CN104140381A

CN104140381A - 与Aβ斑块和神经纤维缠结具有亲和力的化合物及制备方法

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Publication number: CN104140381A
Application number: CN201410307344.7A
Authority: CN
Inventors: 崔孟超; 刘伯里; 付化龙
Original assignee: Beijing Normal University
Current assignee: Beijing Normal University
Priority date: 2014-06-30
Filing date: 2014-06-30
Publication date: 2014-11-12
Anticipated expiration: 2034-06-30
Also published as: CN104140381B

Abstract

本发明提供一种与Aβ斑块和神经纤维缠结具有高亲和力的化合物，所述化合物的结构通式如式(I)所示：其中，W为苯并六元芳环或六元芳环；R₁和R₂独立的表示CH₃、¹¹CH₃、芳基、杂芳基或(CH₂)_n'R₄，其中，n’为2-6，R₄为H、OH、F或Cl，其中F为¹⁸F或¹⁹F，R₃为或

Description

与Aβ斑块和神经纤维缠结具有亲和力的化合物及制备方法

技术领域

本发明涉及影像分子探针领域，具体地说，涉及一种与Aβ斑块和神经纤维缠结具有亲和力的化合物及制备方法。

背景技术

阿尔兹海默症(Alzheimer's disease,AD)，是老年痴呆症最常见的一种形式，已经成为继心脏病、肿瘤和中风然后的第四大杀手。我国目前有500多万的AD患者，而且随着我国老龄化程度的加剧，AD会成为影响老年人健康的主要疾病之一。围绕AD所展开的研究主要包括病理、诊断、治疗及预防已经成为世界重要的疾病研究课题。淀粉样蛋白沉积(Aβ蛋白)和神经纤维缠结是AD的两大主要病理学特征。研究表明，脑内的Aβ蛋白沉积在AD发病前5-10年就已经开始，因此开发以Aβ蛋白沉积为靶点的小分子探针显像剂对AD的早期诊断具有重要意义。除了AD之外，其他淀粉样蛋白沉积疾病或神经纤维缠结疾病还包括：克雅氏病、库鲁病、Down氏综合征、II型糖尿病胰岛瘤、淀粉样蛋白多发性神经病、淀粉样蛋白心肌病、全身性老年淀粉样蛋白病、Muckle-Wells综合征、匹克氏病、淀粉样脑血管病等。

在以往研究中，用于核医学PET或SPECT显像的Aβ斑块显像剂发展迅速，通过对硫磺素-T和刚果红这两种染料进行修饰，已经有不少分子进入了临床试验阶段。例如，2-苯基苯并噻唑类的代表化合物[¹¹C]PIB是目前使用最为广泛的Aβ斑块显像剂，它的类似物[¹⁸F]GE-067由于采用了¹⁸F标记，临床应用前景可能更大，目前已被美国FDA批准；二苯乙烯衍生物二苯乙烯衍生物[¹⁸F]AV-45是第一个被美国FDA批准的Aβ斑块显像剂，[¹⁸F]BAY94-9172也正在积极的开展三期临床试验。2-苯基咪唑并吡啶衍生物[¹²³I]IMPY是第一个进入临床阶段的SPECT显像剂，但由于其体内稳定性差而很快被淘汰。

然而，PET核素标记探针的缺点也是显而易见的：(1)放射性药物所发出的射线对人体具有一定的辐射损伤；(2)放射性药物的制备及标记过程相对复杂，而且只能在线制备；(3)需要医院配套有生产放射性核素的加速器；(4)受目前仪器的限制，显像时间较长，图像处理费时；(5)显像成本较高，病人难以承受；(6)存在放射性废弃物处理问题。

随着技术的发展，光学成像技术，特别是利用近红外波段的光辐射进行生物组织的成像、诊断和检测已经成为目前热门的研究领域之一。目前，脑部近红外光学成像方法和仪器发展迅速，已经有商品化的专用近红外脑部成像仪器，可以实现脑功能检测与研究。近红外光学成像使用的有机荧光小分子探针的荧光发射波长一般在650nm以上，不仅可以有效地避免生物组织的自发荧光干扰，极大的提高检测灵敏度，而且可以穿透较深层的生物组织(能够基本满足脑部成像的要求)。与核医学常用的放射性标记分子探针相比，光学成像具有非放射性、操作简便、测量快速(短于1分钟)、费用低廉等诸多优点。

目前，靶向于Aβ斑块的近红外荧光分子探针报道相对较少，还处于起步阶段。最先报道的靶向于Aβ斑块的近红外荧光分子探针是AOI-987，但其具有明显不足：首先该化合物合成较为复杂；其次，分子带有电荷，不利于透过血脑屏障，与Aβ斑块的亲和力较弱(K_d＝220nM)；最后，Stokes位移只有20nm，不利于显像。2005年又报道了NIAD-4，该分子虽符合一般要求，但由于含有2个噻吩环，脂溶性很高，透过血脑屏障的能力有限。同样，最近报道的CRANAD-2(姜黄素衍生物)及BODIPY-1也存在分子量较大、脂溶性高、脑摄取量低的缺点。综上所述，研制新的性能优异的靶向于Aβ斑块的近红外荧光分子探针来进行AD的早期诊断，符合我国已步入老龄化社会的国情和社会民生的迫切需求，具有重要的科学意义和应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种与脑内Aβ斑块和神经纤维缠结具有高亲和力的化合物。

本发明的另一目的是提供所述化合物的制备方法及应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种与Aβ斑块和神经纤维缠结具有高亲和力的化合物，所述化合物的结构通式如式(I)所示：

其中，W为苯并六元芳环或六元芳环；R₁和R₂独立的表示CH₃、¹¹CH₃、芳基、杂芳基或(CH₂)_n'R₄，其中，n’为2-6，R₄为H、OH、F或Cl，其中F为¹⁸F或¹⁹F，R₃为或n为0-5，且碳碳双键均为反式双键。

式(I)所示化合物中，当W为苯并六元芳环时，W的结构通式如式(II)所示，所述化合物的结构通式如式(III)所示：

其中，X和Y分别独立的表示N或CH，即W为萘环或喹啉环，两个取代基团分别位于2位和6位。

式(I)所示化合物中，当W为六元芳环时，两个取代基团位于六元芳环的对位。

优选地，W为苯环，且所述化合物的结构通式如式(IV)所示：

本发明还提供前述如式(I)所示化合物的制备方法。分述如下：

当式(I)所示化合物中不含¹⁸F、¹⁹F和¹¹C时，制备方法为：

(1)通过wittig反应对各类醛进行碳碳双键的延长，取1mmol溶于25mL无水四氢呋喃，加入1.5mmol(1,3_-二氧环戊基-2-甲基)三苯基溴化膦，然后加入5mmol NaH(60％，分散于石蜡)和催化剂量的18-冠-6，室温搅拌反应24小时，反应结束后用1M盐酸淬灭，然后用氨水将反应体系调节为碱性，二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥后旋蒸除去溶剂，最后柱层析分离得到中间产物；其中，中，W为苯并六元芳环或六元芳环；R₁和R₂独立的表示CH₃、芳基、杂芳基或(CH₂)_n'R₄，其中，n’为2-6，R₄为H、OH或Cl；n为0-5，且碳碳双键均为反式双键。

当R₁取代基中含有-OH，在wittig反应过程中需要用3,4-二氢吡喃对-OH进行保护，即，将-OH转化为-OTHP基团。保护的方法为：取1mmol溶于10mL无水二氯甲烷，加入5mmol3,4-二氢吡喃和1.0g吡啶对甲苯磺酸盐(PPTS)，室温搅拌反应28小时，反应结束后旋蒸除去溶剂，柱层析分离得到油状液体；其中，中W为苯并六元芳环或六元芳环；R₁为(CH₂)_n'R₄，其中n’为2-6，R₄为OH；R₂为CH₃、芳基、杂芳基或(CH₂)_n`R₄，其中，n`为2-6，R₄为H、OH、Cl，n为0-5。

(2)通过Knoevenagel缩合反应合成目标化合物：将步骤(1)制备的中间产物0.2mmol溶于5-20mL甲醇后加入0.4mmol丙二腈(米氏酸、达米酮、丙二酸二甲酯、氰基乙酸甲酯、2,4-恶唑烷二酮或罗丹宁)，然后加入数滴哌啶或碳酸钾的甲醇饱和溶液，摇动反应瓶，室温反应5-15分钟析出固体，抽滤后将所得固体分别用甲醇和石油醚清洗得到如式(I)所示的化合物。

当式(I)所示化合物中F为¹⁹F时，制备方法为：

(1)将1mmol溶于10mL无水二氯甲烷中，加入4mmol对甲苯磺酰氯和4mmol三乙胺，室温搅拌反应3小时，旋蒸除去溶剂，柱层析分离得到结构如式(V)所示的黄色固体化合物；

(2)将1mmol式(V)所示化合物溶于10mL无水四氢呋喃中，加入1.5mmol四丁基氟化铵(溶解于THF中制备成1M的THF溶液)，室温搅拌反应6小时后旋蒸除去溶剂，将剩余油状物用水洗涤，二氯甲烷萃取，有机相经过无水硫酸镁干燥后旋蒸除去，柱层析分离得到结构如式(VI)所示的化合物；

(3)通过Knoevenagel缩合反应合成目标化合物：将步骤(2)制备的如式(VI)所示的化合物0.2mmol溶于5-20mL甲醇后加入0.4mmol丙二腈，然后加入数滴哌啶或碳酸钾的甲醇饱和溶液，摇动反应瓶，室温反应5-15分钟析出固体，抽滤后将所得固体分别用甲醇和石油醚清洗得到如式(VII)所示的化合物。

其中，式(VI)及式(VII)所示化合物中，W为苯并六元芳环或六元芳环；R₂表示CH₃、¹¹CH₃、芳基、杂芳基或(CH₂)_n'R₄，其中，n’为2-6，R₄为H、OH或Cl；R₃为或n为0-5，且碳碳双键均为反式双键。

当式(I)所示化合物中F为¹⁸F时，制备方法为：

(1)将1mmol溶于5mL吡啶，冰水冷却至0℃，加入1.2mmol对甲苯磺酰氯，继续搅拌反应1小时，旋蒸除去吡啶，柱分离得到结构如式(VIII)所示的化合物；

(2)将1-5mg步骤(1)所得如式(VIII)所示的化合物溶于2mL无水乙腈中，将其加入到已除水的含一定活度(例如，活度为10mCi)的含K₂₂₂/K₂CO₃的¹⁸F^-的反应管中，在100℃的条件下标记5min，最后过C18反相柱(Sep-pak)，用水冲洗除去盐和剩余的¹⁸F^-，然后用乙腈淋洗得到最终标记产物，N₂吹干后，用HPLC分离得到纯度大于98％的结构如式(IX)所示的化合物。

其中，式(VIII)及式(IX)所示化合物中，W为苯并六元芳环或六元芳环；R₂为CH₃、芳基、杂芳基或(CH₂)_n'R₄，其中，n’为2-6，R₄为H、OH或Cl；R₃为或n为0-5，且碳碳双键均为反式双键。

当式(I)所示化合物中R₁为¹¹CH₃时，制备方法为：

将2mg溶于0.4mL DMSO中，加入5N NaOH溶液10μL，通入¹¹C-CH₃I气体，密封后在95℃反应5分钟；冷却后通过甲醇活化的C18反相柱(Sep-pak)，再用10mL去离子水冲洗，然后用1mL乙醇淋洗得到标记产物，N₂浓缩所得产物后用HPLC分离纯化得到¹¹C标记的结构如式(X)所示化合物。

其中，及式(X)所示化合物中，W为苯并六元芳环或六元芳环；R₂为CH₃或H；R₃为或n为0-5，且碳碳双键均为反式双键。

本发明进一步提供所述化合物，或其药用可接受的盐、酯、酰胺或前药在制备用于诊断淀粉样蛋白沉积疾病或神经纤维缠结疾病的显像剂中的应用。其中，所述淀粉样蛋白沉积疾病或神经纤维缠结疾病包括但不限于阿尔茨海默病、克雅氏病、库鲁病、Down氏综合征、II型糖尿病胰岛瘤、淀粉样蛋白多发性神经病、淀粉样蛋白心肌病、全身性老年淀粉样蛋白病、Muckle-Wells综合征、匹克氏病、淀粉样脑血管病等。

本发提供了一类基于推拉电子结构的，以萘、喹啉和苯环为主体的一系列衍生物作为与AD病人脑内Aβ斑块具有高亲和力的近红外探针。荧光光谱显示，该类近红外分子探针在PBS缓冲液中发射波长大于650nm，适合于近红外成像；体外荧光染色实验表明，探针能够清楚地与转基因小鼠脑切片和AD人脑组织切片上的Aβ斑块结合；荧光饱和结合实验表明，探针与Aβ蛋白具有高度亲和性；活体动物荧光成像表明，探针能够迅速的穿过血脑屏障，并且具有合理的脑清除速率，在AD转基因鼠脑中，因为与Aβ斑块结合，其清除速率明显慢于正常小鼠。因此，该类探针非常有希望发展成为一种新型的用于AD早期检测的近红外Aβ斑块显像剂。

附图说明

图1为本发明实施例1中化合物1-36的合成过程示意图；其中涉及的反应试剂与条件为：(a)二甲胺，偏重亚硫酸钠，水，140℃，高压，18小时。(b)1)正丁基锂，氮氮二甲基甲酰胺，无水四氢呋喃，-78℃，N₂，45分钟；2)盐酸(1M)，氨水。(c)1)(1,3-二氧戊环-2-基)甲基三苯基溴化瞵，无水四氢呋喃，氢化钠，18-冠-6，室温；2)盐酸(1M)，氨水。(d)N-甲基-2-羟基乙胺，偏重亚硫酸钠，水，140℃，高压，24小时。(e)3,4-二氢-2H-吡喃，4-甲基苯磺酸吡啶(PPTS)，二氯甲烷。(f)盐酸(1M)。(g)二乙醇胺，偏重亚硫酸钠，水，140℃，高压，20小时。(h)4-甲苯磺酰氯，三乙胺，二氯甲烷，室温。(i)四丁基氟化铵，无水四氢呋喃，室温。(j)丙二腈，碳酸钾，甲醇，室温。

图2为本发明实施例2中化合物37-65的合成过程示意图；其中涉及的反应试剂与条件为：(c)1)(1,3-二氧戊环-2-基)甲基三苯基溴化瞵，无水四氢呋喃，氢化钠，18-冠-6，室温；2)盐酸(1M)，氨水。(e)3,4-二氢-2H-吡喃，4-甲基苯磺酸吡啶(PPTS)，二氯甲烷。(h)4-甲苯磺酰氯，三乙胺，二氯甲烷，室温。(i)四丁基氟化铵，无水四氢呋喃，室温。(j)丙二腈，碳酸钾，甲醇，室温。(k)MAAD-1,2，MCAAD-1,2,3，DMMAD-1,2,3反应条件：甲醇，哌啶，室温；MAAD-3，DMDAD-2,3反应条件：甲醇，室温或100℃；DMDAD-1反应条件：150℃熔融反应。

图3为DDNPAD-1至-12，及MAAD-3、DMDAD-3、MCAAD-3和DMMAD-3与Aβ_1-42聚集体结合后的荧光增强曲线；每幅图中各曲线依次为化合物与Aβ_1-42聚集体结合后的荧光发射曲线(1)、化合物与BSA结合后的荧光发射曲线(2)、化合物在PBS缓冲液中的荧光发射曲线(3)和PBS缓冲液本身的荧光发射曲线(4)。

图4为DDNPAD-1，-2，-3与转基因小鼠与AD病人脑组织切片的荧光染色结果；其中，A、D、G分别为DDNPAD-1，-2，-3在鼠脑切片上的荧光染色结果；B、E、H分别为硫磺素-S在相邻鼠脑切片上的染色结果；C、F、I分别为DDNPAD-1，-2，-3在人脑切片上的染色结果。

图5为DDNPAD-4，-5，-6与转基因小鼠与AD病人脑组织切片的荧光染色结果；其中，A、D、G分别为DDNPAD-4，-5，-6在鼠脑切片上的荧光染色结果；B、E、H分别为硫磺素-S在相邻鼠脑切片上的染色结果；C、F、I分别为DDNPAD-4，-5，-6在人脑切片上的染色结果。

图6为DDNPAD-7，-8，-9与转基因小鼠与AD病人脑组织切片的荧光染色结果；其中，A、D、G分别为DDNPAD-7，-8，-9在鼠脑切片上的荧光染色结果；B、E、H分别为硫磺素-S在相邻鼠脑切片上的染色结果；C、F、I分别为DDNPAD-7，-8，-9在人脑切片上的染色结果。

图7为DDNPAD-10，-11，-12与转基因小鼠与AD病人脑组织切片的荧光染色结果；其中，A、D、G分别为DDNPAD-10，-11，-12在鼠脑切片上的荧光染色结果；B、E、H分别为硫磺素-S在相邻鼠脑切片上的染色结果；C、F、I分别为DDNPAD-10，-11，-12在人脑切片上的染色结果。

图8为MAAD、DMDAD、MCAAD和DMMAD系列化合物与转基因鼠脑切片的荧光染色结果；其中，A、B、C、D分别为MAAD、DMDAD、MCAAD和DMMAD系列化合物与转基因鼠脑切片的荧光染色结果；每幅图中左列从上到下分别为MAAD-1，-2，-3或DMDAD-1，-2，-3或MCAAD-1，-2，-3或DMMAD-1，-2，-3与鼠脑切片的荧光染色结果，右列为相邻切片用硫磺素-S的染色结果。

图9为DDNPAD-2，-3在裸鼠脑部的代谢曲线图。其中，图9A表示DDNPAD-2，-3在裸鼠脑部分布的实时图像，图9B表示DDNPAD-2，-3在裸鼠脑部的代谢曲线图。

图10为DDNPAD-2，-3在转基因AD小鼠脑部的代谢曲线，相同月龄的正常小鼠作为对照组也进行了显像；其中，A、B分别为DDNPAD-2在发射波长620nm和680nm的代谢曲线；C、D分别为DDNPAD-3在发射波长680nm和780nm的代谢曲线。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1 以萘环为主体的衍生物的合成

1、合成中间体1

将6-溴-2-萘酚5.5g溶于35mL二甲胺水溶液(33％)后，加入8.2g Na₂S₂O₅，在140℃高压反应釜中反应18小时。停止反应后用NaOH水溶液(1M)超声清洗15分钟，抽滤，然后分别用NaOH水溶液(1M)和去离子水清洗固体，70℃烘干得到浅绿色固体4.4g。产率65.8％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.83(s,1H),7.62(d,J＝9.0Hz,1H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),7.42(d,J＝8.8Hz,1H,7.19(d,J＝8.0Hz,1H),6.92(s,1H),3.06(s,6H)。

2、合成中间体2

将11.4g中间体1溶于50mL无水四氢呋喃后，在-78℃氮气保护中加入27.5mL正丁基锂(2.5M的正己烷溶液)，搅拌反应30分钟；然后加入5.5mLDMF，室温搅拌反应15分钟。向反应体系中加入盐酸(1M)调节为酸性，室温搅拌15分钟后用氨水调节为碱性。抽滤，用去离子水洗涤固体，烘干后得到黄色固体8.6g。产率93.5％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:10.02(s,1H),8.16(s,1H),7.84(d,J＝9.1Hz,1H),7.83(dd,J＝8.5Hz,1.6Hz,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,1H),7.19(dd,J＝9.1Hz,2.5Hz,1H),6.92(s,1H),3.13(s,6H)。

3、合成中间体3

将1.5g中间体2溶于25mL无水四氢呋喃，加入5.7g(1,3二氧环戊基-2-甲基)三苯基溴化膦，然后加入1.7g NaH(60％，分散于石蜡)和催化剂量的18-冠-6，室温搅拌反应24小时。将反应用盐酸(1M)淬灭，然后用氨水将反应体系调节为碱性，二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥后旋蒸除去溶剂，最后用体积比为石油醚:二氯甲烷:乙酸乙酯＝6:6:1的展开剂柱层析分离，得到黄色固体770mg。产率45.4％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.71(d,J＝7.8Hz,1H),7.84(s,1H),7.77(d,J＝9.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,1H),7.58(d,J＝16.0Hz,1H),7.57(d,J＝9.0Hz,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.00(s,1H),6.75(dd,J＝15.8Hz,7.8Hz,1H),3.12(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:193.74,153.76,149.86,136.73,130.96,129.93,127.55,126.97,126.45,125.89,124.14,116.37,105.77,40.43。

4、合成中间体4

用制备中间体3的方法制得中间体4，所用溶剂、催化剂、反应和分离条件均相同，得到83mg黄褐色固体。产率33.5％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(s,1H),7.70(d,J＝9.1Hz,1H),7.62(d,J＝8.6Hz,1H),7.57(d,J＝8.7Hz,1H),7.30(dd,J＝15.0Hz,10.6Hz,1H),7.15(d,J＝7.8Hz,1H),7.12(d,J＝15.3Hz,1H),7.02(dd,J＝15.3Hz,10.6Hz,1H),6.89(s,1H),6.26(dd,J＝15.0Hz,8.0Hz,1H),3.09(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:193.55,152.88,149.41,143.48,135.87,130.37,129.50,129.27,129.08,126.87,126.26,124.24,123.90,116.44,106.02,40.56。

5、合成中间体5

将30mL氮甲基乙醇胺溶于5mL水，然后将6-溴-2-萘酚9.0g溶于上述溶液，加入7.6g Na₂S₂O₅，在140℃高压反应釜中反应24小时。停止反应后用NaOH水溶液(1M)超声清洗15分钟，抽滤，然后分别用NaOH水溶液(1M)和去离子水清洗固体，固体70℃烘干后用体积比为石油醚:乙酸乙酯:＝4:1的展开剂进行柱层析分离得到白色固体5.3g。产率31.5％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.85(s,1H),7.64(d,J＝9.0Hz,1H),7.55(d,J＝8.6Hz,1H),7.45(d,J＝8.3Hz,1H),7.27(s,1H),7.08(s,1H),3.88(t,J＝5.4Hz,2H),3.59(t,J＝5.5Hz,2H),3.10(s,3H)。

6、合成中间体6

将4.4g中间体5溶于40mL无水二氯甲烷，加入3.9g3,4-二氢吡喃和1.0g吡啶对甲苯磺酸盐(PPTS)，室温搅拌反应28小时，反应结束后旋蒸除去溶剂，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝4:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色油状液体5.6g。产率100％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.81(d,J＝1.5Hz,1H),7.59(d,J＝9.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(dd,J＝8.8Hz,1.9Hz,1H),7.19(dd,J＝9.1Hz,1.9Hz,1H),6.88(s,1H),4.58(t,J＝3.0Hz,1H),3.98-3.91(m,1H),3.83-3.75(m,1H),3.70-3.59(m,3H),3.48-3.42(m,1H),3.09(s,3H),1.93-1.41(m,6H)。

7、合成中间体7

将1.5g中间体6溶于25mL无水四氢呋喃后，在-78℃氮气保护中加入2.6mL正丁基锂(2.5M的正己烷溶液)，搅拌反应30分钟；然后加入500μL DMF，室温搅拌反应15分钟。向反应体系中加入盐酸(1M)调节为酸性，然后用氨水调节为碱性。用二氯甲烷萃取反应液三次，无水硫酸镁干燥有机相，旋蒸除去溶剂，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝4:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色油状液体3.5g。产率68.3％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.01(s,1H),8.14(s,1H),7.84-7.78(m,2H),7.64(d,J＝8.6Hz,1H),7.22(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),6.91(d,J＝2.4Hz,1H),4.61-4.54(m,1H),4.00-3.92(m,1H),3.92-3.59(m,4H),3.58-3.35(m,1H),1.95-1.37(m,6H)。

8、合成中间体8

将0.99g中间体7溶于5mL四氢呋喃，加入20mL盐酸(1M)，室温搅拌反应10小时。反应完毕后用氨水调节反应液至碱性，用二氯甲烷萃取反应液三次，有机相经过无水硫酸镁干燥后旋蒸除去，然后先后用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝4:1和2:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色固体733.65mg。产率100％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.97(s,1H),8.09(s,1H),7.79(dd,J＝8.9,2.2Hz,2H),7.62(d,J＝8.6Hz,1H),7.22(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),6.92(d,J＝2.4Hz,1H),3.90(s,2H),3.66(t,J＝5.7Hz,2H),3.14(s,3H)。

9、合成中间体9

将4.6g中间体7溶于50mL无水四氢呋喃，加入9.8g(1,3二氧环戊基-2-甲基)三苯基溴化膦，然后加入3.0g NaH(60％，分散于石蜡)和催化剂量的18-冠-6，室温搅拌反应36小时。将反应用盐酸(1M)淬灭，然后用氨水将反应体系调节为碱性，二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥后旋蒸除去溶剂，产物没有进行纯化直接进行下一步反应。

10、合成中间体10

根据合成中间体8的方法由中间体9制得中间体10，得到黄色固体3.1g。产率84.4％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.70(d,J＝7.7Hz,1H),7.82(s,1H),7.74(d,J＝9.1Hz,1H),7.64(d,J＝8.6Hz,1H),7.58(s,1H),7.55(d,J＝9.0Hz,1H),7.22(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),6.97(s,1H),6.74(dd,J＝15.8,7.8Hz,1H),3.90(t,J＝5.5Hz,2H),3.65(t,J＝5.6Hz,2H),3.14(s,3H)。

11、合成中间体11

根据合成中间体9的方法由中间体9制得中间体11，反应完毕后用盐酸(1M)淬灭反应，在室温下搅拌反应1小时后用氨水中和至碱性，最后用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝2:1的展开剂进行柱层析分离得到砖红色固体540mg。产率36.9％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.70(d,J＝9.6Hz,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H),7.31-7.24(m,1H),7.20(d,J＝7.9Hz,1H),7.10(d,J＝15.4Hz,1H),7.00(dd,J＝15.1,10.9Hz,1H),6.94(s,1H),6.23(dd,J＝15.1,8.0Hz,1H),3.89(s,2H),3.63(t,J＝5.4Hz,2H),3.11(s,3H)。

12、合成中间体12

将25mL2,2'-二羟基二乙胺溶于10mL水，然后将6-溴-2-萘酚6.1g溶于上述溶液，加入8.3g Na₂S₂O₅，在140℃高压反应釜中反应20小时。停止反应后用去离子水超声清洗15分钟，抽滤，然后用去离子水清洗固体，固体60℃烘干后，先后用体积比为二氯甲烷:乙酸乙酯＝40:1和纯乙酸乙酯作为展开剂进行柱层析分离得到白色固体1.7g。产率24.4％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.83(s,1H),7.62(d,J＝9.1Hz,1H),7.50(d,J＝8.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),7.14(d,J＝8.6Hz,1H),6.91(s,1H),3.93(t,J＝4.7Hz,4H),3.69(t,J＝4.7Hz,4H),3.00(s,2H)。

13、合成中间体13

将2.1g中间体12溶于100mL无水二氯甲烷，加入5.4g3,4-二氢吡喃和1.7g吡啶对甲苯磺酸盐(PPTS)，40℃搅拌反应12小时，反应结束后旋蒸除去溶剂，用石油醚:乙酸乙酯＝8:1(v:v)柱层析分离得到黄色油状液体3.1g。产率95.1％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.81(s,1H),7.59(d,J＝9.1Hz,1H),7.48(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.22(d,J＝9.2Hz,1H),7.00(s,1H),4.64-4.53(m,2H),4.02-3.90(m,2H),3.87-3.77(m,3H),3.76-3.62(m,5H),3.48-3.45(m,2H),1.84-1.45(m,12H)。

14、合成中间体14

按照合成中间体7的方法由中间体13制得中间体14，得到黄绿色油状液体2.1g。产率74.2％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.00(s,1H),8.13(s,1H),7.81(d,J＝8.8Hz,1H),7.62(d,J＝8.6Hz,1H),6.99(d,J＝2.1Hz,1H),4.60(d,J＝3.3Hz,2H),4.04-3.94(m,2H),3.88-3.63(m,8H),3.50-3.46(m,2H),1.89-1.44(m,12H)。

15、合成中间体15

按照合成中间体8的方法由中间体14制得中间体15，得到黄色固体238mg。产率75.8％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.97(s,1H),8.10(s,1H),7.81(d,J＝9.1Hz,1H),7.79(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,1H),7.15(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),6.90(d,J＝2.0Hz,1H),3.97(t,J＝4.9Hz,4H),3.75(t,J＝4.9Hz,4H),3.13(s,2H)。

16、合成中间体16

按照合成中间体9的方法由中间体14制得中间体16，反应时间为56小时，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝4:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色油状液体1.3g。产率44.6％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.72(s,1H),7.63(d,J＝9.1Hz,1H),7.51(d,J＝9.0Hz,1H),7.48(d,J＝16.2Hz,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,1H),7.12(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),6.86(d,J＝1.9Hz,1H),6.66(dd,J＝15.7,7.8Hz,1H),4.53(s,2H),3.94-3.85(m,2H),3.80-3.55(m,8H),3.45-3.37(m,2H),1.80-1.33(m,12H)。

17、合成中间体17

按照合成中间体15的方法由中间体16制得中间体17，得到红色固体183.7mg。产率85.6％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.78(s,1H),7.73(d,J＝9.0Hz,1H),7.60(d,J＝8.6Hz,1H),7.54(d,J＝10.1Hz,1H),7.51(d,J＝15.9Hz,1H),7.13(d,J＝7.3Hz,1H),6.90(s,1H),6.68(dd,J＝15.7,7.8Hz,1H),3.97(t,J＝4.8Hz,4H),3.74(t,J＝4.8Hz,4H),3.13(s,2H)。

18、合成中间体18

按照合成中间体11的方法由中间体16制得中间体18，得到红色固体139mg。产率15.4％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.57(d,J＝8.1Hz,1H),7.71(s,1H),7.70(d,J＝9.5Hz,1H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H),7.31-7.22(m,1H),7.13-7.10(m,1H),7.08(s,1H),6.99(dd,J＝14.9,10.5Hz,1H),6.89(s,1H),6.21(dd,J＝15.0,8.0Hz,1H),3.97(t,J＝4.7Hz,4H),3.74(t,J＝4.9Hz,4H),3.00(s,2H)。

19、合成中间体19

将中间体8422.4mg溶于10mL无水二氯甲烷，加入1.5g对甲苯磺酰氯和1.5mL三乙胺，室温搅拌反应3小时，旋蒸除去溶剂，然后先后用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝4:1和2:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色固体561.1mg。产率79.5％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.03(s,1H),8.15(s,1H),7.84(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),7.78(d,J＝9.1Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,2H),7.62(d,J＝8.6Hz,1H),7.15(d,J＝8.1Hz,2H),7.04(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),6.78(d,J＝1.9Hz,1H),4.26(t,J＝5.7Hz,2H),3.79(t,J＝5.8Hz,2H),3.06(s,3H),2.29(s,3H)。

20、合成中间体20

按照合成中间体19的方法由中间体10制得中间体20，得到黄色固体105mg。产率59.6％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.72(d,J＝7.7Hz,1H),7.83(s,1H),7.70(d,J＝9.1Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,2H),7.60(s,2H),7.58(d,J＝16.4Hz,1H),7.17(d,J＝8.1Hz,2H),7.04(dd,J＝9.1,2.2Hz,1H),6.84(s,1H),6.76(dd,J＝15.8,7.7Hz,1H),4.27(t,J＝5.7Hz,2H),3.78(t,J＝5.7Hz,2H),3.05(s,3H),2.31(s,3H)。

21、合成中间体21

按照合成中间体19的方法由中间体11制得中间体21，得到黄色固体45.7mg。产率63.6％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,2H),7.64(d,J＝9.3Hz,1H),7.58(s,2H),7.32(dd,J＝15.1,10.5Hz,1H),7.16(d,J＝7.8Hz,2H),7.10(d,J＝15.2Hz,1H),7.06-7.00(m,1H),6.98(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),6.74(d,J＝1.9Hz,1H),6.27(dd,J＝15.1,8.0Hz,1H),4.24(t,J＝5.8Hz,2H),3.76(t,J＝5.8Hz,2H),3.02(s,3H),2.31(s,3H)。

22、合成中间体22

将中间体19256.6mg溶于10mL无水四氢呋喃，加入2.6mL四丁基氟化铵(1M的THF溶液)，室温搅拌反应6小时后旋蒸除去溶剂，将剩余油状物用水洗涤，二氯甲烷萃取，有机相经过无水硫酸镁干燥后旋蒸除去，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝4:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色固体86.1mg。产率55.6％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.02(s,1H),8.16(s,1H),7.85(d,J＝1.9Hz,1H),7.83(s,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,1H),7.18(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),6.93(d,J＝2.3Hz,1H),4.68(dt,J＝47.1,5.1Hz,2H),3.82(dt,J＝24.5,5.1Hz,2H),3.18(s,3H)。

23、合成中间体23

按照合成中间体22的方法由中间体20制得中间体23，用体积比为二氯甲烷:乙酸乙酯＝40:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色固体99.7mg。产率37.9％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.72(d,J＝7.8Hz,1H),7.85(s,1H),7.77(d,J＝9.1Hz,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,1H),7.61(d,J＝3.0Hz,1H),7.58(d,J＝11.4Hz,1H),7.19(d,J＝7.5Hz,1H),7.02(s,1H),6.76(dd,J＝15.8,7.8Hz,1H),4.70(dt,J＝47.1,5.0Hz,2H),3.81(dt,J＝24.7,5.1Hz,2H),3.18(s,3H)。

24、合成中间体24

按照合成中间体22的方法由中间体21制得中间体24，得到黄色固体35.0mg。产率65.0％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.75(s,1H),7.73(d,J＝11.0Hz,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),7.31(dd,J＝15.1,10.5Hz,1H),7.17(d,J＝9.7Hz,1H),7.11(s,1H),7.08-7.04(m,1H),7.01(d,J＝4.5Hz,1H),6.27(dd,J＝15.1,8.0Hz,1H),4.69(dt,J＝47.1,5.1Hz,2H),3.79(dt,J＝24.5,5.1Hz,2H),3.16(s,3H)。

25、合成化合物25(DDNPAD-1)

将90mg中间体2溶于10mL甲醇，加入60mg丙二腈，再加入2滴饱和K₂CO₃甲醇溶液作为催化剂，室温放置反应3分钟后析出固体，抽滤，用少量甲醇和石油醚洗涤，干燥后的到红色晶状固体95mg。产率85.5％，结构如下：¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.08(d,J＝1.4Hz,1H),7.96(dd,J＝8.9Hz,1.9Hz,1H),7.77(d,J＝9.2Hz,1H),7.70(s,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.17(dd,J＝9.2Hz,2.6Hz,1H),6.85(d,J＝2.4Hz,1H),3.17(s,6H)。

26、合成化合物26(DDNPAD-2)

由合成化合物25的方法得到26，得到红色固体42mg。产率75.0％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.82(s,1H),7.73(d,J＝9.1Hz,1H),7.55-7.64(m,3H),7.34(dd,J＝15.0Hz,2.6Hz,1H),7.20-7.26(m,1H),7.16(dd,J＝9.1Hz,2.4Hz,1H),6.87(s,1H),3.13(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:160.15,151.34,150.29,137.29,132.36,130.36,127.50,127.19,125.78,124.21,119.90,116.35,114.35,112.46,105.69,79.26,40.35。

27、合成化合物27(DDNPAD-3)

由合成化合物25的方法得到27，得到黑色固体29mg。产率93.3％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.73(s,1H),7.70(d,J＝9.1Hz,1H),7.61(d,J＝8.5Hz,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H),7.46(d,J＝11.9Hz,1H),7.15-7.07(m,3H),7.00(dd,J＝15.0Hz,11.0Hz,1H),6.87(s,1H),6.81-6.75(m,1H),3.11(s,6H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ:159.42,151.19,149.68,146.00,136.33,130.08,129.86,129.71,127.07,124.80,124.71,123.94,119.99,116.41,114.31,112.32,105.80,79.78,40.54。

28、合成化合物28(DDNPAD-4)

将52.6mg中间体8溶于5mL甲醇，加入52mg丙二腈后加入100μL碳酸钾甲醇饱和溶液作为催化剂，室温反应1小时后析出固体，抽滤，用甲醇和石油醚分别洗涤固体，得到红色晶状固体41mg。产率65.2％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.96(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),7.78(d,J＝9.2Hz,1H),7.69(s,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,1H),7.27-7.24(m,1H),6.97(s,1H),3.93(t,J＝5.6Hz,2H),3.70(t,J＝5.6Hz,2H),3.20(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:150.73,138.41,135.11,131.48,127.23,125.34,125.28,124.86,116.76,115.11,113.94,105.74,60.34,54.73,39.28。

29、合成化合物29(DDNPAD-5)

利用合成化合物28的方法制得化合物29，得到红色固体28mg。产率65.7％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.81(s,1H),7.73(d,J＝9.1Hz,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.58(d,J＝8.7Hz,1H),7.51(d,J＝11.4Hz,1H),7.30(d,J＝15.0Hz,1H),7.24-7.16(m,2H),6.96(s,1H),3.91(t,J＝5.1Hz,2H),3.67(t,J＝5.5Hz,2H),3.17(s,3H)。

30、合成化合物30(DDNPAD-6)

利用合成化合物28的方法制得化合物30，得到亮紫色固体78mg。产率65.7％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.73(s,1H),7.71(d,J＝9.3Hz,1H),7.62(d,J＝8.6Hz,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.44(d,J＝12.1Hz,1H),7.21(d,J＝8.6Hz,1H),7.13(d,J＝14.9Hz,1H),7.08(d,J＝13.6Hz,1H),7.01-6.95(m,2H),6.80-6.74(m,1H),3.90(d,J＝4.1Hz,2H),3.65(t,J＝5.4Hz,2H),3.14(s,3H)。

31、合成化合物31(DDNPAD-7)

根据合成化合物28的方法由中间体15制得化合物31，得到红色固体88.3mg。产率73.7％，结构如下：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.35(s,1H),8.21(s,1H),7.93(dd,J＝8.9,1.7Hz,1H),7.82(d,J＝9.3Hz,1H),7.69(d,J＝8.9Hz,1H),7.30(dd,J＝9.3,2.4Hz,1H),7.01(d,J＝2.1Hz,1H),4.85(t,J＝5.1Hz,2H),3.63(s,8H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ:160.27,149.81,138.09,135.71,131.30,126.62,124.11,116.75,115.45,114.58,104.49,74.47,58.14,53.13。

32、合成化合物32(DDNPAD-8)

根据合成化合物28的方法由中间体17制得化合物32，得到深红色固体40mg。产率57.1％，结构如下：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.25(d,J＝11.6Hz,1H),8.03(s,1H),7.81(d,J＝9.2Hz,1H),7.71(d,J＝8.7Hz,1H),7.67(d,J＝15.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.7Hz,1H),7.23(dd,J＝11.5,2.2Hz,1H),7.20(d,J＝14.5Hz,1H),6.97(s,1H),4.82(s,2H),3.63-3.59(m,8H).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ:162.07,152.49,148.40,137.04,132.30,130.42,126.92,126.66,124.98,124.45,119.74,116.15,114.85,112.86,104.46,76.81,58.19,53.18。

33、合成化合物33(DDNPAD-9)

根据合成化合物28的方法由中间体18制得化合物33，得到黑色固体12.8mg。产率30.0％，结构如下：¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.85(d,J＝11.9Hz,1H),7.79(s,1H),7.72(d,J＝9.2Hz,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.59(d,J＝8.7Hz,1H),7.36(dd,J＝14.1,10.3Hz,1H),7.27-7.15(m,3H),6.97(s,1H),6.83(dd,J＝14.0,12.1Hz,1H),3.81(t,J＝5.9Hz,4H),3.69(t,J＝6.0Hz,3H)。

34、合成化合物34(DDNPAD-10)

根据化合物25的合成方法制得化合物34，得到红色针状晶体33.6mg。产率54.7％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.97(dd,J＝8.8,1.8Hz,1H),7.78(d,J＝9.2Hz,1H),7.71(s,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.17(dd,J＝9.2,2.5Hz,1H),6.89(d,J＝2.4Hz,1H),4.69(dt,J＝47.0,5.0Hz,2H),3.84(dt,J＝24.8,5.0Hz,2H),3.21(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:159.27,150.16,138.39,135.08,131.51,127.27,125.35,125.28,124.94,116.44,115.05,113.91,105.63,81.64(¹J_CF＝170.1Hz),52.47(²J_CF＝20.9Hz),39.27。

35、合成化合物35(DDNPAD-11)

根据化合物25的合成方法制得化合物35，得到紫黑色固体57.4mg。产率62.7％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.85(s,1H),7.76(d,J＝9.1Hz,1H),7.66(d,J＝8.7Hz,1H),7.63(s,1H),7.60(d,J＝11.3Hz,1H),7.37(d,J＝15.1Hz,1H),7.30-7.23(m,1H),7.18(d,J＝9.1Hz,1H),6.98(s,1H),4.70(dt,J＝47.1,5.0Hz,2H),3.82(dt,J＝24.8,5.0Hz,2H),3.20(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:160.23,156.92,151.28,148.87,137.23,132.19,130.59,127.91,127.34,127.06,126.16,124.38,121.72,120.32,116.24,114.26,112.39,106.15,81.69(¹J_CF＝169.7Hz),79.86,52.65(²J_CF＝20.9Hz),39.33。

36、合成化合物36(DDNPAD-12)

根据化合物25的合成方法制得化合物36，得到紫黑色固体25.9mg。产率65.1％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.74(s,1H),7.72(d,J＝9.2Hz,1H),7.63(d,J＝8.7Hz,1H),7.56(d,J＝9.6Hz,1H),7.47(d,J＝11.9Hz,1H),7.14(d,J＝15.2Hz,1H),7.14-7.08(m,2H),7.01(dd,J＝15.1,10.8Hz,1H),6.93(s,1H),6.84-6.75(m,1H),4.68(dt,J＝47.1,5.0Hz,2H),3.80(dt,J＝24.6,5.0Hz,2H),3.17(s,3H)。

化合物1-36的合成过程示意图如图1所示。

实施例2 以苯环为主体的分子探针的合成

37、合成中间体37

将4-二甲氨基肉桂醛(578mg,3.3mmol)与(1,3-二氧环戊基-2-甲基)三苯基溴化膦(1.36g,3.2mmol)溶于25mL无水THF，70℃回流反应2h。再向反应体系中加入浓盐酸，然后用氨水调节pH到7。CH₂Cl₂萃取水相三次，无水硫酸镁干燥有机相，旋蒸除去溶剂，柱分离(石油醚:乙酸乙酯＝4:1，体积比)，得到黄色固体(139mg,46.0％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.56(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(d,J＝8.9Hz,2H),7.32-7.21(m,1H),6.95(d,J＝15.3Hz,1H),6.82(dd,J＝15.3,10.9Hz,1H),6.68(d,J＝8.8Hz,2H),6.18(dd,J＝15.0,8.1Hz,1H),3.03(s,6H)。

38、合成化合物38(MAAD-1)

将4-二甲氨基苯甲醛(448.4mg,3.0mmol)与米氏酸(432.2mg,3.0mmol)分别溶于甲醇后混合，加入50μL哌啶。室温下搅拌反应2h，抽滤，用石油醚洗涤固体，得米黄色晶体(591mg,71.6％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.31(s,1H),8.25(d,J＝9.2Hz,2H),6.69(d,J＝9.2Hz,2H),3.16(s,6H),1.76(s,6H),1.39(s,9H)。

39、合成化合物39(MAAD-2)

合成方法同化合物38，得到紫色固体(325mg,36.0％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.09-8.18(m,2H),7.59(d,J＝8.9Hz,2H),7.37(dd,J＝11.6Hz,2.4Hz,1H),6.68(d,J＝8.9Hz,2H),3.11(s,6H),1.74(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:163.87,161.64,159.13,156.88,153.11,132.22,123.24,120.16,111.97,106.01,104.06,40.11,27.49。

40、合成化合物40(MAAD-3)

将中间体37(44.8mg,0.22mmol)与米氏酸(40.0mg,0.27mmol)分别溶于甲醇后混合，室温反应1h，抽滤，柱分离(石油醚:乙酸乙酯＝10:1，体积比)，得到黑色固体(40mg,55.5％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.08(d,J＝12.5Hz,1H),7.72-7.79(m,1H),7.48(d,J＝8.9Hz,1H),7.43(d,J＝8.9Hz,2H),6.96-7.05(m,2H),6.69(d,J＝8.9Hz,2H),3.07(s,6H),1.74(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:163.66,161.38,158.02,157.21,151.97,146.47,131.71,130.89,130.14,128.87,126.26,123.89,123.52,112.12,107.23,104.22,40.14,27.57。

41、合成化合物41(DMDAD-1)

将4-二甲氨基苯甲醛(279.0mg,1.9mmol)与达米酮(283.5mg,2.0mmol)置于10mL圆底烧瓶中，150℃油浴加热，反应10min，用乙酸乙酯溶解反应体系，抽滤除去未溶解的物质，旋蒸除去溶剂，乙酸乙酯/石油醚体系重结晶，得到黄色固体(39mg,7.7％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.28(d,J＝9.2Hz,2H),8.03(s,1H),6.66(d,J＝9.2Hz,2H),3.12(s,6H),2.57(s,2H),2.55(s,2H),1.09(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:198.60,197.44,154.01,153.42,138.51,126.25,121.46,110.95,54.46,52.50,40.00,29.94,28.58。

42、合成化合物42(DMDAD-2)

将4-二甲氨基肉桂醛(175.0mg,1.0mmol)与达米酮(140.0mg,1.0mmol)溶于5mL甲醇，加热反应。分别用乙酸乙酯和二氯甲烷溶解固体，抽滤除去不溶物。乙酸乙酯/石油醚重结晶，柱分离(然后依次用石油醚:乙酸乙酯＝4:1，2:1洗脱)，得到紫色晶状固体(53.5mg,18.0％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.31(dd,J＝14.9Hz,12.4Hz),7.87(d,J＝12.4Hz,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,2H),7.36(d,J＝15.0Hz,1H),6.67(d,J＝8.8Hz,2H),3.08(s,6H),2.52(s,2H),2.50(s,2H),1.08(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:198.94,198.01,156.62,153.45,152.60,131.57,125.37,123.86,121.21,111.84,53.98,52.28,40.12,30.21,28.59。

43、合成化合物43(DMDAD-3)

将中间体37(24.8mg,0.12mmol)与达米酮(30.6mg,0.22mmol)分别溶于2mL和1mL甲醇后在搅拌下将达米酮的溶液滴入中间体37溶液中，室温反应5h，旋蒸除去溶剂，柱分离(石油醚:乙酸乙酯＝4:1，体积比)得到黑色固体(12mg,30.8％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.87(dd,J＝13.3Hz,12.8Hz),7.76(d,J＝12.6Hz,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,2H),7.22(dd,J＝14.0Hz,5.2Hz),6.94(d,J＝5.3Hz,2H),6.67(d,J＝8.8Hz,2H),3.05(s,6H),2.51(s,2H),2.50(s,2H),1.07(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:198.83,197.98,156.64,151.94,151.51,144.21,129.63,127.55,126.18,124.17,112.03,53.98,52.32,40.14,30.17,28.57。

44、合成化合物44(MCAAD-1)

将4-N,N二甲基氨基苯甲醛(275.6mg,1.8mmol)溶于3mL甲醇后加入氰基乙酸甲酯(210.7mg,2.1mmol)和20μL哌啶，室温搅拌反应10min，有黄色固体析出，甲醇重结晶得到黄色针状固体(314mg,75.8％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.9Hz,2H),6.71(d,J＝9.0Hz,2H),3.88(s,3H),3.12(s,6H)。

45、合成化合物45(MCAAD-2)

合成方法同化合物44，得到红色晶体(489mg,83.0％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.98(d,J＝11.6Hz,1H),7.49(d,J＝7.4Hz,2H),7.21(d,J＝15.1Hz,1H),7.09(d,J＝13.7Hz,1H),6.69(d,J＝7.4Hz,2H),3.87(s,3H),3.08(s,6H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ:163.85,156.83,152.52,150.53,130.92,122.65,118.16,115.68,111.93,98.78,52.65,40.09。

46、合成化合物46(MCAAD-3)

合成方法同化合物44，柱分离(二氯甲烷:石油醚＝2:1，体积比)，得到黑色固体(40m_g,67.5％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.91(d,J＝12.1Hz,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,2H),7.08(dd,J＝14.2Hz,10.5Hz,1H),6.71-6.93(m,5H),3.86(s,3H),3.05(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:163.63,155.82,150.97,143.93,131.24,129.50,124.23,122.82,115.31,112.10,100.05,52.75,40.19。

47、合成化合物47(DMMAD-1)

将4-N,N二甲基氨基苯甲醛(545.8mg,3.7mmol)溶于2mL甲醇后加入丙二酸二甲酯(675.0mg,5.1mmol)和20μL哌啶，室温搅拌反应12h。旋蒸溶剂，柱分离(二氯甲烷:乙酸乙酯＝40:1，体积比)得到黄色固体(479mg,49.7％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.67(s,1H),7.32(d,J＝7.7Hz,2H),6.63(d,J＝7.7Hz,2H),3.88(s,3H),3.81(s,3H),3.02(s,6H)。

48、合成化合物48(DMMAD-2)

合成方法同化合物47，得到橘红色固体(130mg,22.5％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.61(d,J＝11.4Hz,1H),7.42(d,J＝7.1Hz,2H),7.16(dd,J＝13.4Hz,13.4Hz,1H),7.01(d,J＝15.0Hz,1H),6.67(d,J＝6.8Hz,2H),3.89(s,3H),3.81(s,3H),3.03(s,6H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:167.16,166.67,149.41,147.68,132.33,130.69,120.88,119.74,114.11,112.83,53.03,52.96,41.06。

49、合成化合物49(DMMAD-3)

合成方法同化合物47，得到深红色固体(13mg,22.4％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.51(d,J＝11.9Hz,1H),7.35(d,J＝8.8Hz,2H),6.92-6.84(m,1H),6.79-6.70(m,3H),6.67(d,J＝8.8Hz,2H),3.87(s,3H),3.80(s,3H),3.01(s,7H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:166.07,165.57,150.98,147.19,147.11,140.31,130.80,128.82,128.73,124.81,52.18,52.11,40.28,40.23。

50、合成中间体50

将3.19g4-羟乙基甲胺基苯甲醛溶于20mL无水二氯甲烷，加入3.3g3,4-二氢吡喃和1.0g吡啶对甲苯磺酸盐(PPTS)，室温搅拌反应24小时，反应结束后旋蒸除去溶剂，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝1:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色油状液体3.8g。产率69.5％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.74(s,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),6.76(d,J＝8.8Hz,2H),4.58(s,1H),3.97-3.41(m,6H),3.12(s,3H),1.91-1.42(m,6H)。

51、合成中间体51

将1.8g中间体50溶于25mL无水四氢呋喃，加入5.8g(1,3二氧环戊基-2-甲基)三苯基溴化膦，然后加入804mg NaH(60％，分散于石蜡)和催化剂量的18-冠-6，室温搅拌反应36小时。将反应用盐酸(1M)淬灭，然后用氨水将反应体系调节为碱性，二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥后旋蒸除去溶剂，最后用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝1:2的展开剂进行柱层析分离，得到黄色固体690mg。产率50.1％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.58(d,J＝7.9Hz,1H),7.45(d,J＝8.9Hz,2H),7.37(d,J＝15.7Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,2H),6.53(dd,J＝15.7,7.9Hz,1H),3.87(t,J＝5.7Hz,2H),3.59(t,J＝5.7Hz,2H),3.09(s,3H),1.74(s,1H)。

52、合成中间体52

合成方法同中间体50，得到黄色油状液体723mg。产率89.2％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(d,J＝15.7Hz,1H),6.77(d,J＝8.1Hz,2H),6.55(dd,J＝15.5,7.7Hz,1H),4.58(s,1H),3.93(s,1H),3.78-3.76(m,1H),3.63(s,3H),3.48-3.46(m,1H),3.09(s,3H),1.91-1.43(m,6H)。

53、合成中间体53

合成方法同中间体51，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝1:1的展开剂进行柱层析分离，得到红色固体422mg。产率72.0％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.55(d,J＝8.1Hz,1H),7.40(d,J＝8.9Hz,2H),7.24(dd,J＝15.0,10.8Hz,1H),6.94(d,J＝15.4Hz,1H),6.81(dd,J＝15.4,10.9Hz,1H),6.76(d,J＝8.8Hz,2H),6.17(dd,J＝15.0,8.1Hz,1H),3.85(t,J＝5.7Hz,2H),3.56(t,J＝5.7Hz,2H),3.06(s,3H)。

54、合成中间体54

将285mg4-羟乙基甲胺基苯甲醛溶于1mL无水二氯甲烷，加入477mg对甲苯磺酰氯和300μL三乙胺，室温搅拌反应10min，旋蒸除去溶剂，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝2:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色固体422mg。产率79.0％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.75(s,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,4H),7.24(d,J＝8.0Hz,2H),6.59(d,J＝8.8Hz,2H),4.21(t,J＝5.7Hz,2H),3.73(t,J＝5.6Hz,2H),3.01(s,3H),2.40(s,3H)。

55、合成中间体55

合成方法同中间体54，得到红色油状液体109mg。产率47.4％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.61(d,J＝7.7Hz,1H),7.69(d,J＝7.7Hz,2H),7.51-7.31(m,3H),7.25(d,J＝7.1Hz,2H),6.59(d,J＝8.6Hz,2H),6.55(dd,J＝15.7,7.5Hz,1H),4.20(t,J＝5.1Hz,2H),3.70(t,J＝5.3Hz,2H),2.99(s,3H),2.40(s,3H)。

56、合成中间体56

合成方法同中间体54，得到红色油状液体120mg。产率55.5％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.3Hz,2H),7.37(d,J＝8.8Hz,2H),7.30-7.21(m,3H),6.93(d,J＝15.4Hz,1H),6.83(dd,J＝15.4,10.6Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,2H),6.21(dd,J＝15.0,8.0Hz,1H),4.22(t,J＝5.8Hz,2H),3.68(t,J＝5.8Hz,2H),2.98(s,3H),2.41(s,3H)。

57、合成中间体57

将中间体54223mg溶于5mL无水四氢呋喃，加入1.9mL四丁基氟化铵(1M的THF溶液)，室温搅拌反应12小时后旋蒸除去溶剂，将剩余油状物用水洗涤，二氯甲烷萃取，有机相经过无水硫酸镁干燥后旋蒸除去，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝2:1的展开剂进行柱层析分离得到黄色固体92mg。产率76.1％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.76(s,1H),7.75(d,J＝8.3Hz,2H),6.74(d,J＝8.4Hz,2H),4.64(dt,J＝46.8,4.8Hz,2H),3.77(dt,J＝24.6,4.6Hz,2H),3.14(s,3H)。

58、合成中间体58

合成方法同中间体57，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝1:1的展开剂进行柱层析分离得到红色固体18mg。产率94.4％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.46(d,J＝8.7Hz,2H),7.37(d,J＝15.7Hz,1H),6.71(d,J＝8.7Hz,2H),6.55(dd,J＝15.6,7.8Hz,1H),4.62(dt,J＝47.1,5.0Hz,2H),3.73(dt,J＝24.4,5.0Hz,2H),3.10(s,3H)。

59、合成中间体59

合成方法同中间体57，用体积比为石油醚:乙酸乙酯＝1:1的展开剂进行柱层析分离得到红色固体18mg。产率94.4％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.57(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(d,J＝8.9Hz,2H),7.30-7.22(m,1H),6.94(d,J＝15.4Hz,1H),6.83(dd,J＝15.2,10.9Hz,1H),6.70(d,J＝8.9Hz,2H),6.19(dd,J＝15.1,8.1Hz,1H),4.62(dt,J＝47.1,5.2Hz,2H),3.71(dt,J＝24.5,5.1Hz,2H),3.09(s,3H)。

60、合成化合物60(OHMNAD-1)

将120mg4-羟乙基甲胺基苯甲醛溶于2mL甲醇后加入过量丙二腈，然后加入3滴碳酸钾甲醇溶液，反应1min，旋干溶剂，用体积比为二氯甲烷:乙酸乙酯＝20的展开剂进行硅胶柱分离得到黄色固体130mg。产率81.4％，结构如下：¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.81(d,J＝9.1Hz,1H),7.46(s,1H),6.77(d,J＝9.2Hz,1H),3.90(t,J＝5.6Hz,2H),3.66(t,J＝5.6Hz,2H),3.18(s,1H)。

61、合成化合物61(OHMNAD-2)

合成方法同化合物60。用二氯甲烷过柱分离得到红色固体18mg。产率64.6％。

62、合成化合物62(OHMNAD-3)

合成方法同化合物60，先用体积比为二氯甲烷:乙酸乙酯＝20的展开剂进行硅胶柱分离，再用HPLC分离(乙腈:水＝3:2，体积比流速4mL/min，保留时间11.4min)，得到黑色固体16.7mg。产率50.0％。

63、合成化合物63(FMNAD-1)

将35mg中间体57溶于1mL甲醇后加入20.9mg丙二腈，然后加入10μL哌啶，室温反应5min后有黄色固体析出，抽滤，用甲醇和石油醚洗涤固体，得到黄色固体23mg。产率53.0％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.82(d,J＝8.8Hz,2H),7.48(s,1H),6.73(d,J＝8.6Hz,2H),4.65(dt,J＝47.0,4.5Hz,2H),3.79(dt,J＝25.1,4.3Hz,2H),3.18(s,3H)。

64、合成化合物64(FMNAD-2)

合成方法同化合物63，用二氯甲烷过柱分离得到红色固体15mg。产率24.6％，结构如下：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.51(d,J＝11.6Hz,1H),7.49(d,J＝9.0Hz,2H),7.18(d,J＝14.9Hz,1H),7.04(dd,J＝14.9,11.6Hz,1H),6.71(d,J＝9.0Hz,2H),4.64(dt,J＝47.0,5.0Hz,2H),3.76(dt,J＝24.8,5.0Hz,2H),3.14(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:160.42,151.96,151.11,132.46,131.57,122.53,117.78,114.74,112.85,112.11,81.42(¹J_CF＝170.0Hz),52.25(²J_CF＝20.9Hz),39.16。

65、合成化合物65(FMNAD-3)

合成方法同化合物63，用HPLC分离，分离条件同化合物62，得到黑色固体20.4mg。产率77.7％。

化合物37-65的合成过程示意图如图2所示。

实施例3 荧光探针分子的效果实验

1.荧光探针分子激发与发射光谱的测定

1.1 实验步骤

(1)配制化合物的二氯甲烷溶液，浓度为10^-3mol/L(1mmol/L)。

(2)化合物有机溶液的配制。取上述溶液30μL，分别用不同的有机溶剂二氯甲烷、四氢呋喃、甲醇和DMSO稀释至3mL，得到10μM的溶液。

(3)化合物PBS溶液的配制。用微量进样器取步骤(1)中的母液6μL，挥发掉二氯甲烷，加入50μL DMSO溶解化合物，然后加入250μL乙醇，补加PBS缓冲溶液至3mL，最后得到化合物2μM的PBS溶液(含10％乙醇)。

(4)用RF-5301PC荧光光谱仪(日本，SHIMADZU公司)和荧光四面通石英比色皿测定与记录化合物的荧光激发与发射光谱。

1.2 实验结果

实验结果如表1所示，每个系列的化合物，随着双键数量的增加，激发与发射波长发生红移，其中化合物26、27、29、30、32、33、35、36、40、43、46、49、62和65在PBS缓冲液中的发射波长达到了650nm，并且有较大的斯托克斯位移(74-209nm)，这些优异的光学性质都使得该类探针较好的运用于活体显像。该光学性质要远远优于AOI987、NIAD-4、BAP-1和THK265。

2.荧光探针分子与Aβ_1-42聚集体的体外结合实验

2.1 实验方法

(1)用上述荧光探针分子激发与发射光谱的测定中描述的方法配制500nM化合物的PBS溶液，加入10μg/mL的Aβ_1-42聚集体(Aβ_1-42聚集体的制备按照已有方法进行)。按照相同的方法，制得化合物与牛血清白蛋白(BSA，10μg/mL)的混合溶液。

(2)将上述溶液在37℃，100r/min的摇床中孵育1.5小时。

(3)按照上述荧光探针分子激发与发射光谱的测定中步骤(4)的方法，对每个荧光探针，在相同的仪器条件下分别测定化合物与Aβ_1-42聚集体的溶液、化合物与BSA的混合溶液、化合物溶液和PBS缓冲溶液的荧光激发与发射光谱。分析数据，计算化合物与Aβ_1-42聚集体结合后的荧光增强倍数。

2.2 实验结果。

实验结果如表1和图3所示，从表1可以看出，近红外探针27、30、33、36、40、43和46在与Aβ_1-42聚集体结合之后，发射波长仍能保持在650nm以上，并且图3显示，与结合之前相比，探针与Aβ_1-42聚集体结合之后荧光强度有极大的增强，这一光学性质远远优于硫黄素-S、CRANAD-2、AOI987、NIAD-4、BAP-1和THK265，为该类探针在生物活体显像中的应用奠定了良好的基础。

3.荧光探针分子的荧光染色实验

3.1.1 小鼠脑切片的荧光染色

(1)分别配制化合物的水溶液(含2％DMSO，20％乙醇)，浓度为1μM；

(2)将两片8μm厚的12个月龄APP C57转基因小鼠脑切片(石蜡)和两片正常小鼠脑切片(石蜡)依次经过15min的二甲苯脱蜡，然后依次经过2×5min的100％的乙醇，2×5min的95％的乙醇，5min的80％的乙醇和5min的70％的乙醇洗涤，流水冲洗10min后，至于10mM的PBS(pH＝7.4)中；

(3)将小鼠脑切片分别浸于待测化合物溶液中10min；

(4)切片经过40％的乙醇洗涤、快速分化后，采用荧光显微镜观察。

3.1.2 AD患者脑切片的荧光染色

步骤及方法同上。

3.2 实验结果

实验结果如图4-图8所示，本发明的探针能清晰染色转基因老鼠脑切片上的Aβ斑块(除MCA-1和DMM-1)，而且，探针DDNPAD-1到-12还能清晰染色AD病人脑部切片上的Aβ斑块，表明本发明提供的探针与Aβ斑块选择性地结合。

4.荧光饱和结合实验

4.1 实验步骤

向硅烷玻璃试管中依次加入100μL化合物的乙醇溶液(终浓度从10^-6M至10^-11M)、100μL Aβ_1-42聚集体(1.6μg)和800μL PBS缓冲液(0.02M，pH＝7.4)，室温震荡(100r/min)孵育1小时。非特异组不加Aβ_1-42聚集体，进行同样的处理。孵育结束后，将溶液转移至黑色96孔板中，每孔加入300μL待测液，用自动酶标仪测量荧光强度，利用GraphPrad Prism5.01分析处理数据，得到解离常数K_d。

4.2 实验结果

实验结果见表1。用该方法对DDNPAD-1到-12进行了活性测定，结果显示，大多数化合物表现出较高活性，说明该类化合物具备作为近红外Aβ探针的一个重要特征。而且R₁、R₂取代基团对活性的影响很大，当R₁、R₂取代基团较大，很难趋于共平面时，化合物对Aβ_1-42聚集体表现出较差的活性。

5.竞争结合实验

5.1 实验步骤：

(1)配制pH＝7.4的BSA溶液(0.1％)；

(2)放射配基[¹²⁵I]IMPY按照已有方法制备；将[¹²⁵I]IMPY配制成60000-100000cpm/100μL的水溶液；

(3)将待测化合物配制成10^-3至10^-9mol/L连续稀释的乙醇溶液；

(4)受体Aβ_1-42蛋白按照已有方法制备。将其稀释成约30nM的水溶液；

(5)玻璃纤维滤膜用含0.1％(体积分数)聚乙烯亚胺的PBS溶液浸泡0.5h；

(6)在12×75mm硼硅玻璃管中分别加入100μL不同浓度待测化合物溶液和100μL[¹²⁵I]IMPY溶液、700μL BSA溶液及100μL Aβ_1-42溶液。用封口膜封好，涡旋；

(7)在37℃恒温水浴中振荡孵育2h；

(8)多头细胞收集器收集反应液，用PBS冲洗三遍，每次3mL；

(9)用γ计数仪测量计数；

(10)利用GraphPrad Prism5.01分析处理数据，得到亲和力常数K_i。

5.2 实验结果

实验结果见表1。用该方法对MAAD、DMDAD、MCAAD和DMMAD类化合物进行了活性测定，结果显示，该类化合物对Aβ_1-42蛋白活性一般，而且碳碳双键的数量对活性具有较大影响，双键越多，共轭体系越大，对Aβ_1-42蛋白表现出越好的活性。

6.正常裸鼠活体显像

6.1 实验步骤

将DDNPAD-2和DDNPAD-3溶液(0.4mg/Kg,10％DMSO，90％丙二醇)50μL由尾静脉注射入正常裸鼠体(BALB/ca，雌性，20g，6周龄)内，在异氟烷的持续麻醉下于不同的时间点进行显像(Xenogen IVIS Spaectrum，激发波长分别为570nm和605nm，发射波长分别为680nm和780nm)，数据用Living4.2.1软件进行分析。

6.2 实验结果

实验结果如图9A和图9B所示。结果显示，DDNPAD-2在正常裸鼠体内进脑量2分钟达到最大值，并且迅速清除；DDNPAD-3在大脑部位15分钟达到最大值，清除速率一般。这两个探针都具有非常好的进脑量，同时具有合适的脑部清除速率，适合于活体显像。

7.AD转基因小鼠活体显像

7.1 实验步骤

将DDNPAD-2溶液(0.4mg/Kg,10％DMSO，90％丙二醇)50μL由尾静脉注射入AD转基因小鼠(Tg-2576APP双转，13月龄)和正常小鼠(C57BL6，13月龄)体内，在异氟烷的持续麻醉下于不同的时间点进行显像(Xenogen IVIS-200，激发波长：570nm，发射波长分别取620nm和680nm)，分析结果。DDNPAD-3进行了相同的实验，用AD转基因小鼠(Tg-2576APP双转，18月龄)和正常小鼠(C57BL6，18月龄)进行实验，激发波长为605nm，发射波长取680nm和780nm。

7.2 实验结果

实验结果如图10所示。结果显示，DDNPAD-2和DDNPAD-3在在脑部的代谢与裸鼠相同，DDNPAD-2在AD转基因小鼠体内的清除速率(2min/30min＝3.5,620nm)明显要慢于正常小鼠(2min/30min＝5.0,620nm)；DDNPAD-3在AD转基因小鼠体内的清除速率(10min/60min＝1.5,680nm)也明显要慢于正常小鼠(10min/60min＝1.9,680nm)，表明探针与小鼠脑内的Aβ斑块结合后滞留在小鼠脑部，使AD小鼠脑部的荧光信号明显高于正常小鼠，适用于活体的荧光成像。

8.AD转基因小鼠体内荧光染色

8.1 实验步骤

将上述活体显像所用的小鼠饲养15天，让探针在其体内彻底代谢。然后将DDNPAD-2和DDNPAD-3溶液(0.4mg/Kg,10％DMSO，90％丙二醇)50μL由尾静脉注射入AD转基因小鼠和正常小鼠体内，20分钟后断颈处死，迅速取出脑组织，用20g/L蔗糖与OCT混合包埋剂(1:1)包埋后置于-20℃冷冻20-30分钟，然后进行切片(20μm)。待切片在室温干燥后，置于荧光显微镜下观察、拍照(滤光片AF546)。相同的切片用硫磺素S进行染色(0.125％，水:乙醇＝1:1)，同样用荧光显微镜观察、拍照(滤光片DAPI)。

8.2 实验结果

最后通过AD转基因小鼠体内荧光染色进一步验证了探针与脑内Aβ斑块的结合。DDNPAD-2和DDNPAD-3都能与小鼠大脑和小脑内的Aβ斑块进行清晰的染色；用硫磺素S进行的对比染色可以很好的与化合物染色的斑块很好的符合。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

表1

Claims

1.一种与Aβ斑块和神经纤维缠结具有高亲和力的化合物，其特征在于，所述化合物的结构通式如式(I)所示：

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，当W为苯并六元芳环时，W的结构通式如式(II)所示，所述化合物的结构通式如式(III)所示：

3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，当W为六元芳环时，两个取代基团位于六元芳环的对位。

4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，W为苯环，且所述化合物的结构通式如式(IV)所示：

5.权利要求1-4任一项所述化合物的制备方法，其特征在于，当所述化合物中不含¹⁸F、¹⁹F和¹¹C时，制备方法为：

(1)通过wittig反应对各类醛进行碳碳双键的延长，取1mmol溶于25mL无水四氢呋喃，加入1.5mmol(1,3-二氧环戊基-2-甲基)三苯基溴化膦，然后加入5mmol NaH和催化剂量的18-冠-6，室温搅拌反应24小时，反应结束后用1M盐酸淬灭，然后用氨水将反应体系调节为碱性，二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥后旋蒸除去溶剂，最后柱层析分离得到中间产物；

(2)通过Knoevenagel缩合反应合成目标化合物：将步骤(1)制备的中间产物0.2mmol溶于5-20mL甲醇后加入0.4mmol丙二腈，然后加入数滴哌啶或碳酸钾的甲醇饱和溶液，摇动反应瓶，室温反应5-15分钟析出固体，抽滤后将所得固体分别用甲醇和石油醚清洗得到如式(I)所示的化合物；

其中，中，W为苯并六元芳环或六元芳环；R₁和R₂独立的表示CH₃、芳基、杂芳基或(CH₂)_n'R₄，其中，n’为2-6，R₄为H、OH或Cl；n为0-5，且碳碳双键均为反式双键。

6.权利要求1-4任一项所述化合物的制备方法，其特征在于，当所述化合物中F为¹⁹F时，制备方法为：

(2)将1mmol式(V)所示化合物溶于10mL无水四氢呋喃中，加入1.5mmol四丁基氟化铵，室温搅拌反应6小时后旋蒸除去溶剂，将剩余油状物用水洗涤，二氯甲烷萃取，有机相经过无水硫酸镁干燥后旋蒸除去，柱层析分离得到结构如式(VI)所示的化合物；

(3)通过Knoevenagel缩合反应合成目标化合物：将步骤(2)制备的如式(VI)所示的化合物0.2mmol溶于5-20mL甲醇后加入0.4mmol丙二腈，然后加入数滴哌啶或碳酸钾的甲醇饱和溶液，摇动反应瓶，室温反应5-15分钟析出固体，抽滤后将所得固体分别用甲醇和石油醚清洗得到如式(VII)所示的化合物；

7.权利要求1-4任一项所述化合物的制备方法，其特征在于，当所述化合物中F为¹⁸F时，制备方法为：

(2)将1-5mg步骤(1)所得如式(VIII)所示的化合物溶于2mL无水乙腈中，将其加入到已除水的活度为10mCi的含K₂₂₂/K₂CO₃的¹⁸F^-的反应管中，在100℃的条件下标记5min，最后过C18反相柱，用水冲洗除去盐和剩余的¹⁸F^-，然后用乙腈淋洗得到最终标记产物，N₂吹干后，用HPLC分离得到结构如式(IX)所示的化合物；

8.权利要求1-4任一项所述化合物的制备方法，其特征在于，当所述化合物中R₁为¹¹CH₃时，制备方法为：

将2mg溶于0.4mL DMSO中，加入5N NaOH溶液10μL，通入¹¹C-CH₃I气体，密封后在95℃反应5分钟；冷却后通过甲醇活化的C18反相柱，再用10mL去离子水冲洗，然后用1mL乙醇淋洗得到标记产物，N₂浓缩所得产物后用HPLC分离纯化得到¹¹C标记的结构如式(X)所示化合物；

9.权利要求1-4任一项所述化合物，或其药用可接受的盐、酯、酰胺或前药在制备用于诊断淀粉样蛋白沉积疾病或神经纤维缠结疾病的显像剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述淀粉样蛋白沉积疾病或神经纤维缠结疾病包括但不限于阿尔茨海默病、克雅氏病、库鲁病、Down氏综合征、II型糖尿病胰岛瘤、淀粉样蛋白多发性神经病、淀粉样蛋白心肌病、全身性老年淀粉样蛋白病、Muckle-Wells综合征、匹克氏病、淀粉样脑血管病。