BR112020026087A2 - composição de lipídio à base de vegetais, tinta ou verniz, e, processo para produzir uma composição de lipídio - Google Patents

Abstract

trata-se de uma composição de lipídio à base de vegetais que compreende níveis muito altos de ácido a-linolênico (ala), junto de pelo menos um outro ácido graxo poli-insaturado de cadeia longa (tipicamente como ésteres de ácido graxo). a composição é obtenível a partir de uma única fonte por meio de métodos de processamento convencionais e tem propriedades de estabilidade aprimoradas.

Description

1 / 50 COMPOSIÇÃO DE LIPÍDIO À BASE DE VEGETAIS, TINTA OU VERNIZ, E, PROCESSO PARA PRODUZIR UMA COMPOSIÇÃO DE

LIPÍDIO CAMPO DA INVENÇÃO

[001] As modalidades no presente documento reveladas referem-se a composições de lipídio inovadoras que são enriquecidas com ácido α- linolênico. As composições compreendem uma mistura de ácidos graxos poli- insaturados que têm vários benefícios para a saúde. As composições podem fornecer benefícios nutricionais e são potencialmente obtidas de uma única fonte que é escalonável e sustentável. Estas também têm uma estabilidade aprimorada à oxidação.

ANTECEDENTES

[002] Os ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa ômega-3 (LC-PUFAs) são amplamente reconhecidos como compostos importantes para a saúde humana e animal. Esses ácidos graxos podem ser obtidos de fontes dietéticas ou, em menor grau, pela conversão de ácidos graxos linoleico (LA, 18:2n-6) ou α-linoleico (“ALA”, 18:3n-3), dentre os quais todos considerados ácidos graxos essenciais na dieta humana.

[003] Do ponto de vista nutricional, os ácidos graxos ômega-3 mais importantes são provavelmente o ácido α-linolênico, ácido eicosapentaenoico ("EPA"; 20:5n-3) e ácido docosa-hexanoico sob as condições a seguir ("DHA"; 22:6n-3). O DHA é um LC-PUFA, que é importante para o desenvolvimento do cérebro e dos olhos. A ingestão de PUFAs ômega-3 também pode ajudar a prevenir doenças coronárias. Estudos médicos indicam claramente que esses ácidos graxos têm aspectos benéficos à saúde, tais como funções cardiovasculares e imunológicas aprimoradas e redução do câncer, diabetes e pressão alta. Os resultados clínicos demonstraram que uma ingestão dietética de 5,5 g de PUFAs ômega-3 por semana pode estar associada a uma redução de 50% do risco de parada cardíaca primária.

2 / 50 Consequentemente, o óleo que contém PUFAs ômega-3 tem tido alta demanda para fins farmacêuticos e dietéticos.

[004] Geralmente, a estabilidade oxidativa de um ácido graxo diminui notavelmente à medida que o número de ligações duplas de carbono- carbono, ou o grau de insaturação, aumenta. Infelizmente, o ALA, EPA e DHA são gorduras poli-insaturadas que tendem a oxidar prontamente. O EPA (com 5 ligações duplas de carbono-carbono) é significativamente mais propenso à oxidação que o ALA; o DHA (com 6 ligações duplas de carbono- carbono) é ainda mais propenso à oxidação que o EPA. Como consequência, o aumento do teor de ômega-3 tende a reduzir a vida útil de muitos produtos. Esses problemas se tornam particularmente agudos com óleos, incluindo quantidades significativas de EPA ou DHA.

[005] O documento n° U.S. 2015/223483 revela mesclas à base de óleo de canola que têm estabilidade oxidativa aprimorada. A estabilidade é alcançada pela adição de um ou mais aditivos.

[006] O documento n° U.S. 2011/0027443 revela composições de gordura e óleo que contêm mesclas particulares de ácido oleico, ácido linoleico, ácido alfa linoleico e LC-PUFAs com um perfil de sabor aprimorado. O documento n° U.S. 2004/209953 revela produtos nutricionais que contêm predominantemente monoglicerídeos e diglicerídeos de LC- PUFAs. O documento n° U.S. 5.130.061 descreve o uso de processos de transesterificação e destilação para extrair o DHA de óleos brutos. O documento n° U.S. 9.040.730 descreve a purificação de misturas de lipídios que contêm PUFAs para reduzir a quantidade de esteróis indesejáveis na composição. Em cada um desses casos, óleos de peixe ou microbianos são usados como a matéria-prima a partir da qual mesclas específicas são obtidas. O documento n° U.S. 2009/047378 revela alimentos ricos em ALA que contêm um suplemento alimentar com alto teor de gordura.

[007] O pedido de patente internacional no WO 2013/185184 revela

3 / 50 processos para a produção de ésteres etílicos de ácidos graxos poli- insaturados.

[008] O Pedido de Patente canadense n° C.A. 2822314 e a patente n°

7.091.369 revelam composições de lipídeos de plantas que compreendem altos níveis de ácido α-linolênico. A canola geneticamente modificada é descrita no documento n° WO 2017/218969 e no documento n° WO 2017/219006.

[009] A listagem ou discussão de um documento aparentemente publicado anteriormente nesse relatório descritivo não deve ser necessariamente interpretada como um reconhecimento de que o documento faz parte do estado da técnica ou que é de conhecimento geral comum.

REVELAÇÃO DA INVENÇÃO

[0010] De acordo com um primeiro aspecto da invenção, é fornecida uma composição de lipídio à base de vegetais que compreende: (i) ácido α-linolênico em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 85% em peso do teor total de ácido graxo da composição; e (ii) um segundo ácido graxo poli-insaturado em uma quantidade de aproximadamente 1% em peso do teor total de ácido graxo da composição; em que o segundo ácido graxo poli-insaturado é um C:20-24 ácido graxo poli-insaturado ômega-3 que contém pelo menos 4 insaturações; e em que o ácido α-linoleico e o segundo ácido graxo poli-insaturado são fornecidos independentemente na forma de um ácido graxo, um sal de ácido graxo, um éster de ácido graxo ou um sal de éster de ácido graxo.

[0011] As ditas composições de lipídio são denominadas no presente documento de "composições da invenção".

[0012] A presente invenção se refere a composições de lipídio que contêm, simultaneamente, níveis elevados de e ácido α-linolênico (ALA), na

4 / 50 forma de um ácido graxo livre, um sal, um éster ou um sal de um éster. Essas composições podem ser obtidas de fontes sustentáveis, como fontes vegetais. Constatou-se, também, que as mesmas têm um perfil de estabilidade de armazenamento aprimorado que é evidenciado por uma redução na degradação por oxidação durante o armazenamento. O ALA, em particular, é reconhecido como um composto importante para a saúde humana e animal. Essas composições podem ser utilizadas em alimentos, produtos nutracêuticos, cosméticos e outras composições químicas, e podem ser úteis como intermediários e ingredientes farmacêuticos ativos. As composições que contêm ALA da invenção também são úteis para fazer óleos de secagem rápida e, portanto, são úteis como componentes de tintas e vernizes.

[0013] Os níveis de ácido graxo nas composições da invenção podem ser determinados com o uso de métodos de rotina conhecidos pelas pessoas versadas na técnica. Tais métodos incluem cromatografia gasosa (GC) em combinação com padrões de referência, por exemplo, de acordo com os métodos revelados nos exemplos. Em um método particular, os ácidos graxos são convertidos em ésteres metílicos ou etílicos antes da análise de GC. Essas técnicas são descritas nos Exemplos. A posição do pico no cromatograma pode ser usada para identificar cada ácido graxo específico e a área sob cada pico integrada para determinar a quantidade. Conforme usado no presente documento, salvo quando indicado de outro modo, a porcentagem de ácido graxo particular em uma amostra é determinada calculando-se a área sob a curva no cromatograma para esse ácido graxo como uma porcentagem da área total para ácidos graxos no cromatograma. Isso corresponde essencialmente a uma porcentagem em peso (p/p). A identidade dos ácidos graxos pode ser confirmada por GC-MS.

[0014] As referências ao ácido docosa-hexaenoico e “ALA" nesse contexto são, salvo quando indicado de outro modo, referências à forma ω3 do ácido docosa-hexaenoico, que é o ácido docosa-hexaenoico que tem uma

5 / 50 dessaturação (ligação dupla de carbono-carbono) na terceira ligação de carbono-carbono da extremidade metila do ácido graxo. Formas abreviadas que podem ser usadas de maneira intercambiável incluem “18:3n-3” e “18:3ω-3”. De modo semelhante, as referências ao ácido γ-linolênico são, salvo quando indicado de outro modo, referências à forma ω6 do ácido linolênico, que é o ácido linolênico que tem uma dessaturação (dupla ligação de carbono-carbono) na sexta ligação de carbono-carbono da extremidade metila do ácido graxo.

[0015] De modo mais geral, os termos "ácido graxo poli-insaturado" e "PUFA" se referem a um ácido graxo que compreende pelo menos duas ligações duplas de carbono-carbono. Os termos "ácido graxo poli-insaturado de cadeia longa" e "LC-PUFA" se referem a um ácido graxo que compreende pelo menos 20 átomos de carbono e pelo menos duas ligações duplas de carbono-carbono em sua cadeia de carbono e, portanto, incluem VLC-PUFAs. Conforme usado no presente documento, os termos "ácido graxo poli- insaturado de cadeia muito longa" e "VLC-PUFA" se referem a um ácido graxo que compreende pelo menos 22 átomos de carbono e pelo menos três ligações duplas de carbono-carbono em sua cadeia de carbono. Normalmente, o número de átomos de carbono na cadeia de carbono do ácido graxo se refere a uma cadeia de carbono não ramificada. Caso a cadeia de carbono seja ramificada, o número de átomos de carbono exclui aqueles nos grupos laterais.

[0016] Os ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa podem ser ácidos graxos ω3 ("ômega-3"), ou seja, ácidos graxos que têm uma dessaturação (ligação dupla de carbono-carbono) na terceira ligação de carbono-carbono da extremidade metila do ácido graxo. Os mesmos podem ser, alternativamente, ácidos graxos ω6 ("ômega-6"), ou seja, ácidos graxos com uma dessaturação (ligação dupla de carbono-carbono) na sexta ligação de carbono-carbono da extremidade metila do ácido graxo. Embora outros

6 / 50 padrões de insaturação possam estar presentes, as formas ω6 e particularmente ω3 são particularmente relevantes no contexto da presente invenção.

[0017] As composições da invenção compreendem pelo menos dois ácidos graxos poli-insaturados diferentes, incluindo ALA e pelo menos um outro ácido graxo poli-insaturado. Em uma modalidade, ALA é o ácido graxo mais abundante presente na composição (em peso em relação ao teor de ácido graxo total da composição). O segundo ácido graxo mais abundante na composição (em peso em relação ao teor de ácido graxo total da composição) é denominado no presente documento de "segundo ácido graxo poli- insaturado" ou "segundo PUFA".

[0018] O ALA e o segundo PUFA podem estar presentes, cada um, independentemente na forma de um ácido graxo, um sal de ácido graxo, um éster de ácido graxo ou um sal de um éster de ácido graxo.

[0019] Conforme usado no presente documento, o termo "ácido graxo" se refere a um ácido carboxílico (ou ácido orgânico), muitas vezes com uma longa cauda alifática, saturada ou insaturada. Normalmente, os ácidos graxos têm uma cadeia ligada de carbono-carbono de pelo menos 8 átomos de carbono de comprimento, mais particularmente pelo menos 12 carbonos de comprimento. A maioria dos ácidos graxos de ocorrência natural tem um número par de átomos de carbono devido ao fato de que a biossíntese do mesmo envolve acetato, que tem dois átomos de carbono. Os ácidos graxos podem estar em um estado livre (não esterificado), denominado no presente documento de um "ácido graxo livre", ou em uma forma esterificada, como um éster alquílico, parte de um triglicerídeo, parte de um diacilglicerídeo, parte de um monoacilglicerídeo, acil-CoA (tio-éster) ligado ou outra forma ligada, ou uma mistura dos mesmos. O ácido graxo pode ser esterificado como um fosfolipídio, tal como as formas de fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilglicerol, fosfatidilinositol ou

7 / 50 difosfatidilglicerol, embora seja esterificado, de preferência, como um éster alquílico, especialmente como um éster etílico. A fim de evitar dúvidas, salvo indicado de outro modo, o termo "ácido graxo" abrange ácidos graxos livres, ésteres de ácidos graxos e sais de qualquer um dos mesmos. Salvo quando indicado de outro modo, os valores quantitativos associados a ácidos graxos específicos se referem à quantidade (calculada com base no peso) desse ácido graxo que está presente, independentemente da forma (por exemplo, ácido livre ou éster) em que está presente.

[0020] Cada ácido graxo na composição também pode ser fornecido independentemente na forma de um sal de um ácido graxo, por exemplo, um sal alcalino ou sal alcalinoterroso. Os sais particulares que podem ser mencionados incluem sais de lítio e sais de cálcio. Esses sais têm potenciais benefícios medicinais adicionais ou oferecem melhorias na capacidade de processamento. De modo semelhante, um éster de ácido graxo pode ser fornecido na forma de um sal de um éster de ácido graxo. Qualquer combinação de ácidos graxos na forma de ácidos graxos livres, sais, ésteres ou sais de ésteres pode estar presente nas composições da invenção. Isso quer dizer que, a título de exemplo, o ALA pode estar presente como um éster etílico, e o segundo PUFA pode estar presente predominantemente como um ácido graxo livre.

[0021] Os "ácidos graxos saturados" não contêm ligações duplas ou outros grupos funcionais ao longo da cadeia. O termo "saturado" se refere a hidrogênio, em que todos os carbonos (com exceção do grupo ácido carboxílico [-COOH]) contêm a maior quantidade de hidrogênios possível. Em outras palavras, a extremidade ômega (ω) está ligada a três átomos de hidrogênio (CH3-) e cada carbono na cadeia está ligado a dois átomos de hidrogênio (-CH2-). O termo "ácido graxo total" inclui ácidos graxos em todas as formas, sejam saturados ou insaturados, ácidos livres, ésteres e/ou sais.

[0022] O termo "aproximadamente", conforme usado no presente

8 / 50 documento quando se refere a um valor mensurável, tal como uma quantidade de um composto, peso, tempo, temperatura e semelhantes, se refere a variações de 20%, 10%, 5%, 1%, 0,5% ou até mesmo 0,1% da quantidade especificada.

[0023] As composições da invenção que podem ser mencionadas incluem aquelas que contêm uma alta concentração de ácidos graxos ômega- 3, dentre os quais muitos são denominados “gorduras essenciais” que são consideradas particularmente importantes para a saúde humana. Os ácidos graxos ômega-3 podem ter efeitos benéficos sobre os níveis de colesterol HDL, podem sustentar o desenvolvimento do cérebro em jovens e comprovadamente beneficiar a saúde mental. Esses ácidos graxos são geralmente considerados precursores de eicosanoides com propriedades anti- inflamatórias. Composições particulares da invenção que podem ser mencionadas incluem aquelas em que a quantidade total de ácidos graxos poli-insaturados ômega-3 na composição de lipídio é pelo menos aproximadamente 90%, tal como pelo menos aproximadamente 95%, em peso do teor total de ácido graxo da composição.

[0024] Os ácidos graxos ômega-6 também são considerados importantes para a saúde humana. Em particular, determinados ácidos graxos ômega-6 são “gorduras essenciais” necessárias para uma boa saúde, porém o corpo é incapaz de sintetizar os mesmos. No entanto, foi demonstrado que as gorduras ômega-6 são precursoras dos eicosanoides com mais propriedades pró-inflamatórias, e, portanto, quando muitos desses eicosanoides são produzidos, podem aumentar a inflamação e as doenças inflamatórias. Dito isso, pode ser desejável minimizar a quantidade de tais ácidos graxos nas composições de lipídio. De modo geral, é aceito que razão entre ácidos graxos ômega-6 e ômega-3 na dieta deve ser de 4:1 ou menos. No entanto, a dieta ocidental normal geralmente contém uma proporção maior de ácidos graxos ômega-6. As composições de lipídio da presente invenção contêm

9 / 50 vantajosamente quantidades relativamente baixas de ácidos graxos ômega-6 ao mesmo que contêm quantidades relativamente elevadas dos ácidos graxos ômega-3 mais benéficos. Em uma modalidade, a quantidade total de ácidos graxos poli-insaturados ômega-6 na composição é, no máximo, aproximadamente 5% (por exemplo, no máximo, 3%) em peso do teor total de ácido graxo da composição. Em outra modalidade, a razão entre o peso total de ácidos graxos poli-insaturados ômega-3 e o peso total de ácidos graxos poli-insaturados ômega-6 na composição é de pelo menos aproximadamente 10:1. Em uma outra modalidade, a razão do peso total entre ácidos graxos poli-insaturados ômega-3 e o peso total de ácidos graxos poli-insaturados ômega-6 na composição é de pelo menos aproximadamente 20:1.

[0025] As composições de lipídio que contêm ácidos graxos poli- insaturados de cadeia longa são normalmente obtidas de fontes marinhas (por exemplo peixes, crustáceos), fontes de algas ou plantas (por exemplo linho ou echium). A matéria orgânica inicial é primeiramente processada para extrair o óleo (geralmente, denominado de óleo “bruto”) contido na mesma. No caso de sementes de plantas, por exemplo, as sementes são trituradas para liberar o óleo que é, em seguida, separado do sólido por filtração e/ou decantação. Os óleos brutos contêm geralmente níveis de ácidos graxos poli-insaturados que são muito baixos para serem úteis (por exemplo como produtos nutricionais), portanto, o enriquecimento é necessário. Quando o óleo bruto está faltando em um ou mais componentes essenciais, é frequentemente comum mesclar óleos brutos ou enriquecidos de fontes múltiplas (por exemplo de peixes e algas) para obter a composição desejada. Alternativamente, o enriquecimento pode ser alcançado pelo processamento do óleo bruto para remover componentes indesejados (por exemplo, componentes que afetam deleteriamente a cor, odor ou estabilidade do produto, ou ácidos graxos indesejados) ao mesmo tempo que maximiza os níveis dos componentes de ácido graxo desejados.

10 / 50

[0026] As composições da presente invenção são vantajosamente obtidas de uma única fonte. O uso de uma única fonte facilita o processamento eficiente e econômico do óleo bruto e da fabricação das composições de lipídio da invenção. A "obtido de uma única fonte" (ou "obtido de uma única fonte”) significa que a composição de lipídio pode ser obtida de um ou mais organismos de uma única classe taxonômica. Em uma modalidade particular, a composição de lipídio não é derivada de múltiplos organismos em diferentes classes taxonômicas. Por exemplo, as composições de lipídio podem não ser mesclas de óleos obtidos a partir de uma combinação de peixes e algas ou uma combinação de peixes e plantas. Em vez disso, as composições de lipídio da invenção (ou os óleos "brutos" a partir dos quais as composições podem ser obtidas por meio de técnicas de enriquecimento, tais como transesterificação e destilação) são obtidas de uma única população de organismos, por exemplo, uma única fonte de matéria de planta ou de uma vegetação. Para evitar dúvidas, a frase "obtido de uma única fonte" não exclui o uso de vários organismos da mesma espécie como fonte da composição de lipídio ou óleo "bruto", ou seja, o uso de vários peixes, estoques de algas, plantas ou sementes de plantas que são da mesma espécie. Os ditos organismos múltiplos são, de preferência, todos da mesma espécie, ou da mesma linha de reprodução, ou da mesma variedade de planta, ou do mesmo estoque ou lote de produção.

[0027] Nas composições de lipídio específicas da invenção, o ALA está presente em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 87%, tal como pelo menos aproximadamente 88%, em peso do teor total de ácido graxo da composição. Outras composições particulares que podem ser mencionadas incluem aquelas que contêm ALA em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 90% em peso do teor total de ácidos graxos da composição. Em outras modalidades adicionais da invenção, o ALA está presente em uma quantidade de até aproximadamente 96% (tal como até

11 / 50 aproximadamente 95%) em peso do teor total de ácidos graxos da composição.

[0028] As composições da invenção contêm um segundo ácido graxo poli-insaturado em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 1% em peso do teor total de ácido graxo da composição. Em uma modalidade, o dito segundo ácido graxo poli-insaturado está presente em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 1,5% em peso do teor de ácido graxo total da composição. O dito segundo ácido graxo poli-insaturado pode ou não ser o segundo ácido graxo poli-insaturado mais abundante na composição. O segundo PUFA pode ser qualquer PUFA (ou sal, éster ou sal de um éster do mesmo) que é um C: 20-24 ácido graxo poli-insaturado ômega-3 que contêm pelo menos 4 insaturações. Exemplos de tais PUFAs incluem PUFAs ômega- 3 (particularmente, DHA, ETA, EPA e SDA). É particularmente preferido que o segundo PUFA seja DHA (ou um sal, éster ou sal de um éster do mesmo).

[0029] Nas composições de lipídio específicas da invenção, o segundo PUFA (por exemplo, DHA) está presente em uma quantidade de aproximadamente 1% a aproximadamente 5% em peso do teor total de ácido graxo da composição. Outras composições particulares que podem ser mencionadas incluem aquelas que contêm o segundo PUFA (por exemplo, DHA) em uma quantidade de aproximadamente 1% a aproximadamente 4% em peso do teor total de ácido graxo da composição.

[0030] As composições da invenção também podem conter outros ácidos graxos ômega-3 (além do ALA e do segundo PUFA), tais como ácido γ-linolênico (GLA; “18:3n-6”), ácido eicosatetraenoico (ETA; “20:4n-3"), EPA e/ou um ou mais outros isômeros de ácido linolênico (ou seja, um ou mais outros C18:3 ácidos graxos nos quais as localizações das insaturações na cadeia de carbono não correspondem às do ALA e do GLA). Em uma modalidade, as composições da invenção contêm, também, pelo menos um C10 ácido graxo poli-insaturado (ou um sal, éster ou sal de um éster do

12 / 50 mesmo), tal como LA ou, particularmente, GLA. O dito C18 PUFA pode estar presente em uma quantidade de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 4% em peso do teor total de ácido graxo da composição. Em outra modalidade, as composições da invenção contêm adicionalmente GLA em uma quantidade de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 4% (tal como de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 3%) em peso do teor de ácido graxo total da composição. Em ainda outra modalidade, as composições contêm EPA em uma quantidade de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 3% (tal como de aproximadamente 0,3% a aproximadamente 2%) em peso do teor de ácido graxo total da composição. Em ainda outra modalidade, as composições contêm ETA em uma quantidade de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 0,5% (tal como de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 0,3%) em peso do teor de ácido graxo total da composição.

[0031] Uma composição de lipídio à base de vegetais específica da invenção que pode ser mencionada é aquela que compreende: (i) ALA em uma quantidade de pelo menos de aproximadamente 85% em peso do teor total de ácido graxo da composição; (ii) um segundo ácido graxo poli-insaturado em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 1% em peso do teor de ácido graxo total da composição; e (iii) GLA em uma quantidade de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 4% em peso do teor total de ácido graxo da composição; em que o segundo ácido graxo poli-insaturado é um C:20-24 ácido graxo poli-insaturado ômega-3 que contém pelo menos 4 insaturações (tal como DHA ou EPA); e em que o ALA, o segundo ácido graxo poli- insaturado e o GLA são fornecidos independentemente na forma de um ácido graxo, um sal de ácido graxo, um éster de ácido graxo ou um sal de um éster

13 / 50 de ácido graxo.

[0032] As composições da invenção também podem conter DHA e EPA. Por exemplo, a quantidade total combinada de DHA e EPA presente pode ser pelo menos aproximadamente 1% (tal como pelo menos aproximadamente 2%) em peso do teor total de ácido graxo da composição.

[0033] As composições da invenção contêm até aproximadamente 0,5% de ácido palmítico (16:0) em peso do teor total de ácidos graxos da composição. Em modalidades particulares, as composições contêm até aproximadamente 0,1%, mais particularmente até aproximadamente 0,05%, ácido palmítico em peso do teor de ácido graxo total da composição. De modo semelhante, as composições da invenção são essencialmente livres de ácidos graxos saturados de comprimento de cadeia mais curto, tais como ácido cáprico (10:0), ácido láurico (12:0) e ácido mirístico (14:0). Isso significa que as composições contêm tais ácidos graxos de cadeia (e ésteres, sais e sais de ésteres dos mesmos) em uma quantidade de, no máximo, aproximadamente 0,1% (por exemplo, no máximo 0,01%) em peso do total de ácidos graxos da composição.

[0034] Preferências e opções para um determinado aspecto, recurso ou parâmetro da invenção devem, salvo quando o contexto indicar de outro modo, ser consideradas como revelados em combinação com qualquer e todas as preferências e opções para todos os outros aspectos, recursos e parâmetros da invenção. Por exemplo, as quantidades particulares do ALA, do segundo PUFA e do GLA (caso esteja presente) indicadas nas passagens anteriores são reveladas em todas as combinações.

[0035] Uma composição de lipídio particular que pode, portanto, ser mencionada é aquela que compreende: (i) ALA em uma quantidade de pelo menos de aproximadamente 85% em peso do teor total de ácido graxo da composição; (ii) DHA em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 1%

14 / 50 em peso do teor total de ácido graxo da composição; e (iii) GLA em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 1% em peso do teor total de ácido graxo da composição; em que cada um dentre o ALA, DHA e GLA é fornecido independentemente na forma de um ácido graxo, um sal de ácido graxo, um éster de ácido graxo ou um sal de a éster de ácido graxo.

[0036] Nas composições da invenção, o ALA e o segundo PUFA podem estar independentemente presentes na forma de um ácido graxo, um sal de ácido graxo, um éster de ácido graxo ou um sal de um éster de ácido graxo. Em uma modalidade específica, esses componentes tomam, cada um, a mesma forma, por exemplo, eles podem estar todos na forma de um ácido graxo, todos na forma de um sal de ácido graxo, todos na forma de um éster de ácido graxo ou todos na forma de um sal de um éster de ácido graxo. Quando os componentes estão na forma de um sal de ácido graxo, éster ou sal de um éster, então, os componentes podem estar na forma do mesmo sal, éster ou sal do éster. Por exemplo, o ALA e o segundo PUFA podem ser fornecidos na forma de um éster etílico do ácido graxo.

[0037] Em uma modalidade particular, o ALA e o segundo PUFA são fornecidos independentemente na forma de um sal de a éster de ácido graxo ou, mais particularmente, na forma de um éster de ácido graxo. As formas de ésteres de ácido graxo adequadas são conhecidas pelas pessoas versadas na técnica. Por exemplo, as formas de éster de ácido graxo que são nutricionalmente aceitáveis e/ou farmaceuticamente aceitáveis incluem ésteres etílicos, ésteres metílicos, fosfolipídios, monoglicerídeos, diglicerídeos e triglicerídeos de ácidos graxos. Podem ser necessárias diferentes formas de éster, dependendo do uso pretendido da composição de lipídio. Por exemplo, os triglicerídeos são particularmente adequados para uso em alimentos destinados ao consumo humano, especialmente consumo infantil, devido, em parte, ao sabor e à estabilidade dessas formas de éster ao tratamento térmico

15 / 50 (que pode ser necessário para tais produtos alimentares). Os ésteres etílicos são particularmente adequados para uso em suplementos dietéticos, uma vez que essas formas de éster podem ser fabricadas com eficiência e facilidade, e a conversão para em forma de triglicerídeo não é necessária. Disto isso, em uma modalidade adicionalmente o ALA e o segundo PUFA são fornecidos, cada um independentemente, na forma de um ácido graxo éster etílico ou como parte de um triglicerídeo.

[0038] Os triglicerídeos são ésteres derivados do glicerol e três ácidos graxos. Uma vez que a presente invenção se refere a mesclas de ácidos graxos, os componentes de ácidos graxos em tais triglicerídeos podem ser misturados nas razões correspondentes. Isto é, embora uma mistura de diferentes moléculas de triglicerídeos possa estar presente em uma composição, o perfil geral de ácidos graxos na composição é conforme definido nas reivindicações.

[0039] Os componentes de ácidos graxos podem estar presentes alternativamente na forma de ácidos graxos "livres", ou seja, na forma - COOH do ácido graxo. No entanto, em composições específicas da invenção, as composições contêm níveis relativamente baixos de ácidos graxos nessa forma devido ao fato de que estão associados a um sabor desagradável (muitas vezes "ensaboado") e são menos estáveis que os ácidos graxos que estão em uma forma esterificada. Os ácidos graxos livres são tipicamente removidos de óleos e composições de lipídio por meio de refinação alcalina ou física, por exemplo, de acordo com processos discutidos ao longo do presente documento. Dito isso, em uma modalidade, o teor total de ácido graxo livre nas composições de lipídio é inferior a 5% (tal como inferior a aproximadamente 2%, particularmente, inferior a aproximadamente 1%) em peso do teor total de ácidos graxos da composição.

[0040] Os ácidos graxos nas composições de lipídio da invenção são tipicamente ácidos graxos de cadeia tipicamente linear (isto é, não

16 / 50 ramificada). As composições da invenção que podem ser mencionadas incluem aquelas que contêm níveis muito baixos de ácidos graxos de cadeia ramificada e ésteres dos mesmos de modo que a composição seja essencialmente isenta de ácidos graxos de cadeia ramificada e ésteres de ácidos graxos de cadeia ramificada. Os termos "níveis baixos” significa que a composição contém ácidos graxos de cadeia ramificada e ésteres de ácidos graxos em uma quantidade de, no máximo, aproximadamente 0,1% em peso do total de ácidos graxos da composição.

[0041] As composições de lipídio da invenção também podem conter outros componentes (por exemplo, que não sejam ácidos graxos) que se originam do material de origem e que não são totalmente removidos durante o processo de extração e enriquecimento. As identidades precisas desses outros componentes variam muito, dependendo do material de origem. Exemplos de outros componentes incluem fitoesteróis (ou seja, esteróis vegetais e estanóis vegetais) presentes como um esterol livre ou como um éster de esterol (como β-sitosterol, β-sitostanol, Δ5-avenasterol, campesterol, Δ5-estigmasterol, Δ7-estigmasterol e Δ7-avenasterol, colesterol, brassicasterol, calinasterol, campesterol, campestanol e eburicol). Outros exemplos incluem antioxidantes, como tocoferóis e tocotrienóis. Dito isso, as composições de lipídio particulares da invenção que podem ser mencionadas incluem aquelas que contêm quantidades detectáveis de um ou mais fitoesteróis (tais como β- sitosterol). Esses esteróis podem estar presentes em pelo menos aproximadamente 0,01%, porém normalmente não mais do que aproximadamente 1%, em peso da composição de lipídio.

[0042] As composições da presente invenção são vantajosamente obtidas a partir de plantas (fontes "vegetais"). O termo “à base de vegetais” significa que pelo menos 70% em peso dos lipídios que estão presentes nas composições da invenção são obtidos de fontes vegetais. As fontes vegetais incluem plantas, particularmente culturas, tais como cereais. Em pelo menos

17 / 50 uma modalidade, os lipídios são obtidos a partir de uma colheita de óleo de semente, como Brassica, por exemplo, Brassica napus ou Brassica juncea. No entanto, a fim de evitar dúvidas, não é essencial que as composições sejam obtidas exclusivamente de tais fontes, isto é, uma proporção (por exemplo, no máximo 30% em peso) dos lipídios nas composições da invenção pode ser obtida de outras fontes, incluindo óleos marinhos (por exemplo, peixes ou crustáceos). Em um exemplo, pelo menos 80%, tal como pelo menos 90%, em peso dos lipídios que estão presentes são obtidos de fontes vegetais. Em composições particulares da invenção, essencialmente todos (isto é, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou aproximadamente 100%) os lipídios são obtidos de fontes vegetais. Em outra modalidade, as composições da invenção não contêm essencialmente ácidos graxos de origem de linhaça (por exemplo, menos de 1% dos ácidos graxos na composição são derivados de linhaça ou óleo de linhaça).

[0043] Em uma modalidade, as composições da invenção (e os alimentos e composições farmacêuticas definidas a seguir) não são de origem animal (por exemplo, animal marinho). Ou seja, em tais modalidades, as composições de lipídio não contêm quaisquer componentes de origem animal, tais como peixes e crustáceos. As composições de lipídio nas quais nenhum componente é obtido de um animal são consideradas vantajosas em termos de teor de lipídio e um perfil de estabilidade que pode ser obtido seguindo procedimentos padrão de refinamento e/ou enriquecimento.

[0044] O uso de plantas como fonte de lipídios ou ácidos graxos oferece uma série de vantagens. Por exemplo, as fontes marinhas de óleos são conhecidas por conter níveis relativamente altos de contaminantes (como mercúrio, PCBs e alérgenos de peixes (por exemplo, parvalbuminas)) que não são encontrados em materiais vegetais. A sobrepesca histórica também esgotou os estoques de peixes e crustáceos (por exemplo, krill) de tal forma que os mesmos não são mais sustentáveis. A presente invenção, portanto,

18 / 50 oferece uma composição de óleo de ácido graxo poli-insaturado de origem sustentável contendo níveis relativamente baixos de contaminantes indesejados.

[0045] Em uma modalidade particular, a composição da invenção é derivada de uma planta. As plantas das quais os óleos são obtidos são tipicamente culturas oleaginosas, como copra, caroço de algodão, linho, palmiste, amendoim, colza, semente de soja e girassol. As composições obtidas exclusivamente de plantas, portanto, podem ser denominadas de óleos "vegetais" ou "composições de lipídios vegetais". As plantas adequadas a partir das quais as composições de lipídio da invenção podem ser obtidas são conhecidas pelas versadas na técnica e incluem Brassica sp., Gossypium hirsutum, Linum usitatissimum, Helianthus sp., Carthamus tinctorius, Glycine max, Zea mays, Arabidopsis thaliana, Sorghum bicolor, Sorghum vulgare, Avena sativa, Trifolium sp., Elaesis guineenis, Nicotiana benthamiana, Hordeum vulgare, Lupinus angustifolius, Oryza sativa, Oryza glaberrima, Camelina sativa ou Crambe abyssinica. Uma fonte vegetal particular que pode ser mencionada nesse sentido é a Brassica sp.

[0046] Fontes adequadas (incluindo fontes marinhas, de algas e vegetais) podem ser de ocorrência natural ou podem ser geneticamente modificadas para aumentar sua capacidade de produzir ácidos graxos poli- insaturados de cadeia longa. Exemplos de fontes vegetais que foram geneticamente modificadas com essa finalidade, isto é, que se originam de células vegetais recombinantes, são conhecidos pelas pessoas versadas na técnica e são revelados nos pedidos de patente internacional n° PCT/AU2013/000639 (publicado como WO 2013/185184), PCT/AU2014/050433 (publicado como WO 2015/089587) e PCT/AU2015/050340 (publicado como WO 2015/196250). A canola geneticamente modificada é descrita no documento n° WO 2017/218969 e no documento n° WO 2017/219006. As revelações em todas as publicações

19 / 50 mencionadas no presente documento são incorporadas a título de referência em sua totalidade.

[0047] As composições de lipídio da invenção podem ser obtidas diretamente de uma fonte de ocorrência natural (por exemplo, um animal, algas e/ou uma planta). No entanto, normalmente é necessário processar os óleos obtidos de fontes de ocorrências naturais a fim de enriquecer os mesmos. Os processos de enriquecimento adequados são exemplificados nos Exemplos.

[0048] Fontes adequadas de composições de lipídio da invenção, ou óleos "brutos" que podem ser mesclados ou enriquecidos para produzir essas composições, incluem espécies marinhas, algas e plantas. Os processos para a obtenção de óleos de fontes marinhas são bem conhecidos na técnica.

[0049] As fontes vegetais (tais como fontes de sementes oleaginosas) são particularmente adequadas devido aos baixos níveis de determinados contaminantes e sustentabilidade superior, conforme discutido acima. Plantas tais como Brassica sp. (por exemplo canola) produzem sementes que podem ser processadas para obter óleo. EXTRAÇÃO DE ÓLEOS/LIPÍDIOS

[0050] As técnicas que são praticadas rotineiramente na técnica podem ser usadas para extrair, processar e analisar óleos produzidos por plantas e sementes. Normalmente, as sementes das plantas são cozidas, prensadas e o óleo extraído para produzir óleo bruto. Esse óleo pode, por sua vez, ser degomado, refinado, branqueado e/ou desodorizado. Verificou-se que uma combinação de degomagem, refinação, branqueamento e desodorização é particularmente eficaz para preparar misturas de lipídios enriquecidas com ALA. Disto isso, em uma modalidade, a composição de lipídio é obtida a partir de um óleo de semente que foi degomado, refinado, branqueado e/ou desodorizado. No entanto, não é necessário que os óleos sejam processados dessa forma, e a purificação e o enriquecimento adequados podem ser obtidos

20 / 50 sem esses métodos. Dito isso, em uma modalidade, a composição de lipídio é obtida de um óleo de semente que não foi degomado, refinado, branqueado ou desodorizado antes de enriquecimento.

[0051] De modo geral, as técnicas para triturar sementes são conhecidas na técnica. Por exemplo, as sementes oleaginosas podem ser temperadas aspergindo-se as mesmas com água para aumentar o teor de umidade para, por exemplo, 8,5%, e escamadas com o uso de usando um cilindro liso com uma configuração de espaço de 0,23 mm a 0,27 mm. Dependendo do tipo de semente, a água não pode ser adicionada antes do esmagamento. A extração também pode ser alcançada com o uso de um processo de extrusão. O processo de extrusão pode ou não ser usado no lugar da escamação e, às vezes, é usado como um processo complementar antes ou depois da prensagem por parafuso.

[0052] Em uma modalidade, a maior parte do óleo de semente é liberada por esmagamento com o uso de uma prensa de parafuso. Em seguida, o material sólido expelido da prensa de parafuso é extraído com um solvente, por exemplo, hexano, com o uso de uma coluna rastreada por calor, após isso, o solvente é removido do óleo extraído. Alternativamente, o óleo bruto produzido pela operação de prensagem pode passar por um tanque de decantação com um topo de drenagem de fio ranhurado para remover os sólidos que são expressos com o óleo durante a operação de prensagem. O óleo clarificado pode ser passado por um filtro de placa e estrutura para remover quaisquer partículas sólidas finas restantes. Caso desejado, o óleo recuperado do processo de extração pode ser combinado com o óleo clarificado para produzir um óleo bruto mesclado. Quando o solvente é removido do petróleo bruto, as porções prensadas e extraídas são combinadas e submetidas a procedimentos normais de processamento de óleo.

REFINAMENTO E PURIFICAÇÃO

[0053] Conforme usado no presente documento, o termo "purificado"

21 / 50 quando usado em combinação com lipídio ou óleo da invenção normalmente significa que o lipídio ou óleo extraído foi submetido a uma ou mais etapas de processamento para aumentar a pureza do componente lipídio/óleo. Por exemplo, as etapas de purificação podem compreender um ou mais dentre: degomagem, desodorização, descoloração ou secagem do óleo extraído. No entanto, conforme usado no presente documento, o termo "purificado" não inclui um processo de transesterificação ou outro processo que altera a composição de ácido graxo do lipídio ou óleo da invenção de modo a aumentar o teor de ALA como uma porcentagem do teor de ácido graxo total. Em outras palavras, a composição de ácido graxo do lipídio ou óleo purificado é essencialmente igual à do lipídio ou óleo não purificado.

[0054] Os óleos vegetais podem ser refinados (purificados) quando extraídos da fonte vegetal, com o uso de um ou mais dentre os processos a seguir e, particularmente, com o uso de uma combinação de degomagem, refinação alcalina, branqueamento e desodorização. Os métodos adequados são conhecidos pelas pessoas versadas na técnica (por exemplo, aqueles revelados no documento nº WO 2013/185184).

[0055] A degomagem é uma etapa inicial no refinamento de óleos e seu objetivo principal é a remoção da maioria dos fosfolipídios do óleo. Adição de aproximadamente 2% de água que contém tipicamente ácido fosfórico, de 70 a 80 °C para o óleo bruto resulta na separação da maioria dos fosfolipídios acompanhados por metais vestigiais e pigmentos. O material insolúvel removido é principalmente uma mistura de fosfolipídios e triacilgliceróis. A degomagem pode ser realizada pela adição de ácido fosfórico concentrado ao óleo de semente em bruto para converter fosfatídeos não hidratáveis em uma forma hidratável e para quelar metais menores que estão presentes. A goma é separada do óleo de semente por centrifugação.

[0056] O refinamento de alcalino é um dos processos de refinamento para o tratamento do petróleo bruto, às vezes também denominado de

22 / 50 neutralização. Normalmente, isso ocorre após a degomagem e antes do branqueamento. Após a degomagem, o óleo de semente pode ser tratado pela por meio da adição de uma quantidade suficiente de uma solução alcalina para ajustar a dose de todos os ácidos graxos livres e ácido fosfórico e por meio da remoção dos sabões então formados. Os materiais alcalinos adequados incluem hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, carbonato de sódio, hidróxido de lítio, hidróxido de cálcio, carbonato de cálcio e hidróxido de amônio. O refinamento de alcalino é normalmente realizado à temperatura ambiente e remove a fração de ácido graxo livre. O sabão é removido por meio de centrifugação ou por meio extração em um solvente para o sabão e o óleo neutralizado é lavado com água. Caso necessário, qualquer excesso de alcalino no óleo pode ser neutralizado com um ácido adequado, tal como ácido clorídrico ou ácido sulfúrico.

[0057] O branqueamento é um processo de refinamento no qual os óleos são aquecidos de 90 a 120 °C durante 10 a 30 minutos na presença de uma terra branqueadora (0,2 a 2,0%) e na ausência de oxigênio, operando-se com nitrogênio ou vapor ou em vácuo. O branqueamento é projetado para remover pigmentos indesejados (carotenoides, clorofila etc.), e o processo também remove produtos de oxidação, metais vestigiais, compostos de enxofre e traços de sabão.

[0058] A desodorização é um tratamento de óleos e gorduras a uma alta temperatura (por exemplo, aproximadamente 180 °C) e baixa pressão (0,1 a 1 mm Hg). Isso é tipicamente alcançado pela introdução de vapor no óleo de semente a uma taxa de aproximadamente 0,1 ml/minuto/100 ml de óleo de óleo. Após aproximadamente 30 minutos de pulverização, o óleo de semente é deixado esfriar sob vácuo. Esse tratamento melhora a cor do óleo de semente e remove a maioria das substâncias voláteis ou compostos odoríferos, incluindo quaisquer ácidos graxos livres remanescentes, monoacilgliceróis e produtos de oxidação.

23 / 50

[0059] A adaptação a baixas temperaturas é um processo usado algumas vezes na produção comercial de óleos para a separação de óleos e gorduras em frações sólidas (estearina) e líquidas (oleína) por meio de cristalização em temperaturas subambientes. O mesmo foi aplicado originalmente ao óleo de semente de algodão para produzir um produto sem sólidos. É normalmente usado para diminuir o teor de ácidos graxos saturados dos óleos.

TRANSESTERIFICAÇÃO

[0060] Os óleos brutos geralmente contêm os ácidos graxos desejados na forma de triacilgliceróis (TAGs). A transesterificação é um processo que pode ser usado para trocar os ácidos graxos dentro dos TAGs, e entre os mesmos, ou para transferir os ácidos graxos para outro álcool a fim de formar um éster (tal como um éster etílico ou um éster metílico). Em modalidades da invenção, a transesterificação é alcançada com o uso de meios químicos, tipicamente envolvendo um ácido ou base forte como um catalisador. O etóxido de sódio (em etanol) é um exemplo de uma base forte usada para formar ésteres etílicos de ácidos graxos por meio da transesterificação. O processo pode ser realizado sob temperatura ambiente ou sob temperatura elevada (por exemplo, até aproximadamente 80 °C).

[0061] Em outras modalidades da invenção, a transesterificação é alcançada com o uso de uma ou mais enzimas, particularmente lipases que são conhecidas por serem úteis para hidrolisar ligações de éster, por exemplo, em glicerídeos. A enzima pode ser uma lipase que é posição-específica (sn- 1/3-específica ou sn-2-específica) para o ácido graxo no triacilglicerídeo ou que tem uma preferência sobre alguns ácidos graxos ou sobre outros. Enzimas particulares que podem ser mencionadas incluem Lipozyme 435 (disponível na Novozymes A/S). O processo é normalmente realizado à temperatura ambiente. O processo é tipicamente realizado na presença de uma quantidade em excesso do álcool correspondente à forma de éster desejada (por exemplo,

24 / 50 com o uso de etanol para formar ésteres etílicos dos ácidos graxos).

DESTILAÇÃO

[0062] A destilação molecular é um método eficaz para remover quantidades significativas dos componentes mais voláteis, como os ácidos graxos saturados, dos óleos brutos. A destilação é tipicamente realizada sob pressão reduzida, por exemplo, abaixo de aproximadamente 1 mbar. A temperatura e o tempo podem então ser escolhidos para atingir uma divisão de aproximadamente 50:50 entre o destilado e o resíduo após um tempo de destilação de algumas (por exemplo, 1 a 10) horas. As temperaturas de destilação típicas usadas na produção das composições de lipídio da presente invenção estão na região de 120 °C a 180 °C, particularmente, entre 145 °C e 160 °C.

[0063] Múltiplas destilações podem ser realizadas, em que cada destilação é considerada completa quando uma divisão de aproximadamente 50:50 entre o destilado e o resíduo é alcançada. O uso de destilações sucessivas reduz o rendimento geral, no entanto, duas destilações podem produzir resultados ideais.

CROMATOGRAFIA

[0064] A cromatografia é um método eficaz para separar os vários componentes das misturas de PUFA. A mesma pode ser usada para aumentar a concentração de um ou mais PUFAs preferenciais dentro de uma mistura. A separação cromatográfica pode ser alcançada sob uma variedade de condições, porém envolve normalmente o uso de um sistema cromatográfico de leito estacionário ou um sistema de leito móvel simulado.

[0065] Um sistema cromatográfico de leito estacionário se baseia no seguinte conceito: uma mistura cujos componentes devem ser separados é (normalmente junto com um eluente) induzida a percolar através de uma coluna que contém um empacotamento de um material poroso (a fase estacionária) exibindo uma alta permeabilidade para fluidos. A velocidade de

25 / 50 percolação de cada componente da mistura depende das propriedades físicas daquele componente para que os componentes saiam da coluna sucessiva e seletivamente. Desse modo, os componentes tendem a fixar fortemente à fase estacionária e, portanto, serão mais atrasados, ao passo que outros tendem a fixar fracamente e sair da coluna após um curto período.

[0066] Um sistema de leito móvel simulado consiste em uma série de colunas individuais que contêm adsorvente que são conectadas em série e que são operadas deslocando periodicamente a mistura e os pontos de injeção de eluente e também os pontos de coleta de componentes separados no sistema em que o efeito geral é simular a operação de uma única coluna que contém um leito móvel do adsorvente sólido. Assim, um sistema de leito móvel simulado consiste em colunas que, como em um sistema de leito estacionário convencional, contêm leitos estacionários de adsorvente sólido através do qual o eluente é passado, porém em um sistema de leito móvel simulado a operação ocorre de modo que simule um leito móvel contracorrente contínuo.

[0067] As colunas usadas nesses processos contêm normalmente sílica (ou uma sílica modificada) como base para a fase estacionária. A fase móvel (eluente) é tipicamente uma mistura de solvente altamente polar, que, muitas vezes, contém um ou mais solventes próticos, tais como água, metanol, etanol e semelhantes, assim como misturas dos mesmos. A taxa de fluxo do eluente pode ser ajustada pelas pessoas versadas na técnica para otimizar a eficiência do processo de separação. Os métodos de detecção de PUFAs são conhecidos pelas pessoas versadas na técnica e incluem métodos de absorção de UV-vis, assim como métodos de detecção de índice de refração.

[0068] De acordo com um segundo aspecto da invenção, é fornecido, portanto, um processo para produzir uma composição de lipídio da invenção, sendo que o processo compreende fornecer uma de ésteres etílicos de ácido graxo; submeter a dita mistura a um processo de separação cromatográfica. A

26 / 50 presente invenção também se refere a composições de lipídio que podem ser obtidas por tais processos de destilação. As condições de separação cromatográficas adequadas incluem aquelas no presente documento descritas.

[0069] Por exemplo, uma fase móvel particular que pode ser usada na separação cromatográfica é uma mistura de metanol e água (por exemplo, metanol/água a 88%), embora isso possa ser alterado (por exemplo, para aumentar o teor de metanol) durante o processo de separação para aumentar a eficiência. Uma fase estacionária específica que pode ser usada é uma fase estacionária à base de sílica, como uma coluna Deltaprep C18. HPLC analítica, ou qualquer outra técnica adequada conhecida pelas pessoas versadas na técnica, pode ser realizada nas frações obtidas para identificar aquelas que contêm altas concentrações de ALA e, portanto, contêm as composições de lipídio da invenção.

[0070] Em uma modalidade do segundo aspecto da invenção, a mistura de ésteres etílicos de ácidos graxos é obtida por transesterificação de um óleo de lipídio à base de vegetais, por exemplo, de acordo com qualquer um dos processos descritos anteriormente. O óleo de lipídio à base de vegetais pode ser obtido a partir de qualquer uma das plantas, particularmente as sementes oleaginosas, reveladas no presente documento ou conhecidas de outro modo na técnica. Antes da transesterificação e destilação, o refinamento do óleo lipídico à base de vegetais que o uso de degomagem, refinamento alcalino, branqueamento e/ou desodorização pode ser realizado opcionalmente.

OUTROS MÉTODOS DE ENRIQUECIMENTO

[0071] As composições de lipídio da presente invenção são úteis como ingredientes farmacêuticos ativos (APIs) ou como precursores (ou "intermediários") para APIs que podem ser obtidos a partir dos mesmos por meio de enriquecimento adicional. Essas composições são mais enriquecidas ainda nos níveis de PUFAs benéficos, tais como ALA.

27 / 50

[0072] A concentração de ácidos graxos poli-insaturados em um óleo pode ser aumentada por uma variedade de métodos conhecidos na técnica, tal como, por exemplo, cristalização por congelamento, formação de complexos com o uso de ureia, extração de fluido supercrítico e complexação de íons de prata. A formação de complexos com ureia é um método simples e eficiente para reduzir o nível de ácidos graxos saturados e monoinsaturados no óleo. Inicialmente, os TAGs do óleo são divididos nos ácidos graxos constituintes dos mesmos, geralmente na forma de ésteres de ácidos graxos. Esses ácidos graxos livres ou ésteres de ácidos graxos, que geralmente não são alterados na composição de ácidos graxos pelo tratamento, podem ser, então, misturados com uma solução etanólica de ureia para a formação do complexo. Os ácidos graxos saturados e monoinsaturados facilmente complexam com a ureia e cristalizam no resfriamento e podem ser subsequentemente removidos por filtração. A fração não complexada com ureia é, portanto, enriquecida com ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa.

PRODUTOS

[0073] As composições de lipídio da presente invenção são óleos a granel. Ou seja, a composição de lipídio foi separada da matéria-prima (por exemplo, sementes de plantas) da qual parte ou todo o lipídio foi obtido).

[0074] As composições de lipídio da presente invenção podem ser utilizadas como alimentos. Ou seja, as composições da invenção podem ser fornecidas em uma forma oralmente disponível. Para os fins da presente invenção, "alimentos" incluem qualquer alimento ou preparação para consumo humano ou animal que, quando ingerido pelo corpo, serve para nutrir ou formar tecidos ou fornecer energia; e/ou mantém, restaura ou sustenta o estado nutricional adequado ou a função metabólica. Os alimentos incluem composições nutricionais para bebês e/ou crianças pequenas, tais como, por exemplo, fórmulas infantis. No caso de alimentos para animais, os ácidos graxos podem ser fornecidos na forma de triglicerídeos a fim de

28 / 50 minimizar ainda mais quaisquer sabores desagradáveis e maximizar a estabilidade.

[0075] Os alimentos compreendem uma composição de lipídio da invenção opcionalmente em combinação com um carreador adequado. O termo "carreador" é usado em seu sentido mais amplo para abranger qualquer componente que pode ou não ter valor nutricional. Conforme uma pessoa versada na técnica observará, o carreador deve ser adequado para uso (ou usado em uma concentração suficientemente baixa) em um alimento de modo que não tenha efeito deletério sobre um organismo que consome o alimento.

[0076] A composição do alimento pode estar em uma forma sólida ou líquida. Além disso, a composição pode incluir macronutrientes comestíveis, proteínas, carboidratos, vitaminas e/ou minerais em quantidades desejadas para um uso particular, conforme são bem conhecidos na técnica. As quantidades desses ingredientes variarão dependendo da possibilidade de a composição estar destinada para uso em indivíduos normais ou para uso em indivíduos com necessidades especializadas, tais como indivíduos que sofrem de distúrbios metabólicos e semelhantes.

[0077] Exemplos de carreadores adequados com valor nutricional incluem macronutrientes, tais como gorduras comestíveis (por exemplo óleo de coco, óleo de borragem, óleo fúngico, óleo de corrente negra, óleo de soja e mono- e diglicerídeos), carbo-hidratos (por exemplo glicose, lactose comestível e amido hidrolisado) e proteínas (por exemplo proteínas de soja, soro eletrodialisado, leite desnatado eletrodialisado, soro de leite ou os hidrolisados dessas proteínas).

[0078] Vitaminas e minerais que podem ser adicionados ao ingrediente no presente documento revelado incluem, por exemplo, cálcio, fósforo, potássio, sódio, cloreto, magnésio, manganês, ferro, cobre, zinco, selênio, iodo e vitaminas A, E, D, C e o complexo B.

[0079] As composições de lipídio da presente invenção podem ser

29 / 50 utilizadas em composições farmacêuticas. Tais composições farmacêuticas compreendem a composição de lipídio da invenção opcionalmente em combinação com um ou mais excipientes, diluentes ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis, que são conhecidos pela pessoa versada na técnica. Excipientes, diluentes ou carreadores adequados incluem solução salina tamponada com fosfato, água, etanol, polióis, agentes umectantes ou emulsões, tais como uma emulsão de água/óleo. A composição pode estar na forma líquida ou sólida, incluindo uma solução, suspensão, emulsão, óleo ou pó. Por exemplo, a composição pode estar na forma de um comprimido, cápsula, gel encapsulado, líquido ingerível (incluindo um óleo ou solução) ou pó, emulsão ou pomada ou creme tópico. A composição farmacêutica também pode ser fornecida como uma preparação intravenosa.

[0080] As formas particulares adequadas para alimentos e para composições farmacêuticas incluem cápsulas que contêm líquido e géis encapsulados.

[0081] As composições de lipídios da invenção podem ser misturadas com outros lipídios ou misturas de lipídios (particularmente, ésteres de ácidos graxos à base de vegetais e misturas de ésteres de ácidos graxos) antes do uso. As composições de lipídio da invenção podem ser fornecidas em combinação com um ou mais componentes adicionais selecionados a partir do grupo que consiste em um antioxidante (por exemplo, um tocoferol (como alfa-tocoferol ou gama-tocoferol) ou um tocotrienol), um estabilizador e um tensoativo. Tanto alfa-tocoferol quanto gama-tocoferol são componentes de ocorrência natural em vários óleos de sementes de plantas, incluindo óleos de canola.

[0082] Pode também ser desejável incluir agentes isotônicos, tais como açúcares, cloreto de sódio e semelhantes nas composições. Além de tais diluentes inertes, a composição também pode incluir adjuvantes, tais como agentes umectantes, agentes emulsionantes e de suspensão, agentes adoçantes, agentes aromatizantes e agentes perfumantes. As suspensões, além das

30 / 50 composições de lipídio da invenção, podem compreender agentes de suspensão, tais como álcoois isoestearílicos etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, ágar-ágar e tragacanto ou misturas dessas substâncias.

[0083] As formas de dosagem sólidas, tais como comprimidos e cápsulas, podem ser preparadas com o uso de técnicas bem conhecidas na técnica. Por exemplo, os ácidos graxos produzidos de acordo com os métodos revelados no presente documento podem ser comprimidos com bases de comprimidos convencionais, tais como lactose, sacarose e amido de milho em combinação com ligantes, tais como acácia, amido de milho ou gelatina, agentes desintegrantes, tais como amido de batata ou ácido algínico, e um lubrificante como ácido esteárico ou estearato de magnésio. As cápsulas podem ser preparadas incorporando-se esses excipientes em uma cápsula de gelatina juntamente com a composição de lipídio relevante e, opcionalmente, um ou mais antioxidantes.

[0084] As rotas de administração possíveis das composições farmacêuticas da presente invenção incluem, por exemplo, via enteral (por exemplo, oral e retal) e via parenteral. Por exemplo, uma preparação líquida pode ser administrada por via oral ou retal. Além disso, uma mistura homogênea pode ser completamente dispersa em água, misturada por adição sob condições estéreis com diluentes, conservantes, tampões ou propelentes fisiologicamente aceitáveis para formar uma aspersão ou inalante.

[0085] As composições de lipídio da invenção são indicadas como farmacêuticas. De acordo com um outro aspecto da invenção, é fornecida uma composição da invenção, incluindo qualquer uma das composições farmacêuticas descritas acima, para uso como produto farmacêutico.

[0086] As composições de lipídio da invenção podem fornecer uma série de benefícios que são tipicamente associados a ácidos graxos poli- insaturados de cadeia longa. Por exemplo, as composições de lipídio da

31 / 50 invenção e as composições farmacêuticas descritas acima podem ser utilizadas no tratamento ou prevenção de doenças cardiovasculares, proteção contra morte em pacientes com doenças cardiovasculares, redução dos níveis de colesterol sérico geral, redução de BP elevada, aumento na razão HDL:LDL, redução de triglicerídeos ou redução dos níveis de apolipoproteína-B, conforme pode ser determinado com o uso de testes que são bem conhecidos pela pessoa versada na técnica. Consequentemente, métodos de tratamento (ou prevenção) das doenças e condições listadas acima com o uso das composições de lipídio da invenção também são revelados.

[0087] Conforme usado no presente documento, os termos "tratamento", "tratar" e "tratando" se referem à reversão, alívio, inibição do progresso de uma doença ou distúrbio conforme descrito no presente documento, ou retardamento, eliminação ou redução da incidência ou do início de um distúrbio ou doença, conforme descrito no presente documento, em comparação ao que ocorreria na ausência da medida tomada. Conforme usado no presente documento, os termos "prevenir", "prevenção" e "prevenindo" se referem à redução do risco de adquirir ou desenvolver uma determinada afecção ou redução ou inibição da recorrência ou da dita afecção em um indivíduo que não está doente.

[0088] Uma dosagem típica de um ácido graxo particular é de 0,1 mg a 20 g, tomada de uma a cinco vezes por dia (até 100 g por dia) e está particularmente na faixa de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 1, 2, 5, ou 10 g por dia (tomados em uma ou múltiplas doses). Conforme conhecido na técnica, um mínimo de aproximadamente 300 mg/dia de ácido graxo, especialmente LC-PUFA, é desejável. No entanto, será observado que qualquer quantidade de ácido graxo será benéfica para o indivíduo.

[0089] Quando usada como uma composição farmacêutica, a dosagem da composição de lipídio a ser administrada ao paciente pode ser determinada por uma psoa versada na técnica e depende de vários fatores, tais

32 / 50 como peso do paciente, idade do paciente, saúde geral do paciente, histórico do paciente, estado imunológico do paciente etc.

[0090] As composições que contêm ALA da invenção também são úteis para produzir fazer óleos de secagem rápida. Os óleos de secagem rápida são, por sua vez, úteis como componentes de tintas (principalmente, tintas a óleo) e vernizes.

[0091] As composições da invenção são composições prontamente obteníveis que podem ter um perfil de estabilidade aprimorado e que podem conter uma mistura de ácidos graxos em que as proporções relativas de ácidos graxos ômega-3 e ômega-6 são particularmente benéficas para saúde humana. A estabilidade pode ser avaliada com o uso de vários métodos conhecidos pelas pessoas versadas na técnica. Tais métodos incluem o método Rancimat, a avaliação da formação de propanal (particularmente apropriado para ácidos graxos ômega-3), a avaliação da formação de hexanal (particularmente apropriado para ácidos graxos ômega-6), o método de “valor de peróxido” (por exemplo, que usa o método oficial AOCS Cd 8-53) e o método do “valor de p-anisidina” (por exemplo, que usa o método oficial AOCS Cd 18-90). Nos Exemplos é mostrado que as composições da invenção são obtidas a partir de misturas iniciais que não mostram um perfil de estabilidade aprimorado em comparação às mesclas de referência (as mesclas de referência que têm uma composição semelhante em termos dos PUFAs principais, porém que contêm uma quantidade significativa de lipídio de origem animal (peixe)).

[0092] Os compostos da invenção podem ter a vantagem de poderem ser mais eficazes, menos tóxicos, mais duradouros, mais potentes, produzirem menos efeitos secundários, serem mais facilmente absorvidos e/ou de terem uma melhor perfil farmacocinético (por exemplo, maior biodisponibilidade oral e/ou depuração mais baixa) e/ou de terem outras propriedades farmacológicas, físicas ou químicas úteis em comparação aos compostos conhecidos na técnica anterior, seja para uso nas indicações acima indicadas

33 / 50 ou de outro modo.

[0093] A invenção é ilustrada pelos seguintes exemplos nos quais:

[0094] A Figura 1 mostra dados de liberação de propanal para o óleo de canola e óleo de referência (após a transesterificação e destilação), o que demonstra a estabilidade aprimorada do óleo de canola com ALA descrito no presente documento; e

[0095] A Figura 2 mostra os dados de liberação do propanal para o óleo de canola e o óleo de referência (após o refinamento, transesterificação e destilação de RBD), o que demonstra a estabilidade aprimorada do óleo de canola com ALA descrito no presente documento.

EXEMPLOS EXEMPLO 1 – EXTRAÇÃO DE ÓLEO DE CANOLA DE ALA DAS

SEMENTES

[0096] A canola de uma variedade revelada na publicação de patente n° U.S. 2018/0016590 A1 foi cultivada como uma cultura de verão. A semente foi colhida e, em seguida, armazenada à temperatura ambiente antes do esmagamento.

[0097] 272 k g da semente foram esmagados para produzir óleo com ALA com o uso de uma prensa de parafuso Kern Kraft KK80. A temperatura do aquecedor do colar do expelidor foi definida para a temperatura máxima definida no termostato. A temperatura ambiente inicial e a temperatura de sufocamento foram 20 °C e a distância de sufocamento foi fixada em 73,92 mm. A semente foi alimentada com óleo contínuo e coleta de farinha sem parar o expelidor até que toda a semente fosse esmagada.

[0098] A velocidade de rotação da broca, a temperatura da farinha e o óleo expelido foram monitorados durante a prensagem. O tempo de esmagamento foi de 4 horas para 270 kg, que é uma taxa de transferência de 67,5 kg/h. Foi obtido um rendimento de 87,2 kg (32%) de petróleo bruto. Após a filtragem para remover finos, o rendimento foi de 77,2 kg (28%).

34 / 50 EXEMPLO 2 - ÓLEO DE MESCLA DE REFERÊNCIA

[0099] O óleo de peixe puro contém baixos níveis de ácidos graxos com ALA e níveis significativamente mais altos de EPA e DHA. Uma mescla de óleo de referência (denominada no presente documento de "óleo de mescla de referência de triglicerídeo bruto" ou semelhante) foi projetada para ter a composição o mais semelhante possível ao óleo de canola com ALA filtrado obtido no Exemplo 1. Isso foi feito (a) combinando o nível total de DHA com o do óleo de canola DHA e (b) combinando a razão de DHA / (ALA+EPA). Isso foi obtido mesclando-se um óleo de peixe rico em DHA (atum), um óleo rico em ALA (óleo de linhaça) e óleo de canola padrão. O óleo de mescla de referência resultante também tem um teor total de ômega-3 semelhante ao óleo de canola com ALA. EXEMPLO 3 – COMPOSIÇÕES DE ÁCIDO GRAXO DO ÓLEO DE

CANOLA DE ALA BRUTO DE E MESCLA DE REFERÊNCIA

[00100] As composições de ácidos graxos do óleo bruto filtrado e do óleo da mescla de referência foram analisadas. Os resultados são mostrados abaixo. Óleo de canola ALA bruto (% Óleo de referência bruto (% Ácido graxo em peso) em peso) Palmítico C16:0 4,3 9,6 Esteárico C18:0 1,9 3,8 Oleico C18:1n9c 39,4 30,6 Cis-vacênico C18:1n7c 3,6 2,0 Linoleico C18:2n6c 7,8 11,5 GLA C18:3n6 0,1 0,1 ALA C18:3n3 21,9 21,2 Araquídico C20:0 0,7 0,4 SDA C18:4n3 2,2 0,2 Gondoico C20:1n9c 1,4 0,8 Beênico C22:0 0,3 0,2 ETA C20:4n3 1,0 0,1 Erúcico C22:1n9c 0,0 0,1 EPA C20:5n3 0,4 1,7 DPA3 C22:5n3 0,9 0,4 DHA C22:6n3 10,2 9,8 Outras 4,0 7,6 EXEMPLO 4 - AVALIAÇÃO DA ESTABILIDADE DO ÓLEO

[00101] Um estudo de estabilidade Rancimat foi realizado com o uso do óleo bruto de canola com ALA e da mescla de referência descrita nos

35 / 50 Exemplos 1 e 2, respectivamente. O método envolveu o teste de aproximadamente 2,5 g de material de teste com o uso de procedimentos padrão para um Metrohm 743 Rancimat a 90 °C.

[00102] A tabela a seguir resume os resultados obtidos com esses óleos a 90 °C. Os experimentos foram realizados em duplicata. Óleo Tempo Óleo de Canola com ALA 7 horas 29 minutos 7 horas 17 minutos Óleo de referência 10 horas 26 minutos 10 horas 11 minutos

[00103] O óleo de canola ALA mostrou estabilidade consistentemente inferior ao óleo de referência. EXEMPLO 5 - TRANSESTERIFICAÇÃO ENZIMÁTICA DE ÓLEO BRUTO DE CANOLA-ALA

[00104] O seguinte procedimento de transesterificação enzimática foi realizado em aproximadamente 5 kg do óleo de triglicerídeo bruto obtido no Exemplo 1. A Lipozyme 435 foi obtida da Novozymes A/S.

[00105] A um reator seco com corrente de azoto equipado com um agitador mecânico foi adicionado etanol não desnaturado a 100% (5,00 kg) e o óleo triglicérido bruto obtido no Exemplo 1 (5,00 kg) e a mistura agitada. A essa mistura foi adicionada Lipozyme 435 (420 g), e a mistura foi aquecida a 40 °C durante 21 horas. Um espectro de RMN de 1H registrado de uma amostra retirada da mistura indicou que a reação havia sido concluída.

[00106] A mistura foi arrefecida a 20 °C. A mistura foi drenada do reator e filtrada através de um pano de filtro de polipropileno de 4 µm em um filtro Neutsche de 20 l. O reator foi enxaguado com etanol (2x1,6 l) e espírito de petróleo (2,51), e estes foram usados para lavar sequencialmente o bolo de filtro. À mistura de reação em bruto resultante foi adicionado espírito de petróleo (10 l) e água (4 l), e a mistura foi bem misturada no reator e, em seguida, deixada em repouso, após isso, 2 fases se formaram.

[00107] A camada de espírito de petróleo foi removida e a camada aquosa extraída com espírito de petróleo (2x10 l). As camadas de destilado de

36 / 50 petróleo combinadas foram devolvidas ao reator e evaporadas in vacuo até um volume baixo (aproximadamente 10 l). A solução concentrada resultante foi drenada do reator, seca sobre sulfato de magnésio anidro (aproximadamente 1 kg), filtrada e concentrada in vacuo para fornecer um óleo amarelo (5,13 kg). EXEMPLO 6 – TRANSESTERIFICAÇÃO ENZIMÁTICA DE ÓLEO

BRUTO DE MESCLA DE REFERÊNCIA

[00108] A transesterificação enzimática do óleo de mescla de referência de triglicerídeo bruto obtido de acordo com o Exemplo 2 (5,00 kg) foi concluída com o uso do processo descrito no Exemplo anterior. O produto foi obtido como um óleo amarelo. EXEMPLO 7 - DESTILAÇÃO DE ÓLEOS DE CANOLA

TRANSESTERIFICADOS PROCEDIMENTO PADRÃO PARA A REMOÇÃO DE COMPONENTES MAIS VOLÁTEIS DE MISTURAS DE ÉSTERES ETÍLICOS DE ÁCIDOS GRAXOS (FAEE) POR DESTILAÇÃO A VÁCUO

[00109] Os ésteres etílicos de ácido graxo bruto (FAEE) da canola- DHA bruta (obtido no Exemplo 5) foram submetidos à destilação sob as condições a seguir. A separação por destilação foi obtida passando o óleo bruto transesterificado através de uma película limpa Pope de 2 polegadas (50 mm) ainda sob vácuo equipada com 2 x 1.000 ml frascos de coleta que coletam o destilado e o resíduo. Cada um foi analisado quanto à composição de ácidos graxos.

[00110] O vácuo foi fornecido por uma bomba rotativa Edwards 3, e o vácuo foi medido por um vacuômetro ebro VM2000.

[00111] O alambique foi alimentado com óleo por uma bomba peristáltica Cole-Palmer Instrument Company easy-load II a 4 ml/min com o motor do destilador ajustado para 325 rpm com condensador de água usado para condensar o destilado. A alimentação continuou até que um ou outro dos frascos receptores estivesse cheio.

37 / 50

[00112] O FAEE de canola-ALA bruta foi destilado sob essas condições com as bandas de aquecimento inicialmente ajustadas para 147 °C. O objetivo foi obter uma divisão a 50:50 de destilado:resíduo. Durante os primeiros 30 a 45 minutos do experimento, a temperatura das bandas do aquecedor aumentou para 154 °C a fim de aumentar a proporção do óleo que destilou, e permitiu-se que o alambique fosse equilibrado. Após de meia hora, a temperatura das bandas de aquecimento foi ajustada durante meia hora para 149 °C. O restante da destilação ocorreu a 149 °C. O tempo total de destilação foi de 350 minutos. Uma porção do resíduo da destilação acima foi novamente submetida à remoção de componentes mais voláteis por destilação sob as condições padrão com a temperatura das bandas do aquecedor ajustada para 149 °C. O tempo total de destilação foi de 95 minutos. Destilação Alimentação Destilado Resíduo Primeiro 1.395,4 g 699,5 g 690,5 g Segundo 376,3 g 211,7 g 160,3 g EXEMPLO 8 - DESTILAÇÃO DE FAEE DERIVADO DA MESCLA DE

REFERÊNCIA BRUTA

[00113] Os ésteres etílicos de ácidos graxos em bruto (FAEE) da mescla de referência em bruto (obtida no Exemplo 6) foram submetidos à destilação sob as mesmas condições mostradas o Exemplo anterior.

[00114] A mescla de referência bruta FAEE foi destilada sob essas condições padrão com as bandas do aquecedor inicialmente definidas para 152 °C. O objetivo foi obter uma divisão a 50:50 de destilado:resíduo. Após 20 minutos, a temperatura das bandas do aquecedor foi ajustada para 154 °C para aumentar o fluxo de destilado. Após mais uma hora, a temperatura das bandas do aquecedor foi ajustada para 153 °C e, em seguida, 152 °C durante a hora seguinte. Para a última hora da destilação, a temperatura das bandas do aquecedor foi ajustada para 153 °C. O tempo total de destilação foi de 380 minutos. O resíduo da destilação anterior foi novamente submetido à remoção de componentes mais voláteis por destilação nas condições padrão. O objetivo

38 / 50 foi obter uma divisão a 50:50 de destilado:resíduo. A destilação foi realizada principalmente com as bandas do aquecedor ajustadas para 150 a 151 °C. O tempo total de destilação foi de 195 minutos. Destilação Alimentação Destilado Resíduo Primeiro 1.515,7 g 729,6 g 775,1 g Segundo 768,5 g 399,7 g 363,3 g EXEMPLO 9 - SEPARAÇÃO CROMATOGRÁFICA DE FAEE

DERIVADO DE CANOLA HPLC PREPARATIVA

[00115] Os ésteres etílicos de ácidos graxos (FAEE) obtidos no Exemplo 7 (isto é, que foram obtidos a partir do canola-ALA bruto e processados com o uso de transesterificação e destilação) foram submetidos à separação cromatográfica sob as condições a seguir. Um sistema de HPLC preparativo que compreende um sistema Waters Prep 4000, injetor Rheodyne com ciclo de 10 ml, coluna Deltaprep C18 de 300 x 40 mm, detector de comprimento de onda duplo Waters 2487 e registrador gráfico foi equilibrado com 88% de metanol/fase móvel de água a 70 ml/min. O detector foi ajustado para 215 nm e 2,0 unidades de absorbância em escala completa e o gráfico executado a 6 cm/h.

[00116] 1,0 g de óleo FAEE foi dissolvido em uma quantidade mínima de 88% metanol/água e injetado na coluna através do injetor Rheodyne. Foram recolhidas fracções de aproximadamente 250 ml quando a frente do solvente apareceu após aproximadamente 7 minutos.

[00117] Um total de 43 frações foi coletado ao longo de 140 minutos. Após 85 minutos, a fase móvel mudou para 90% metanol/água. Após 105 minutos, a fase móvel foi alterada para 94% de metanol/água. Após 110 minutos, a fase móvel foi alterada para metanol 100%. Após as fracções finais terem sido recolhidas, a coluna foi lavada durante mais 1 hora com metanol a 100% a 70 ml/min. A HPLC analítica foi realizada em todas as frações, e as frações que contêm predominantemente ALA foram combinadas

39 / 50 (rendimento: 9%).

HPLC ANALÍTICA

[00118] Um sistema de HPLC que compreende um controlador de bomba Waters 600E, amostrador automático 717, detector de matriz de fotodiodo 2996 e detector de índice de refração 2414 foi usado para análise de amostra. A análise foi realizada em uma coluna Alltima C18 de 150 x 4,6 mm com o uso de 90% de metanol/água isocrática ou 95% de metanol/água a 1,0 ml/min como fase móvel. A coleta e o processamento dos dados foram realizados no software Waters Empower 3. EXEMPLO 10 - SEPARAÇÃO CROMATOGRÁFICA DE FAEE

DERIVADA DA MESCLA DE REFERÊNCIA

[00119] Os ésteres etílicos de ácido graxo destilados (FAEE) da mescla de referência (obtido no Exemplo 8) foram submetidos à separação cromatográfica sob as mesmas condições mostradas no Exemplo anterior.

[00120] Um total de 43 frações foram coletadas ao longo de 130 minutos. Após 75 minutos, a fase móvel foi alterada para 90% de metanol/água. Após 95 minutos, a fase móvel foi alterada para 95% de metanol/água. Após 110 minutos, a fase móvel foi alterada para 100% MeOH. Após as frações finais terem sido coletadas, a coluna foi lavada por mais 1 hora com 100% de MeOH a 70 ml/min. A HPLC analítica foi realizada em todas as frações, e as frações que contêm predominantemente ALA foram combinadas (rendimento: aproximadamente 10%). EXEMPLO 11 - ANÁLISE DA COMPOSIÇÃO DE ÁCIDOS GRAXOS

PARA OS ÓLEOS

[00121] As composições de ácidos graxos dos produtos obtidos nos Exemplos 9 e 10 foram analisadas. Os resultados são mostrados abaixo. Óleo de Canola com ALA Óleo de referência Ácido graxo (% em peso) (% em peso) (Exemplo 9) (Exemplo 10) Palmítico C16:0 0,00 0,00 Esteárico C18:0 0,00 0,00 Oleico C18:1n9c 0,00 0,00 Cis-vacênico C18:1n7c 0,00 0,08

40 / 50 Óleo de Canola com ALA Óleo de referência Ácido graxo (% em peso) (% em peso) (Exemplo 9) (Exemplo 10) Linoleico C18:2n6c 0,03 0,00 GLA C18:3n6 1,88 0,13 C18:3 isômeros 3,01 0,30 ALA C18:3n3 90,02 92,18 Araquídico C20:0 0,00 0,00 SDA C18:4n3 0,08 0,00 Gondoico C20:1n9c 0,07 0,00 Beênico C22:0 0,00 0,01 ETA C20:4n3 0,09 0,00 Erúcico C22:1n9c 0,00 0,00 EPA C20:5n3 0,45 5,42 DPA3 C22:5n3 0,00 0,00 DHA C22:6n3 1,79 1,38 Outras 2,60 0,50 EXEMPLO 12 - AVALIAÇÃO DE ESTABILIDADE DE ÓLEO TESTE DE ESTABILIDADE DE ESPAÇO VAZIO GC-MS

[00122] A análise do espaço livre foi realizada nos produtos enriquecidos descritos acima para avaliar as quantidades de propanal que são liberadas sob condições específicas. Níveis aumentados de liberação de propanal demonstram estabilidade reduzida para o material de teste. MÉTODO SPME (MICROEXTRAÇÃO EM FASE SÓLIDA):

[00123] Fibra StableFlex PDMS/DVB de 65 µm selecionada (kit de fibra Supelco 57284-u)

[00124] As fibras foram condicionadas por 10 minutos antes do uso a 250 °C em uma estação de condicionamento Triplus RSH

[00125] As amostras foram incubadas a 40 °C durante 1 min antes da extração.

[00126] Extraídas durante por 1 min do frasco com espaço vazio

[00127] Espera-se que seja um bom método geral capaz de capturar uma ampla gama de componentes voláteis. MÉTODO GC:

[00128] GC Thermo Scientific TRACE 1310

[00129] Coluna Thermo Scientific TR-DIOXIN 5MS, diâmetro interno de 0,25 mm, filme de 30 m 0,1 µm

[00130] Injeção por divisão 250 °C Separação 83, 1,2 ml He/min

41 / 50

[00131] Elevação de GC: 40 °C, 1 minuto a 100 a 5 °C/min, depois a 300 °C a 50 °C/min

[00132] Foi usada uma coluna específica de MS genérica com boa sinergia para análise de espaço vazio. Uma elevação de temperatura inicial lenta foi empregada para maximizar a separação de voláteis antes de aumentar ao máximo para manter o desempenho da coluna. Injeções divididas foram empregadas para evitar a necessidade de resfriamento criogênico da entrada e aumentar a resolução da coluna.

[00133] A separação dos padrões foi dificultada por alguma sobreposição de pico, porém ainda pode ser acomodada na quantificação. 3 resultados de calibração padrão (0,1, 0,01 e 0,01%), o íon molecular m/z 56 foi empregue para a detecção de propanal. O pico base em m/z 58 é usado para detectar hexanal. MÉTODO MS:

[00134] GC-MS de alta resolução Thermo Scientific DFS

[00135] Baixa resolução (1000), varredura completa 35-350Da a 0,5 s/varredura

[00136] Padrões: - As diluições padrão de Propanal e Hexanal foram feitas nos ésteres etílicos de Canola com ALA fornecidos. Em seguida, as misturas padrão foram adicionadas a um volume de 540 µl a frascos do espaço vazio de 20 ml.

[00137] A varredura completa foi empregada, permitindo o monitoramento de todos os produtos evoluídos, em vez de moléculas específicas. RESULTADOS DE ESTABILIDADE DO ESPAÇO VAZIO:

[00138] A tabela abaixo a seguir os resultados obtidos a partir do óleo de canola RBD obtido no Exemplo 9 e do óleo de referência RBD obtido no Exemplo 10 de T = 0 a 5 dias. As amostras de teste foram mantidas durante esse período à temperatura ambiente em uma caixa de luz e sob iluminação de

42 / 50 tubo fluorescente. O íon m/z 58 molecular foi analisado, e o cromatograma de massa mostra claramente o surgimento de propanal em RT 1,37 min. O desenvolvimento do propanal é quantificado na tabela abaixo e os dados são mostrados na Figura 1. O óleo de canola com ALA liberou quantidades substancialmente menores de propanal, demonstrando a estabilidade aprimorada do óleo de canola em comparação à referência. Ponto no tempo (dias) 0 2 5 Óleo de Canola com ALA (propanal em ppm) 2.546,964 3.324,144 3.958,752 Óleo de referência (propanal em ppm) 1.626,756 6.353,456 1.4368,795

[00139] O óleo de canola com ALA apresentou estabilidade superior à oxidação em comparação ao óleo de referência. EXEMPLO 13 - REFINAMENTO DE ÓLEO DE CANOLA ALA

[00140] Uma porção do óleo de canola obtido no Exemplo 1 foi refinado antes de ser submetido a enriquecimento adicional. O processo de refinamento envolveu degomagem, refinamento de álcali, branqueamento e desodorização.

DEGOMAGEM ÁCIDA

[00141] A degomagem é a remoção de fosfatídeos não hidratáveis e hidratáveis do óleo. O óleo bruto seco obtido no Exemplo 1 foi aquecido a 53 ± 2 °C e foi adicionado 0,2% de uma solução de ácido cítrico a 50%. Após aproximadamente 30 minutos de mistura, 2,0% de água amaciada aquecida (53 ± 2 °C) foi adicionada e misturada durante aproximadamente 30 minutos. O óleo foi aquecido a 67 ± 3 °C durante a espera e depois centrifugado. PRÉ-TRATAMENTO/REFINAMENTO DE ÁCIDO

[00142] Refinamento é a remoção de ácidos graxos livres após sua saponificação com soda cáustica para torná-los solúveis em água e sua posterior remoção por centrifugação. Uma etapa de pré-tratamento com ácido foi usada para continuar a hidratação dos fosfatídeos. O óleo degomado foi aquecido a 65 ± 5 °C e 0,1% de ácido fosfórico a 85% adicionado e misturado por um total de 30 minutos. Após a adição de ácido e tempo de espera,

43 / 50 hidróxido de sódio 20 Be‘ (Baumé; 14,4%, p/p) foi adicionado para neutralizar os ácidos graxos livres mais um excesso de 0,05% (p/p). Em seguida, a cáustica e o óleo foram misturados por mais 15 minutos. O óleo foi aquecido a 62 ± 2 °C durante a espera de 15 minutos e, em seguida, o óleo foi centrifugado.

TRATAMENTO DE TRISIL SILICA

[00143] Para posterior retirada dos sabonetes, foi realizado tratamento com trisil sílica, em níveis compatíveis com o branqueamento. O pré- tratamento com Trisila foi combinado com a etapa de branqueamento. O óleo refinado foi aquecido a 68 ± 5 °C e tratado com 0,3% de Trisila 300. Óleo/Trisila foram mostrados durante aproximadamente 15 minutos e, em seguida, o branqueamento continuou.

BRANQUEAMENTO

[00144] O óleo refinado foi tratado com argila adsortiva para remoção de peróxidos, fosfatídeos, corpos coloridos e vestígios de sabão. Uma etapa de pré-tratamento com ácido foi usada para continuar a hidratação dos fosfatídeos. O óleo pré-tratado com Trisila foi misturado com 0,2% (em p/p) de uma solução de ácido cítrico a 50%. Após 15 minutos de mistura, foi adicionada argila de branqueamento Tonsil Supreme 126 FF a 2% (em p/p). Em seguida, a mistura foi aquecida a 90 ± 2 °C sob vácuo e mantida durante aproximadamente 30 minutos. O óleo foi resfriado a 60 ± 2 °C, o vácuo foi rompido com nitrogênio, 1,0 kg de auxiliar de filtro adicionado e filtrado. Vaso de pressão: Vaso de pressão Cherry-Burrell de 500 l, camisa de vapor ou água de resfriamento, toda construção em aço inoxidável 316 com impulsor e defletores para mistura, número de série da mfg nº E-227-94. Prensa de filtro: Foram usados prensa de filtro de Polipropileno Sperry de 60,96 cm (24 polegadas), filtro de 135,9 litros (4,8 pés cúbicos) de capacidade, suportes de papel e tecido.

DESODORIZANTE

44 / 50

[00145] O óleo branqueado foi submetido à aspersão com vapor em alta temperatura e baixa pressão para remover componentes odoríferos, componentes de sabor e ácidos graxos livres adicionais. A cor também é reduzida por meio de branqueamento por calor em temperaturas elevadas. A metade do óleo branqueado foi desodorizado a 180 ± 2 °C por 60 min com vapor de pulverização a 1% e a composição de ácidos graxos (FAC) foi monitorada. Recipiente desodorizador (OD4): Recipiente de fabricação de cobre de 400 l classificado a vácuo, camisa de vapor ou água de resfriamento, toda construção 316 inoxidável. Uma ligeira diminuição do nível de DHA foi observada a 180 °C por 60 min de espera. Em seguida, outro ensaio foi conduzido a 180 °C por 30 min de espera. O produto foi embalado sob nitrogênio em baldes de plástico de HDPE de 20 l e armazenado em um refrigerador a 4 °C. EXEMPLO 14 - REFINAMENTO DO ÓLEO DE MESCLA DE

REFERÊNCIA ORIGINAL

[00146] Uma porção da mescla de referência descrita no Exemplo 2 foi refinada antes de ser submetida a enriquecimento adicional. No processo de refinamento, a mescla de referência foi submetida a refinamento nas mesmas condições mostradas no Exemplo anterior. EXEMPLO 15 – COMPOSIÇÕES DE ÁCIDO GRAXO DO ÓLEO DE

CANOLA COM ALA BRUTO DE RBD E MESCLA DE REFERÊNCIA

[00147] As composições de ácidos graxos do óleo bruto filtrado por RDB (do Exemplo 13) e do óleo de mescla de referência de RBD (do Exemplo 14) foram analisadas. Os resultados são mostrados abaixo. Óleo de canola ALA bruto Óleo de referência bruto (% Ácido graxo (% em peso) em peso) Palmítico C16:0 4,23 9,22 Esteárico C18:0 2,52 3,89 Oleico C18:1n9c 42,90 31,62 Cis-vacênico C18:1n7c 3,01 1,96 Linoleico C18:2n6c 7,15 12,18 GLA C18:3n6 0,54 0,00 ALA C18:3n3 19,95 22,51 Araquídico C20:0 0,72 0,38 SDA C18:4n3 2,25 0,17

45 / 50 Óleo de canola ALA bruto Óleo de referência bruto (% Ácido graxo (% em peso) em peso) Gondoico C20:1n9c 1,28 0,71 Beênico C22:0 0,31 0,22 ETA C20:4n3 1,08 0,00 Erúcico C22:1n9c 0,00 0,00 EPA C20:5n3 0,47 1,67 DPA3 C22:5n3 0,96 0,41 DHA C22:6n3 9,33 9,20 Outras 3,32 5,86

[00148] Referências a "RBD" em combinação com os Exemplos (e as Figuras anexas) significam que o produto em questão foi obtido direta ou indiretamente dos produtos "refinados" do Exemplo 13 (para óleos de canola) e Exemplo 14 (para mesclas de referência). EXEMPLO 16 – TRANSESTERIFICAÇÃO QUÍMICA DE ÓLEO DE

CANOLA ALA RBD

[00149] A um reator químico Buchi CR101 seco com nitrogênio equipado com um agitador mecânico foram adicionados etanol absoluto (12,5 l) e o óleo de canola ALA de triglicerídeo refinado ("RBD") obtido no Exemplo 13 (5,00 kg) e a mistura agitada.

[00150] À mistura acima foi adicionado etóxido de sódio (150 g) que foi enxaguado no reator com mais etanol absoluto (2,5 l), e a agitação continuou durante 16 horas à temperatura ambiente. Um espectro de RMN de 1 H registrado de uma amostra retirada da mistura indicou que a reação havia sido concluída.

[00151] O procedimento de transesterificação foi realizado em aproximadamente 5 kg de óleo de canola com ALA RBD. À mistura de reação bruta resultante foi adicionado destilado de petróleo com ponto de ebulição de 40 a 60 °C (destilado de petróleo, 10 l) e água (10 l) e a mistura foi cuidadosamente acidificada até pH 7 com ácido clorídrico a 10% (870 ml no total necessário, Tiras de Indicação Merck Universal, pH 0 a 14) com mistura completa.

[00152] A mistura resultante foi deixada em repouso no reator, após isso, 2 fases se formaram. A camada de espírito de petróleo foi removida e a

46 / 50 camada aquosa foi extraída com destilado de petróleo (3x5 l). As camadas de destilado de petróleo combinadas foram devolvidas ao reator e evaporadas in vacuo até um volume baixo (aproximadamente 10 l). A solução concentrada resultante foi drenada do reator, seca sobre sulfato de magnésio anidro (aproximadamente 1 kg), filtrada e concentrada in vacuo para dar um óleo amarelo pálido claro (rendimento: 99%). EXEMPLO 17 - TRANSESTERIFICAÇÃO QUÍMICA DE ÓLEO DE

MESCLA DE REFERÊNCIA DE RBD

[00153] A um reator químico Buchi CR101 seco, lavado com nitrogênio, equipado com um agitador mecânico, foi adicionado etanol absoluto (12,5 l), e o óleo de mescla de referência de triglicerídeo RBD foi obtido de acordo com o Exemplo 14 (aproximadamente 5 kg) e a mistura foi agitada.

[00154] À mistura acima foi adicionado etóxido de sódio (150 g) que foi enxaguado no reator com mais etanol absoluto (2,5 l), e a agitação continuou durante 16 horas à temperatura ambiente. Um espectro de RMN de 1 H registrado de uma amostra indicou que pouca ou nenhuma reação ocorreu. Foi adicionado mais etóxido de sódio (57 g) à mistura, e a agitação continuou.

[00155] Após mais 5 horas, um espectro de RMN de 1H de uma amostra indicou que a reação estava 75% completa. Foi adicionado mais etóxido de sódio (60 ml de uma solução a 21% em etanol) à mistura e a agitação continuou durante 3 dias, após esse período, a reação foi concluída.

ISOLAMENTO DE PRODUTO EXEMPLIFICATIVO DA TRANSESTERIFICAÇÃO QUÍMICA DA MESCLA DE REFERÊNCIA DE RBD

[00156] O procedimento de transesterificação foi realizado em aproximadamente 5 kg de óleo de mescla de referência de RBD. À mistura de reação em bruto resultante foi adicionado espírito de petróleo (15 l) e água (3,3 l), e a mistura foi cuidadosamente acidificada até pH 7 com ácido

47 / 50 clorídrico a 10% (910 ml no total necessário) com mistura completa.

[00157] A mistura resultante foi deixada em repouso no reator, após isso, 2 fases se formaram. A camada de destilado de petróleo foi removida e a camada aquosa foi extraída com espírito de petróleo (2x7,5 l). As camadas de destilado de petróleo combinadas foram devolvidas ao reator e evaporadas in vacuo até um volume baixo (aproximadamente 10 l). A solução concentrada resultante foi drenada do reator, seca sobre sulfato de magnésio anidro (aproximadamente 1 kg), filtrada e concentrada in vacuo para dar um óleo amarelo pálido claro (rendimento: 99%). EXEMPLO 18 - DESTILAÇÃO DE ÓLEOS DE CANOLA RBD

TRANSESTERIFICADOS PROCEDIMENTO PADRÃO PARA A REMOÇÃO DE COMPONENTES MAIS VOLÁTEIS DE MISTURAS DE ÉSTERES ETÍLICOS DE ÁCIDOS GRAXOS (FAEE) POR DESTILAÇÃO A VÁCUO

[00158] Os ésteres etílicos de ácidos graxos (FAEE) da canola ALA RDB (obtida no Exemplo 16) foram submetidos à destilação sob as condições a seguir. A separação por destilação foi obtida passando o óleo bruto transesterificado através de uma película limpa Pope de 2 polegadas (50 mm) ainda sob vácuo equipada com 2 x 1.000 ml frascos de coleta que coletam o destilado e o resíduo. Cada um foi analisado quanto à composição de ácidos graxos.

[00159] O vácuo foi fornecido por uma bomba rotativa Edwards 3, e o vácuo foi medido por um vacuômetro ebro VM2000.

[00160] O alambique foi alimentado com óleo por uma bomba peristáltica Cole-Palmer Instrument Company easy-load II a 4 ml/min com o motor do destilador ajustado para 325 rpm com condensador de água usado para condensar o destilado. A alimentação continuou até que um ou outro dos frascos receptores estivesse cheio.

[00161] O FAEE de canola ALA RBD foi destilado sob essas

48 / 50 condições com as bandas do aquecedor inicialmente ajustadas para 152 °C a fim de obter uma divisão a 50:50 de destilado:resíduo. Uma parte do resíduo dessa destilação foi novamente submetida à remoção de componentes mais voláteis por destilação sob as condições padrão com a temperatura das bandas do aquecedor ajustada para 152 °C. O tempo total de destilação foi de aproximadamente 90 minutos. Destilação Alimentação Destilado Resíduo Primeiro 1.596,6 729,9 855,9 Segundo 851,3 503,5 343,1 EXEMPLO 19 - DESTILAÇÃO DE FAEE DERIVADA DA MISTURA DE

REFERÊNCIA DE RBD TRANSESTERIFICADA

[00162] Os ésteres etílicos de ácidos graxos (FAEE) da mescla de referência de RBD (obtida no Exemplo 17) foram submetidos à destilação nas mesmas condições que as mostradas no Exemplo anterior.

[00163] A mescla de referência de RBD FAEE foi destilada sob essas condições padrão com as bandas do aquecedor inicialmente ajustadas para 152 °C para obter uma divisão a 50:50 de destilado:resíduo. O resíduo dessa destilação foi novamente submetido à remoção de componentes mais voláteis por destilação nas condições padrão. O objetivo foi obter uma divisão a 50:50 de destilado:resíduo. A destilação foi realizada principalmente com as bandas do aquecedor ajustadas para 152 °C. O tempo total de destilação foi de aproximadamente 200 minutos. Destilação Alimentação Destilado Resíduo Primeiro 1.195,1 674,7 504,6 Segundo 496,4 297,2 197,4 EXEMPLO 20 - SEPARAÇÃO CROMATOGRÁFICA DE FAEE

DERIVADO DE RBD CANOLA

[00164] Os ésteres etílicos de ácidos graxos (FAEE) obtidos no Exemplo 18 (isto é, que foram obtidos da canola-ALA RBD e processados com o uso de transesterificação e destilação) foram submetidos à separação cromatográfica sob as condições a seguir. Um sistema de HPLC preparativo que compreende um sistema Waters Prep 4000, injetor Rheodyne com ciclo

49 / 50 de 10 ml, coluna Deltaprep C18 de 300 x 40 mm, detector de comprimento de onda duplo Waters 2487 e registrador gráfico foi equilibrado com 88% de metanol/fase móvel de água a 70 ml/min. O detector foi ajustado para 215 nm e 2,0 unidades de absorbância em escala completa e o gráfico executado a 6 cm/h.

[00165] 1,0 g de óleo FAEE foi dissolvido em uma quantidade mínima de 88% metanol/água e injetado na coluna através do injetor Rheodyne. Foram recolhidas fracções de aproximadamente 250 ml quando a frente do solvente apareceu após aproximadamente 7 minutos.

[00166] A HPLC analítica foi realizada em todas as frações, e as frações que contêm predominantemente ALA foram combinadas (rendimento: aproximadamente 10%). EXEMPLO 21 - SEPARAÇÃO CROMATOGRÁFICA DE FAEE

DERIVADO DA MESCLA DE REFERÊNCIA

[00167] Os ésteres etílicos de ácido graxo destilados (FAEE) da mescla de referência de RDB (obtido no Exemplo 19) foram submetidos à separação cromatográfica sob as mesmas condições mostradas no Exemplo anterior.

[00168] A HPLC analítica foi realizada em todas as frações, e as frações que contêm predominantemente ALA foram combinadas (rendimento: aproximadamente 10%). EXEMPLO 22 - ANÁLISE DA COMPOSIÇÃO DE ÁCIDOS GRAXOS

PARA OS ÓLEOS DE RBD ENRIQUECIDOS

[00169] As composições de ácidos graxos dos produtos obtidos nos Exemplos 20 e 21 foram analisadas. Os resultados são mostrados abaixo. Óleo de Canola com ALA Óleo de referência Ácido graxo (% em peso) (% em peso) (Exemplo 20) (Exemplo 21) Palmítico C16:0 0,00 0,00 Esteárico C18:0 0,00 0,00 Oleico C18:1n9c 0,00 0,00 Cis-vacênico C18:1n7c 0,00 0,00 Linoleico C18:2n6c 0,00 0,00 GLA C18:3n6 1,94 0,00 C18:3 isômeros 3,08 0,37 ALA C18:3n3 89,93 96,13

50 / 50 Óleo de Canola com ALA Óleo de referência Ácido graxo (% em peso) (% em peso) (Exemplo 20) (Exemplo 21) Araquídico C20:0 0,03 0,00 SDA C18:4n3 0,04 0,00 Gondoico C20:1n9c 0,00 0,00 Beênico C22:0 0,00 0,00 ETA C20:4n3 0,18 0,00 Erúcico C22:1n9c 0,00 0,00 EPA C20:5n3 1,37 1,49 DPA3 C22:5n3 0,02 0,00 DHA C22:6n3 2,79 0,73 Outras 0,63 1,28 EXEMPLO 23 - AVALIAÇÃO DA ESTABILIDADE DE ÓLEO

[00170] A análise do espaço livre foi conduzida nos produtos enriquecidos descritos nos Exemplos 20 e 21 de acordo com o método descrito no Exemplo 12.

[00171] A tabela a seguir resume os resultados obtidos a partir do óleo de canola RBD obtido no Exemplo 20 e do óleo de referência RBD obtido no Exemplo 21 de T = 0 a 5 dias. As amostras de teste foram mantidas durante esse período à temperatura ambiente em uma caixa de luz e sob iluminação de tubo fluorescente. O íon m/z 58 molecular foi analisado, e o cromatograma de massa mostra claramente o surgimento de propanal em RT 1,37 min. O desenvolvimento propanal é quantificado na tabela abaixo, e os dados são mostrados na Figura 2. O óleo de canola com ALA liberou quantidades substancialmente menores de propanal, demonstrando a estabilidade aprimorada do óleo de canola em comparação à referência. Ponto no tempo (dias) 0 2 5 Óleo de Canola com ALA (propanal em ppm) 861,802 1942,117 4145,081 Óleo de referência (propanal em ppm) 512,695 4302,865 8792,707

[00172] O óleo de canola com ALA apresentou estabilidade superior à oxidação em comparação ao óleo de referência.

Claims (15)

REIVINDICAÇÕES

1. Composição de lipídio à base de vegetais caracterizada pelo fato de que compreende: (i) ácido α-linolênico em uma quantidade de pelo menos aproximadamente 85% em peso do teor total de ácido graxo da composição; e (ii) um segundo ácido graxo poli-insaturado em uma quantidade de aproximadamente 1% em peso do teor total de ácido graxo da composição; em que o segundo ácido graxo poli-insaturado é um C:20-24 ácido graxo poli-insaturado ômega-3 que contém pelo menos 4 insaturações, e em que o ácido α-linolênico e o segundo ácido graxo poli-insaturado são fornecidos independentemente na forma de um ácido graxo, um sal de ácido graxo, um éster de ácido graxo ou um sal de éster de ácido graxo.

2. Composição de lipídio de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a quantidade de ácido α-linolênico presente é pelo menos aproximadamente 88% em peso do teor total de ácido graxo da composição.

3. Composição de lipídio de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a quantidade total de ácidos graxos poli- insaturados ômega-3 na composição de lipídio é pelo menos aproximadamente 90% em peso do teor total de ácido graxo da composição.

4. Composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o segundo ácido graxo poli-insaturado é ácido docosa-hexanoico sob as condições a seguir (22:6n-3).

5. Composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a composição de lipídio à base de vegetais compreende adicionalmente ácido γ-linolênico

(18:3n-6) em uma quantidade de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 4% (tal como de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 3%) em peso do teor total de ácido graxo da composição.

6. Composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que cada um dentre o ácido α-linolênico e o segundo ácido graxo poli-insaturado é fornecido independentemente na forma de um éster de ácido graxo ou um sal de um éster de ácido graxo, tal como na forma de um éster etílico de ácido graxo ou como parte de um triglicerídeo.

7. Composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a composição de lipídio é derivada de uma única fonte.

8. Composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a composição de lipídio é derivada de uma planta.

9. Composição de lipídio de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que é uma semente de óleo, particularmente, Brassica sp., Gossypium hirsutum, Linum usitatissimum, Helianthus sp., Carthamus tinctorius, Glycine max, Zea mays, Arabidopsis thaliana, Sorghum bicolor, Sorghum vulgare, Avena sativa, Trifolium sp., Elaesis guineenis, Nicotiana benthamiana, Hordeum vulgare, Lupinus angustifolius, Oryza sativa, Oryza glaberrima, Camelina sativa ou Crambe abyssinica.

10. Composição de lipídio de acordo com a reivindicação 8, sendo que a composição de lipídio é caracterizada pelo fato de que não foi refinada, branqueada, desodorizada antes do enriquecimento.

11. Composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, sendo que a composição é caracterizada pelo fato de que é fornecida na forma de um comprimido, uma cápsula, gel encapsulado, líquido ou pó ingerível, emulsão o uma pomada ou creme tópico.

12. Composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um ou mais componentes adicionais selecionados dentre o grupo que consiste em um antioxidante, um estabilizador e um tensoativo.

13. Composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que destinada para uso no tratamento contra doença cardiovascular, proteção para prevenir morte em pacientes com doença cardiovascular, redução de níveis gerais de colesterol sérico, redução em alta BP, aumento na razão HDL:LDL, redução de triglicerídeos ou redução de níveis de apolipoproteína-B.

14. Tinta ou verniz caracterizado pelo fato de que compreende a composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12.

15. Processo para produzir uma composição de lipídio de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, sendo que o processo é caracterizado pelo fato de que fornece uma mistura de ésteres etílicos de ácido graxo e submeter a dita mistura a um processo de separação cromatográfica, em que, opcionalmente, a mistura de ésteres etílicos de ácido graxo é obtida por meio de transesterificação e destilação de um óleo de lipídio à base de vegetais.