)烟腈的60ml二氯甲烷溶液中。于室温搅拌反应介质1小时。加入乙酸乙酯，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发以获得白色粉末形式的1.5g(75％)6-氨基-5-碘-2-(甲基亚磺酰基)烟腈，所述白色粉末还可能包含很少比例(<20％)的6-氨基-5-碘-2-(甲基磺酰基)烟腈。如果需要，所述混合物原样用于后面的步骤。
LCMS(EI,m/z):(M+1)307.98
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.45(1H,s,CH芳香的),7.70(2H,平坦宽单峰,NH2),2.84(3H,s,CH3)。
实施例5:5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺
将275μl(2eq)肼一水合物加入至872mg(2.84mmol)6-氨基-5-碘-2-(甲基亚磺酰基)烟腈的11ml 2-丙醇溶液中。于80℃搅拌反应介质3小时。加入水并用乙酸乙酯萃取产物。将有机相经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。用最小量二异丙醚研磨残余物。过滤固体以获得褐色粉末形式的523mg(67％)5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)276.00
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.23(1H,s,NH),8.26(1H,s,CH芳香的),6.11(2H,bs,NH2),5.25(2H,bs,NH2)。
方法B1的实施例
实施例6:5-(3,5-二氟苄硫基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-胺
实施例6a:6-氯-3-硝基-2-氰基吡啶
将2,6-二氯-3-硝基吡啶(5.18mmol,1g)和5ml N-甲基-2-吡咯烷酮在微波反应器中混合。于180℃加热反应混合物15分钟(6个大气压)。将粗反应产物溶解于乙酸乙酯中，过滤并用水相洗涤数次。收集有机相，经硫酸镁干燥并浓缩干燥。通过硅胶色谱法(庚烷/AcOEt)纯化由此得到的粗产物以在浓缩之后获得0.62g(65％)褐色油。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.81(1H,d,CH芳香的),8.18(1H,d,CH芳香的)。
实施例6b:3-硝基-6-硫代-1,6-二氢吡啶-2-甲腈
将一个当量的NaSH:H2O加入至6-氯-3-硝基-2-氰基吡啶(5.45mmol,1g)的20mlEtOH溶液中。颜色变为橙色。于室温搅拌反应介质30分钟。然后将粗反应产物浓缩，再溶解于乙酸乙酯中并用酸性水相(1N HCl)然后中性相萃取数次。将有机相浓缩并将粗反应产物在丙酮中重结晶以获得0.64g(79％)黄色晶体。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.71(1H,d,CH芳香的),8.27(1H,d,CH芳香的)。
实施例6c:6-(3,5-二氟苄硫基)-3-硝基-2-氰基吡啶
于70℃加热3-硝基-6-硫代-1,6-二氢吡啶-2-甲腈(4.42mmol,1.34g)、3,5-二氟苄基溴苄(8.83mmol,1.828g)和K2CO3(11.04mmol,1.525g)的5ml丙酮中的混合物10小时，然后减压下蒸发。通过硅胶色谱法(AcOEt/庚烷)纯化残余物以获得1.33g(98％)所需产物。
LCMS(ES-):m/z 306(M-H+)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.53(1H,d,CH芳香的),7.91(1H,d,CH芳香的),7.21(2H,m),7.17(1H,m),4.55(2H,CH2)。
实施例6d:3-氨基-6-(3,5-二氟苄硫基)吡啶酰胺
搅拌下将6-(3,5-二氟苄硫基)-3-硝基-2-氰基吡啶(0.05g,0.163mmol)和PtO2(0.739mg,3.25μmol)的10ml MeOH中的混合物置于氢气大气压2小时。过滤催化剂，浓缩溶液，通过硅胶色谱法(AcOEt/庚烷)纯化由此得到的残余物以在浓缩之后获得0.04g(83％)白色晶体。
LCMS(ES+)m/z:296(MH+)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.84(1H,宽s,NH),7.40(1H,宽s,NH),7.14(1H,d,CH芳香的),7.08(4H,m,CH芳香的),6.80(2H,宽s,NH2),4.43(2H,s,CH2)。
实施例6e:3-氨基-6-(3,5-二氟苄硫基)-2-氰基吡啶
将3-氨基-6-(3,5-二氟苄硫基)吡啶酰胺(2.37mmol,0.7g)和P2Cl5(9.48mmol,1.346g)的混合物、20ml甲苯和1ml离子溶剂(1-丁基-3-甲基咪唑鎓四氟硼酸盐)置于微波反应器中，然后于140℃加热30分钟。然后减压下浓缩粗反应产物，将由此得到的橙色晶体再溶解于乙酸乙酯中并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机相经硫酸镁干燥，然后浓缩以获得0.7g褐色油。通过硅胶色谱法(AcOEt/庚烷+0.1％NEt3)纯化所述粗反应产物以在浓缩之后获得0.15g(23％)橙色晶体。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.73(1H,d,CH芳香的),7.25(2H,m,CH芳香的),7.18(1H,m),6.85(1H,d),5.43(2H,CH2)。
实施例6:5-(3,5-二氟苄硫基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-胺
将冷却至0℃的3ml NaNO2水溶液于0℃逐滴加入至3-氨基-6-(3,5-二氟苄硫基)-2-氰基吡啶(1.587mmol,0.44g)的15ml 6N HCl溶液的溶液中。15分钟之后，逐滴加入冷却至0℃的稀释于4ml 12N HCl的SnCl2·2H2O溶液。然后于25℃搅拌反应介质1小时。用乙酸乙酯萃取溶液，然后用饱和NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤。收集有机相，经硫酸镁干燥，然后减压下浓缩。通过硅胶色谱法(AcOEt/庚烷)纯化残余物以在浓缩有机相之后获得0.07g(15％)黑色晶体。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.64(1H,s,NH),7.63(1H,d,CH芳香的),7.21(2H,m,CH芳香的),7.13(1H,d,CH芳香的),7.04(1H,m,CH芳香的),5.38(2H,s,NH2),4.51(2H,s,CH2)。
通过类似的方法获得如下化合物：
**1H NMR:δHppm(400MHz,DMSO):6-2:11.65(1H,s,NH),7.64(1H,dd,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.42-7.51(1H,m,CH芳香的),7.20-7.25(1H,m,CH芳香的),7.14(1H,dd,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.01-7.11(1H,m,CH芳香的),5.37-5.41(2H,m,NH2),4.49(2H,s)。6-3:11.65(1H,s,NH),7.83(1H,m,CH芳香的),7.61(1H,dd,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.50(1H,m,CH芳香的),7.28-7.32(1H,m,CH芳香的),7.10(1H,dd,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.01-7.11(1H,m,CH芳香的),5.42(2H,s,NH2),4.47(2H,s)。
方法B2的实施例
实施例7:5-(3,5-二氯苯硫基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-胺
实施例7a:6-(3,5-二氯苯硫基)-3-硝基-2-氰基吡啶
于70℃保持6-氯-3-硝基-2-氰基吡啶(3.70g,0.02mol)、3,5-二氯苯硫酚(3.60g,0.02mol)和K2CO3(5.6g,0.04mol)的100ml乙腈中的混合物16小时。将粗反应产物稀释于乙酸乙酯相分(fraction)中并用水相洗涤。经硫酸钠干燥有机相并通过硅胶色谱法(AcOEt/石油醚)纯化残余物以获得5.4g(80％)黄色固体。
实施例7b:3-氨基-6-(3,5-二氯苯硫基)-2-氰基吡啶
搅拌下将10ml浓HCl加入至6-(3,5-二氯苯硫基)-3-硝基-2-氰基吡啶(3.4g,0.01mol)的50ml甲醇溶液中。将反应介质回流，加入1.68g(0.03mol)铁并搅拌10分钟。返回至室温之后，向反应混合物中加入100ml乙酸乙酯和50ml水。使用30％苏打溶液将pH调节至10，萃取有机相，然后在浓缩之前经无水硫酸钠干燥。通过硅胶色谱法(乙酸乙酯/石油醚)纯化残余物以在浓缩相分之后获得2.82g(91％)黄色固体。
LCMS(m/e):296(M+H+).％.
实施例7:5-(3,5-二氯苯硫基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-胺
于0℃将350mg NaNO2(5.07mmol)水溶液(2ml)加入至1.5g 3-氨基-6-(3,5-二氯苯硫基)-2-氰基吡啶(5.07mmol)的100ml 50％硫酸搅拌溶液中。于0-5℃搅拌混合物20分钟。然后加入2.9g SnCl2·2H2O(12.7mmol,2.5eq)的盐酸溶液(12N溶液，10ml)，并于室温搅拌所述溶液1小时。过滤形成的固体，然后用20ml水洗涤两次。将固体悬浮于100ml中，并通过加入30％苏打溶液调节pH至10。分离有机相，然后经无水硫酸钠干燥，之后真空下浓缩。乙酸乙酯中重结晶之后得到浅黄色固体(470mg,34％)。
LCMS m/z 311(M+H+)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.91(1H,bs,NH),7.79(1H,d,CH芳香的),7.55(1H,s,CH芳香的),7.36(2H,s,CH芳香的),7.33(1H,m,CH芳香的),5.42(2H,s,NH2)。
通过类似的方法获得如下化合物：
**1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7-1:11.61(1H,大单峰,NH),7.73(1H,d,CH芳香的),7.24(2H,m,CH芳香的),7.18(1H,m,CH芳香的),6.86(1H,d,CH芳香的)。7-2:11.95(1H,sl,NH),7.78(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.33(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.19(1H,t,CH芳香的),7.04(2H,2d,CH芳香的,J＝8.8Hz),5.51(2H,s,NH2)。7-3:11.80(1H,sl,NH),7.70(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.60(1H,t,CH芳香的),7.49(1H,q,CH芳香的),7.27-7.33(1H,m,CH芳香的),7.11(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),5.41(2H,s,NH2)。7-4:11.93(1H,sl,NH),7.80(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.62(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.40(1H,dd,CH芳香的,J＝11.2Hz),7.29(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.1(1H,s,CH芳香的),5.51(2H,s,NH2)。7-5:11.86(1H,sl,NH),7.87(1H,d,CH芳香的,J＝9.6Hz),7.73(1H,d,CH芳香的,J＝11.6),7.50-7.68(2H,m,CH芳香的),7.44(1H,d,CH芳香的,J＝10.4Hz),7.11(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),5.46(2H,s,NH2)。7-6:12.66(1H,sl,NH),8.52(1H,s,CH芳香的),7.12-7.20(1H,m,CH芳香的),7.02-7.10(2H,m,CH芳香的),5.90(2H,s,NH2)。7-7:12.70(1H,s,NH),8.52(1H,s,CH芳香的),7.60(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.38(1H,dd,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.12(1H,s,CH芳香的),5.92(2H,s,NH2)。7-8:12.66(1H,s,NH),8.39(1H,s,CH芳香的),7.84(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),7.58(1H,t,CH芳香的),7.50(1H,t,CH芳香的),7.34(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),5.87(2H,s,NH2)。7-9:11.57(1H,s,NH),7.74(1H,d,Ch芳香的,J＝9Hz),7.25(3H,m,CH芳香的),6.88(1H,d,Ch芳香的,J＝9Hz),5.44(2H,s),5.08(2H,s)。7-10:11.58(1H,s,NH),7.73(1H,d,CH芳香的,J＝12.0Hz),7.48-7.58(1H,m,CH芳香的),7.21-7.37(2H,m,CH芳香的),6.85(1H,d,CH芳香的,J＝12.0Hz),5.44(2H,s,CH),5.10(2H,sl,NH2)。7-11:11.60(1H,sl,NH),7.70-7.77(2H,m,CH芳香的),7.57(1H,d,CH芳香的,J＝11.2Hz),7.40-7.50(1H,m,CH芳香的),6.89(1H,d,CH芳香的,J＝12.0Hz),5.48(2H,s,CH),5.06(2H,sl,NH2)。7-12:11.60(1H,sl,NH),7.91(1H,s,CH芳香的),7.83(1H,d,CH芳香的,J＝11.2Hz),7.75(1H,d,CH芳香的,J＝12.0Hz),7.66(1H,d,CH芳香的,J＝9.6Hz),6.88(1H,d,CH芳香的,J＝12.0Hz),5.58(2H,s,CH),5.01(2H,sl,NH2)。7-13:11.56(1H,sl,NH),8.77(1H,s,CH芳香的),8.55(1H,s,CH芳香的),7.96(1H,d,CH芳香的,J＝10.4Hz),7.72(1H,d,CH芳香的,J＝12.0Hz),7.42(1H,dd,CH芳香的,J＝10.0Hz),6.83(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),5.45(2H,s,CH),5.15(2H,sl,NH2)。
实施例8:N5-(3,5-二氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3,5-二胺
实施例8a:6-(3,5-二氟苯基氨基)-3-硝基-2-氰基吡啶
于70℃将6.5g 6-氯-3-硝基-2-氰基吡啶(0.065mol)和6.2g 3,5-二氟苯胺(0.048mol)的100ml甲苯中的混合物加热5小时。将粗反应产物稀释于乙酸乙酯相分中并用饱和NaCl溶液洗涤。经硫酸钠干燥有机相并通过硅胶色谱法(AcOEt/石油醚)纯化残余物以获得3.9g(33％)黄色固体。
实施例8b:3-氨基-6-(3,5-二氟苯基氨基)-2-氰基吡啶
搅拌下将10ml浓HCl加入至6-(3,5-二氯苯硫基)-3-硝基-2-氰基吡啶(3.9g,0.0141mol)的150ml乙醇溶液中。将反应介质回流，加入2.4g铁(0.0423mol)并于80℃搅拌1小时。返回至0℃之后，使用1N苏打溶液调节pH至8并在硅藻土上过滤反应介质。向反应混合物中加入100ml乙酸乙酯和50ml甲醇。萃取有机相并用乙酸乙酯相分萃取水相数次。合并有机相，然后在浓缩之前经无水硫酸钠干燥，以在浓缩之后获得2.3g(66％)褐色固体。
实施例8:5-(3,5-二氟苯基氨基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-胺
于0℃将713mg NaNO2(10.3mmol)水溶液(5ml)逐滴加入至2.3g 3-氨基-6-(3,5-二氟苯基氨基)-2-氰基吡啶(9.4mmol)的100ml 6N盐酸搅拌溶液中。于0-5℃搅拌混合物20分钟。然后逐滴加入5.3g SnCl2·2H2O(23.5mmol,2.5eq)的盐酸溶液(12N溶液，30ml)，并于室温搅拌所述溶液1小时。然后将反应介质冷却至0℃并用30％苏打溶液碱化至pH 8。用乙酸乙酯萃取混合物，用饱和NaCl溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥有机相，之后真空下浓缩有机相。通过硅胶柱色谱法(AcOEt)纯化残余物。得到浅黄色固体(530mg,22％)。
LCMS:m/z 262(M+H+)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.47(s,1H),9.45(s,1H),7.65(m,3H),6.87(d,1H,J＝7.8Hz),6.60(m,1H),5.09(s,2H)。
通过类似的方法获得如下化合物：
**1HNMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8-1:11.46(1H,s,NH),8.75-8.82(2H,m,CH芳香的),7.65(1H,dd,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.19-7.31(2H,m,CH芳香的),6.67-6.63(1H,sl,CH芳香的),5.06(2H,s,NH2)。8-2:11.58(1H,sl,NH),8.65(1H,s,CH芳香的),8.35(1H,s,CH芳香的),7.69(1H,d,CH芳香的,J＝12.0Hz),7.45(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.24(1H,d,CH芳香的,J＝12.0Hz),6.96(1H,dd,CH芳香的,J＝11.2Hz),5.03(2H,sl,NH2)。
方法B3的实施例
实施例9:5-(3,5-二氟苄基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-胺
可以根据方法B3，由如下中间体制备该化合物。
实施例9a:2-(3,5-二氟苄基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环硼戊烷
实施例9b:6-(3,5-二氟苄基)-3-硝基-2-氰基吡啶
实施例9c:3-氨基-6-(3,5-二氟苄基)-2-氰基吡啶
方法B4的实施例
实施例10:3-氨基-N-(3,5-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-磺酰胺
实施例10a:5-(N-(3,5-二氟苯基)氨磺酰基)烟酸
于0℃将2.74g(9.64mmol)2-氯-5-(氯磺酰基)烟酸乙酯的20ml无水二氯甲烷溶液逐滴加入至稀释于10ml无水二氯甲烷的623mg(4.82mmol)3,5-二氟苯胺和1.68ml(12.05mmol)三乙胺的混合物中。于室温搅拌所述溶液3小时。蒸发溶剂以获得浅褐色固体。将固体在20ml甲醇中研磨，过滤，然后用3ml甲醇冲洗以获得2.85g白色固体。
将该固体再溶解于25ml四氢呋喃中并加入0.421g(10.04mmol)氢氧化锂一水合物的10ml水溶液中。于35℃搅拌下放置反应混合物3小时，然后稀释于水中，用1N盐酸酸化并用乙酸乙酯萃取。收集有机相，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩以获得橙色固体形式的1.12g 5-(N-(3,5-二氟苯基)氨磺酰基)烟酸(产率＝67％)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.91(1H,s,CH芳香的),8.51(1H,s,CH芳香的),7.02(1H,dd,CH芳香的),6.83(2H,d,CH芳香的)。
实施例10b:2-氯-5-(N-(3,5-二氟苯基)氨磺酰基)烟酰胺
将0.288ml(3.87mmol)亚硫酰氯和一滴DMF依次加入至5ml无水甲苯中的0.450g(1.29mmol)2-氯-5-(N-(3,5-二氟苯基)氨磺酰基)烟酸中。甲苯回流下搅拌下放置混合物2小时。然后搅拌下将酰氯反应混合物逐滴加入至冰冷的4.5ml 25％氢氧化铵的溶液中。观察到气体的释放。于室温搅拌下放置反应介质30分钟。用乙酸乙酯萃取反应介质数次。经无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后浓缩。得到浅褐色固体形式的0.315g 2-氯-5-(N-(3,5-二氟苯基)氨磺酰基)烟酰胺(产率＝72％)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.18(1H,bs,NH),8.86(1H,s,CH芳香的),8.22(1H,s,CH芳香的),8.21(1H,bs,NH),7.98(1H,bs,NH),6.96(1H,dd,CH芳香的),6.79(2H,d,CH芳香的)。
实施例10c:6-氯-5-氰基-N-(3,5-二氟苯基)吡啶-3-磺酰胺
将3.4ml(36.2mmol)三氯氧磷和一滴浓硫酸加入至0.315g(0.906mmol)2-氯-5-(N-(3,5-二氟苯基)氨磺酰基)烟酰胺中。于90℃搅拌反应混合物2小时，然后逐滴加入至冰中。将褐色固体过滤，用水冲洗，然后真空下干燥。得到浅褐色固体形式的0.217g 6-氯-5-氰基-N-(3,5-二氟苯基)吡啶-3-磺酰胺(产率＝72％)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.34(1H,bs,NH),9.04(1H,s,CH芳香的),8.92(1H,s,CH芳香的),7.03(1H,dd,CH芳香的),6.85(2H,d,CH芳香的)。
实施例10:3-氨基-N-(3,5-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-磺酰胺
将0.377ml(2.63mmol)35％肼加入至稀释于6ml异丙醇中的0.217g(0.658mmol)6-氯-5-氰基-N-(3,5-二氟苯基)吡啶-3-磺酰胺中。于75℃加热所述溶液2小时。蒸发溶剂以获得黄色固体形式的0.214g 3-氨基-N-(3,5-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-磺酰胺(产率＝100％)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.74(1H,d,CH芳香的),8.68(1H,d,CH芳香的),6.88(1H,dd,CH芳香的),6.80(2H,d,CH芳香的),6.04(2H,bs,NH)。
方法B5的实施例
实施例11:5-(3,5-二氟苄氧基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
可以根据方法B5，由如下中间体制备该化合物。
实施例11a:5-羟基烟腈
于200℃加热1g 5-甲氧基烟腈(7.46mmol)和8.62g吡啶盐酸盐的混合物2小时。将粗反应产物稀释于水相分中使用乙醚萃取数次。通过加入碳酸氢钠碱化水相，然后再次用乙醚萃取。将有机相干燥，然后浓缩以获得米黄色固体形式的850mg 5-羟基烟腈(95％)。
LCMS:m/z 120.94(M+H+)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):10.79(s,1H),8.46(s,1H,CH芳香的),8.42(s,1H,CH芳香的),7.60(s,1H,CH芳香的)。
实施例11b:5-(3,5-二氟苄氧基)烟腈
于0℃氮气下将876mg(2eq)氢化钠逐渐加入至865mg 5-羟基烟腈(7.2mmol)的15mL二甲基乙酰胺溶液中。在加入2.24g(1.5aq)3,5-二氟溴苄之前，将混合物搅拌10分钟。搅拌下放置混合物另外的2.5小时，之后将混合物稀释于乙酸乙酯相分并用水相分洗涤。将有机相分离、干燥和浓缩。将得到的固体残余物于甲醇中重结晶以获得米黄色粉末形式的1.1g(68％5-(3,5-二氟苄氧基)烟腈。
LCMS:m/z 247.11(M+H+)。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.69(s,1H,CH),8.65(s,1H,CH),8.08(s,1H,CH),7.26(m,3H,CH),5.28(d,2H,CH2)。
实施例11c:3-氰基-5-(3,5-二氟苄氧基)吡啶1-氧化物
于0℃将224mg m-CPBA加入至250mg 5-(3,5-二氟苄氧基)烟腈的乙腈溶液中。将反应介质搅拌20小时，同时逐步形成沉淀物。然后过滤该固体并洗涤以获得白色粉末形式的200mg(75％)3-氰基-5-(3,5-二氟苄氧基)吡啶1-氧化物。
LCMS:m/z 263.06(M+H+)。
实施例11d:2-氯-5-(3,5-二氟苄氧基)烟腈
于110℃加热2.3mL POCl3中(加入几滴H2SO4)的650mg 3-氰基-5-(3,5-二氟苄氧基)吡啶1-氧化物混合物1小时30分钟。然后将粗反应介质倒入冰中，通过过滤分离由此形成的沉淀物并真空下干燥以获得600mg米黄色固体形式的立体异构体混合物，所述混合物主要包含所需的2-氯-5-(3,5-二氟苄氧基)烟腈，其未经进一步纯化而使用。
LCMS:m/z 281.02(M+H+)。
实施例11:5-(3,5-二氟苄氧基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
将313mg水合肼(5eq)加入至1.6g 2-氯-5-(3,5-二氟苄氧基)烟腈(450μmol)的10mL 2-丙醇溶液中。于100℃加热反应混合物6小时。返回至室温之后导致沉淀，过滤粗反应介质，除去固体并将滤液蒸发至干。然后通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用乙酸乙酯和甲醇梯度洗脱，而将更大极性相分分离，浓缩并在搅拌下再次悬浮于少量甲醇中。分离由此得到的固体并干燥以获得米黄色固体形式的221mg 5-(3,5-二氟苄氧基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺，其未经进一步纯化而使用。
LCMS:m/z 277.07(M+H+)。
方法B6的实施例
实施例11二:N-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)-3,5-二氟苯磺酰胺
实施例11二-a:N-(6-氯-5-氰基吡啶-3-基)-3,5-二氟苯磺酰胺
氩气氛下将1.132g(5.32mmol)3,5-二氟苯-1-磺酰氯加入至545mg(3.55mmol)5-氨基-2-氯烟腈的20mL无水1:1THF和吡啶混合物的溶液中。将反应介质加热至70℃持续3小时并放置另外的12小时。将溶剂蒸发至干并将粗反应产物再溶解于乙酸乙酯中，用水相分洗涤数次。将有机相经硫酸镁干燥，过滤，浓缩，然后通过硅胶色谱法纯化以获得784mg(67％)N-(6-氯-5-氰基吡啶-3-基)-3,5-二氟苯磺酰胺。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11,39(1H,sl,NH),8.34(1H,m,CH芳香的),8.10(1H,m,CH芳香的),7.67(1H,m,CH芳香的),7.59(2H,m,CH芳香的)。
实施例11二:N-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)-3,5-二氟苯磺酰胺
氩气下将1.786g(35.7mmol)水合肼加入至784mg(2.38mmol)N-(6-氯-5-氰基吡啶-3-基)-3,5-二氟苯磺酰胺的6mL乙醇溶液中。将所述溶液加热至100℃持续20小时，然后冷却至室温。蒸发溶剂以获得810mg N-(3-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)-3,5-二氟苯磺酰胺(100％)，其未经进一步纯化而用于后面的步骤。
LCMS:m/z 326.07(M+H+)。
方法C1的实施例
实施例12:N6-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺
可以根据方法C1，由如下中间体制备该化合物。
实施例12-a:5-氰基-6-(甲硫基)吡啶-2-基三氟甲磺酸酯
氮气下将15.26mL(1.2eq)2-甲基-2-丙醇钾，然后将9.03g(1.2eq)1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺滴加入3.5g(21.06mmol)6-羟基-2-(甲硫基)烟腈的180mL四氢呋喃溶液中。于室温搅拌反应混合物2小时45分钟。加入水并用乙酸乙酯萃取产物。将有机相经无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发以获得橙色固体。在硅胶柱上(洗脱剂：环己烷/二氯甲烷5:5)纯化产物以获得黄色固体形式的5.31g(85％)5-氰基-6-(甲硫基)吡啶-2-基三氟甲磺酸酯。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.57(1H,d,CH),7.52(1H,d,CH),2.59(3H,s,CH3)。
实施例12-b:6-(2,4-二氟苯基氨基)-2-(甲硫基)烟腈
氮气下将0.81mL(1.2eq),4-二氟苯胺和1.53g(1.4eq)碳酸铯(I)加入至2g(6.71mmol)5-氰基-6-(甲硫基)吡啶-2-基三氟甲磺酸酯的30mL 1,4-二氧六环溶液中。氩气下将介质脱气5分钟，之后加入0.25g(0.06eq)2,2’-双(二苯膦)-1,1’联萘和0.08g(0.04eq)(1E,4E)-1,5-二苯基-1,4-戊二烯-3-酮，钯(II)络合物。于100℃搅拌反应介质2小时。返回至室温之后，加入乙酸乙酯和盐水。将有机相经无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(洗脱剂：环己烷/乙酸乙酯8:2然后7:3)纯化得到的残余物以获得白色固体形式的1.52g(82％)6-(2,4-二氟苯基氨基)-2-(甲硫基)烟腈。
LCMS(IE,m/z):(M+1)278.06。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):9.57(1H,s,NH),7.73-7.86(2H,m,CH),7.28-7.44(1H,m,CH),7.02-7.18(1H,m,CH),6.60(1H,d,CH),2.41(3H,s,CH3)。
实施例12:N6-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺
氩气下将769mg(3.12mmol)间-氯过氧苯甲酸(mCPBA)加入至786mg(2.83mmol)6-(2,4-二氟苯基氨基)-2-(甲硫基)烟腈的25mL二氯甲烷搅拌溶液中。于室温搅拌反应介质1小时，之后加入乙酸乙酯相分并用NaHCO3饱和溶液洗涤该有机相。将合并的有机相经硫酸镁干燥并蒸发至干。将粗反应产物再次溶解于10mL丙醇中并加入2当量水中的肼盐酸盐。于90℃加热混合物6小时，之后用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机相经硫酸镁干燥并蒸发至干，之后通过硅胶色谱法纯化以获得黄色-橙色固体形式的495mg N6-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺(67％)。
LCMS(IE,m/z):(M+1)262.14。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.40(1H,s,NH),8.76(1H,s,NH),8.15(1H,m,CH),7.81(1H,d,CH),7.28(1H,m,CH),7.06(1H,m,CH),6.55(1H,d,CH),5.24(2H,s,NH2)。
通过类似的方法获得如下化合物：
**1H NMR,dmso-d6,实施例:12-1:11.17(1H,s,NH),7.66(1H,d,CH),7.37(1H,s,NH),7.04(3H,m,CH),6.24(1H,d,CH),5.11(2H,s,NH2),4.52(2H,s,CH2)。
实施例12二:N6-(2,4-二氟苯基)-N6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺
实施例12二-a:6-((3,5-二氟苯基)(甲基)氨基)-2-(甲硫基)烟腈
氮气下将3.05mL(5.04mmol)2-甲基-2-丙醇钾，然后将286μL(1.8eq)碘甲烷滴加入700mg(2.52mmol)6-(2,4-二氟苯基氨基)-2-(甲硫基)烟腈的20mL N,N-二甲基甲酰胺溶液中。于室温搅拌反应介质24小时，然后加入126μL(0.8eq,2.02mmol)碘甲烷。于室温搅拌反应介质另外2小时。加入水并用乙酸乙酯萃取产物。将有机相经无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发以获得褐色固体形式的660mg(90％)6-((2,4-二氟苯基)(甲基)氨基)-2-(甲硫基)烟腈。
LCMS(IE,m/z):(M+1)292.09。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.74-7.80(1H,m,CH),7.55-7.63(1H,m,CH),7.43-7.52(1H,m,CH),7.18-7.27(1H,m,CH),6.16-6.30(1H,m,CH),3.43(3H,s,CH3),2.42(3H,s,CH3)。
实施例12二:N6-(2,4-二氟苯基)-N6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺
氩气下将452mg(1.84mmol)mCPBA加入至486mg(1.67mmol)6-((2,4-二氟苯基)(甲基)氨基)-2-(甲硫基)烟腈的15mL二氯甲烷搅拌溶液中。于室温搅拌反应介质30分钟，之后加入乙酸乙酯相分。将有机相用NaHCO3饱和溶液洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发至干。将粗反应产物再次溶解于6mL丙醇中并加入164μL(3.38mmol)水中的肼盐酸盐。于90℃加热混合物6小时，之后用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机相经硫酸镁干燥并蒸发至干，之后通过硅胶色谱法纯化以获得黄色-橙色固体形式的328mg N6-(2,4-二氟苯基)-N6-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3,6-二胺(70％)。
LCMS(IE,m/z):(M+1)276.15。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.41(1H,s,NH),7.75(1H,d,CH),7.51-7.55(1H,m,CH),7.40-7.43(1H,m,CH),7.17-7.22(1H,m,CH),6.03(1H,d,CH),5.23(2H,s,NH2),3.28(3H,s,CH3)。
方法C3的实施例
实施例12三：6-(2,4-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
实施例12三-a:2-氯-6-(2,4-二氟苯硫基)烟腈
氮气下将362mg(1.05eq)氢氧化钾的10mL乙醇溶液加入至698μL(6.16mmol)2,4-二氟苯硫酚的30mL乙醇溶液中。于室温搅拌反应介质15分钟，然后在冰中冷却，之后加入1.015g(0.95eq)2,6-二氯烟腈的30mL乙醇溶液。然后于0-5℃搅拌反应介质2小时。加入63mL 0.1N HCl溶液终止反应。加入水并用乙酸乙酯萃取产物。将有机相经无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(洗脱剂：环己烷/乙酸乙酯94:6)纯化残余物以获得白色固体形式的1.09g(66％)2-氯-6-(2,4-二氟苯硫基)-烟腈。
LCMS(IE,m/z):(M+1)282.98。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.24(1H,d,CH),7.77-7.85(1H,m,CH),7.52-7.63(1H,m,CH),7.25-7.35(2H,m,CH),2.41(3H,s,CH3)。
实施例12三:6-(2,4-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
氮气下将0.561mL(11.57mmol)肼一水合物加入至1.09g(3.86mmol)2-氯-6-(2,4-二氟苯硫基)烟腈的15mL丙醇搅拌溶液中。于80℃搅拌反应介质4小时。当反应介质返回至室温时得到沉淀物。将沉淀物过滤并用乙醇冲洗。将固体溶解于乙酸乙酯相分中并用1NHCl溶液洗涤。将有机相经硫酸镁干燥并蒸发至干以获得黄色固体形式的420mg(39％)6-(2,4-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.10(1H,s,NH),8.11(1H,d,CH),7.82-7.89(1H,m,CH),7.58-7.63(1H,m,CH),7.32-7.36(1H,m,CH),6.86(1H,d,CH),4.59(2H,s,NH2)。
通过类似的方法获得如下化合物：
实施例12四:6-(3,5-二氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
氩气下将17.35mL 0.5M(3,5-二氟苄基)氯化锌(8.58mmol)的THF溶液加入至416mg氯化钯(II)(510mmol)和883mg 2,6-二氯烟腈(5.1mmol)的2mL无水THF溶液中。将反应回流7小时，然后冷却至室温。加入1N苏打水溶液并连续用乙酸乙酯相分萃取产物数次。将有机相经硫酸镁干燥并蒸发至干，之后通过硅胶色谱法纯化以获得680mg 2-氯-6-(3,5-二氟苄基)-烟腈和副产物的混合物，其未经进一步纯化而用于后面的步骤。
搅拌下将前面的混合物溶解于10mL异丙醇中并加入750μL 35％水合肼。于80℃加热所述溶液4小时。将溶剂蒸发至干并通过硅胶色谱法(二氯甲烷/甲醇9:1)纯化产物以获得290mg 6-(3,5-二氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(64％)。
LCMS(IE,m/z):(M+1)261.16。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.82(1H,s,NH),8.01(1H,d,CH),6.99-7.04(3H,m,CH),6.91(1H,d,CH),5.49(2H,s,NH2),4.12(2H,s,CH2)。
方法D1的实施例
实施例13:5-(3,5-二氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
将0.575g(0.704mmol)(dppf)2PdCl2·CH2Cl2和28ml(14.08mmol)3,5-二氟苄基氯化锌(II)加入至1.5g(7.04mmol)5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺的10ml四氢呋喃溶液中。于90℃加热反应介质18小时。返回至室温之后，于0℃通过缓慢加入水来水解所述反应。过滤形成的沉淀物之后，用四氢呋喃冲洗固体并用乙酸乙酯萃取含水滤液数次。将有机相合并，经硫酸镁干燥并浓缩。通过硅胶色谱法(95:4.5:0.5然后95:4:1二氯甲烷/甲醇/铵作为洗脱剂)纯化残余物以获得米黄色固体形式的1.7g(93％)5-(3,5-二氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)261.41。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):11.87(1H,s,NH),8.31(1H,d,CH芳香的),7.92(1H,d,CH芳香的),6.98-7.08(3H,m,CH芳香的),5.47(2H,s,NH),4.04(2H,s,CH2)。
通过类似的方法获得如下化合物：
**1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13-1:11.61(1H,sl,NH),7.65(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.20(1H,d,CH芳香的,J＝11.2Hz),6.95-7.10(3H,m,CH芳香的),5.32(2H,sl,NH2),4.18(2H,s,CH2)。13-2:12.31(1H,sl,NH),8.44(1H,s,CH芳香的),7.03-7.08(3H,m,CH芳香的),5.61(2H,sl,NH2),4.25(2H,s,CH2)。
方法D2的实施例
实施例14:5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺
在50ml圆底烧瓶中混合0.7g(2.68mmol)5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺、0.74g(5.36mmol)无水碳酸钾和0.10g碘化亚铜(0.536mmol)。然后加入15ml 2-丙醇、0.01g(0.2mmol)聚乙二醇和0.43g(2.95mmol)3,5-二氟苯硫酚。于80℃加热反应混合物2小时。蒸发溶剂并将形成的固体过滤，依次用水和戊烷冲洗并在烘箱中于50℃干燥以获得褐色固体形式的0.75g(100％)5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)280.03。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.65(1H,bs,NH),8.52(1H,s,CH芳香的),7.18(1H,t,CH芳香的),7.05-7.18(2H,m,CH芳香的),5.89(2H,s,NH)。
根据相同的方法获得如下衍生物：
**1H NMR,DMSO-d6,实施例:14-3:12.65(1H,bs,NH),8.52(1H,s,CH芳香的),7.18(1H,t,CH芳香的),7.05-7.18(2H,m,CH芳香的),5.89(2H,s,NH)。14-6:8.21(2H,bs,CH芳香的),7.07(1H,m,CH芳香的),6.90(2H,m,CH芳香的),6.27(2H,bs,NH),4.03(2H,s,CH),1.63(9H,s,CH)。14-7:12.16(1H,bs,NH),8.39(1H,s,CH芳香的),7.00-7.08(1H,m,CH芳香的),6.64-6.72(2H,m,CH芳香的),5.73(2H,bs,NH2),2.54(3H,s,CH3)。14-9:8.51(1H,bs,CH芳香的),8.35(1H,bs,CH芳香的),7.02(1H,m,CH芳香的),6.72(2H,bs,CH芳香的),6.52(2H,bs,NH),1.67(9H,s,CH)。(ND:未确定)。
实施例14二:N-(5-(3,5-二氟苯基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺.
氩气下将225mg N-(5-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺(0.25mmol)、36mg二氟苯胺(0.275mmol)、19mg R-(+)-2,2’-双(二苯膦)-1,1’联萘(0.030mmol)、11mg(0.013mmol)三(二亚苄基丙酮)二钯(0)和75mg(0.75mmol)叔丁醇钠的10mL THF溶液回流过夜。将粗反应介质冷却，用乙酸乙酯萃取并用水洗涤。将有机相经硫酸镁干燥并通过硅胶色谱法纯化以获得N-(5-(3,5-二氟苯基氨基)-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺，其未经进一步纯化而用于后面的步骤。
于0℃将由此得到的产物溶解于10mL二氯甲烷中并加入56mg(0.5mmol)TFA。搅拌反应介质4小时。加入水并用NaHCO3溶液调节反应介质的pH至7。收集水相，用浓K2CO3溶液碱化(pH 9-10)并用二氯甲烷萃取。收集有机相，经硫酸镁干燥并浓缩至干燥以获得40mg N-(5-(3,5-二氟苯基氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺。
LCMS(IE,m/z):(M+1)562.12。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.45(1H,sl,NH),10.47(1H,sl,NH),8.65(1H,s,CH芳香的),8.55(1H,s,CH芳香的),8.14(1H,d,NH),7.77(1H,d,CH芳香的),7.26(2H,m,CH芳香的),7.05(1H,m,CH芳香的),6.25(1H,d,CH芳香的),6.14(1H,s,NH),6.77(1H,s,NH),3.82-3.84(2H,dt,CH),3.72(1H,m,CH),3.47-3.52(2H,m,CH),3.28-3.34(4H,m,CH),2.43(4H,m,CH),2.23(3H,s,CH3),1.94-1.97(2H,m,CH),1.37-1.39(2H,m,CH)。
方法D3的实施例：
实施例15:N-(5-((3,5-二氟苯基)乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺
氩气下，搅拌下，在12ml无水二氧六环中，将0.94mg(0.926mmol)三乙胺加入至400mg(0.712mmol)N-(5-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺、67.8mg(0.356mmol)CuI和50mg(0.071mmol)Pd(PPh3)2Cl2。于100℃加热反应3.5小时。用30ml水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。将有机相经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(二氯甲烷/甲醇)纯化得到的残余物以获得黄色固体形式的152mg N-(5-((3,5-二氟苯基)乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺(产率＝37％)。
LCMS(EI,m/z):(M+1)572.17。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.57(1H,bs,NH),10.56(1H,bs,NH),8.68(1H,s,CH芳香的),8.43(1H,s,CH芳香的),8.13(1H,d,NH),7.80(1H,d,CH芳香的),7.38(2H,m,CH芳香的),6.27(1H,d,CH芳香的),6.15(1H,d,CH芳香的),3.84-3.82(2H,dt,CH),3.70(1H,m,CH),3.45-3.50(2H,m,CH),3.21-3.33(4H,m,CH),2.42-2.46(4H,m,CH),2.28(3H,s,CH3),1.94-1.97(2H,m,CH),1.37-1.39(2H,m,CH)。
根据相同的方法获得如下衍生物：
**1H NMR,dmso-d6,实施例:15-1:12.71(1H,sl,NH),8.66(1H,s,CH芳香的),7.40-7.47(3H,m,CH芳香的),6.01(2H,sl,NH2)。
方法E的实施例
包括方法E的方案旨在通过与任选原位产生的特征在于亲电官能团的中间体(如酰氯、异氰酸酯、异硫氰酸酯或醛)反应官能化氨基吡唑环的环外胺。
反应中间体的制备
实施例16:2-(N-(4,4-二氟环己基)-2,2,2-三氟乙酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸
实施例16a:4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-硝基苯甲酸叔丁酯
该化合物以前描述于WO 2008/74749中。
将5.28ml(47.6mmol)1-甲基哌嗪加入至4.1g(17mmol)4-氟-2-硝基苯甲酸叔丁酯中。无需溶剂搅拌反应混合物5小时。将150ml水加入至反应混合物中并将其搅拌24小时。将形成的沉淀物过滤，用水冲洗并真空下干燥以获得黄色固体形式的4.9g(90％)4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-硝基苯甲酸叔丁酯。
LCMS(EI,m/z):(M+1)322.37。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.69(1H,d,CH芳香的),7.30(1H,d,CH芳香的),7.20(1H,dd,CH芳香的),3.38(4H,m,CH),2.40(4H,m,CH),2.22(3H,s,CH3),1.45(9H,s,CH3)。
实施例16b:2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯
该化合物以前描述于WO 2008/74749中。
将0.160g(1.500mmol)钯碳(10％)和15.19ml(150mmol)环己烷加入至4.82g(15mmol)4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-硝基苯甲酸叔丁酯的100ml乙醇溶液中。于80℃加热反应混合物8小时。将反应混合物过滤然后用乙醇冲洗以获得黄色固体形式的4.2g(产率＝96％)2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯。
LCMS(EI,m/z):(M+1)292.39。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.44(1H,d,CH芳香的),6.40(2H,bs,NH2),6.19(1H,dd,CH芳香的),6.12(1H,d,CH芳香的),3.17(4H,m,CH),2.40(4H,m,CH),2.22(3H,s,CH3),1.49(9H,s,CH3)。
实施例16c:2-(4,4-二氟环己基氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯
将1.045ml(13.57mmol)三氟乙酸、1g(7.46mmol)4,4-二氟环己酮和2.158g(8.20mmol)四甲基三乙酰氧硼氢化铵加入至溶解于60ml二氯甲烷中的1.521g(5.22mmol)2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯中。搅拌下于室温放置反应24小时。蒸发溶剂然后将粗反应产物再溶解于30ml乙酸乙酯中。将溶液依次用0.5M HCl溶液、0.5M苏打溶液和最后的饱和NaHCO3溶液洗涤。将有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩以获得浅褐色胶形式的2.2g 2-(4,4-二氟环己基氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯(产率＝72％)。
LCMS(EI,m/z):(M+1)410.3。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.73(1H,bs,NH),7.58(1H,m,CH芳香的),7.77(1H,m,CH芳香的),6.09(1H,bs,CH芳香的),3.37(4H,m,CH),3.27(4H,m,CH),2.47(4H,m,CH),2.25(3H,s,CH),1.99(4H,s,CH),1.40(9H,s,CH)。
实施例16d:2-(N-(4,4-二氟环己基)-2,2,2-三氟乙酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯
将0.99ml(6.98mmol)三氟乙酸酐和1.12ml(8.06mmol)三乙胺加入至溶解于40ml二氯甲烷中的2.2g(5.3mmol)2-(4,4-二氟环己基氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯中。搅拌下于室温放置反应3小时。蒸发溶剂然后将粗反应产物吸收于30ml乙酸乙酯中。用饱和NaHCO3溶液洗涤所述溶液。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩以获得浅褐色胶形式的2.5g 2-(N-(4,4-二氟环己基)-2,2,2-三氟乙酰氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯(产率＝92％)。
LCMS(EI,m/z):(M+1)506.26。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.84(1H,m,CH芳香的),7.09(1H,m,CH芳香的),6.89(1H,bs,CH芳香的),3.45-3.39(8H,m,CH),2.83(4H,m,CH),2.20(4H,m,CH),2.05(3H,s,CH),1.46(9H,s,CH)。
实施例16:2-(N-(4,4-二氟环己基)-2,2,2-三氟乙酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸
将7.62ml(99mmol)三氟乙酸加入至溶解于30ml二氯甲烷中的2.5g(4.95mmol)2-(N-(4,4-二氟环己基)-2,2,2-三氟乙酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯中。搅拌下于室温放置反应过夜。蒸发溶剂然后将粗反应产物再溶解于30ml乙酸乙酯中。蒸发溶剂，将形成的固体再溶解于乙醚中并再次蒸发溶剂。重复该操作三次直至得到浅褐色固体。得到三氟乙酸盐形式的2.2g 2-(N-(4,4-二氟环己基)-2,2,2-三氟乙酰胺基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸(产率＝79％)。
LCMS(EI,m/z):(M+1)450.1。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):10.01(1H,bs,OH),7.92(1H,m,CH芳香的),7.13(1H,m,CH芳香的),7.01(1H,bs,CH芳香的),4.39(1H,m,CH),3.12-3.52(8H,m,CH),2.86(3H,s,CH),1.75-2.0(8H,m,CH)。
通过该方法还获得了如下化合物：
4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸。
该化合物以前描述于WO 2008/74749、WO 2009/13126和WO 2010/69966中。
LCMS(EI,m/z):(M+1)416.40。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.60(1H,bs,OH),10.08(1H,bs,OH),7.90(1H,d,CH芳香的),7.13(1H,dd,CH芳香的),6.90(1H,d,CH芳香的),4.40(1H,m,CH),4.10(2H,m,CH),3.70-3.90(2H,m,CH),3.59-3.62(4H,m,CH),3.30-3.32(4H,m,CH),2.87(3H,s,CH3),1.87-1.98(1H,m,CH),1.59-1.60(1H,m,CH),1.00-1.54(2H,m,CH)。
4-((3-(二甲基氨基)丙基)(甲基)氨基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸。
该化合物以前描述于WO 2009/13126和WO 2008/74749中。
实施例17:(S)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)-4-(3-(2,2,2-三氟乙酰胺基)吡咯烷-1-基)苯甲酸
实施例17a:(S)-4-(3-(叔丁氧羰基氨基)吡咯烷-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4基氨基)苯甲酸叔丁酯
通过使用(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯重复实施例16d得到了该化合物。
实施例17b:(S)-4-(3-氨基吡咯烷-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酸
将19.7ml(25eq)三氟乙酸加入至4.72g(10.23mmol)(S)-4-(3-(叔丁氧羰基氨基)吡咯烷-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酸叔丁酯的100ml二氯甲烷的溶液中。于室温搅拌反应介质30小时。蒸发溶剂并将残余物再溶解于乙醚中并研磨直至得到固体。过滤形成的固体并且真空下干燥以获得三氟乙酸盐形式的4.3g(100％)黄色粉末状的(S)-4-(3-氨基吡咯烷-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酸。
LCMS(EI,m/z):(M+1)306.22。
实施例17:(S)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)-4-(3-(2,2,2-三氟乙酰胺基)吡咯烷-1-基)苯甲酸
于0℃将1.74ml(3.5eq)三乙胺和1.6ml(2.1eq)三氟乙酸酐加入至三氟乙酸盐形式的1.5g(3.58mmol)(S)-4-(3-氨基吡咯烷-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酸的40ml二氯甲烷溶液中。于室温搅拌反应介质24小时。逐滴加入水(10ml)，然后用饱和氯化钠洗涤有机相，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(96:4二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂)纯化残余物以获得黄色粉末形式的250mg(14％)(S)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)-4-(3-(2,2,2-三氟乙酰胺基)吡咯烷-1-基)苯甲酸。
LCMS(EI,m/z):(M+1)498.07。
实施例18:2-(2-氟乙氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸
可以由如下中间体制备该化合物。
实施例18a:4-氟-2-(2-氟乙氧基)苯甲酸叔丁酯
实施例18b:2-(2-氟乙氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸叔丁酯
通过该方法还获得了如下化合物：
2-(2-氟乙氧基)-4-(4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯甲酸。
实施例19:4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(2-氟乙基)-乙酰胺基)-苯甲酸
可以由如下中间体制备该化合物。
实施例19a:4-氟-2-(2-氟乙基氨基)苯甲酸叔丁酯
实施例19b:4-氟-2-(2,2,2-三氟-N-(2-氟乙基)乙酰胺基)苯甲酸叔丁酯
实施例19c:4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(2-氟乙基)-乙酰胺基)-苯甲酸叔丁酯
通过该方法还获得了如下化合物：
4-((3-(二甲基氨基)丙基)(甲基)氨基)-2-(2,2,2-三氟-N-(2-氟乙基)乙酰胺基)苯甲酸。
实施例20:4-(1-甲基哌啶-4-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸三氟乙酸盐
可以由如下中间体制备该化合物。
实施例20a:2-硝基-4-(吡啶-4-基)苯甲酸叔丁酯
将1.67g二(三苯基膦)二氯化钯(II)(2.38mmol)和15.8g碳酸钠(149mmol)加入至18g 4-溴-2-硝基苯甲酸叔丁酯(59.6mmol)和10.98g吡啶-4-基硼酸(89mmol)的在200ml二甲氧基乙烷和100mL水的混合物溶液中。于100℃加热反应介质24小时然后减压下浓缩。通过快速色谱法(CH2Cl2/AcOEt:100:0至70:30，30分钟)纯化得到的残余物。该产物被分离为油的形式，其结晶以获得14.64g(82％)晶体。
MS(m/z):(M+1)301.0。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.73(2H,d,CH芳香的,J＝6.0Hz),8.44(1H,s,CH芳香的),8.24(1H,dd,CH芳香的,J＝8.0Hz),7.97(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),7.85(2H,dd,CH芳香的,J＝4.4Hz),1.54(9H,s)。
实施例20b:4-(4-(叔丁氧羰基)-3-硝基苯基)-1-甲基吡啶嗡碘化物
将7.55mL碘甲烷(121mmol)加入至16.2g 2-硝基-4-(吡啶-4-基)苯甲酸叔丁酯(60.6mmol)的20mL丙酮溶液中。于60℃加热反应介质4小时，然后于室温过夜。干燥浓缩之后，分离到27g橙色晶体(100％)。
MS(m/z):(M+1)315.0。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):9.14(2H,d,CH芳香的,J＝6.4Hz),8.71(1H,s,CH芳香的),8.63(2H,d,CH芳香的,J＝6.4Hz),8.47(1H,dd,CH芳香的,J＝8.0Hz),8.08(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),4.37(3H,s,CH),1.54(9H,s)。
实施例20c:2-氨基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酸叔丁酯
在不锈钢反应器中，将0.48g氧化铂(IV)(2.12mmol)加入至26.8g 4-(4-(叔丁氧羰基)-3-硝基苯基)-1-甲基吡啶碘化物(60.6mmol)的200mL甲醇溶液中。将反应介质于5bar氢气下放置24小时。过滤催化剂并于减压下浓缩滤液以获得24.8g(98％)白色晶体。
MS(m/z):(M+1)291.1。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):9.18(1H,s,HI),7.60(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),6.54-6.40(3H,m,CH芳香的),6.39(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),3.48-3.53(2H,m,CH),3.06(2H,t,CH),2.81(3H,s,CH),2.60-2.70(1H,m,CH),1.89-1.97(2H,m,CH),1.70-1.80(2H,m,CH),1.52(9H,s)。
实施例20d:4-(1-甲基哌啶-4-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酸叔丁酯
搅拌下将7.18mL 2,2,2-三氟乙酸(93mmol)、4.11mg二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(44.5mmol)然后将14.5g四甲基三乙酰氧硼氢化铵(53.8mmol)依次加入至15g 2-氨基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酸叔丁酯的200mL二氯甲烷溶液中。于室温将反应介质搅拌2小时，然后用1N苏打溶液吸收。分离有机相，经硫酸镁干燥然后浓缩干燥。残余物总包含HI。因此将其吸收于二氯甲烷中并用100mL 1H苏打溶液洗涤。将有机相倾倒出，经硫酸镁干燥并浓缩至干以获得14.6g黄色固体(定量产率)。
MS(m/z):(M+1)375.2。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.69(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.63(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),6.65(1H,s,CH芳香的),6.44(1H,dd,CH芳香的,J＝8.4Hz),3.74-3.86(2H,m,CH),3.66-3.71(1H,m,CH),3.51(2H,t,CH),3.05-3.12(2H,m,CH),2.6-2.5(1H,m,CH),2.42(3H,s,CH),2.30-2.40(2H,m,CH),1.89-1.97(2H,m,CH),1.64-1.77(4H,m,CH),1.52(9H,s),1.33-1.45(2H,m,CH)。
实施例20e:4-(1-甲基哌啶-4-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸叔丁酯
搅拌下于0℃将6.35mL三乙胺和5.50mL 2,2,2-三氟乙酸酐(39.6mmol)加入至11.4g 4-(1-甲基哌啶-4-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酸叔丁酯(30.4mmol)的240mL二氯甲烷溶液中。于室温搅拌反应介质1小时，然后滴加入100mL水。倾倒出有机相，经硫酸镁干燥并浓缩至干。将残余物吸收于乙醇/乙醚混合物中以获得固体，其在多孔烧结圆盘上过滤并分离到12.06g白色晶体。浓缩滤液(4.5g)然后通过硅胶闪式色谱法纯化(CH2Cl2/meOH:95:5至90:10,20分钟)。得到的产物在乙醚中重结晶以获得1.04g另外的白色晶体(总产率＝74％)。
MS(m/z):(M+1)471.1。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):9.45(1H,sl,NH+),7.96(1H,d,CH芳香的,J＝8Hz),7.51(1H,d,CH芳香的,J＝8Hz),7.31(1H,s,CH芳香的),4.6-4.5(1H,m,CH),3.90-3.75(2H,m,CH),3.5-3.35(4H,m,CH),3.1-2.85(3H,m,CH),2.79(3H,s,CH3),2.1-1.95(3H,3,CH),1.9-1.75(2H,m,CH),1.55-1.40(11H,m),1.0-0.85(1H,m,CH)。
实施例20:4-(1-甲基哌啶-4-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸三氟乙酸盐。
搅拌下将6.33mL 2,2,2-三氟乙酸(82mmol)加入至3.2g 4-(1-甲基哌啶-4-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(5.47mmol)(三氟乙酸盐的形式)的30mL二氯甲烷溶液中。于室温搅拌反应介质16小时，然后减压下蒸发。将残余物吸收于乙醇中，并在多孔烧结圆盘上过滤形成的白色固体以获得1.61g(53％)白色晶体。
MS(m/z):(M+1)415.1。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.39(1H,sl,COOH),9.46(1H,sl,COOH du TFA),7.99(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.49(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.30(1H,s,CH芳香的),4.53(1H,m,CH),3.74-3.86(2H,m,CH),3.35-3.45(5H,m,CH),2.90-3.01(3H,m,CH),2.76(3H,s,CH),1.65-2.04(5H,m,CH),1.44-1.54(2H,m,CH)。
实施例21:1-(4-异硫氰酰基苯基)-4-甲基哌嗪
采用EP1215208中描述的方法制备该化合物。
通过该方法还获得了如下化合物：
2-异硫氰酰基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基甲酸叔丁酯.
实施例22:2-异氰酰基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
可以由如下中间体制备该化合物。
实施例22a:5-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基氨基甲酸叔丁酯
实施例22b:2-氨基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
实施例22:2-异氰酰基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
实施例23:4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲醛
实施例23a:(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯基)甲醇
于0℃将溶解于5ml四氢呋喃中的500mg(1.060mmol)4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸加入至201mg(5.30mmol)LiAlH4的9ml四氢呋喃混悬液中。于0℃搅拌反应混合物1小时，然后于室温搅拌3小时。于0℃冷却反应混合物，然后逐滴加入200μl水，然后加入200μl苏打溶液(15重量％)最后加入1ml水。于室温搅拌反应混合物2小时，然后过滤并用四氢呋喃冲洗。浓缩滤液以获得白色固体形式的250mg(产率＝77％)(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯基)甲醇。
LCMS(EI,m/z):(M+1)306.14。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):6.85(1H,d,CH芳香的),6.20(1H,d,CH芳香的),6.10(1H,d,CH芳香的),4.95(1H,bs,OH),4.87(1H,d,NH),4.37(2H,d,CH2),3.83-3.86(2H,m,CH),3.56(1H,m,CH),3.46-3.56(3H,m,CH),3.45(1H,m,CH),3.05-3.07(4H,m,CH),2.41-2.44(4H,m,CH),2.21(3H,s,CH3),1.89-1.92(2H,m,CH)。
实施例23:4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲醛
于室温将85mg(0.982mmol)二氧化锰加入至乙酸乙酯(10ml)和二氯甲烷(9ml)混合物中的(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯基)甲醇(100mg,0.327mmol)溶液中。将反应混合物置于超声波浴中5小时。过滤反应混合物，蒸发溶剂并通过色谱法纯化粗产物以获得白色固体形式的50.0mg(产率＝50.3％)(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲醛。
LCMS(EI,m/z):(M+1)304.19。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):9.43(1H,d,CH),7.32(1H,d,CH芳香的),6.36(1H,d,CH芳香的),6.08(1H,d,CH芳香的),3.94-3.99(2H,m,CH),3.77(1H,m,CH),3.61-3.63(2H,m,CH),3.42-3.45(4H,m,CH),2.57-2.60(4H,m,CH),2.36(3H,s,CH3),2.04-2.08(2H,m,CH),1.51-1.60(2H,m,CH)。
实施例24:2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙酸
实施例24a:2,2,2-三氯-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙醇
于室温将1.0ml(10.00mmol)三氯乙酸和小份的1.854g(10mmol)2,2,2-三氯乙酸钠加入至1.362g(6.67mmol)4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲醛的13.5ml二甲基甲酰胺溶液中。于室温搅拌反应混合物3小时。浓缩溶剂并用乙酸乙酯萃取粗反应产物。使用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤有机相。将有机相合并，经硫酸镁干燥然后浓缩以获得白色固体形式的1.760g(产率＝82％)2,2,2-三氯-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙醇。
LCMS(EI,m/z):(M+1)324.04。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):7.41(2H,d,CH芳香的),7.02(1H,bs,OH),6.90(2H,d,CH芳香的),5.08(1H,bs,CH),3.14-3.16(4H,m,CH),2.42-2.47(4H,m,CH),2.21(3H,s,CH3)。
实施例24:2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙酸
将0.559g(14.77mmol)硼氢化钠快速加入至28ml乙醇中的2.294g(7.35mmol)二苄基二硒醚中。于室温搅拌反应混合物1小时。然后加入2.266g(7mmol)2,2,2-三氯-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙醇和1.680g(42.0mmol)氢氧化钠。于35℃搅拌反应混合物24小时。浓缩溶剂并在加入pH 5水相之后用乙酸乙酯萃取粗产物。将有机相合并，经硫酸镁干燥然后浓缩以获得2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙酸，其未经另外的纯化而使用。
LCMS(EI,m/z):(M+1)235.294。
实施例25:2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)乙酸
可以由如下中间体制备该化合物。
实施例25a:2-(4-氟-2-硝基苯基)丙二酸二乙酯
实施例25b:2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)丙二酸二乙酯
方法E1的实施例：
实施例26:N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰胺
将0.95ml(11.21mmol)草酰氯和2滴无水二甲基甲酰胺加入至2.97g(5.61mmol)4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸的95ml二氯甲烷溶液中。于室温搅拌反应混合物2小时。蒸发溶剂，将形成的固体吸收于甲苯中并蒸发溶剂。重复该操作三次直至得到白色固体。于-20℃将酰氯溶解于35ml无水四氢呋喃中，然后将形成的溶液加入至包含1.56g(5.61mmol)5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺和3.71ml(21.30mmol)N-乙基-N-异丙基-2-丙胺的30ml无水四氢呋喃溶液中。于-20℃搅拌反应混合物3小时，然后于室温过夜。过滤得到的沉淀物并用四氢呋喃和水冲洗，然后干燥以获得2g(53％)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)676.20。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.66(1H,bs,NH),11.08(1H,bs,NH),8.61(1H,s,CH芳香的),8.46(1H,s,CH芳香的),7.83(1H,d,CH芳香的),7.05-7.10(2H,m,CH芳香的),6.83-6.89(3H,m,CH芳香的),4.39-4.44(1H,m,CH),3.83-3.85(1H,m,CH),3.69-3.72(1H,m,CH),3.59-3.62(1H,m,CH),3.30-3.32(4H,m,CH2),2.30-2.44(4H,m,CH2),2.27(3H,s,CH3),1.87-1.90(1H,m,CH),1.59-1.60(1H,m,CH),1.49-1.50(1H,m,CH),1.20-1.40(1H,m,CH)。
根据相同的方法获得如下衍生物：
**1H NMR,dmso-d6,实施例:26-4:13,64(1H,sl,NH),11,26(1H,sl,NH),8,68(1H,d,CH芳香的),8,58(1H,d,CH芳香的),8,20(2H,d,CH芳香的),7,64(2H,d,CH芳香的),7,03(1H,m,CH芳香的),6,78(2H,m,CH芳香的),3,95(2H,m,CH2)。26-8:13,59(1H,sl,NH),11,05(1H,sl,NH),8,68(1H,d,CH芳香的),8,57(1H,d,CH芳香的),7,19(2H,d,CH芳香的),6,99-7,08(1H,m,CH芳香的),6,88(2H,d,CH芳香的),6,75-6,79(2H,m,CH芳香的),3,61(2H,m,CH2),3,07-3,09(4H,m,CH),2,41-2,44(4H,m,CH),2,20(3H,s,CH3)。26-9:13,17(1H,sl,NH),10,90(1H,sl,NH),8,55(1H,s,CH芳香的),7,79(1H,d,CH芳香的),7,07(1H,dd,CH芳香的),6,90(1H,d,CH芳香的),4,40-4,50(1H,m,CH),3,96(3H,s,CH3),3,82-3,89(1H,m,CH),3,74-3,80(1H,m,CH),3,34-3,41(2H,m,CH),3,28-3,33(4H,m,2*CH2),2,43-2,47(4H,m,2*CH2),2,23(3H,s,CH3),1,85-1,92(1H,m,CH),1,58-1,63(1H,m,CH),1,45-1,53(1H,m,CH),1,22-1,33(1H,m,CH)。26-10:12,48(1H,sl,NH),10,72(1H,sl,NH),8,30(1H,s,CH芳香的),7,77(1H,d,CH芳香的),7,06(1H,dd,CH芳香的),6,88(1H,d,CH芳香的),6,40(2H,sl,NH2),4,40-4,50(1H,m,CH),3,82-3,89(1H,m,CH),3,74-3,80(1H,m,CH),3,34-3,41(2H,m,CH),3,28-3,33(4H,m,2*CH2),2,43-2,47(4H,m,2*CH2),2,23(3H,s,CH3),1,85-1,92(1H,m,CH),1,58-1,65(1H,m,CH),1,45-1,55(1H,m,CH),1,22-1,34(1H,m,CH)。(ND:未确定)。26-14:12.99(1H,sl,NH),10.25(1H,s,NH),7.96(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.90-7.80(1H,m,CH芳香的),7.23-7.16(3H,m,CH芳香的),7.12-7.08(1H,m,CH芳香的),6.96(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.87(1H,s,CH芳香的),5.31(2H,s),4.49-4.42(1H,m),3.86-3.75(2H,m),3.45(1H,m),3.37(1H,m),3.35(4H,s),2.42(4H,s),2.22(3H,s),1.90-1.75(2H,m),1.53-1.49(1H,m),1.31-1.25(1H,m)。26-16:13.00(1H,s,NH),10.27(1H,s,NH),7.95(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.89-7.84(1H,m,CH芳香的),7.50-7.40(1H,m,CH芳香的),7.35-7.20(2H,m,CH芳香的),7.12-7.09(1H,m,CH芳香的),6.94(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.87(1H,s,CH芳香的),5.30(2H,s),4.52-4.43(1H,m),3.85-3.75(2H,m),3.46-3.43(1H,m),3.36(5H,s),2.45(4H,s),2.22(3H,s),1.92-1.82(2H,m),1.60-1.52(1H,m),1.33-1.26(1H,m)。26-20:13.01(1H,s,NH),10.22(1H,s,NH),7.97(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.90-7.78(3H,m,CH芳香的),7.68-7.64(1H,m,CH芳香的),7.12-7.08(1H,m,CH芳香的),6.97(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.85(1H,s,CH芳香的),5.43(2H,s),4.45-4.40(1H,m),3.86-3.70(2H,m),3.46-3.42(1H,m),3.30-3.28(5H,m),2.46(4H,s),2.23(3H,s),1.90(1H,d,J＝11.2Hz),1.77(1H,d,J＝11.2Hz),1.58-1.50(1H,m),1.30-1.20(1H,m)。
在某些情况下，这些反应的主产物对应于双取代的产物，其特征在于吡唑环另外的官能化。在这些情况下，分离该产物并且如下所述通过碱处理将其转化为单取代的产物。
实施例27:N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺
实施例27a:N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰胺
将1.51ml(17.90mmol)草酰氯和2滴无水二甲基甲酰胺加入至4.74g(8.95mmol)4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸的60ml二氯甲烷溶液中。于室温搅拌反应混合物2小时。蒸发溶剂，将形成的固体吸收于甲苯中并蒸发溶剂；重复该操作三次直至得到白色固体。
于0℃将酰氯分小份加入至溶解于15ml吡啶中的1g(3.58mmol)5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺中。于室温于25℃搅拌反应混合物过夜。蒸发溶剂之后，通过硅胶色谱法(90:10二氯甲烷/甲醇，然后90:9:1和然后90:5:5二氯甲烷/甲醇/铵作为洗脱剂)纯化残余物以获得N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)1074.64。
实施例27:N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺。
将0.27ml(1.95mmol)三乙胺加入至0.21g(0.19mmol)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰胺的5ml甲醇溶液中。于65℃加热反应介质4小时，然后于室温过夜。溶剂蒸发之后，用乙酸乙酯萃取产物数次。将有机相合并，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩。通过硅胶色谱法(95:4:1二氯甲烷/甲醇/铵作为洗脱剂)纯化残余物以获得黄色固体形式的0.065g(57％)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺。
LCMS(EI,m/z):(M-1)579.21。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.95(1H,bs,NH),10.25(1H,bs,NH),8.62(1H,s,CH芳香的),8.27(1H,d,NH),7.80(1H,d,CH芳香的),7.17-7.27(3H,m,CH芳香的),6.27(1H,d,CH芳香的),6.12(1H,d,CH芳香的),3.79-3.82(2H,m,CH),3.67(1H,m,CH),3.45-3.50(2H,m,CH),3.26-3.29(4H,m,CH),2.42-2.44(4H,m,CH),2.22(3H,s,CH3),1.90-1.93(2H,m,CH),1.31-1.36(2H,m,CH)。
通过相同的方法获得如下化合物：
吡啶中进行的反应通常使其能够修饰产物的结构异构体分布。如下实施例具有该类型反应的特征。
实施例27-二:N-(5-(N-(3,5-二氟苯基)氨磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰胺
将0.224ml(2.63mmol)草酰氯和2滴无水二甲基甲酰胺加入至0.697g(1.316mmol)4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酸的20ml二氯甲烷溶液中。于室温搅拌反应混合物2小时。蒸发溶剂，将形成的固体再溶解于甲苯中并蒸发溶剂。重复该操作三次直至得到白色固体。
于0℃将酰氯溶解于5ml无水吡啶中，然后将形成的溶液加入至0.214g(0.658mmol)3-氨基-N-(3,5-二氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-磺酰胺的5ml吡啶溶液中。于0℃搅拌反应混合物3小时，然后于室温过夜。蒸发吡啶并将粗反应产物再溶解于甲苯中然后浓缩至干。用饱和NaHCO3溶液稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。将有机相经MgSO4干燥，过滤和浓缩，粗产物未经纯化或特征化直接用于脱保护反应。
通过相同的方法获得如下化合物：
方法E2的实施例：
实施例28:5-(3,5-二氟苯硫基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
将41.5μl三氟乙酸(0.539mmol)和小份的129mg(0.611mmol)三乙酰氧基硼氢化钠加入至100mg(0.35mmol)5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺和81mg(0.395mmol)4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲醛的20ml 1:1二氯甲烷和四氢呋喃混合物的溶液中。于室温搅拌反应介质16小时。加入另一部分的125μl三氟乙酸和388mg三乙酰氧基硼氢化钠并搅拌反应介质另外的24小时。然后浓缩溶剂并用乙酸乙酯萃取反应介质以及用饱和碳酸氢钠溶液洗涤反应介质。合并有机相，经硫酸镁干燥然后浓缩以获得黄色油。在甲醇中研磨该油以分离到135mg黄色固体。
LCMS(EI,m/z):(M+1)467.57。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.43(1H,bs,NH),8.49(1H,d,CH芳香的),8.47(1H,d,CH芳香的),7.25(2H,d,CH芳香的),7.03-7.08(1H,m,CH芳香的),6.89(2H,d,CH芳香的),6.76-6.77(3H,m,NH和CH芳香的),4.34(2H,d,CH),3.08(4H,m,CH),2.44(4H,m,CH),2.21(3H,s,CH3)。
根据相同的方法获得如下衍生物：
**1H NMR,DMSO-d6,实施例:28-1:12.43(1H,bs,NH),8.49(1H,d,CH芳香的),8.47(1H,d,CH芳香的),7.51(1H,d,CH芳香的),7.45(1H,m,CH芳香的),7.27(1H,m,CH芳香的),7.03-7.08(1H,m,CH芳香的),7.00(1H,t,NH),6.77-6.80(2H,m,CH芳香的),4.63(2H,d,CH),3.19-3.21(4H,m,CH),2.42-2.45(4H,m,CH),2.21(3H,s,CH3)。
方法E3的实施例
实施例29:1-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)硫脲
于25℃将0.507g(2.17mmol)1-(4-异硫氰酰基苯基)-4-甲基哌嗪加入至溶解于12ml无水二甲基乙酰胺中的0.540g(2.17mmol)3,5-二氟苯硫基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺中。于85℃搅拌下将混合物放置15小时。通过加入20ml水处理反应，然后用乙酸乙酯萃取该反应。将有机相经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(15:1二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂)纯化产物以获得浅褐色固体形式的0.156g(产率＝15％)1-(1-叔丁基-5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)硫脲。
LCMS(EI,m/z):(M+1)512.08。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.69(1H,bs,NH),11.50(1H,bs,NH),11.19(1H,bs,NH),8.96(1H,d,CH芳香的),8.66(1H,d,CH芳香的),7.41(2H,d,CH芳香的),7.10(1H,ddd,CH芳香的),6.95(2H,d,CH芳香的),6.89(2H,bd,CH芳香的),3.13-3.16(4H,m,CH),2.45-2.47(4H,m,CH),2.23(3H,s,CH)。
实施例29-二:1-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)脲
于0℃将0.048g(1.19mmol)氯化钠加入至溶解于10ml无水二甲基乙酰胺中的0.200g(0.598mmol)1-叔丁基-5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺中。搅拌下将该反应放置10分钟。然后于0℃加入0.130g(0.598mmol)1-(4-异氰酰基苯基)-4-甲基哌嗪。搅拌下于室温放置混合物3小时。于0℃通过逐滴加入20ml水处理反应，然后用乙酸乙酯萃取该反应。将有机相经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。通过硅胶色谱法纯化产物以获得浅褐色固体形式的0.150g(产率＝45％)1-(1-叔丁基-5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)脲。
LCMS(EI,m/z):(M+1)552.21。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):8.92(1H,bs,NH),8.58(1H,bs,NH),8.51(1H,bs,CH芳香的),8.30(1H,bs,CH芳香的),7.31(2H,d,CH芳香的),7.05(1H,m,CH芳香的),6.83-6.85(2H,m,CH芳香的),3.03-3.08(4H,m,CH),2.45-2.48(4H,m,CH),2.21(3H,s,CH),1.76(9H,s,CH)。
将溶解于20ml TFA(三氟乙酸)的0.150g(0.272mmol)1-(1-叔丁基-5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)脲的溶液回流3小时。蒸发溶剂，用饱和NaHCO3溶液稀释粗反应产物并用乙酸乙酯提取粗反应产物。将有机相经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将得到固体于甲醇中研磨、过滤和干燥。得到米黄色固体形式的110mg(82％)1-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)脲。
LCMS(EI,m/z):(M+1):496.06。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):10.85(1H,bs,NH),9.57(1H,bs,NH),8.57(1H,bs,CH芳香的),8.30(1H,bs,CH芳香的),7.39(2H,d,CH芳香的),6.99(1H,m,CH芳香的),6.89(2H,d,CH芳香的),6.70(2H,bd,CH芳香的),3.03-3.08(4H,m,CH),2.45-2.48(4H,m,CH),2.21(3H,s,CH)。
方法F的实施例
方法F1的实施例：脱保护
实施例30:N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺
将9.08ml(65.1mmol)三乙胺加入至2g(2.96mmol)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)苯甲酰胺的65ml甲醇溶液中。于65℃加热反应介质2小时，然后于室温过夜。将形成的沉淀物过滤，依次用戊烷、水和乙醚冲洗，然后真空下干燥以获得白色固体形式的0.73g(43％)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)580.23。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.59(1H,bs,NH),10.56(1H,bs,NH),8.61(1H,s,CH芳香的),8.50(1H,s,CH芳香的),8.17(1H,d,NH),7.80(1H,d,CH芳香的),7.07(1H,m,CH芳香的),6.86(2H,m,CH芳香的),6.23(1H,d,CH芳香的),6.13(1H,d,CH芳香的),3.79-3.82(2H,dt,CH),3.60(1H,m,CH),3.45-3.50(2H,m,CH),3.21-3.33(4H,m,CH),2.42-2.46(4H,m,CH),2.22(3H,s,CH3),1.91-1.94(2H,m,CH),1.35-1.38(2H,m,CH)。
**1H NMR,DMSO-d6,实施例:30-3:13.86(1H,bs,NH),10.70(1H,bs,NH),8.67(2H,bs,CH芳香的),8.10(1H,d,NH),7.77(1H,d,CH芳香的),7.22(1H,m,CH芳香的),6.95(2H,d,CH芳香的),6.26(1H,d,CH芳香的),6.16(1H,bs,CH芳香的),4.85(2H,bs,CH),3.82-3.86(2H,dt,CH),3.70(1H,m,CH),3.47-3.53(2H,m,CH),3.28-3.32(4H,m,CH),2.42-2.46(4H,m,CH),2.20(3H,s,CH3),1.94-1.98(2H,m,CH),1.34-1.41(2H,m,CH)。；30-5:13.25(1H,bs,NH),10.48(1H,bs,NH),8.42(1H,s,CH芳香的),8.11(1H,d,NH),7.76(1H,d,CH芳香的),7.00-7.10(1H,m,CH芳香的),6.79-6.87(2H,m,CH芳香的),6.23(1H,dd,CH芳香的),6.12(1H,d,CH芳香的),3.94(3H,s,CH3),3.75-3.83(2H,m,CH),3.63-3.71(1H,m,CH),3.42-3.52(2H,m,CH),3.22-3.32(4H,m,2*CH2),2.36-2.48(4H,m,2*CH2),2.22(3H,s,CH3),1.88-1.97(2H,m,CH),1.32-1.42(2H,m,CH)。30-6:13.10(1H,bs,NH),10.38(1H,bs,NH),8.56(1H,s,CH芳香的),8.12(1H,d,NH),7.75(1H,d,CH芳香的),6.23(1H,dd,CH芳香的),6.14(1H,d,CH芳香的),3.97(3H,s,CH3),3.80-3.86(2H,m,CH),3.62-3.74(1H,m,CH),3.40-3.55(2H,m,CH),3.22-3.32(4H,m,2*CH2),2.36-2.48(4H,m,2*CH2),2.23(3H,s,CH3),1.90-1.99(2H,m,CH),1.32-1.45(2H,m,CH)。30-7:12.43(1H,bs,NH),10.22(1H,bs,NH),8.32(1H,s,CH芳香的),8.13(1H,d,NH),7.73(1H,d,CH芳香的),6.37(2H,bs,NH2),6.22(1H,dd,CH芳香的),6.13(1H,d,CH芳香的),3.78-3.86(2H,m,CH),3.65-3.74(1H,m,CH),3.44-3.54(2H,m,CH),3.22-3.32(4H,m,2*CH2),2.36-2.48(4H,m,2*CH2),2.23(3H,s,CH3),1.90-1.99(2H,m,CH),1.32-1.45(2H,m,CH)。30-8:13.79(1H,bs,NH),10.91(1H,bs,NH),10.69(1H,bs,NH),8.83(1H,s,CH芳香的),8.76(1H,s,CH芳香的),8.18(1H,d,NH),7.80(1H,d,CH芳香的),6.82-6.75(3H,m,CH芳香的),6.26(1H,d,CH芳香的),6.15(1H,d,CH芳香的),3.87-3.82(2H,dt,CH),3.72(1H,m,CH),3.54-3.47(2H,m,CH),3.32-3.29(4H,m,CH),2.42-2.46(4H,m,CH),2.28(3H,s,CH3),1.97-1.95(2H,m,CH),1.43-1.36(2H,m,CH)。30-13:12.99(1H,s,NH),9.92(1H,s,NH),8.38(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.92(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.84(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.32(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.07-7.00(3H,m,CH芳香的),6.26(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),4.21(2H,s),3.82-3.76(2H,m),3.69-3.63(1H,m),3.48(2H,t),3.28(4H,s),2.46(4H,s),2.25(3H,s),2.00-1.90(2H,m),1.37-1.26(2H,m)。30-14:12.96(1H,sl,NH),9.84(1H,s,NH),8.34(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.96(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.25(1H,s,CH芳香的),7.23(1H,s,CH芳香的),7.17(1H,t,CH芳香的),6.96(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.25(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),5.35(2H,s),3.82-3.77(2H,m),3.67(1H,sl),3.46(2H,t),3.29(4H,s),2.50(4H,s),2.29(3H,s),1.93-1.88(2H,m),1.35-1.25(2H,m)。30-15:13.01(1H,sl,NH),10.11(1H,sl,NH),7.99(1H,sl,NH),7.97(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.84(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.25-7.14(3H,m,CH芳香的),6.97(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.67(1H,sl,CH芳香的),6.51(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),5.35(2H,s,CH芳香的),3.83-3.78(2H,m),3.68-3.63(1H,m),3.47(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.45-2.40(1H,m),2.19(3H,s),2.00-1.87(4H,m),1.75-1.65(4H,m),1.34-1.28(2H,m)。30-16:12.95(1H,sl,NH),9.85(1H,s,NH),8.33(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.95(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.48(1H,q,CH芳香的),7.31-7.20(2H,m,CH芳香的),6.93(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.25(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),5.35(2H,s),3.81-3.76(2H,m),3.68(1H,sl),3.47(2H,t),3.26(4H,s),2.44(4H,s),2.29(3H,s),1.94-1.88(2H,m),1.36-1.27(2H,m)。30-17:13.06(1H,sl,NH),10.12(1H,sl,NH),7.93(1H,sl,NH),7.86(2H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.51-7.44(1H,m,CH芳香的),7.30-7.20(2H,m,CH芳香的),6.90(1H,sl,CH芳香的),6.64(1H,sl,CH芳香的),6.49(1H,sl,CH芳香的),5.37(2H,s,CH芳香的),3.83-3.76(2H,m),3.68-3.63(1H,m),3.46(2H,t),2.86(2H,d,J＝10.4Hz),2.44-2.38(1H,m),2.19(3H,s),1.99-1.90(4H,m),1.75-1.65(4H,m),1.40-1.30(2H,m)。30-18:12.94(1H,sl,NH),9.81(1H,s,NH),8.32(1H,d,CH芳香的,J＝7.7Hz),7.96(1H,d,CH芳香的,J＝9Hz),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝9Hz),7.71(1H,d,NH),7.51(1H,d,CH芳香的,J＝8.6Hz),7.43(1H,dd,CH芳香的,J＝8.6Hz),6.97(1H,d,CH芳香的,J＝8.6Hz),6.24(1H,d,CH芳香的,J＝8.9Hz),6.13(1H,s,CH芳香的),5.39(2H,s),3.82-3.74(2H,m),3.72-3.62(1H,m),3.46(2H,t),3.28-3.22(4H,m),2.46-2.40(4H,m),2.22(3H,s),1.95-1.87(2H,m),1.37-1.26(2H,m)。30-19:13.01(1H,sl,NH),10.09(1H,s,NH),7.97(2H,d,CH芳香的,J＝9Hz),7.83(1H,d,CH芳香的,J＝8.2Hz),7.71(1H,dd,NH),7.50(1H,d,CH芳香的,J＝7.4Hz),7.43(1H,dd,CH芳香的,J＝8.6Hz),6.98(1H,d,CH芳香的,J＝9Hz),6.67(1H,s,CH芳香的),6.51(1H,d,CH芳香的,J＝8.2Hz),5.38(2H,s),3.84-3.75(2H,m),3.72-3.62(1H,m),3.46(2H,t),2.86(2H,d),2.43(1H,m),2.19(3H,s),1.99-1.88(4H,m),1.74-1.64(4H,m),1.38-1.26(2H,m)。30-20:12.97(1H,sl,NH),9.82(1H,s,NH),8.32(1H,d,NH,J＝8.0Hz),7.97(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.87(1H,s,CH芳香的),7.80-7.76(2H,m,CH芳香的),7.64(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),6.96(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.24(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.13(1H,s,CH芳香的),5.47(2H,s),3.81-3.76(2H,m),3.66(1H,sl),3.46(2H,t),3.26(4H,s),2.43(4H,s),2.29(3H,s),1.93-1.88(2H,m),1.35-1.25(2H,m)。30-21:13.03(1H,s,NH),10.08(1H,s,NH),8.00-7.95(2H,m,CH芳香的),7.87-7.75(3H,m,CH芳香的),7.63(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),6.97(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.67(1H,s,CH芳香的),6.51(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),5.47(2H,s,CH芳香的),3.83-3.76(2H,m),3.68-3.64(1H,m),3.47(2H,t),2.87(2H,d,J＝10.4Hz),2.45-2.40(1H,m),2.20(3H,s),2.00-1.87(4H,m),1.74-1.65(4H,m),1.36-1.25(2H,m)。30-22:12.93(1H,s,NH),9.86(1H,s,NH),8.70(1H,s,CH芳香的),8.51(1H,dd,CH芳香的,J＝5.2Hz),8.38(1H,d,NH,J＝8.0Hz),7.96-7.90(2H,m,CH芳香的),7.84(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.73-7.33(1H,m,CH芳香的),6.91(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.27(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.15(1H,s,CH芳香的),5.35(2H,s),3.83-3.77(2H,m),3.70-3.64(1H,m),3.47(2H,t),3.59(4H,s),2.59(4H,s),2.34(3H,s),1.95-1.88(2H,m),1.40-1.28(2H,m)。30-23:13.03(1H,s,NH),10.17(1H,s,NH),8.70(1H,s,CH芳香的),8.52(1H,dd,CH芳香的,J＝4.8Hz),8.06(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.96(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.94-7.88(2H,m,CH芳香的),7.37-7.34(1H,m,CH芳香的),6.93(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.69(1H,s,CH芳香的),6.52(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),5.36(2H,s,CH芳香的),3.83-3.79(2H,m),3.68-3.64(1H,m),3.46(2H,t),3.25-3.15(2H,m),2.65-2.55(3H,m),2.54(3H,s),2.00-1.85(6H,m),1.41-1.28(2H,m)。30-24:13.21(1H,s,NH),10.00(1H,s,NH),8.30(1H,d,NH,J＝7.6Hz),8.00(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.79(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.33(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.26-7.16(3H,m,CH芳香的),6.24(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.13(1H,s,CH芳香的),4.06-3.99(2H,m),3.67(1H,sl),3.47(2H,t),3.28(4H,s),2.47(4H,s),2.25(3H,s),1.94-1.88(2H,m),1.37-1.26(2H,m)。30-25:13.26(1H,s,NH),10.28(1H,s,NH),8.02(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.97(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.83(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),7.34(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.27-7.17(3H,m,CH芳香的),6.68(1H,s,CH芳香的),6.51(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),3.85-3.78(2H,m),3.71-3.65(1H,m),3.47(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.48-2.40(1H,m),2.19(3H,s),1.98-1.88(4H,m),1.74-1.66(4H,m),1.36-1.27(2H,m)。30-26:13.12(1H,s,NH),9.95(1H,s,NH),8.32(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.93(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.79(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.73(1H,t,CH芳香的),7.52-7.40(2H,m,CH芳香的),7.12(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.25(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.13(1H,s,CH芳香的),3.83-3.77(2H,m),3.69(1H,sl),3.48(2H,t),3.28(4H,s),2.44(4H,s),2.27(3H,s),1.96-1.89(2H,m),1.37-1.27(2H,m)。30-27:13.17(1H,s,NH),10.21(1H,s,NH),7.99-7.92(2H,m,CH芳香的et NH),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.77-7.70(1H,m,CH芳香的),7.51-7.40(2H,m,CH芳香的),7.13(1H,dd,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.69(1H,s,CH芳香的),6.51(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),3.85-3.78(2H,m),3.72-3.67(1H,m),3.48(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.47-2.40(1H,m),2.20(3H,s),1.96-1.87(4H,m),1.75-1.65(4H,m),1.38-1.28(2H,m)。30-28:13.31(1H,sl,NH),9.95(1H,sl,NH),8.31(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.99(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),7.78(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.58-7.49(3H,m,CH芳香的),7.31(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.24(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.10(1H,s,CH芳香的),3.83-3.76(2H,m),3.70-3.60(1H,m),3.45(2H,t),3.21(4H,s),2.43(4H,s),2.22(3H,s),1.94-1.86(2H,m),1.38-1.28(2H,m)。30-29:13.26(1H,s,NH),10.25(1H,s,NH),8.01(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.94(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.82(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.59-7.54(3H,m,CH芳香的),7.32(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.67(1H,s,CH芳香的),6.54(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),3.84-3.78(2H,m),3.71-3.62(1H,m),3.47(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.45-2.41(1H,m),2.19(3H,s),1.96-1.90(4H,m),1.74-1.68(4H,m),1.34-1.27(2H,m)。30-30:13.23(1H,s,NH),9.98(1H,s,NH),8.29(1H,d,NH,J＝7.6Hz),8.01(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.79(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.62(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.52(1H,s,CH芳香的),7.44(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),7.24(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),6.25(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),6.12(1H,s,CH芳香的),3.82-3.75(2H,m),3.73-3.67(1H,m),3.47(2H,t),3.27(4H,s),2.43(4H,s),2.22(3H,s),1.95-1.87(2H,m),1.35-1.28(2H,m)。30-31:13.28(1H,s,NH),10.25(1H,s,NH),8.02(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.95(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),7.61(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.56(1H,s,CH芳香的),7.43(1H,dd,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.25(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.68(1H,s,CH芳香的),6.51(1H,d,CH芳香的,J＝7.2Hz),3.84-3.78(2H,m),3.69-3.61(1H,m),3.47(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.47-2.41(1H,m),2.20(3H,s),2.00-1.90(4H,m),1.76-1.69(4H,m),1.40-1.30(2H,m)。30-32:13.16(1H,s,NH),9.95(1H,s,NH),8.33(1H,d,NH,J＝8.0Hz),7.93(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.89(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.79(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.70-7.63(2H,m,CH芳香的),7.60(1H,t,CH芳香的),6.97(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.25(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),3.83-3.78(2H,m),3.68(1H,sl),3.48(2H,t),3.28(4H,s),2.44(4H,s),2.23(3H,s),1.95-1.90(2H,m),1.38-1.28(2H,m)。30-33:13.21(1H,s,NH),10.22(1H,s,NH),7.99(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.94(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.89(1H,d,CH芳香的,J＝7.2Hz),7.82(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.71-7.57(3H,m,CH芳香的),6.98(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.69(1H,s,CH芳香的),6.52(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),3.85-3.79(2H,m),3.72-3.62(1H,m),3.48(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.47-2.41(1H,m),2.19(3H,s),2.00-1.90(4H,m),1.76-1.69(4H,m),1.40-1.30(2H,m)。30-34:13.07(1H,s,NH),10.11(1H,s,NH),8.32(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.90-7.85(2H,m,CH芳香的),7.22(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.19(1H,s,CH芳香的),7.17(1H,s,CH芳香的),7.03(1H,t,CH芳香的),6.30(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),6.19(1H,s,CH芳香的),4.43(2H,s),4.02(2H,sl),3.80-3.74(2H,m),3.67(1H,sl),3.44(2H,t),3.10(4H,s),2.84(3H,s),1.89-1.84(2H,m),1.30-1.14(4H,m)。30-35:13.08(1H,s,NH),10.28(1H,s,NH),7.96(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.88(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.86(1H,d,CH芳香的,J＝6.8Hz),7.22(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.18(1H,s,CH芳香的),7.17(1H,s,CH芳香的),7.02(1H,t,CH芳香的),6.66(1H,s,CH芳香的),6.51(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),4.43(2H,s),3.80-3.74(2H,m),3.64(1H,sl),3.44(2H,t),2.89-2.84(2H,m),2.43(1H,sl),2.20(3H,s),1.98-1.95(2H,m),1.89-1.84(2H,m),1.72-1.69(4H,m),1.29-1.20(2H,m)。30-36:13.10(1H,sl,NH),10.11(1H,s,NH),9.73(1H,sl,COOH),8.34(1H,sl,NH),7.92-7.86(2H,m,CH芳香的),7.47-7.40(1H,m,CH芳香的),7.23(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.20-7.13(1H,m,CH芳香的),7.11-7.05(1H,m,CH芳香的),6.31(1H,dd,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.20(1H,s,CH芳香的),4.41(2H,s),4.04(2H,d,J＝8.8Hz),3.81-3.75(2H,m),3.70-3.66(1H,m),3.51(2H,d,J＝11.2Hz),3.44(2H,t),3.16-2.97(4H,m),2.87(3H,s),1.91-1.84(2H,m),1.34-1.22(2H,m)。30-37:13.09(1H,s,NH),10.29(1H,s,NH),7.97(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.90-7.86(2H,m,CH芳香的),7.47-7.41(1H,m,CH芳香的),7.23(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.19-7.13(1H,m,CH芳香的),7.11-7.05(1H,m,CH芳香的),6.67(1H,s,CH芳香的),6.52(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),4.41(2H,s),3.79-3.74(2H,m),3.66-3.62(1H,m),3.44(2H,t),2.86(2H,d,J＝11.2Hz),2.45-2.40(1H,m),2.19(3H,s),2.00-1.85(4H,m),1.74-1.65(4H,m),1.33-1.23(2H,m)。30-38:13.02(1H,s,NH),10.04(1H,s,NH),8.28(1H,d,NH,J＝8.0Hz),7.88-7.84(2H,m,CH芳香的),7.74(1H,s,CH芳香的),7.43(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.29(1H,dd,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.22(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.25(1H,dd,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.12(1H,s,CH芳香的),4.50(2H,s),3.78-3.74(2H,m),3.66-3.62(1H,m),3.44(2H,t),3.26(4H,s),2.43(4H,s),2.22(3H,s),1.91-1.84(2H,m),1.35-1.23(2H,m)。30-39:13.09(1H,s,NH),10.32(1H,s,NH),8.28(1H,d,NH,J＝8.0Hz),7.90(2H,D,CH芳香的),7.74(1H,s,CH芳香的),7.43(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.29(1H,dd,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.25(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.67(1H,s,CH芳香的),6.54(1H,dd,CH芳香的,J＝8,4Hz),4.51(2H,s),3.79-3.76(2H,m),3.70-3.64(1H,m),3.44(2H,t),2.95-2.92(2H,m),2,52-2,51(1H,m),2.27(3H,s),2.13-2,01(2H,m),1,90-1,87(2H,m)1.77-1.69(4H,m),1.32-1.24(2H,m)。30-40:12.77(1H,s,NH),9.86(1H,s,NH),9.60(1H,s,NH),8.40(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.86(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.83(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.56(2H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.93(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.55(1H,t,CH芳香的),6.23(1H,dd,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.13(1H,s,CH芳香的),3.82-3.75(2H,m),3.69-3.61(1H,m),3.46(2H,t),3.27(4H,s),2.44(4H,s),2.29(3H,s),1.96-1.88(2H,m),1.38-1.26(2H,m)。30-41:12.85(1H,sl,NH),10.13(1H,s,NH),9.62(1H,s,NH),8.03(1H,d,NH,J＝7.2Hz),7.90-7.84(2H,m,CH芳香的),7.57(2H,dd,CH芳香的,J＝10.4Hz),6.95(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.68(1H,s,CH芳香的),6.60-6.50(2H,m,CH芳香的),3.83-3.78(2H,m),3.68-3.63(1H,m),3.46(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.45-2.40(1H,m),2.20(3H,s),2.00-1.92(4H,m),1.75-1.65(4H,m),1.37-1.27(2H,m)。30-42:12.77(1H,s,NH),9.87(1H,s,NH),9.02(1H,s,NH),8.80-8.72(1H,m,CH芳香的),8.41(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.86(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.83(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.28(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.22-7.15(1H,m,CH芳香的),6.63-6.57(1H,m,CH芳香的),6.23(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.13(1H,s,CH芳香的),3.83-3.75(2H,m),3.70-3.64(1H,m),3.46(2H,t),3.27(4H,s),2.44(4H,s),2.23(3H,s),1.95-1.88(2H,m),1.39-1.26(2H,m)。30-43:12.84(1H,s,NH),10.13(1H,s,NH),9.05(1H,sl,NH),8.81-8.74(1H,m,CH芳香的),8.05(1H,d,NH,J＝7.2Hz),7.89-7.84(2H,m,CH芳香的),7.30(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.23-7.15(1H,m,CH芳香的),6.67(1H,s,CH芳香的),6.64-6.58(1H,m,CH芳香的),6.51(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),3.83-3.76(2H,m),3.68-3.64(1H,m),3.47(2H,t),2.89(2H,d,J＝10.8Hz),2.45-2.40(1H,m),2.21(3H,s),2.01-1.91(4H,m),1.74-1.66(4H,m),1.38-1.27(2H,m)。30-44:12.80(1H,s,NH),10.16(1H,s,NH),8.89(1H,s,CH芳香的),8.52(1H,s,NH),8.34(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.89(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.41(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.35(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.89(1H,dd,CH芳香的,J＝8.4Hz),6.21(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.11(1H,s,CH芳香的),3.83-3.75(2H,m),3.66-3.60(1H,m),3.46(2H,t),3.25(4H,s),2.44(4H,s),2.23(3H,s),1.95-1.87(2H,m),1.37-1.26(2H,m)。30-45:12.86(1H,s,NH),10.10(1H,s,NH),8.91(1H,s,CH芳香的),8.54(1H,s,NH),8.00(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.90(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.85(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),7.41(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.37(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.88(1H,dd,CH芳香的,J＝8.4Hz),6.64(1H,s,CH芳香的),6.48(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),3.83-3.77(2H,m),3.67-3.60(1H,m),3.47(2H,t),2.88(2H,d,J＝11.2Hz),2.45-2.38(1H,m),2.21(3H,s),2.00-1.87(4H,m),1.75-1.65(4H,m),1.37-1.26(2H,m)。30-46:13.74(1H,sl,NH),10.14(1H,s,NH),8.62(1H,s,CH芳香的),8.33(1H,d,NH),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝8.7Hz),7.12-7.03(3H,m,CH芳香的),6.26(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.13(1H,s,CH芳香的),4.31(2H,s),4.14-4.07(4H,m),3.68(1H,sl),3.28(4H,s),2.43(4H,s),2.23(3H,s),1.92(2H,d,J＝12.4Hz),1.38-1.26(2H,m)。30-47:13.80(1H,sl,NH),10.41(1H,s,NH),8.64(1H,s,CH芳香的),8.02(1H,d,NH),7.85(1H,d,CH芳香的,J＝8.1Hz),7.12-7.03(3H,m,CH芳香的),6.69(1H,s,CH芳香的),6.52(1H,d,CH芳香的,J＝8.1Hz),4.30(2H,s),3.81(2H,d,J＝11.1Hz),3.68(1H,sl),3.48(2H,t),2.87(2H,d,J＝10.5Hz),2.47-2.39(1H,sl),2.19(3H,s),2-1.88(4H,m),1.76-1.66(4H,m),1.39-1.27(2H,m)。30-48:13.99(1H,sl,NH),10.17(1H,s,NH),8.34(1H,s,CH芳香的),8.29(1H,dl,NH),7.78(1H,d,CH芳香的,J＝8.9Hz),7.54-7.41(3H,m,CH芳香的),6.07(1H,d,CH芳香的,J＝8.9Hz),5.87(1H,s,CH芳香的),3.82(2H,dl),3.62(1H,sl),3.51-3.37(4H,m),2.97(3H,s),2.28-2.19(2H,m),2.15(6H,s),2-1.90(2H,m),1.71-1.61(2H,m),1.42-1.28(2H,m)。30-49:14.06(1H,sl,NH),10.56(1H,s,NH),8.85(1H,s,CH芳香的),7.97(1H,sl,NH),7.85(1H,d,CH芳香的,J＝8.1Hz),7.50-7.40(3H,m,CH芳香的),6.71(1H,s,CH芳香的),6.54(1H,d,CH芳香的,J＝8.1Hz),3.83-3.76(2H,m),3.70(1H,sl),3.48(2H,t),2.88(2H,d,J＝10.6Hz),2.48-2.40(1H,m),2.20(3H,s),2.01-1.89(4H,m),1.76-1.66(4H,m),1.40-1.28(2H,m)。30-50:13.94(1H,sl,NH),10.11(1H,sl,NH),8.59(1H,s,CH芳香的),8.30(1H,sl,NH),7.76(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.27-7.13(3H,m,CH芳香的),6.04(1H,dd,CH芳香的,J＝9.2Hz),5.85(1H,s,CH芳香的),3.87-3.76(2H,m),3.66-3.55(1H,m),3.49-3.26(4H,m),2.96(3H,s),2.22(2H,t),2.14(6H,s),1.97-1.89(2H,m),1.69-1.60(2H,q),1.40-1.28(2H,m)。30-51:13.95(1H,sl,NH),10.17(1H,sl,NH),8.54(1H,s,CH芳香的),8.28(1H,sl,NH),7.78(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.59(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.42-7.38(2H,m,CH芳香的),6.23(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),6.11(1H,s,CH芳香的),3.82-3.77(2H,m),3.66(1H,sl),3.46(2H,t),3.26(4H,s),2.43(4H,s),2.22(3H,s),1.92-1.88(2H,m),1.34-1.24(2H,m)。30-52:13.97(1H,sl,NH),10.20(1H,s,NH),8.38(1H,s,CH芳香的),8.27(1H,d,NH),7.88(1H,d,CH芳香的,J＝7.2Hz),7.78(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.66-7.55(3H,m,CH芳香的),6.26(1H,dd,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.13(1H,s,CH芳香的),3.85-3.76(2H,m),3.75-3.63(1H,m),3.48(2H,t),3.37-3.26(4H,m),2.61-2.52(4H,m),2.32(3H,sl),1.96-1.88(2H,m),1.39-1.26(2H,m)。30-53:13.64(1H,s,NH),10.20(1H,s,NH),8.30(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.23(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),8.19(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.75-7.65(3H,m,CH芳香的),6.28(1H,dd,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),3.83-3.77(2H,m),3.70-3.64(1H,m),3.48(2H,t),3.29(4H,s),2.44(4H,s),2.23(3H,s),1.95-1.89(2H,m),1.38-1.26(2H,m)。30-54:13.64(1H,sl,NH),10.48(1H,sl,NH),8.32(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.19(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.91(1H,sl,NH),7.85(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.77-7.65(3H,m,CH芳香的),6.71(1H,s,CH芳香的),6.54(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),3.86-3.80(2H,m),3.71-3.64(1H,m),3.48(2H,t),2.89(2H,d,J＝11.2Hz),2.45-2.40(1H,m),2.21(3H,s),2.00-1.90(4H,m),1.75-1.65(4H,m),1.38-1.27(2H,m)。30-55:13.64(1H,s,NH),10.16(1H,s,NH),8.29(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.24(1H,d,NH,J＝7.6Hz),8.17(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.09(1H,t,CH芳香的),7.88-7.85(1H,m,CH芳香的),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.67(1H,q,CH芳香的),6.28(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),3.83-3.75(2H,m),3.72-3.67(1H,m),3.48(2H,t),3.29(4H,s),2.44(4H,s),2.23(3H,s),1.96-1.89(2H,m),1.35-1.28(2H,m)。30-56:13.67(1H,s,NH),10.43(1H,s,NH),8.31(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.18(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.13-8.05(1H,m,CH芳香的),7.92(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.90-7.82(2H,m,CH芳香的),7.66(1H,q,CH芳香的),6.71(1H,s,CH芳香的),6.54(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),3.85-3.80(2H,m),3.73-3.65(1H,m),3.49(2H,t),2.89(2H,d,J＝11.2Hz),2.48-2.42(1H,m),2.21(3H,s),1.99-1.90(4H,m),1.76-1.68(4H,m),1.37-1.27(2H,m)。30-57:13.66(1H,s,NH),10.17(1H,s,NH),8.30(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.24-8.16(2H,m,CH芳香的et NH),8.03-7.97(3H,m,CH芳香的),7.81(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.28(1H,d,CH芳香的,J＝7.2Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),3.83-3.77(2H,m),3.71-3.67(1H,m),3.48(2H,t),3.29(4H,s),2.44(4H,s),2.23(3H,s),1.96-1.89(2H,m),1.34-1.28(2H,m)。30-58:13.71(1H,s,NH),10.45(1H,s,NH),8.32(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),8.22(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.02-7.96(3H,m,CH芳香的),7.86-7.81(1H,m,NH),7.83(1H,d,Ch芳香的),6.71(1H,s,CH芳香的),6.54(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),3.85-3.78(2H,m),3.72-3.65(1H,m),3.48(2H,t),2.88(2H,d,J＝11.2Hz),2.48-2.44(1H,m),2.21(3H,s),1.97-1.87(4H,m),1.76-1.70(4H,m),1.36-1.28(2H,m)。30-59:13.69(1H,s,NH),10.04(1H,s,NH),8.34(1H,d,NH,J＝8.8Hz),8.26-8.16(3H,m,CH芳香的),7.81(1H,dd,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.74(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.66(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),6.24(1H,dd,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.10(1H,s,CH芳香的),3.82-3.76(2H,m),3.68-3.62(1H,m),3.48(2H,t),3.27(4H,s),2.43(4H,s),2.22(3H,s),1.93-1.86(2H,m),1.31-1.21(2H,m)。30-60:13.74(1H,s,NH),10.31(1H,s,NH),8.35(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.25(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.21(1H,s,CH芳香的),7.85(1H,d,NH,J＝7.2Hz),7.81(1H,dd,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.76(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),7.66(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),6.67(1H,s,CH芳香的),6.50(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),3.85-3.78(2H,m),3.68-3.62(1H,m),3.48(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.46-2.40(1H,m),2.20(3H,s),1.97-1.87(4H,m),1.75-1.67(4H,m),1.32-1.24(2H,m)。30-61:13.61(1H,s,NH),10.32(1H,s,NH),8.71(1H,d,NH,J＝8.0Hz),8.21(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.87(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.80(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.17(1H,t,CH芳香的),7.05-7.02(2H,m,CH芳香的),6.29(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),4.93(2H,s),3.74-3.68(3H,m),3.43(2H,t),3.29(4H,s),2.44(4H,s),2.28(3H,s),1.90-1.84(2H,m),1.28-1.20(2H,m)。30-62:13.67(1H,sl,NH),10.59(1H,s,NH),8.23(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.10(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.92(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),7.82(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.17(1H,t,CH芳香的),7.05-7.02(2H,m,CH芳香的),6.71(1H,s,CH芳香的),6.56(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),4.94(2H,s),3.77-3.70(3H,m),3.43(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.45-2.40(1H,m),2.20(3H,s),1.98-1.91(2H,m),1.89-1.95(2H,m),1.75-1.67(4H,m),1.30-1.20(2H,m)。30-63:13.63(1H,sl,NH),10.28(1H,s,NH),8.37(1H,d,NH,J＝8.0Hz),8.24(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.88-7.82(2H,m,CH芳香的),7.24-7.17(3H,m,CH芳香的),6.29(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),4.87(2H,s),3.75-3.70(3H,m),3.43(2H,t),3.28(4H,s),2.45(4H,s),2.23(3H,s),1.90-1.85(2H,m),1.32-1.20(2H,m)。30-64:13.69(1H,sl,NH),10.55(1H,s,NH),8.26(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.05(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.90(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.86(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.24-7.15(3H,m,CH芳香的),6.70(1H,s,CH芳香的),6.56(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),4.88(2H,s),3.80-3.65(3H,m),3.43(2H,t),2.87(2H,d,J＝11.2Hz),2.46-2.40(1H,m),2.20(3H,s),2.00-1.86(4H,m),1.75-1.67(4H,m),1.29-1.23(2H,m)。30-65:13.49(1H,sl,NH),10.45(1H,s,NH),9.31(1H,sl,COOH),8.21(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.06(1H,sl,NH),7.92(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.57(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.17-7.11(2H,m,CH芳香的),6.96-6.91(1H,m,CH芳香的),6.67(1H,s,CH芳香的),6.53(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),4.51(1H,d,J＝13.2Hz),4.20(1H,d,J＝13.2Hz),3.81-3.76(2H,m),3.71-3.62(1H,m),3.56-3.41(4H,m),3.08(2H,t),2.83(3H,s),2.45-2.40(1H,m),2.07-2.00(2H,m),1.95-1.86(4H,m),1.41-1.29(2H,m)。30-66:13.62(1H,sl,NH),10.22(1H,sl,NH),8.36(1H,d,NH,J＝7.6Hz),8.23(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.85(1H,d,CH芳香的,J＝9.2Hz),7.80(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.48(1H,s,CH芳香的),7.45-7.37(2H,m,CH芳香的),6.29(1H,d,CH芳香的,J＝7.2Hz),6.14(1H,s,CH芳香的),4.97(2H,s),3.76-3.70(3H,m),3.44(2H,t),3.28(4H,s),2.44(4H,s),2.23(3H,s),1.91-1.86(2H,m),1.30-1.24(2H,m)。30-67:13.67(1H,sl,NH),10.49(1H,s,NH),8.25(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.02(1H,d,NH,J＝7.2Hz),7.89(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),7.82(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.49(1H,t,CH芳香的),7.45-7.35(2H,m,CH芳香的),6.70(1H,s,CH芳香的),6.56(1H,d,CH芳香的,J＝8.0Hz),4.97(2H,s),3.78-3.64(3H,m),3.44(2H,t),2.88(2H,d,J＝11.2Hz),2.45-2.40(1H,m),2.20(3H,s),1.98-1.86(4H,m),1.76-1.66(4H,m),1.32-1.22(2H,m)。30-68:13.46(1H,s,NH),10.36(1H,s,NH),8.21(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),8.00(1H,d,NH,J＝7.6Hz),7.86(1H,d,CH芳香的,J＝8.4Hz),7.59(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.43-7.33(2H,m,CH芳香的),7.28(1H,s,CH芳香的),6.69(1H,s,CH芳香的),6.54(1H,d,CH芳香的,J＝7.6Hz),4.58(1H,d,J＝12.8Hz),4.30(1H,d,J＝12.8Hz),3.78-3.75(2H,m),3.70-3.65(1H,m),3.46(2H,t),2.92-2.88(2H,m),2.45-2.40(1H,m),2.24(3H,s),2.05-1.95(2H,m),1.93-1.89(2H,m),1.77-1.70(4H,m),1.34-1.24(2H,m)。(ND:未确定)。
实施例30-二:(S)-4-(3-氨基吡咯烷-1-基)-N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺
将876μl(20eq)三乙胺加入至238mg(0.314mmol)(S)-N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-2-(2,2,2-三氟-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)-4-(3-(2,2,2-三氟乙酰胺基)吡咯烷-1-基)苯甲酰胺的6ml甲醇溶液中。于65℃搅拌反应介质4小时。返回至室温之后，加入8ml正丁醇和260mg(6eq)碳酸钾。于80℃搅拌反应介质24小时。返回至室温之后，蒸发溶剂，加入水并用二氯甲烷萃取产物。将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(8:2二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂)纯化残余物以获得褐色固体形式的87mg(49％)(S)-4-(3-氨基吡咯烷-1-基)-N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)566.24。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):10.46(1H,bs,NH),8.60(1H,s,CH芳香的),8.50(1H,s,CH芳香的),8.26(1H,d,NH),7.78(1H,d,CH芳香的),7.08(1H,t,CH芳香的),6.86(2H，d，CH芳香的)，5.86(1H，dd，CH芳香的)，5.71(1H，d，CH芳香的)，3.80-3.88(2H，m，CH),3.63-3.70(2H,m,CH),3.40-3.55(5H,m,CH),3.01-3.08(1H,m,CH),2.08-2.13(1H,m,CH),1.92-1.99(2H,m,CH3),1.76-1.82(1H,m,CH),1.30-1.41(2H,m,CH吡喃酮)。
方法F2的实施例：还原
实施例31:N-(5-(3,5-二氟苯乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺
将10mg 10％Pd/C加入至100mg(0.175mmol)N-(5-((3,5-二氟苯基)乙炔基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺的10ml四氢呋喃和5ml甲醇的混合溶液中，之后将反应介质置于氢气氛下。于室温将反应混合物搅拌12小时然后在硅藻土上过滤并浓缩。分离到白色固体形式的62mg(产率＝60％)N-(5-(3,5-二氟苯乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)576.23。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.14(1H,bs,NH),10.32(1H,bs,NH),8.40(1H,d,CH芳香的),8.22(1H,d,NH),7.96(1H,d,CH芳香的),7.80(1H,d,CH芳香的),7.03-6.98(3H,m,CH芳香的),6.23(1H,d,CH芳香的),6.16(1H,bs,CH芳香的),3.84-3.81(2H,dt,CH),3.70(1H,m,CH),3.52-3.46(2H,m,CH),3.04-2.93(4H,m,CH),2.59-2.69(4H,m,CH),2.42-2.46(4H,m,CH),2.38(3H,s,CH3),1.96-1.93(2H,m,CH),1.40-1.33(2H,m,CH)。
根据相同的方法获得如下衍生物：
**1H NMR,dmso-d6,实施例:31-1:13.68(1H,sl,NH),10.11(1H,s,NH),8.52(1H,s,CH芳香的),8.35(1H,dl,NH),7.82(1H,d,CH芳香的,J＝9Hz),7.05-6.97(3H,m,CH芳香的),6.27(1H,dd,CH芳香的),6.14(1H,s,CH芳香的),3.83-3.76(2H,m),3.74-3.64(1H,m),3.47(2H,t),3.32-3.20(6H,m),3.07(2H,dd),2.44(4H,dd),2.23(3H,s),1.91(2H,d),1.38-1.27(2H,m)。
实施例32:5-(3,5-二氟苯硫基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
氩气下于0℃将100mg(0.173mmol)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1-H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺分小份加入至19.64mg(0.518mmol)LiAlH4的3ml无水四氢呋喃溶液中。于90℃加热反应混合物15小时。然后加入另一部分20mg LiAlH4并于90℃搅拌反应介质5小时。然后于0℃将45μl水加入至反应混合物中，接着加入45μl氢氧化钠(15重量％)，最后加入120μl水。于25℃搅拌反应混合物1小时，然后在硅藻土上过滤。蒸发溶剂之后，通过色谱法纯化粗产物。得到黄色固体形式的16.80mg(17％)5-(3,5-二氟苯硫基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)566.68。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.57(1H,bs,NH),8.45(2H,d,CH芳香的),6.97-7.06(2H,m,CH芳香的),6.73-6.75(2H,m,CH芳香的),6.65(1H,t,NH),6.13-6.19(2H,m,CH芳香的),4.98(1H,d,NH),4.30(2H,m,CH2),3.73-3.77(2H,m,CH),3.60(1H,m,CH),3.45-3.50(2H,m,CH),3.04(4H,m,CH),2.42(4H,m,CH),2.18(3H,s,CH3),1.80-1.83(2H,m,CH),1.27-1.32(2H,m,CH)。
根据相同的方法获得如下衍生物：
实施例33:2-(4-氨基苯基)-N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)乙酰胺
将152mg(2.72mmol)铁和70mg(1.3mmol)氯化铵的100μl水溶液加入至0.24g(0.544mmol)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-2-(4-硝基苯基)乙酰胺的10ml 2:1乙醇/水混合溶液中。将数滴乙酸加入至该混合物中并于60℃加热4小时。冷却和浓缩溶剂之后，将粗反应产物用乙酸乙酯萃取并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将有机相合并，经硫酸镁干燥然后浓缩。通过硅胶色谱法(DCM/MeOH)纯化粗产物以获得褐色固体形式的11mg(4％)2-(4-氨基苯基)-N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)乙酰胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)412.09。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):13.60(1H,bs,NH),10.96(1H,bs,NH),8.68(1H,d,CH芳香的),8.55(1H,d,CH芳香的),7.06(1H,m,CH芳香的),6.98(2H,d,CH芳香的),6.79(2H,m,CH芳香的),6.50(2H,m,CH芳香的),4.92(2H,s,NH),3.51(2H,m,CH2)。
方法F3的实施例：硫化物的氧化
实施例34:5-(3,5-二氟苯基磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺
于0℃将663mg(1.078mmol)硫酸氢钾的1.1ml水溶液加入至300mg(1.078mmol)5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺的10ml四氢呋喃和甲醇1:1混合溶液中。于室温搅拌反应混合物16小时。然后于0℃加入另一部分663mg硫酸氢钾并于室温搅拌反应介质24小时。蒸发溶剂，并用碳酸氢钠溶液稀释反应介质，用乙酸乙酯萃取，经MgSO4干燥，然后浓缩以获得黄色固体形式的340mg(81％)5-(3,5-二氟苯基磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)311.03。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.72(1H,bs,NH),8.92(1H,d,CH芳香的),8.84(1H,d,CH芳香的),7.89-8.01(1H,d,CH芳香的),7.62-7.80(2H,m,CH芳香的),6.06(2H,bs,NH)。
通过该方法还得到了如下化合物：
**1H NMR,DMSO-d6,实施例:33-2:12.64(1H,bs,NH),8.56(1H,d,CH芳香的),8.49(1H,d,CH芳香的),7.24(1H,ddd,CH芳香的),6.94(2H,bd,CH芳香的),6.03(2H,bs,NH),4.80(2H,s,CH)。(ND:未确定)。
可替代地，在氧化反应之前可以进行保护步骤，接着是脱保护步骤，其可以导致相应的砜或亚砜的制备。
实施例34-二:5-(3,5-二氟苯基亚磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡嗪-3-胺
氩气下将0.55mL三乙胺和22mg 4-二甲基氨基吡啶加入至500mg(1.790mmol)5-(3,5-二氟苯硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺的10mL四氢呋喃溶液中。于0℃搅拌溶液，加入0.915mL二碳酸二叔丁酯并将反应介质搅拌过夜。将水相分加入至反应介质中，然后将其用乙酸乙酯萃取。将有机相经MgSO4干燥并真空下浓缩以得到粗产物，其未经进一步纯化而用于氧化步骤。
于0℃将得到粗产物溶解于10mL四氢呋喃和甲醇的1:1混合物中，然后加入1.103g(1.794mmol)硫酸氢钾的2mL水溶液。于室温搅拌反应介质16小时。然后加入另一部分550mg硫酸氢钾并于室温搅拌反应介质5小时。蒸发溶剂并用碳酸氢钠溶液稀释反应介质，用乙酸乙酯萃取，经硫酸镁干燥并浓缩产生相应的的砜和亚砜的混合物，其未经进一步纯化而用于脱保护步骤。
于0℃将4mL无水THF中的0.373mL TFA加入至600mg以前得到的混合物的6mL二氯甲烷溶液中。于室温搅拌混合物1小时并加入另一部分的4mL THF中的4当量TFA。搅拌1小时之后，重复该操作并搅拌反应介质总计3小时45分钟。蒸发溶剂并用碳酸钾溶液稀释反应介质，用乙酸乙酯萃取，经硫酸镁干燥并浓缩以获得5-(3,5-二氟苯基磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺和5-(3,5-二氟苯基亚磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-胺的1:1混合物。该化合物未经进一步纯化而用于后面的步骤。
通过该方法还得到了如下化合物：
**1H NMR，DMSO-d6，实施例:34二-1:12.31(1H，sl，NH)，8.08-8.18(1H，m，CH芳香的),8.05(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.97(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.87-7.93(1H,m,CH芳香的),7.64-7.76(1H,m,CH芳香的),5.81(2H,sl,NH2)。34二-2:12.32(1H,sl,NH),7.94-8.11(5H,m,CH芳香的),5.85(2H,sl,NH2)。34二-3:12.34(1H,sl,NH),8.27(1H,s,CH芳香的),8.12(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),8.01(1H,d,CH芳香的,J＝11.6Hz),7.82-7.89(1H,m,CH芳香的),7.67(1H,d,CH芳香的,J＝11.2Hz),5.70(2H,sl,NH2)。34二-4:12.28(1H,sl,NH),7.89(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.68(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.21(1H,m,CH芳香的),6.91-6.97(2H,m,CH芳香的),5.87(2H,s,NH2),4.94(2H,s,CH)。34二-5:12.28(1H,sl,NH),7.89(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.68(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.20-7.25(2H,m,CH芳香的),7.10-7.15(1H,m,CH芳香的),5.84(2H,s,NH2),4.87(2H,s,CH)。34二-6:12.04(1H,s,NH),7.87(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.40(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.10-7.25(2H,m,CH芳香的),6.90-6.97(1H,m,CH芳香的),5.61(2H,s,NH2),4.47(1H,d,CH,J＝13.2Hz),4.18(1H,d,CH,J＝13.2Hz)。34二-7:12.28(1H,s,NH),7.89(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.64(1H,d,CH芳香的,J＝8.8Hz),7.40-7.50(3H,m,CH芳香的),5.81(2H,s,NH2),4.96(2H,s,CH)。
方法F4的实施例:脱甲基
实施例35:N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-6-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺
于0℃将443μl(3eq)1M三溴化硼的二氯甲烷溶液加入至90mg(0.148mmol)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-6-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺(实施例18)的4ml 1,2-二氯乙烷溶液中。于60℃搅拌反应介质3小时，然后在冰浴中冷却，之后加入甲醇。蒸发溶剂并将残余物再溶解于甲醇和乙酸乙酯的混合物中。将形成的固体过滤，再溶解于3ml四氢呋喃中并加入至1N苏打溶液中。于室温搅拌反应介质18小时。将溶液的pH调节至8-9并用乙酸乙酯萃取水相。经硫酸镁干燥有机相并通过硅胶柱(二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂)纯化得到的粗产物以获得黄色粉末形式的21mg(24％)N-(5-(3,5-二氟苯硫基)-6-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)苯甲酰胺。
LCMS(EI,m/z):(M+1)596.13。
1H NMR:δH ppm(400MHz,DMSO):12.96(1H,平坦宽单峰),12.02(1H,平坦宽单峰),10.64(1H,bs,NH),8.46(1H,bs),8.09(1H,bs),7.72(1H,d,CH芳香的),6.97-7.10(1H,m,CH芳香的),6.60-6.74(2H,m,CH芳香的),6.28(1H,dd,CH芳香的),6.13(1H,d,CH芳香的),3.80-3.90(2H,m,CH吡喃酮),3.65-3.77(1H,m,CH吡喃酮),3.50(2H,t,CH吡喃酮),3.25-3.32(4H,m,2*CH2),2.37-2.45(4H,m,2*CH2),2.22(3H,s,CH3),1.91-2.00(2H,m,CH吡喃酮),1.28-1.43(2H,m,CH吡喃酮)。
II、根据本发明的化合物的生物试验
·测量TrkA、TrkB或TrkC激酶的抑制的试验
由Millipore或Kinome Scan(DiscoverX)生产这些激酶，并且根据生产商的条款筛选这些激酶。
结果示于如下表中：
·对抗NGF-诱导的痛觉过敏的体内镇痛活性
已经在接受足底注射NGF的小鼠中体内测试通式(I)化合物，特别是化合物30。该治疗引起热痛觉过敏(Schuligoi等人,1998,Neuroscience Letters 252:147-149)。简单来说，雄性小鼠接受皮下注射10μl NGFβ(1μg；SIGMA)到右后爪的跖面。注射之后，小鼠返回至其笼子。NGF注射之后四小时，将小鼠置于热板痛觉测量计(BIO-HC2.00，Bioseb，法国)的中心，记录后爪第一次轻快举起或添或跳跃的延迟时间。使用最大截止时间60秒防止组织损伤。结果以延迟时间的平均值±标准误给出。在NGF注射之前30分钟给予测试化合物。
图1显示当通过腹腔途径(图1A)或口服途径(图1B)施用时，化合物30剂量依赖性抑制NGF-诱导的痛觉过敏。在10mg/kg剂量和更低剂量发生了NGF-诱导的痛觉过敏的完全或几乎完全的逆转(方差分析*P<0.05对比于单独的NGF)。
·福尔马林试验中大鼠体内的镇痛活性
采用Wheeler-Aceto等人(Pain,1990,40:229-38)和Bardin等人(2003,Pharmacology 67:182-194)的方法。在试验的第二阶段，化合物30抑制添爪44％对比于空白载体处理的动物(方差分析P<0.05)。
·对抗弗氏完全佐剂(CFA)诱导的急性和慢性炎性疼痛的体内镇痛活性
使用到达时160-180g重量的雄性斯普拉-道来氏大鼠[Crl:OFA(SD)CharlesRiver Lyon,法国]。在炎症引入之前一周使大鼠首先每日习惯于处置和用于冯弗雷(von-Frey)和热板模型的试验装置。在接下来的星期一，使它们经历用于确定基础分数(basalscore)的伤害感受试验。然后，向大鼠的右后爪的跖面皮下注射100μl CFA(1mg/1ml；Sigma)(第0天:D0)。在安慰剂组以相同途径注射生理盐水。
然后将每个大鼠放置于透明塑料笼的升高的塑料网上，记录10分钟期间的自发退缩次数(自发疼痛的测定)。使用冯弗雷纤毛试验评估机械性痛觉超敏。将每个大鼠放置于透明塑料笼的升高的塑料网上并允许其适应试验环境至少5分钟。将冯弗雷纤毛(赛姆斯-温斯坦单纤维丝(Semmes–Weinstein monofilament),Stoelting IL,USA；0.6、1.4、2、4、6、8、10和15g)以升序方式通过网眼板的下方应用于所注射爪的跖面持续1秒。测定阈值作为诱发退缩反应的最小力。重复该试验三次，每次试验间隔5分钟。确定触觉刺激的爪退缩分数作为3次测量的平均值。动物通过腹腔注射或口服接受测试化合物。
0.5至20mg/kg剂量的通式(I)化合物在该试验显示镇痛活性，既对抗急性炎性疼痛(退缩)也对抗机械性痛觉超敏。例如，化合物30腹腔注射之后剂量依赖性地抑制退缩(图2A)且口服施用之后剂量依赖性地抑制机械性痛觉超敏(图2B)。化合物完全或几乎完全逆转自发疼痛(0.16mg/kg)和机械性痛觉超敏(2.5mg/kg)。
·骨癌疼痛模型中对抗慢性疼痛的体内镇痛活性
骨癌产生影响人类和动物的最疼痛条件之一。其也是人类晚期癌症患者中最常见的疼痛，并且其仍然很难治疗且显著有助于增加的发病率和降低的生命质量。已经开发了数种鼠科骨肉瘤诱导的疼痛的模型(Pacharinsak和Beitz,Animal models of cancerpain.Comp Med.2008年6月；58:220-33.)。
我们通过向异氟烷麻醉的5-6周龄C3H/HeNCrl小鼠的胫骨移植包含2x105NCTC2472溶骨纤维肉瘤细胞的10μl PBS而诱导骨癌疼痛。由于破骨细胞数量的增加和其活化，这些细胞的存在诱导骨中溶骨性病变，其导致骨组织的破坏和邻近软组织的入侵和与疼痛相关的行为。在肿瘤细胞注射之前和在肿瘤细胞注射之后3、7、10、14和17天评估与疼痛相关的行为。如下行为也被评估：
-自发移动期间0-4分上的肢体使用，其中0＝所注射后爪的正常使用且4＝没有使用所注射后爪；
-轻触诱发的疼痛。用小的漆刷非伤害性刺激肿瘤注射的爪1分钟之后测量轻触诱发的退缩。记录5分钟的退缩次数。
对于药物治疗，用测试化合物或生理盐水慢性处理动物，从注射肿瘤细胞之后第7天开始，当与疼痛相关的行为清楚出现时，在测试之间30分钟通过腹腔途径施用所述测试化合物或生理盐水。例如，2.5mg/kg剂量的化合物30从第10天显著降低肢体使用分数(图3A)且从第8天显著降低轻触诱发的退缩(图3B)。
·对比实验：
在96孔试验板格式中开展了体外基于kinase glo plus的激酶试验(Promega)以评估化合物抑制原肌球蛋白相关激酶(Trk)受体的活性，使用这些受体的可溶分子内片段，其包含激酶活性(TrkA(或NTRK1；400ng/孔；Millipore)和TrkB(或NTRK2；200ng/孔；Invitrogen))。以50μl最终体积进行所述试验，所述50μl最终体积包含8mM MOPS(pH 7.0)、0.2mM EDTA、40mM乙酸镁、25mM 2-甘油磷酸酯、1mM DTT、2mM钒酸钠、0.01％Triton X-100、或者是1mg/ml(TrkA)或2.5mg/ml(TrkB)聚EY(聚Glu-Tyr 4:1；底物)和30(Trk A)或者是40(Trk B)μM ATP。通过连续稀释将测试化合物溶解于(10mM)，和稀释于100％DMSO中，测试的半对数浓度通常为1至30000nM最终浓度(5％DMSO最终)，但是这些浓度可以根据化合物的效能进行调节。通过加入ATP开始反应，并于30℃孵育所述板2小时。将所述板从孵育器中移出，向每个孔加入50μl kinase-glo plus，接着于室温孵育10分钟。用光度计测量荧光素诱导的发冷光，其与孔中残留的ATP成正比。每个板上的对照包括具有单独激酶的孔(最大ATP消耗，或0％抑制)、没有激酶的孔(最大ATP信号或100％抑制)和具有20μM十字孢碱的孔(抑制的阳性对照)。每个板上还包括K252a的全浓度效应抑制曲线(半对数浓度为1至10000nM)。pIC50值衍生自拟合ATP消耗的抑制曲线，使用对照定义的0-100％发冷光范围，具有反曲剂量-效应方程：抑制％＝100-(100/(1+10(X+pIC50)*nH)),其中X为测试化合物浓度的对数。在这些情况下，K252a具有对TrkA的pIC507.46±0.07(平均值±SD；N＝42；IC50＝30nM)和对TrkB的pIC507.16±0.18(N＝36；IC50＝74nM)，这些值与体外文献数据一致(Tapley等人(1992)Oncogene 7:371-381，Tan等人(2007)Mol Pharmacol 72:1440-1446)。
得到的结果显示如下：

Claims (12)

1.如下通式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其互变异构体，或其立体异构体或任何比例的立体异构体混合物在制备用于治疗或预防疼痛的药物中的用途，
其中：
-Y1代表CH基团，
-Y4代表氮原子，
-Y2代表C-X-Ar基团，
-Y3代表C-W基团，
-Ar代表苯基，其被一个或多个卤原子取代，
-X代表选自O、S、S(O)、S(O)2、S(NH)、S(O)(NH)、S(O)2(NH)、和CH2的二价基团，其中这些基团中的第一个原子与C-X-Ar链的C原子相连，
-W代表H或NH2基团，
-V代表C(O)或C(S)，
-n代表0，
-R1代表
-R2代表和
-R3代表氢原子。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述立体异构体混合物为对映异构体混合物。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述对映异构体混合物为外消旋混合物。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述疼痛为伤害性疼痛、炎性疼痛、神经性疼痛、原发性疼痛或精神性疼痛。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述疼痛为炎性疼痛或神经性疼痛。
6.根据权利要求1所述的用途，其中所述疼痛起因于癌症、神经损伤或风湿性疾病。
7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于X代表选自S、S(O)、S(O)2、CH2和S(O)2NH的二价基团，其中这些基团中的第一个原子与C-X-Ar链的C原子相连。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于X代表选自S、S(O)2、CH2和S(O)2NH的二价基团，其中这些基团中的第一个原子与C-X-Ar链的C原子相连。
9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于Ar代表选自如下基团的基团：
10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于V代表C(O)。
11.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述通式(I)的化合物选自如下化合物：
12.包含至少一种药学上可接受的赋形剂和一种作为活性成分的根据权利要求1-11中任一项所述的化合物的药物组合物在制备用于治疗或预防疼痛的药物中的用途。
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