BRPI0611115A2 - formulações ungueais tópicas - Google Patents

Abstract

A aplicação de um agente redutor, seguido por um agente oxidante, em uma unha, aumenta consideravelmente sua permeabilidade, com isso possibilitando a passagem de fármacos através da unha.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invençãopara "FORMULAÇÕES UNGUEAIS TÓPICAS".

A presente invenção se refere a formulaçõestópicas para aplicação ungueal, as formulações compreendendoum fármaco e um acentuador de penetração.

Onicomicose é o termo genérico para infecçõesfungosas da placa ungueal ou do leito ungueal, sendo responsávelpor até 50% das doenças ungueais. Tanto as unhas dos dedos dasmãos quanto dos pés podem ser afetadas. Na Europa, estima-seque essa doença afete aproximadamente 5% da população, e estáse tornando cada vez mais predominante. Esse aumento se deve,principalmente, ao envelhecimento da população, pois aonicomicose é muito mais comum entre os idosos. Outros fatoresde contribuição incluem calçados de baixa qualidade e o usomaior de centros de lazer comunitários.

Os patógenos mais comuns responsáveis porcausar a onicomicose são os dermatófitos, responsáveis por maisde 90% dos casos. Os mais comuns são Trichophyton rubrum(unhas dos dedos do pé 56% - unhas dos dedos das mãos 36%) eTrichophyton mentagrophytes (unhas dos dedos do pé 19% -unhas dos dedos das mãos 11%) As canidíases são bem menoscomuns, mas, geralmente, estão associadas ao Candida albicans(unhas dos dedos dos pés 10% - 30% unhas dos dedos das mãos).

A segunda doença ungueal relativamentecomum é a psoríase. A psoríase é mais conhecida como umadoença inflamatória da pele, mas a maioria dos pacientes quesofrem de psoríase cutânea também sofrem de psoríase ungueal. Eraro encontrar pacientes que apresentem apenas psoríase ungueal.

A psoríase é mais comum na Europa e na América do Norte, ondeela afeta cerca de 3% da população.

Embora raramente as doenças ungueaisrepresentem um risco à vida do paciente, elas podem causar muitador e deformações. Sintomas comuns incluem alterações na corda unha, geralmente para amarelo/verde ou uma cor mais escura,e acúmulo de detritos sob a unha, causando um odordesagradável. Além disso, a unha pode se tornar mais espessa eescamosa. Somente tais sinais estéticos podem afetar seriamente aqualidade de vida do indivíduo. Além desses sintomas, a doençapode causar muita dor. O espessamento das unhas dos dedos dopé, em particular, pode gerar desconforto nos sapatos e até mesmoao ficar em pé e andar, para alguns indivíduos.

O tratamento eficaz da onicomicose, e de outrasdoenças ungueais, é seriamente dificultado pelo fato de que olocal da infecção encontra-se protegido pela placa ungueal, queconsiste basicamente de queratinas, um grupo fibroso deproteínas. As fibra de queratina são mantidas unidas por proteínasglobulares ricas em cisteína, cujas ligações de dissulfeto atuamcomo uma cola e são responsáveis por grande parte da integridadeda placa ungueal. Qualquer tratamento eficaz deve estar apto asuperar o obstáculo apresentado pela placa ungueal dura e rígida ea administrar uma espécie ativa ao leito ungueal.Os métodos de tratamento conhecidos podemser divididos em três categorias gerais. A primeira envolve aremoção de toda ou parte da unha afetada para expor o local dainfecção. A remoção pode ser cirúrgica ou química. A remoçãoquímica pode envolver a aplicação de uréia à placa unguealdentro de um curativo oclusivo durante um período curto. A uréiaatua desdobrando as proteínas dentro da unha. A unha fica mole ese separa do leito ungueal. Entretanto, a natureza desse tratamentoé traumática e dolorosa, o que o torna pouco popular, sendo usadoapenas como último recurso.

O segundo método geral de tratamento é aadministração oral de um fármaco apropriado. Atualmente, háquatro terapias principais via oral disponíveis para o tratamentoda onicomicose. São elas: Griseofulvina (Grisovin, GSK),Cetoconazol (Nizoral®, Janssen-Cilag), Itraconazol (Sporanox®,Janssen-Cilag) e Terbinafina (Lamisil®, Novartis). Para psoríase,agentes orais como metotrexato, etretinato e ciclosporina podemser eficazes.

A griseofulvina existe desde a década de 50. Emrazão de sua atividade fungistática contra dermatófitos, sãonecessários longos períodos de tratamento (9 a 12 meses parainfecções das unhas dos dedos dos pés). Os índices de cura sãobaixos, e os de recidiva são altos. O Cetoconazol foi o primeirofármaco baseado em imidazol a ser usado para o tratamento daonicomicose na década de 80. No entanto, devido a suahepatotoxicidade, seu uso agora se restringe a infecções das unhasdos dedos das mãos que não responderam a outras terapias. Osagentes antifungicos mais recentes, Itraconazol e Terbinafina, sãomais eficazes no tratamento oral da onicomicose, com índices decura micológica maiores e períodos de tratamento menor do queos observados anteriormente.

O terceiro método envolve a aplicação tópica deuma composição à placa ungueal. As terapias tópicas paraonicomicose, atualmente no mercado, incluem Amorolfina(Loceryl®, Galderma) e Ciclopirox (Penlac®, Dermik).Conforma usados neste documento, os termos "tópico" e"topicamente" indicam a aplicação a uma superfície, tal comopele ou unha, em contraste à aplicação sistêmica, que,normalmente, se dá por ingestão ou injeção.

Os tratamentos tópicos para doenças ungueaissão mais preferidos, em princípio, pois não apresentam osmesmos riscos que os fármacos sistêmicos, como ahepatotoxicidade, e porque causam menos dor e deformação queos tratamentos que envolvem remoção total ou parcial da unha.Entretanto, para serem eficazes, a espécie ativa deve ser capaz depenetrar na placa ungueal em quantidades suficientes, de modoque concentrações eficazes da espécie ativa possam atingir ascamadas mais profundas da placa ungueal, bem como do próprioleito ungueal. Provavelmente, como resultado da penetraçãoinsatisfatória do fármaco, os tratamentos tópicos disponíveis nomomento são relativamente ineficazes e estão associados a longostempos de tratamento e baixos índices de cura.Em comparação ao estrato córneo delgado dapele, a placa ungueal é muito mais espessa. Isso quer dizer que háuma via de difusão muito maior para administração do fármaco aoleito ungueal. Além disso, a unha não age como uma barreiralipoidal, mas sim como um hidrogel concentrado. As ligações dedissulfeto das proteínas ricas em cisteína são em grande parteresponsáveis pela integridade e estrutura da unha, e por suaspropriedades separatórias. Portanto, o desenvolvimento detratamentos tópicos eficazes para doenças ungueais representa umdesafio muito maior que o desenvolvimento de tratamentostópicos para a pele.

Existem vários fatores que influenciam na taxade difusão dos fármacos para dentro e através da placa ungueal.Esses fatores incluem: o tamanho da espécie difusora, ahidrofilia/lipofilia da espécie difusora e a natureza do veículo.Além disso, a penetração pode ser melhorada se reduzirmos demaneira eficaz a barreira através da qual os fármacos devem sedifundir a fim de atingir o local de infecção no leito ungueal. Abarreira pode ser reduzida por meios físicos ou químicos.

A redução física da barreira envolve remoçãoparcial ou total da unha, ou limadura da camada superior da placaungueal. Tais procedimentos são indesejados, pois causam dores edeformações.

Uma abordagem mais aceitável envolve o usode acentuadores químicos que, quando aplicados à unha,interagem com a estrutura da unha e a modificam de modo areduzir a barreira à penetração do fármaco e aumentam a taxa dedifusão da espécie ativa para dentro e através da placa ungueal.Normalmente, usa-se uréia como acentuador de penetraçãoungueal, visto que ela tem a capacidade de remover quimicamenteas placas ungueais. Outras abordagens enfocam as ligações dedissulfeto na unha, e os perturbadores dessas ligações incluemacetilcisteína e mercaptoetanol.

No momento, não há tratamentos tópicosdisponíveis que apresentem resultados satisfatórios no tratamentodas doenças que afetam as camadas inferiores da placa ungueal edo leito ungueal.

A US-A-6.664.292 revela composições tópicaspara o tratamento de distúrbios patológicos da unha. Ascomposições consistem de álcool inferior e um ácido carboxílicoinferior.

A US-A-5.753.256 revela um emplastro para otratamento de micose ungueal. O emplastro inclui um compostoativo e um acentuador de penetração. Os acentuadores depenetração revelados são sulfóxidos, ácido láctico, ácidosalicílico, propilenoglicol, fordamida dimetílica, acetamidadimetílica e dodecilsulfato de sódio.

O Pedido US N2 2003/0235541 revela umaformulação básica aquosa para tratamento tópico de onicomicose.

O Pedido de Patente US N- 2001/0049386revela um método de tratamento da onicomicose, em que umacomposição amolecedora de tecido, compreendendo uréia e umacomposição antifungica, é administrada a uma área infectada aoredor de uma unha, tanto em uma composição como emcomposições separadas, simultaneamente ou nãosimultaneamente.

A WO 99/40955 revela um adesivo matricialsensível à pressão para o tratamento da onicomicose. Comoopção, são incluídos, no adesivo, acentuadores de penetração napele.

A GB-A-2278056 revela ésteres e amidassuperiores de ácido tioglicólico como acentuadores de penetraçãopara uso dérmico, e revela formulações adequadas para otratamento de onicomicose. Entretanto, essas formulações sópodem ser aplicadas periunguealmente. Além disso, essestratamentos ainda precisam da presença sistêmica do fármaco,uma vez que as formulações são para administração viatransdérmica de modo fazendo com que, embora o tratamentopossa ser aplicado localmente, o fármaco ainda entre na correntesangüínea.

A WO 99/49895 revela que o ácido tioglicólicoé capaz de reduzir a queratina na unha, e, portanto, pode ser usadopara melhorar a difusão dos fármacos através da unha até o leitoungueal.

A DE 1000567 revela o uso do ácidotioglicólico em combinação com iodeto de sódio para reduzir aqueratina ungueal, enquanto que a EP 0712633Al simplesmenterevela o uso do ácido tioglicólico como um acentuador depenetração na pele.

A US 2003/0007939 revela uma composiçãofarmacêutica de peróxido de hidrogênio e pelo menos um outroagente dermatológico para intensificar a penetração na pele, nocouro cabeludo, nos cabelos e na unha. O uso de um agenteredutor não é citado.

A EP 0.425.507 revela uma composição para otratamento de condições anormais ou lesionadas do epitélio,inclusive a pele, que compreende uma proteína ativada, um agenteoxidante, incluindo peróxido de hidrogênio, e um agente redutor,incluindo ácido tioglicólico.

Assim, ainda há a necessidade de formulaçõeseficazes, de aplicação tópica, para o tratamento de doençasungueais.

Nos surpreendemos ao descobrir que um agenteredutor, como ácido tioglicólico (AT) e um agente redutor, comoperóxido de hidrogênio, podem ser aplicados à unha um após ooutro para intensificar a penetração do fármaco. Em situaçõescomuns, a combinação dos dois agentes geralmente resulta numareação química extrema. Entretanto, na unha, parece ser segurocombinar esses agentes.

Assim, sob um primeiro aspecto, a presenteinvenção propõe o uso de uma preparação, de preferência líquida,de um agente redutor e de um agente oxidante na produção de ummedicamento para o tratamento de doenças ungueais tratáveis porfármacos, as referidas preparações sendo dispostas separadamentee para administração seqüencial na unha de um paciente,iniciando pelo agente redutor seguido pelo agente oxidante, oreferido fármaco sendo disposto em uma ou na outra preparação,ou, como opção, em uma terceira preparação em que o fármaco éadicional ao agente redutor ou oxidante.

O/um agente redutor e o/um agente oxidantepodem ser escolhidos com base em fármacos conhecidos, comoantifungicos e antipsoriáticos, com propriedades de redução ouoxidação apropriadas, mas, em geral, prefere-se que um fármacoextra seja empregado, como discutido a seguir.

Prefere-se que os agentes redutores e oxidantessejam suficientemente poderosos a tal ponto que uma simplescombinação das duas preparações resulte em uma reação extrema,como uma reação substancialmente exotérmica, ou até mesmoexplosiva. Incrível como pareça, foi comprovado que, quandoaplicados à unha de forma seqüencial (o agente redutor, seguidopelo oxidante), tais combinações podem ser administradas comsegurança sem sinais visíveis imediatos de uma reação extrema.

Compreende-se que certos agentes redutores e oxidantes sãopoderosos demais para serem aplicados a uma unha comsegurança, ou resultam em reações indesejadas, comodescoloração, o que pode ser inaceitável para certos pacientes.Entretanto, contanto que cada agente seja individualmenteaceitável para aplicação a uma unha, as combinações também sãoaceitáveis, mesmo quando uma combinação dos doiscomponentes, na ausência da unha, resultar em uma reaçãoextrema. Os agentes ácido tioglicólico e peróxido de hidrogêniosão um exemplo de tal combinação. Aplicando os critériosanteriores, outros agentes e combinações podem ser escolhidossem dificuldade pelos versados na técnica.

As concentrações adequadas para cada agentesão determinadas de forma independente, e, geralmente, estãoentre 1 e 50% p/v, com uma faixa preferida sendo entre 5 e 30%.Mais preferivelmente, a concentração de cada um é determinadaseparadamente a partir de uma faixa entre 10 e 25%, e emparticular, 5 e 15%.

Em uma concretização preferida, a forçadesejada dos agentes redutores e oxidantes pode ser determinadapor referência aos potenciais de redução deles. Como bem-conhecido na técnica, o potencial de redução de uma espécie emparticular indica a capacidade dessa espécie em aceitar elétrons,fornecendo assim uma indicação de sua capacidade em serreduzida.

O potencial de redução dos agentes oxidantes eredutores de acordo com a presente invenção pode ser medido porqualquer procedimento conhecido pelos versados na técnica. Ummétodo preferido consiste em medir o potencial de redução deuma solução de um agente óm particular, em água ou em umamistura de água e etanol, em relação a um eletrodo deprata/cloreto de prata, em r.t.p. e calibrado contra padrões deoxirredução.De acordo com uma concretização preferida dainvenção, o potencial de redução do agente oxidante, quandomedido de acordo com o protocolo anterior, é, de preferência,menor do que -50 mV, mais preferivelmente, menor do que -100mV, e ainda mais preferivelmente, menor do que -200 mV. Opotencial de redução do agente redutor é, de preferência, maior doque +20 mV, mais preferivelmente, maior do que +50 mV, eainda mais preferivelmente, maior do que +75 mV.

Como demonstrado nos Exemplos anexos, opotencial de redução das soluções contendo qualquer um dosagentes pode ser ajustado alterando-se a concentração do agenteoxidante ou redutor presente na solução, ou ajustando-se o pH dasolução, se desejado.

Assim, em uma concretização preferida, oagente redutor é preparado como uma preparação alcalina, compH entre 7 e 14. Mais preferivelmente, o pH está entre 8 e 13,sendo de particular preferência um pH entre 9 e 12, uma vez queisso geralmente maximiza o potencial de redução de um compostoredutor.

Inversamente, embora a importância do pH doagente oxidante seja em geral menor, prefere-se que o pH estejaentre 1 e 7, ainda mais preferivelmente, entre 2 e 5, uma vez queisso tende a maximizar o potencial de oxidação (potencial deredução -ve), em todo caso, prefere-se que nenhuma daspreparações seja ácida/cáustica a tal ponto que respingosacidentais na pele ocasionem danos inaceitáveis do ponto de vistafarmacêutico e/ou cosmético.

Entretanto, apreciar-se-á que o pH de qualqueruma das formulações pode ser modificado para obter o efeitodesejado, tal como moderar o potencial de redução ou a taxa dereação, de modo que as preferências indicadas acima se aplicamde forma geral quando não existem outras consideraçõesrelevantes quanto ao pH.

Em geral, as formulações dos compostos deredução e oxidação são selecionadas de modo que os potenciaisde redução estejam dentro das faixas indicadas anteriormente, eem geral de modo a maximizar o potencial +ve ou -ve, conformeapropriado. Embora em geral se prefira que o potencial deredução seja otimizado pela concentração, deve-se compreenderque podem ser usadas formulações com baixas concentrações emsituações em que a evaporação do solvente e/ou do co-solventeocasione maiores concentrações in situ.

Concentrações preferidas dos agentes sãodeterminadas sem dificuldade de acordo com as técnicasexemplificadas nos Exemplos anexos. Por exemplo, uma faixa deconcentração preferida de ácido tioglicólico é de 0,1% e até 20%e superior; uréia-H202 pelo menos 5% e até 40% e superior, H2O2pelo menos 20% e até 100%|, e DTT pelo menos 0,05% e até 20%e superior. As preparações formuladas com etanol, ou outrosolvente ou co-solvente volátil, podem ser preparadas comconcentrações menores do agente redutor ou oxidante, uma vezque a concentração do agente aumentará na aplicação à unhaquando a preparação for aplicada nela.

É espantoso que a aplicação dos doiscomponentes pareça ser sinérgica, pois não há razão para sesuspeitar que a permeabilidade aumentada gerada por um doscomponentes seja suficientemente diferente a ponto de ser capaz acomplementar a outra. De fato, esse modo de ação não é implícitona técnica, pois a aplicação do agente oxidante primeirogeralmente não resulta em intensificação apreciável dapermeabilidade ungueal superior à da mais eficaz dos doiscomponentes. Entretanto, o uso do agente redutor em primeirolugar parece levar a uma sinergia tal que o efeito é geralmentemaior do que o efeito combinado de ambos os agentes. Esse efeitopode ser, mas não é sempre, refletido em uma medição daabsorção líquida aumentada pela unha (infra).

Os agentes redutores preferidos incluemtioglicolato de amônio, tioglicolato de cálcio, tioglicolato desódio, ácido tioglicólico (TA) e ditiotreitol (DTT), ácidoascórbico, hidroquinona, mercaptoetanol, glutationa, L-cisteína,taurina, ácido aminometanesulfônico, ácido cistéico, ácidocisteinesulfínico, ácido etanedisulfônico, ácido etanesulfônico,homotaurina, hipotaurina, ácido isetiônico, ácidomercaptoetanesulfônico, N-metiltaurina (MTAU), bem comoderivados simples desses.

Entende-se por "derivado simples" um sal, ésterou amida do composto. Prefere-se, em especial, derivados simplesdo ácido tioglicólico. Qualquer componente alquila adicional é,de preferência, uma alquila inferior tendo 1 a 5 átomos decarbono no total, mais preferivelmente tendo 1 a 4 átomos decarbono, ainda mais preferivelmente, 1, 2 ou 3 átomos decarbono.

De preferência, o agente redutor é ácidotioglicólico ou um derivado dele, e, como tal, o agente redutor édesignado em geral neste documento como o próprio, embora secompreenda que qualquer referência também inclui outros agentesredutores, exceto o contrário esteja claro ou evidente.

O agente oxidante pode ser qualquer um queseja adequado, inclusive uréia, peróxido de hidrogênio, persulfatode potássio, tiouracil, ácido p-oumérico, ácido glicólico, ácidooxálico, cineol, peroxidona, dióxido de cloro, dicromato deamônio, nitrato de amônio, perclorato de amônio, permanganatode amônio, bromato de bário, clorato de bário, peróxido de bário,clorato de cádmio, clorato de cálcio, clorato de bário, cromato decálcio, perclorato de cálcio, nitrato de cromo, nitrato de cobalto,óxido de prata, ácido periódico e dicromato de piridina. Peróxidode hidrogênio é preferido, e um composto de adição de peróxidode hidrogênio e uréia é mais preferido.

As preparações podem ser administradasimediatamente uma após a outra, mas é preferível aplicar aspreparações na ordem da preparação redutora seguida pelapreparação oxidante, e permitir que a primeira preparação reajacom a unha durante um período de tempo curto antes de aplicar apreparação oxidante. Um tempo adequado seria entre 10 segundose 10 minutos, mais preferivelmente entre 1 minuto e 5 minutos.Embora se aceitem esses períodos de tempo curtos, foi descobertoque podem transcorrer períodos de tempo maiores entre asaplicações, e um período de tempo preferido entre a aplicação doagente redutor e oxidante seria entre 15 e 30 horas, maispreferivelmente 20 a 26 horas, com períodos similares entre asaplicações subseqüentes. Quando tais períodos de tempo maioresforem empregados, é preferível que o fármaco esteja presente emuma ou em ambas as preparações, ou seja administrado em umaformulação separada, mas junto com uma ou ambas aspreparações.

O fármaco pode estar presente em uma ou emambas as preparações, ou pode ser preparado separadamente paraadministração antes, durante ou após a aplicação dos agentes deoxidação e redução. Em uma concretização, o agente redutor éaplicado à unha, seguido pelo fármaco e então pelo agenteoxidante, de modo que o fármaco já esteja no local no caso ainteração entre os agentes de oxidação e redução resulte emacentuação da penetração. Em geral, prefere-se que o fármacoesteja presente em uma separação preparada, principalmente noscasos em que se deseja evitar a exposição prolongada a um dosagentes de oxidação e de redução, ou a ambos.

As formulações da presente invenção são paraaplicação ungueal, e podem ser formuladas de qualquer maneiraprópria para aplicação a um úngüe ou unha.As preparações são, de preferência, aquosas,como opção contendo um co-solvente, tal como etanol ouacetona. Embora o co-solvente possa não seja necessário para osagentes de oxidação ou redução, ele pode ser necessário para asolubilização do fármaco.

Em geral, as formulações ungueais da presenteinvenção podem ser na forma de cremes, pomadas, géis, soluções,loções, espumas, musses, líquidos pulverizados, pastas ou laças,que se destinam à aplicação direta na unha. Entretanto, asformulações da invenção também podem ser na forma desoluções, pós ou pré-misturas, por exemplo. Uma solução, porexemplo, pode ser aplicada a um curativo, tal como um emplastro,e depois unida à unha de modo a atingir o local com maisprecisão. Como alternativa, um curativo pode ser aplicado à unha,em seguida aplicando a solução ao curativo. Dessa forma, porexemplo, pode ser possível restringir o curativo inteiramente àsuperfície da unha, ou o curativo pode ser construído de tal formaque o contato entre a solução e as superfícies diferentes da unhaou do local a ser tratado seja inibido ou impedido, seja pelaconstrução do curativo, seja pela introdução de meiosseparatórios. Meios separatórios adequados podem incluir certosadesivos ou resinas, ou outros tratamentos adequados. Quandotais curativos são usados, é preferível usar curativos separadospara cada um dos agentes de redução e oxidação de modo a evitarque ocorra uma reação possivelmente explosiva.Quando um curativo é usado, também pode serútil aplicar um curativo de oclusão adicional ao curativo, uma vezque a solução ou outra preparação de fármaco foi aplicado aocurativo absortivo, com o objetivo de impedir a evaporação doveículo, quando isto for indesejado.

Um adesivo, de construção similar a um adesivotransdérmico, mas preferivelmente um adesivo de reservatório,pode ser usado para fornecer um agente, após a aplicação dooutro, por meio de uma tinta ou laca, por exemplo. De modosimilar, pode-se aplicar um pó, polvilhando-o sobre umasuperfície laqueada ou pintada, por exemplo.

Outros pós e pré-misturas também podem sercompostos, conforme desejado, em soluções ou preparações paraaplicação na unha, por exemplo.

Compreende-se que as referências a "unha"contidas neste documento incluem referências a qualquersuperfície ungueal apropriada. Nos humanos, isso na verdade sóabrangerá unhas dos dedos dos pés e das mãos, mas contempla-sequalquer superfície ungueal.

Veículos adequados para os agentes geralmenteincluem água e álcoois inferiores, inclusive álcoois monoídricos epoliídricos. Outros solventes também podem ser empregados, talcomo acetona, e, em geral, os versados na técnica assimilarãofacilmente quais solvente são adequados para aplicação à unha.

Além do veículo, podem ser usados outrosveículos, como agentes de volume, por exemplo. Embora sejapossível empregar água para formar o volume da formulação, foiconstatado que o propilenoglicol está geralmente associado aníveis mais elevados de penetração ungueal, e em geral é umagente de volume mais preferido.

As preparações podem ser preparações aquosassimples, ou podem conter outros ingredientes, como espessantes,acentuadores de estabilização, agentes de modificação de pH,inibidores de odor e corantes, por exemplo. O uso de inibidores deodor é particularmente preferido quando o medicamento destina-se ao tratamento de uma doença que causa mau cheiro na unha, oque é comum em tais doenças, ou quando se deseja ocultar o odordo próprio medicamento. De forma similar, podem ser incluídoscorantes quando a doença sendo tratada resultar em descoloraçãoindesejada da unha. Em uma concretização, as preparações sãopreparadas como vernizes que secam in situ.

Em outra concretização, os agentes de reduçãoe/ou oxidação, em especial o ácido tioglicólico, podem serconjugados com o fármaco a ser administrado.

Entende-se pelo termo "fármaco" qualqueringrediente ativo da formulação da invenção, capaz de exercer umefeito terapêutico ao ser aplicado a uma unha. O efeito terapêuticosó pode ser percebido quando associado ao acentuador depenetração da invenção.

Os fármacos adequados para uso nasformulações da invenção podem ser para qualquer doençaassociada à úngüe do paciente, mas geralmente podem serdivididos na categoria de infecção fungosa ou doença relacionadaà psoríase. O fármaco pode estar em qualquer forma adequada,podendo ser uma substância sólida, um líquido ou um gás,presente em uma preparação a ser administrada à unha. Gasesadequados incluem, por exemplo, NO.

Fármacos adequados para uso nas formulaçõesda presente invenção incluem os fármacos antifungicos:amorolfina, miconazol, cetoconazol, itraconazol, fluconazol,econazol, ciclopirox, oxiconazol, clotrimazol, terbinafina,naftifina, anfotericina, greseofulvina, voriconazol, flucitosina,nistatina e seus sais e ésteres aceitáveis do ponto de vistafarmacêutico. Terbinafina é particularmente preferida.

Fármacos adequados para uso no caso dapsoríase incluem corticóides, 5-fluorouracila, metotrexato,etretinato, ciclosporina, tacrolimus e seus derivados.

A quantidade do fármaco usada não é crucialpara a invenção, e tudo que é necessário é que o fármaco possaser administrado em quantidade eficaz para o tratamento ouprofilaxia de uma doença ungueal. A quantidade do fármaco podedepender da idade, sexo e/ou peso do paciente, mas geralmente éfornecida como uma preparação conservada em estoque paraaplicação à unha, e a concentração do fármaco em geraldependerá da doença a ser tratada, como o fator principaldeterminante.

A quantidade do fármaco pode ser suficientepara eliminar a doença após um tratamento, mas geralmenteocorre que o tratamento será continuado para um número deaplicações, fazendo com que a quantidade de fármaco seja sobmedida para tratamento gradual de acordo com o número deciclos pretendido.

No tratamento cíclico, a unha infectada é tratadaciclicamente com agente redutor e agente oxidante. A melhorestratégia é tratar com o agente redutor no primeiro dia, depoiscom o agente oxidante no segundo dia, com o fármaco sendoadministrado de preferência com o agente oxidante ou logo apósele, em seguida repetindo o processo no dia 3, iniciandonovamente com a aplicação do agente redutor. Como opção, podehaver um intervalo entre os tratamentos, de modo que otratamento repetido inicie novamente ao quarto dia, ao quinto dia,ao sexto dia ou ao sétimo dia, por exemplo. O intervalo pode sermaior, caso seja preferido, mas de preferência, é menor do queum mês, e mais preferivelmente, menor do que 2 semanas.

Contempla-se que o ciclo pode compreenderduas ou mais aplicações de qualquer uma das preparações. Porexemplo, o agente redutor pode ser aplicado todos os dias durantedois ou três dias consecutivos, por exemplo, ou em váriasocasiões durante um dia, com o agente oxidante e o fármacosendo aplicados no dia seguinte ao último tratamento com oagente redutor, ou um dia após o primeiro tratamento, que podeser logo após o último tratamento com o agente redutor. O agenteredutor pode ser aplicado em dias sucessivos, ou em váriasocasiões durante um dia, e em geral se prefere que o fármaco sejaaplicado a cada tratamento com o agente oxidante, ou logo após.

As concentrações adequadas de fármaco naspreparações da invenção dependerão de fatores como a doença aser tratada, e o fármaco a ser usado, em todo caso, será de fácilassimilação para os versados na técnica. Para orientar-se,concentrações adequadas podem estar na faixa de 0,1% a 50%w/w, mais preferivelmente 1% a 20% w/w, em particular 1% a10% w/w, embora concentrações acima e abaixo dessas faixassejam contempladas pela presente invenção.

As formulações da presente invenção tambémpodem compreender outros fármacos e/ou acentuadores depenetração. Exemplos adequados de vários fármacos foramapresentados anteriormente. Outros acentuadores de penetraçãoincluem ácido láctico, DMSO, ácido salicílico e ácido oléico, dosquais prefere-se, em especial, ácido láctico, ácido salicílico eácido oléico.

A concentração do acentuador pode serqualquer uma que seja eficaz para permitir maior penetração daplaca ungueal do que uma formulação similar sem acentuador.

Em geral, a quantidade do acentuador irá variar entre cerca de0,1% w/w e cerca de 25% w/w, com quantidades entre 1% e 20, emais preferivelmente, 3% e 15% w/w, geralmente propiciandobons resultados.

A presente invenção também fornece ummétodo para o tratamento de uma infecção ungueal de uma unhaem um paciente que precisa desse tratamento, compreendendoaplicar uma preparação de um agente redutor à referida unha,seguido pela aplicação de uma preparação de um agente oxidantenela, a referida doença ungueal sendo tratável por um fármaco, oreferido fármaco sendo disposto em uma das referidaspreparações ou em uma terceira preparação.

Contempla-se que o método acima compreende,de preferência, quaisquer aspectos, como especificados acima, emrelação ao uso, e/ou conforme definidos em qualquer uma dasreivindicações anexas 2 à 43.

A presente invenção também fornece um kitcompreendendo preparações, conforme definidas acima, para otratamento de uma infecção ungueal, e de preferência, conformedefinido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43.

De agora em diante, a presente invenção éilustrada em detalhes pelos Exemplos não limitantes a seguir.

EXEMPLOS:

EXEMPLOS 1 a 4: Materiais e Métodos:

Nos Exemplos 1 a 4, foram desenvolvidos doismodelos para testar a permeabilidade da unha. O primeiro modeloseguiu um regime similar ao da WO 99/49895, em que a unha foitratada com um acentuador de penetração dissolvido em umsolvente e a % de aumento do peso da unha foi determinada.Supõe-se que os acentuadores de penetração sejamqueratinolíticos, e, assim, rompam as ligações de enxofre na unha,dessa fazendo-a amolecer e absorver mais líquido.O segundo modelo na verdade mede apermeabilidade da unha. Neste novo modelo, um compostoradioativo, 14-C-manitol, foi usado para acompanhar o progressode um agente através da unha após a aplicação dos acentuadoresde penetração. Uma nova célula de difusão foi usada para medir adifusão do manitol.

Os exemplos 1 a 4 usam os instrumentos,materiais e métodos detalhados a seguir.

Materiais: Tabela 1: Fornecedores, grau edetalhes de lote dos materiais usados no estudo.

<table>table see original document page 24</column></row><table><table>table see original document page 25</column></row><table>Acentuadores de Penetração:

Uma vez que cada um dos acentuadores depenetração demonstrou diferentes solubilidades, utilizou-se água,ou uma mistura de etanol e água, como solventes, de acordo coma Tabela 2 abaixo.

Tabela 2: Solventes usados para osacentuadores de penetração.

<table>table see original document page 26</column></row><table>

Métodos:

Estudos de inchação ungueal:

Lavagem e preparação de aparas de unha:

Aparas de unha de aproximadamente 2 mm decomprimento foram obtidas de voluntários humanos saudáveis(com consentimento) usando cortadores de unha. Elas foramlavadas usando etanol a 70% (v/v) por agitação em vórtex em umfrasco de vidro de 28 ml usando um WhirliMixer™ (Fison's, UK)à velocidade máxima durante 1 min. Depois, as aparas foramenxaguadas em água agitando em vórtex vigorosamente outra vezdurante 1 minuto. O procedimento foi repetido três vezes. Emseguida, as unhas foram colocadas em uma cápsula de Petri abertae deixadas secar em um forno de temperatura controlada a 30 +2°C durante 24 h. Após a secagem no forno, as unhas forampesadas e colocadas em poços individuais de uma placa paramicrobiologia de 23 poços (Costar®, UK). Em todos osexperimentos, usaram-se 10 conjuntos de aparas de unha.

Aplicação dos acentuadores de penetração nas aparas de unha:

As aparas de unha lavadas dos poços da placapara microbiologia foram imersas em 1 ml da solução deacentuador de penetração durante aproximadamente 20 horas. Asolução em excesso foi removida de todas as aparas de unhasecando-as delicadamente usando papéis-toalha. As aparas deunha foram pesadas, e os pesos foram anotados. Caso um segundoacentuador de penetração tivesse sido usado, o mesmoprocedimento seria repetido para o segundo composto e osegundo peso seria anotado. De modo a estimar o efeito dosolvente separadamente, um conjunto de unhas-controle foitestado usando uma metodologia idêntica, com a diferença de sersimplesmente imergido no solvente sem a adição do acentuadorde penetração.

Estudos sobre a penetração ungueal do manitol:Preparação dos acentuadores de penetraçãoOs acentuadores de penetração única foramcompostos no solvente apropriado e reforçados com 14C manitol(10 μΐ do manitol 14C conservado em estoque). Quando mais deum acentuador de penetração foi aplicado às unhas, apenas oúltimo acentuador de penetração foi reforçado com 14C manitolantes da aplicação na unha. Como controle, utilizou-se 14Cmanitol sem acentuador de penetração.

Preparação da célula de difusão ungueal:

As células de difusão ungueal pré-calibradasforam montadas com unhas humanas de espessura completa. Ofluido receptor, que consistia de uma mistura de 20% deetanol/água, foi colocado no poço receptor até a marca gravada nobraço lateral. Um seguidor magnético foi inserido, e depois ascélulas foram colocadas em um agitador magnético em banho-maria mantido a 32°C. Verificou-se se havia vazamento e bolhasde ar nas células. Após um período de equilíbrio de 30 minutos,uma amostra de Iml foi obtida do braço lateral de amostragem ecolocada em um frasco de cintilação, seguido por 4 ml decoquetel de cintilação, e testada no contador de cintilação usandoo modo duplo preparado (3H/14C). Isso foi feito para garantir quenenhuma célula continha radioatividade residual, e essas leiturastambém foram tidas como informações de pano de fundo paracada célula. As células foram então alimentadas até a marcagravada com líquido receptor fresco, pré-equilibrado a 32°C.

Normalização da unha usando água 3H:Após obter a leitura de fundo (descrita na seçãoacima), 50 μΐ de água 3H (ca. 18000 dpm) foram colocados sobrea unha na célula de difusão ungueal montada, usando uma pipetade Gilson pré-calibrada. Depois as células foram absorvidasimediatamente com parafilm. Após 20 horas, uma amostra de 1ml do líquido receptor foi removida do braço lateral usando umaseringa de 1 ml e colocada em um frasco de cintilação, seguidopor 4 ml de coquetel de cintilação, e testada no contador decintilação usando o modo duplo preparado (3H/14C). Esse valorfoi usado para normalizar cada unha e, se os valores deradioatividade fossem considerados muito altos, então as célulasseriam rejeitadas devido a vazamentos. Um teste-Q de Dixon foiusado para determinada se alguma das células estava vazando.

Em seguida, a água 3H foi seca usando um papel-toalha e a célulafoi completada, até a marca gravada, com líquido receptor fresco,pré-equilibrado a 32°C.

Ao testar um acentuador de penetração único,uma alíquota de 50 μΐ de cada acentuador de penetração (pré-reforçado com 14C manitol conforme descrito acima) foi pipetadausando uma pipeta Gilson pré-calibrada sobre a superfície daunha humana com espessura total. Cada célula foi então absorvidacom parafilm. Os pontos de tempo de amostragem foram obtidosem ca. 20 h, 55 h, 68h, 92h e 116 h. Após cada ponto de tempo,uma amostra de Iml foi obtida do braço lateral e colocada em umfrasco de cintilação, seguido por 4 ml de coquetel de cintilação, etestada no contador de cintilação usando o modo duplo preparado(3H/14C). As células foram então alimentadas até a marca gravadacom líquido receptor fresco, pré-equilibrado a 32°C. Cadaacentuador de penetração (e controles) foi testado no total de n=5-6 vezes usando o procedimento resumido acima.

Ao usar mais de um acentuador de penetração,50 μL do acentuador de penetração sem manitol radiotivo forampipetados usando uma pipeta Gilson pré-calibrada sobre asuperfície da unha humana de espessura total, em seguidaabsorvendo cada célula com parafilm. Após 20 horas, oacentuador de pré-penetração foi seco com papéis-toalha e asuperfície da unha foi lavada com água deionizada (3x1 ml). Osegundo acentuador de penetração, pré-reforçado com 14Cmanitol, foi então aplicado, seguindo-se com o protocolo aplicadoao acentuador de penetração único descrito acima.

EXEMPLO 1: Uso de Acentuadores Únicosde Penetração Ungueal

Estudos de inchação ungueal:

A Figura 1 ilustra a alteração na unha após 20 h,quando água (controle), cisteína, tioglicolato de amônio (AmTA),ácido tioglicólico (TA), ácido glicólico (GA), peróxido dehidrogênio (H2O2), peróxido de uréia-hidrogênio (Uréia-H202) e1,4-ditio-DL-treitol (DTT) foram adicionados às aparas de unha(média ± desvio padrão, n=10). Os valores são expressos comouma porcentagem do peso original da unha. Embora tanto águacomo etanol a 20% em água tenham sido usados como soluções-controle, não houve diferença significativa (p > 0,05, ANOVA)entre os dois. Sendo assim, apenas o controle com água éilustrado na Figura 1.

Todos dentre o ácido tioglicólico (TA), ácidoglicólico (GA), peróxido de hidrogênio (H2O2), peróxido de uréia-hidrogênio (uréia-H202), ditiotreitol (DTT) e tioglicolato deamônio (AmTA) aumentaram significativamente (p < 0,05,ANO VA) o peso das aparas de unha após 20 horas, se comparadoao controle. O aumento no peso da unha, provocado por seis dossete acentuadores de penetração testados, leva-nos a crer que asunhas estão absorvendo mais do líquido aplicado. Também foipercebida a alteração física na aparência das unhas tratadas. Asunhas tratadas com TA, GA, H2O2 e AmTa ficaram mais molesdo que os controles, além de uma cor mais clara.

A cisteína não aumentou de forma significativa(p > 0,05, ANOVA) o peso da unha. Assim, a penetração dolíquido nas unhas tratadas com cisteína não foi melhorada.

Estudos sobre a penetração do manitol:

A Figura 2 ilustra a penetração de 14C manitolatravés de toda a espessura da unha humana, usando diferentesacentuadores de penetração únicos (n=6 ± SD, DTT n=5 ± SD). OTA saturado (50%) foi o melhor acentuador de penetração demanitol nesses experimentos. Entretanto, quando o TA é reduzidoa uma concentração de 5%, seu efeito de melhoramento dapenetração cai abaixo ao do DTT. O H2O2 não ésignificativamente diferente ao TA a 5% (p < 0,05, ANOVA) emtermos de difusão de manitol após 96 horas.EXEMPLO 2: Uso de Acentuadores Duplosde Penetração Ungueal

Estudos de inchação ungueal:

O maior aumento no peso da unha com aaplicação de um acentuador único de penetração foi de 71% paraTA a 5% (apresentado na Figura 1). Entretanto, a adição de doisacentuadores de penetração, um após o outro, levou a umaumento de até 150% no peso da unha, conforme ilustrado naFigura 3. A Figura 3 ilustra a porcentagem de ganho de peso dasunhas, quando tratadas com 2 acentuadores de penetração em 2estágios separados (> indica seguido por) em ambas as ordens deaplicação (média ± desvio padrão, n=10).

A adição de TA, seguido por H2O2 ou uréia-H2O2, aumentou significativamente o peso da unha (p < 0,05,ANOVA), se comparado ao TA separadamente. Entretanto,quando H2O2 ou uréia-H202 foi aplicado antes de TA, não houveaumento significativo no peso da unha (p > 0,05, ANOVA) secomparado ao TA separadamente. Em cada um dos experimentoscom acentuadores duplos de penetração, detalhados na Figura 3,observou-se uma tendência similar. A adição do agente redutor(por exemplo, TA, GA, DTT) antes do agente oxidante (porexemplo, H2O2 ou uréia-H202) melhorou significativamente oaumento de peso das unhas, se comparado à aplicação dos agentesna ordem inversa, isto é, agentes oxidantes seguidos pelos agentesredutores. A aplicação do TA, seguido por uréia-H202, apresentouo maior aumento no peso, ao passo que o menor de todos foiuréia-H202 seguido por DTT.

EXEMPLO 3: Efeito da Concentração doAcentuador de Penetração

Estudos de inchação ungueal:

A Figura 4 ilustra a porcentagem de ganho depeso das unhas após um período de 20 horas em concentraçõesvariáveis de TA (média ± desvio padrão, n=10). No caso de unhastratadas com TA, o aumento da concentração do acentuador depenetração levou ao aumento do ganho de peso. O ganho de pesomais significativo foi observado nas unhas tratadas com TA a 20%.

A Figura 5 ilustra a porcentagem de ganho depeso das unhas após um período de 20 horas em concentraçõesvariáveis de Uréia-H202. As porcentagens ilustradas no eixo χ sãoa concentração total de H2O2 presente (média ± desvio padrão, η= 10). A concentração de uréia-H202 aplicado às unhas tambéminfluenciou o ganho de peso, e, conseqüentemente, apermeabilidade da unha. A aplicação de uréia-H202 a 20% foisignificativamente melhor do que a 10% em termos de ganho depeso da unha. Entretanto, as unhas tratadas com concentraçõescrescentes entre 20% e 35% de H2O2 não apresentaram diferençasignificativa (p > 0,05, ANOVA) em termos de aumento de peso.

A Figura 6 ilustra a porcentagem de ganho depeso das unhas após um período de 20 horas em concentraçõesvariáveis de DTT (média ± desvio padrão, n=10). As unhastratadas com DTT a 1% apresentaram um aumento de pesosignificativo (p > 0,05, ANO VA) se comparado às unhas tratadascom DTT a 5%, mas os aumentos adicionais de concentraçãoentre 5 e 10% não tiveram efeito significativo (p < 0,05,ANOVA). O maior efeito sobre o peso da unha é observado comuma concentração de DTT de 20%, quase duas vezes maior doque o efeito observado com uma concentração de 10%.

EXEMPLO 4: Efeito do pH sobre os Acentuadores de Penetração

Estudos de inehação ungueal:

A Figura 7 ilustra a porcentagem de ganho depeso das unhas após um período de 20 horas em vários sais de TA(todos à concentração de 5%). Os números acima das barrasindicam o pH de cada solução antes da aplicação (média ± desviopadrão, n=10). Independente do tipo de sal de tioglicolatoempregado como acentuador de penetração, o aumento no peso daunha foi significativamente maior (p > 0,05, ANOVA) do que ocontrole. O tioglicolato de cálcio provocou o maior aumento nopeso da unha, e, portanto, facilitou a penetração da maiorquantidade de líquido na unha. O tipo de sal influencioudiretamente o pH do líquido aplicado à unha. TA foi aplicadocomo solução, com pH de 2,12, ao passo que o tioglicolato decálcio tinha um pH de 11,43. Assim, apesar de todos oscompostos terem sido eficazes no melhoramento da absorçãolíquida pela unha, um pH > 7,1 pareceu ser favorável em termosde aumento do peso da unha.EXEMPLOS 5 a 10:

Materiais e Métodos:

Os exemplos 5 a 10 usam os materiais emétodos detalhados a seguir.

Medições de oxirredução:

Um medidor de oxirredução com análise de íons(Metrohm, UK) foi usado para medir os potenciais de redução daspreparações aquosas de 0,5 M dos compostos em águadeionizada, em relação a um eletrodo de referência estável, depotencial conhecido (Ag/AgCl) em r.t.p.

Estudos sobre a difusão da terbinafina:

Amostras de unha humana (espessura total) deca. de 3 mm de diâmetro foram posicionadas entre as duasmetades da célula de difusão ChubTur™ especialmente projetadae fechadas juntas. O compartimento receptor foi abastecido comum sistema tampão previamente sonicado para assegurar ascondições de absorção, e as células foram fixas em um suporte deperspex montado em um agitador magnético em banho-mariamantido a 32°C. O conteúdo da câmara receptora foi agitadocontinuamente por pequenos seguidores magnéticos revestidoscom PTFE, acionados por um agitador magnético submersível.Uma quantidade conhecida de formulação / solução de fármacofoi aplicada à superfície da unha (dose infinita) em intervalos detempo regulares, amostras de tampão foram obtidas docompartimento receptor, substituídas por meio receptor fresco eexaminadas quanto ao teor de fármaco usando HPLC.Testes microbiológicos com TurChub®:

Uma placa de ágar-dextrose Sabouraud foisemeada com Trichophyton rubrum pela remoção delicada demicélio e esporos usando uma zaragatoa estéril a partir de umacultura em meio inclinado, e transferindo-os para a superfície doágar. A placa foi incubada a 25°C durante 7 dias. Os esporosbrancos da superfície da placa foram removidos por enxágüe comsolução de Ringer (20 ml). A suspensão de esporos foi filtradaatravés de uma gaze estéril (Smith+Nephew, Propax, 7,5 cm χ 7,5cm, chumaço de faze de 8 camadas, BP Tipo 13) para remover omicélio. A contagem viável da suspensão de esporos foi estimadae a contagem de esporos foi ajustada para aproximadamente 1 χIO7 cíu/ml, diluindo ou concentrando os esporoscorrespondentemente em um volume final de 20 ml.

Inicialmente as aparas de unha distai foramobtidas de unhas dos dedos do pé de voluntários, que cresceramaté o tamanho mínimo de 3 mm. Foi exigido que todos osvoluntários não tivessem usado esmalte para unhas ou polido asunhas dos dedos do pé nos últimos 6 meses, além de nãoapresentarem sinais de doença nas unhas nos últimos 6 meses. Osvoluntários foram solicitados a remover as partes distais da unhausando tesouras ou cortadores de unha comuns. Não foramsolicitados procedimentos específicos, como remoção estéril oulimpeza das unhas. As aparas de unha foram então colocadas emum recipiente apropriado, por exemplo, saco plástico, frasco,envelope, etc., antes de serem colocadas em um minifrasco de 8ml por doador/doação e rotuladas com quaisquer detalhesfornecidos. As amostras foram armazenadas em um refrigeradoraté serem usadas.

Usando tesouras, as aparas de unha foram entãocortadas em pedaços, de no mínimo 3 mm por 3 mm. O númerode pedaços que pode ser obtido para cada unha dependeinteiramente do tamanho da amostra original, de modo que umaunha pequena do dedo do pé só produz 1 ou 2 pedaços, ao passoque uma unha maior do dedo do pé pode produzir entre 3 e 5pedaços. As aparas de unha foram imersas em etanol a 70% emsolução de água e misturadas em vórtex durante um minuto. Asolução de etanol foi então decantada e substituída por umasolução de etanol fresco a 70% e misturada em vórtex por maisum minuto. Em seguida, a solução de etanol foi decantada esubstituída pela solução de Ringer, misturada em vórtex duranteum minuto e decantada e substituída por solução fresca de Ringer.

Esse processo de lavagem com solução de Ringer foi realizado nototal de três vezes, substituindo a solução de lavagem em cadafase. Uma vez que o processo de lavagem foi concluído, as aparasde unha foram colocadas em uma cápsula de Petri estéril semtampa e secas por exposição ao ar sob uma câmara de fluxolaminar durante 30 minutos à temperatura ambiente. Assim que asaparas de unha foram secas, elas foram colocadas em novosminifrascos de 8 ml (garrafa separada por doador, por lote).

Também foi medida a espessura das unhas usando um par decompassos de calibre.As aparas distais de unha (unha com espessuratotal) foram então tratadas em uma célula de difusão com osistema acentuador de penetração durante 20 horas com ácidotioglicólico, seguido por 20 horas com uréia H2O2.

Inicialmente, as células TurChub® (seçõesinferior e superior) foram esterilizadas em um autoclave a 121 0Cdurante 15 minutos. A junta ungueal também foi esterilizada emetanol a 100% e seca ao ar sob uma câmara de fluxo laminar antesda montagem das seções de unha/membrana. As unhas e a juntatratadas com o acentuador de penetração foram então carregadosna metade inferior da célula TurChub® com o lado dorsal paracima. Um volume pré-determinado (calibrado para cada célula) deágar SDA derretido (mantido a 56°C) foi então carregado naseção inferior da célula. Após o ágar ter se consolidado, umvolume fixo (50 μΐ) do organismo-teste T. rubrum em solução deRinger foi aplicado sobre a superfície do ágar. A suspensão doorganismo foi então estimulada a se espalhar uniformementesobre a superfície do ágar balançando delicadamente a célula deum lado para o outro. O líquido em excesso da suspensão doorganismo foi removido da célula usando uma seringa e umaagulha. Assim que o organismo foi aplicado à célula, a unha foimontada e a seção afunilada superior da célula foi adicionada efixada na posição correta com molas. As células são projetadas demodo que o líquido em excesso (por exemplo, da condensação)não contamine o ágar, mas em vez disso, se acumule no fundo dacélula; em segundo lugar, as células são orientadas de tal formaque elas evitam resultados positivos falsos devido ao "escoamentosuperficial" descendente no ágar.

Aproximadamente 100 μΐ do ativo ouformulação foram aplicados durante 7 dias no organismo-teste T.rubrum. A eficácia das formulações foi determinada medindo-se azona de inibição do crescimento de T. rubrum na célula TurChub™.

EXEMPLO 5: Medição do potencial deoxirreducão dos acentuadores de penetração ungueal

O potencial de oxirredução dos agentes quedemonstraram melhorar a inchação ungueal humana foi testado.Supõe-se que os agentes redutores tenham potenciais deoxirredução -ve, ao passo que os agentes oxidantes têmpotenciais de oxirredução +ve (quando expresso, na alternativa,como potenciais de redução, o sinal muda, fazendo com que osagentes redutores tenham um potencial +ve). Os resultados naTabela 3 e na Figura 8 (+SD, n=3) mostram que existemdiferenças notáveis em termos dos potenciais de oxirredução dosvários agentes testados.

Tabela 3. Potenciais de oxirredução e valoresde pH para agentes químicos (concentração 0,5m, n=3):

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Esses agentes químicos que reduziramintensamente incluem os sais de tioglicolato, com tioglicolato decálcio tendo o menor potencial de oxirredução dentre todas assubstâncias químicas (-531,3mV). Os agentes oxidantes maispoderosos foram os que tinham os maiores potenciais deoxirredução, que incluem peróxido de uréia-hidrogênio (uréia-H2O2), peróxido de hidrogênio (H2O2), ácido glicólico, ácidooxálico e persulfato de potássio.

É evidente, com base nesses dados deoxirredução, que todas essas combinações de agentes quemelhoraram drasticamente a inchação da unha (Exemplo 2) eramagentes oxidantes ou redutores fortes. Além disso, a ordem deaplicação desses agentes é importante, a maior inchação unguealno Exemplo 2 foi observada quando o agente redutor foi aplicadoà unha primeiro.

EXEMPLO 6: Efeito da concentração docomposto acentuador de penetração ungueal sobre o potencialde oxirredução:

O efeito da concentração sobre o potencial deoxirredução dos agentes selecionados foi investigado. Estesincluíam ácido tioglicólico, uréia-H202, H2O2 e DTT. Osresultados das titulações são apresentados nas Tabelas 4 a 7.

Tabela 4. Potenciais médios de oxirredução evalores médios de pH do TA a concentrações entre 0,001% e20% w/w (n=3)

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A Tabela 4 mostra que, a concentrações de TAentre 1 e 20%, não há efeito de concentração sobre o potencial deoxirredução medido da solução. A concentrações inferiores a esta(0,001 a 1%), o potencial de oxirredução diminui gradualmentecom a queda na concentração. Observou-se uma tendência similarquando o potencial de oxirredução do DTT foi medido, e apenas aconcentrações inferiores a 0,05% houve queda no potencial deoxirredução da solução (Tabela 5).

Tabela 5. Potenciais médios de oxirredução evalores médios de pH do DTT a concentrações entre -0,005%e 12% w/w (n=2):

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Observa-se um efeito similar tanto com o H2O2quanto com uréia-H202. Com o último em altas concentrações,entre 5 e 17,5%, não pareceu haver grandes diferenças nopotencial de oxirredução (Tabela 6). Entretanto, conforme aconcentração de uréia-H202 diminuía abaixo de 5%, o potencialde oxirredução, e assim, a capacidade de oxidação, caíram commais rapidez. O pH da solução também se tornou mais neutroconforme a concentração da solução diminuía. Com H2O2, aconcentração crítica em que o potencial de oxirredução diminuiufoi de 20% (Tabela 7).Tabela 6. Potenciais médios de oxirredução evalores médios de pH de Uréia-H?Q? a concentrações entre -0,002% e 17,5% teor de H,Q, w/w (n=3):

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Tabela 7. Potenciais médios de oxirredução evalores médios de pH do H2Q2 a concentrações entre 0,005 e 35% w/w (n=3):

<table>table see original document page 43</column></row><table>EXEMPLO 7: Efeito do pH do compostoacentuador de penetração ungueal sobre o potencial deoxirredução:

Para investigar se o pH da solução tem algumefeito sobre o potencial de oxirredução dos acentuadores depenetração, uma faixa de pH foi investigada para dois doscompostos; solução de TA a 5% e uréia-H202 com um teor deH2O2 de 15%. O TA foi testado usando uma faixa de pH de 2 a 11(o pH foi ajustado usando solução de NaOH). A solução de uréia-H2O2 foi testada em pHs entre 2 e 10 (o pH foi ajustado usandosoluções de HCl e NaOH).

O potencial de oxirredução do TA quaseaumentou em uma ordem de grandeza em relação à faixa de pHtestada (Tabela 8). Em contrapartida, o potencial de oxirreduçãodo complexo de uréia-H202 diminuiu gradualmente até atingir opH 10, em que o potencial de oxirredução caiu acentuadamente(Tabela 9).

Tabela 8: Potencial médio de oxirredução desoluções de TA em valores de pH variando de pH 2 a 11 (n=3).

<table>table see original document page 44</column></row><table><table>table see original document page 45</column></row><table>

Tabela 9. Potencial médio de oxirredução das soluções de Uréia-H?0? em valores de pH variando de pH 2 a (η=3 + SP).

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EXEMPLO 8: Intensificação de penetraçãode um composto farmacêutico de modelo

A Figura 9 é uma representação gráfica dadifusão de terbinafina através de uma unha humana após o pré-tratamento com 50:50 etanol/água (controle), uréia-H202 ou ácidotioglicólico (TA) isoladamente, e com os dois acentuadores depenetração em combinação. Os resultados demonstram acapacidade do sistema acentuador de penetração duplo emaumentar a difusão de um fármaco típico.

Quando as unhas foram embebidas em umasolução de etanol/água a 50:50 (controle) durante 20 horas e ofármaco foi aplicado, apenas 44 ± 13 μg por cm2 penetraram naunha após 214 horas. A aplicação do agente oxidante, peróxido deuréia-hidrogênio, não teve efeito significativo (p > 0,05,ANOVA) sobre a quantidade de fármaco penetrando na unha,permitindo que 47 ± 33 μg por cm atravessassem a barreira. Aaplicação de ácido tioglicólico à unha antes da aplicação deterbinafina permitiu que 861 ± 135 μg por cm2 do fármacopenetrassem, mas isso foi menor do que quando ácido tioglicólicoe Ureia-H2O2 foram aplicados seqüencialmente antes daterbinafina, pois permitiu ± 1332 μg por cm após 219 horas.

EXEMPLO 9: Efeito do tempo de aplicaçãosobre a eficácia do sistema acentuador de penetração de aplicação dupla:

A Figura 10 é uma representação gráfica dadifusão de terbinafina através de uma unha humana após o pré-tratamento com ácido tioglicólico (TA) seguido por uréia-H202durante diferentes períodos de tempo.

A aplicação do sistema acentuador depenetração durante 30 minutos ou 1 hora permitiu que menos de10 μg por cm de fármaco penetrasse na unha em ambos os casos.Em contrapartida, usando o sistema de penetração duplo duranteaté 20 horas, houve aumento na quantidade de terbinafinapenetrando na unha humana para 3329 ± 1842 μg por cm2 após 315 horas.

EXEMPLO 10: Uso do sistema acentuadorde penetração para melhorar o desempenho das formulaçõesantifúngicas comerciais:

Os efeitos do sistema acentuador de penetraçãoduplo sobre a penetração de amorolfina da Iaca farmacêuticacomercial Loceryl® foram testados usando uma análisemicrobiológica. A análise estimou a eficácia da formulação nacondição isolada ou junto com o pré-tratamento com ácidotioglicólico, uréia-peróxido de hidrogênio, ou ambos, contra omicroorganismo predominante encontrado em unhasonicomicóticas, T. rubrum.

A Figura 11 é uma comparação do comprimentomédio da zona de inibição (ZOI) usando o sistema de célula deteste TurChub® com o organismo T. rubrum, após aplicar aaparas distais de unha de espessura total, pré-tratadas, umavariedade de sistemas acentuadores de penetração, em seguidaaplicando 100 μΐ de uma Iaca de Loceril convencional à superfíciede cada uma e incubando durante sete dias (n=4 ± SD).

A Figura 11 demonstra que, quando amorolfinafoi aplicada separadamente ou após a unha ter sido pré-tratadadurante 20 oras com um único agente redutor, ácido tioglicólico,o crescimento do microorganismo não foi impedido, isto é, nãohouve zona de inibição detectável. Quando um agente oxidante,peróxido de uréia-hidrogênio, foi usado para tratar previamente aunha, foi detectada uma pequena zona de inibição. Entretanto,quando o agente oxidante e o agente redutor foram aplicadosseqüencialmente na unha antes do fármaco antifungico, foiobservada uma zona de inibição de quase 2 cm. Esses resultadosmostram que a aplicação de um agente redutor e um agenteoxidante melhora substancialmente a eliminação microbiológicaobtida usando uma formulação aplicada unguealmente disponívelno mercado.

Claims (46)

1. - Uso de preparações de um agente redutor ede um agente oxidante, caracterizado pelo fato de ser na produçãode um medicamento para o tratamento de doenças ungueaistratáveis por fármacos, onde as referidas preparações sãodispostas separadamente e para administração seqüencial na unhade um paciente, iniciando pelo agente redutor seguido pelo agenteoxidante, o referido fármaco sendo disposto em uma ou na outrapreparação, ou, como opção, em uma terceira preparação em queo fármaco é adicional ao agente redutor ou oxidante.

2. - Uso, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que uma combinação simples das duaspreparações levaria a uma reação extrema, e pelo fato de que cadaagente individual é aceitável, do ponto de vista farmacêutico, paraaplicação em uma unha.

3. - Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que o agente redutor é selecionadodentre o grupo composto de: tioglicolato de amônio, tioglicolatode cálcio, tioglicolato de sódio, ácido tioglicólico (TA) editiotreitol (DTT), ácido ascórbico, hidroquinona, mercaptoetanol,glutationa, L-cisteína, taurina, ácido aminometanesulfônico, ácidocistéico, ácido cisteinesulfínico, ácido etanedisulfônico, ácidoetanesulfônico, homotaurina, hipotaurina, ácido isetiônico, ácidomercaptoetanesulfônico, N-metiltaurina e seus derivados simples.

4. - Uso, de acordo com a reivindicação 3,caracterizado pelo fato de que o derivado é um sal.

5. - Uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4,caracterizado pelo fato de que o agente redutor é ácidotioglicólico ou um de seus derivados.

6. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que oagente oxidante é selecionado dentre o grupo composto de: uréia,peróxido de hidrogênio, persulfato de potássio, tiouracil, ácido p-coumérico, ácido glicólico, ácido oxálico, cineol, peroxidona,dióxido de cloro, dicromato de amônio, nitrato de amônio,perclorato de amônio, permanganato de amônio, bromato debário, clorato de bário, peróxido de bário, clorato de cádmio,clorato de cálcio, cromato de cálcio, perclorato de cálcio, nitratode cromo, nitrato de cobalto, oxido de prata, ácido periódico edicromato de piridina.

7. - Uso, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que o agente oxidante é peróxido de hidrogênio.

8. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que oagente oxidante é um composto de adição de peróxido dehidrogênio e uréia.

9. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que ofármaco está presente em uma ou em ambas as preparações.

10. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o fármaco estápresente em uma terceira preparação.

11. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que aspreparações são líquidas.

12. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que oagente redutor é preparado como uma preparação alcalina, compH entre 7 e 14.

13. - Uso, de acordo com a reivindicação 12,caracterizado pelo fato de que o pH está entre 8 e 13.

14. - Uso, de acordo com a reivindicação 13,caracterizado pelo fato de que o pH está entre 9 e 12.

15. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o pHdo agente oxidante está entre 1 e 7.

16. - Uso, de acordo com a reivindicação 15,caracterizado pelo fato de que o pH está entre 2 e 5.

17. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que aspreparações são aquosas.

18. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado por compreenderpropilenoglicol como agente de volume.

19. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que ácidotioglicólico é conjugado ao fármaco.

20. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que ofármaco é selecionado dentre o grupo de fármacos antifungicoscomposto de: amorolfina, miconazol, cetoconazol, itraconazol,fluconazol, econazol, ciclopirox, oxiconazol, clotrimazol,terbinafina, naftifina, anfotericina, greseofulvina, voriconazol,flucitosina, nistatina e seus sais e ésteres aceitáveis do ponto devista farmacêutico.

21. - Uso, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que o fármaco é terbinafina.

22. - Uso, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que o fármaco é amorolfina.

23. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que ofármaco é selecionado dentre o grupo de fármacos antipsoriáticoscomposto de: corticóides, 5-fluorouracila, metotrexato, etretinato,ciclosporina, tacrolimus e seus derivados.

24. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que opotencial de redução de 0,5 M do agente oxidante em águadeionizada, quando medido em relação a um eletrodo dereferência Ag/AgCl, é menor do que 50 mV.

25. - Uso, de acordo com a reivindicação 24,caracterizado pelo fato de que o potencial de redução é menor doque-1 OOmV.

26. - Uso, de acordo com a reivindicação 25,caracterizado pelo fato de que o potencial de redução é menor doque -200mV.

27. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que opotencial de redução de 0,5 M do agente oxidante em águadeionizada, quando medido em relação a um eletrodo dereferência Ag/AgCl, é maior do que +20 mV.

28. - Uso, de acordo com a reivindicação 27,caracterizado pelo fato de que o potencial de redução é maior doque +50mV.

29. - Uso, de acordo com a reivindicação 28,caracterizado pelo fato de que o potencial de redução é maior doque +75mV.

30. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que oagente de redução é conjugado ao fármaco.

31. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que oagente oxidante é conjugado ao fármaco.

32. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que pelomenos uma preparação é selecionada dentre o grupo composto de:cremes, pomadas, géis, soluções, loções, espumas, musses,líquidos pulverizados, pastas, curativos, pós, pré-misturas, laçasnão aquosas e laças aquosas.

33. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que cadauma das referidas preparações é selecionada individualmentedentre o grupo composto de: cremes, pomadas, géis, soluções,loções, espumas, musses, líquidos pulverizados, pastas, curativos,pós, pré-misturas, laças não aquosas e laças aquosas.

34. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que pelomenos uma preparação é um gel à base d'água.

35. - Uso, de acordo com a reivindicação 34,caracterizado pelo fato de que todas as preparações são géis àbase d'água.

36. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 34, caracterizado pelo fato de que pelo menosuma preparação é uma Iaca à base d'água.

37. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que todas aspreparações são laças à base d'água.

38. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que apreparação do agente redutor é aplicada pelo menos 10 horasantes da preparação do oxidante.

39. - Uso, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que a preparação do agente redutor éaplicada pelo menos 15 horas antes da preparação do oxidante.

40. - Uso, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que a preparação do agente redutor éaplicada pelo menos 20 horas antes da preparação do oxidante.

41. - Uso, de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que apreparação do fármaco é aplicada dentro de uma hora após aaplicação da preparação do agente oxidante.

42. - Uso, de acordo com a reivindicação 41,caracterizado pelo fato de que o fármaco é aplicado dentro de 20minutos após a aplicação da preparação do agente oxidante.

43. - Uso, de acordo com a reivindicação 41,caracterizado pelo fato de que o fármaco é aplicadoimediatamente após a aplicação da preparação do agenteoxidante.

44. - Método para o tratamento de uma infecçãoungueal de uma unha em um paciente que precisa dessetratamento, caracterizado por compreender aplicar umapreparação de um agente redutor à referida unha, seguido pelaaplicação de uma preparação de um agente oxidante nela, areferida doença ungueal sendo tratável por um fármaco, o referidofármaco sendo disposto em uma das referidas preparações ou emuma terceira preparação.

45. - Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado por adicionalmente compreender aspectosconforme definidos em qualquer uma das reivindicações 2 a 43.

46. - Kit, caracterizado por compreenderpreparações conforme definidas em qualquer uma dasreivindicações 1 a 43.