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BRPI0619399B1 - Derivado de metastina ou um sal do mesmo, e, medicamento - Google Patents

Derivado de metastina ou um sal do mesmo, e, medicamento Download PDF

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BRPI0619399B1
BRPI0619399B1 BRPI0619399-4A BRPI0619399A BRPI0619399B1 BR PI0619399 B1 BRPI0619399 B1 BR PI0619399B1 BR PI0619399 A BRPI0619399 A BR PI0619399A BR PI0619399 B1 BRPI0619399 B1 BR PI0619399B1
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BR
Brazil
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arg
phe
compound
tyr
azagly
Prior art date
Application number
BRPI0619399-4A
Other languages
English (en)
Inventor
Taiji Asami
Naoki Nishizawa
Original Assignee
Takeda Pharmaceutical Company Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37846230&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BRPI0619399(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Takeda Pharmaceutical Company Limited filed Critical Takeda Pharmaceutical Company Limited
Publication of BRPI0619399A2 publication Critical patent/BRPI0619399A2/pt
Publication of BRPI0619399B1 publication Critical patent/BRPI0619399B1/pt
Publication of BRPI0619399B8 publication Critical patent/BRPI0619399B8/pt

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Abstract

derivado de metastina ou um sal do mesmo, composto ou um sal do mesmo, pró-droga, medicamento, e, uso de uma dose eficaz do derivado de metastina a presente invenção proporciona derivados estávies de metastina tendo excelentes atividades biológicas (uma atividade de supressão de metástase cancerígena, uma atividade de supressão de crescimento de câncer, uma atividade de estimulação de secreção de hormoônio gonadroprópico, atividade de estimulação de secreção de hormônio sexual, etc.) através de estimulação dos aminoácidos constituintes de metastina com aminoácidos específicos no derivado de metastina da presente invenção, a estabilidade no sangue, solubilidade, etc são mais aperfeiçoadas, a tendência de geleificação é reduzida, a farmacocinética é também melhorada e uma excelente atividade de supressõa de metástase cancerígena ou uma atividade de supressão de crescimento de câncer é exibida. além disso, o derivado de metastina da presente invenção tem os efeitos de supressão de secreção de hormônio gonadotrópico, supressão de secreção de hormônio sexual, etc.

Description

A presente invenção se refere a derivados de metastina e uso 5 dos mesmos.
TÉCNICA ANTECEDENTE
Metastina derivada de ser humano (também denominada peptídeo KiSS-1) (WO 00/24890) e metastina derivada de camundongo ou rato (WO 01/75104) são conhecidas. Preparados com liberação sustentada 10 contendo metastina também são conhecidos (WO 02/85399).
Segundo informações, a metastina tem um efeito de supressão de metástase cancerígena e, assim, é eficaz para prevenção ou tratamento de cânceres (por exemplo, câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer de fígado, câncer pancreático, câncer cólon-retal, câncer retal, câncer colônico, câncer 15 de próstata, câncer ovariano, câncer cervical, câncer de mama, câncer renal, câncer de bexiga, tumor cerebral, etc.); a metastina também tem um efeito de controlar a função pancreática e é eficaz para a prevenção ou tratamento de doenças pancreáticas (por exemplo, pancreatite aguda ou crônica, câncer pancreático; etc.); e a metastina ainda tem um efeito de controle de função
Petição 870190011014, de 01/02/2019, pág. 11/15 placentária e é eficaz para prevenção ou tratamento de coriocarcinoma, mola da hidátide, mola invasiva, aborto, hipoplasia fetal, metabolismo anormal de glicose, metabolismo anormal ou distribuição anormal de lipídio (WO 00/24890, WO 01/75104 e WO 02/85399).
DIVULGAÇÃO DA INVENÇÃO
A presente invenção objetiva o fornecimento de derivados de metastina estáveis tendo excelentes atividades biológicas (uma atividade de supressão de metástase cancerígena, uma atividade de supressão de crescimento de câncer, uma atividade de estimulação de secreção de
hormônio gonadotrópico, atividade de estimulação de secreção de hormônio sexual, etc.). Os presentes inventores fizeram estudos extensivos para
* resolver os problemas precedentes e, como um resultado, inesperadamente
verificaram que através de substituição dos aminoácidos constituintes da
15 metastina por aminoácidos específicos, estabilidade no sangue, solubilidade, etc. e uma excelente atividade de supressão de metástase cancerígena ou uma atividade de supressão de crescimento de câncer é exibida. Os presentes inventores ainda verificaram, inesperadamente, que esses derivados de
metastina têm um efeito de supressão da secreção de hormônio gonadotrópico, um efeito de supressão da secreção de hormônio sexual, etc., os quais são totalmente diferentes dos efeitos conhecidos até o momento. Baseado nessas verificações, os presentes inventores continuaram outras investigações e realizaram a presente invenção. Isto é, a presente invenção proporciona as características a seguir e assim por diante.
(1) Um derivado de metastina representado pela fórmula:
XX0-XX2-XX3-XX4-XX5-XX6-AzaGly-XX8-XX9-XX 10-NH2 (em que:
XX0 representa formila, uma Ci_2o alcanoíla, ciclopropanocarbonila, 6-(acetil-D-arginilamino)caproíla, 6-((R)-2,3 /0 diaminopropionilamino)caproíla, 6-(D-norleucilamino)caproíla, 4-(Darginilamino)butirila, 3-(4-hidróxifenil)propionila, glicila, tirosila, acetilglicila, acetiltirosila, D-tirosila, acetil-D-tirosila, piroglutamila, 3(piridin-3-il)propionila, adipoíla, glicoloíla, 6-aminocaproíla, 6acetilaminocaproíla, 4-[bis-(2-piridilmetil)aminometil]benzoíla ou 4ureidobenzoíla;
XX2 representa Tyr, D-Tyr, D-Ala, D-Leu, D-Phe, D-Lys, DTrp ou uma ligação química;
XX3 representa:
i) um aminoácido selecionado de Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr e Vai, em que o grupo α-amino pode ser opcionalmente metilado;
ii) um aminoácido cíclico selecionado de Pro, Aze(2), Aze(3), Pic(2), Pic(3), Hyp, Thz, Abz(2), Abz(3), Pzc(2), Pro(4NH2), Hyp(Bzl), cisHyp, Pro(4F) e lzc;
iii) um aminoácido selecionado de D-Dap, D-Pya(4), DL-
Ala(Pip), Orn, Aib e Tyr(PO3H2); ou iv) uma ligação química;
XX4 representa Asn, ácido 2-amino-3-ureidopropiônico, ácido Np-formil-p-diaminopropiônico, ácido N^-acetil-p-diaminopropiônico, Νωpentilasparagina, NC0-ciclopropilasparagina, N®-benzilasparagina, ácido 2,4diaminobutanóico, ácido 2,3-diaminopropiônico, His, Gin, Gly, Arg, Cit, Nva, D-Asn ou uma ligação química;
XX5 representa Ser, Thr, Vai, NMeSer, Gly, Ala, Hyp, D-Ala, D-Thr, D-Pro ou uma ligação química;
XX6 representa Phe, Tyr, Trp, Tyr(Me), Thi, Nal(2), Cha, Pya(4), treo-Ser(3Fenila), eritrO“Ser(3Fenila) ou fenilalanina opcionalmente substituída;
AzaGly representa azaglicina;
ΧΧ8 representa Leu, Nva, Vai ou Ala(cPr);
XX9 representa arginina opcionalmente substituída, lisina opcionalmente substituída ou omitina opcionalmente substituída; e
XX10 representa 2-naftilalanina, 2-tienilalanina, tirosina, fenilalanina opcionalmente substituída ou triptofano opcionalmente substituído);
ou um sal do mesmo.
(2) Um derivado de metastina representado pela fórmula: XX0-XX2-XX3-XX4-XX5-XX6-AzaGly-XX8-XX9-XX10-NH2
U) (em que:
XXO representa formila, uma Ci_2o alcanoíla, ciclopropanocarbonila, 6-(acetil-D-arginilamino)caproíla, 6-((R)-2,3diaminopropionilamino)caproíla, 6-(D-norleucilamino)caproíla, 4-(Darginilamino)butirila, 3-(4-hidróxifenil)propionila, glicila, tirosila, 15 acetilglicila, acetiltirosila, D-tirosila, acetil-D-tirosila, piroglutamila, 3(piridin-3-il)propionila, adipoíla, glicoloíla, 6-aminocaproíla, 6acetílaminocaproíla, 4-[bis-(2-piridilmetil)aminometil]benzoíla ou 4ureidobenzoíla;
XX2 representa Tyr, D-Tyr, D-Ala, D-Leu, D-Phe, D-Lys, D£) Trp ou uma ligação química;
XX3 representa D-Asp, D-Dap, D-Ser, D-Gln, D-His, D-Trp, D-Tyr, D-Pya(4), D-NMeAla, D-NMePhe, Aze(2), Aze(3), Pic(2), Pic(3), Hyp, Thz, Gly, Aib, Abz(2), Abz(3), Sar, Izc, Leu, Lys, Glu, Thr, Trp, Ser, Ala, NMeAla, β-alanina, DL-Ala(Pip), Pzc(2), Om, His(3Me), Tyr(PO3H2), 25 Pro(4NH2), Hyp(Bzl), cisHyp, Pro(4F) ou uma ligação química;
XX4 representa Asn, ácido 2-amino-3-ureidopropiônico, ácido Np-formil-p-diaminopropiônico, ácido N^-acetil-p-diairimopropiônico, N<!)pentilasparagina, bT-ciclopropilasparagina, N®-benzilasparagina, ácido 2,4diaminobutanóico, ácido 2,3-diaminopropiônico, His, Gin, Gly, Arg, Cit,
Nva, D-Asn ou uma ligação química; XX5 representa Ser, Thr, Vai, NMeSer, Gly, Ala, Hyp, D-Ala, D-Thr, D-Pro ou uma ligação química; XX6 representa Phe, Tyr, Trp, Tyr(Me), Thi, Nal(2), Cha,
. 5 Ί Pya(4), Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F), Phe(4Cl), aMePhe, Phe(2Me), Phe(3Me), Phe(4Me), treo-Ser(3Fenila), eritro-Ser(3Fenila) ou D-Phe; AzaGly representa azaglicina; XX8 representa Leu, Nva, Vai ou Ala(cPr); XX9 representa Arg, Om, Arg(Me), D-Arg ou Arg(asymMe2);
e XXI0 representa Phe, Trp, 2-naftilalanina, 2-tienilalanina, tirosina ou 4-fluorofenilalanina);
• ou um sal do mesmo. (3) Um derivado de metastina representado pela fórmula:
15 • XX0-XX2-XX3-XX4-XX5-XX6-AzaGly-XX8-XX9-XX10-NH2 (em que: XXO representa formila, a Ομ2ο alcanoíla, ciclopropanocarbonila, 6-(acetil-D-arginilamino)caproíla, 6-((R)-2,3 - diaminopropionilamino)caproíla, 6-(D-norleucilamino)caproíla, 4-(D- arginilamino)butirila, 3 -(4-hidróxifenil)propionila, glicila, tirosila, acetilglicila, acetiltirosila, D-tirosila, acetil-D-tirosila, piroglutamila, 3(piridin-3-il)propionila, adipoíla, glicoloíla ou 6-aminocaproíla; XX2 representa Tyr, D-Tyr, D-Ala, D-Leu, D-Phe, D-Lys, DTrp ou uma ligação química;
25 XX3 representa D-Asp, D-Dap, D-Ser, D-Gln, D-His, DNMeAla, D-NMePhe, Aze(2), Pic(2), Pic(3), Hyp, Thz, NMeAla, Gly, Aib, Abz(2), Abz(3), Sar, Leu, Lys, Glu, β-alanina, Pzc(2), Õm, His(3Mè), Tyr(PO3H2), Pro(4NH2) ou Hyp(Bzl); XX4 representa Asn, ácido 2-amino-3-ureidopropiônico, ácido
Np-formil-p-diaminopropiônico, ácido N^-acetil-p-diaminopropiônico, Νωpentilasparagina, N“-ciclopropilasparagina, N^benzilasparagina, ácido 2,4diaminobutanóico, His, Gin, Cit ou D-Asn;
XX5 representa Ser, Thr, Vai, NMeSer, Gly, Ala, Hyp, D-Ala 5 ou D-Thr;
XX6 representa Phe, Tyr, Trp, Tyr(Me), Thi, Nal(2), Cha, Pya(4), Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F), Phe(4Cl) ou D-Phe; AzaGly representa azaglicina;
XX 8 representa Leu, Nva ou Vai;
W XX9 representa Arg, Om, Arg(Me) ou Arg(asymMe2); e
XX10 representa Phe, Trp, 2-naftilalanina, 2-tienilalanina, tirosina ou 4-fluorofenilalanina);
ou um sal do mesmo.
(4) Um derivado de metastina representado pela fórmula:
XX0-XX2-XX3-XX4-XX5-XX6-AzaGly-XX8-XX9-XXl 0-NH2 (em que:
XXO representa formila, uma Cbi2 alcanoíla, ciclopropanocarbonila, 6-(acetil-D-arginilamino)caproíla, 6-((R)-2,3diaminopropionilamino)caproíla, 6-(D-norleucilamino)caproíla, 4-(Darginilamino)butirila, 3 -(4-hidróxifenil)propionila, gli cila, tirosila, acetilglicila, acetiltirosila, D-tirosila, acetil-D-tirosila, piroglutamila, 3(piridin-3-il)propionila, adipoíla, glicoloíla ou 6-aminocaproíla;
XX2 representa Tyr, D-Tyr, D-Ala, D-Leu, D-Phe, D-Lys, DTrp ou uma ligação química; XX3 representa D-Asp, D-Dap, D-Ser, D-Gln, 25 D-His, D-NMeAla, D-NMePhe, Aze(2), Pic(2), Pic(3), Hyp, Thz, NMeAla, Gly, Aib, Abz(2), Abz(3), Sar, Leu, Lys, Glu, β-alanina, Pzc(2), Orn, His(3Me), Tyr(PO3H2), Pro(4NH2) ou Hyp(Bzl);
XX4 representa Asn, ácido 2-amino-3-ureidopropiônico, ácido N^-formildiaminopropiônico, ácido hAacetildiaminopropiônico, Νω7 pentilasparagina, Nw-ciclopropilasparagina, N®-benzilasparagina ou ácido 2,4diaminobutanóico;
XX5 representa Ser, Thr ou Vai;
XX6 representa Phe, Tyr, Trp, Tyr(Me), Thi, Nal(2), Cha, 5 Pya(4), Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F) ou Phe(4Cl);
AzaGly representa azaglicina;
XX8 representa Leu, Nva ou Vai;
XX9 representa Arg, Om, Arg(Me) ou Arg(asymMe2); e XX10 representa Phe, Trp, 2-naftilalanina, 2-tienilalanina,
tirosina ou 4-fluorofenilalanina);
ou um sal do mesmo.
(5) O derivado de metastina ou um sal do mesmo de acordo com (1), em que:
XXO representa uma Cm2 alcanoíla, 6-aminocaproíla, 615 acetilaminocaproíla, glicoloíla, 4-[bis-(2-piridilmetil)aminometil]benzoíla, 4ureidobenzoíla, 3-(4-hidróxifenil)propionila ou piroglutamila;
XX2 representa D-Tyr, Tyr ou uma ligação química;
XX3 representa D-Asp, D-Dap, D-Ser, D-Gln, D-His, D-Trp, D-Tyr, D-Pya(4) D-NMeAla, D-NMePhe, Aze(2), Aze(3), Pic(2), Pic(3), Hyp, Thz, Gly, Aib, Abz(2), Sar, Izc, Leu, Lys, Glu, Thr, Trp, Ser, Ala, NMeAla, β-alanina, DL-Ala(Pip), Pzc(2), Om, His(3Me), Tyr(PO3H2),
Pro(4NH2), Hyp(Bzl), cisHyp, Pro(4F) ou uma ligação química;
XX4 representa Asn, ácido 2-amino-3-ureidopropiônico, Νωpentilasparagina, N°~ciclopropilasparagina, N“-benzilasparagina, ácido 2,425 diaminobutanóico, ácido 2,3-diaminopropiônico, His, Gin, Gly, Arg, Cit,
Nva, D-Asn ou uma ligação química;
XX5 representa Thr, NMeSer, Gly, Ala, Hyp, D-Ala, D-Thr,
D-Pro ou uma ligação química;
XX6 representa Phe, Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F), Phe(4Cl),
ccMePhe, Phe(2Me), Phe(3Me), Phe(4Me), treo-Ser(3Fenila), eritroSer(3Fenila) ou D-Phe;
XX8 representa Leu ou Ala(cPr);
XX9 representa Arg, Arg(Me) ou D-Arg; e
XXI0 representa Trp.
(6) O derivado de metastina de acordo com (1), o qual é representado pela fórmula:
XX0-XX2-XX3-XX4-XX5-XX6-AzaGly-XX8-XX9-XX10-NH2
(em que:
XXO representa formila, uma Ci_6 alcanoíla ou glicoloíla;
XX2 representa D-Tyr ou uma ligação química;
XX3 representa Aze(2), Hyp, Gly, Aib, Leu, Lys, Glu, His(3Me), Tyr(PO3H2)? Hyp(Bzl), cisHyp ou Pro(4F);
XX4 representa Asn ou ácido 2-amino-3~ureidopropiônico;
XX5 representa Ser, Thr ou Ala;
XX6 representa Phe, Cha, Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F), Phe(4Cl), Phe(2Me), Phe(3Me), Phe(4Me), treo-Ser(3Fenila) ou eritroSer(3Fenila);
AzaGly representa azaglicina;
XX8 representa Leu ou Ala(cPr);
XX9 representa Arg ou Arg(Me); e
XX10 representa Phe ou Trp);
ou um sal do mesmo.
(7) Ac-D-Tyr-D-Trp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-D-Arg-Trp-
NH2 (Composto No 708),
Ac-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)’Trp“NH2 (Composto No. 709),
Decanoil~Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 710),
Acp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto
No. 712),
Ac-Acp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 713),
Ac-D-Tyr“D-Trp-Asp(NHPen)-Tbr-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No 714),
Ac-D-Tyr-D-Trp“Asp(NHcPr)-Thr-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No 715),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHBzl)-Thr-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 716),
Ac-D-Tyr-D-Ti'p-Alb-Thr-Phe-AzaGly-LeU“Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 717),
Ac-D-Tyr-D-Pya(4)-Alb-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No 718),
Ac-D-Tyr-D-Trp~Asn-D-Pro-Phe~AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 719),
Ac-D-Tyr-Aze(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 720),
Ac-D-Tyr-Pic(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 721),
Ac-D-Tyr-Pic(3)“Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 722),
Ac“D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 723),
Ac-D-Tyr-Thz-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 724),
Ac-D-Tyr-NMeAla-Asn-Thr-PhC-AzaGly-Leu-Arg(Me)“TrPNH2 (Composto No 725),
Ac-D-Tyr-Gly“Asn-Thr-Phe-AzaGly-LeU“Arg(Me)-Trp-NH2
(Composto No 726),
Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-PhC-AZaGly-Leu-Arg(Me)-TrP-NH2 (Composto No. 727),
Ac-D-Tyr~Abz(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-LeU“Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No 728),
Ac-D-Tyr-Aze(3)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 730),
Ac-D-Tyr-Sar-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu~Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 731),
Ac-D-Tyr-D-NMeAla~Asn-Thr-Phe~AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 732),
Ac-D-Tyr-Izc-Asn~Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 734),
Ac-D-Tyr-D-Asp“Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 735),
Ac-D-Tyr-D-Dap~Asn-Thr~Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 736),
Ac-D-Tyr-D-Ser-Asn-Thr-Phe-AzaGly~Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 737),
Ac7D-Tyr-D-Gln-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 738),
Ac-D-Tyr-D-His-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 739),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Dab-Thr“Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 740),
Ac-D-Tyr-Ala-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 742),
Ac-D~Tyr-Leu-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 743),
Ac-D-Tyr“Ser-Asn-Thr-Phe-AzaGly~Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 744),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn“Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No 745),
Ac-D-Tyr-Glu-Asn~Thr-Phe~AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 746),
Ac-D-Tyr~p-Ala-Asn“Thr-Phe~AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 747),
Ac-D-Tyr-D“Trp-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 748),
Ac“D-Tyr-D“Trp-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 749),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 750),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)--TrpNH2 (Composto No. 754),
Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 755),
Ac-D“Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 756),
Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 757),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly~Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 758),
Ac-D“Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 759),
Ac-D-Tyr-Pzc(2)-Asn“Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 760),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp12 &
ΝΉ2 (Composto No. 763), Ac-D“Tyr-Trp-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 764), Ac-D-Tyr-Hyp“Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-
5 NH2 (Composto No. 765), Ac-D-Tyr-Trp-Asn~Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp“ NH2 (Composto No. 766), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- ΝΉ2 (Composto No. 767),
4 * » Ac-D-Tyr-Trp-Asn~Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp~ ΝΉ2 (Composto No. 768), ACD-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp“ NH2 (Composto No. 769),
• ACD-Tyr“Alb-Asn-Tbr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-
15 • NH2 (Composto No. 770), Ac-D-Tyr-Om-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 771), Ac-DG?yr-Thr~Asn-Thr-Phe-AzaGly~Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 772), Ac-D-Tyr-His(3Me)-AsnThr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- ΝΉ2 (Composto No. 773), Ac~D-Tyr-DL-Ala(Pip)-Asn-Thr-Phe-AzaGly“Leu-Arg(Me)- Trp-NH2 (Composto No. 774), Ac-D-Tyr-Tyr(PCbH2)-Asn-Thr~Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)~
25 Trp-NH2 (Composto No. 775), Glicoloil-D-Tyr~Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly“Leu-Arg(Me)- Trp-NH2 (Composto No. 776), Ac-D-Tyr-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 777),
<áO
Ac-D-Tyr-Pro(4NH2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp~NH2 (Composto No. 780), Ac-D-Tyr-Hyp(Bzl)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 781),
Ac-D-Tyr-D-NMePhe-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 782),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 783),
Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp10 ΝΉ2 (Composto No. 784),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(3 F)-AzaGly-Leu- Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 785),
Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 786),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 787),
Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 788),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 789),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 790),
Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 791),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-D-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 794),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg-Trp-NH2 (Composto No. 797),
Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Phe- AzaGly-Leu- Arg(Me)-Trp-NH2 £1 ίο (Composto No. 800),
4-[Bis-(2-Piridilmetii)aminometil]benzoil-Phe~AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 801),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-NMeSer-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 809),
Ac-D-Tyr-HypAsn-Hyp-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 810),
Ac-D“Tyr-Hyp-Asn-Gly-Phe-AzaGly“Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 813),
Ac-D“Tyr-Hyp-Asn-Ala-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 814),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-D-Ala-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 815),
Ac-D-Tyr-Hyp-His-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 816),
Ac-D-Tyr-Hyp-Gln-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 843),
Ac-D-Tyr-Hyp-D-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TipNH2 (Composto No. 844),
Ac-D-Tyr-Hyp-Cit-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 845),
Ac-D-Tyr~Hyp-Asn-D-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 846),
Ac-D-Tyr-Hyp”Asn-Thr-Phe-AzaGly-Ala(cPr)-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 856),
4-Ureidobenzoil-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 860),
Ac-D-Tyr-Hyp-ArgThr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 861), è°
Ac-D-Tyr-Hyp“Gly-Thr-Phe-AzaGly-Leu~Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 862),
Ac-D-Tyr-Hyp-Dap-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp“NH2 (Composto No. 863),
Ac-D-Tyr-Hyp-Dab-Thr-Pte-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 864),
Ac~D-Tyr-Hyp~Asn-Thr-aMePhe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp~
NH2 (Composto No. 868),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(2Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 870),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asri“Thr“Phe(3Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 872),
Ac-D-Tyr-Hyp“Asn-Thr-Phe(4Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 874),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-treo-Ser(3Fenil)-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 877),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-eritro-Ser(3Fenil)-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 882),
Ac-D-Tyr-Hyp-Nva-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No 886),
Ac-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)“Trp-NH2 (Composto No. 887),
3-(p-Hidróxifenil)propionil-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 888), pGlu-Asn-Thr~Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 889),
Ac-D-Tyr-cisHyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp~
NH2 (Composto No. 896),
Ac-D-Tyr-Pro(4F)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp25
ΝΉ2 (Composto No. 897), Ac-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 899) ou um sal do mesmo. 8. Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHPen)-Thr-Phe-AzaGly-Leu-
5 Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 714), Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHcPr)-Thr-Phe-AzaGly-Leu- Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 715), Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHBzl)-Thr-Phe-A2aGly-Leu- Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 716),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Alb-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 717), Ac-D-Tyr-D-Pya(4)-Alb-Thr-Phe-AzaGly~Leu-Arg(Me)-Trp~ NH2 (Composto No. 718), Ac-D-Tyr-Aze(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly~Leu-Arg(Me)-Trp-
15 • NH2 (Composto No. 720), Ac-DTyr-Pic(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 721), AcD-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 723), Ac-D-Tyr-Thz-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 724), Ac-D“Tyr-GlyAsn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 726), Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
25 (Composto No. 727), Ac-D-Tyr-D“NMeAla-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)- Trp-NH2 (Composto No. 732), Ac-D-Tyr“D-Gln-Asn-Thr-Phe-AzaGIy~Leu-Arg(Me)“Trp- NH2 (Composto No 738),
Ac-D-Tyr-D-His-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No 739),
AcD-Tyr-D-Trp-Dab-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 740),
Ac-D-Tyr-Ala-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 742),
Ac-D-Tyr-Leu-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 743),
Ac-D-Tyr-Ser-Asn“Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 W (Composto No. 744),
Ac-D~Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 745), , Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)“Trp-NH2 (Composto No. 746),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 748),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asn-Thr-Phe(2F)“AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 749),
Ac-D~Tyr-D-Trp-Asn-Thr-Phe(3F)“AzaGly-LeU“Arg(Me)> Trp-NH2 (Composto No 750),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 754),
Ac-D“Tyr-Glu-Asn~Thr-Phe(2F)“AzaGly“Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 755),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 756),
Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 757),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp18
NH2 (Composto No. 758), Ac-D-Tyr-Glu-Asn“Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 759), Ac-D-Tyr-Pzc(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-
5 ΝΉ2 (Composto No. 760), Ac-D-Tyr-Hyp“Asn-Thr-Phe(2F)~AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 763), Ac-D“Tyr-Trp-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 764),
• Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 765), Ac-D~Tyr-Trp-Asn-Thr-Phe(3 F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- ΝΉ2 (Composto No. 766), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly“Leu-Arg(Me)-Trp-
15 • NH2 (Composto No. 767), Ac-D-Tyr-Trp-Asn-ThrPhe(4Cl)“AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 768), Ac-D-Tyr-Gly-Asn“Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 769), Ac-D-Tyr-Alb-Asn~Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 770), Ac-D-Tyr-Om-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 771), Ac-D-Tyr-Thr-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
25 (Composto No. 772), Ac-D-Tyr-His(3Me)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No 773), Ac-D-Tyr-Tyr(PO3H2)-Asn-Tlir-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)- Trp-NH2 (Composto No. 775),
Glicoloil-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr“Phe-AzaGly-Leu~Arg(Me)Trp“NH2 (Composto No. 776),
Ac-D-Tyr-Pro(4NH2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 780),
Ac-D-Tyr-Hyp(Bzl)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 781),
Ac-D-Tyr-D-NMePhe-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 782),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No 783),
Ac-D-Tyr-Alb-Asn~Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu~Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 784), . Ac“D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly~Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 785),
Ac-D-Tyr-Alb~Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp~
NH2 (Composto No. 786),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 787),
Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trpφ) NH2 (Composto No 788),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 789),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Tlm-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 790),
Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe(4F)“AzaGly-LeU“Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 791),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-D-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 794),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg-Trp-NH2
(Composto No. 797), Ac-D~Tyr-Hyp-Alb-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 800), 4-[Bis-(2-Piridilmetil)aminometil]benzoil-Phe-AzaGly-Leu-
5 Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 801), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-NMeSer-Phe-AzaGly-LeU“Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 809), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Hyp-Phe“AzaGly-Leu~Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 810),
i Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Gly-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp“NH2 (Composto No. 813), Ac-D-Tyr-Hyp“Asn-Ala-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 814), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-D-Ala-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-
15 NH2 (Composto No. 815), Ac-D-Tyr-Hyp-His-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 816), Ac-D-Tyr-Hyp-Gln-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 843),
• Ac-D-Tyr-Hyp-D-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No. 844), Ac-D-Tyr-Hyp-Cit-Thr“Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 845), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-D-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-
25 NH2 (Composto No. 846), Ac-D~Tyr-Hyp-Asn-Tlir-Phe-AzaGlyAla(cPr)-Arg(Me)-Trp- NH2 (Composto No 856), 4-Ureidobenzoil-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 860),
Ac-D-Tyr-Hyp-Arg-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No 861),
Ac-D-Tyr-Hyp-Gly-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No 862),
Ac-D-Tyr-Hyp-Dap-Thr-Phe~AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 863),
Ac-D-Tyr-Hyp-Dab-Thr-Phe~AzaGly-Leu-Arg(Me)“Trp-NH2 (Composto No. 864),
Ac-D-Tyr-Hyp“Asn-Thr-aMePhe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp10 NH2 (Composto No. 868),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(2Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 870),
Ac-D-T yr-Hyp-Asn-Thr-Phe(3Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 872),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(4Me)-AzaGlyLeU“Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 874),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-treo-Ser(3FeniI)-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 877),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-eritro- Ser(3Fenil)- AzaGly-Leuφ) Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 882),
Ac-D-Tyr-Hyp-Nva-Thr-Phe-AzaGlyLeu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No 886),
3-(p-Hidróxifenil)propionil-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NlI2 (Composto No. 888),
Ac-D-Tyr-cisHyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)~Trp“
NH2 (Composto No 896),
Ac-D-Tyr-Pro(4F)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 897),
Ac-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
(Composto No. 899) ou um sal do mesmo. (9) Uma pró-droga do derivado de metastina de acordo com (1) ou um sal do mesmo. (10) Uma pró-droga do derivado de metastina de acordo com
5 (7) ou um sal do mesmo. (11) Um medicamento compreendendo o derivado de metastina de acordo com (1) a (8), um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo. (12) O medicamento de acordo com (11), o qual é um agente
è° para supressão de metástase cancerígena ou um agente para supressão de crescimento de câncer. (13) O medicamento de acordo com (11), o qual é um agente para prevenção ou tratamento de câncer. (14) 0 medicamento de acordo com (11), o qual é um agente
15 para controle de função placentária. (15) 0 medicamento de acordo com (11), o qual é um agente para prevenção ou tratamento de coriocarcinoma, mola da hidátide, mola invasiva, aborto, hipoplasia fetal, metabolismo anormal de glicose, metabolismo anormal de lipídio ou indução de distribuição.
• (16) 0 medicamento de acordo com (11), o qual é um agente para melhora da função gonadal. (17) 0 medicamento de acordo com (11), o qual é um agente para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependente, infertilidade, endometriose, puberdade precoce ou mioma do útero.
25 (18) 0 medicamento de acordo com (11), o qual é um agente para indução ou estimulação de ovulação. (19) O medicamento de acordo com (11), o qual é um agente secretagogo de hormônio gonadotrópico ou um agente secretagogo de hormônio sexual.
(20) O medicamento de acordo com (11), o qual é um agente para prevenção ou tratamento de mal de Alzheimer, Autismo ou lesão cognitiva moderada.
(21) Um método para supressão de metástase cancerígena ou 5 crescimento de câncer, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8), um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(22) Um método de prevenção ou tratamento de câncer, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado
K) de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(23) Um método para controle de função placentária, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(24) Um método para prevenção ou tratamento de coriocarcinoma, mola da hidátide, mola invasiva, aborto, hipoplasia fetal, metabolismo anormal de glicose, metabolismo anormal de lipídio ou indução de distribuição, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma |D dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(25) Um método para melhora da função gonadal, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(26) Um método para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependente, infertilidade, endometriose, puberdade precoce ou mioma do útero, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(27) Um método para indução ou estimulação de ovulação, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(28) Um método para promoção de secreção de hormônio gonadotrópico ou promoção de secreção de hormônio sexual, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do
(29) Um método para prevenção ou tratamento de mal de
Alzheimer, Autismo ou lesão cognitiva moderada, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(30) O medicamento de acordo com (11), o qual é um agente para regulação negativa de hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual.
(31) O medicamento de acordo com (11), o qual é um agente para regulação negativa de proteína OT7T175 humana (receptor de metastina) ·>
consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO 9.
(32) O agente de acordo com (30) ou (31), o qual é um agente para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependente.
(33) Um método para regulação negativa de hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(34) Um método para regulação negativa de proteína
OT7T175 humana (receptor de metastina) consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ DD NO: 9, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina
35, de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
(35) Um método para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependente, o qual compreende administração, a um mamífero, de uma dose eficaz do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal 5 do mesmo ou uma pró-droga do mesmo.
A presente invenção ainda proporciona as características a seguir e assim por diante.
(36) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou
um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um ) agente para supressão de metástase cancerígena ou um agente para supressão de crescimento de câncer.
(37) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um agente para prevenção ou tratamento de câncer.
(38) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um agente para controle de função placentária.
(39) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um ^0 agente para prevenção ou tratamento de coriocarcinoma, mola da hidátide, mola invasiva, aborto, hipoplasia fetal, metabolismo anormal de glicose, metabolismo anormal de lipídio ou indução de distribuição.
(40) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um agente para melhora da função gonadal.
(41) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um agente para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependente, infertilidade, endometriose, puberdade precoce ou mioma do útero.
(42) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um agente para indução ou estimulação de ovulação.
(43) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou 5 um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um agente secretagogo de hormônio gonadotrópico ou um agente secretagogo de hormônio sexual.
(44) Uso do derivado de metastina de acordo com (1) a (8) ou um sal do mesmo ou uma pró-droga do mesmo para a fabricação de um 0 agente para prevenção ou tratamento de mal de Alzheimer, Autismo ou lesão F cognitiva moderada.
Na presente invenção, Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-LeuArg-Phe-NH2 (SEQ ID NO: 16) é referido como metastina 10 (Metastina 10), isto é, MS 10.
Aqui, a Tyr N-terminal e a Phe C-terminal em MS 10 são contadas como as posições 1 e 10, respectivamente.
Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly~Leu-Arg-Phe-NH2
123 456789 10
Por exemplo, [HphlOJMSlO significa um peptídeo em que Phe no C término (posição 10) de MS 10 é substituída por Hph.
Por exemplo, des(l)-MS10 significa um peptídeo em que Tyr no N término (posição 1) de MS 10 é deletada.
Por exemplo, des(l-3)-Fmoc-MS10 significa um peptídeo em que Tyr-Asn-Trp no N término (posições 1 a 3) é deletada e o grupo amino de 25 Asn na posição 4 é modificado com Fmoc
Por exemplo, des(l)-Ac-[D-Tyr2,D-Trp3,Thr5,AzaGly7,DArg9,Trpl0]MS10 do Composto No. 708 significa um peptídeo em que a extremidade amino de MS 10 é modificada com Ac, Tyr no N término (posição 1) é deletada, Asn na posição 2 é substituída por D-Tyr, Trp na posição 3 é substituída por D-Trp, Ser na posição 5 é substituída por Thr, Gly na posição 7 é substituída por AzaGly, Arg na posição 9 é substituída por DArg e Phe na posição 10 é substituída por Trp, isto é, Ac-D-Tyr-D-Trp-AsnThr-Phe-AzaGly-Leu-D-Arg-Trp-NH2.
Nas fórmulas descritas acima, XXO representa um grupo de modificação na extremidade amino; e cada um de XX2, XX3, XX4, XX5, XX6, XX8, XX9 e XX10 representa as posições 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9 e 10 de MS 10 descrita acima, respectivamente.
Cada ligação química entre XXO, XX2, XX3, XX4, XX5, XX6, AzaGly, XX8, XX9 e XXI0 e NH2 na fórmula: XX0-XX2-XX3-XX4XX5-XX6-AzaGly-XX8-XX9-XX10-NH2 representa os seguintes significados.
A ligação química na fórmula XX0-XX2 significa uma ligação entre o grupo representado por XXO e o grupo amino (grupo a-amino) contido em XX2. Mais especificamente, a fórmula XX0-XX2 representa que o átomo de hidrogênio no grupo amino (NH2) contido em XX2 é substituído por um grupo representado por XXO.
A ligação química na fórmula XX2-XX3 significa que o grupo carboxila (grupo α-carboxila) contido em XX2 é ligado ao grupo amino (grupo α-amino) em XX3 através de uma ligação de amida.
A ligação química nas fórmulas XX3-XX4, XX4-XX5, ΧΧό-ΧΧό,” XX8-XX9 e XX9-XX10 têm o mesmo significado conforme descrito acima.
A ligação química na fórmula XX6-AzaGly significa que o grupo carboxila (grupo α-carboxila) contido em XX6 é ligado ao grupo amino (grupo α-amino) em AzaGly [azaglicina] através de uma ligação de amida.
A ligação química na fórmula AzaGly-XX8 significa que o grupo carboxila (grupo a-carboxila) contido em AzaGly é ligado ao grupo amino (grupo oc-amino) em XX8 através de uma ligação de amida.
A ligação química na fórmula XX10-NH2 representa a ligação entre o grupo carboxila (grupo α-carboxila) e -NH2. Mais especificamente, a fórmula XX10-NH2 indica que -OH no grupo carboxila 5 (-COOH) contendo XX10 é substituído por -NH2.
Onde XX2, XX3, XX4 e/ou XX5 representam a ligação química essas ligações químicas têm o mesmo significado conforme descrito acima.
Exemplos específicos dessas ligações químicas incluem as
) ligações representadas pelas fórmulas estruturais mostradas na TABELA 1B depois descritas e assim por diante.
Na fórmula descrita acima, XXO representa formila, uma Ci_2o alcanoíla (por exemplo, acetila, propionila, butirila, hexanoíla, decanoíla, etc.;
de preferência representa uma Ομ6 alcanoíla, tal como acetila, propionila, butirila, etc.; mais preferivelmente, acetila, etc.), ciclopropanocarbonila, 6(acetil-D-arginilamino)caproíla, 6-((R)-2,3-diaminopropionilamino)caproíla,
6-(D-norleucilamino)caproíla,
4-(D-arginilamlno)butirila,
3-(4hidróxifenil)propionila, glicila, tirosila, acetilglicila, acetiltirosila, D-tirosila, acetil-D-tirosila, piroglutamila, 3-(piridin-3-il)propionila, adipoíla, glicoloíla,
6-aminocaproíla,
6-acetilaminocaproíla,
4-[bis-(2piridilmetil)aminometil]benzoíla ou 4-ureidobenzoíla, de preferência, representa uma ϋμΐ2 alcanoíla, 6-aminocaproíla, 6-acetilaminocaproíla, glicoloíla, 4-[bis-(2-piridilmetil)aminometil]benzoíla, 4-ureidobenzoíla, 3-(4hidróxifenil)propionila ou piroglutamila, mais preferivelmente, representa 25 formila, uma Ci_6 alcanoíla ou glicoloíla, ainda mais preferivelmente, representa uma Ci.6 alcanoíla ou glicoloíla e, ainda mais preferivelmente, representa acetila ou glicoloíla. Também de preferência, XXO é formila, uma Ci_20 alcanoíla, ciclopropanocarbonila, 6-(acetil-D-arginilamino)caproíla, 6((R)-2,3-diaminopropionilamino)caproíla, 6-(D-norleucilamino)caproíla, 429
(D-arginilamino)butirila, 3-(4-hidróxifenil)propionila, glicila, tirosila, acetilglicila, acetiltirosila, D-tirosila, acetil-D-tirosila, piroglutamila, 3(piridin~3-il)propionila, adipoíla, glicoloíla ou 6-aminocaproíla; também preferidos são formila, a CM 2 alcanoíla, ciclopropanocarbonila, 6-(acetil-D5 arginilamino)caproíla, 6-((R)-2,3-diaminopropionilamino)caproíla, 6-(Dnorleucilamino)caproí la, 4-(D~arginilamino)butirila, 3 -(4hidróxifenil)propionila, glicila, tirosila, acetilglicila, acetiltirosila, D-tirosila, acetil-D-tirosila, piroglutamila, 3-(piridin-3-il)propionila, adipoíla, glicoloíla e 6-aminocaproíla.
Na fórmula acima, XX2 representa Tyr, D-Tyr, D-Ala, D-Leu,
D-Phe, D-Lys, D-Trp ou uma ligação química; de preferência representa DTyr, Tyr ou uma ligação química; mais preferivelmente representa D-Tyr ou uma ligação química; e, ainda mais preferivelmente, representa D-Tyr.
Na fórmula acima, XX3 representa (i) um aminoácido em que o grupo α-amino pode ser opcionalmente metilado (um aminoácido selecionado do grupo consistindo de Ala [alanina], Arg [arginina], Asn [asparagína], Asp [ácido aspártico], Cys [cisteína], Gin [glutamina], Glu [ácido glutâmico], Gly [glicina], His [histidina], Ile [isoleucina], Leu [leucina], Lys [lisina], Met [metionina], Phe [fenilalanina], Ser [serina], Thr [treonina], Trp [triptofano], Tyr [tirosina] e Vai [valina]), (ii) um aminoácido cíclico (um aminoácido cíclico selecionado de Pro [prolina], Aze(2), Aze(3), Pic(2), Pic(3), Hyp, Thz, Abz(2), Abz(3), Pzc(2), Pro(4NH2), Hyp(Bzl), cisHyp, Pro(4F) e lzc)), (iii) um aminoácido selecionado de D-Dap, D-Pya(4), DL-Ala(Pip), Om, Aib e Tyr(PO3H2) ou (iv) uma ligação química.
Aqui, Aze(2) representa [ácido azetidina-2-carboxílico],
Aze(3) representa [ácido azetidina-3-carboxílico], Pic(2) representa [ácido pipecolínico], Pic(3) representa [ácido 3-piperidinacarboxílico], D-Dap representa [D-ácido 2,3-diaminopropiônico], D-Pya(4) representa [4-piridilD-alanina], Hyp representa [trans-4-hidróxiprolina], Thz representa
2k£
[tioprolina], Aib representa [ácido α-aminoisobutanóico], Abz(2) representa [ácido 2-aminobenzóico], Abz(3) representa [ácido 3-aminobenzóico], lzc representa [ácido imidazolidina-2-carboxílico], DL-Ala(Pip) representa [DL(4-piperidin-l-il)alanina], Pzc(2) representa [ácido piperazina-2-carboxílico],
5 Om representa [omitina], Ty(PO3H2) representa [O-fosfotirosina], Pro(4NH2) representa [cis-4-aminoprolina], Hyp(Bzl) representa [trans-4- benzilóxiprolina], cisHyp representa [cis-4-hidróxiprolina], e Pro(4F) representa [trans-4-fluoroprolina]. Aqui, o aminoácido pode ser um L-aminoácido ou um D-
è° aminoácido. Alanina pode ser α-alanina ou β-alanina, a menos que de outro modo indicado. De preferência, XX3 é D-Asp, D-Dap [ácido D-2,3diaminopropiônico], D-Ser, D-Gln, D-His, D-Trp, D-Tyr, D-Pya(4), D-
• NMeAla [D-Na-metilalanina], D-NMePhe [D- Na-metilfenilalanina], Aze(2), Aze(3) [ácido azetidina-3-carboxílico], Pic(2), Pic(3), Hyp, Thz, NMeAla,
15 Gly, Aib, Abz(2), Abz(3), Sar, lzc, Leu, Lys, Glu, Thr, Trp, Ser, Ala, NMeAla, β-alanina, Pzc(2), Om, His(3Me) [3-metilhistidina], Tyr(PO3H2), Pro(4NH2), Hyp(Bzl), cisHyp, Pro(4F) ou uma ligação química; mais preferivelmente, representa D-Asp, D-Dap, D-Ser, D-Gln, D-His, D-Trp, DTyr, D-Pya(4) D-NMeAla, D-NMePhe, Aze(2), Aze(3), Pic(2), Pic(3), Hyp,
•θ Thz, Gly, Aib, Abz(2), Sar, lzc, Leu, Lys, Glu, Thr, Trp, Ser, Ala, NMeAla, β-alanina, DL-Ala(Pip), Pzc(2), Om, His(3Me), Tyr(PO3H2), Pro(4NH2), Hyp(Bzl), cisHyp, Pro(4F) ou uma ligação química; particularmente de preferência, representa D-Gln, D-His, Aze(2), Pic(2), Hyp, Thz, Gly, Aib, DNMeAla, Leu, Lys, Glu, Om, His(3Me), Tyr(PO3H2), Pro(4NH2), D-
25 NMePhe, Hyp(Bzl), cisHyp ou Pro(4F), ainda mais preferivelmente, representa Aze(2), Hyp, Gly, Aib, Leu, Lys, Glu, His(3Me), Tyr(PO3H2), Hyp(Bzl), cisHyp ou Pro(4F) e, ainda mais preferivelmente, representa Hyp, Glu, Hyp(Bzl) ou Pro(4F). Como XX3, D-Asp, D-Dap, D-Ser, D-Gln, D-His, D-NMeAla, D-NMePhe, Aze(2), Pic(2), Pic(3), Hyp, Thz, NMeAla, Gly, Aib,
Abz(2), Abz(3), Sar, Leu, Lys, Glu, β-alanina, Pzc(2), Om, His(3Me), Tyr(PO3H2), Pro(4NH2) ou Hyp(Bzl) é também preferido.
Na fórmula acima, XX4 representa Asn, ácido 2-amino-3
ureidopropiônico, ácido Np-formil-p~diaminopropiônico, ácido Np-acetil^~ 5 diaminopropiônico, N°~pentilasparagina, N®-ciclopropilasparagina, Νωbenzilasparagina, ácido 2,4-diaminobutanóico, ácido 2,3-diaminopropiônico, His, Gin, Gly, Arg, Cit, Nva, D-Asn ou uma ligação química; de preferência representa Asn, ácido 2~amino-3-ureidopropiônico, N“-pentilasparagina, Νωciclopropilasparagina, N“-benzilasparagina, ácido 2,4-diaminobutanóico, ) ácido 2,3-diaminopropiônico, His, Gin, Gly, Arg, Cit, Nva, D-Asn ou uma ligação química; mais preferivelmente, representa Asn ou ácido 2-amino-3ureidopropiônico. Também de preferência, XX4 representa Asn, ácido 2amino-3-ureidopropiônico, ácido Np-formil^-diaminopropiônico, ácido Νβacetil^-diaminopropiônico, N“-pentilasparagina, N“-ciclopropilasparagina, 15 N°-benzilasparagina, ácido 2,4-diaminobutanóico, His, Gin, Cit ou D-Asn; ou
Asn, ácido 2-amino-3-ureidopropiônico, ácido N“-formildiaminopropiônico, ácido N“-acetildiaminopropiônico, N°-pentilasparagina, Νωciclopropilasparagina, N°-benzilasparagina ou ácido 2,4-diaminobutanóico é também preferido.
Na fórmula descrita acima, XX5 representa Ser, Thr, Vai,
NMeSer, Gly, Ala, Hyp, D-Ala, D-Thr, D-Pro ou uma ligação química; de preferência, representa Thr, NMeSer, Gly, Ala, Hyp, D-Ala, D-Thr, D-Pro ou uma ligação química; mais preferivelmente, representa Ser, Thr ou Ala e, ainda mais preferivelmente, representa Thr. Também, de preferência, XX5 é 25 Ser, Thr, Vai, NMeSer, Gly, Ala, Hyp, D-Ala ou D-Thr; ou Ser, Thr ou Vai é também preferido.
Na fórmula descrita acima, XX6 representa Phe, Tyr, Trp,
Tyr(Me), Thi, Nal(2), Cha, Pya(4), treo-Ser(3Fenila), eritro-Ser(3Fenila) ou uma fenilalanina opcionalmente substituída. Aqui, o substituinte na
fenilalanina opcionalmente substituída inclui, por exemplo, oxo, um átomo de halogênio (por exemplo, flúor, cloro, bromo, iodo, etc.), um alquilenodióxí de Cu (por exemplo, metilenodióxi, etilenodióxi, etc.), nitro, ciano, uma Cr6 alquila opcionalmente substituída, uma C2.6 alquenila opcionalmente 5 substituída, uma C2.g alquinila opcionalmente substituída, uma C3.8 cicloalquila opcionalmente substituída, uma Cô-u arila opcionalmente substituída, uma C7_i6 aralquila opcionalmente substituída, um Ci-6 alcóxi opcionalmente substituído, hidróxi, um Cg-u arilóxi opcionalmente substituído, um C7_iô aralquilóxi opcionalmente substituído, mercapto, um Cr6 10 alquiltio opcionalmente substituído, um Cg-u ariltio opcionalmente substituído, um C7_ig aralquiltio opcionalmente substituído, um amino opcionalmente substituído, um mono- ou di-Ci-galquil-amino opcionalmente substituído (por exemplo, metilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino, propilamino, isopropilamino, etc.), um mono- ou di-C2_6 alquenil-amino 15 opcionalmente substituído (por exemplo, vinilamino, propenilamino, isopropenilamino), um C2.g alquinil-amino opcionalmente substituído (por exemplo, 2-butin-l-il-amÍno, 4-pentin-l-il-amino, 5-hexin-l-il-amino), um mono- ou di-C3_8 cicloalquil-amino opcionalmente substituído (por exemplo, ciclopropilamino, ciclohexilamino), um Cg_í4 aril-amino opcionalmente substituído (por exemplo, fenilamino, difenilamino, naftilamino), um Ci-g alcóxi-amino opcionalmente substituído (por exemplo, metóxiamino, etóxiamino, propóxiamino, isopropóxiamino), formilamino, um Crg alquilcarbonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, acetilamino, propionilamino, pivaloilamino, etc.), um C3.8 cicloalquil-carbonilamino 25 opcionalmente substituído (por exemplo, ciclopropilcarbonilamino, ciclopentilcarbonilamino, ciclohexilcarbonilamino, etc.), um Cg-14 arilcarbonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, benzoilamino, naftoilamino, etc.), um Cpg alcóxi-carbonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, metóxicarbonilamino, etóxicarbonilamino,
propóxicarbonilamino, butóxicarbonilamino, etc.), um Ci_6 alquilsulfonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, metil-sulfonilamino, etil-sulfonilamino, etc.), um C6_14 aril-sulfonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, fenil-sulfonilamino, 2-naftil-sulfonilamino, l-naftil5 sulfonilamino, etc.)], formila, carbóxi, uma Ci~6 alquil-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, acetila, propionila, pivaloíla, etc.), uma C3_g cicloalquil-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, ciclopropilcarbonila, ciclopentilcarbonila, ciclohexilcarbonila, 1 metilciclohexil-carbonila, etc.), uma Q-i4 aril-carbonila opcionalmente 10 substituída (por exemplo, benzoíla, 1-naftoíla, 2-naftoíla, etc.), uma C7.16 aralquil-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, fenilacetila, 3fenilpropionila, etc.), uma carbonila heterocíclica de 5 a 7 elementos opcionalmente substituída contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionadas de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de 15 carbono (por exemplo, nicotinoíla, isonicotinoíla, tenoíla, furoíla, morfolinocarbonila, tiomorfolinocarbonila, piperazin-1-Ílcarbonila, pirrolidin1-ilcarbonila, etc.), uma carboxila opcionalmente esterificada, um grupo carbamoíla opcionalmente substituído, uma Cpe alquil-sulfonila
opcionalmente substituída (por exemplo, metil-sulfonila, etil-sulfonila, etc.), uma C1-6 alquil-sulfinila opcionalmente substituída (por exemplo, metilsulfinila, etil-sulfinila, etc.), uma Ce. 14 aril-sulfonila opcionalmente substituída (por exemplo, fenil-sulfonila, 1 -naftil-sulfonila, 2-naftil-sulfonila, etc.), uma
Cô-i4 aril-sulfinila opcionalmente substituída (por exemplo, fenil-sulfmila, 1naftil-sulfinila, 2-naftil-sulfmila, etc.), um Cr6 alquil-carbonilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, acetóxi, propionilóxi, etc.), um Cô_i4 aril-carbonilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, benzoilóxi, naftilcarbonilóxi, etc.), um C]-6 alcóxi-carbonilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, metóxicarbonilóxi, etóxicarbonilóxi, propóxicarbonilóxi, butóxicarbonilóxi, etc.), um mono-CX alquilcarbamoilóxi opcionalmente &
substituído (por exemplo, metilcarbamoilóxi, etilcarbamoilóxi, etc.), um diCi-6 alquilcarbamoilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, dimetilcarbamoilóxi, dietilcarbamoilóxi, etc.), um mono- ou di-C6.14 arilcarbamoilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, fenilcarbamoilóxi, 5 naftilcarbamoilóxi, etc.), um grupo heterocíclico opcionalmente substituído, sulfo, sulfamoíla, sulfinamoíla, sulfenamoíla ou um grupo de 2 ou mais (por exemplo, 2 ou 3) desses substituintes combinados e semelhantes (Grupo Substituinte A). 0 número dos substituintes não está particularmente limitado, mas esses grupos podem ter 1 a 5, de preferência 1 a 3 substituintes em i posições substituíveis e, quando existem dois ou mais substituintes, cada substituinte pode ser o mesmo ou diferente.
O grupo carboxila opcionalmente esterificado no Grupo
Substituinte A inclui, por exemplo, uma Ci_6 alcóxi-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, metóxicarbonila, etóxicarbonila, propóxicarbonila, 15 terc-butóxicarbonila, etc.), uma Q44 arilóxi-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, fenóxicarbonila, etc.), uma C7-16 aralquilóxicarbonila opcionalmente substituída (por exemplo, benzilóxicarbonila, fenetilóxicarbonila, etc.) e semelhantes.
A ”Cr6 alquila na Ci-6 alquila opcionalmente substituída no
Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, neopentila, hexila, etc.
A C2-6 alquenila na C2_6 alquenila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, vinila, propenila, 25 isopropenila, 2-buten-l-ila, 4-penten-l-ila, 5-hexen-l-ila, etc.
A C2_6 alquinila na C2_6 alquinila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, 2-butin-l-ila, 4pentin-l-ila, 5-hexin-l-ila, etc.
A C3_8 cicloalquila na C3-8 cicloalquila opcionalmente
substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, etc. A C6.]4 arila na C6.I4 arila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, fenila, 1-naftila, 2-naftila, 2-
5 bifenilila, 3-bifenilila, 4-bifenilila, 2-antrila, etc. A C7-16 aralquila na C746 aralquila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, benzila, fenetila, difenilmetila, 1-naftilmetila, 2-naftilmetila, 2,2-difeniletila, 3-fenilpropila, 4fenilbutila, 5-fenilpentila, 2-bifenilmetila, 3-bifenilmetila, 4-bifenilmetila),
è° etc. 0 Cr6 alcóxi no Cr6 alcóxi opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, butóxi, isobutóxi, sec-butóxi, pentilóxi, hexilóxi, etc. 0 Ce. 14 arilóxi no C6.i4 arilóxi opcionalmente substituído
15 no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, fenilóxi, 1-naftilóxi, 2-naftilóxi, etc.
O Cy-ió aralquilóxi no C7-16 aralquilóxi opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, benzilóxi, fenetilóxi, etc.
O Cr6 alquiltio no Ci-6 alquiltio opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, metiltio, etiltio, propiltio, isopropiltio, butiltio, sec-butiltio, terc-butiltio, etc.
O Cô-u ariltio no C6_i4 ariltio opcionalmente substituído no
Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, feniltio, 1 -naftiltio, 2-naftiltio, etc.
O C7.]6 aralquiltio no C7_i6 aralquiltio opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, benziltio, fenetiltio, etc.
Os substituintes para esses grupos Ci-6 alcóxi-carbonila, Cj6 alquila, C2_6 alquenila, C2_6 alquinila, C]-6 alcóxi, Ci-6 alquiltio, C]-6
alquil-amino, C2-6 alquenil-amino, C2-6 alquinil-amino, Cr6 alcóxiamino, Cr6 alquil-carbonila, ”Cr6 alquil-sulfonila”, C]-6 alquil-sulfinila, C]“6 alquil-carbonilamino, Ci_6 alcóxi-carbonilamino, Cr6 alquilsulfonilamino, ”Cr6 alquil-carbonilóxi, Cr6 alcóxi-carbonilóxi, ”mono-Cr 5 6 alquilcarbamoilóxi e di-Cj-g alquilcarbamoilóxi no Grupo Substituinte A incluem, por exemplo, 1 a 5 substituintes selecionados de, por exemplo, um átomo de halogênio (por exemplo, átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de iodo), carbóxi, hidróxi, amino, um mono- ou di-Cpó alquilamino, um mono- ou di-C6„14 arilamino, uma C3.8 cicloalquila, um Cr6 alcóxi, uma Ci-6 alcóxi-carbonila, um Crg alquiltio, uma Crg alquil-sulfinila, uma Ci-6 alquil-sulfonila, a carboxila opcionalmente esterificada descrita acima, carbamoíla, tiocarbamoíla, uma mono-Ci-g alquilcarbamoíla (por exemplo, metilcarbamoíla, etilcarbamoíla, etc.), uma di-Cr6 alquilcarbamoíla (por exemplo, dimetilcarbamoíla, dietilcarbamoíla, etilmetilcarbamoíla, etc.), 15 uma mono- ou di-Cg-u arilcarbamoíla (por exemplo, fenilcarbamoíla, 1naftilcarbamoíla, 2-naftilcarbamoíla, etc.), uma mono- ou di-carbamoíla heterocícüca de 5 a 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono (por exemplo, 2-piridilcarbamoíla, 3-piridilcarbamoíla, 4>0 piridilcarbamoíla, 2-tienilcarbamoíla, 3-tienilcarbamoíla, etc.) e semelhantes.
Os substituintes para a Cg_i4 arilóxi-carbonila, C7_ig aralquilóxi-carbonila, C3.8 cicloalquila, Cg_i4 arila, C7_i6 aralquila, Cg. i4 arilóxi, C7_ig aralquilóxi, Cô-u ariltio, C7_i6 aralquiltio, C3.8 cicloalquil-amino, Cg_i4 aril-amino, C3.8 cicloalquil-carbonila, C6-i4 aril25 carbonila, C7_i6 aralquil-carbonila, carbonila heterocícüca de 5 a 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono, Cg.i4 aril-sulfonila, C6.i4 aril-sulfinila, C3.8 cicloalquil-carbonilamino, C6-i4 aril-carbonilamino, Cg-u aril-sulfonilamino, Cg_i4 aril-carbonilóxi e
mono- ou di-C6_i4 aril-carbamoilóxi no Grupo Substituinte A incluem, por exemplo, 1 a 5 substituintes selecionado de, por exemplo, um átomo de halogênio, hidróxi, carbóxi, nitro, ciano, a Cr6 alquila opcionalmente substituída descrita acima, a C2.ó alquenila opcionalmente substituída descrita 5 acima, a C2_6 alquinila opcionalmente substituída descrita acima, a C3_8 cicloalquila opcionalmente substituída descrita acima, o alcóxi opcionalmente substituído descrito acima, o Cj-6 alquiltio opcíonalmente substituído descrito acima, a Ci^ alquil-sulfmila opcionalmente substituída descrita acima, a Ci-6 alquil-sulfonila opcionalmente substituída descrita ) acima, a carboxila opcionalmente esterificada descrita acima, carbamoíla, tiocarbamoíla, uma mono-Ci-6 alquilcarbamoíla, uma di-Ci-6 alquilcarbamoíla, uma mono- ou di-Cé-u arilcarbamoíla, uma mono- ou di-carbamoíla heterocíclica de 5 a 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos 15 átomos de carbono e semelhantes.
O grupo heterocíclico opcionalmente substituído no Grupo
Substituinte A inclui, por exemplo, um grupo heterocíclico de 5 a 14 elementos (monocíclico, bicíclico ou tricíclico) contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio ^0 além dos átomos de carbono, o qual pode ser opcionalmente substituído por um átomo de halogênio, hidróxi, carbóxi, nitro, ciano, a Ci_6 alquila opcionalmente substituída descrita acima, a C2-e alquenila opcionalmente substituída descrita acima, a C2-6 alquinila opcionalmente substituída descrita acima, a C3„8 cicloalquila opcionalmente substituída descrita acima, a Cô-h 25 arila opcionalmente substituída descrita acima, o Ci_6 alcóxi opcionalmente substituído descrito acima, o Cj_6 alquiltio opcionalmente substituído descrito acima, o C6_i4 ariltio opcionalmente substituído descrito acima, o C7.i6 aralquiltio opcionalmente substituído descrito acima, a Ci_6 alquil-sulfinila opcionalmente substituída descrita acima, a Cô-h aril-sulfínila opcionalmente ί
substituída descrita acima, a Ci% alquil-sulfonila opcionalmente substituída descrita acima, a Có-u aril-sulfonila opcionalmente substituída descrita acima, a carboxila opcionalmente esterificada descrita acima, carbamoíla, tiocarbamoíla, uma mono-Cj-ô alquilcarbamoíla, uma di-alquilcarbamoíla 5 inferior, uma mono- ou di-C6_i4 arilcarbamoíla, uma mono- ou di-carbamoíla heterocíclica de 5 ou 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono ou semelhante; de preferência (i) um grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 elementos (de preferência, 5 a 10 elementos), (ii) um W grupo heterocíclico não aromático de 5 a 10 elementos ou (iii) um grupo monovalente formado por um átomo de hidrogênio opcional de um heteroanel ligado em ponte de 7 a 10 elementos e semelhantes, são empregados; dentre os mesmos, usado de preferência é um grupo heterocíclico aromático de 5 elementos. Especificamente usado é um grupo heterocíclico aromático, tal 15 como tienila (por exemplo, 2-tienila, 3-tienila), furila (por exemplo, 2-furila,
3- furila), piridila (por exemplo, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila), tiazolila (por exemplo, 2-tiazolila, 4-tÍazolila, 5-tiazolila), oxazolila (por exemplo, 2oxazolila, 4-oxazolila), quinolila (por exemplo, 2-quinolila, 3-quinolila, 4quinolila, 5-quinolila, 8-quinolila), isoquinolila (por exemplo, 1-isoquinolila, |θ 3-isoquinolila, 4-isoquinolila, 5-isoquinolila), pirazinila, pirimidinila (por exemplo, 2-pirimidinila, 4-pirimidinila), pirrolila (por exemplo, 1-pirrolila, 2pirrolila, 3-pirrolila), imidazolila (por exemplo, 1-imidazolila, 2-imidazolila,
4- imidazolila), pirazolila (por exemplo, 1-pirazolila, 3-pirazolila, 4pirazolila), piridazinila (por exemplo, 3-piridazinila, 4-piridazinila), isotiazolila (por exemplo, 3-isotiazolila), isoxazolila (por exemplo, 3isoxazolila), indolila (por exemplo, 1-indolila, 2-indolila, 3-indolila), 2benzotiazolila, benzo [bjtienila, (por exemplo, 2-benzo[b]tienila, 3benzo[b]tienila), benzo[b]furanila (por exemplo, 2-benzo[b]furanila, 3benzo[bjfuranila), etc., um grupo heterocíclico não aromático, tal como &
pirrolidinila (por exemplo, 1 -pirrolidinila, 2-pirrolidinila, 3-pirrolidinila), oxazolidinila (por exemplo, 2-oxazolidinila), imidazolinila (por exemplo, 1imidazolinila, 2-imidazolinila, 4-imidazolinila), piperidinila (por exemplo, 1piperidinila, 2-piperidinila, 3-piperidinila, 4-piperidinila), piperazinila (por 5 exemplo, 1-piperazinila, 2-piperazinila), morfolino, tiomorfolino, etc.
O grupo carbamoíla opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui um grupo carbamoíla o qual pode ser opcionalmente substituído por Ci_6 alquila opcionalmente substituída, C2_6 alquenila opcionalmente substituída, uma C2.6 alquinila opcionalmente substituída, uma 10 C3.8 cicloalquila opcionalmente substituída, uma arila opcionalmente substituída, um grupo heterocíclico opcionalmente substituído descrita acima, etc. e exemplos específicos são carbamoíla, tiocarbamoíla, uma mono-Ci-6 alquilcarbamoíla (por exemplo, metilcarbamoíla, etilcarbamoíla, etc.), uma diCj-6 alquilcarbamoíla (por exemplo, dimetilcarbamoíla, dietilcarbamoíla, 15 etilmetilcarbamoíla, etc.), uma C]-6 alquil(Cr6 alcóxi)carbamoíla (por exemplo, metil(metóxi)carbamoíla, etil(metóxi)carbamoíla), uma mono- ou di-Cô-14 arilcarbamoíla (por exemplo, fenilcarbamoíla, 1-naftilcarbamoíla, 2naftilcarbamoíla, etc.), uma mono- ou di-carbamoíla heterocíclica de 5 a 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de ^0 átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono (por exemplo, 2-piridilcarbamoíla, 3-piridilcarbamoíla, 4-piridilcarbamoíla, 2tienilcarbamoíla, 3-tienilcarbamoíla, etc.), uma carbamoíla cíclica de 5 a 7 elementos (por exemplo, 1-pirrolidinilcarbonila, 1-piperidinilcarbonila, hexametileno-iminocarbonila) e semelhantes.
O amino opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui um amino o qual pode ser opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados da Ci_6 alquila opcionalmente substituída descrita acima, a C2_g alquenila opcionalmente substituída descrita acima, a C2~6 alquinila opcionalmente substituída descrita acima, a C3.8 cicloalquila opcionalmente $
substituída descrita acima, a C6.14 arila opcionalmente substituída descrita acima, o Ci-6 alcóxi opcionalmente substituído descrito acima, formila, a Cbg alquil-carbonila opcionalmente substituída descrita acima, a C3.8 cicloalquilcarbonila opcionalmente substituída descrita acima, a Cg_i4 aril-carbonila opcionalmente substituída descrita acima, a Ci_6 alcóxi-carbonila opcionalmente substituída descrita acima, a Cr6 alquil-sulfonila opcionalmente substituída descrita acima, a Cg.i4 aril-sulfonila opcionalmente substituída) e semelhantes.
Mais preferivelmente, os substituintes são um átomo de halogênio, hidróxi, um Ci_g alcóxi, uma Cre alquila halogenada opcionalmente substituída, um Ci-6 alcóxi halogenado opcionalmente substituído, amino, nitro, ciano, etc.
. XX6 representa, de preferência, Phe, Tyr, Trp, Tyr(Me) [Ometiltirosina], Thi [2-tienilalanina], Nal(2) [2-naftilalanina], Cha [ciclohexilalanina], Pya(4) [4-piridilalanina], Phe(2F) [2-fluorofenilalanina], Phe(3F) [3-fluorofenilalanina], Phe(4F) [4-fluorofenilalanina], Phe(4Cl) [4clorofenilalanina], aMePhe [a-metilfenilalanina], Phe(2Me), Phe(3Me), Phe(4Me), treo-Ser(3Fenila), eritro-Ser(3Fenila) ou D-Phe, mais preferivelmente representa Phe, Cha, Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F), Phe(4Cl), aMePhe, Phe(2Me), Phe(3Me), Phe(4Me), treo-Ser(3Fenila), eritroSer(3Fenila) ou D-Phe, ainda mais preferivelmente representa Phe, Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F), Phe(4Cl), aMePhe, Phe(2Me), Phe(3Me), Phe(4Me), treoSer(3Fenila), eritro-Ser(3Fenila) ou D-Phe, ainda mais preferivelmente representa Phe, Cha, Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F), Phe(4Cl), Phe(2Me),
Phe(3Me), Phe(4Me), treo-Ser(3Fenila) ou eritro-Ser(3Fenila) e, ainda mais preferivelmente, representa Phe, Cha, Phe(3F) ou Phe(4F) As XX6, Phe, Tyr, Trp, Tyr(Me), Thi, Nal(2), Cha, Pya(4), Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F), Phe(4Cl) ou D-Phe ou Phe, Tyr, Trp, Tyr(Me), Thi, Nal(2), Cha, Pya(4), Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F) ou Phe(4Cl) é também preferido.
Na fórmula descrita acima, AzaGly representa azaglicina.
Na fórmula descrita acima, XX8 representa Leu, Nva [norvalina], Vai ou Ala(cPr) [ciclopropilalanina] e representa, de preferência, Leu ou Ala(cPr). Como XX8, Leu, Nva ou Vai é também preferido.
Na fórmula descrita acima, XX9 representa uma arginina
opcionalmente substituída, uma lisina opcionalmente substituída ou uma omitina opcionalmente substituída. Aqui, substituintes para a arginina opcionalmente substituída, a lisina opcionalmente substituída ou a omitina opcionalmente substituída são 1 ou o número substituível de Ci_6 alquila (por I exemplo, metila, etila, propila, isopropila, butila, etc.), Ci_6 acila (por exemplo, acetila, propionila, etc.). XX9 representa, de preferência, Arg, Om [omitina], Arg(Me) [bT-metilarginina], D-Arg ou Arg (asymMe2) [Νω,ωdimetilarginina assimétrica], mais preferivelmente representa Arg, Arg(Me) ou D-Arg, ainda mais preferivelmente representa Arg ou Arg(Me). Como 15 XX9, Arg, Om, Arg (Me) ou Arg (asymMe2) é também preferido.
Na fórmula descrita acima, XXI0 representa 2-naftilalanina, 2tienilalanina, tírosina, uma fenilalanina opcionalmente substituída ou um triptofano opcionalmente substituído. Aqui, os substituintes na fenilalanina opcionalmente substituída e no triptofano opcionalmente substituído incluem, )0 por exemplo, oxo, um átomo de halogênio (por exemplo, flúor, cloro, bromo, iodo, etc.), um Ci-3 alquilenodióxi (por exemplo, metilenodióxi, etilenodióxi, etc.), nitro, ciano, uma Cr6 alquila opcionalmente substituída, uma C2_6 alquenila opcionalmente substituída, uma C2.6 alquinila opcionalmente substituída, uma C3_8 cicloalquila opcionalmente substituída, uma C6_i4 arila 25 opcionalmente substituída, uma C7_i6 aralquila opcionalmente substituída, um
Cr6 alcóxi opcionalmente substituído, hidróxi, um Cô-m arilóxi opcionalmente substituído, um C7_i6 aralquilóxi opcionalmente substituído, mercapto, um Cr6 alquiltio opcionalmente substituído, um C6_i4 ariltio opcionalmente substituído, um C7_iô aralquiltio opcionalmente substituído, um amino
opcionalmente substituído [amino, um mono- ou di-Ci-g alquil-amino opcionalmente substituído (por exemplo, metilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino, propilamina, isopropilamino, etc.), um mono- ou diC2-6 alquenil-amino opcionalmente substituído (por exemplo, vinilamino, 5 propenilamino, isopropenilamino), um C2-g alquinil-amino opcionalmente substituído (por exemplo, 2-butin-l-il-amino, 4-pentin-l-il-amino, 5-hexin-lil-amino), um mono- ou di-C3.8 cicloalquil-amino opcionalmente substituído (por exemplo, ciclopropilamino, ciclohexilamino), um Cg-u aril-amino opcionalmente substituído (por exemplo, fenilamino, difenilamino, 10 naftilamino), um Cr6 alcóxi-amino opcionalmente substituído (por exemplo, metóxiamino, etóxiamíno, propóxiamino, isopropóxiamino), formilamino, um Ci-6 alquil-carbonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, acetilamino, propionilamino, pivaloilamino, etc.), um C3.8 cicloalquilcarbonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, 15 ciclopropilcarbonilamino, ciclopentilcarbonilamino, ciclohexilcarbonilamino, etc.), um Cg. 14 aril-carbonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, benzoilamino, naftoilamino, etc.), um Crg alcóxi-carbonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, metóxicarbonilamino, etóxicarbonilamino, propóxicarbonilamino, butóxicarbonilamino, etc.), um |D Cr6 alquil-sulfonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, metilsulfonilamino, etil-sulfonilamino, etc.), um Cg_i4 aril-sulfonilamino opcionalmente substituído (por exemplo, fenil-sulfonilamino, 2-naftilsulfonilamino, 1-naftil-sulfonilamino, etc.)], formila, carbóxi, uma Crg alquilcarbonila opcionalmente substituída (por exemplo, acetila, propionila, 25 pivaloíla, etc.), uma C3.g cicloalquil-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, ciclopropilcarbonila, ciclopentilcarbonila, ciclohexilcarbonila, 1metilciclohexil-carbonila, etc.), uma Cg.i4 aril-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, benzoíla, 1-naftoíla, 2-naftoíla, etc.), uma C7.i6 aralquil-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, fenilacetila, 343 /
fenilpropionila, etc.), uma carbonila heterocíclica de 5 a 7 elementos opcionalmente substituída contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono (por exemplo, nicotinoíla, isonicotinoíla, tenoíla, furoíla, morfolinocarbonila, tiomorfolinocarbonila, piperazin-l-ilcarbonila, pirrolidin1-ilcarbonila, etc.), uma carboxila opcionalmente esterificada, um grupo carbamoíla opcionalmente substituído, uma Ci_6 alquil-sulfonila opcionalmente substituída (por exemplo, metil-sulfonila, etila sulfonila, etc.), uma Cr6 alquil-sulfinila opcionalmente substituída (por exemplo, metil10 sulfmila, etil-sulfinila, etc.), uma Cô-u aril-sulfonila opcionalmente substituída (por exemplo, fenil-sulfonila, 1-naftil-sulfonila, 2-naftil-sulfonila, etc.), uma Ce-u aril-sulfinila opcionalmente substituída (por exemplo, fenil-sulímila, 1naftil-sulfinila, 2-naftil-sulfinila, etc.), um Cpó alquil-carbonilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, acetóxi, propionilóxi, etc.), um Cô-m aril-carbonilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, benzoilóxi, naftilcarbonilóxi, etc.), um Cp6 alcóxi-carbonilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, metóxicarbonilóxi, etóxicarbonilóxi, propóxicarbonilóxi, butóxicarbonilóxi, etc.), um mono-Crô alquilcarbamoilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, metilcarbamoilóxi, etilcarbamoilóxi, etc.), um di|0 Cj-6 alquilcarbamoilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, dimetilcarbamoilóxi, dietilcarbamoilóxi, etc.), um mono- ou di-Có-u arilcarbamoilóxi opcionalmente substituído (por exemplo, fenilcarbamoilóxi, naftilcarbamoilóxi, etc ), um grupo heterocíclico opcionalmente substituído, sulfo, sulfamoíla, sulfinamoíla, sulfenamoíla ou um grupo de 2 ou mais (por exemplo, 2 ou 3) desses substituintes combinados e semelhantes (Grupo Substituinte A). O número dos substituintes não está particularmente limitado, mas esses grupos podem ter 1 a 5, de preferência 1 a 3 substituintes em posições substituíveis e, quando existem dois ou mais substituintes, cada substituinte pode ser o mesmo ou diferente.
O grupo carboxila opcionalmente esterificado no Grupo ·'
Substituinte A inclui, por exemplo, uma Cr6 alcóxi-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, metóxicarbonila, etóxicarbonila, propóxicarbonila, terc-butóxicarbonila, etc.), uma Cg. 14 arilóxi-carbonila opcionalmente substituída (por exemplo, fenóxicarbonila, etc.), uma Cy.ig aralquilóxicarbonila opcionalmente substituída (por exemplo, benzilóxicarbonila, fenetilóxicarbonila, etc.) e semelhantes.
A Cb6 alquila na Ci-g alquila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila, isopentila, neopentila, hexila, etc.
A C2-6 alquenila na C2-6 alquenila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, vinila, propenila, isopropenila, 2-buten-l-ila, 4-penten-l-ila, 5-hexen-l-ila, etc.
A C2_6 alquinila na C2_6 alquinila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, 2-butin-l-ila, 4pentin-l-ila, 5-hexin-l-ila, etc.
A C3-8 cicioalquila na C3.8 cicioalquila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, etc.
A Có_i4 arila na Cg-u arila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, fenila, 1-naftila, 2-naftila, 2bifenilila, 3-bifenilila, 4-bifenilila, 2-antrila, etc.
A C7-16 aralquila na C7.ig aralquila opcionalmente substituída no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, benzila, fenetila, difenilmetila, 1-naftilmetila, 2-naftilmetila, 2,2-difeniletila, 3-fenilpropila, 4fenilbutila, 5-fenilpentila, 2-bifenilmetila, 3-bifenilmetila, 4-bifenilmetila, etc.
O C1-6 alcóxi no Cr6 alcóxi opcionalmente substituído no
Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, butóxi, isobutóxi, sec-butóxi, pentilóxi, hexilóxi, etc.
O C6.i4 arilóxi no C6„i4 arilóxi opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, fenilóxi, 1-naftilóxi, 2-naftilóxi, etc.
O C7_i6 aralquilóxi no C7-16 aralquilóxi opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, benzilóxi, fenetilóxi, etc.
O Ci-6 alquiltio no Ci-6 alquiltio opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, metiltio, etiltio, propiltio, ) isopropiltio, butiltio, sec-butiltio, terc-butiltio, etc.
O Cô-i4 ariltio no C6„14 ariltio opcionalmente substituído no
Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, feniltio, 1-naftiltio, 2-naftiltio, etc.
O C7-i6 aralquiltio no C7_i6 aralquiltio opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, benziltio, fenetiltio, etc.
Os substituintes para esses grupos Cre alcóxi-carbonila, Cp alquila, C2-6 alquenila, C2_6 alquinila, ”Cr6 alcóxi, Cró alquiltio, Ci_ alquil-amino, C2q, alquenil-amino, C2-ó alquinil-amino, Ci_6 alcóxiamino, Cr6 alquil-carbonila, ”Cr6 alquil-sulfonila, C]_6 alquil-sulfinila, 00 Ci_6 alquil-carbonilamino, Ομ6 alcóxi-carbonilamino, Ci-g alquilsulfonilamino, Cr6 alquil-carbonilóxi, Cr6 alcóxi-carbonilóxi, mono-Cr alquilcarbamoilóxi e di-Ci-6 alquilcarbamoilóxi incluem 1 a 5 substituintes selecionados de, por exemplo, um átomo de halogênio (por exemplo, átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, átomo de iodo), carbóxi, hidróxi, amino, uma mono- ou di-Cj-g alquilamino, uma mono- ou diC6_i4 arilamino, uma C3.8 cicloalquila, um Ci-$ alcóxi, uma Cj-g alcóxicarbonila, um Cr6 alquiltio, uma Cr6 alquil-sulfinila, uma Cr6 alquilsulfonila, a carboxila opcionalmente esterificada descrita acima, carbamoíla, tiocarbamoíla, uma mono-C]-6 alquilcarbamoíla (por exemplo,
6?
metilcarbamoíla, etilcarbamoíla, etc.), uma di-Crg alquilcarbamoíla (por exemplo, dimetilcarbamoíla, dietilcarbamoíla, etilmetilcarbamoíla, etc.), uma mono- ou di-Cg.u arilcarbamoíla (por exemplo, fenilcarbamoíla, 1naftilcarbamoíla, 2-naftilcarbamoíla, etc.), uma mono- ou di-carbamoíla heterocíclica de 5 a 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono (por exemplo, 2-piridilcarbamoíla, 3-piridilcarbamoíla, 4piridilcarbamoíla, 2-tienilcarbamoíla, 3-tienilcarbamoíla, etc.) e semelhantes.
Os substituintes para a Cg-n arilóxi-carbonila, C7_ig aralquilóxi-carbonila, C3_8 cicloalquila, Cg_i4 arila, C7_i6 aralquila, Cg_i4 arilóxi, C746 aralquilóxi, C6_]4 ariltio, C7.j6 aralquiltio, C3_8 cicloalquilamino, C6-i4 aril-amino, C3_8 cicloalquil-carbonila, C6.i4 aril-carbonila, C7.i6 aralquil-carbonila, Carbonila heterocíclica de 5 a 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono, C6.14 arilsulfonila, ”C6.i4 aril-sulfinila, C3.8 cicloalquil-carbonilamino, Cgq4 arilcarbonilamino, Có_i4 aril-sulfonilamino, Cgq4 aril-carbonilóxi e monoou di-Cg-u arilcarbamoilóxi no Grupo Substituinte A incluem 1 a 5 substituintes selecionado de, por exemplo, um átomo de halogênio, hidróxi, |0 carbóxi, nitro, ciano, a Cr6 alquila opcionalmente substituída descrita acima, a C2.g alquenila opcionalmente substituída descrita acima, a C2.g alquimia opcionalmente substituída descrita acima, a C3.8 cicloalquila opcionalmente substituída descrita acima, o Cr6 alcóxi opcionalmente substituído descrito acima, o Cpó alquiltio opcionalmente substituído descrito acima, a Ci_g alquil25 sulfinila opcionalmente substituída descrita acima, a Ci_g alquil-sulfonila opcionalmente substituída descrita acima, a carboxila opcionalmente esterificada descrita acima, carbamoíla, tiocarbamoíla, uma mono-Cr6 alquilcarbamoíla, uma di“Crg alquilcarbamoíla, uma mono- ou di-Cg-u arilcarbamoíla, uma mono- ou di-carbamoíla heterocíclica de 5 a 7 elementos
contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono e semelhantes.
O grupo heterocíclico opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui, por exemplo, um grupo heterocíclico (monocíclico, 5 bicíclico ou tricíclico) contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono o qual pode ser opcionalmente substituído por um átomo de halogênio, hidróxi, carbóxi, nitro, ciano, a Cpô alquila opcionalmente substituída descrita acima, a C2-6 alquenila opcionalmente substituída descrita 10 acima, a C2„g alquinila opcionalmente substituída descrita acima, a C3_g cicioalquila opcionalmente substituída descrita acima, a Cô-u arila opcionalmente substituída descrita acima, o C]-6 alcóxi opcionalmente substituído descrito acima, ο Ομ6 alquiltio opcionalmente substituído descrito acima, o C6.I4 ariltio opcionalmente substituído descrito acima, o C7_i6 15 aralquiltio opcionalmente substituído descrito acima, a Ci_6 alquil-sulfinila opcionalmente substituída descrita acima, a Có-m aril-sulfinila opcionalmente substituída descrita acima, a Cr6 alquil-sulfonila opcionalmente substituída descrita acima, a Cô-u aril-sulfonila opcionalmente substituída descrita acima, a carboxila opcionalmente esterificada descrita acima, carbamoíla, ^0 tiocarbamoíla, uma mono-Cr6 alquilcarbamoíla, uma di-alquilcarbamoíla inferior, uma mono- ou di-Cô-14 arilcarbamoíla, uma mono- ou di-carbamoíla heterocíclica de 5 ou 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono ou semelhante, de preferência, (i) um grupo heterocíclico 25 aromático de 5 a 14 elementos (de preferência, de 5 a 10 elementos), (ii) um grupo heterocíclico não aromático de 5 a 10 elementos ou (iii) um grupo monovalente formado por um átomo de hidrogênio opcional de um heteroanel ligado em ponte de 7 a 10 elementos e, dentre os mesmos, um grupo heterocíclico aromático de 5 elementos é, de preferência, usado.
Especificamente usados são, por exemplo, um grupo heterocíclico aromático tal como tienila (por exemplo, 2-tienila, 3-tienila), furila (por exemplo, 2furila, 3-furila), piridila (por exemplo, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila), tiazolila (por exemplo, 2-tiazolila, 4-tiazolila, 5-tiazolila), oxazolila (por 5 exemplo, 2-oxazolila, 4-oxazolila), quinolila (por exemplo, 2-quinolila, 3quinolila, 4-quinolila, 5-quinolila, 8-quinolila), isoquinolila (por exemplo, 1isoquinolila, 3-isoquinolila, 4-isoquinolila, 5-isoquinolila), pirazinila, pirimidinila (por exemplo, 2-pirimidinila, 4-pirimidinila), pirrolila (por exemplo, 1-pirrolila, 2-pirrolila, 3-pirrolila), imidazolila (por exemplo, 110 imidazolila, 2-imidazolila, 4-imidazolila), pirazolila (por exemplo, 1 pirazolila, 3-pirazolila, 4-pirazolila), piridazinila (por exemplo, 3-piridazinila, 4-piridazinila), isotiazolila (por exemplo, 3-isotiazolila), isoxazolila (por exemplo, 3-isoxazolila), indolila (por exemplo, 1-indolila, 2-indolila, 3indolila), 2-benzotiazolila, benzo[b]tienila, (por exemplo, 2-benzo [b]tienila, 15 3-benzo[b]tienila), benzo[b]furanila (por exemplo, 2-benzo[b]furanila, 3benzo[b]furanila), etc.; um grupo heterocíclico não aromático tal como pirrolidinila (por exemplo, 1 -pirrolidinila, 2-pirrolidinila, 3 -pirrolidinila), oxazolidinila (por exemplo, 2-oxazolidinila), imidazolinila (por exemplo, 1imidazolinila, 2-imidazolinila, 4-imidazolinila), piperidinila (por exemplo, 1|0 piperidinila, 2-piperidinila, 3-piperidinila, 4-piperidinila), piperazinila (por exemplo, 1-piperazinila, 2-piperazinila), morfolino, tiomorfolino, etc.
O grupo carbamoíla opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui um grupo carbamoíla o qual pode ser opcionalmente substituído por Ci-6 alquila opcionalmente substituída, uma C2-6 alquenila 25 opcionalmente substituída, uma C2.6 alquinila opcionalmente substituída, uma C3_8 cicloalquila opcionalmente substituída, uma Cr6 arila opcionalmente substituída, um grupo heterocíclico opcionalmente substituído descrito acima, etc. e exemplos específicos incluem carbamoíla, tiocarbamoíla, uma mono-Cr 6 alquilcarbamoíla (por exemplo, metilcarbamoíla, etila carbamoíla, etc.), di49
Ci-6 alquilcarbamoíla (por exemplo, dimetilcarbamoíla, dietilcarbamoíla, etilmetilcarbamoíla, etc.), Ci% alquil(Ci-6 alcóxi)carbamoíla (por exemplo, metil(metóxi)carbamoíla, etil(metóxi)carbamoíla), uma mono- ou di-Cô-u arilcarbamoíla (por exemplo, fenilcarbamoíla, 1-naftilcarbamoíla, 2naftilcarbamoíla, etc.), uma mono- ou di-carbamoíla heterocíclica de 5 a 7 elementos contendo 1 a 4 heteroátomos de 1 ou 2 espécies selecionados de átomos de nitrogênio, enxofre e oxigênio além dos átomos de carbono (por exemplo, 2-piridilcarbamoíla, 3-piridilcarbamoíla, 4-piridilcarbamoíla, 2tienilcarbamoíla, 3-tienilcarbamoíla, etc.), uma carbamoíla cíclica de 5 a 7 elementos (por exemplo, 1 -pirrolidinilcarbonila, 1 -piperidinilcarbonila, hexametileno-iminocarbonila) e semelhantes.
O amino opcionalmente substituído no Grupo Substituinte A inclui um amino o qual pode ser opcionalmente substituído por 1 ou 2 grupos selecionados da Cr6 alquila opcionalmente substituída descrita acima, a C2_6 alquenila opcionalmente substituída descrita acima, a C2-6 alquinila opcionalmente substituída descrita acima, a C3„8 cicloalquila opcionalmente substituída descrita acima, a C6.14 arila opcionalmente substituída descrita acima, o Ci-6 alcóxi opcionalmente substituído descrito acima, formila, a Cj-6 alquil-carbonila opcionalmente substituída descrita acima, a C3.8 cicloalquilcarbonila opcionalmente substituída descrita acima, a C6_14 aril-carbonila opcionalmente substituída descrita acima, a Cj-6 alcóxi-carbonila descrita acima, a Ci-6 alquil-sulfonila opcionalmente substituída descrita acima, uma Cô-14 aril-sulfonila opcionalmente substituída e semelhantes.
Mais preferivelmente, esses substituintes são um átomo de halogênio, hidróxi, um Ci_6 alcóxi, uma Ci_6 alquila halogenada opcionalmente substituída, um Cró alcóxi halogenado opcionalmente substituído, amino, nitro, ciano, etc.
XXI0 representa, de preferência, Phe, Trp, 2-naftilalanina, 2tienilalanina, tirosina ou 4-fluorofenilalanina, mais preferivelmente representa de
Phe ou Trp, e, ainda mais preferivelmente, representa Trp.
Em uma combinação desses grupos é proporcionado, preferência, um derivado de metastina representado pela fórmula:
XX0-XX2-XX3XX4-XX5-XX6-AzaGly-XX8-XX9-XX10-NH2 (em que:
XXO representa formila, uma Ci% alcanoíla ou glicoloíla;
XX2 representa D-Tyr ou uma ligação química;
XX3 representa Aze(2), Hyp, Gly, Aib, Leu, Lys, Glu, His(3Me), Tyr(PO3H2), Hyp(Bzl) ou Pro(4F);
XX4 representa Asn ou ácido 2-amino-3-ureidopropiônico;
XX5 representa Ser, Thr ou Ala;
XX6 representa Phe, Cha, Phe(2F), Phe(3F), Phe(4F) ou Phe(4Cl);
AzaGly representa azaglicina;
XX8 representa Leu ou Ala(cPr);
XX9 representa Arg ou Arg(Me); e
XXI0 representa Phe ou Trp);
ou um sal do mesmo.
Em uma combinação desses grupos é proporcionado, mais preferivelmente, um derivado de metastina representado pela fórmula:
XX0-XX2-XX3-XX4-XX5-XX6-AzaGly-XX8-XX9-XX10-NH2 (em que:
XXO representa acetila ou glicoloíla (de preferência acetila);
XX2 representa D-Tyr;
XX3 representa Hyp, Glu, Hyp(Bzl) ou Pro(4F);
XX4 representa Asn ou ácido 2-amino-3-ureidopropiônico;
XX5 representa Thr;
XX6 representa Phe, Cha, Phe(3F) ou Phe(4F);
AzaGly representa azaglicina;
e°
ΧΧ8 representa Leu ou Ala(cPr);
XX9 representa Arg ou Arg(Me); e
XXI0 representa Trp);
ou um sal do mesmo.
Nos derivados de metastina, todos os compostos em que os grupos mostrados pelos respectivos símbolos descritos acima são opcionalmente combinados são, de preferência, usados.
Os compostos mostrados pelos números de composto a seguir também são, de preferência, usados:
Composto No.
Trp3 ,Thr5, AzaGly7,D-Arg9,Trp 1OJMS10
Ac-D-TynD-Trp-Asn-Thr-Phc-AzaGly-Leu-D-Arg-Trp-NIL
Composto No. 709: des(l-3)-Ac[Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 710: des(l-3)-Decanoil[Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Decanoil-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 712: des(l-2)[Acp3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl OJMS 10
Acp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 713: des(l-2)-Ac-[Acp3,
Thr5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-Acp-Asn-Thr“Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)~Trp-NH2
Composto No. 714: des(l)-Ac-[D-Tyr2,D~
Trp3, Asp(NHPen)4,Thr5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-D“Trp-Asp(NHPen)-Thr-Phe-AzaGly-LeU“ Arg(Me)-Trp-NH2
Composto
708:
des(l)~Ac-[D-Tyr2,DNo.
715:
des(l)-Ac-[D-Tyr2,D52
Trp3, Asp(NHcPr)4,Thr5, AzaGly 7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHcPr)-Thr-Phe-AzaGly-LeU“
Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 716: des(l)-Ac-[D-Tyr2,D5 Trp3, Asp(NHBzl)4,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHBzl)-Thr-Phe-AzaGly~LeuArg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 717: des(l)-Ac-[D-Tyr2,D~
Trp3, Aib4,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-D-Trp-Alb-Thr-Phe-AzaGly-Leu- Arg(Me)-Trpφ nh2
Composto No. 718: des(l)-Ac-[D-Tyr2,D? Pya(4)3, Aib4;Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-D-Pya(4)-Alb-Thr-Phe-AzaGly~Leu-Arg(Me)-Trp’ 15 NH2
Composto No. 719: des(l)-Ac™[D-Tyr2;D-Trp3,DPro5,AzaGly7,Arg(Me)9,TrplO]MS 10
Ac-D-Tyr-D“Trp-Asn-D-Pro-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)~TrpNH2 φΡ Composto No. 720: des(l)-Ac-[DTyr2, Aze(2)3 ,Thr5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Aze(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 721: des(l)-Ac-[D25 Tyr2,Pic(2)3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-TyrPic(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-LeU“Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 722: des(l)-Ac-[DTyr2,Pic(3)3 ,Thr5, AzaGly 7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D“Tyr-Pic(3)-Asn-Thr~Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 723: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Thr5, AzaGly 7, Arg(Me)9,Trp 1OJMS10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp“NH2
Composto No. 724: des(l)-Ac-[DTyr2,Thz3 ,Thr5, AzaGly 7, Arg(Me)9Trp 1OJMS 10
Ac-D-Tyr-Thz-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)“Trp-NH2
Composto No. 725: des(l)-Ac-[D10 Tyr2;NMeAla3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10 • Ac-D-Tyr-NMeAla-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp“
NH2
Composto No. 726: des(l)-Ac-[DTyr2,Gly3,Thr5, AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 727: des(l)-Ac-[DTyr2, Aib3 ,Thr5, AzaGly7,Arg(Me)9,Tip 10]MS 10
Ac-D“Tyr-Alb-Asn~Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 728: des(l)-Ac-[DφΟ Tyr2, Abz(2)3 ,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Abz(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 730: des(l)-Ac-[DTyr2,Aze(3)3,Thr5?AzaGly7?Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Aze(3)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)“TrpNH2
Composto No. 731:des(l)-Ac-[DTyr2,Sar3,Thr5,AzaGly7JArg(Me)9,Trpl OJMS 10
Ac-D-Tyr-Sar-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 732: des(l)-Ac-[D-Tyr2,DNMeAla3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,TrplO]MS10 Ac-D-Tyr-D-NMeAla-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 734: des(l)-Ac-[DTyr2,Izc3 ,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Izc-Asn-Thr-Phe-AzaGly-LeU“Arg(Me)-Trp-NH2 Composto No. 735 des(l)-Ac-[D-Tyr2,DAsp3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl OJMS 10
Ac-D-Tyr-D-Asp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp• nh2
Composto No. 736: des(l)-Ac-[D-Tyr2,DDap3 ,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1OJMS 10 Ac-D-Tyr-D-Dap“Asn-ThrPhe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp15 NH2
Composto No. 737: des(l)-Ac-[D-Tyr2,DSer3 ,Thr5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10 Ac-DTyr-D-Ser-Asn-Thr-Phe-AzaGly“Leu-Arg(Me)-TrpNH2 φθ Composto No. 738: des(l)-Ac~[D“Tyr2,D~
Gln3 ,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10 Ac-D-Tyr-D-Gln“Asn-Thr~Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 739: des(l)~Ac-[D“Tyr2,D25 His3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl OJMS10
Ac-D-Tyr-D-His-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu~Arg(Me)“TrpNH2
Composto No. 740: des(l)-Ac“[D“Tyr2,DTrp3 ,Dab4,Thr5 ,AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-D-Trp-Dab-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2
Composto No. 742: des(l)-Ac-[DTyr2, Ala3 ,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Ala-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 743: des(l)-Ac-[DTyr2,Leu3,Thr5 ,AzaGly7f Arg(Me)9,Trp 10]MS 10 Ac-D~Tyr-Leu-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 744: des(l)-Ac-[D10 Tyr2,Ser3,Thr5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1OJMS 10
Ac-D-Tyr-Ser-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)TrpNH2
Composto No. 745: des(l)-Ac-[DTyr2,Lys3 ,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1OJMS10 Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe-AzaGly~LeU“Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 746: des(l)-Ac-[DTyr2,Glu3,Thr5 ,AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe-AzaGly-LeU“Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 747: des(l)“Ac-[D-Tyr2,pAla3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-p-Ala-AsriThr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)“Trp-NH2
Composto No. 748: des(l)-Ac-[D-Tyr2,DTrp3,Thr5 ,Phe(4Cl)6,AzaGly7, Arg(Me)9, Trp 1 OJMS 10
AcD-Tyr-D~Trp~Asn-Thr-Phe(4Cl)“AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp“NH2
Composto No. 749: des(l)-Ac-[D-Tyr2,DTrp3 ,Thr5 ,Phe(2F)6, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asn-Thr-Phe(2F)-ÃzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto
No.
750:
des(l)-Ac-[D-Tyr2,D56 ©3
Trp3 ,Thr5,Phe(3F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 754: des(l)-Ac-[D5 Tyr2,Ly s3 ,Thr5 ,Phe(2F)6, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 755: des(l)-Ac-[DTyr2,Glu3,Thr5,Phe(2F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Glu-Asn~Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpMb
Composto No. 756: des(l)-Ac-[DTyr2,Lys3,Thr5 ,Phe(3F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl 0]MS 10
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp~
NH2
Composto No. 757: des(l)-Ac-[DTyr2,Glu3,Thr5,Phe(3F)6;AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGlyLeu-Arg(Me)-TrpNH2 ^0 Composto No. 758: des(l)-Ac-[DTyr2,Lys3,Thr5,Phe(4Cl)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(4Cl)“AzaGly-Leu-Arg(Me)~Trp
NH2
Composto No. 759 des(l)-Ac-[D25 Tyr2sGlu3,Thr5,Phe(4Cl)6}AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D“Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(4Cl)“AzaGly-Leu-Arg(Me)“Trp“
NH2
Composto No. 760: des(l)-Ac-[D~
Tyr2,Pzc(2)3 ,Thr5, AzaGiy7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Pzc(2)-Asn-Thr-Phe- AzaGly-Leu- Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 763: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Thr5sPhe(2F)6íAzaGly7;Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 764: des(l)-Ac-[DTyr25Trp3,Thr5,Phe(2F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Trp-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp10 NH2 • Composto No. 765: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Thr5,Phe(3F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(3 F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 766: des(l)-Ac-[DTyr2,Trp3JThr5,Phe(3F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Trp-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 767: des(l)-Ac-[Dφθ Tyr2,Hyp3,Thr5,Phe(4Cl)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 768: des(l)-Ac-[DTyr2,Trp3,Thr5;Phe(4Cl)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Trp-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 769: des(l)-Ac-[DTyr2,Gly3,Thr5,Phe(4Cl)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp58 νη2
Composto No. 770: des(l)-Ac-[DTyr2JAlb3,Thr5,Phe(4Cl)6,AzaGly7,Arg(Me)9rTrp-10]MST0-Ac-D-Tyr“Alb-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp5 NH2
Composto No. 771: des(l)-Ac-[DTyr2,Om3 ,Thr5, AzaGly 7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Om-Asn-Thr-Phe-AzaGly~Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 772: des(l)-Ac-[D10 Tyr2,Om3]Thr5, AzaGly 7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Thr-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 773: des(l)-Ac-[DTyr2,His(3Me)3,Thr5,AzaGly7,Ai'g(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-His(3Me)~Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp15 NH2
Composto No. 774: des(l)-Ac-[D-Tyr25DLAla(Pip)3 ,Thr5, AzaGly7; Arg(Me)9?Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-DL“Ala(Pip)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 φθ Composto No. 775: des(l)-Ac-[DTyr2,Tyr(PO3H2)3 ,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D“Tyr-Tyr(PO3H2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 776: des(l)-Glicoloil-[D25 Tyr2,Hyp3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,TrplO]MS 10
Glicoloil-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phs-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 777: des(l-2)-Ac-[DTyr3 ,Thr5, AzaGly 7 ,Arg(Me)9,Trp 1OJMS10 ¢6
Ac-DTyr-Asn-Thr-Phe-AzaGly“Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 Composto No. 780: des(l)-Ac-[DTyr2,Pro(4NH2)3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 Ac-D-TyrPro(4NH2)~Asn-Thr-Phe--AzaGly-Leu-Arg(Me)·5 Trp-NH2
Composto No. 781: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp(Bzl)3 ,Thr5)AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Hyp(Bzl)-'Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 782. des(l)-Ac-[D-Tyr2,D• NMePhe3 ,Thr5 ,AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-D-NMePhe-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 783: des(l)-Ac-[D15 Tyr2,Gly3,Thr5,Phe(2F)6,AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1OJMS10
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2
Composto No. 784: des(l)-Ac-[DTyr2, Alb3 ,Thr5 ,Phe(2F)6, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac“D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 785: des(l)-Ac-[DTyr2;Gly3,Thr5,Phe(3F)6;AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac’DTyr-Gly-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp25 NH2
Composto No. 786: des(l)-Ac-[DTyr2,Alb3,Thr5,Phe(3F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 787: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Thr5,Phe(4F)6, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10 Ac-D-Tyr-Hyp“Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)~TrpNH2
Composto No. 788: des(l)-Ac-[DTyr2,Glu3 ,Thr5,Phe(4F)6, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10 Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 789: des(l)-Ac-[D~
Tyr2,Lys3,Thr5,Phe(4F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,TrplO]MS10
Ac-D-Tyr-Lys~Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2
Composto No. 790: des(l)-Ac-[DTyr2,Gly3 ,Thr5 ,Phe(4F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1OJMS 10
Ac~D-Tyr-Gly~Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Lcu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 791: des(l)-Ac-[DTyr2, Alb3 ,Thr5,Phe(4F)6, AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1OJMS 10 Ac-D-Tyr-Alb-Asn~Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp00 NH2
Composto No. 794: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Thr5,DPhe6, AzaGly7 ,Arg(Me)9,Trp 1OJMS10 Ac“D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-D-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 797: des(l)-Ac-[DTyr2;Hyp3,Thr5,AzaGly7,Trpl OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr“Phe-AzaGly-Leu-Arg-Trp-NH2 Composto No. 800: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Alb4,Thr5 ,AzaGly 7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 801: des(l-5)-4-[Bis-(2Piridilmetil)aminometil]benzoil-[AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10] MS 10
4-[Bis-(2-Piridilmetil)aminometil]benzoil-Phe-AzaGly-Leu5 Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 809: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,NMeSer5,AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-NMeSer-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 810: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Hyp5, • AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Hyp-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)~Trp-NH2 * Composto No. 813: des( 1)- Ac- [D-
Tyr2,Hyp3 ,Gly5, AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10 a ,
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Gly-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 814: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,
Ala5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl 0]MS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Ala-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 815: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,DφΟ Ala5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-D-Ala-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 816. des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,His4 ,Thr5, AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-His-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 843: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3vGln4,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1ÕJMS10
Ac-D-Tyr-Hyp-Gln-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 844: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,D62
Asn4,Thr5, AzaGly7; Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-D-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 845: des( 1 )-Ac-[D5 Tyr2,Hyp3 ,Cit4 Jhr5, AzaGly7, Arg(Me)9 ,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Cit-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 Composto No. 846 des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,DThr5, AzaGly7, Arg(Me)9 ,Trp 1 OJMS 10 Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-D-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp10 NH2
Composto No. 856: des(l)-Ac-[DTyr2,HyP3,Thr5?AzaGly7,Ala(cPr)8;Arg(Me)9,Trpl0JMS10 Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Ala(cPr)-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 860: des(l-5)-4-Ureidobenzoil[ AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
4-Ureidobenzoil-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 Composto No. 861: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Arg4,Thr5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10 Ac-D-Tyr-Hyp-Arg-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 862: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Gly4,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Gly-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 Composto No. 863: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Dap4,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 Ac-D-Tyr-Hyp-Dap-Thr-Phe~AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto ””Nõ 864. des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3;Dab4,Thr5?AzaGly7sArg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Dab-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 868: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Thr5,aMePhe6,AzaGly7,Arg(Me)9, Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-aMePhe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 870: des(l)-Ac-[DTyr2?Hyp3 ,Thr5?Phe(2Me)6JAzaGly7,Arg(Me)9,Trpl OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(2Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 872: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Thr5 ,Phe(3Me)6,AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(3Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 874: des(l)-Ac-[DTyr2sHyp3íThr5,Phe(4Me)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(4Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 877: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3Jhr5?treoSer(3Fenila)6, AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-treo-Ser(3 Fenila)-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 882: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Thr5,eritroSer(3Fenila)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-eritro-Ser(3 Fenila)-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 886 des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Nva4,Thr5?AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Nva-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NI-L
Composto No. 887: des(l-2)-Ac[Hyp3 ,Thr51 AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 888: des( 1-2)-3-(p-Hidróxifenil)propionil[Hyp3 ,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl OJMS 10
3-(p-Hidróxifenil)propionil-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu5 Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 889: des(l-2)[pGlu3 ,Thr5, AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10 pGlu-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 896: des(l)-Ac-[D10 Tyr2,cisHyp3Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9]TrplO]MS10
Ac-D-Tyr-cisHyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2
Composto No. 897: des(l)-Ac-[DTyr2,Pro(4F)3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Pro(4F)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2
Composto No. 899: des(l)-Ac[Tyr2,Hyp3,Thr5)AzaGly 7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 ^0 Em particular, os compostos representados pelos seguintes números de composto são preferidos como os derivado de metastina.
Ac-D-Tyr-D-Trp- Asp(NHPen)-Thr-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 714),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHcPr)-Thr-Phe-AzaGly-Leu25 Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 715),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHBzl)-Thr-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 716),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Alb-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 717), &
Ac-D-Tyr-D-Pya(4)-Alb-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΗ2 (Composto No. 718),
Ac-D-Tyr-Aze(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 720),
Ac-D-Tyr-Pic(2)“Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 721), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 723), Ac-D-Tyr-Thz-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 724), Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 726) , Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 727),
Ac-D-Tyr-D-NMeAla-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No 732), Ac-D-Tyr-D-Gln-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 738), Ac-D-Tyr-D-His-Asn-Thr-Phe~AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp^^0 NH2 (Composto No 739), Ac-D-Tyr-D-Trp-Dab-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No 740), Ac-D-Tyr-Ala-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 742),
Ac-D-Tyr-Leu-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 743),
Ac-D-Tyr-Ser-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 744),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
(Composto No. 745),
Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No 746),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)5 Trp-NH2 (Composto No. 748),
Ac-D-Tyr-D-Trp-Asn“Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 749), Ac-D-Tyr-D-Trp~Asn-Thr-Phe(3F)AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No 750),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)“TrpNH2 (Composto No. 754), Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 755),
Ac-D-Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(3F)-A2aGly-Leu-Arg(Me)-Trp15 NH2 (Composto No. 756), Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(3F)“AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 757),
Ac-D“Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 758), φθ Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 759), Ac-D-Tyr-Pzc(2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 760), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp25 NH2 (Composto No. 763),
Ac-D-Tyr-Trp“Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No 764),
Ac-D-Tyr-Hyp“Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 765),
Ac-D-Tyr-Trp-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly“Leu-Arg(Me)-TrpΝΉ2 (Composto No. 766),
Ac-D-Tyr-Hyp-AsnThr-Phe(4Cl)-AzaGly-LeU“Arg(Me)“TrpNH2 (Composto No. 767), «> 5 Ac-D-Tyr-Trp-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 768),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn~Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)~TrpNH2 (Composto No. 769),
Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe(4Cl)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp10 NH2 (Composto No. 770), • Ac-D-Tyr-Om-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Aj:g(Me)-Trp-NH2 (Composto No 771),
Ac-D-Tyr-Thr-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 772),
Ac-D-Tyr-His(3Me)-Asn~Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 773),
Ac-D-Tyr-Tyr(PO3H2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)~
Trp-NH2 (Composto No. 775),
Glicoloil-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)φθ Trp-NH2 (Composto No. 776),
Ac-DTyr-Pro(4NH2)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2 (Composto No. 780),
Ac-D-Tyr-Hyp(Bzl)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No 781),
Ac-D-Tyr-D-NMePhe-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-ΝΉ? (Composto No. 782),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 783),
Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr-Phe(2F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp68
NH2 (Composto No. 784),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn-Thr-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp“
NH2 (Composto No. 785), ; * Ac-D-Tyr-Alb-Asn-Thr“Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp~
NH2 (Composto No. 786),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu~Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 787),
Ac-D-Tyr-Glu-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 788),
Ac-D“Tyr-Lys-Asn-Thr-Phe(4F)-AzaGIy-Leu-Arg(Me)-Trp• NH2 (Composto No. 789),
Ac-D-Tyr-Gly-Asn~Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 790),
Ac-D-TyrAlb-Asn“Thr-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Me)“Trp15 NH2 (Composto No. 791),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-D-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 794),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly“Leu-Arg-Trp-NH2 (Composto No. 797), φρ Ac-D-Tyr-Hyp-Alb-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 800),
4-[Bis-(2“Piridilmetil)aminometil]benzoil-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 801),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-NMeSer-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp25 NH2 (Composto No. 809),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Hyp-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 810),
Ac“D-Tyr-Hyp-Asn-Gly-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp“NH2 (Composto No. 813), r
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Ala-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 814),
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-D-Ala-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 815),
Ac-D-Tyr-Hyp-His-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 816),
Ac-D-Tyr-Hyp-Gln-Thr-Phe- AzaGly-Leu- Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 843),
Ac-D-Tyr-Hyp-D-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp10 NH2 (Composto No. 844), • Ac-D-Tyr-Hyp-Cit-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 845), Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-D-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2 (Composto No. 846),
Composto No. 856: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Thr5, AzaGly7,Ala(cPr)8, Arg(Me)9,Trp 1OJMS10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe- AzaGly-Ala(cPr)-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 860: des(l-5)-4-Ureidobenzoilφθ [AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
4-Ureidobenzoil-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 Composto No. 861: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Arg4,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Hyp- Arg-Thr-Phe- AzaGly-Leu- Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 862: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Gly4,Thr5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10]MS 10 Ac-D-Tyr-Hyp-Gly-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 Composto No. 863: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Dap4,Thr5,
AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 10] MS 10 •θ
Ac-D-Tyr-Hyp-Dap-Thr“Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 864: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Dab4,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 10]MS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Dab-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 868: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Thr5, aMePhe6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1OJMS10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-aMePhe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-TrpNH2
Composto No. 870: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3 ,Thr5 ,Phe(2Me)6, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D~Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(2Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 872: des(l)-Ac-[DTyr2;Hyp3,Thr5;Phe(3Me)6,AzaGly7,Arg(Me)9sTrpl0]MS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe(3Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp-NH2
Composto No. 874: des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Thr5,Phe(4Me)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn~Thr-Phe(4Me)-AzaGly-Leu-Arg(Me)Trp~NH2
Composto No. 877: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Hyp3,Thr5,treoSer(3Fenila)6, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr~treo-Ser(3Fenila)-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 882: des(l)-AC“[D-Tyr2,Hyp3,Thr5?eritroSer(3Fenila)6,AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-eritro-Ser(3Fenila)-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2
Composto No 886: des(l)-Ac-[D25
Tyr2,Hyp3 ,Nva4,Thr5, AzaGly7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10 Ac-D-Tyr-Hyp-Nva-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 Composto No. 888: des(l-2)-3-(p-Hidróxifenil)propionil“ [Hyp 3 ,Thr5, AzaGly 7, Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
3 -(p-Hidróxifenil)propionil-Hyp-Asn-Thr-Phe- AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2
Composto No. 896: des(l)-Ac-[DTyr2,cisHyp3 ,Thr5, AzaGly 7 ,Arg(Me)9, Trp 1 OJMS 10
Ac-D-Tyr-cisHyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp10
NH2
Composto No. 897: des(l)-Ac-[D-Tyr2,Pro(4F)3,Thr5,
AzaGly7,Arg(Me)9,TrplO]MS 10
Ac-D-Tyr-Pro(4F)-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trpnh2 ou •°
Composto [Tyr2,Hyp3,Thr5 ,AzaGly7,Arg(Me)9,Trp 1 OJMS 10
Ac-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2.
Os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais ou pró-drogas têm excelente estabilidade no sangue, solubilidade, etc., além de excelentes efeitos de supressão de metástase cancerígena e crescimento de câncer e são úteis como agentes para a prevenção ou tratamento de cânceres
No.
899:
des(l)-Ac(por exemplo, câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer de fígado, câncer pancreático, câncer cólon-retal, câncer retal, câncer colônico, câncer de 25 próstata, câncer ovariano, câncer cervical, câncer de mama, etc.). Os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais ou pró-drogas têm um efeito de controlar a função pancreática e são úteis como agentes para prevenção ou tratamento de doenças pancreáticas (por exemplo, pancreatite aguda ou crônica, câncer pancreático, etc.). Os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais ou pró-drogas têm o efeito de controle de função placentária e são úteis como agentes para prevenção ou tratamento de coriocarcinoma, mola da hidátide, mola invasiva, aborto, hipoplasia fetal, metabolismo anormal de glicose, metabolismo anormal de lipídio ou indução de distribuição.
Também, os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais ou pró-drogas têm os efeitos de aumentar o nível de açúcar, promover a secreção pancreática de glucagon e promover a formação de urina e são úteis como agentes para prevenção ou tratamento de obesidade, hiperlipemia, diabetes mellitus do tipo II, hipoglicemia, hipertensão, neuropatia diabética, nefropatia diabética, retinopatia diabética, edema, perturbações urinárias, resistência à insulina, diabetes mellitus instável, atrofia gordurosa, alergia à insulina, insulinoma, arteriosclerose, distúrbios trombóticos ou lipotoxicidade.
Além disso, os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais ou pró-drogas têm excelentes atividades de promoção de secreção de hormônio gonadotrópico, promoção de secreção de hormônio sexual, indução de ovulação ou estimulação de ovulação e são úteis como agentes estáveis e baixamente tóxicos, por exemplo, agentes para melhora da função gonadal, agentes para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependente (por exemplo, câncer de próstata, câncer de mama, etc.), infertilidade, endometriose, puberdade precoce, mioma do útero, etc., agentes para indução ou estimulação de ovulação, agentes secretagogos de hormônio gonadotrópico, contraceptivos, agentes secretagogos de hormônio sexual ou semelhante.
Além disso, os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais ou pró-drogas são úteis como agentes para prevenção ou tratamento de mal de Alzheimer, Autismo, lesão cognitiva moderada, etc.
Os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais
ou pró-drogas são úteis como agentes para supressão de secreção de hormônio gonadotrópico ou secreção de hormônio sexual; agentes de regulação negativa para hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual; agentes de regulação negativa de proteína OT7T175 humana (receptor de metastina) consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9; agentes para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependentes (por exemplo, câncer de próstata, câncer de mama, etc.; particularmente, câncer de próstata hormônio-sensível, etc.); agentes para prevenção ou tratamento de endometriose; agentes para inibição de maturação folicular ovariana; agentes para suspensão do ciclo menstruai; agentes para o tratamento mioma do útero; agentes para o tratamento puberdade precoce; contraceptivos, etc.
Além disso, os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais ou pró-drogas são úteis como agentes para potencialização de imunidade (por exemplo, agentes profiláticos para infecção após transplante de medula óssea, agentes para potencialização de imunidade destinada a câncer, etc); imuno-estimulante (por exemplo, regeneração do timo, recrescimento do timo, intensificação de desenvolvimento de células T, etc.), agentes para prevenção ou tratamento de atrofia muscular bulbo-espinhal; agentes para proteção do ovário; agentes para prevenção ou tratamento de hipertrofia de próstata benigna (BPH); agentes para prevenção ou tratamento de distúrbio de identidade do sexo; ou agentes para fertilização in vitro (IVF). Além disso, eles são também úteis como agentes para prevenção ou tratamento de infertilidade, hipogonadismo, oligospermia, azoospermia, aspermia, astenospermia ou necrospermia. Ainda, eles são úteis para doenças hormônio-dependentes (por exemplo, câncer dependente de hormônio, tal como câncer de próstata, câncer uterino, câncer de mama, tumor da hipófise, etc.), alargamento da glândula da próstata, endometriose, fibróide uterino, puberdade precoce, dismenorréia, amenorréia, síndrome menstruai, síndrome de ovário multilocular, relapso pós-operatório dos cânceres mencionados φθ acima, metástase dos cânceres acima mencionados, hipopituitarismo, nanismo (o caso onde a secreção de hormônio de crescimento foi comprometida com hipo-secreção de hormônio da pituitária, etc.), distúrbio menopausal, queixa indefinida, distúrbios dependentes de hormônio sexual, tais como distúrbios metabólicos ósseos de cálcio-fósforo. Ele é também aplicável para contracepção (ou infertilidade quando efeitos de rebound após cessação da droga são utilizados), etc.
Além disso, a metastina per se ou DNA que codifica metastina, etc. são também úteis como agentes para supressão de secreção de hormônio gonadotrópico ou secreção de hormônio sexual; agentes de regulação negativa para hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual; agentes de regulação negativa de proteína OT7T175 humana (receptor de metastina) consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9; agentes para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependentes (por exemplo, câncer de próstata, câncer de mama, etc.; particularmente, câncer de próstata hormônio-sensível, câncer de mama sensível a hormônio, etc.); agentes para prevenção ou tratamento de endometriose; agentes para inibição de maturação folicular ovariana; agentes para suspensão do ciclo menstruai; agentes para o tratamento mioma do útero; agentes para o tratamento puberdade precoce; contraceptivos, etc.
Os derivados de metastina da presente invenção podem ser preparados através de métodos publicamente conhecidos para a síntese de peptídeo. Como os métodos para a síntese de peptídeo, por exemplo, síntese em fase sólida ou síntese em fase líquida pode ser usada. Isto é, o peptídeo parcial ou aminoácidos que podem constituir o peptídeo da presente invenção são repetidamente condensados com a parte restante para proporcionar o produto tendo uma seqüência desejada. Onde o produto tem grupos de proteção, esses grupos de proteção são removidos para proporcionar o peptídeo desejado. Métodos publicamente disponíveis para condensação e
remoção dos grupos de proteção são descritos em (1) a (5) abaixo.
(1) M Bodanszky & Μ A. Ondetti: Peptide Synthesis,
Interscience Publishers, New York (1966) (2) Schroeder & Luebke: The Peptide, Academic Press, New .· 5 York (1965) (3) Nobuo Izumiya e colaboradores: Peptide Gosei-no-Kiso to Jikken (Basics and experiments of peptide synthesis), publicado pela Maruzen Co (1975) (4) Haruaki Yajima & Shunpei Sakakibara: Seikagaku Jikken 10 Koza (Biochemical Experiment) 1, Tanpaknshitsu no Kagaku (Chemistry of • Proteins) IV, 205 (1977) (5) Haruaki Yajima, ed: Zoku Iyakuhin no Kaihatsu (A sequel to Development of Pharmaceuticals), Vol. 14, Peptide Synthesis, publicado pela Hirokawa Shoten.
t
Após término da reação, o produto pode ser purificado e isolado através de uma combinação de métodos convencionais de purificação, tais como extração com solvente, destilação, cromatografia em coluna, cromatografia de líquido e recristalização, para proporcionar o peptídeo da presente invenção. Quando o peptídeo obtido através dos métodos acima está Ό em uma forma livre, o peptídeo pode ser convertido a um sal apropriado através de um método publicamente disponível; inversamente, quando o peptídeo é obtido em uma forma de sal, ele pode ser convertido à sua forma livre através de métodos publicamente disponíveis.
Para a condensação dos aminoácidos ou peptídeos protegidos, uma variedade de reagentes de ativação para síntese de peptídeo podem ser usados, mas sais de trisfosfônio, sais de tetrametilurônio, carbodiimidas, etc.
são particularmente preferidos. Exemplos de sais de trisfosfônio incluem hexafluorofosfato de benzotriazol-l-ilóxitris(pirrolidino)fosfônio (PyBOP), hexafluorofosfato de bromotris(pirrolidino)fosfônio (PyBroP) e £3
hexafluorofosfato de 7-azabenzotriazol-l-ilóxitris(pirrolidino)fosfônio (PyAOP), exemplos de sais de tetrametiiurônio incluem 2-(lH-benzotriazol1 -il)-1,1,3,3-hexafluorofosfato (HBTU), 2-(7-azabenzotriazol-1 -il)-1,1,3,3hexafluorofosfato (HATU), tetrafluoroborato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)1,1,3,3-tetrametilurônio (TBTU), tetrafluoroborato de 2-(5-norborneno-2,3dicarbóxiimido)-1,1,3,3-tetrametiiurônio (TNTU) e tetrafluoroborato de O(N-succimidil)-1,1,3,3-tetrametiiurônio (TSTU); exemplos de carbodiimidas incluem DCC, Ν,Ν'-diisopropilcarbodiimida (DEPCDI) e hidrocloreto de Netil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI.HC1); etc. Para condensação usando esses reagentes, a adição de inibidores de racemização (por exemplo, HONB, HOBt, HOAt, HOOBt, etc.) é preferida. Solventes usados na condensação podem ser apropriadamente escolhidos de solventes que são conhecidos por serem utilizáveis para condensação. Por exemplo, amidas ácidas, tais como Ν,Ν-dimetilformamida anídrica ou hídrica, N,Ndimetilacetamida, N-metilpirrolidona, etc., hidrocarbonetos halogenados, tais como cloreto de metileno, clorofórmio, etc., álcoois, tais como trifluoroetanol, fenol, etc., sulfóxidos, tal como sulfóxido de dimetila, etc., aminas terciárias, tal como piridina, etc., éteres, tais como dioxano, tetraidrofurano, etc., nitrilas, tais como acetonitrila, propionitrila, etc., ésteres, tais como acetato de metila, acetato de etila, etc. ou misturas adequadas dos mesmos, etc. são usados. A temperatura de reação é apropriadamente escolhida da faixa conhecida por ser aplicável à reações de ligação peptídica e normalmente é escolhida, adequadamente, da faixa de cerca de -20 °C a 50 °C. Os derivados de aminoácido ativados são usados geralmente em um excesso de 1,5 a 6 vezes. No caso de síntese em fase sólida, a condensação é examinada usando a reação com niidrina; quando a condensação é insuficiente, a condensação pode ser completada repetindo-se a reação de condensação sem remoção dos grupos de proteção. Quando a condensação ainda é insuficiente mesmo após repetição da reação, os aminoácidos não reagidos são acilados com anidrido acético ou acetilimidazol para cancelar qualquer efeito adverso sobre a reação subseqüente.
Exemplos dos grupos de proteção usados para proteger grupos amino nos aminoácidos de iniciação incluem Z, Boc, terc-pentilóxicarbonila, 5 isobomilóxicarbonila, 4-metóxibenzilóxicarbonila, Cl-Z, Br-Z, adamantilóxicarbonila, trifluoroacetila, ftaloíla, formila, 2-nitrofenil-sulfenila, difenilfosfinotioíla, Fmoc, tritila, etc. Exemplos de grupos de proteção para um grupo carboxila incluem, além do grupo Ci_6 alquila, um grupo C3.g cicioalquila e um grupo C744 aralquila para R descrito acima, alila, 210 adamantila, 4-nitrobenzila, 4-metóxibenzila, 4-clorobenzila, um grupo fenacila, benzilóxicarbonil-hidrazida, terc-butóxicarbonil-hidrazida, tritilhidrazida, etc.
O grupo hidroxila da serina e treonina pode ser protegido, por exemplo, através de esterificação ou eterificação. Exemplos de grupos adequados para essa esterificação incluem um grupo derivado de ácido orgânico, tal como um grupo (C2_4) alcanoíla inferior, tal como um grupo acetila, um grupo aroíla, tal como um grupo benzoíla, etc. Exemplos de um grupo adequado para a eterificação incluem um grupo benzila, um grupo tetrahidropiranila, um grupo terc-butila, um grupo tritila (Trt), etc.
Exemplos de grupos para proteção do grupo hidroxila fenólica da tirosina incluem Bzl, 2,6-diclorobenzila (Cl2-Bzl), 2-nitrobenzila, Br-Z, terc-butila, etc. Exemplos de grupos usados para proteger a porção imidazol da histidina incluem Tos, 4-metóxi-2,3,6-trimetilbenzeno-sulfonila (Mtr),
DNP, Bom, Bum, Boc, Trt, Fmoc, etc.
Exemplos de grupos de proteção para 0 grupo guanidino na arginina incluem Tos, Z, 4-metóxi-2,3,6-trimetilbenzeno-sulfonila (Mtr), pmetóxibenzeno-sulfonila (MBS), 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonila (Pmc), mesitileno-2-sulfonila (Mts), 2,2,4,6,7-pentametil dihidrobenzofuran5-sulfonila (Pbf), Boc, Z, NO2, etc.
Exemplos de grupos de proteção para o grupo amino da cadeia lateral de lisina incluem Z, Cl-Z, trifluoroacetila, Boc, Fmoc, Trt, Mtr, 4,4dimetil-2,6-dioxociclohexilidenoíla (Dde), etc.
Exemplos de grupos de proteção para a indolila de triptofano incluem formila (For), Z, Boc, Mts, Mtr, etc.
Um grupo de proteção para asparagina e glutamina incluem Trt, xantila (Xan), 4,4'-dimetóxibenzidrila (Mbh), 2,4,6-trimetóxibenzila (Tmob), etc.
Exemplos de grupos carboxila ativados no material de iniciação incluem os anidridos ácidos correspondentes, azidas, ésteres ativados [ésteres com álcoois (por exemplo, pentaclorofenol, 2,4,5triclorofenol, 2,4-dinitrofenol, álcool cianometílico, p-nitrofenol, HONB, Nhidróxi-succimida, 1-hidróxibenzotriazol (HOBt) ou l-hidróxi-7azabenzotriazol (HOAt)J, etc. À medida que os aminoácidos nos quais os grupos amino no material de iniciação são ativados, as amidas de fósforo correspondentes são empregadas.
Para eliminar (divisão) os grupos de proteção, é usada redução catalítica sob fluxo de gás hidrogênio na presença de um catalisador, tal como Pd-negro ou Pd-carbono; um tratamento ácido com fluoreto de hidrogênio anídrico, ácido metano-sulfônico, ácido trifluorometanosulfônico, ácido trifluoroacético, brometo de trimetil-silano (TMSBr), trifluorometano-sulfonato de trimetil-silila, ácido tetrafluorobórico, tris(trifluoro)boro, tribrometo de boro ou uma solução misturada dos mesmos, um tratamento com base com diisopropiletilamina, trietilamina, piperidina, piperazina, etc. e redução com sódio em amônia líquida. A eliminação de grupos de proteção através do tratamento ácido descrito acima é geralmente realizada em uma temperatura de aproximadamente -20°C a 40°C. No tratamento ácido, é eficiente adicionar um removedor de cátions, tais como anisola, fenol, tioanisola, m-cresol, p-cresol, etc, sulfeto de dimetila, 1,406 butanoditiol, 1,2-etanoditiol, etc. Além disso, o grupo 2,4-dinitrofenila usado como um grupo de proteção para a imidazol da histidina é removido através de um tratamento com um grupo tiofenol formila usado à medida que o grupo de proteção da indol de triptofano é removido através do tratamento ácido 5 antes mencionado na presença de 1,2-etanoditiol, 1,4-butanoditiol, etc., bem como através de um tratamento com um álcali, tal como uma solução diluída de hidróxido de sódio, amônia diluída, etc.
Proteção de grupos funcionais que não deverão estar envolvidos na reação dos materiais de iniciação, grupos de proteção, remoção 10 dos grupos de proteção e ativação de grupos funcionais envolvidos na reação podem ser apropriadamente escolhidos de grupos publicamente conhecidos e meios publicamente conhecidos.
Métodos para obtenção da amida do peptídeo incluem, por exemplo, síntese em fase sólida usando resinas para a formação da amida do 15 peptídeo em outro método para obtenção das amidas do peptídeo, por exemplo, o grupo α-carboxila do aminoácido carbóxi terminal é primeiro protegido através de amidação; a cadeia peptídica é, então, estendida a partir do lado com o grupo amino até um comprimento desejado. Após o que, um peptídeo no qual apenas o grupo de proteção do grupo ot-amino N-terminal na ^0 cadeia peptídica foi removido do peptídeo e um peptídeo (ou um aminoácido) no qual apenas o grupo de proteção do grupo carboxila C-terminal foi eliminado são preparados. Os dois peptídeos são condensados em uma mistura de solventes descrita acima. Os detalhes da reação de condensação sao os mesmos conforme descrito acima. Após o peptídeo protegido obtido 25 através da condensação ser purificado, todos os grupos de proteção são removidos através do método descrito acima para proporcionar o peptídeo bruto desejado. Esse peptídeo bruto é purificado através de vários meios de purificação conhecidos. Liofilização da fração principal proporciona a amida do peptídeo desejado.
Quando o derivado de metastina da presente invenção está presente na forma de um isômero configuracional, um diastereômero, um confôrmero ou semelhante, cada um, pode ser isolado através dos meios de separação e purificação descritos acima, se desejado. Além disso, quando o composto da presente invenção é racêmico, ele pode ser separado em um isômero S e um isômero R através de meios convencionais de decomposição óptica.
Quando isômeros estéricos existem para o derivado de metastina da presente invenção, a presente invenção inclui ambos esses isômeros sozinhos e os isômeros presentes como uma mistura dos mesmos.
Além disso, o derivado de metastina da presente invenção pode também ser hidratado ou não-hidratado.
O derivado de metastina da presente invenção pode também ser rotulado com um isótopo (por exemplo, 3H, 14C, 35S), etc.
No decorrer da especificação, os peptídeos são representados de acordo com a forma convencional de descrição de peptídeos, isto é, o Ntérmino (amino término) do lado esquerdo e o C-término (carboxila término) do lado direito. Nos peptídeos, o C-término está usualmente na forma de uma amida (-CONH2), um grupo carboxila (-COOH), um carboxilato (-COO), uma alquilamida (-CONHR) ou um éster (-COOR) e a amida (-CONH2) é particularmente preferida. Exemplos de R no éster ou alquilamida incluem um grupo Ci_6 alquila, tal como metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, etc.; um grupo C3.8 cicloalquila, tal como ciclopentila, ciclohexila, etc.; um grupo C6_i2 arila, tal como fenila, α-naftila, etc; um grupo C744 aralquila, tal como um grupo fenil-C].2-alquila, por exemplo, benzila, fenetila, etc. ou um grupo a-naftil-Ci-2-alquila, tal como α-naftilmetila, etc.; um grupo pivaloilóximetila, os quais são amplamente usados como um éster para uso oral e semelhantes.
Exemplos de um sal do derivado de metastina da presente invenção incluem um sal de metal, um sal de amônio, um sal com uma base orgânica, um sal com um ácido, um sal de amônio, um sal com uma base orgânica, uma sal com um ácido inorgânico, um sal com um ácido orgânico, um sal com um aminoácido básico ou ácido e semelhantes. Exemplos preferidos do sal de metal incluem sais de metal alcalino, tais como sais de 5 sódio, sais de potássio, etc.; sais de metal alcalino terroso, tais como sais de cálcio, sais de magnésio, sais de bário, etc.; sais de alumínio; e semelhantes. Exemplos preferidos dos sais com bases orgânicas incluem sais com trimetilamina, trietilamina, piridina, picolina, 2,6-lutidina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, ciclohexilamina, diciclohexilamina, N,N'10 dibenziletilenodiamina, etc. Exemplos preferidos dos sais com ácidos inorgânicos incluem sais com ácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácido nítrico, ácido sulfurico, ácido fosfórico, etc. Exemplos preferidos de sais com ácidos orgânicos incluem sais com ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido ftálico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, 15 ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanosulfônico, ácido benzeno-sulfônico, ácido p-tolueno-sulfônico, etc. Exemplos de sais preferidos com aminoácidos básicos incluem sais com arginina, lisina, omitina, etc e exemplos preferidos de sais com aminoácidos ácidos incluem sais com ácido aspártico, ácido glutâmico, etc.
|£0 Dentre os mesmos, sais farmaceuticamente aceitáveis são preferíveis. Por exemplo, quando o composto tem um grupo funcional ácido, sais inorgânicos, tais como sais de metal alcalino (por exemplo, sal de sódio, sal de potássio, etc.), sais de metal alcalino terroso (por exemplo, sal de cálcio, sal de magnésio, sal de bário, etc.), sais de amônio, etc. são preferíveis.
Quando o composto tem um grupo funcional básico, sais com ácidos inorgânicos com ácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácido nítrico, ácido sulfurico, ácido fosfórico, etc. e sais com ácidos orgânicos tais como, ácido acético, ácido ftálico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido metano-sul fônico, ácido p82 e° tolueno-sulfônico, etc. são preferíveis.
A pró-droga do derivado de metastina ou um sal do mesmo (aqui depois algumas vezes simplesmente referido como o derivado de metastina da presente invenção) se refere a um derivado de metastina que é convertido ao derivado de metastina da presente invenção sob condições fisiológicas ou com um reação em virtude de uma enzima, um ácido gástrico, etc., no corpo vivo. Em outras palavras, a pró-droga da presente invenção é o derivado de metastina que sofre oxidação enzimática, redução, hidrólise, etc. para ser convertido ao derivado de metastina da presente invenção ou ao derivado de metastina que sofre hidrólise, etc. através de um ácido gástrico, etc. para ser convertido ao derivado de metastina da presente invenção.
Exemplos da pró-droga do derivado de metastina da presente invenção incluem um derivado de metastina em que um grupo amino do derivado de metastina da presente invenção é substituído por uma acila, uma alquila, ácido fosfórico, etc. (por exemplo, derivados de metastina em que um grupo amino do derivado de metastina da presente invenção é substituído por eicosanoíla, alanila, pentilaminocarbonila (5-metil-2~oxo-l,3-dioxolen-4il)metóxicarbonila, tetrahidrofuranila, pirrolidilmetila, pivaloilóximetila, tercbutila, etc); derivados de metastina em que um grupo hidróxi do derivado de metastina da presente invenção é substituído por uma acila, uma alquila, ácido fosfórico, ácido bórico, etc. (por exemplo, derivados de metastina em que um grupo hidróxi do derivado de metastina da presente invenção é substituído por acetila, palmitoíla, propanoíla, pivaloíla, succinila, fumarila, alanila, dimetilaminometilcarbonila, etc.); e derivados de metastina em que um grupo carbóxi do derivado de metastina da presente invenção é substituído por éster, amida, etc. (por exemplo, derivados de metastina em que o grupo carbóxi do derivado de metastina da presente invenção é convertido ao etil éster, fenil éster, carbóximetil éster, dimetilaminometil éster, pivaloilóximetil éster, etóxicarbonilóxietil éster, ftalidil éster, (5-metil-2-oxo-l,3-dioxolen-4-il)metil éster, ciclohexilóxicarboniletil éster, metilamida, etc); e semelhantes. Esses derivados de metastina podem ser produzidos a partir dos derivados de metastina da presente invenção através de métodos conhecidos per se.
As pró-drogas do derivado de metastina da presente invenção podem ser aquelas que são convertidas aos derivados de metastina da presente invenção sob as condições fisiológicas conforme descrito em Pharmaceutical Research and Development, Vol. 7 (Drug Design), páginas 163-198, publicado em 1990 pela Hirokawa Publishing Co. Os derivados de metastina da presente invenção ou seus sais ou pró-drogas (aqui depois algumas vezes simplesmente referidos como o composto da presente invenção) possuem a atividade de supressão de metástase cancerígena ou a atividade de supressão de crescimento de câncer. Assim, os derivados de metastina são úteis para medicamentos tais como agentes para prevenção ou tratamento de todos os cânceres (por exemplo, câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer de fígado, câncer de pâncreas, câncer cólon-retal, câncer retal, câncer colônico, câncer de próstata, câncer ovariano, câncer cervical, câncer de mama, etc.) e semelhantes.
O composto da presente invenção também possui o efeito de controlar a função pancreática e, assim, é útil como um medicamento tal como um agente para prevenção ou tratamento de várias doenças pancreáticas (por exemplo, pancreatite aguda ou crônica, câncer pancreático, etc.).
Além disso, o composto da presente invenção possui o efeito de controle de função placentária e, assim, é útil como um medicamento tal como um agente para prevenção ou tratamento de coriocarcinoma, mola da hidátide, mola invasiva, aborto, hipoplasia fetal, metabolismo anormal de glicose, metabolismo anormal de lipídio ou indução de distribuição, etc.
Além disso, o composto da presenfé invenção possui o’s efeitos de aumentar o nível de açúcar, promover a secreção pancreática de glucagon e promover a formação de urina e, assim, é útil como um medicamento tal como agentes hipcrglicêmicos, agentes secretagogos de glucagon ou agentes para promoção de formação de urina, os quais são úteis para agentes para prevenção ou tratamento de obesidade, hiperlipemia, diabetes mellitus do tipo II, hipoglicemia, hipertensão, neuropatia diabética, nefropatia diabética, 5 retinopatia diabética, edema, perturbações urinárias, resistência à insulina, diabetes mellitus instável, atrofia gordurosa, alergia à insulina, insulinoma, arteriosclerose, distúrbios trombóticos ou lipotoxicidade; e semelhantes.
Além disso, o composto da presente invenção também possui os efeitos de promoção de secreção de hormônio gonadotrópico (por exemplo, 10 FSH, LH, etc.), promoção de secreção de hormônio sexual [por exemplo, androgênios (por exemplo, testosterona, androstenodiona, etc.), estrogênios (por exemplo, estradiol, estrona, etc.), progesteronas, etc.], melhora da função gonadal e indução ou estimulação de ovulação, bem como, um efeito de maturação sexual, etc. e, conseqüentemente, pode ser usado como um agente 15 para melhora da função gonadal, um agente para indução de ou estimulação de ovulação, um agente secretagogo de hormônio gonadotrópico ou um agente secretagogo de hormônio sexual ou um agente para prevenção ou tratamento de câncer hormônio-dependentes [por exemplo, câncer de próstata, câncer de mama, etc.], infertilidade [por exemplo, menstruação irregular, :0 dismenorréia, amenorréia, amenorréia induzida por perda de peso, amenorréia secundária, anovulação, hipo-ovarianismo, hipogonadismo, falha espermatogenética, hipogonadismo (por exemplo, impotência, etc.), atrofia genital, atrofia testicular, distúrbio de função testicular, azoospermia, hipoandrogenemia, etc.], endometriose, puberdade precoce, mi orna do útero,
Além disso, a pró-droga do derivado de metastina da presente invenção ou seu sal é útil como um agente para prevenção ou ^tãmentõ’ de mal de Alzheimer, Autismo, lesão cognitiva moderada, etc.
Além disso, o composto da presente invenção tem excelente etc.
de hormônio gonadotrópico (por hormônio sexual androstenodiona), [por exemplo, estrogênio (por para regulação estabilidade no sangue, solubilidade e estabilidade de solução, quando comparado com a metastina nativa, tal como metastina 54 (1-54) ou metastina 10 (45-54).
O derivado de metastina da presente invenção ou seu sal ou pró-droga, metastina per se ou DNA que codifica metastina, etc. é útil como um agente para supressão de secreção exemplo, FSH, LH) ou secreção de androgênio (por exemplo, testosterona, exemplo, estradiol, estrona), progesterona]; um agente negativa de hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual; em particular, ele é útil para supressão de secreção de hormônio gonadotrópico ou secreção de hormônio sexual via regulação negativa de hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual (em que, a regulação negativa de hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual pode ser perda pulsátil de LHRH ou depleção de LHRH) ou regulação negativa de proteína OT7T175 humana (receptor de metastina) consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9; particularmente útil como um agente para prevenção ou tratamento de cânceres hormônio-dependentes (por exemplo, câncer de próstata, câncer de mama, etc.; especialmente um câncer de próstata, câncer de próstata hormônio-sensível, etc.); um agente para prevenção ou tratamento de endometriose; um agente para inibição de maturação folicular ovariana; um agente para suspensão do ciclo menstruai; um agente para tratamento de mioma do útero; um agente para tratamento de puberdade precoce; ou como um contraceptivo, etc. Onde o derivado de metastina da presente invenção ou seu sal ou pró-droga, metastina per se ou DNA que codifica metastina, etc. tem atividade agonista normal, uma dose eficaz do derivado de metastina suficiente para suprimir a secreção de hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual é administrado no mesmo local ou tecido onde espera-se que os efeitos terapêuticos sejam exercidos, de modo que o derivado de metastina está
presente em uma dose maior do que a requerida (isto é, o derivado de metastina é administrado em um excesso com relação à dose efetiva normal, na qual o derivado de metastina exerce os efeitos de supressão de metástase cancerígena, supressão de crescimento de câncer, etc.; ou o efeito de 5 promoção de secreção de hormônio gonadotrópico, o efeito de promoção de secreção de hormônio sexual, etc.) para exibir os efeitos de supressão de secreção de hormônio gonadotrópico ou secreção de hormônio sexual. Exemplos específicos incluem administração sustentada ou contínua da dose efetiva normal (incluindo uma técnica de administração para liberar 10 gradualmente os ingredientes farmacêuticos através de administração em bolo); e semelhantes. Ainda, quando o derivado de metastina da presente invenção ou seu sal ou pró-droga do mesmo, etc. tem uma atividade agonista suficiente maior do que aquela requerida (uma atividade super-agonista) se toma possível sustentar as atividades mais do que aquelas exibidas pela dose 15 necessária no local ou tecido onde o efeito terapêutico tem de ser exibido.
Portanto, ela é suficiente mesmo através de administração de uma dose eficaz para suprimir a secreção de hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual, pelo que o efeito de supressão de secreção de hormônio gonadotrópico ou secreção de hormônio sexual é exibido.
^0 Em outras palavras uma dose eficaz do derivado de metastina da presente invenção ou seu sal ou pró-droga, metastina per se ou DNA que codifica metastina, etc suficiente para suprimir a secreção de hormônio gonadotrópico ou hormônio sexual é administrada de modo que o derivado de metastina esteja presente em uma dose maior do que aquela requerida no local 25 ou tecido onde os efeitos terapêuticos têm de ser exercidos ou suas atividades podem ser sustentadas mais do que o requerido, o que permite exibir os efeitos de supressão de secreção de hormônio gonadotrópico ou secreção de hormônio sexual.
O produto farmacêutico compreendendo o composto da
presente invenção é baixamente tóxico. Portanto, o composto da presente invenção pode ser seguramente administrado quer diretamente como ele está ou como uma mistura com veículos farmacologicamente aceitáveis oral ou parenteralmente (por exemplo, topicamente, retalmente, intravenosamente, 5 etc.), na forma de preparados farmacêuticos, tais como tabletes (incluindo drágeas e tabletes revestidos com filme), formas de dosagem em pó, grânulos, cápsulas (incluindo cápsulas moles), formas de dosagem líquida, injeções, supositórios, formas de dosagem com liberação sustentada, etc., de acordo com meios publicamente conhecidos geralmente usados no processo para 10 produção de preparados farmacêuticos.
O composto da presente invenção está contido no preparado farmacêutico a presente invenção em cerca de 0,01 a cerca de 100% em peso, baseado no peso total do preparado.
Uma dose do composto da presente invenção pode variar, dependendo do indivíduo a ser administrado, órgão alvo, condições, via de administração, etc. e, em administração oral, o composto é geralmente administrado ao paciente com câncer (com um peso corporal de 60 kg) em uma dose diária de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg, de preferência de cerca de 0,1 a cerca de 50 mg e, mais preferivelmente, cerca de 0,1 a cerca de 20 £0 mg. Em administração parenteral, uma única dose do composto pode variar, dependendo do indivíduo a ser administrado, órgão alvo, condições, via de administração, etc. e, na forma de um preparado em dosagem injetável, é vantajoso administrar o composto ao paciente com câncer (com um peso corporal de 60 kg) geralmente em uma dose de cerca de 0,001 a cerca de 30 mg, de preferência cerca de 0,01 a cerca de 20 mg e, mais preferivelmente, cerca de 0,01 a cerca de 10 mg. Para outras espécies de animais, a dose correspondente àquela convertida por 60 kg de peso pode ser administrada.
Veículos farmacologicamente aceitáveis os quais podem ser usados na fabricação do preparado farmacêutico da presente invenção
incluem várias substâncias veículo orgânicas ou inorgânicas convencionalmente usadas como materiais para preparados farmacêuticos. Essas substâncias incluem, por exemplo, um excipiente, um lubrificante, um aglutinante e um agente de desintegração em uma forma de dosagem sólida e 5 um solvente, um auxiliar de dissolução, um agente de suspensão, um agente de isotonização, um tampão, um agente de nivelamento, etc. em uma forma de dosagem líquida. Além disso, aditivos convencionais, tais como um conservante, um antioxidante, um colorante, um adoçante, um adsorvente, um agente de umedecimento, etc. podem ser apropriadamente usados em 10 quantidades adequadas, se necessário.
Exemplos de excipientes incluem lactose, sacarose, D-manitol, amido, amido de milho, celulose cristalina, ácido silícico anídrico leve, etc.
Exemplos de lubrificantes incluem estearato de magnésio, estearato de cálcio, talco, sílica coloidal, etc.
Exemplos de aglutinantes incluem celulose cristalina, sacarose, D-manitol, dextrina, hidróxipropilcelulose, hidróxipropilmetilcelulose, polivinilpirrolidona, amido, sacarose, gelatina, metilcelulose, carbóximetilcelulose de sódio, etc.
Exemplos de agentes de desintegração incluem amido, Ό carbóximetilcelulose, carbóximetilcelulose de cálcio, carbóximetil amido de sódio, L-hidróxipropilcelulose, etc.
Exemplos de solventes incluem água para injeção, álcool, propileno glicol, Macrogol, óleo de gergelim, óleo de milho, óleo de oliva, etc.
Exemplos de auxiliares de dissolução incluem polietileno glicol, propileno glicol, D-manitol, benzoato de benzila, etanol, trisaminometano, colesterol, trietanolamina, carbonato de sódio, citrato de sódio, etc
Exemplos de agentes de suspensão incluem tensoativos tais
como estearil trietanolamina, lauril-sulfato de sódio, lauril aminopropionato, lecitina, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, monoestearato de glicerina, etc.; polímeros hidrofílicos, tais como álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, carbóximetilcelulose de sódio, metilcelulose, 5 hidróximetilcelulose, hidróxi etil celulose, hidróxipropilcelulose, etc.
Exemplos de agentes de isotonização incluem glicose, Dsorbitol, cloreto de sódio, glicerina, D-manitol, etc.
Exemplos de tampões incluem soluções de tamponamento de fosfato, acetato, carbonato, citrato, etc.
Exemplos de agentes de nivelamento incluem álcool benzílico,
Exemplos de conservantes incluem p-hidróxibenzoatos, clorobutanol, álcool benzílico, álcool fenetílico, ácido dehidroacético, ácido sórbico, etc.
Exemplos de antioxidantes incluem a sulfeto, ácido ascórbico, α-tocoferol, etc.
Além disso, o composto da presente invenção pode ser usado ' λ ' em combinação com outras drogas que não o composto da presente invenção.
Exemplos das drogas, as quais podem ser usadas em |p0 combinação com o composto da presente invenção (aqui depois algumas vezes simplesmente referidos como drogas concomitantes), incluem agentes quimioterapêuticos para o tratamento câncer, agentes terapêuticos hormonais, agentes imunoterapêuticos, etc. (aqui depois simplesmente referidos como agentes concomitantes).
Exemplos de agentes quimioterapêuticos incluem agentes de alquilação, antimetabólitos, antibióticos, anti-câncer, agentes anti-câncer derivados de plantas, etc.
Exemplos de agentes de alquilação incluem mostarda de nitrogênio, hidrocloreto de N-óxido de mostarda de nitrogênio, clorambutila,
φ20 ciclofosfamida, ifosfamida, tiotepa, carboquona, tosilato de improsulfan, busulfan, hidrocloreto de nimustina, mitobronitol, melphalan, dacarbazina, ranimustina, fosfato sódico de estramustina, trietilenomelamina, carmustina, lomustina, estreptozocina, pipobroman, etoglucid, carboplatina, cisplatina, miboplatina, nedaplatina, oxaliplatina, altretamina, ambamustina, hidrocloreto de dibrospídio, fotemustina, prednimustina, pumítepa. ribomustina. temozolomida, treosulphan, trofosfamida, estimalâmero de zinostatina, carboquona, adozelesina, cistemustina, bizelesina, etc.
Exemplos de antimetabólitos incluem mercaptopurina, ribosídeo de 6-mercaptopurina, tioinosina, metotrexato, enocitabina, citarabina, ocfosfato de citarabina, hidrocloreto de ancitabina, drogas de 5-FU (por exemplo, fluorouracila, tegafur, UFT, doxifluridina, carmofur, galocitabina, emmitefur, etc.), aminopterina, cálcio de leucovorina, tablóide, butocina, cálcio de folinato, cálcio de levofolinato, cladribina, emitefur, fludarabina, gemcitabina, hidróxicarbamida, pentostatina, piritrexim, idoxuridina, mitoguazona, tiazofrina, ambamustina, etc.
Exemplos de antibióticos anti-câncer incluem actinomicina D, actinomicina C, mitomicina C, cromomicina A3, hidrocloreto de bleomicina, sulfato de bleomicina, sulfato de peplomicina, hidrocloreto de daunorubicina, hidrocloreto de doxorubicina, hidrocloreto de aclarubicina; hidrocloreto de pirarubicina, hidrocloreto de epirubicina, neocarzinostatina, mitramicina, sarcomicina, carzinofilina, mitotano, hidrocloreto de zorubicina, hidrocloreto de mitoxantrona, hidrocloreto de idarubicina, etc.
Exemplos de agentes anti-câncer derivados de plantas incluem etoposídeo, fosfato de etoposídeo, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina, sulfato de vindesina, teniposídeo, paclitaxel, docetaxel, vinorelbina, etc.
Exemplos de agentes terapêuticos hormonais incluem fosfestrol, distilestilbestrol, clorotrianiseno, acetato de medróxiprogesterona,
φο acetato de megestrol, acetato de clormadinona, acetato de ciproterona, danazol, alilestrenol, gestrinona, mepartricina, raloxifeno, ormeloxifeno, levormeloxifeno, anti-estrogênios (por exemplo, citrato de tamoxifeno, citrato de toremifeno, etc.), formas de dosagem em comprido, mepitiostano, testrolactona, aminoglutetimida, agonistas de LH-RH (por exemplo, acetato de goserelina, buserelina, Leuprorelina, etc.), droloxifeno, epitiostanol, sulfonato de etinilestradiol, inibidores de aromatase (por exemplo, hidrocloreto de fadrozol, anastrozol, retrozol, exemestano, vorozol, formestano, etc.), anti-androgênios (por exemplo, flutamida, bicartamida, nilutamida, etc.), inibidores de 5a-reductase (por exemplo, fmasterida, epristerida, etc.), drogas de adrenocorticohormônio (por exemplo, dexametasona, prednisolona, betametasona, triamcinolona, etc.), inibidores da síntese de androgênio (por exemplo, abiraterona, etc.), retinóides e drogas que retardam o metabolismo de retinóide (por exemplo, liarozol, etc.) e, dentre os mesmos, agonistas de LH-RH (por exemplo, acetato de goserelina, buserelina, Leuprorelina, etc.) são preferíveis.
Exemplos de agentes imunoterapêuticos (BRM) incluem picibanil, crestina, sizofiran, lentinan, ubenimex, interferons, interleucinas, fator de estimulação de colônia de macrófago, fator de estimulação de colônia de granulócito, eritropoietina, linfotoxina, vacina BCG, Corynebacterium parvum, levamisola, polissacarídeo K, procodazola, etc.
O uso combinado do composto da presente invenção e uma droga concomitante exibe os efeitos excelentes a seguir.
(1) A dose pode ser reduzida, quando comparado com a dose quando o composto da presente invenção ou uma droga concomitante é administrado sozinho.
(2) Uma droga concomitantemente administrada com o composto da presente invenção pode ser escolhido dependendo da condição (branda, grave, etc.) de um paciente.
φρο (3) Uma droga concomitante, cujo mecanismo funcional é diferente daquele do composto da presente invenção pode ser escolhido de modo que um período de tratamento pode ser ajustado mais longo.
(4) Uma droga concomitante, cujo mecanismo funcional é diferente daquele do composto da presente invenção, pode ser escolhido de modo que efeitos terapêuticos sustentados possam ser obtidos.
(5) Um efeito sinergístico pode ser obtido através do uso concomitante do composto da presente invenção e uma droga concomitante.
Além disso, o composto da presente invenção pode reduzir valores de testosterona para o nível de castração imediatamente após medicação. Assim, quando a droga concomitante, tal como um agonista de LH-RH (por exemplo, acetato de goserelina, buserelina, Leuprorelina etc.; de preferência Leuprorelina) é usado em combinação com o composto da presente invenção, os valores de testosterona podem ser reduzidos para o nível de castração imediatamente após medicação do composto da presente invenção. Ainda, uma vez que o uso combinado da droga concomitante, tal como um agonista de LH-RH (por exemplo, acetato de goserelina, buserelina, Leuprorelina etc.; de preferência Leuprorelina) e o composto da presente invenção resulta em preservação prolongada do período hormôniodependente, ele pode ser vantajosamente usado.
Aqui depois, o uso combinado do composto da presente invenção e da droga concomitante é referida como o preparado combinado da presente invenção.
Quando o preparado combinado da presente invenção é usado, um período de dosagem do composto da presente invenção e da droga concomitante não está restrito; o composto da presente invenção ou sua composição farmacêutica e a droga concomitante ou sua composição farmacêutica pode ser administrado ao indivíduo a ser administrado quer simultaneamente ou em determinados intervalos de tempo. A dose da droga concomitante pode ser modificada de acordo com a dose usada clinicamente e pode ser apropriadamente escolhida dependendo do indivíduo a ser administrado, da via para administração, doença, combinação etc.
Um modo para administração do preparado combinado da presente invenção não está particularmente limitado, mas é suficiente de modo que o composto da presente invenção seja usado em combinação com a droga concomitante no momento de administração. Para tal modo de administração, existem, por exemplo, (1) administração de uma única forma de dosagem obtida através de mistura do composto da presente invenção da 10 droga concomitante juntos ao mesmo tempo, (2) administração simultânea das duas formas de dosagem preparadas separadamente do composto da presente invenção e da droga concomitante através da mesma via de administração, (3) administração de duas formas de dosagem preparadas separadamente do composto da presente invenção e da droga concomitante em determinados 15 intervalos de tempo através da mesma via de administração, (4) administração simultânea das duas formas de dosagem preparadas separadamente do composto da presente invenção e da droga concomitante através de diferentes vias de administração, (5) administração das duas formas de dosagem preparadas separadamente do composto da presente invenção e da droga pO concomitante em determinados intervalos de tempo (por exemplo, administração do composto da presente invenção e da droga concomitante nessa ordem ou administração em uma ordem inversa) através de diferentes vias de administração, etc.
O preparado combinado da presente invenção é baixamente 25 tóxico e, assim, pode ser seguramente administrado oral ou parenteralmente (por exemplo, topicamente, retalmente, intravenosamente, etc.), quer diretamente como ele está ou na forma de preparados farmacêuticos, tais como tabletes (incluindo drágeas e tabletes revestidos com filme), formas de dosagem em pó, grânulos, cápsulas (incluindo cápsulas moles), formas de
dosagem líquida, injeções, supositórios, formas de dosagem com liberação sustentada, etc., os quais são obtidos através de mistura do composto da presente invenção ou (e) a droga concomitante descrita acima com veículos farmacologicamente aceitáveis através de métodos publicamente conhecidos.
Formas de dosagem injetáveis podem ser administradas intravenosamente, intramuscularmente ou subcutaneamente no órgão ou diretamente no foco.
Veículos farmacologicamente aceitáveis os quais podem ser usados para fabricar o preparado combinado da presente invenção incluem várias substâncias veículo orgânicas ou inorgânicas convencionalmente 10 usadas como materiais para preparados farmacêuticos. Essas substâncias incluem, por exemplo, um excipiente, um lubrificante, um aglutinante e um agente de desintegração em uma forma de dosagem sólida e um solvente, um auxiliar de dissolução, um agente de suspensão, um agente de isotonização, um tampão, um agente de nivelamento, etc. em uma forma de dosagem 15 líquida. Além disso, aditivos convencionais, tais como um conservante, um antioxidante, um colorante e, um adoçante, um adsorvente, um agente de umedecimento, etc. podem ser apropriadamente usados em quantidades adequadas, se necessário.
Exemplos de excipientes incluem lactose, sacarose, D-manitol, pO amido, amido de milho, celulose cristalina, ácido silícico anídrico leve, etc.
Exemplos de lubrificantes incluem estearato de magnésio, estearato de cálcio, talco, sílica coloidal, etc.
Exemplos de aglutinantes incluem celulose cristalina, sacarose, D-manitol, dextrina, hidróxipropilcelulose, hidróxipropilmetilcelulose, polivinilpirrolidona, amido, sacarose, gelatina, metilcelulose, carbóximetilcelulose de sódio, etc.
Exemplos de agentes de desintegração incluem amido, carbóximetilcelulose, carbóximetilcelulose de cálcio, carbóximetil amido de sódio, L-hidróxipropilcelulose, etc.
Exemplos de solventes incluem água para injeção, álcool, propileno glicol, Macrogol, óleo de gergelim, óleo de milho, óleo de oliva, etc.
Exemplos de auxiliares de dissolução incluem polietileno glicol, propileno glicol, D-manitol, benzoato de benzila, etanol, trisaminometano, colesterol, trietanolamina, carbonato de sódio, citrato de sódio, etc
Exemplos de agentes de suspensão incluem tensoativos tais como estearil trietanolamina, lauril-sulfato de sódio, lauril aminopropionato, 10 lecitina, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, monoestearato de glicerina, etc.; polímeros hidrofílicos, tais como álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, carbóximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidróximetilcelulose, hidróxi etil celulose, hidróxipropilcelulose, etc.
Exemplos de agentes de isotonização incluem glicose, Dsorbitol, cloreto de sódio, glicerina, D-manitol, etc.
Exemplos de tampões incluem soluções de tamponamento de fosfato, acetato, carbonato, citrato, etc.
Exemplos de agentes de nivelamento incluem álcool benzílico, etc.
Exemplos de conservantes incluem p-hidróxibenzoatos, clorobutanol, álcool benzílico, álcool fenetílico, ácido dehidroacético, ácido sórbico, etc.
Exemplos de antioxidantes incluem a sulfeto, ácido ascórbico, α-tocoferol, etc.
No preparado combinado da presente invenção, uma proporção do composto da presente invenção para a droga concomitante pode ser apropriadamente escolhida, dependendo do indivíduo a ser administrado, via de administração, doença, etc.
Por exemplo, a quantidade do composto da presente invenção
e°
JO3 & contida no preparado combinado da presente invenção varia, dependendo da forma de dosagem do preparado mais usualmente é cerca de 0,01 a 100% em peso, de preferência, cerca de 0,1 a 50% em peso e, mais preferivelmente, cerca de 0,5 a 20% em peso, baseado no peso total do preparado.
A quantidade da droga concomitante contido no preparado combinado da presente invenção varia, dependendo da forma de dosagem do preparado, mas é usualmente cerca de 0,01 a 100% em peso, de preferência, cerca de 0,1 a 50% em peso e, mais preferivelmente, cerca de 0,5 a 20% em peso, baseado no peso total do preparado.
A quantidade de aditivos, tal como um veículo, etc. contidos no preparado combinado da presente invenção varia, dependendo da forma de dosagem do preparado e é usualmente cerca de 1 a 99,99% em peso, de preferência, cerca de 10 a 90% em peso, baseado no peso total do preparado.
Essas quantidades podem ser as mesmas, também quando o composto da presente invenção e a droga concomitante são separadamente preparados, respectivamente.
Esses preparados podem ser fabricados através de métodos publicamente conhecidos per se convencionalmente usados em geral.
Por exemplo, o composto da presente invenção ou droga concomitante podem ser preparados em uma forma de dosagem injetável através de formulação com um agente de dispersão (por exemplo, Tween 80 (fabricado pela Atlas Powder Company, EUA), HCO 60 (fabricado pela Nikko Chemicals Co., Lida.), polietileno glicol, carbóximetil celulose, alginato de sódio, hidroxipropil metil celulose, dextrina, etc.), um estabilizante (por exemplo, ácido ascórbico, piro-sulfeto de sódio), um tensoativo (por exemplo, polisorbato 80, macrogol, etc.), um agente de solubilizaçao (por exemplo, glicerina, etanol, etc.), um agente de tamponamento (por exemplo, ácido fosfórico ou seu sal de metal alcalino, ácido cítrico ou seu sal de metal alcalino, etc.), um agente de isotonização (por exemplo, cloreto de sódio, cloreto de potássio, manitol, sorbitol, glicose, etc.), um agente para ajuste de pH (por exemplo, ácido clorídrico, hidróxido de sódio, etc.), um conservante (por exemplo, p-oxibenzoato de etila, ácido benzóico, metilparabeno, propilparabeno, álcool benzílico, etc.), um solubilizante (por exemplo, glicerina concentrada, meglumina, etc.), um auxiliar de dissolução (por exemplo, propileno glicol, sacarose, etc.), um agente de nivelamento (por exemplo, glicose, álcool benzílico, etc.), para preparar o mesmo em injeção aquosa; ou através de dissolução, suspensão ou emulsificação com um óleo vegetal, tal como óleo de oliva, óleo de gergelim, óleo de semente de algodão, óleo de milho, etc., um auxiliar de dissolução, tal como propileno glicol ou semelhante para preparar uma injeção oleosa.
Uma forma de dosagem oral pode ser produzida da maneira convencional através de adição do composto da presente invenção ou da droga concomitante, por exemplo, um excipiente (por exemplo, lactose, sacarose, amido, etc.), um agente de desintegração (por exemplo, amido, carbonato de cálcio, etc.), um aglutinante (por exemplo, amido, goma arábica, carbóximetil celulose, polivinilpirrolidona, hidróxipropil celulose, etc.), um lubrificante (por exemplo, talco, estearato de magnésio, polietilenoglicol 6000, etc.) e outros aditivos, compressão da mistura resultante e, se necessário, revestimento do produto comprimido para fins de disfarce do sabor, degradação entérica ou liberação sustentada através de técnicas publicamente conhecidas per ser. Agentes de revestimento para essa finalidade incluem, por exemplo, hidróxipropilmetil celulose, etil celulose, hidróximetil celulose, hidróxipropil celulose, polioxietileno glicol, Tween 80, Prulonic F68, ftalato de acetato de celulose, ftalato de hidróxipropilmetil celulose, succinato de acetato de hidróximetil celulose, Eudragit (fabricado pela Rohm Company, Alemanha, copolímero de ácido metacrílico/ ácido acrílico) e corantes (por exemplo, óxido de ferro, dióxido de titânio). A forma de dosagem oral pode estar em uma forma de dosagem com liberação
imediata ou uma forma de dosagem com liberação sustentada.
Por exemplo, em um supositório, o composto da presente invenção ou a droga concomitante é preparada em uma composição sólida, semi-sólida ou líquida oleosa ou aquosa através de técnicas publicamente conhecidas per se bases oleosas usadas para a composição descrita acima incluem glicerídeos de ácidos graxos superiores [por exemplo, manteiga de cacau, uitepsóis (fabricado pela Dynamite Nobel Company, Alemanha), etc.], ácidos graxos moderados [por exemplo miglióis (fabricado pela Dynamite Nobel Company, Alemanha), etc.], óleos vegetais (por exemplo, óleo de gergelim, óleo de soja, óleo de semente de algodão, etc.) e semelhantes. Bases aquosas incluem, por exemplo, polietileno glicol e polipropileno glicol. Bases para géis aquosos incluem, por exemplo, borrachas naturais, derivados de celulose, polímeros de vinila, polímeros acrílicos, etc.
Exemplos da forma de dosagem com liberação sustentada acima incluem microcápsulas com liberação sustentada e semelhantes.
Microcápsulas com liberação sustentada podem se obtidas através de métodos publicamente conhecidos per se e são, de preferência, preparadas na forma, por exemplo, de uma forma de dosagem com liberação sustentada através do método [2] mostrado abaixo e administradas.
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De preferência, o composto da presente invenção é preparado em uma forma de dosagem para administração oral, tal como uma forma de dosagem sólida (por exemplo, uma forma de dosagem em pó, grânulos, tabletes, cápsulas) ou em uma forma de dosagem para administração retal, tal como um supositório, etc. Uma forma de dosagem para administração oral é particularmente preferida. A droga concomitante pode ser preparada na forma de dosagem, dependendo dos tipos de droga.
Aqui depois, [1] um preparado injetável do composto da presente invenção ou a droga concomitante e sua produção, [2] um preparado com liberação sustentada ou liberação imediata do composto da presente
invenção ou a droga concomitante e sua produção e [3] um preparado de desintegração oral, sublingual ou bucal rápida do composto da presente invenção ou da droga concomitante e sua produção serão especificamente descritos.
[1] Preparado Injetável e sua Produção
Um preparado injetável obtido através de dissolução do composto da presente invenção ou da droga concomitante em água é preferido. O preparado injetável pode conter um benzoato e/ou um salicilato.
O preparado injetável é obtido através de dissolução do composto da presente invenção ou da droga concomitante e opcionalmente um benzoato e/ou um salicilato em água.
Exemplos do benzoato e/ou salicilato descritos acima incluem um sal de metal alcalino, tal como sais de sódio e potássio, etc., um sal de metal alcalino terroso, tal como sais de cálcio e magnésio, etc., um sal de amônio, um sal de meglumina, um sal de um ácido orgânico, tal como trometamol e semelhantes.
A concentração do composto da presente invenção ou da droga concomitante no preparado injetável é cerca de 0,05 a 50% peso/v, de preferência, cerca de 0,3 a 20% peso/v. A concentração do benzoato e/ou salicilato é 0,5 a 50% peso/v, de preferência, 3 a 20% peso/v.
Além disso, aditivos geralmente usado em um preparado injetável, tais como um estabilizante (ácido ascórbico, piro-sulfeto de sódio, etc.) um tensoativo (polisorbato 80, macrogol, etc.), um agente de solubilidade (glicerina, etanol, etc.), um agente de isotonização (cloreto de sódio, cloreto de potássio, etc.), um agente de tamponamento (ácido fosfórico e seu sal de metal alcalino, ácido cítrico e seu sal de metal alcalino, etc.), um agente de dispersão (hidróxipropil metil celulose, dextrina), um agente para ajuste de pH (ácido clorídrico, hidróxido de sódio, etc.), um conservante (poxibenzoato de etila, ácido benzóico, etc.), um solubilizante (glicerina
100 concentrada, meglumina, etc.), um auxiliar de dissolução (propileno glicol, sacarose, etc.), um agente de nivelamento (glicose, álcool benzílico, etc.) são apropriadamente adicionados ao preparado. Qualquer um desses aditivos é adicionado em uma quantidade geralmente usada em um preparado injetável.
preferência, de 2,5 a 8,0 através de adição de um agente para ajuste de pH.
O preparado injetável é obtido através de dissolução do composto da presente invenção ou da droga concomitante e opcionalmente um benzoato e um salicilato e, se necessário, os aditivos acima em água. 10 Esses componentes podem ser dissolvidos em qualquer ordem de acordo com a mesma maneira conforme em um preparado injetável convencional.
Uma solução aquosa para injeção é, de preferência, aquecida e usada como um preparado injetável após esterilização através de filtração ou submetida à autoclave conforme em um preparado injetável convencional 15 para proporcionar um preparado inj etável.
Um preparado injetável aquoso é, de preferência, submetida à autoclave, por exemplo, a 100 a 121 °C durante 5 a 30 minutos.
Além disso, o preparado pode estar em uma forma de solução à qual atividade antibacteriana é conferida para ser utilizável como uma forma Ό de dosagem múltipla em dosagem dividida.
[2] Preparado com Liberação ou Liberação Imediata e sua
Produção
Um preparado com liberação sustentada preferido compreende um núcleo compreendendo o composto da presente invenção ou droga 25 concomitante, o qual é opcionalmente revestido com um material insolúvel em água ou um polímero de intumescimento. Por exemplo, um preparado com liberação sustentada para administração oral de uma forma de dosagem uma vez ao dia é preferido.
Exemplos do material insolúvel em água usado para o agente
101 de revestimento incluem éteres de celulose, tais como etil celulose, butil celulose, etc., ésteres de celulose, tais como acetato de celulose, propionato de celulose, etc., poli vinil ésteres, tais como acetato de polivinila, butirato de polivinila, etc., polímeros de ácido acrílico, tal como um copolímero de ácido acrílico/ácido metacrílico, um copolímero de metil metacrilato, um copolímero de etóxietil metacrilato/cinamoetil metacrilato/aminoalquil metacrilato, um ácido poliacrílico, um ácido polimetacrílico, um copolímero de ácido metacrílico/alquilamida, um (poli)metil metacrilato, um polimetacrilato, um copolímero de aminoalquil metacrilato, um anidrido (poli)metacrílico, um copolímero de glicidil metacrilato, em particular, a série de Eudragits (Rohm & Pharma), tais como Eudragit RS-100, RL-100, RS30D, RL-30D, RL-PO e RS-PO (copolímero de etil acrilato/metil metacrilato/clorotrimetil metacrilato/etil amônio) e Eudragit NE-30D (copolímero de metil metacrilato/etil acrilato), etc., óleos hidrogenados, tal como óleo de mamona hidrogenado (por exemplo, LUBRI WAX (Freund Industrial Co., Ltda.), etc.), ceras, tais como cera de carnaúba, um éster de glicerina de ácido graxo, parafina, etc., ésteres de ácido graxo de poliglicerina, etc.
O polímero de intumescimento é, de preferência, um polímero tendo um grupo ácido removível e exibindo intumescimento pH-dependente e um polímero tendo um grupo removível ácido, o qual sofre um menor intumescimento em um pH ácido tal como no estômago, mas é intumescido extensivamente em um pH neutro, tal como nos intestinos delgado e grosso, é preferido.
Exemplos de tal polímero tendo um grupo removível ácido e exibindo intumescimento pH-dependente incluem um polímero de ácido poliacrílico reticulado, tais como Carbomers 934P, 940, 941, 974P, 980, 1342, etc., policarbofila e policarbofila de cálcio (todos fabricados pela BF Goodrich Chemicals), Hivis Wakos 103, 104, 105 e 304 (todos fabricados
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pela Wako Pure Chemical Industries, Ltda.), etc.
O agente de revestimento usado no preparado com liberação sustentada pode ainda conter um material hidrofílico.
Exemplos do material hidrofílico incluem um polissacarídeo o qual pode ter um grupo sulfato, tal como pululana, dextrina, alginatos de metal alcalino, etc., um polissacarídeo tendo um grupo hidróxialquila ou um grupo carbóxialquila, tal como hidroxipropil celulose, hidróxipropilmetil celulose, carbóximetilcelulose de sódio, etc., metil celulose, polivinil pirrolidona, álcool polivinílico, polietileno glicol, etc.
A quantidade do material insolúvel em água contido no agente de revestimento do preparado com liberação sustentada é cerca de 30 a cerca de 90% (peso/peso), de preferência, cerca de 35 a cerca de 80% (peso/peso), mais preferivelmente, cerca de 40 a cerca de 75% (peso/peso) e o teor de polímero de intumescimento é cerca de 3 a cerca de 30% (peso/peso), de preferência, cerca de 3 a cerca de 15% (peso/peso). O agente de revestimento pode ainda conter o material hidrofílico e a quantidade do material hidrofílico contida no agente de revestimento é cerca de 50% (peso/peso) ou menos, de preferência, cerca de 5 a cerca de 40% (peso/peso), mais preferivelmente, cerca de 5 a cerca de 35% (peso/peso). Conforme usado aqui, o % (peso/peso) |p0 acima é usado para significar um % em peso baseado na composição de agente de revestimento, a qual é o restante da solução de agente de revestimento após relação de qualquer solvente (por exemplo, água, um álcool inferior, tal como metanol, etanol, etc.).
O preparado com liberação sustentada é fabricado através de preparo de um núcleo contendo uma droga conforme ilustrada abaixo, seguido por revestimento do núcleo resultante com uma solução de agente de revestimento obtida através de fusão térmica de um material insolúvel em água ou um polímero de intumescimento ou através de solução ou dispersão de tal material em um solvente.
103
I. Produção do Núcleo contendo droga
O formato de um núcleo contendo uma droga a ser revestida com um agente de revestimento (aqui depois algumas vezes simplesmente referido como um núcleo) não está especificamente limitado, mas, de preferência, preparado em um formato em partícula, tal como grânulos, grânulos finos ou semelhantes.
Quando um núcleo é grânulos ou grânulos finos, ele tem um tamanho médio de partícula, de preferência, de cerca de 150 a cerca de 2.000 gm, mais preferivelmente, cerca de 500 a cerca de 1.400 pm.
Um núcleo pode ser preparado de uma maneira convencional. Por exemplo, uma droga é misturada com um excipiente, aglutinante, agente de desintegração, lubrificante, estabilizante adequado, etc., e, então, submetido à granulação por extrusão a úmido, granulaçao em leito fluidizado ou semelhantes.
O teor de droga no núcleo é cerca de 0,5 a cerca de 95% (peso/peso), de preferência, cerca de 5,0 a cerca de 80% (peso/peso), mais preferivelmente, cerca de 30 a cerca de 70% (peso/peso).
Exemplos do excipiente contido no núcleo incluem um sacarídeo, tal como sacarose, lactose, manitol, glicose, etc., amido, celulose cristalina, fosfato de cálcio, amido de milho, etc. Dentre os mesmos, celulose cristalina e amido de milho são preferidos.
Exemplos do aglutinante usado incluem álcool polivinílico, hidróxipropil celulose, polietileno glicol, polivinil pirrolidona, Pluronic F68, goma arábica, gelatina, amido, etc. Exemplos do agente de desintegração incluem carbóximetil celulose de cálcio (ECG505), croscarmelose de sódio (Ac-Di-Sol), polivinil pirrolidona reticulada (crospovidona), hidróxipropil celulose com baixa substituição (L-HPC), etc. Dentre os mesmos, hidróxipropil celulose, polivinil pirrolidona e hidróxipropil celulose com baixa substituição são preferidos. Exemplos do lubrificante e do
104 anticoagulante incluem talco, estearato de magnésio e seus sais inorgânicos e exemplos do lubrificante incluem polietileno glicol, etc. Exemplos do estabilizante incluem um ácido tal como ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, etc.
Além da técnica descrita acima, o núcleo pode ser preparado usando outras técnicas, tais como a técnica de granulação por turbilhonamento, uma técnica de revestimento em panela, uma técnica de revestimento em leito fluidizado e uma técnica de granulação por fusão, em que uma droga ou uma mistura da droga com um excipiente lubrificante, etc. é adicionada aos poucos às partículas de veículo inertes como sementes para o núcleo com pulverização de um aglutinante dissolvido em um solvente adequado, tal como água, um álcool inferior (por exemplo, manitol, etanol, etc.), ou semelhante. Exemplos das pc. Exemplos das partículas de veículo inertes incluem aquelas preparadas a partir de sacarose, lactose, amido, celulose cristalina e ceras e, de preferência, esses veículos têm um tamanho médio de partícula de cerca de 100 pm a cerca de 1.500 pm.
De forma a separar a droga contida no núcleo de um agente de revestimento, a superfície do núcleo pode ser coberta com um material protetor. Exemplos do material protetor incluem o material hidrofílico descrito acima e um material insolúvel em água. O material protetor preferido é polietileno glicol ou um polissacarídeo tendo um grupo hidróxialquila ou um grupo carbóxialquila, mais preferivelmente, hidróxi propii metil celulose e hidróxipropil celulose. O material protetor pode conter como um estabilizante, um ácido, tal como ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, etc. e um lubrificante, tal como talco. Quando o material protetor é usado, a quantidade do mesmo a ser revestida é cerca de 1 a cerca de 15% (peso/peso), de preferência cerca de 1 a cerca de 10% (peso/peso), mais preferivelmente cerca de 2 a cerca de 8% (peso/peso) baseado no núcleo.
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O material protetor pode ser revestido através de um método de revestimento convencional e, especificamente, o núcleo é revestido por pulverização com o material protetor através de uma técnica de revestimento em leito fluidizado, uma técnica de revestimento em panela, etc.
II. Revestimento do Núcleo com Agente de Revestimento
O núcleo obtido em I acima é revestido com uma solução de agente de revestimento preparada através de aquecimento por fusão do material insolúvel em água e do polímero de intumescimento pH-dependente descrito acima e o material hidrofílico ou através de dissolução ou dispersão dos mesmos em um solvente para obter um preparado com liberação sustentada.
Como um método de revestimento do núcleo com a solução de agente de revestimento, existem, por exemplo, revestimento por pulverização, etc.
A proporção de composição do material insolúvel em água, polímero de intumescimento e material hidrofílico na solução de agente de revestimento pode ser apropriadamente escolhida para estar dentro das quantidades dos respectivos componentes contidos no revestimento.
A quantidade do agente de revestimento é cerca de 1 a cerca de 90% (peso/peso), de preferência cerca de 5 a cerca de 50% (peso/peso), mais preferivelmente, cerca de 5 a cerca de 35% (peso/peso) baseado no núcleo (excluindo o revestimento de material protetor).
Como o solvente para a solução de agente de revestimento, água em um solvente orgânico podem ser usados unicamente ou como uma mistura dos mesmos. Quando uma mistura é usada, a proporção de água e do solvente orgânico (água/solvente orgânico: uma proporção em peso) pode variar com a faixa de 1 a 100% e é, de preferência, 1 a cerca de 30%. O solvente orgânico não está particularmente limitado, na medida em que ele possa dissolver o material insolúvel em água e exemplos do solvente incluem
106 um álcool inferior, tal como álcool metílico, álcool etílico, álcool isopropílico, álcool n-butílico, etc., uma alcanona inferior tal como acetona, acetonitrila,
clorofórmio, cloreto de metileno, etc. Dentre os mesmos, um álcool inferior é preferido, com álcool etílico e álcool isopropílico sendo mais preferidos. 5 Água e uma mistura de água e um solvente orgânico são usados, de preferência, como solventes para a solução de agente de revestimento. Nesse caso, um ácido, tal como ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, etc. pode ser adicionado à solução de agente de revestimento, se necessário, para fins de estabilização da solução de agente de
revestimento.
Para realizar o revestimento através de revestimento por pulverização, o revestimento pode ser feito usando um método de revestimento convencional. Especificamente, o núcleo é pulverizado com um solução de agente de revestimento através de uma técnica de revestimento em leito fluidizado, uma técnica de revestimento em panela ou semelhante. Nesse momento, um lubrificante tal como talco, óxido de titânio, estearato de magnésio, estearato de cálcio, anidrido silícico leve, etc. e um plastificante tal como éster graxo de glicerina, óleo de mamona endurecido, citrato de trietila, álcool cetílico, álcool estearílico, etc. pode também ser adicionado.
Após revestimento com um agente de revestimento, um agente anti-estática, tal como talco, também pode ser misturado, se necessário.
O preparado com liberação imediata pode ser um líquido (solução, suspensão, emulsão, etc.) ou um sólido (partículas, pílulas, tabletes, etc.). Um preparado oral e um preparado parenteral, tal como um preparado 25 injetável, pode ser usado e um preparado oral é preferido.
O preparado com liberação imediata pode usualmente conter um veículo, aditivos e um excipiente (aqui depois algumas vezes abreviado como excipientes) os quais são convencionalmente usados no campo farmacêutico, além de uma droga o qual é um ingrediente ativo. Os
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excipientes farmacêuticos não estão especificamente limitados, na medida em que eles sejam excipientes convencionalmente usados no campo farmacêutico. Exemplos do excipiente para um preparado sólido oral incluem lactose, amido, amido de milho, celulose cristalina (Avicel PH1O1, fabricado pela Asahi Kasei Corporation, etc.), açúcar em pó, açúcar granulado, manitol, anidrido silícico leve, carbonato de magnésio, carbonato de cálcio, L-cisteína, etc., com amido de milho e manitol sendo preferidos. Qualquer um desses excipientes pode ser empregado sozinho ou em combinação uns com os outros. As quantidades dos excipientes são, por exemplo, cerca de 4,5 a cerca de 99,4 % peso/peso, de preferência cerca de 20 a cerca de 98,5 % peso/peso, mais preferivelmente, cerca de 30 a cerca de 97 % peso/peso, baseado no peso total do preparado com liberação imediata.
O teor da droga no preparado com liberação imediata pode ser apropriadamente selecionado da faixa de cerca de 0,5% a cerca de 95%, de preferência cerca de 1% a cerca de 60% para a quantidade toda do preparado com liberação imediata.
Quando o preparado com liberação imediata é um preparado sólido oral, o preparado contém um agente de desintegração além dos componentes descritos acima. Exemplos do agente de desintegração incluem carbóximetilcelulose de cálcio (ECG5O5 fabricado pela GOTOKU CHEMICAL Co., Ltda.), croscarmelose de sódio (por exemplo, Ac-Di-Sol fabricado pela Asahi Kasei Corporation), crospovidona (por exemplo, COLEDON CL fabricado pela BASF), hidróxipropil celulose baixamente substituída (Shin-Etsu Chemical Co., Ltda.), carbóximetil amido (MATSUTANI CHEMICAL INDUSTRY Co., Ltda,), carbóximetil amido de sódio (EXORITAB fabricado pela KIMURA SANGYO), α amido parcial (PCS fabricado pela Asahi Kasei Corporation), etc. Por exemplo, o agente de desintegração que desintegra grânulos através de absorção de água ou intumescimento quando de contato com a água ou forma um canal entre o
108 componente ativo compreendendo o núcleo e um excipiente pode ser usado. Qualquer um desses agentes de desintegração pode ser usado sozinho ou em combinação uns com os outros. A quantidade do agente de desintegração usado pode ser apropriadamente escolhida dependendo do tipo e da quantidade da droga usada ou do design do preparado em particular para desempenho de liberação pretendido. Por exemplo, a quantidade é cerca de 0,05 a cerca de 30 % peso/peso, de preferência cerca de 0,5 a cerca de 15 % peso/peso baseado no peso total do preparado com liberação imediata.
Quando o preparado com liberação imediata é um preparado sólido oral, o preparado sólido oral pode opcionalmente conter aditivos convencionalmente usados em um preparado sólido, além dos componentes descritos acima. Exemplos dos aditivos incluem aglutinantes (por exemplo, sacarose, gelatina, goma arábica em pó, metil celulose, hidróxipropil celulose, hidróxipropilmetil celulose, carbóximetilcelulose, polivinil pirrolidona, pululana, dextrina, etc.), lubrificantes (polietileno glicol, estearato de magnésio, talco, anidrido silícico leve (por exemplo, aerosil (NIPPON AEROSIL)), tensoativos (por exemplo, tensoativos aniônicos tal como alquilsulfato de sódio, tensoativo não iônicos tal como éster graxo de polioxietileno, sorbitan éster graxo de polioxietileno, derivados de óleo de mamona de polioxietileno, etc.), colorantes (por exemplo, colorantes de alcatrão, caramelo, colcotar, óxido de titânio, riboflavinas), se necessário, corretores (por exemplo, adoçantes, flavorizantes, etc.), adsorventes, conservantes, agentes de umedecimento, agentes anti-estática, etc. Além disso, um ácido orgânico tal como ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido fumárico ou semelhante pode também ser adicionado como um estabilizante.
Como o aglutinante acima, hidróxipropil celulose, polietileno glicol e polivinil pirrolidona, etc. são, de preferência, usados.
O preparado com liberação imediata pode ser preparado
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através de mistura dos componentes descritos acima e amassamento da mistura, se necessário e, então, moldagem de acordo com uma técnica convencional para fabricação de preparados farmacêuticos. A mistura acima pode ser realizada de uma maneira convencional, por exemplo, através de 5 mistura, amassamento, etc. Especificamente, o onde o preparado com liberação imediata está na forma de partículas, o. preparado pode ser preparado através de mistura dos componentes com um granulador vertical, um amassador multi-finalidade (HATA IRON WORKS CO., LTDA), um granulador de leito fluidizado FD-5S (POWREX CORPORATION) ou ) semelhante e, então, granulação do resultante através de granulação por extrusão a úmido ou granulação em leito fluidizado através de uma técnica similar àquela para o preparo do núcleo do preparado com liberação sustentada descrito acima.
O preparado com liberação imediata e o preparado com liberação sustentada assim obtidos podem ser compostos como eles estão ou junto com excipientes farmacêuticos apropriados, em preparados farmacêuticos separadamente de uma maneira convencional para preparar os respectivos preparados para administração em combinação um com o outro simultaneamente ou determinados intervalos de tempo. Altemativamente, |p0 ambos os preparados podem ser compostos em uma única forma de dosagem para administração oral (por exemplo, grânulos, grânulos finos, tabletes, cápsulas) como eles estão ou junto com excipientes farmacêuticos apropriados. Ambos os preparados na forma de grânulos ou grânulos finos podem também ser enchidos em uma única cápsula para administração oral.
[3] Preparado Sublingual, Bucal ou de Desintegração Oral
Rápida e sua Produção
Um preparado sublingual, bucal ou de desintegração oral rápida pode estar na forma de um preparado sólido, tal como um tablete, ou pode estar na forma de um emplasto mucosal oral (filme) ou um filme de
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desintegração oral.
O preparado sublingual, bucal ou de desintegração oral rápida é, de preferência, um preparado contendo o composto da presente invenção ou - a droga concomitante e um excipiente. O preparado pode também conter agentes auxiliares, tais como um lubrificante, um agente de isotonização, um veículo hidrofílico, um polímero dispersável em água, um estabilizante, etc. Ainda, para fins de promoção da absorção e intensificação da biodisponibilidade, o preparado pode também conter β-ciclodextrina ou derivados de β-ciclodextrina (por exemplo, hidróxipropil-^-ciclodextrina, ^0 etc.) e semelhantes.
Exemplos dos excipientes acima incluem lactose, sacarose, Dmanitol, amido, celulose cristalina, anidrido silícico leve, etc. Exemplos do lubrificante incluem estearato de magnésio, estearato de cálcio, talco, sílica coloidal, etc., com estearato de magnésio e sílica coloidal sendo preferidos.
Exemplos do agente de isotonização incluem cloreto de sódio, glicose, frutose, manitol, sorbitol, lactose, sacarose, glicerina e uréia, com manitol sendo particularmente preferido. Como o veículo hidrofílico, por exemplo, um veículo hidrofílico de intumescimento, tal como celulose cristalina, etil celulose, polivinil pirrolidona reticulada, anidrido silícico leve, ácido silício, >0 fosfato de dicálcio, carbonato de cálcio, etc., com celulose cristalina (por exemplo, celulose microcristalina, etc.) sendo preferida. Como o polímero dispersável em água, por exemplo, uma goma (por exemplo, goma de tragacanto, goma acácia, goma guar), alginato (por exemplo, alginato de sódio), derivados de celulose (por exemplo, metil celulose, carbóximetilcelulose, hidróximetil celulose, hidróxipropil celulose, hidróxipropilmetil celulose), gelatina, amido solúvel em água, ácido poliacrílico (por exemplo, carbômero), ácido polimetacrílico, álcool polivinílico, polietileno glicol, polivinil pirrolidona, policarbofila, sal de palmitato de ascorbato, etc., com hidróxipropilmetil celulose, ácido
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poliacrílico, alginato, gelatina, carbóximetilcelulose, polivinil pirrolidona e polietileno glicol sendo preferidos. Hidróxipropilmetil celulose é particularmente preferido. Como o estabilizante, por exemplo, cisteína, tiosorbitol, ácido tartárico, ácido cítrico, carbonato de sódio, ácido ascórbíco, 5 glicina, sulfeto de sódio, etc., com ácido cítrico e ácido ascórbico sendo particularmente preferidos.
O preparado sublingual, bucal ou de desintegração oral rápida pode ser preparado através de mistura do composto da presente invenção ou da droga concomitante e um excipiente através de um método conhecido per 10 se. Além disso, se desejado, os agentes auxiliares descritos acima, tais como o lubrificante, agente de isotonização, veículo hidrofílico, polímero dispersável em água, estabilizante, colorante, adoçante, conservante, etc. podem também ser misturados. Após mistura dos componentes descritos acima simultaneamente ou em determinados intervalos de tempo, a mistura é 15 comprimida em tabletes para obter o tablete sublingual, bucal ou de desintegração oral rápida. De forma a obter uma dureza adequada, um solvente, tal como água, um álcool, etc. pode ser usado para umidifícar ou umedecer os componentes antes ou após tableteamento, seguido por secagem.
No preparo do emplastro mucosal oral (filme), o composto da |0 presente invenção ou a droga concomitante e o polímero dispersável em água (de preferência, hidróxipropil celulose, hidróxipropilmetil celulose), excipiente, etc. descritos acima são dissolvidos em um solvente tal como água, etc. e, então, a solução resultante é fundida em um filme. Além disso, aditivos tais como um plastificante, um estabilizante, um antioxidante, um 25 conservante, um colorante, um agente de tamponamento, um adoçante, etc. podem ser adicionados ao preparado. Um glicol, tal como polietileno glicol, propileno glicol, etc. pode ser adicionado para conferir uma elasticidade apropriada a um filme e um polímero bioadesivo (por exemplo, policarbofila, carbopol) pode também ser adicionado para intensificar a adesão do filme ao
112
revestimento mucosal oral. A fundição pode ser realizada entornando a solução sobre uma superfície não adesiva, dispersando a solução usando um aparelho de revestimento, tal como um bisturi, em uma espessura uniforme (de.preferência, aproximadamente 10 a 1000 mícrons) e, então, secagem da 5 solução para formar um filme. O filme assim formado é seco em temperatura ambiente ou enquanto se aquece e, então, cortado em pedaços, cada um tendo uma área de superfície desejada.
Um preparado de desintegração oral rápida preferido é, por
exemplo, um preparado de difusão rápida em uma forma de rede sólida, o qual compreende o composto da presente invenção ou uma droga concomitante e um veículo solúvel em água ou difusível em água inerte ao composto da presente invenção ou à droga concomitante. A rede é formada através de sublimação de um solvente da composição sólida compreendendo uma solução do composto da presente invenção ou a droga concomitante em 15 um solvente adequado.
Além do composto da presente invenção ou da droga concomitante, a composição do preparado de desintegração oral rápida pode, de preferência, conter um agente de formação de matriz e componentes secundários.
Exemplos do agente de formação de matriz incluem gelatinas, dextrinas e proteínas animais ou vegetais de soja, trigo, semente de psillium, etc.; materiais viscosos, tais como goma arábica, goma guar, agar, goma xantana, etc.; polissacarídeo; alginatos, carbóximetil celuloses; carragenanos; dextranas; pectinas; polímeros sintéticos, tais como polivinil pirrolidonas;
materiais derivados de complexos de gelatina-goma arábica, etc. O agente de formação de matriz ainda inclui sacarídeos, tais como manitol, dextrose, lactose, galactose, trealose, etc.; sacarídeos cíclicos, tais como ciclodextrinas, etc.; sais inorgânicos, tais como fosfato de sódio, cloreto de sódio, silicato de alumínio, etc.; aminoácidos tendo 2 a 12 átomos de carbono, tais como
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&
113 glicina, L-alanina, ácido L-aspártico, ácido L-glutâmico, L-hidróxiprolina, Lisoleucina, L-leucina, L-fenilalanina, etc.
Um ou mais agentes de formação de matriz podem ser incorporados em uma solução ou suspensão antes de solidificação. Os agentes 5 de formação de matriz podem estar presentes além de um tensoativo ou podem estar presentes na ausência de um tensoativo, os agentes de formação de matriz servindo não apenas para formar a matriz em si, mas também para ajudar a manter a difusão do composto da presente invenção ou da droga concomitante em uma solução ou suspensão.
A composição pode conter um componente secundário, tal como um conservante, um antioxidante, um tensoativo, um agente de espessamento, um colorante, um agente para ajuste de pH, um flavorizante, um adoçante, um agente para disfarce de sabor, etc. Como o colorante adequado, existem, por exemplo, vermelho de óxido de ferro, preto e amarelo, corantes FD & C disponíveis da, ERIS & EVERALD tais como FD & C Blue
No. 2 e FD & C Red No. 40, etc. Exemplos de flavorizante adequados incluem menta, framboesa, licorice, laranja, limão, toranja, caramelo, baunilha, cereja, aroma de uva e uma combinação dos mesmos. Exemplos do agente para ajuste de pH adequados incluem ácido cítrico, ácido tartárico, 0 ácido fosfórico, ácido clorídrico e ácido maleico. Exemplos do adoçante adequado incluem aspartame, acesulfame K e taumatina. Exemplos do agente para disfarce de sabor adequados incluem bicarbonato de sódio, resinas de troca de íons, compostos de inclusão de ciclodextrina, adsorventes e apomorfina microencapsulada.
O preparado geralmente contém o composto da presente invenção ou a droga concomitante em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 50% em peso, de preferência cerca de 0,1 a cerca de 30% em peso, e, de preferência, o preparado (o tablete sublingual, bucal, etc. descrito acima) permite que 90% ou mais do composto da presente invenção ou da droga
114 %
concomitante sejam dissolvidos (em água) dentro de um período de tempo de cerca de 1 a cerca de 60 minutos, de preferência cerca de 1 minuto a cerca de 15 minutos, mais preferivelmente, cerca de 2 minutos a cerca de 5 minutos ou é um preparado de desintegração oral rápida o qual desintegra dentro de cerca 5 de 1 a cerca de 60 segundos, de preferência, cerca de 1 a cerca de 30 segundos, mais preferivelmente, cerca de 1 a cerca de 10 segundos, após ser colocado na cavidade oral.
A quantidade do excipiente acima é cerca de 10 a cerca de
99% em peso, de preferência, cerca de 30 a cerca de 90% em peso baseado no peso total do preparado. A quantidade de β-ciclodextrina ou derivado de βciclodextrina é cerca de 0 a cerca de 305 em peso baseado no peso total do preparado. A quantidade do lubrificante é cerca de 0,01 a cerca de 10% em peso, de preferência, cerca de 1 a cerca de 5% em peso, baseado no peso total do preparado. A quantidade do agente de isotonização é cerca de 0,1 a cerca 15 de 90% em peso, de preferência, cerca de 10 a cerca de 70% em peso, baseado no peso total do preparado. A quantidade do veículo hidrofílico é cerca de 0,1 a cerca de 50% em peso, de preferência, cerca de 10 a cerca de 30% em peso, baseado no peso total do preparado. A quantidade do polímero dispersável em água é cerca de 0,1 a cerca de 30% em peso, de preferência, ^0 cerca de 10 a cerca de 5% em peso, baseado no peso total do preparado. A quantidade do estabilizante é cerca de 0,1 a cerca de 10% em peso, de preferência, cerca de 1 a cerca de 5% em peso, baseado no peso total do preparado. Se necessário, o preparado descrito acima pode ainda conter aditivos tais como um colorante, um adoçante, um conservante, etc.
Uma dose dos preparados combinados da presente invenção varia dependendo do tipo do composto da presente invenção, idade, peso corporal, condições, forma de dosagem, via para administração, período de dosagem, etc.
Uma dose do composto da presente invenção pode variar,
115 *
>0 dependendo do indivíduo, a ser administrado, órgão alvo, condições, via de administração, etc. e em administração oral, o composto é geralmente administrado ao paciente com câncer (com um peso corporal de 60 kg) em uma dose diária de cerca de 0,01 a cerca de lOOmg, de preferência, cerca de 0,1 a cerca de 50 mg e, mais preferivelmente, cerca de 0,1 a cerca de 20 mg. Em administração parenteral, uma única dose do composto pode variar, dependendo do indivíduo a ser administrado, órgão alvo, condições, via de administração, etc. E, na forma de uma forma de dosagem injetável, é vantajoso administrar intravenosamente o composto ao paciente com câncer (com peso corporal de 60 kg) geralmente em uma dose diária de cerca de 0,001 a cerca de 30 mg, de preferência, cerca de 0,01 a cerca de 20 mg e, mais preferivelmente, cerca de 0,01 a cerca de 10 mg. Para outras espécies de animais, a dose correspondente conforme convertido por peso de 60 kg pode ser administrada. Naturalmente, a dose pode variar dependendo das condições individuais conforme descrito acima; em tal caso, uma dose menor do que a dose fornecida acima pode ser suficiente ou uma dose maior do que a faixa acima pode ser usada.
É possível ajustar qualquer faixa de uma dose para a droga concomitante, na medida em que ela não cause efeitos colaterais adversos. Uma dose diária da droga concomitante pode variar, dependendo da gravidade da doença, da idade, sexo, peso corporal e suscetibilidade do indivíduo, período e intervalos de dosagem, características, formulação, tipo e componentes ativos do preparado farmacêutico, etc. E não particularmente limitada. Por exemplo, em administração oral, a dose é de 0,001 a 2000 mg, de preferência, cerca de 0,01 a 500 mg e, preferivelmente, cerca de 0,1 a 100 mg por kg de peso corporal em mamíferos em termos de uma droga; usualmente, essa dose é administrada dividindo 1 a 4 vezes por dia.
Quando os preparados farmacêuticos da presente invenção são está cerca mais
JM$
116
J£3 >0 administrados, eles podem ser administrados concomitantemente. Altemativamente, a droga concomitante é primeiro administrado e, então, o composto da presente invenção é administrado ou o composto da presente invenção é primeiro administrado e, então, a droga concomitante é administrada. Quando eles são administrados em determinados intervalos de tempo, os intervalos podem variar, dependendo do componente ativo a ser administrado, da forma de dosagem e da via de administração; por exemplo, quando a droga concomitante é primeiro administrado, o composto da presente invenção pode ser administrado dentro de 1 minuto a 3 dias, de preferência, 10 minutos a 1 dia, mais preferivelmente, 15 minutos a 1 hora após a administração da droga concomitante. Quando o composto da presente invenção é primeiro administrado, a droga concomitante pode ser administrada dentro de 1 minuto a 1 dia, de preferência, 10 minutos a 6 horas, mais preferivelmente, 15 minutos a 1 hora após a administração do composto da presente invenção.
Como um método preferido de administração, por exemplo, cerca de 0,001 a 200 mg/kg da droga concomitante na forma de um preparado de dosagem oral são administrados oralmente e, após cerca de 15 minutos, cerca de 0,005 a 0,5 mg/kg do composto da presente invenção na forma de um preparado parenteral são administrados parenteralmente como uma dose diária.
Como as metastinas, são usadas, por exemplo, metastina humana descrita no WO 00/24890, metastina de camundongo ou de rato descrita no WO 01/75104, etc.
Exemplos específicos da metastina humana incluem um peptídeo compreendendo a 47°-54° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 e consistindo de 8 a 54 resíduos de aminoácido e semelhantes.
O peptídeo compreendendo as 47°-54° seqüências de
117
aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 e consistindo de 8 a 54 resíduos de aminoácido pode ser qualquer peptídeo, na medida em que ele seja um peptídeo compreendendo as 47°-54° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 e consistindo de 8 a 54 resíduos de aminoácido, mas significa que esses peptídeos têm substancialmente a mesma atividade fisiológica (por exemplo, uma atividade de ligação a receptor, uma ação de transdução de sinal, uma ação de elevação do nível de açúcar, uma ação de promoção da secreção de glucagon pancreático, uma ação de promoção de formação de urina, etc.). Especificamente, são usados (i) um peptídeo tendo a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1, (ii) um peptídeo compreendendo as 47°-54° seqüências de aminoácido no Ctérmino na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 e consistindo de 8 a 15 resíduos de aminoácido, etc.
Mais especificamente, a metastina humana usada inclui (i) um peptídeo tendo a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 54 (1-54)), (ii) um peptídeo consistindo das 40°-54° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 15 (40-54); SEQ ID NO: 15), (iii) um peptídeo consistindo das 45°-54° seqüências de aminoácido Ν’terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ED NO: 1 (metastina humana 10 (45-54); SEQ ID NO. 16), (iv) um peptídeo consistindo das 46°-54° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 9 (46-54); SEQ ID NO: 17), (v) um peptídeo consistindo das 47°-54° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 8 (47-54); SEQ ID NO: 18), etc.
Como metastina de camundongo (A), são usadas, por exemplo, (i) um peptídeo compreendendo as 134o-14Io seqüências de aminoácido N118
terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 3 e consistindo de 8 a 52 resíduos de aminoácidos. Exemplos específicos de metastina de camundongo (A) usadas incluem (i) um peptídeo consistindo das 90o-14Io seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido 5 representada por SEQ ID NO: 3, (ii) um peptídeo consistindo das 132o-14Io seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 3, (iii) um peptídeo consistindo das 127o-14Io seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 3 e semelhantes.
Como metastina de camundongo (B), são usadas, por exemplo, (i) um peptídeo compreendendo as 13 8o-145° seqüências de aminoácido Nterminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 5 e consistindo de 8 a 52 resíduos de aminoácidos. Exemplos específicos de metastina de camundongo (B) usadas incluem um peptídeo consistindo das 15 95o-145° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 5 e semelhantes.
Como a metastina de rato, são usadas, por exemplo, (i) um peptídeo compreendendo as 112o-119° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 7 e consistindo de a 52 resíduos de aminoácido. Exemplos específicos de metastina de rato usadas incluem (i) um peptídeo consistindo das 68o-119° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 7, (ii) um peptídeo consistindo das 110o-119° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ 25 ID NO: 7, (iii) um peptídeo consistindo das 105o-119° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 7 e semelhantes.
Por toda a especificação, as metastinas são representadas de acordo com a forma convencional de descrição de peptídeos, isto é, o N119 &
término (amino término) do lado esquerdo e o C-término (carboxila término) do lado direito. No peptídeo representado por SEQ ID NO: 1, o C-término pode estar em qualquer forma de um grupo carboxila (-COOH), um carboxilato (-COO), uma amida (-CONH2) e um éster (-COOR). Aqui, 5 exemplos de R do grupo éster ou amida de alquila incluem um grupo Cr6 alquila, tal como metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, etc.; um grupo C3.8 cicloalquila, tal como ciclopentila, ciclohexila, etc.; um grupo C6_I2 arila, tal como fenila, α-naftila, etc.; uma C7.14 aralquila, tal como um grupo fenilCi_2 alquila, por exemplo, benzila, fenetila, benzidrila, etc. ou um grupo anaftil-Ci-2 alquila, tal como a-naftilmetila, etc.; um grupo pivaloilóximetila, os quais são amplamente usados como um éster para uso oral e semelhantes.
Além disso, as metastinas incluem peptídeos em que o grupo amino no resíduo de metionina N-terminal é protegido com um grupo de proteção (por exemplo, um grupo Cr6 alquila, tal como um grupo C2.6 15 alcanoíla, por exemplo, um grupo formila, um grupo acetila, etc.); aqueles em que a região N-terminal é clivada in vivo e o grupo glutamila assim formado é piroglutaminado; aqueles em que um substituinte (por exemplo, -OH, -SH, grupo amino, grupo imidazol, grupo indol, grupo guanidino, etc.) sobre a cadeia lateral de um aminoácido na molécula é protegido com um grupo de tO proteção adequado (por exemplo, um grupo Cr6 acila, tal como um grupo C2.6 alcanoíla, por exemplo, um grupo formila, grupo acetila, etc.) ou peptídeos conjugados, tais como glicopeptídeos ligados à cadeias de açúcar.
Para os sais da metastina da presente invenção, preferidos são sais com bases fisiologicamente aceitáveis (por exemplo, sais de metal 25 alcalino) ou ácidos (por exemplo, ácidos orgânicos ou ácidos inorgânicos), etc., especialmente preferidos são sais de adição de ácido. Exemplos de tais sais incluem sais, por exemplo, com ácidos inorgânicos (por exemplo, ácido clorídrico, ácido fosfórico, ácido hidrobrômico, ácido sulfurico); sais com ácidos orgânicos (por exemplo, ácido acético, ácido fórmico, ácido
120 &
propiônico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido oxálico, ácido benzóico, ácido metanosulfônico, ácido benzeno-sulfônico) e semelhantes.
Como os DNAs que codificam metastinas, são usados, por exemplo, DNAs que codificam metastina humana descritos no WO 00/24890, DNAs que codificam metastina de camundongo ou rato descritos no WO 01/75104, etc.
Os DNAs que codificam as metastinas podem ser qualquer um de DNA genômico, biblioteca de DNA genômico, cDNA derivado das células
e tecidos descritos acima, biblioteca de cDNA derivada das células e tecidos descritos acima e DNA sintético. O vetor a ser usado para a biblioteca pode ser qualquer um de bacteriófago, plasmídeo, cosmídeo e fagemídeo. O DNA pode também ser diretamente amplificado através de reação em cadeia de polimerase por transcriptase reversa (aqui depois abreviada como RT-PCR) usando o RNA total ou a fração de mRNA preparada a partir dos tecidos e células descritos acima. O DNA que codifica metastina humana, precursor de metastina de camundongo (A), precursor de metastina de camundongo (B) ou metastina de rato pode ser qualquer DNA, na medida em que ele seja um DNA compreendendo cada seqüência de base representada por SEQ ID NO: >0 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 8 um DNA compreendendo uma seqüência de base hibridizável à seqüência de base representada por SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 8 sob condições altamente estringentes e codifique um metastina humana, precursor de metastina de camundongo (A), precursor de metastina de camundongo (B) ou metastina de rato descrita acima. Exemplos específicos do DNA hibridizável à seqüência de base representada por qualquer uma de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 8 incluem DNAs compreendendo uma seqüência de base tendo pelo menos cerca de 70% de homologia, de preferência pelo menos cerca de 80% de homologia, mais preferivelmente
121
pelo menos cerca de 90% de homologia e} ainda mais preferivelmente, pelo menos cerca de 95% de homologia, à seqüência de base representada por qualquer uma de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 8.
A homologia na seqüência de base pode ser medida sob as seguintes condições (um valor de expectativa -10; gaps são permitidas; filtração = ON; escore de combinação = 1; escore de combinação errônea = 3) usando o algoritmo de escore de homologia BLAST da NCBI (National
Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool).
A hibridização pode ser realizada através de métodos publicamente conhecidos per se ou através de modificações desses métodos, por exemplo, de acordo com o método descrito em Molecular Cloning, 2a (J. Sambrook e colaboradores, Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989), etc. Uma biblioteca comercialmente disponível também pode ser usada de acordo com 15 as instruções do protocolo do fabricante em anexo. De preferência, a hibridização pode ser realizada sob condições altamente estringentes.
As condições altamente estringentes usadas aqui são, por exemplo, aquelas em uma concentração de sódio de cerca de 19 a 40 mM, de preferência cerca de 19 a 20 mM, em uma temperatura de cerca de 50 a 70 °C, Ό de preferência cerca de 60 a 65 °C. Em particular, condições de hibridização em uma concentração de sódio de cerca de 19 mM em uma temperatura de cerca de 65 °C são mais preferidas.
Especificamente, como o DNA que codifica a metastina humana consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID 25 NO: 1, o DNA consistindo da seqüência de base representada por SEQ ID NO: 2 é usado. Conseqüentemente, para a seqüência de base que codifica a metastina humana consistindo das várias seqüências de aminoácido descritas acima, uma seqüência de base correspondendo a cada uma das seqüências de aminoácido parciais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID
122 ja3
NO: 1 pode ser pode ser escolhida da seqüência de base representada por SEQ ED NO: 2.
Como o DNA que codifica o precursor de metastina de camundongo (A) compreendendo a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 3, são empregados um DNA consistindo da seqüência de base representada por SEQ ED NO: 4 e semelhantes. Conseqüentemente, para a seqüência de base que codifica o precursor de metastina de camundongo (A) consistindo das várias seqüências de aminoácido descritas acima, uma seqüência de base correspondendo a cada uma das seqüências de aminoácido parciais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 3 pode ser pode ser escolhida da seqüência de base representada por SEQ ID NO: 4.
Como o DNA que codifica o precursor de metastina de camundongo (B) compreendendo a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 5, são empregados um DNA consistindo da seqüência de base representada por SEQ ID NO: 6 e semelhantes. Conseqüentemente, para a seqüência de base que codifica o precursor de metastina de camundongo (B) compreendendo das várias seqüências de aminoácido descritas acima, uma seqüência de base correspondendo a cada uma das seqüências de aminoácido parciais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 5 pode ser pode ser escolhida da seqüência de base representada por SEQ ID NO: 6.
Como o DNA que codifica a metastina de rato compreendendo a seqüência de aminoácido representada por SEQ ED NO: 7, são empregados um DNA consistindo da seqüência de base representada por SEQ ED NO: 8 e semelhantes. Conseqüentemente, para a seqüência de base que codifica a metastina de rato consistindo das várias seqüências de aminoácido descritas acima, uma seqüência de base correspondendo a cada uma das seqüências de aminoácido parciais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ED NO: 7 pode ser pode ser escolhida da seqüência de base representada por SEQ ED NO: 8.
j2>0 &
123
Mais especificamente, para o peptídeo consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 54 (1-54)), um DNA contendo a seqüência de base representada por SEQ ED NO: 2, etc. é usado.
Para o peptídeo consistindo das 40°-54° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 15 (40-54); SEQ ID NO: 15); um DNA
contendo a seqüência de base representada por SEQ ID NO: 19, etc. é usado.
Para o peptídeo consistindo das 45°-54° seqüências de aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 10 (45-54); representado por SEQ ID NO: 16), um DNA contendo a seqüência de base representada por SEQ ID NO: 20, etc.
é usado.
Para o peptídeo consistindo das 46°-54° seqüências de 15 aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 9 (46-54); representado por SEQ ID NO: 17), um DNA contendo a seqüência de base representada por SEQ ED NO: 21, etc. é usado.
Para o peptídeo consistindo das 47°-54° seqüências de feo aminoácido N-terminais na seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 (metastina humana 8 (47-54); representado por SEQ ID NO: 18), um DNA contendo a seqüência de base representada por SEQ ID NO: 22, etc. é usado.
Como o receptor de metastina, seus peptídeos parciais ou sais dos mesmos, são usados, por exemplo, um receptor de metastina humana, seus peptídeos parciais ou sais dos mesmos descritos no WO 00/24890, um receptor de metastina humano, de camundongo ou de rato, seus peptídeos parciais ou sais dos mesmos descritos no WO 01/75104, etc.
Especificamente, uma proteína compreendendo a mesma ou
124 substancialmente a mesma seqüência de aminoácido como uma seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 13, etc. é usada como o receptor de metastina.
A seqüência de aminoácido a qual é substancialmente a mesma 5 seqüência de aminoácido que a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ED NO: 13 inclui, por exemplo, um aminoácido representado por SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ED NO: 13 inclui, por exemplo, uma seqüência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 70% de homologia, de preferência pelo menos cerca de 80% de homologia, mais preferivelmente pelo menos cerca de 90% de homologia e, ainda mais preferivelmente, pelo menos cerca de 95% de homologia, a uma a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 ou SEQIDNO: 13.
A homologia das seqüências de aminoácido pode ser medida sob as seguintes condições (um valor de expectativa = 10; gaps são permitidas; matriz: BLOSUM62; filtração - OFF) usando o algoritmo de escore de homologia BLAST da NCBI (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool).
Como a proteína compreendendo substancialmente a mesma ^0 seqüência de aminoácido que a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 13, preferida é uma proteína tendo substancialmente a mesma seqüência de aminoácido que a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 13 e tendo a atividade da mesma natureza que aquela de uma proteína tendo a 25 seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 ou SEQIDNO: 13, etc.
Como a atividade substancialmente da mesma natureza, existem, por exemplo, uma atividade de ligação a ligante, uma atividade de transdução de sinal e semelhantes. Substancialmente a mesma natureza é
125
usado para significar que a natureza dessas atividades é equivalente em termos de qualidade. Assim, as atividades tais como uma atividade de ligação a ligante, uma atividade de transdução de sinal, etc. são, de preferência, equivalentes (por exemplo, cerca de 0,01 a 100 vezes, de preferência cerca de 5 0,5 a 10 vezes, mais preferivelmente 0,5 a 2 vezes), mas diferenças em fatores quantitativos, tais como um nível dessas atividades ou tal como um peso molecular da proteína, podem estar presentes e são permissíveís.
As atividades, tais como uma atividade de ligação a ligante, uma atividade de transdução de sinal, etc. podem ser ensaiadas através de
métodos publicamente conhecidos per se com modificações e podem ser determinadas de acordo com métodos de determinação de um ligante ou métodos de triagem descritos, por exemplo, no WO 00/24890 ou WO
01/75104.
Exemplos do receptor de metastina usado incluem proteínas compreendendo (i) a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO:
9, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 13, da qual pelo menos 1 ou 2 (de preferência cerca de 1 a cerca de 30, mais preferivelmente cerca de 1 a cerca de 10 e, ainda mais preferivelmente, vários (1 ou 2)) aminoácidos são deletados; (ii) a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9, φθ SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 13, à qual pelo menos 1 ou 2 (de preferência cerca de 1 a cerca de 30, mais preferivelmente cerca de 1 a cerca de 10 e, ainda mais preferivelmente, vários (1 ou 2)) aminoácidos são adicionados;
(iii) a seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO:
ou SEQ ID NO: 13, na qual pelo menos 1 ou 2 (de preferência cerca de 1 a cerca de 30, mais preferivelmente cerca de 1 a cerca de 10 e, ainda mais preferivelmente, vários (1 ou 2)) aminoácidos são substituídos por outros aminoácidos; ou (iv) uma combinação dessas seqüências de aminoácido; e semelhantes.
Por toda a especificação, os receptores de metastina são
126 representados de acordo com a forma convencional de descrição de peptídeos, isto é, o N-término (amino término) do lado esquerdo e o C-término (carboxila término) do lado direito. No peptídeo representado por SEQ ID NO: 1, o C-término pode estar em qualquer forma de um grupo carboxila (COOH), um carboxilato (-COO'), uma amida (-CONH2) e um éster (-COOR). Aqui, exemplos de R do grupo éster ou amida de alquila incluem um grupo C]~6 alquila, tal como metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, etc.; um grupo C3_8 cicloalquila, tal como ciclopentila, ciclohexila, etc.; um grupo Cg_i2 arila, tal como fenila, α-naftila, etc.; uma C7.14 aralquila, tal como um grupo fenil-Ci_2 alquila, por exemplo, benzila, fenetila, benzidrila, etc. ou um grupo a-naftil-C].2 alquila, tal como α-naftilmetila, etc.; um grupo pivaloilóximetila, os quais são amplamente usados como um éster para uso oral e semelhantes.
Onde os receptores de metastina contêm um grupo carboxila (ou um carboxilato) em uma outra posição que não o C-término, o grupo carboxila pode ser amidado ou esterificado e tais amidas ou ésteres também estão incluídos dentro da proteína de receptor da presente invenção. Nesse caso, o grupo éster usado pode ser o mesmo grupo conforme os ésteres Cterminais acima descritos.
Além disso, os receptores de metastina incluem aqueles em que o grupo amino no resíduo de metionina N-terminal é protegido com um grupo de proteção (por exemplo, um grupo Cr6 alquila, tal como um grupo C2_g alcanoíla, por exemplo, um grupo formila, um grupo acetila, etc.); aqueles em que a região N-terminal é clivada in vivo e o grupo glutamila assim formado é piroglutaminado; aqueles em que um substituinte (por exemplo, -OH, -SH, grupo amino, grupo imidazol, grupo indol, grupo guanidino, etc.) sobre a cadeia lateral de um aminoácido na molécula é protegido com um grupo de proteção adequado (por exemplo, um grupo Crg acila, tal como um grupo C2.6 alcanoíla, por exemplo, um grupo formila, grupo acetila, etc.) ou peptídeos conjugados, tais como glicopeptídeos ligados
127
à cadeias de açúcar.
Exemplos específicos dos receptores de metastina incluem o receptor de metastina humano consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ DD NO: 9, o receptor de metastina de rato consistindo 5 da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 11, o receptor de metastina de camundongo consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO 13, etc.
Os peptídeos parciais do receptor de metastina (aqui depois algumas vezes simplesmente referidos como o peptídeo parcial) podem ser
qualquer peptídeo, na medida em que eles sejam peptídeos parciais do receptor de metastina descrito acima; são usados aqueles tais como moléculas de proteína do receptor de metastina, as quais são os sítios expostos fora da membrana celular e tendo uma atividade de ligação a ligante.
Especificamente, o peptídeo parcial do receptor de metastina consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 9,
SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 13 é um peptídeo contendo as partes analisadas como sendo domínios extracelulares (domínios hidrofílicos) na análise de plotagem hidrofóbica. Um peptídeo contendo um domínio hidrofóbico em uma parte pode ser usado também. Além disso, o peptídeo .0 pode conter cada domínio separadamente ou uma pluralidade de domínios juntos.
No receptor de metastina, peptídeos parciais preferidos são aqueles tendo o número de aminoácidos de pelo menos 20, de preferência pelo menos 50 e, mais preferivelmente, pelo menos 100, na seqüência de aminoácido descrita acima, a qual constitui o receptor de metastina.
O peptídeo parcial pode ser um peptídeo tendo a seqüência de aminoácido descrita acima, da qual pelo menos 1 ou 2 (de preferência, cerca de 1 a cerca de 10 e, mais preferivelmente, vários (1 ou 2)) aminoácidos são deletados; à qual pelo menos 1 ou 2 (de preferência, cerca de 1 a cerca de 10
128 %
e, mais preferivelmente, vários (1 ou 2)) aminoácidos são adicionados ou na qual pelo menos 1 ou 2 (de preferência, cerca de 1 a cerca de 10 e, mais preferivelmente, vários (1 ou 2)) aminoácidos são substituídos por outros aminoácidos.
No peptídeo parcial, o C-término pode ser qualquer forma de um grupo carboxila (-COOH), um carboxilato (-COO“), uma amida (-CONH2) e um éster (-COOR), conforme nos receptores de metastina descritos acima.
Além disso, os peptídeos parciais incluem peptídeos em que o grupo amino no resíduo de metionina N-terminal é protegido com um grupo
de proteção; aqueles em que a região N-terminal é clivada in vivo e o grupo glutamila assim formado é piroglutaminado; aqueles em que um substituinte sobre a cadeia lateral de um aminoácido na molécula é protegida com um grupo de proteção adequado ou peptídeos conjugados, tais como glicopeptídeos ligados à cadeias de açúcar, conforme nos receptores de 15 metastina descritos acima.
Para sais do receptor de metastina ou do peptídeo parcial, preferidos são sais com ácidos fisiologicamente aceitáveis, especialmente sais de adição de ácido fisiologicamente aceitáveis. Exemplos dos sais incluem sais, por exemplo, com ácidos inorgânicos (por exemplo, ácido clorídrico, >0 ácido fosfórico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico); sais com ácidos orgânicos (por exemplo, ácido acético, ácido fórmico, ácido propiônico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido oxálico, ácido benzóico, ácido metano-sulfônico, ácido benzeno-sulfônico) e semelhantes.
Como o DNA que codifica o receptor de metastina ou seus peptídeos parciais, são usados, por exemplo, um DNA que codifica o receptor de metastina humano ou seus peptídeos parciais descrito no WO 00/24890, um DNA que codifica o receptor de metastina de camundongo ou rato ou seus peptídeos parciais descritos no WO 01/75104, etc.
129
Os DNAs que codificam o receptor de metastina ou seus peptídeos parciais podem ser qualquer um de DNA genômico, biblioteca de DNA genômico, cDNA derivado das células e tecidos descritos acima, biblioteca de cDNA derivada das células e tecidos descritos acima e DNA 5 sintético. O vetor a ser usado para a biblioteca pode ser qualquer um de bacteriófago, plasmídeo, cosmídeo e fagemídeo. O DNA pode também ser diretamente amplificado através de reação em cadeia de polimerase por transcriptase reversa (aqui depois abreviada como RT-PCR) usando o RNA total ou a fração de mRNA preparada a partir dos tecidos e células descritos acima. Especificamente, o DNA que codifica o receptor de metastina humano, receptor de metastina de camundongo ou receptor de metastina de rato pode ser qualquer DNA, na medida em que ele seja um DNA compreendendo cada seqüência de base representada por SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 ou SEQ ID NO: 14 ou um DNA compreendendo uma seqüência de base hibridizável à 15 seqüência de base representada por SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 ou SEQ ID NO: 14 sob condições altamente estringentes e codifique um receptor tendo a atividade substancialmente da mesma natureza (por exemplo, uma atividade de ligação a ligante, uma atividade de transdução de sinal, etc.) que aquela do receptor de metastina humano, receptor de metastina de 00 camundongo ou receptor de metastina de rato consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 10, SEQ ED NO: 12 ou SEQ ID NO: 14. Exemplos do DNA hibridizável à seqüência de base representada por qualquer uma de SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 ou SEQ ID NO: 14 incluem DNAs compreendendo uma seqüência de base tendo pelo menos 25 cerca de 70% de homologia, de preferência pelo menos cerca de 80% de homologia, mais preferivelmente pelo menos cerca de 90% de homologia e, ainda mais preferivelmente, pelo menos cerca de 95% de homologia, à seqüência de base representada por qualquer uma de SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 ou SEQIDNO: 14.
J &
130
A homologia na seqüência de base pode ser medida sob as seguintes condições (um valor de expectativa = 10; gaps são permitidas; filtração = ON; escore de combinação = 1; escore de combinação errônea — 3) usando o algoritmo de escore de homologia BLAST da NCBI (National 5 Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool).
A hibridização pode ser realizada através de métodos publicamente conhecidos per se ou através de modificações desses métodos, por exemplo, de acordo com o método descrito em Molecular Cloning, 2a (J. Sambrook e colaboradores, Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989), etc. Uma
biblioteca comercialmente disponível também pode ser usada de acordo com as instruções do protocolo do fabricante em anexo. De preferência, a hibridização pode ser realizada sob condições altamente estringentes.
As condições altamente estringentes usadas aqui são, por exemplo, aquelas em uma concentração de sódio de cerca de 19 a 40 mM, de preferência cerca de 19 a 20 mM, em uma temperatura de cerca de 50 a 70 °C, de preferência cerca de 60 a 65 °C. Em particular, condições de hibridização em uma concentração de sódio de cerca de 19 mM em uma temperatura de cerca de 65 °C são mais preferidas.
Mais especificamente, como o DNA que codifica o receptor de
Ό metastina humano consistindo da seqüência de aminoácido representada por
SEQ ID NO. 9, o DNA consistindo da seqüência de base representada por
SEQIDNO: 10 é usado.
Como o DNA que codifica o receptor de metastina de rato consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 11, o
DNA consistindo da seqüência de base representada por SEQ ED NO: 12 é usado.
Como o DNA que codifica o receptor de metastina de camundongo consistindo da seqüência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 13, o DNA consistindo da seqüência de base representada por SEQ
131
ID NO: 14 é usado.
Os receptores de metastina, seus peptídeos parciais ou sais dos mesmos e os DNAs que codificam os receptores de metastina ou seus peptídeos parciais podem ser obtidos ou produzidos através dos métodos 5 descritos no WO 00/24890 ou WO 01/75104.
A presente invenção será descrita em detalhes através de referência aos EXEMPLOS, EXEMPLOS DE FORMULAÇÃO e EXEMPLOS DE TESTE, mas não deve ser considerada como estando limitada aos mesmos e qualquer modificação pode ser feita sem se desviar do
escopo da presente invenção.
Nos EXEMPLOS a seguir, o termo temperatura ambiente” normalmente significa uma temperatura de cerca de 10 °C a cerca de 35 °C.
Em percentuais, o rendimento é mostrado por mol/mol % e o solvente usado em cromatografia é em vol% e o restante em % em peso. Em espectros de 15 RMN de prótons, os dados sobre prótons de OH, NH, etc. que são amplos e não identificados não são mostrados.
As outras abreviações usadas na especificação significam como segue:
Descrição Abreviação >0 10T,CSNH: C-terminal-CONH2 na posição 10 é substituída por -CSNH2
1T2,CH2NH: A ligação -CONH- entre as posições 1 e 2 é substituída pela ligação -CH2NH-.
2Ψ3,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 2 e 3 é substituída pela ligação -CH2NH-.
3T4,CH2NH: A ligação -CONH- entre as posições 3 e 4 é substituída pela ligação -CH2NH-.
4Ψ5, CH2NH: A ligação -CONH- entre as posições 4 e 5 é substituída pela ligação -CH2NH-.
132 f
6T7,CSNH: A ligação -CONH- entre as posições 6 e 7 é substituída pela ligação -CSNH-.
6Ψ7,ΝΗΟΟ: A ligação -CONH- entre as posições 6 e 7 é substituída pela ligação -NHCO-.
6Ψ7,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 6 e 7 é substituída pela ligação -CH2NH-.
6Ψ7,ΟΗ2Ο: A ligação -CONH- entre as posições 6 e 7 é substituída pela ligação -CH2O-,
7Ψ8,ΟΗ2ΝΗ: A ligação -CONH- entre as posições 7 e 8 é
Ό substituída pela ligação -CH2NH-.
8Ψ9.ΟΗ2ΝΉ: A ligação -CONH- entre as posições 8 e 9 é substituída pela ligação -CH2NH-.
9Ψ10,ΟΗ2ΝΉ: A ligação -CONH- entre as posições 9 e 10 é substituída pela ligação -CH2NH-,
15 Abu: ácido 2-aminobutanóico
Abz(2): ácido 2-aminobenzóico
Abz(3): ácido 3-aminobenzóico
Ac: acetila
AcONB: N-acetóxi-5-norbomeno-2,3-dicarboximida
>0 Acp: ácido 6-aminocapróico
AcOEt: acetato de etila
AcOH: ácido acético
Aib: ácido a-aminoisobutanóico
Ala(2-Qui): 2-quinolilalanina
25 Ala(3-Bzt): 3 -benzotienilalanina
Ala(cPr): ciclopropilalanina
Ala(Pip): (4-piperidin-1 -il)alanina
Alb: Albiziina ácido 2-amino-3-ureidopropiônico
Ambz(4): 4-aminometilbenzoíla
133
Arg(Ac): Arg(Boc2,Me): Alg(Et): Arg(Me): Arg(asyMe2) N“-acetilarginina NC0,ü>-bis-terc-butóxicarbonil-NC0-metilarginina N^etilarginina bT-metilarginina ou Arg(Me2)asym: N^-dimetilarginina
assimétrica
Arg(symMe2) ou Arg(Me2)sym: NQ,ü)-dimetilarginina
simétrica
Arg(NO2): bT-nitroarginina
Arg(Pbf): Νω-2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofuran-
sulfonilarginina
Arg(n-Pr): Νω—propilarginina
Arg(Tos): bT-tosilarginina
Asp(NHMe): N“-metilasparagina
Asp(NMe2): N®“dimetilasparagina
Asp(NHPen): Nw-pentilasparagina
Asp(NHcPr): N“-ciclopropilasparagina
Asp(NHBzl): Nw~benzilasparagina
AzaGly: azaglicina
AzaPhe: azafenilalanina
Aze(2): ácido azetidina-2-carboxílico
Aze(3): ácido azetidina-3-carboxílico
β-Ala: β-alanina
Boc: terc-butóxicarbonila
BoC2O: dicarbonato de di-terc-butila
Br-Z: 2-bromobenzilóxicarbonila
Bu1: terc-butila
Bz: benzila
CDI: 1,1 '-carbonildiimidazol
134
Cha:
CIP:
dimetilimidazólio
Cit
Resina Cit:
Cl-Z:
cPr:
Dab:
Dap
Dap(Ac):
Dap(For):
Dap(Gly):
Dap(GnGly): diaminopropiônico
DCM:
DEA:
DIEA:
DIPCDI:
DMAP:
>0 DMF:
EDT:
Fmoc:
For:
γ-Abu:
γ-MeLeu:
Gn:
GuAmb:
Har:
Har(Me):
ciclohexilalanina tetrafluoroborato de 2-cloro- 1,3citrulina resina de 2-clorotritila
2-clorobenzilóxicarbonila ciclopropila ácido 2,4-diaminobutanóico ácido 2,3-diaminopropiônico ácido Np-acetil“ β-diaminopropiônico ácido N^-formil^-diaminopropiônico ácido N^-glicil-^-diaminopropiônico ácido Νβ -(N-guanidinoglicil)^diclorometano dietilamina
N,N-diisopropiletilamina
1,3-diisopropilcarbodiimida
4-dimetilaminopiridina N,N-dimetilformamida
1,2-etanoditiol
9-fluorenilmetóxicarbonila formila ácido 4-aminobutanóico γ-metilleucina guanidino
4-guanidinometilbenzoíla homoarginina
N°-metilhomoarginina
135
His(3Me): 3 -metilhistidina π-metilhistidina
HOAt: 1 -hidróxi-7-azabenzotriazol
HOBt; 1 -hidróxibenzotriazol
HONB: N-hidróxi-5-norbomeno-2,3“dicarboximida
5 Hph: homofenilalanina
cisHyp: cis-4-hidróxiprolina
Hyp: trans-4-hidróxiprolina
Hyp(Bzl): 0~benzil-trans-4-hidróxiprolina
IndPr: 3 -(indol-3 -il)propionila
tf Izc: ácido imidazolidina-2-carboxílico
Lys(Me2): Νε s-dimetillisina
MBHA: p-metilbenzhidrilamina
- MeOH: metanol
Mtt: 4-metiltritila
15 N((CH2)3Gn)Gly: N-(3 -guanidinopropil)glicina
Nal(l): 1-naftilalanina
Nal(2): 2-naftilalanina
Nar: norarginina
Nar(Me): Na-metilnorarginina
>0 Nle: norleucina
NMeAla: Na-metilalanina
NMeArg: Na-metilarginina
NMeAsn: Na-metilasparagina
NMeLeu: Na-metilleucina
25 NMePhe: Na-metilfenilalanina
NMeSer: Na—metila serina
NMeTrp: Na-metiltriptofano
NMeTyr: Na-metiltirosina
Nva: Norvalina
136
JQ2>
$
OBu1: terc-butóxi
Om: omitina
Om(Mtt): Nô“(4-metiltritil)omitina
PAL: ácido
5-(4-(95 fluorenilmetóxicarbonil)aminometil-3,5 -dimetóxifenóxi)valérico
Pbf:
sulfonila
PGlu:
Phe(2Cl):
Phe(2F):
W Phe(2Me):
Phe(3,4Cl2):
Phe(3,4F2):
Phe(3CF3):
Phe(3Cl):
Phe(3F):
Phe(3Me):
Phe(4Cl):
Phe(4CN):
>0 Phe(4F):
Phe(4Gn):
Phe(4NH2):
Phe(4NO2):
Phe(4CN):
Phe(4Me):
Phe(F5):
AMePhe:
2,2í4,6,7-pentametildÍhidrobenzofiiran-5ácido piroglutâmico
2-clorofenilalanina
2-fluorofenilalanina
2- metilfenilalanina
3.4- diclorofenilalanina
3.4- difluorofenilalanina
-trifluorometilfenilalanina
-clorofenilalanina
3- fluorofenilalanina
-metilfenilalanina
4- clorofenilalanina
4-cianofenilalanina
4-fluorofenilalanina
4-guanidinofenilalanina
4-aminofenilalanina
4-nitrofenilalanina
4-cianofenilalanina
4-metilfenilalanina pentafluorofenilalanina a-metilfenilalanina
PheT(CH2O)Gly: A ligação -CONH- entre Phe e Gly é substituída pela ligação -CH2O-.
137
PheT(C SNH)-NH2: A fenilalanilamida C-terminal é
- substituída por fenilalaniltioamida.
Phg: fenilglicina
PhOH: fenol
5 PhSMe: tioanisola
Pic(2): ácido pipecolínico
Pic(3): ácido 3-piperidinacarboxílico
Pip(2): ácido 2-aminopipecolínico
Pro: prolina
Pro(4F): trans-4-fluoroprolina
Pro(4NH2): cis-4-aminoprolina
Pya(2): 2-piridilalanina
- Pya(3): 3-piridilalanina
Pya(4): 4-piridilalanina
15 PyAOP: ilóxi)-tris(pirrolidino)fosfônio hexafluoro fosfato de (7-azabenzotriazol-l-
PyBOP: tris(pirrolidino)fosfônio hexafluorofosfato de (benzotriazol-1 -ilóxi)-
PyBrop: hexafluorofosfato de bromo-
020 tris(pirrolidino)fosfônio
Pzc(2): ácido piperazina-2-carboxílico
Sar: N-metilglicina
Ser(Ac): O-acetilserina
Ser(Me): O-metilserina
25 Ser(3Fenila): 3-fenilserina
Thi: 2-tienilalanina
Thz: tioprolina
Tic: ácido 1,2,3,4~tetrahidroisoquinolina-2-
carboxílico
138
Jt|3
TIS: triisopropil-silano Tie: terc-leucina Tos: tosila Trp(For): Nm-formiltriptofano
5 Trt: tritila Tyr(Me): O-metiltirosina Tyr(PO3H2): O-fosfotirosina TyrvP(CH2NH)Asn: A ligação -CONH- entre Tyr e Asn é substituída pela ligação -CH2NH-
TFA: ácido trifluoroacético TFE: trifluoroetanol Z: benzilóxicarbonila Na especificação, onde os códigos de bases e aminoácidos são denotados por abreviações, eles são baseados em abreviações de acordo com a
15 IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature ou os códigos comuns na técnica, exemplos dos quais são mostrados abaixo. Para aminoácidos que podem ter o isômero óptico, a forma L é apresentada, a menos que de outro modo indicado. DNA: ácido desoxiribonucleico
|δθ cDNA: ácido desoxiribonucleico complementar A: adenina T: timina G: guanina C: cito sina
25 Y: timina ou citosina N: timina, citosina, adenina ou guanina R: adenina ou guanina M: citosina ou adenina W: timina ou adenina
139
J16 $
S: citosina ou guanina
RNA: ácido ribonucléico mRNA: ácido ribonucléico mensageiro dATP: trifosfato de desoxiadenosina dTTP: trifosfato de desoxitimidina dGTP: trifosfato de desoxiguanosina dCTP: trifosfato de desoxicitidina ATP: trifosfato de adenosina EDTA: ácido etilenodiaminatetraacético SDS: dodecil sulfato de sódio TFA: ácido trifluoroacético EIA: imunoensaio enzimático Gly ou G: glicina Ala ou A: alanina Vai ou V: valina
Leu ou L: leucina Ile ou I: isoleucina Ser ou S: serina Thr ou T: treonina Cys ou C: cisteína Met ou M: metionina
Glu ou E: ácido glutâmico
Asp ou D: ácido aspártico
Lys ou K: lisina
Arg ou R: arginina
His ou H: histidina
Phe ou F: fenilalanina
Tyr ou Y:* tirosina
Trp ou W: triptofano
140
Pro ou P: prolina
AsnouN: asparagina
Gin ou Q: glutamina pGlu: ácido piroglutâmico
Os números de identificação de seqüência na Listagem de Seqüência da especificação indicam as seguintes seqüências, respectivamente.
[SEQ IDNO 1]
Essa mostra a seqüência de aminoácido de metastina derivada de ser humano (Metastina).
[SEQ ID NO 2]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica metastina humana.
[SEQ ID NO 3]
Essa mostra a seqüência de aminoácido do precursor de metastina de camundongo (A).
[SEQ ID NO. 4]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica o precursor de metastina de camundongo (A), a qual é a seqüência de base no plasmídeo pCMV-mKiSS-1 abrigado no transformante de Escherichia coli DH10B/pCMV-mKiSS-l.
[SEQ ED NO 5]
Essa mostra a seqüência de aminoácido de do precursor de metastina de camundongo (B).
[SEQ ID NO: 6]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica o precursor de metastina de camundongo (B), a qual é a seqüência de base no plasmídeo pCR2.1-mKiSS-1.4A abrigado no transformante de Escherichia coli DH5a/pCR2.1-mKiSS-I.4A.
[SEQ ID NO: 7]
141 <1
Essa mostra a seqüência de aminoácido do precursor de metastina derivado de rato.
[SEQ ID NO: 8]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica o precursor de metastina de rato.
[SEQ ID NO: 9]
Essa mostra a seqüência de aminoácido da OT7T175 humana (receptor de metastina).
[SEQIDNO: 10]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica OT7T175 humana (receptor de metastina).
[SEQ IDNO: 11]
Essa mostra a seqüência de aminoácido de OT7T175 de rato (receptor de metastina).
[SEQIDNO: 12]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica OT7T175 de rato (receptor de metastina).
[SEQ ID NO: 13]
Essa mostra a seqüência de aminoácido de OT7T175 de
4^0 camundongo (receptor de metastina).
[SEQ IDNO: 14]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica OT7T175 de camundongo (receptor de metastina).
[SEQ IDNO: 15]
Essa mostra a seqüência de aminoácido de metastina humana (40-54).
[SEQIDNO: 16]
Essa mostra a seqüência de aminoácido de metastina humana (45-54) (MS10).
142 [SEQ IDNO: 17]
Essa mostra a seqüência de aminoácido de metastina humana 9 (46-54).
[SEQ IDNO: 18]
Essa mostra a seqüência de aminoácido de metastina humana 8 (47-54).
[SEQ IDNO: 19]
Essa mostra a seqüência metastina humana 15 (40-54). de DNA de base que codifica
[SEQ ID NO: 20]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica
metastina humana 10 (45-54).
- [SEQ ID NO: 21]
• Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica
15 metastina humana 9 (46-54).
[SEQIDNO: 22]
Essa mostra a seqüência de DNA de base que codifica
metastina humana 8 (47-54).
O transformante de Escherichia coli DH10B/pCMV-mKiSS-l >0 foi depositado em 24 de Janeiro de 2000 com o Intemational Patent Organisms Depository, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (o primeiro Ministry of Intemational Trade and Industry, Agency of Industrial Science and Technology, National Institute of Bioscience and Human Technology (NEBH)), localizado em Central 6, 1-1-1 Higashi, 25 Tsukuba, Ibaraki (código postal 305-8566), Japão, como o Número de Acesso FERM BP-7003 e em 16 de Dezembro de 1999 com o Institute for Fermentation (IFO), localizado em 2-17-85 Juso-Honmachi, Yodogawa-ku, Osaka-shi, Osaka, Japão, como o Número de Acesso IFO 16348.
O transformante de Escherichia coli DH5a/pCR2.1-mKiSS143
1.4Α foi depositado em 6 de Março de 2000 com o Intemational Patent Organisms Depository, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (o primeiro Ministry of Intemational Trade and Industry, Agency of Industrial Science and Technology, National Institute of Bioscience and
Human Technology (NEBH)), localizado em Central 6, 1-1-1 Higashi, Tsukuba, Ibaraki (código postal 305-8566), Japão, como o Número de Acesso FERM BP-7073 e em 16 de Fevereiro de 2000 com o Institute for Fermentation (IFO), localizado em 2-17-85 Juso-Honmachi, Yodogawa-ku, Osaka-shi, Osaka, Japão, como o Número de Acesso EFO 16360.
EXEMPLOS (EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1)
Produção de N-metil-N,N’-Bis-Boc-l-guaniIpirazoIa
Sob um fluxo de nitrogênio, 720 mg de NaH a 60% em óleo foram dissolvidos em 20 mL de DMF seca e 20 mL de solução, em DMF 15 seca, de 5,59 g de N,N'-Bis-Z-l-guanilpirazola comercialmente disponível foram adicionados à solução a 0 °C, seguido por agitação durante 10 minutos. Após 1,68 mL de iodeto de rnetila serem adicionados à mesma, a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 24 horas. Após o solvente ser destilado, o resíduo foi dissolvido em AcOEt e a solução lavada com solução |*0 aq. de HC1, solução aq. saturada de NaHCO3 e, então, solução aq. saturada de
NaCl. Após secagem sobre Na2SO4, o solvente foi concentrado e o concentração foi purificado através de cromatografia rápida em coluna (acetato de etila/n-hexano = 1/4) usando gel de sílica 60 (200 mL) para proporcionar 535 g (rendimento de 91,6%) de N-metil-N,N'-bis-Boc-l25 guanilpirazola como um óleo incolor.
‘H RMN (300 MHz, CDC13): δ 8,00 (br s, 1H), 7,69 (br s, 1H),
6,42 (dd, 1H, J = 2,7, 1,5 Hz), 3,25 (s, 3H), 1,53 (s, 9H), 1,30 (s, 9H)
Análise Elemental como Ci5H24N4O4
Cale. C, 55,54; H, 7,46; N, 17,27 .01
144
Encontrado: C, 55,36; H, 7,48; N, 17,06
Rfl: 0,64, Rf2: 0,79
Solvente de revelação para TLC:
Rfl (acetato de etila/n-hexano - 1/2)
Rf2 (metanol/clorofórmio = 2/98)
Tempo de eluição sobre HPLC: 26,7 mins.
Condições de eluição:
Coluna: Wakosil-II 5C18 HG (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B
= 100/0-20/80, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (40 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO DE REFERÊNCIA 2)
Produção de N-metil-N^-Bis-Z-l-guanilpirazoIa
Em uma atmosfera de argônio, 40 mg de NaH a 60% em óleo foram dissolvidos em 5 mL de DMF seca e 5 mL de solução, em DMF seca, de 380 mg de N,N'-Bis-Z-l-guanilpirazola comercialmente disponível foram adicionados à solução a 0 °C, seguido por agitação durante 10 minutos. Após 125 pL de iodeto de metila serem adicionados à mesma, a mistura foi agitada
Ό em temperatura ambiente durante 15 horas. Após o solvente ser destilado, o resíduo foi dissolvido em AcOEt e a solução lavada com solução aq. de HC1, solução aq. saturada de NaHCO3 e, então, solução aq. saturada de NaCl. Após secagem sobre Na2SO4, o solvente foi concentrado para proporcionar 393 mg do produto bruto. A partir do produto bruto, 170 mg foram purificados através 25 de cromatografia rápida em coluna (acetato de etila/n-hexano = 1/4) usando gel de sílica 60 (75 mL) para proporcionar 353 mg (rendimento de 89,5%) de
N-metil-N,N'-bis-Z-l-guanilpirazola como um óleo incolor.
*H RMN (300 MHz, CDC13): δ 7,97 (br s, 1H), 7,61 (d, 1H, J = 10 Hz), 7,37-7,32 (m, 4H), 7,29-7,26 (m, 4H), 7,16-7,13 (m, 2H), 6,36 (dd,
145
1Η, >2,8, 1,6 Hz), 5,18 (s, 2H), 5,04 (s, 2H), 3,22 (s, 3H)
Análise Elemental como C21H2ON4O4 Cale.: C, 64,28; H, 5,14; N, 14,28 Encontrado: C, 64,09; H, 5,24; N, 14,43
Rfl: 0,50, Rf2: 0,86
Solvente de revelação para TLC:
Rfl (acetato de etila/n-hexano = 1/2)
Rf2 (metanol/clorofórmio = 2/98)
Tempo de eluição sobre HPLC: 28,9 mins.
Condições de eluição:
Coluna: Wakosil-II 5C18 HG (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 100/0-20/80, usando 0 1% TFA em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (40 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 1) (Síntese A): Produção de des(l)-Ac-[D-Tyr2,DTrp3,Thr5,AzaGly7,D-Arg9,Trpl0]MS10 (Composto No. 708)
Trp(Boc), D-Arg(Pbf) e Leu foram introduzidos nessa ordem ^0 em 178 mg de resina MBHA de amida de Rink (0,56 mmoles/g) sobre um sintetizador de peptídeo ABI 433A para produzir a resina MBHA de H-LeuD-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-amida de Rink. Separadamente, 116,3 mg (0,4 mmoles) de FmOC-NHNH2HCl foram suspensos em 1 mL de DMF e, sob resfriamento com gelo, uma suspensão de 61,6 mg (0 38 mmoles) de CDI em 25 10 ml de THF foi adicionada à mesma. Subseqüentemente, 139,4 μΐ (0,8 mmoles) de DIEA foram adicionados à mistura, seguido por agitação em temperatura ambiente durante uma hora. A solução de reação resultante foi adicionada à resina MBHA de H-Leu-D-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-amida de Rink descrita acima, seguido por agitação em temperatura ambiente durante 15
146
horas. Após término da reação, a resina foi lavada e Phe, Th^Bu1) e Asn(Trt) foram introduzidos nessa ordem na resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-DArg(Pbf)-Trp(Boc)-amida de Rink sobre o ABI 433A. A resina foi dividida pela metade, uma das quais foi tomada e a metade restante foi aplicada 5 novamente sobre o ABI 433A, pelo que D-Trp(Boc) e D-Ty^Bu1) foram introduzidos nessa ordem para proporcionar a resina de MBHA de H-DTyr(But)-D-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-D-Arg(Pbf)Trp(Boc)-amida de Rink. Subseqüentemente, o produto foi tratado durante 20 minutos em 3 ml de DMF com 9,4 μΐ (0,1 mmol) de Ac2O e 17,4 μΐ (0,1
mmol) de DIEA para acetilação N-terminal.
A resina foi lavada e seca para proporcionar 202,2 mg da resina MBHA de Ac-D-Tyr(But)-D-Trp(Boc)-Asn(Trt)-Thr(But)-PheAzaGly-Leu-D-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-amida de Rink. À resina obtida, 1,5 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e o extrato foi filtrado para remover a resina. Então, eluição em gradiente com densidade linear (60 ,0 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B:
70/30-60/40 usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a
0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas para proporcionar 16,2 mg de pós brancos.
Espectro de massa (M+H)+ 1284,9 (calc. 1284,6) Tempo de eluição sobre HPLC: 13,3 mins. Condições de eluição:
Coluna YMC-AM301 (4,6 x 100 mm)
147 %
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20 - 30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min (EXEMPLO 2)
Produção de resina MBHA de Fmoc-AzaGIy-LeuArg(Boc2,Me)“Trp(Boc)-ainida de Rink
Após 5 g (0,4 mmoles/g) de resina MBHA de amida de Rink comercialmente disponível serem intumescidos em DMF, a resina foi tratada com 50 ml de solução de piperidina/DMF a 20% durante 20 minutos para remover o grupo Fmoc. A resina obtida foi lavada com DMF e tratada com 4,213 g (8 mmoles) de Fmoc-Trp(Boc)-OH, 1,272 mL (8 mmoles) de DIPCDI e 16 mL (8 mmoles) de solução de HOAt/DMF a 0,5M em temperatura ambiente durante 90 minutos, pelo que Trp(Boc) foi introduzido para proporcionar a resina MBHA de Fmoc-Trp(Boc)-amida de Rink. De uma maneira similar, Om(Mtt) foi introduzido para proporcionar 2 mmoles da resina MBHA de Fmoc-Orn(Mtt)-Trp(Boc)-arnida de Rink. Após a resina obtida ser lavada e intumescida com DCM, 50 mL de TFA/TIS/DCM (1/5/94) foram adicionados à mesma, seguido por agitação durante 10 minutos e remoção da solução através de filtração. Esse procedimento foi repetido até que a cor amarela causada pelo grupo Mtt em uma solução de TFA/TIS/DCM (1/5/94) desaparecesse quando a solução foi adicionada; assim, o grupo Mtt foi removido.
A resina MBHA de Fmoc-Om-Trp(Boc)-amida de Rink resultante foi neutralizada com solução de DIEA/DCM a 5%. Após lavagem com DCM, 25 mL de DCM-TFE (4,1) e 1,946 g (6 mmoles) de N-metil-N,N'bis-Boc-l-guanilpirazola obtida no EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1 foram adicionados à resina. DIEA foi adicionado à mistura para ajustar o pH da solução resultante para 10. A solução foi agitada durante 15 horas para
148 %
proporcionar 6,195 g da resina MBHA de Fmoc-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)amida de Rink. Fmoc-Leu foi introduzido na resina obtida da mesma maneira conforme descrito acima. A resina foi dividida ao meio e o grupo Fmoc foi removido da resina MBHA de Fmoc-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de 5 Rink assim obtida (1 mmol) para proporcionar a resina MBHA de H-LeuArg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink (1 mmol).
Separadamente, 1,745 g (6 mmoles) de Fmoc-NHNH2.HC1
foram suspensos em 20 mL de DMF-THF (4:1). Sob resfriamento com gelo, 973 mg (6 mmoles) de CDI e 2,09 mL (12 mmoles) de DIEA foram i adicionados à suspensão, seguido por agitação em temperatura ambiente durante uma hora. A solução de reação resultante foi adicionada à resina MBHA de H-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink descrita acima e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 15 horas. Após término da reação, a resina foi lavada e seca para proporcionar 3,314 g da resina 15 MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink.
(EXEMPLO 3) (Síntese B) Produção de des(l-3)-Ac[Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 (Composto No. 709)
Após 5,455 g (0,55 mmoles/g) de resina de amida de Rink ^0 MBHA comercialmente disponível serem intumescidos em DMF, a resina foi tratada com 50 ml de solução de piperidina/DMF a 20% durante 20 minutos para remover o grupo Fmoc. A resina obtida foi lavada com DMF e, então, tratada com 6,319 g (12 mmoles) de Fmoc-Trp(Boc)-OH, 1,908 mL (12 mmoles) de DIPCDI e 24 mL (12 mmoles) de solução a 0,5M de HOAt/DMF 25 em temperatura ambiente durante 90 minutos, pelo que Trp(Boc) foi introduzido para proporcionar a resina MBHA de Fmoc-Trp(Boc)-amida de Rink. De uma maneira similar, Om(Mtt) foi introduzido para proporcionar 3 mmoles da resina MBHA de Fmoc-Om(Mtt)-Trp(Boc)-amida de Rink. A resina obtida foi lavada com DCM e intumescida e, então, 50 mL de
149
TFA/TIS/TFE/DCM (1/5/19/75) foram adicionados à resina, seguido por agitação durante 10 minutos e remoção da solução através de filtração. Esse procedimento foi repetido até que a cor amarela causada pelo grupo Mtt livre na solução de TFA/TIS/TFE/DCM (1/5/19/75) desaparecesse quando a 5 solução foi adicionada ao mesmo; assim, o grupo Mtt foi removido.
A resina MBHA de Fmoc-Om-Trp(Boc)-amida de Rink resultante foi neutralizada com solução de DIEA/DCM a 5%. Após lavagem com DCM, 20 mL de DCM-TFE (4:1) e 2,919 g (9 mmoles) de N-metil-N,N'bis-Boc- I-guanilpirazola obtida no EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1 foram
adicionados à resina. DIEA foi adicionado à mistura para ajustar o pH da solução para 10. A mistura foi agitada durante 15 horas para proporcionar a resina MBHA de Fmoc-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink. Fmoc-Leu foi introduzido na resina obtida da mesma maneira conforme descrito acima.
O grupo Fmoc foi, então, removido da resina MBHA de Fmoc-Leu15 Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink assim obtida (3 mmoles) para proporcionar a resina MBHA de H-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink (3 mmoles).
Separadamente, 3,489 g (12 mmoles) de Fmoc-NHNH2HC1 foram suspensos em 20 mL de DMF. Sob resfriamento com gelo, uma >0 suspensão de 1,849 g (11,4 mmoles) de CDI em 20 mL de THF foi adicionado e, então, 4,181 mL (24 mmoles) de DIEA foi adicionado à mistura, seguido por agitação em temperatura ambiente durante uma hora. A solução de reação resultante foi adicionada à resina MBHA de H-LeuArg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink descrita acima, seguido por agitação 25 em temperatura ambiente durante 15 horas. Após término da reação, a resina foi lavada e seca para proporcionar a resina MBHA de Fmoc-AzaGly-LeuArg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink.
A resina obtida foi intumescida em DMF e, então, tratada com 30 ml de solução de piperidina/DMF a 20% durante 20 minutos para remover
150
o grupo Fmoc. Após a resina obtida ser lavada com DMF, a resina foi tratada com 5,419 g (12 mmoles) de Trt-Phe-OH.O,5AcOEt, 6,257 g (12 mmoles) de PyAOP, 24 mL (12 mmoles) de HOAt/DMF a 0,5M e 7,316 mL (42 mmoles) de DIEA em temperatura ambiente durante 90 minutos para proporcionar a resina MBHA de Trt-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink. Após a resina obtida ser lavada com DCM e intumescida, 50 mL de TFA/TIS/TFE/DCM (1/5/19/75) foram adicionados à resina, seguido por agitação durante 10 minutos e remoção da solução através de filtração. Esse procedimento foi repetido até que a cor marrom amarelada causada pelo grupo Trt livre na solução de TFA/TIS/TFE/DCM (1/5/19/75) desaparecesse quando a solução foi adicionada; assim, o grupo Trt grupo foi removido.
A resina MBHA de H-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink obtida foi neutralizada com solução de DEA/DMF a 5% e lavada em DMF. Após o que, a resina foi tratada com 4,780 g (12 15 mmoles) de Fmoc-ThrCBu^OH), 1,908 mL (12 mmoles) de DIPCDI e 24 mL (12 mmoles) de HOAt/DMF a 0,5M em temperatura ambiente durante 90 minutos para introduzir Thr(Bu). Subsequentemente, a desproteção de Fmoc através de tratamento com 50 ml de solução de piperidina/DMF a 20% durante 20 minutos e condensação através do método com DIPCDI/HOAt ^0 conforme na introdução de Thr(Bu') foram realizados para introduzir Asn(Trt). A resina foi, então, lavada e seca para proporcionar 10,624 g da resina MBHA de Fmoc-Asn(Trt)-Thr(But)“Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink. Após 100 mg (0,03 mmoles) da resina resultante serem intumescidos em DMF, a resina foi tratada com 3 ml de solução de 25 piperidina/DMF a 20% durante 20 minutos para remover o grupo Fmoc. A resina obtida foi lavada com DMF e tratada em 1 ml de DMF com 9,4 pL (0,1 mmol) de Ac2O e 17,4 pL (0,1 mmol) de DEEA em temperatura ambiente durante 30 minutos para acetilação N-terminal. A resina foi lavada e seca para proporcionar 94,2 mg da resina MBHA de Ac-AsnfTrQ-Th^Bu^-Phe151
AzaGly-Leu-Arg(Boc2?Me)-Trp(Boc)-amida de Rink.
À resina obtida, 0,75 mL de TFA/PhSMe/mcresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o 5 precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e o extrato foi filtrado para remover a resina. Após o que, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: 76/24-
66/34 usando: TFA a 0,1% em água e eluente B: eluente A: TFA a 0,1%contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack
R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas para proporcionar 2,8 mg de pós brancos.
Espectro de massa (M+H)+ 949,8 (Cale. 949,5)
Tempo de eluição sobre HPLC: 10,2 mins.
Condições de eluição:
Coluna YMC-AM3 01 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila £t0 contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 4) (Síntese C): Produção de des(l-2)-Ac[Acp3,Thr5,AzaGIy7,Arg(Me)9?Trpl0]MS10 (Composto No. 713)
Após 100 mg (0,03 mmoles) da resina MBHA de FmocAsn(Trt)-Thr(Buí)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink serem intumescidos em DMF, a resina foi tratada com 3 ml de solução de piperidina/DMF a 20% durante 20 minutos para remover o grupo Fmoc. A resina foi lavada com DMF e, então, tratada em 1 mL de DMF com 70,6 mg
152
(0,2 mmoles) de Fmoc-Acp-OH, 104,2 mg (0,2 mmoles) de PyAOP e 52,4 pL (0,2 mmoles) de DIEA em temperatura ambiente durante 90 minutos para introduzir Acp; assim, a resina MBHA de Fmoc-Acp-Asn(Trt)-Thr(But)-PheAzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink foi obtida. A resina 5 obtida foi tratada com 3 ml de solução de piperidina/DMF a 20% e, então, lavada com DMF para remover o grupo Fmoc. Subseqüentemente, a resina foi tratada em 1 mL de DMF com 9,4 pL (0,1 mmol) de Ac2O e 17,4 pL (0,1 mmol) de DIEA em temperatura ambiente durante 30 minutos para acetilar o N-término. A resina tratada foi, então, lavada e seca para proporcionar 101,2 mg da resina MBHA de Ac-Acp-Asn(Trt)-Thr(But)Phe-AzaGly-LeU“ Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink.
À resina obtida, 0,75 mL de TFA/PhSMe/mcresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o 15 precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e o extrato foi filtrado para remover a resina. Então, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: 77/23-67/33 >0 usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&DODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas para proporcionar 7 3 mg de pós brancos.
Espectro de massa (M+H)+ 1062,7 (Cale. 1062,6)
Tempo de eluição sobre HPLC: 10,7 mins.
Condições de eluição:
Coluna YMC-AM301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila
153
contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 5) (Síntese D): Produção de Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp(NHPen)5 Thr-Phe-AzaGIy-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 714)
Usando 661 mg (0,25 mmoles) da resina MB HA de FmocAzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink, a cadeia peptídica foi
estendida sobre um sintetizador de peptídeo ABI 433A (Fmoc/DCC/HOBt) para proporcionar a resina MBHA de H-D-Tyr(But)-D-Trp(Boc)-Asp(OBut)Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink.
À resina, 5 mL de DMF, 111 mg de AcONB e 87 pL de DEEA foram adicionados, seguido por agitação durante 3 horas. A resina foi lavada e, então, seca para proporcionar a resina MBHA de Ac-D-Tyr(Buí)-DTrp(Boc)-Asp(OBut)-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)15 amida de Rink.
À uma quantidade de 9/10 da resina, 5 mL de TFA/PhSMe/mcresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 2 horas e éter foi adicionado para precipitação. O procedimento de lavagem com éter foi repetido e, então, seca para >0 proporcionar 218,4 mg de Ac-D-Tyr-D-Trp-Asp-Thr-Phe-AzaGly-LeuArg(Me)-Trp-NH2,
A 32,5 mg do produto, 1 mL de DMF, 5,7 pL de aminopentano, 13,5 mg de HOBt, 26,0 mg de PyBOP e 26,1 pL de DEEA foram adicionados e a mistura foi agitada durante 24 horas. Após o solvente 25 ser removido através de destilação, éter foi adicionado para precipitação. O procedimento de lavagem com éter foi repetido e seco. O resíduo foi dissolvido em uma solução de ácido acético aquosa. Após os materiais insolúveis serem removidos através de filtração, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada com eluentes A/B: 65/35-55/45
154
usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1% contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC D-ODS-5-ST S-5 120A (20 x 150 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas para proporcionar 11,0 mg de pós brancos.
Espectro de massa (M+H)+ 1368,9 (Cale. 1368,7)
Tempo de eluição sobre HPLC: 20,9 mins.
Condições de eluição:
Coluna: Wakosil-II 5C1 8 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B
= 100/0-50/50, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 6) (Síntese E): Produção de des(l)-Ac-[D-Tyr2D15 Trp3,Alb4,Thr5,AzaGIy7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 (Composto No. 717)
Usando 132 mg (0,05 mmoles) da resina MB HA de FmocAzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)~Trp(Boc)-amida de Rink, a cadeia peptídica foi estendida sobre um sintetizador de peptídeo ABI 433A (Fmoc/DCC/HOBt) para proporcionar a resina MBHA de H-D-Tyr(But)-D-Trp(Boc)-Alb>0 Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink.
À resina, 2 mL de DMF, 23 mg de AcONB e 17 pL de DIEA foram adicionados, seguido por agitação durante 3 horas. A resina foi lavada e, então, seca para proporcionar a resina MBHA de Ac-D-Ty^Bu^-DTrp(Boc)-Alb-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de 25 Rink.
À resina, 1 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 2 horas. Éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido
155
J6&
para lavagem. 0 resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e os materiais insolúveis foram removidos através de filtração. Então, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada com eluentes A/B: 69/31-59/41 usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente 5 B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC D-ODS-5-ST S-5 120A (20 x 150 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas para proporcionar 4,8 mg de pós brancos.
Espectro de massa (M+H)+ 1313,9 (Cale. 1313,7)
Tempo de eluição sobre HPLC: 18,3 mins.
Condições de eluição:
Coluna: Wakosil-II 5C18 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 100/0-50/50, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 7)
Produção de des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 (Composto No. 723)
Ό A resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink, 800 mg (0,3 mmoles), foi usada como um material de iniciação e o material de iniciação foi reagido sobre o sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles) para introduzir Phe, Thr(Buí), Asn(Trt), Hyp(But) e D-Tyr(But) 25 nessa ordem para, desse modo, proporcionar a resina MBHA de H-DTyr(But)-Hyp(But)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink. Subseqüentemente, a resina foi tratada durante 20 minutos em DMF com 94,4 μΐ (1 mmol) de Ac2O e 174,2 μΐ (1 mmol) de DIEA para acetilação N-terminal para proporcionar 1,049 g da resina MBHA
156 de Ac-D-Tyr(But)-Hyp(But)-Asn(Trt)-Thr(Bu')-Phe-AzaGly-LeuArg(Boc2,Me)-Trp(Bo c)-amida de Rink. 0 mesmo procedimento foi realizado novamente para proporcionar 1,035 g da resina.
A cada resina, 8 mL de TFA/PhSMe/m“Cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Após o que, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: 76/24-66/34 usando:
eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1% contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&DODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram 15 coletadas e liofilizadas. Os pós brancos obtidos, 159,5 mg, foram dissolvidos em 200 mL de água e 550 pL de resina de troca de íons BioRAD AGÍ x 8 AcO foram adicionados à solução. Enquanto se agitava manualmente a solução de reação algumas vezes, a solução foi deixada descansar durante >0 uma hora. A solução foi filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e proporcionar 134,5 mg de pós brancos como o acetato.
À amostra purificada (o acetato) obtida, 6,725 ml de ácido acético glacial foram adicionados e a mistura foi submetida à ultra-som durante 5 minutos Subseqüentemente, 20,175 ml de água pura foram adicionados para preparar 5 mg/ml/solução de ácido acético aquosa a 25%. Os
5 mg/ml de solução resultantes foram distribuídos em 4 ml cada em seis frascos e o resto da solução foi transferido para um frasco. Esses frascos foram congelados a -80°C durante 2 horas e, então, liofilizados, pelo que a liofilização foi realizada enquanto se esfriava a-40°C durante uma hora, -20°C durante 2 horas, 0°C durante 12 horas, 5°C durante 8 horas e 20°C durante 5
157
horas. Como um resultado, seis frascos de 20 mg cada e um frasco de 12,34 mg foram obtidos.
Espectro de massa (M+H)+ 1225,9 (Calc. 1225,6)
Anal, para aminoácidos (HCl a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre parênteses mostram valores teóricos): Asp 0,99 (1), Thr 0,96 (1); Leu 0,98 (1); Tyr 0,98(1); Phe 1,00(1)
Tempo de eluição sobre HPLC 1 1,4 mins.
Condições de eluição:
Coluna: YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm) (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1 % em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins )
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 8)
Produção de des(l)-Ac-[DTyr2,GIy3;Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 (Composto No. 726)
A resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink, 661 mg (0,25 mmoles), foi usada como um material >0 de iniciação e o material de iniciação foi reagido sobre o sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles) para introduzir Phe, Thr(But), Asn(Trt), Gly e D-Tyr(Bul) nessa ordem, de modo a proporcionar a resina MBHA de H-D-Ty^Bfrj-GlyAsn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Tv(Boc)-amida de Rink, 25 Subseqüentemente, a resina foi tratada durante 20 minutos em DMF com 94,4 μΐ (1 mmol) de Ac2O e 174,2 μΐ (1 mmol) de DEEA para acetilação Nterminal para proporcionar 866,6 mg da resina MBHA de Ac-D-Tyr(But)Gly-Asn(Trt)-Thr(Buí)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de
Rink.
158
À resina obtida, 8 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento 5 foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Então, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes AZB: 76/24-66?34 usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-BS-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas. Os pós brancos obtidos, 42,9 mg, foram dissolvidos em 50 mL de água e 153 pL de resina de troca de íons BioRAD AGÍ x 8 AcO foram adicionados à solução. Enquanto se agitava manualmente a solução de reação algumas 15 vezes, a solução foi deixada descansar durante uma hora. A solução foi, então, filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e proporcionar 39,9 mg de pós brancos como o acetato.
À amostra purificada (o acetato) obtida, 1,995 ml de ácido acético glacial foram adicionados e a mistura foi submetida à ultra-som ^0 durante 5 minutos. Subseqüentemente, 5,985 ml de água pura foram adicionados para preparar 5 mg/ml/solução de ácido acético aquosa a 25%. Os 5 mg/ml de solução resultantes foram distribuídos em um frasco de 4 ml e o resto da solução foi transferido para um frasco. Esses frascos foram congelados a -80°C durante 2 horas e, então, liofilizados, pelo que a 25 liofilização foi realizada enquanto se esfriava a-40°C durante uma hora, -20°C durante 2 horas, 0°C durante 12 horas, 5°C durante 8 horas e 20°C durante 5 horas. Como um resultado, um frasco de 20 mg e um frasco de 19,08 mg preparados a partir da solução restante foram obtidos.
Espectro de massa (M+H)+ 1169,7 (Cale. 1169,6)
159
Anal, para aminoácidos (HC1 a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre parênteses mostram valores teóricos): Asp 0,98 (1); Thr 0,93 (1); Gly 0,97 (1); Leu 0,94 (1); Tyr 0,97 (1); Phe 1,00 (1)
Tempo de eluição sobre HPLC: 1 1,3 mins.
Condições de eluição;
Coluna: YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila
contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 9)
Produção de des(l)-Ac-[DTyr2,Aib3,Thr5,AzaGIy7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 (Composto No. 727)
A resina MBHA de Fmoc-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGlyLeu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink, 1325 mg (0,4 mmoles), foi usada como um material de iniciação e o material de iniciação foi reagido através de síntese manual em fase sólida (Fmoc/DEPCDI/HOAt) para introduzir Aib e D-Tyr(But), nessa ordem. Assim, a resina MB EA de H-D>0 Tyr(Buí)-Aib-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)amida de Rink foi obtida. Subseqüentemente, 5 mL de DMF, 265 mg de AcONB e 209 uL de DIEA foram adicionados e a mistura foi agitada durante 3 horas para acetilação N-terminal para proporcionar a resina MBHA de AcD-TyrCBut)-Aib-Asn(Trí)-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)25 Trp(Boc)-amida de Rink.
À resina obtida, 8 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento
160
foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Então, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: 72/28-62/38 usando eluente A:
TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1% contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas. Os pós brancos obtidos foram dissolvidos em 50 mL de água e 150 pL de resina de troca de íons BioRAD AGÍ x 8 AcO’ foram adicionados à solução. Enquanto se agitava manualmente a solução de reação algumas vezes, a solução foi deixada descansar durante uma hora. A solução foi, então, filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e proporcionar 41,9 * mg de pós brancos como o acetato.
À amostra purificada (o acetato) obtida, 2,095 ml de ácido acético glacial foram adicionados e a mistura foi submetida à ultra-som durante 5 minutos. Subseqüentemente, 6,285 ml de água pura foram adicionados para preparar 5 mg/ml/solução de ácido acético aquosa a 25%. Os 5 mg/ml de solução resultantes foi distribuídos em um frasco de 4 ml e um frasco de 3 ml e o resto da solução foi transferido para um frasco. Esses ^^20 frascos foram congelados a -80°C durante 2 horas e, então, liofilizados, pelo que a liofilização foi realizada enquanto se esfriava a-40°C durante uma hora, ~20°C durante 2 horas, 0°C durante 12 horas, 5°C durante 8 horas e 20°C durante 5 horas. Como um resultado, um frasco de 20 mg, um frasco de 15 mg e um frasco de 4,8 mg preparados a partir da solução restante foram 25 obtidos.
Espectro de massa (M+H)+ 1197 7 (Calc. 1197,6)
Anal, para aminoácidos (HC1 a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre parênteses mostram valores teóricos): Asp 0 98 (1); Thr 0,94 (1); Leu 0,95
161
J68 &
(1); Tyr 0,97(1); Phe 1,00(1)
Tempo de eluição sobre HPLC. 13,0 mins.
Condições de eluição:
Coluna YMC-AM301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, usando TFA a 1% em água como eluente A e acetonitrila contendo 0 1% TFA como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo:, 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 10)
Produção de des(l)-Ac-[D
Tyr2,Glu3,Thr5;AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 (Composto No. 746)
A resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink, 661 mg (0,25 mmoles), foi usada como um material de iniciação e o material de iniciação foi reagido sobre um sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles), pelo que Phe, Thr(But), Asn(Trt), Glu(O BuL) e D-Ty^Bu1) foram introduzidos nessa ordem para proporcionar a resina MBHA de H-DTyr(Buí)-Glu(OBut)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink. Subseqüentemente, a resina foi tratada durante 20 *0 minutos em DMF com 94,4 μ1 (1 mmol) de Ac2O e 174,2 μΐ (1 mmol) de DIEA para acetilação N-terminal para proporcionar 940,0 mg da resina MBHA de Ac-D-Tyr(But)-Glu(OBut)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGly-LeuArg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink.
À resina obtida, 6 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Então,
162 ·'
J6Q eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes AZB: 76/24-66/34 usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas. Os pós brancos obtidos, 57,3 mg, foram dissolvidos em 100 mL de água e 192 pL de resina de troca de íons AGÍ x 8 AcO‘, a qual foi obtida através de conversão de BioRAD AGÍ x 8 CT comercialmente disponível no tipo acetato de uma maneira convencional, foram adicionados à solução. Enquanto se agitava manualmente a solução de reação algumas vezes, a solução foi deixada descansar durante uma hora. A solução foi, então, filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e a resina foi liofilizada para proporcionar 42,7 mg de pós brancos.
À amostra purificada (o acetato) obtida, 2,135 ml de ácido acético glacial foram adicionados e a mistura foi submetida à ultra-som durante 5 minutos. Subsequentemente, 6,405 ml de água pura foi adicionado para preparar 5 mg/ml/solução de ácido acético aquosa a 25%. A solução resultante foi distribuída em 4 ml cada em dois frascos e o resto da solução foi transferido para um frasco. Esses frascos foram congelados a -80°C durante 2 horas e, então, liofilizados, pelo que a liofílização foi realizada enquanto se esfriava a-40°C durante 4 horas, -20°C durante 2 horas, 0°C durante 12 horas, 5°C durante 8 horas e 20°C durante 5 horas. Como um resultado, dois frascos de 20 mg cada e um frasco de 0,52 mg preparados a partir da solução restante foram obtidos.
Espectro de massa (M+H)+ 1241,8 (Cale. 1241,4)
Anal, para aminoácidos (HC1 a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre parênteses mostram valores teóricos): Asp 0,99 (1); Thr 0,95 (1); Glu 0,96 (1); Leu 0,98 (1); Tyr 0,98 (1); Phe 1,00 (1)
163 &
Tempo de eluição sobre HPLC: 11,4 mins.
Condições de eluição:
Coluna: YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 11)
Produção de des(l)-Ac-[D-
Tyr2,Lys3,Thr5,Plie(3F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MSl() (Composto
No. 756)
A resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink, 661 mg (0,25 mmoles), foi usada como um material de iniciação e o material de iniciação foi reagido sobre um sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles), pelo que Phe(3F), Thr(Bul), Asn(Trt), Lys(Boc) e D-Ty^Bu*) foram introduzidos nessa ordem para proporcionar a resina MBHA de H-DTyr(But)-LyS(BOC)-ASn(Tn)-Thr(But)-PhC(SF)-AzaGly-LeuArg(BoC25Me)-TrP(Boc)“amida de Rink. Subseqüentemente, a resina foi >0 tratada durante 20 minutos em DMF com 94,4 μΐ (1 mmol) de Ac2O e 174,2 μΐ (1 mmol) de DIEA para acetilação N-terminal para proporcionar 881,7 mg da resina MBHA de Ac-D-Tyr(Buí)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Thr(Buí)-Phe(3F)AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink.
À resina obtida, 6 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Então,
164 &
eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: 77/23-67/33 usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A 5 (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas.
Os pós brancos obtidos, 47,7 mg, foram dissolvidos em 50 mL de água e 316 pL de resina de troca de íons BioRAD AGÍ x 8 AcO' foram adicionados à solução. Enquanto se agitava manualmente a solução de reação algumas vezes, a solução foi deixada descansar durante uma hora. A solução foi, então, > filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e proporcionar 42,2 mg de pós brancos como o acetato.
À amostra purificada (o acetato) obtida, 2,11 ml de ácido • acético glacial foram adicionados e a mistura foi submetida à ultra-som durante 5 minutos. Subseqüentemente, 6,33 ml de água pura foram adicionados para preparar 5 mg/ml/solução de ácido acético aquosa a 25%. Os mg/ml de solução resultantes foi distribuído em dois frascos de 4 ml cada e o resto da solução foi transferido para um frasco. Esses frascos foram congelados a -80°C durante 2 horas e, então, liofilizados, pelo que a liofilização foi realizada enquanto se esfriava a-40°C durante uma hora, -20°C φθ durante 2 horas, 0°C durante 12 horas, 5°C durante 8 horas e 20°C durante 5 horas. Como um resultado, dois frascos de 20 mg e um frasco de 0,20 mg preparados a partir da solução restante foram obtidos.
Espectro de massa (M+H)+ 1258,8 (Cale. 1258,6)
Anal, para aminoácidos (HC1 a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre parênteses mostram valores teóricos): Asp 0,99 (1); Thr 0,95 (I); Leu 0,95 (1); Tyr 0,99 (1); Phe(3F) 1,00 (1); Lys 0,97 (1)
Tempo de eluição sobre HPLC: 10,8 mins
Condições de eluição:
165
Coluna: YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 12)
Produção de des(l)-Ac-[DTyr2,Glu3,Thr5,Phe(3F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,TrplO]MS10 (Composto No. 757) de φ20
A resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink, 661 mg (0 25 mmoles), foi usada como um material de iniciação e o material de iniciação foi reagido sobre um sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles), pelo que Phe(3F), ΤΙιτ(Β^), Asn(Trt), Glu(O BuL) e D-Ty^Bu1) foram introduzidos nessa ordem para proporcionar a resina MBHA de H-DTyr(Bu,)-Glu(OBut)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe(3F)-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink. Subseqüentemente, a resina foi tratada durante 20 minutos em DMF com 94,4 μΐ (1 mmol) de Ac2O e 174. 2 μΐ (1 mmol) de DIEA para acetilação N-terminal para proporcionar 872,5 mg da resina MBHA de Ac-D-Tyr(But)-Glu(OBut)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe(3F)-AzaGlyLeu-Arg(Boc2,Me)- Trp(Boc)-amida de Rink.
À resina obtida, 8 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H20/TIS/EDT (80/5/5/5/2 5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e 0 sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Então, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: 74,5/25 5-64,5/35,5 usando:
166
eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&DODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas. Os pós brancos obtidos, 60,0 mg, foram dissolvidos 5 em 100 mL de água e 198 pL de resina de troca de íons AGÍ x 8 AcO', a qual foi obtida através de conversão de BioRAD AGÍ x 8 CF comercialmente disponível no tipo acetato de uma maneira convencional, foram adicionados à solução. Enquanto se agitava manualmente a solução de reação algumas vezes, a solução foi deixada descansar durante uma hora. A solução foi, então, tf
020 filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e proporcionar 45,2 mg de pós brancos como o acetato.
À amostra purificada (o acetato) obtida, 2,26 ml de ácido acético glacial foram adicionados e a mistura foi submetida à ultra-som durante 5 minutos. Subseqüentemente, 6,78 ml de água pura foram adicionados para preparar 5 mg/ml/solução de ácido acético aquosa a 25%. Os 5 mg/ml de solução resultantes foram distribuídos em 4 ml cada em dois frascos e o resto da solução foi transferido para um frasco. Esses frascos foram congelados a -80°C durante 2 horas e, então, liofilizados, pelo que a liofilização foi realizada enquanto se esfriava a-40°C durante uma hora, -20°C durante 2 horas, 0°C durante 12 horas, 5°C durante 8 horas e 2O°C durante 5 horas. Como um resultado, dois frascos de 20 mg e um frasco de 3,81 mg preparados a partir da solução restante foram obtidos.
Espectro de massa (M+H)+ 1259,9 (Cale. 1259,6)
Anal, para aminoácidos (HC1 a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre parênteses mostram valores teóricos): Asp 0,99 (1); Thr 0,94 (1); Glu 0,99 (1); Leu 0,94 (1); Tyr 0,97 (1); Phe(3F) 1,00 (1)
Tempo de eluição sobre HPLC: 11,9 mins.
Condições de eluição:
167
è° >0
Coluna: YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 13)
Produção de des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Thr5,Phe(4F)6,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 (Composto No. 787)
A resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink, 661 mg (0,25 mmoles), foi usada como um material de iniciação e o material de iniciação foi reagido sobre o sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles), pelo que Phe(4F), Thr(But), Asn(Trt), Hyp(But) e D-Ty^Bu1) foram introduzidos nessa ordem para proporcionar a resina MBHA de H-DTyr(But)-Hyp(But)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe(4F)-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink. Subseqüentemente, a resina foi tratada durante 20 minutos em DMF com 94,4 μΐ (1 mmol) de Ac2O e 174,2 pl (1 mmol) de DEEA para acetilação N-terminal para proporcionar 832,8 mg da resina MBHA de Ac-D-Tyr(But)-Hyp(Buí)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe(4F)-AzaGly-LeuArg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink. O mesmo procedimento foi realizado novamente para proporcionar 823,9 mg da resina.
A cada resina, 6 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2 5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Então, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma
168
taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: 74/26-64/36 usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas. 5 Os pós brancos obtidos, 117,7 mg, foram dissolvidos em 200 mL de água e
394 pL de resina de troca de íons AGÍ x 8 AcO-, a qual foi obtida através de conversão de BioRAD AGÍ x 8 CF comercialmente disponível no tipo acetato de uma maneira convencional, foram adicionados à solução. Enquanto se agitava manualmente a solução de reação algumas vezes, a solução foi ^0 deixada descansar durante uma hora. A solução foi, então, filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e proporcionar 115,5 mg de pós brancos como o acetato.
À amostra purificada (o acetato) obtida, 5,775 ml de ácido acético glacial foram adicionados e a mistura foi submetida à ultra-som 15 durante 5 minutos. Subseqüentemente, 17,325 ml de água pura foram adicionados para preparar 5 mg/ml/solução de ácido acético aquosa a 25%. Os 5 mg/ml de solução resultantes foram distribuídos em 4 ml cada em cinco frascos e o resto da solução foi transferido para um frasco. Esses frascos foram congelados a -80°C durante 2 horas e, então, liofilizados, pelo que a 120 liofilização foi realizada enquanto se esfriava a-40°C durante 4 horas, -20°C durante 2 horas, 0°C durante 12 horas, 5°C durante 8 horas e 20°C durante 5 horas. Como um resultado, cinco frascos de 20 mg e um frasco de 11,95 mg preparados a partir da solução restante foram obtidos.
Espectro de massa (M+H)+ 1243,6 (Cale. 1243,6)
Anal, para aminoácidos (HC1 a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre parênteses mostram valores teóricos): Asp 1,01 (1); Thr 0,96 (1); Leu 0,97 (1); Tyr 1,02(1); Phe(4F) 1,00 (1)
Tempo de eluição sobre HPLC: 12,0 mins.
169
Condições de eluição:
Coluna: YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes AZB = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila 5 contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 14)
Produção de des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,Thr5,AzaGly7,Trpl0]MS10 (Composto No. 797)
A resina MBHA de amida de Rink, 357 mg (0,25 mmoles), foi usada como um material de iniciação e o material de iniciação foi reagido sobre o sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles), pelo que Trp(Boc), Arg(Pbf) e Leu foram introduzidos para proporcionar a resina MBHA de H-Leu-Arg(Pbf)-Trp(Boc)15 amida de Rink. Em um reator separado, 290,75 mg (1 mmol) de the FmocNHNH2HC1 foram pesados e dissolvidos em DMF. Sob resfriamento com gelo, uma suspensão de 156,9 mg (0,95 mmoles) de CDI em THF e 339,7 μΐ de DIEA foram adicionados e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi adicionada à resina MBHA de H-Leu^20 Arg(Pbf)-Trp(Boc)-amida de Rink, seguido por agitação em temperatura ambiente durante a noite. Após a resina ser lavada, Phe, Thr(But), Asn(Trt), Hyp(But) e D-Tyr(Bu) foram introduzidos nessa ordem novamente sobre o sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles) para proporcionar a resina MBHA de H-D25 Tyr(Bu> Hyp(Buí)-Asn(Trt)-Thr(Buí)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Pbf)-Trp(Boc)amida de Rink. Subseqüentemente, a resina foi tratada durante 20 minutos em DMF com 94,4 μΐ (1 mmol) de Ac2O e 174,2 μΐ (1 mmol) de DIEA para acetilação N-terminal para proporcionar 596,6 mg da resina MBHA de Ac-DTyr(But)-Hyp(But)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Pbf)-Trp(Boc)170 amida de Rink.
À resina obtida, 4 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Então, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: 74/26-64/36 usando: eluente A:
è°
020
TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas. Os pós brancos obtidos, 146,3 mg, foram dissolvidos em 100 mL de água e 530 pL de resina de troca de íons BioRAD AGÍ x 8 AcO' foram adicionados à solução, seguido por agitação durante uma hora. Após a resina ser removida por meio de filtração em um tampão de algodão através de lã de sílica, a mesma quantidade da resina foi novamente adicionada e a mistura foi agitada durante uma hora. A solução foi filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e liofilizada para proporcionar 127,3 mg de pós brancos como o acetato.
Espectro de massa (M+H)+ 1211,1 (Cale. 1211,6)
Anal, para aminoácidos (HC1 a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre parênteses mostram valores teóricos): Asp 0,99 (1); Thr 0,96 (1); Leu 0,93 (1); Tyr 0,98 (1); Phe 1,00 (1); Arg 0,99 (1)
Tempo de eluição sobre HPLC: 11,4 mins.
Condições de eluição:
Coluna YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B
171 &
= 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 15)
Produção de des(l)-Ac-[DTyr2,Hyp3,AIb4,Thr5,AzaGly7,Arg(Me)9,Trpl0]MS10 (Composto No.
800)
A resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)Trp(Boc)-amida de Rink (0,378 mmoles/g), 661 mg (0,25 mmoles), foi usada como um material de iniciação e o material de iniciação foi reagido sobre o sintetizador de peptídeo ABI 433A (de acordo com o protocolo com Fmoc/DCC/HOBt, 0,25 mmoles), pelo que Phe, Thr(But), Alb, Hyp(But) e DTyr(But) foram introduzidos nessa ordem para, desse modo, proporcionar a resina MBHA de H-D-TyríBu^-HypíBu^-Alb-ThríBu^-Phe-Gly-Leu15 Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink. Subseqüentemente, a resina foi tratada durante 20 minutos em DMF com 94,4 μΐ (1 mmol) de Ac2O e 174,2 μΐ (1 mmol) de DIEA para acetilação N-terminal para proporcionar 1,173 g da resina MBHA de Ac-D-Tyr(But)-Hyp(But)-Asn(Trt)-Thr(But)-Phe-AzaGlyLeu-Arg(Boc2,Me)- Trp(Boc)-amida de Rink.
φζο À resina obtida, 7 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2 5/2 5) foi adicionado, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Após o que, eluição em gradiente com densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 8 ml/min com eluentes A/B: 74/26-64/36 usando: eluente A. TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1%-contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando Daisopak-SP 100-5-ODS-P (20 x 250 mm). As
172
frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas. Os pós brancos obtidos, 94.8 mg, foram dissolvidos em 20 mL de água e 320 pL de resina de troca de íons BioRAD AGÍ x 8 AcO foram adicionados à solução. A solução foi filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e 5 liofilizada para proporcionar 79,4 mg de pós brancos como o acetato.
Espectro de massa (M+H)+ 1240,4 (Calc. 1240,6)
Anal, para aminoácidos (HCl a 20% contendo ácido tioglicólico a 4%, 110°C, hidrólise durante 24 horas; os valores entre
parênteses mostram valores teóricos): Thr 1,02 (1); Leu 0,99 (1); Tyr 1,00 (1);
Phe 1,00(1)
Tempo de eluição sobre HPLC: 12,3 mins.
Condições de eluição:
Coluna: YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B 15 = 80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min.
(EXEMPLO 16) (Síntese F). Produção de des(l-5)-4-[bis-(2<20 piridilnietiI)aminometil]benzoil-[AzaGly7,Arg(Me)9,TrplO] MS10 (Composto No. 801)
Em um reator, 265 mg (0,1 mmoles) da resina MBHA de Fmoc-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)-amida de Rink (0,378 mmoles/g) foram pesados e lavados e intumescidos em DMF. A resina foi, então, tratada 25 em 5 ml de solução de piperidina/DMF a 20% durante 20 minutos para desproteção de Fmoc. A resina foi tratada com 155,0 mg (0,4 mmoles) de Fmoc-Phe-OH, 63,6 pL (0,4 mmoles) de DIPCDI e 0,8 mL (0,4 mmoles) de HOAt a 0,5M/DMF em temperatura ambiente durante 90 minutos para introduzir Phe. Subseqüentemente, desproteção de Fmoc através de
173
J?O tratamento em 5 ml de solução de piperidina/DMF a 20% durante 20 minutos e condensação através do método com DIPCDI/ΗΟΑΐ conforme na introdução de Phe, Pelo que Ambz(4) foi introduzida para proporcionar a resina MBHA de Fmoc-Ambz(4)-Phe“AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)5 amida de Rink. Após desproteção de Fmoc, a resina resultante foi tratada durante 10 minutos em DMF com 11,4 μΐ (0,12 mmoles) de 2piridinacarbóxialdeído na presença de 50 μΐ de AcOH, 41,1 mg (0,4 mmoles) de NaBH3CN foram adicionados à mesma e a mistura foi agitada durante uma hora. Após lavagem em DMF, o mesmo procedimento foi repetido novamente. A resina obtida foi lavada em DMF e MeOH e seca para proporcionar 281,4 mg da resina MBHA de 4-[Bis-(2Piridilmetil)aminometil]benzoil-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Boc2,Me)-Trp(Boc)amida de Rink.
À resina obtida, 2 mL de TFA/PhSMe/m-cresol/H2O/TIS/EDT (80/5/5/5/2,5/2,5) foram adicionados, seguido por agitação durante 90 minutos. Dietil éter foi adicionado à solução de reação, o precipitado resultante foi centrifugado e o sobrenadante foi removido. Esse procedimento foi repetido duas vezes para lavagem. O resíduo foi extraído com uma solução de ácido acético aquosa e a resina foi removida através de filtração. Então, >0 eluição em gradiente de densidade linear (60 minutos) foi realizada em uma taxa de fluxo de 15 ml/min com eluentes A/B: a 76/24-66/34 usando: eluente A: TFA a 0,1% em água e eluente B: TFA a 0,1% contendo acetonitrila sobre HPLC preparativa usando uma coluna YMC Pack R&D-ODS-5-B S-5, 120A (30 x 250 mm). As frações contendo o produto foram coletadas e liofilizadas.
Os pós brancos obtidos, 17,3 mg, foram dissolvidos em 20 mL de AcCN-água (9:1) e 210 pL de resina de troca de íons BioRAD AGÍ x 8 AcO' foram adicionados à solução. Enquanto se agitava manualmente a solução de reação algumas vezes, a solução foi filtrada através de um filtro com membrana para remover a resina e liofilizada para proporcionar 10,8 mg de pós brancos como
174
o acetato.
Espectro de massa (Μ+Η)+ 1007,3 (Cale. 1007,5)
Tempo de eluição sobre FIPLC. 10,7 mins
Condições de eluição:
Coluna: YMC ODS AM-301 (4,6 x 100 mm)
Eluição em gradiente com densidade linear com eluentes A/B =80/20-30/70, usando TFA a 0,1% em água como eluente A e acetonitrila contendo TFA a 0,1% como eluente B (25 mins.)
Taxa de fluxo: 1,0 ml/min
As estruturas de compostos sintetizados conforme nos
EXEMPLOS 1 a 16 ou compostos sintetizados através de métodos de síntese similares aos EXEMPLOS 1 a 6 e as propriedades físico-químicas desses compostos são mostradas na TABELA 1A abaixo.
A descrição da coluna Método de síntese na Tabela representa que o composto pode ser sintetizado ou foi sintetizado através de ou de acordo com o método de síntese descrito na mesma.
Mais especificamente, A na coluna Método de síntese do Composto número 708 representa que o composto foi sintetizado através do método de síntese A, conforme descrito no EXEMPLO 1.
^20 B na coluna Método de síntese do Composto número 709 representa que o composto foi sintetizado através do método de síntese b, conforme descrito no EXEMPLO 3.
C na coluna Método de síntese do Composto número 713 representa que o composto foi sintetizado através do método de síntese C, 25 conforme descrito no EXEMPLO 4.
D na coluna Método de síntese do Composto número 714 representa que o composto foi sintetizado através do método de síntese D, conforme descrito no EXEMPLO 5.
E na coluna Método de síntese do Composto número 717
175
representa que o composto foi sintetizado através do método de síntese E, conforme descrito no EXEMPLO 6.
Cada descrição na coluna Método de síntese de cada composto descrito nos EXEMPLOS 7 a 16 representa que o composto pode 5 ser sintetizado de acordo com cada método de síntese descrito na mesma.
Cada descrição na coluna Método de síntese de cada composto a qual não é descrita nos EXEMPLOS 1 a 16 representa que o composto foi sintetizado de acordo com cada método de síntese descrito na mesma.
A descrição da coluna Condição de HPLC na Tabela representa que cada composto foi eluído através de cada condição de HPLC de a, b ou c descrita na mesma.
176
TABELA ΙΑ
Método Síntese m CQ o O Q Q Q ω ω ω 41 4 4 4 4 4 4 4
Condição de HPLC cú cS cd cd cs -O x> © -O -O -O aS ai rt «1 cd «i « aS CS
HPLC (min) σγ co <N a Tf 4 <4 <4 © <4 CM co CM o CM oo ITi oo r-^ VM cm (> Tf 80 cm O CM co co
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Estrutura © CO g σ’ 08 00 u < Q N 4 U< 4 4 4 £ ô 22 >> Q < 1 z—x co O X? <© co g O 2 4 4 'ã? â 4 Õ « N < 4 4 ó < r ,—8 co 1 '—' W o 13 O CO g © a. 4 4 <1> g OO Ui < 4 5o O CS N < 4 Ui JO 4 ’Õ c cS o CD Q co 1 VI <D TO O CO g © £ 4 2Γ 5 < 4 _>> < vo u _a 4 4 cx < ( ,—% 2 w d TJ o co g © & 4 4 2? 5 £? < g. < 4 4 (X CD < Ó < 1 c? CO ω X5 o CO g o & 4 4 <—s (L> £ &0 u < 4 5o O « N < 4 u 4 4 4 Ή' ω cx Z z '—' cx co < 4 & 4' Q 22 4 ώ o < t CO (D Q o GO g o £ 4 'ã? £? < 4 5o <ã £ o TC & 1 4 £ Q u 4 1 Q ό < A. <Λ <D Q o co g O £ 4 2? 5 'õo < 4 >8 § 4 í—I 4 4 <—·. N aa Z £ 6 < 4 £ 1 q CM u 4 Q ύ < 1 W O Q o co o1 > 4 'ã? s Ê? < 4 >8 O <s N < 4 13 4 2 < co & 4 [ Q Εγ Q o < <z> <D T3 © CO s o & 4 4 g 'co 43 4 >8 O < í Tf X) < 4 /----8 Tf X 4 1 Q £ Q ó < oo <1> T3 O CO 'o1 4 í OO < 4 < 4 o Si 4 > Q 4 eΕγ Q <7 Q, ύ < , -r a> Ό O co s o1 & 4 4 £? < 4 >-. O «s N < 4 u £ m C? < £* t Q ò < ÂTy ω Ό O CO O e- H 4 'ÔT < 4 qo < e ω 4 i 1 Q ύ < A <z> <1> T5 O ío g o1 & 4 4 'o 4 2? < 4 l— 4 4 4 CO O 4 £ Q ύ í. tZl o XJ O co s o1 & 4 4 'ã? 'õo Ui C 4 >8 0 ai N < 4 u _a 4 4 4 5o Z l & o < J CO a> Xí O ζΖ2 g, o1 £ 4 'm? u < 4 >8 0 < s 4 3 4 22 a ò < r CO <υ -o o co g o & 4 4 'o' < % § N < 4 λ 4 4 CS 4 >8 4 1 Q ύ < ^~8 8__J Vi O TJ o co O1 ox <D < 4 5o 0 cd N < 4 u JS 4 4 Λ* 0 <d Q 1 O < J svwZ GO Q X o CO © £ 4 2? 4 2? < 4 u 4 4 x> < <d £ Q 1 O co <D X © CO g <© 1 4 s X-4 £? < 4 _5o < 2 H 4 Z—\ N 4 < 22 4 Q 1 Q < Z-X GO □ X
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80 oo oo 80 OO o ΓΟΟ CM ΓΟΟ xt ΓΟΟ t— Γοο CM oo 00 80 OO 00 ΓΟΟ oo oo 00 oo 08 OO OO 80 08 OO r- 08 OO 08 08 OO
181
As estruturas dos compostos na TABELA IA acima são mostradas na TABELA 1B.
[TABELA 1B]
No. Composto Estrutura
708
709
710 -5.
712
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714
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EXEMPLO DE TESTE 1
Ensaio de Atividade de Aumento do Nível de íons de Ca Intracelular Usando FLIPR
De acordo com o método descrito no JPA 2000-312590, a atividade de aumento do nível de íons de Ca intracelular foi medida usando FLIPR.
A linhagem de células de expressão estável hOT7T175 foi obtida através de transfecção do plasmídeo de expressão pAK-rOT175 para células animais em células CHO/dhfr, usando CellPhect Transfection Kit (Amersham Pharmacia Biotech, Inc.). Primeiro, 240 pL de Tampão A (vem junto com o CellPhect Transfection Kit) foram adicionados a 9,6 pg de DNA de plasmídeo dissolvido em 240 pL de água destilada, seguido por agitação. Após a mistura ser assentada durante 10 minutos, 480 pL de Tampão B (vem junto com o CellPhect Transfection Kit) foram adicionados à mistura, a qual
194 tf
ΦζΟ foi vigorosamente agitada para formar lipossomas contendo o DNA. Então, 4 χ 105 células CHO/dhfr (obtidas da ATCC) foram inoculadas sobre um disco de Petri de 60 mm. Após cultura das células em meio F12 de Ham (Nissui Seiyaku Co., Ltda.) suplementado com soro bovino fetal a 10% (BIO WHITTAKER, Inc.) a 37 °C durante 2 dias em gás dióxido de carbono a 5%, 480 mL dos lipossomas foram gota a gota adicionados às células sobre o disco de Petri. Após cultura das células a 37 °C durante 6 horas em gás dióxido de carbono a 5%, as células foram lavadas duas vezes com meio F-12 de Ham isento de soro e 3 mL de glicerol a 15% foram adicionados às células sobre o disco de Petri, seguido por tratamento durante 2 minutos. As células foram novamente lavadas duas vezes com meio F-12 de Ham isento de soro, seguido por incubação em meio F-12 de Ham suplementado com soro bovino fetal a 10% a 37 °C durante 15 horas em gás dióxido de carbono a 5%. As células foram dispersas através de tratamento com tripsina para recuperar do disco de Petri. As células recuperadas foram inoculadas sobre uma lâmina com 6 cavidades a 1,25 χ 104 células/cavidade e incubação foi iniciada a 37 °C em meio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) (Nissui Seiyaku Co., Ltda.) contendo soro bovino fetal submetido à diálise a 10% (JRH BIOSCIENCES, Inc.) em gás dióxido de carbono a 5%. Os transformantes CHO plasmídeo-transfectados cresceram no meio, mas as células nãotransfectadas morreram gradualmente, conseqüentemente, o meio foi trocado nos Dias 1 e 2 após o início de incubação para remover as células mortas. Aproximadamente 20 colônias dos transformantes CHO que mantiveram o crescimento nos Dias 8 a 10 após a incubação foram isoladas. Das células nessas colônias, células mostrando alta reatividade com o peptídeo ligante de metastina (aqui depois meramente referidas como hOT7T175/CHO) foram selecionadas para proporcionar o seguinte experimento.
A atividade de aumento do nível de Ca intracelular do peptídeo sintético em hOT7T175/CHO foi determinada usando FLIPR
195 (Molecular Devices, Inc.).
hOT7T175/CHO foi subcultivada em DMEM suplementado com soro bovino fetal submetido à diálise a 10% (aqui depois abreviado como dFBS) (aqui depois referido como dFBS/DMEM a 10%) e fornecidas para o 5 experimento. As hOT7T175/CHO foram suspensas em dFBS/DMEM a 10% a 15 x 104 células/ml. A suspensão foi inoculada sobre uma lâmina com 96 cavidades para FLIPR (Black Plate Clear Bottom, Coster, Inc.) a 200 μΐ/cavidade (3,0 x 104 células/200 μΕ/cavidade), seguido por incubação a 37 °C durante a noite em uma incubadora com 5% de CO2 (aqui depois referida como a lâmina de célula). Então, 21 ml de HANKS/HBSS (9,8 g de HANKS, 0,35 g de hidrogencarbonato de sódio, 20 ml de HEPES a 1M; após ajuste do pH para 7,4 com hidróxido de sódio, a mistura foi esterilizada através de filtração), 210 pl de Probenecid a 250 mM e 210 μΐ de soro bovino fetal (FBS) (HANKS/HBSS-Probenecid-FBS) foram misturados.
Além disso, 2 frascos de Fluo3-AM (50 pg/frasco) foram dissolvidos em 21 pL de sulfóxido de dimetila e 21 pL de ácido Pluronic a 20%. A solução resultante foi adicionada a e misturada com 10 ml do HANKS/HBSS-Probenecid-FBS descrito acima. Após o meio de cultura ser removido, a mistura foi distribuída sobre a lâmina de células em 100 pl |20 cada/célula, seguido por incubação a 37 °C durante uma hora em uma incubadora com 5% de CO2 (carregamento de pigmento). O peptídeo foi dissolvido em sulfóxido de dimetila a 1 x ΙΟ'3 Μ. A solução de peptídeo foi diluída com HANKS/HBSS contendo Probenecid a 2,5 mM, BS A a 0,2% e CHAPS a 0,1%. A diluição foi, então, transferida para uma lâmina com 96 25 cavidades para FLEPR (lâmina com fundo em V, Coster, Inc.) (aqui depois referida como a lâmina de amostra). Após término do carregamento de pigmento sobre a lâmina de célula, a lâmina de célula foi lavada 4 vezes com tampão de lavagem, o qual foi preparado através da adição de Probenecid a
2,5 mM a HANKS/HBSS usando um lavador de lâmina para deixar 100 pL
196 o2O3 do tampão de lavagem após a lavagem. A lâmina de célula e a lâmina de amostra foram colocadas no FLEPR e 0,05 ml de uma amostra da lâmina de amostra foram automaticamente transferidos para a lâmina de célula com o dispositivo FLIPR para promover a resposta celular. Uma alteração no nível de íons de cálcio intracelular durante 180 segundos foi medida com a passagem do tempo. A atividade de aumento do nível de íons de Ca intracelular [atividade específica à Metastina (1-54)] é mostrada na TABELA
2.
[TABELA 2]
No. de Composto Atividade Especifica No. de Composto Atividade Especifica No. de Composto Atividade Especifica
708 12,8 747 2,6 789 3,4
709 9,8 748 0,4 790 2,3
710 7,2 749 0,5 791 2,9
712 8,9 750 1,0 794 2,3
713 3,7 754 3,1 797 1,4
714 0,7 755 3,5 800 0,8
715 1,6 756 2,4 801 11,1
716 3,6 757 2,7 809 1,0
717 1,0 758 1,8 810 1,5
718 2,6 759 L9 812 0,5
719 3,8 760 1,7 814 0,5
720 0,8 763 6,4 815 0,5
721 1,1 764 1,5 816 U
722 2,2 765 2,6 843 0,8
723 2,0 766 0,2 844 0,9
724 1,4 767 1,5 845 1,0
725 2,7 768 0,6 846 0,9
726 3,1 769 1,5 856 0,6
727 1,5 770 2,6 860 1,3
728 3,2 771 1,9 861 1,4
730 4,1 772 1,3 862 0,7
731 8,8 773 1,1 863 0,9
732 3,2 774 2,0 864 1,0
734 2,3 775 1,3 868 1,4
735 3,4 776 1,5 870 0,6
736 2,4 777 1,8 872 0,7
737 3,0 780 2,1 874 0,8
738 1,4 781 1,0 877 1,0
739 1,6 782 1,8 882 0,8
740 1,1 783 8,8 886 1,2
742 2,3 784 3,4 888 1,1
743 3,4 785 3,2 896 0,6
197
744 1 2,4 786 3,3 897 0,7
745 3,0 787 2,3 899 1,1
746 | 2,2 788 2,7
EXEMPLO DE TESTE 2
Avaliação do Efeito de Redução Nível de Testosterona no Sangue dos Derivados de Metastina Usando Ratos Machos Maduros
Um derivado de peptídeo de metastina (aqui depois referido como peptídeo) foi dissolvido em solução aquosa de DMSO a 50% (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltda.) para preparar uma solução de peptídeo com uma concentração de 0,03, 0,01 ou 0,003 mM. Essa solução de peptídeo foi enchida em cinco bombas osmóticas ALZET (Modelo 2001, 0,2 ml de volume, taxa de liberação: 0,001 ml/h, DURECT Corporation). As bombas ALZET enchidas com a solução de peptídeo foram implantadas subcutaneamente em 5 ratos machos CD(SD)IGS de 9 semanas de idade após o nascimento (Charles River Japan, Inc.), respectivamente. Esses ratos com a bomba implantada foram alimentados durante 6 dias sob condições normais de alimentação. Após pesagem, o animal foi decapitado para coletar o sangue. Após 0,03 ml/ml de sangue de solução de aprotinina (Trasilol, Bayer) contendo 0,1 g/ml de EDTA.2Na serem adicionados ao sangue, o plasma foi separado e recuperado através de centrifugação a 1.800 x g durante 25 min. Do plasma obtido, 0,05 ml foram aplicados ao radioimunoensaio (DPC, Total Testosterone Kit, Diagnostic Products Corporation) para medir o nível de testosterona no plasma em cada rato. Os peptídeos são listados na TABELA 3, quando o número de ratos mostrando o nível de testosterona abaixo do limite de medição (0,04 ng/ml do nível no plasma) em um radioimunoensaio era de 3 ou mais nos 5 ratos que receberam os peptídeos.
[TABELA 3]
No. de Composto No. de Composto
720 763
721 765
723 767
726 773
198
727 775
732 776
734 787
738 788
739 797
742 814
744 856
745 870
746 872
750 874
755 877
756 882
757 888
758 896
759 897
APLICABILIDADE INDUSTRIAL
De acordo com a presente invenção, são proporcionados derivados estáveis de metastina tendo excelentes atividades biológicas (uma atividade de supressão de metástase cancerígena, uma atividade de supressão 5 de crescimento de câncer, uma atividade de estimulação de secreção de hormônio gonadotrópico, atividade de estimulação de secreção de hormônio sexual, etc.).
199 %
TRATADO DE BUDAPESTE SOBRE O RECONHECIMENTO INTERNACIONAL DO DEPÓSITO DE MICROORGANISMOS
PARA OS FINS DE PROCEDIMENTO DE PATENTE
FORMA INTERNACIONAL
RECIBO NO CASO DE UM DEPÓSITO ORIGINAL Expedido de acordo com a Regra 7.1 pela
AUTORIDADE DEPOSITÁRIA INTERNACIONAL
Identificada no final desta página
Ao: Depositante
Nome: Takeda Pharmaceutical Company Limited Kunio Takeda Representante
Endereço: 1-1, Doshomachi 4-chome, Chuo-ku, Osaka-shi
1. IDENTIFICAÇÃO DO MICROORGANISMO
Referência de identificação dada pelo Número de acesso dado pela
DEPOSITANTE AUTORIDADE DEPOSITANTE
INTERNACIONAL:
Escheríchia coli DH5oÍ/pCR2, l-mKiSS-L4A FERM BP-7073_____________________
2. DESCRIÇÃO CIENTÍFICA E/OU DESIGNAÇÃO TAXONÔMICA PROPOSTA
O microorganismo identificado em 1 acima foi acompanhado por:
Γχΐ 1—’ uma descrição científica
Γχΐ 1—1 uma designação taxonômica proposta____________________________________________
3. RECIBO E ACEITAÇÃO
Esta Autoridade Depositante Internacional aceita o microorganismo identificado em 1 acima, que foi recebido pela mesma em 6 de março de 2000 (data de depósito originall)
4. RECIBO DE SOLICITAÇÃO PARA CONVERSÃO
A Autoridade Depositária Internacional aceitou o microorganismo identificado em 1 acima, que foi recebido pela mesma em — (data do depósito original), e recebeu uma solicitação para conversão em um depósito sob o Tratado de Budapeste do depósito original em —
5. AUTORIDADE DEPOSITANTE INTERNACIONAL
Nome: National Institute of Bioscience and Human-Technology Agency of Industrial Science and Technology Dr. Shinichi Ohashi DIRETOR-GERAL Data: 6 de março de 2000
Endereço: 1-3, Higashi 1-Chome Tsukuba-shi Ibaraki-ken
305-8566, JAPÃO

Claims (3)

1. Derivado de metastina ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de ser representado pela fórmula:
Ac-D-Tyr-Hyp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me)-Trp-NH2 (Composto No. 5 723).
2. Medicamento, caracterizado pelo fato de compreender o derivado de metastina como definido na reivindicação 1 ou um sal do mesmo.
3. Medicamento de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de ser um agente para regulação negativa de hormônio
10 gonadotrópico ou hormônio sexual.
BRPI0619399A 2005-12-22 2006-12-21 derivado de metastina ou um sal do mesmo, e, medicamento BRPI0619399B8 (pt)

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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003292696A1 (en) 2002-12-26 2004-08-10 Takeda Pharmaceutical Company Limited Metastin derivative and use thereof
WO2004080479A1 (ja) 2003-03-12 2004-09-23 Takeda Pharmaceutical Company Limited 性腺機能改善剤
CN101845091A (zh) * 2004-06-25 2010-09-29 武田药品工业株式会社 转移素衍生物及其用途
TWI386417B (zh) 2005-12-22 2013-02-21 Takeda Pharmaceutical 轉移抑素衍生物及其用途
US20090093615A1 (en) * 2005-12-22 2009-04-09 Takeda Pharmaceutical Company Limited Metastin derivatives and use thereof
US8404643B2 (en) * 2005-12-22 2013-03-26 Takeda Pharmaceutical Company Limited Metastin derivatives and use thereof
JO3048B1 (ar) 2006-10-25 2016-09-05 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات متاستين واستخدامها
WO2009131191A1 (ja) 2008-04-24 2009-10-29 武田薬品工業株式会社 メタスチン誘導体およびその用途
DK2314609T3 (en) * 2008-07-30 2017-03-13 Takeda Pharmaceuticals Co METASTIN DERIVATIVES AND USE THEREOF
MX2011006170A (es) * 2008-12-29 2011-06-27 Takeda Pharmaceutical Agente preventivo/terapeutico contra el cancer.
AU2010336168A1 (en) * 2009-12-22 2012-06-14 Takeda Pharmaceutical Company Limited Sustained-release formulation
PE20130276A1 (es) 2010-06-25 2013-03-20 Takeda Pharmaceutical Formulacion de liberacion sostenida
EP2755690B1 (en) 2011-08-04 2020-04-01 Merck Sharp & Dohme B.V. Kisspeptide-pentasaccharide conjugates
US9517210B2 (en) 2012-07-12 2016-12-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method for producing microcapsule powder
WO2015112703A1 (en) * 2014-01-22 2015-07-30 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treating diabetes
JP6253146B2 (ja) * 2014-02-04 2017-12-27 国立大学法人山口大学 新規なペプチド誘導体及びこれを含有する医薬
BR112019006227A2 (pt) 2016-09-30 2019-06-18 Myovant Sciences Gmbh métodos de tratamento de leiomioma uterino e endometriose
EP3518952A1 (en) * 2016-09-30 2019-08-07 Myovant Sciences GmbH Methods of treating female infertility
CN116813705A (zh) * 2017-07-05 2023-09-29 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种肽类化合物、其应用及含其的组合物

Family Cites Families (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL74827A (en) 1984-05-21 1989-06-30 Salk Inst For Biological Studi Peptides active as gnrh antagonists and pharmaceutical compositions containing them
MX9100717A (es) 1990-08-24 1992-04-01 Syntex Inc Antagonistas de la bradiquinina
AU7333496A (en) 1995-10-19 1997-05-07 Takeda Chemical Industries Ltd. Quinoline derivatives as gnrh antagonists
JPH09169735A (ja) 1995-10-19 1997-06-30 Takeda Chem Ind Ltd キノリン誘導体、その製造法および用途
JP2000510453A (ja) 1996-04-19 2000-08-15 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 成長ホルモン遊離特性を有する化合物
CA2283299A1 (en) 1997-03-07 1998-09-11 Human Genome Sciences, Inc. 186 human secreted proteins
JP4486187B2 (ja) 1998-10-27 2010-06-23 武田薬品工業株式会社 新規ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質、そのｄｎａおよびそのリガンド
US6528054B1 (en) 1998-12-28 2003-03-04 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of breast cancer
HK1047045A1 (zh) 1999-06-28 2003-02-07 Abbott Gmbh & Co. Kg 預防腫瘤生長的方法
CA2380613C (en) 1999-08-02 2014-03-25 Archer-Daniels-Midland Company Production of l-lysine by corynebacterium strain having mutation in ilvbn operon
US6838259B2 (en) 1999-12-17 2005-01-04 Takeda Chemical Industries, Ltd. Process for producing kiss-1 peptide
CA2404233A1 (en) 2000-03-29 2001-10-04 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer
AU2001244609A1 (en) 2000-03-30 2001-10-15 Takeda Chemical Industries Ltd. Novel protein, dna thereof and process for producing the same
US7834141B1 (en) 2000-03-31 2010-11-16 Theresa Siler-Khodr Non-mammalian GnRH analogs and uses thereof in tumor cell growth regulation and cancer therapy
RU2311920C2 (ru) 2000-09-20 2007-12-10 Корикса Корпорейшн Композиции и способы для лечения и диагностики рака легких
JP2003026601A (ja) 2000-11-29 2003-01-29 Takeda Chem Ind Ltd 医薬組成物およびその製造法
JP2002320496A (ja) 2001-02-26 2002-11-05 Takeda Chem Ind Ltd 新規マウス型ＫｉＳＳ−１レセプタータンパク質およびそのＤＮＡ
WO2002085399A1 (fr) 2001-04-20 2002-10-31 Takeda Chemical Industries, Ltd. Preparations contenant un peptide
CN1509336A (zh) 2001-05-17 2004-06-30 株式会社岛津制作所 肽的制备方法
WO2003027149A1 (fr) 2001-09-19 2003-04-03 Takeda Chemical Industries, Ltd. Anticorps et utilisation de ce dernier
US20050176091A1 (en) 2002-01-11 2005-08-11 Takao Yamada Process for producing kiss-1 peptide
JP2003300906A (ja) 2002-04-12 2003-10-21 Daiichi Fine Chemical Co Ltd がん転移抑制因子の安定化
WO2004038021A1 (en) 2002-10-25 2004-05-06 Paradigm Therapeutics Limited Gpr54 knock-out mammals and screening methods using them
AU2003292696A1 (en) * 2002-12-26 2004-08-10 Takeda Pharmaceutical Company Limited Metastin derivative and use thereof
JP4804714B2 (ja) 2002-12-26 2011-11-02 武田薬品工業株式会社 メタスチン誘導体およびその用途
US6800611B2 (en) * 2003-01-06 2004-10-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Metastin derivatives and their use
KR100595364B1 (ko) 2003-02-20 2006-07-03 재단법인 목암생명공학연구소 Ｌｋ8 단백질을 유효성분으로 포함하는 항암제
WO2004080479A1 (ja) 2003-03-12 2004-09-23 Takeda Pharmaceutical Company Limited 性腺機能改善剤
EP1464652A1 (en) 2003-04-02 2004-10-06 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) GPR54 receptor agonist and antagonist useful for the treatment of gonadotropin related diseases
US20050002935A1 (en) 2003-04-17 2005-01-06 Vincent Ling Use of B7-H3 as an immunoregulatory agent
US20050026224A1 (en) 2003-04-28 2005-02-03 Follettie Maximillian T. Methods and compositions for modulating G-protein coupled receptor 54
WO2004101747A2 (en) 2003-05-07 2004-11-25 The General Hospital Corporation Identification and use of gpr54 and its ligands for reproductive disorders and contraception
DK1633702T3 (da) * 2003-05-30 2008-11-10 Prozymex As Proteaseinhibitorer
JP4688678B2 (ja) 2003-11-03 2011-05-25 北京沙東生物技術有限公司 抗癌作用を有する組換えタンパク質、それをコードする遺伝子、及びそれらの使用
RU2333221C2 (ru) 2003-11-03 2008-09-10 Бейцзин Санбио Байотек Ко., Лтд. Рекомбинантный белок, обладающий противораковым действием, кодирующий его ген и его применение
WO2005095973A2 (en) 2004-03-25 2005-10-13 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with g-protein coupled receptor 54 (gpr54)
CN101845091A (zh) 2004-06-25 2010-09-29 武田药品工业株式会社 转移素衍生物及其用途
US7725869B1 (en) 2005-04-07 2010-05-25 Xilinx, Inc. Method and apparatus for modeling multiple instances of an electronic circuit using an imperative programming language description
WO2007084211A2 (en) 2005-11-11 2007-07-26 The General Hospital Corporation Use of gpr54 ligands for treatment of reproductive disorders, proliferative disorders, and for contraception
US20090099334A1 (en) 2005-12-22 2009-04-16 Takeda Pharmaceutical Company Limited Metastin derivatives and use thereof
US20090093615A1 (en) 2005-12-22 2009-04-09 Takeda Pharmaceutical Company Limited Metastin derivatives and use thereof
US8404643B2 (en) 2005-12-22 2013-03-26 Takeda Pharmaceutical Company Limited Metastin derivatives and use thereof
TWI386417B (zh) 2005-12-22 2013-02-21 Takeda Pharmaceutical 轉移抑素衍生物及其用途
JO3048B1 (ar) 2006-10-25 2016-09-05 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات متاستين واستخدامها

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TWI386417B (zh) 2013-02-21

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