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ayant pour objet : Picolyl-amides substitués de l'acide
4-hydroxy-isophtalique, procédé de préparation et utilisation pharmaceu- tique
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La présente invention concerne une classe de composés organiques, comprenant l'amide picolylique de l'acide isophtalique et ses dérivés substitués, qui possèdent une activité pharmaceutique et peuvent être utilisés pour l'inhibition de l'agglutination des plaquettes sanguines, pour lutter contre d'autres désordres thrombo-emboliques du sang et pour retarder'la coagulation de ce dernier.
L'invention a en outre pour objet un procédé pour la synthèse chimique desdits nouveaux composés, ainsi que les applications pharmaceutiques de ceux-ci.
Les nouveaux composés chimiques qui font l'objet de la présente invention répondent à la formule générale de structure ci-après :
EMI2.1
dans laquelle R peut désigner un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, éthyle, propyle ou allyle, tandis que R' et Rn, différents l'un de l'autre, représentent l'un de l'hydrogène et l'autre un radical méthyle.
Les divers composés selon l'invention, répondant à la formule générale ci-dessus, sont résumés dans le tableau Ici-après.
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TABLEAU l
EMI3.1
<tb>
<tb> Déno- <SEP> R <SEP> R' <SEP> R"
<tb> mination
<tb> G-566 <SEP> H <SEP> H-CH,
<tb> G-567 <SEP> H-CH, <SEP> H
<tb> Gl-555 <SEP> -CH3 <SEP> H <SEP> -CH3
<tb> G-477 <SEP> -CH <SEP> -CH <SEP> H <SEP>
<tb> G-568 <SEP> -C2H5 <SEP> H <SEP> -CH3
<tb> G-569 <SEP> -C2H5 <SEP> -CH <SEP> H <SEP>
<tb> G-570 <SEP> -C3H7 <SEP> H <SEP> -CH3
<tb> G-571 <SEP> -C3H7 <SEP> -CH3 <SEP> H
<tb> G-572 <SEP> -CH2-CH=CH2 <SEP> H <SEP> -CH3
<tb> G-573 <SEP> -CH2-CH=CH2 <SEP> -CH3 <SEP> H
<tb>
Les substances de la classe des composés organiques définis ci-dessus, pour lesquelles le groupe picoline est situé en position 3, R désigne un atome d'hydrogène ou un radical méthyle et R' Et R" désignetn, soit un atome d'hydrogène, soit un radical méthyle, sont connues pour posséder une action anti-coagulante,
fibrinolytique et d'inhibition de l'agglutination des plaquettes sanguines (ou thrombocytes). Cf. les brevets belges 826 033 et 851 967, ainsi que le brevet des Etats-Unis d'Amérique 4 294 833.
Il a été trouvé maintenant, de façon surprenante, que certains autres composés de la même classe possèdent, eux aussi, une activité pharmacologique plus prompte du même genre, en particulier en ce qui concerne l'inhibition de l'agglutination des plaquettes sanguines, et que, partant, on peut les considérer comme dotés d'un meilleur comportement pharmacodynamique dans le traitement de cas d'une urgence clinique particulière.
Une telle forme d'activité ne pouvait être prévue a priori, puisqu'on ne pouvait s'attendre à ce que, d'une
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substitution partielle sur l'atome d'azote de la fonction amide en position 1 ou en position 3, il résulterait une augmentation de la disponibilité du médicament dans l'organisme, après un certain temps à partir du moment de son administration, non plus qu'on pouvait s'attendre à ce qu'une telle vitesse d'action augmentée se montrerait exempte de la manifestation d'effets collatéraux négatifs, comme, par contre, on l'a constaté avec les produits selon la présente invention.
On a donc découvert une nouvelle classe de composés dotés de caractéristiques pharmacologiques différentes de celles des dérivés connus précédemment, au moins pour ce qui concerne leur mécanisme pharmacodynamique, et qui offre aux spécialistes de la technique une gamme plus complète d'agents actifs utiles en thérapeutique pour se rendre maître rapidement des phénomènes thrombo-emboliques grâce à une variété suffisante de médicaments et de dosages respectifs pour chaque cas particulier.
L'invention a par conséquent pour objet les composés mentionnés plus haut en tant qu'agents pharmaceutiques capables de provoquer rapidement l'inhibition de l'agglutination des plaquettes sanguines.
Un autre objet de l'invention est un procédé de préparation des composés de la formule générale reprise plus haut, qui consiste à faire réagir un ester monoalkylé d'un acide 4-hydroxy-ou 4-alcoxy-isophtalique correspondant avec la 3-picolyl-amine pour obtenir le monopicolyl-amide correspondant, à traiter ensuite le dérivé mono-acide ainsi obtenu avec le chlorure de thionyle et à faire réagir le chlorure d'acide obtenu avec la N-méthyl- 3-picolyl-amine pour former le dérivé correspondant selon l'invention.
Ces réactions se déroulent selon le schéma ci-après, dans lequel R possède la signification indiquée dans le
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tableau I et où les deux autres substituants se placent alternativement en position 1 ou en position 3.
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Les exemples ci-après, décrits en vue d'illustrer l'invention sans vouloir limiter celle-ci, serviront à éclaircir la mise en oeuvre pratique, étant entendu que diverses variantes d'exécution, évidentes pour les spécialistes de la technique, entrent dans le cadre de l'invention sans en modifier la portée.
Exemple 1
Synthèse du mono- (3-pico1y1-amide) de la formule I
Un mélange de 4,7 millimoles d'un mono-ester méthylique approprié de l'acide 4-hydroxy-eu 4-alcoxy-isophtalique et de 47 millimoles de 3-picolyl-amine est maintenu pendant 24 heures à la température de 600C.
Ensuite, on refroidit et on met le récipient de réaction dans un mélange réfrigérant, de façon que la température se maintienne aux environs de OOC durant l'acidification subséquente, réalisée à l'aide d'acide acétique glacial ou d'acide chlorhydrique 5N jusqu'à l'obtention d'un
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pH compris entre 3,5 et 5,5 suivant les cas, en vue de provoquer la précipitation complète du composé (I).
Le précipité formé est séparé par une filtration sous vide, lavé à fond avec de l'eau distillée et recristallisé dans un solvant organique.
Le composé obtenu peut être utilisé tel quel dans le mode opératoire de l'exemple qui suit.
Exemple II
EMI6.1
Synthèse d'un N- méthyl) de la formule (II)
Un mélange de 27,9 millimoles d'un composé approprié de la formule I, obtenu selon l'exemple précédent et mis en suspension dans du tétrahydrofuranne (THF) anhydre, de 53,7 millimoles de chlorure de thionyle et de 1 millimole de diméthyl-formamide est soumis pendant trois heures à une agitation mécanique à la température de 60oC.
Le solvant, ainsi que le chlorure de thionyle en excès, sont ensuite éliminés par une distillation sous pression réduite, puis le résidu solide obtenu est lavé à trois reprises avec du benzène anhydre.
Le résidu est ensuite mis en suspension dans du THF et ajouté sous agitation mécanique, à froid et très lentement, à une solution de 30 millimoles de N-méthyl-3picolyl-amine et de 55,8 millimoles de triéthyl-amine dans le THF.
Cette addition terminée, le mélange réactionnel est encore agité pendant deux heures à la température ordinaire.
Le précipité formé est séparé par filtration. Le filtrat est évaporé à siccité à basse température et sous une pression réduite.
Le résidu ainsi obtenu est repris dans une solution saturée de NaHCO, puis extrait plusieurs fois au chloroforme. Les extraits chloroformiques réunis sont séchés sur
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NaSO, puis évaporés à siccité à pression réduite.
Le résidu final obtenu est un composé de la formule II.
EMI7.1
Les amides N- 3- pyridyl¯7-4-hydroxy- cons- tituent l'objet de l'invention, sont obtenus sous forme de base libre d'un point de fusion relativement bas, non paramétrique, et sont suffisamment caractérisables comme tels.
Cependant, après une purification à l'aide d'une chromatographie sur une colonne de gel de silice, l'éluant étant le méthanol, ils ont pu être soumis à l'analyse élémentaire centésimale et les résultats sont repris dans le tableau II ci-après.
La structure des composés de formule II est ainsi confirmée, tandis qu'en pratique, il s'est avéré préférable de ne pas se servir des bases libres, mais de leurs sels organiques, par exemple des tartrates, citrates, oxalates, succinates ou autres, sans limitation quant à la portée de la présente invention.
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TABLEAU II
EMI8.1
<tb>
<tb> Dénomi- <SEP> Formule <SEP> Composition <SEP> (%)
<tb> nation <SEP> Formule <SEP> N <SEP> C <SEP> H
<tb> cale. <SEP> trouvé <SEP> cale. <SEP> trouvé <SEP> cale. <SEP> trouvé
<tb> G-566 <SEP> C21H20N4O3 <SEP> 14, <SEP> 88 <SEP> 14, <SEP> 79 <SEP> 67, <SEP> 00 <SEP> 66, <SEP> 91 <SEP> 5, <SEP> 35 <SEP> 5, <SEP> 38 <SEP>
<tb> G-567 <SEP> C21H20N4O3 <SEP> 14,88 <SEP> 14,83 <SEP> 67,00 <SEP> 67,09 <SEP> 5,35 <SEP> 5,40
<tb> G-555 <SEP> C22H22N4O3 <SEP> 14,35 <SEP> 14,28 <SEP> 67,67 <SEP> 67,61 <SEP> 5,68 <SEP> 5,71
<tb> G-477 <SEP> C22H22N4O3 <SEP> 14,35 <SEP> 14,32 <SEP> 67,67 <SEP> 67, <SEP> 64 <SEP> 5, <SEP> 68 <SEP> 5, <SEP> 72 <SEP>
<tb> G-568 <SEP> C23H24N4O3 <SEP> 13,85 <SEP> 13,90 <SEP> 68,30 <SEP> 68,27 <SEP> 5,98 <SEP> 6,03
<tb> G-569 <SEP> C23H24N403 <SEP> 13,85 <SEP> 13,88 <SEP> 68,30 <SEP> 68,33 <SEP> 5, <SEP> 98 <SEP> 6,
<SEP> 00 <SEP>
<tb> G-570 <SEP> C24H26N403 <SEP> 13, <SEP> 38 <SEP> 13, <SEP> 41 <SEP> 68, <SEP> 88 <SEP> 68, <SEP> 91 <SEP> 6, <SEP> 26 <SEP> 6, <SEP> 30 <SEP>
<tb> G-571 <SEP> C24H26N403 <SEP> 13, <SEP> 38 <SEP> 13, <SEP> 37 <SEP> 68, <SEP> 88 <SEP> 68, <SEP> 93 <SEP> 6, <SEP> 26 <SEP> 6, <SEP> 31 <SEP>
<tb> G-572 <SEP> C24H24N4O3 <SEP> 13, <SEP> 45 <SEP> 13, <SEP> 49 <SEP> 69, <SEP> 21 <SEP> 69, <SEP> 17 <SEP> 5, <SEP> 80 <SEP> 5, <SEP> 85 <SEP>
<tb> G-573 <SEP> C24H24N403 <SEP> 13,45 <SEP> 13,50 <SEP> 69,21 <SEP> 69,15 <SEP> 5,80 <SEP> 5,85
<tb>
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Activité pharmacologique in vitro
Les composés de la présente invention ont été essayés pour vérifier leur intervention dans les mécanismes de la fonction se rapportant aux plaquettes.
En particulier, les expériences in vitro ont tendu à révéler l'effet sur l'agglutination des plaquettes, provoquée par divers inducteurs, selon la méthode de Born, avec les modalités relatives bien connues des spécialistes de la technique.
C'est ainsi qu'a été induite l'agglutination dans
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un"plasma riche en plaquettes (PRP)"humain, à l'aide d'adénosine-diphosphate (ADP) à la concentration de 2. et on a contrôlé ensuite les paramètres normaux de l'agglutination après incubation du PRP avec les composés de la présente invention pris aux concentrations finales de 10 et 5. 10" M, en opérant à 370C pendant 30 minutes, en comparaison avec une épreuve de contrôle.
Dans les comparaisons d'un tel agent d'agglutination, à savoir de l'ADP, il y a eu une certaine réduction de l'ampleur maximale de l'agglutination (AM) seulement à la concentration plus élevée (5. 10-4 M) des composés de la présente invention, lesquels, par ailleurs, n'ont pas interféré de manière statistiquement significative sur la vitesse d'agglutination ("slopen ou pente).
Un effet plus remarquable a été mis en lumière dans les comparaisons des autres agents d'agglutination tels
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que l'adrénaline à la concentration de a M et surtout l'acide arachidonique à la concentration de 1 mM ; dans ces cas, les composés de la présente invention, pris à la concentration finale de 5. 10-4 M, ont provoqué une augmen- tation de 127,7 % du temps de latence de l'onde secondaire d'adrénaline (2 WLT) et une réduction de 10 % de l'ampleur maximale de l'agglutination (avec P < 0, 05) ;
dans les comparaisons de l'acide arachidonique, il y a eu une augmentation marquée du temps de latence ("lag time") égale à
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68 % (avec P < 0, 05), une réduction de 36,8 % de la pente ("slopen), indices d'une réactivité réduite, quant aux plaquettes, de l'agent d'agglutination, et une diminution consistante de l'amplitude maximale de l'onde d'agglutination secondaire.
Ces expériences, prises avec leurs résultats, comme exposé ci-dessus, font prévoir une action spécifique au niveau de la voie biosynthétique des prostaglandines à partir de l'acide arachidonique : voie biosynthétique qui, dans les plaquettes, conduit en même temps à la formation de thromboxane, comme il est bien connu des spécialistes.
Par conséquent, on a effectué les études suivantes sur les niveaux de la production plaquettaire du malonodialdéhyde (MDA) et du thromboxane (A2) en déterminant le TX B2 (Kit Biodata, méthode radio-immunologique), sur du PRP humain, stimulé avec diverses concentrations d'acide arachidonique, selon le procédé de Smith modifié par Villa et coll. Dans le tableau III suivant, on a reporté, par exemple, l'effet du composé G-555 à diverses concentrations.
TABLEAU III
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<tb>
<tb> G-555 <SEP> MDA <SEP> 8 <SEP> TX <SEP> B2
<tb> Concentration <SEP> (nanomoles/3. <SEP> 10 <SEP> (nanogrammes/
<tb> finale <SEP> plaquettes) <SEP> ml)
<tb> témoin <SEP> 2, <SEP> 40 <SEP> 1.250
<tb> 5. <SEP> 10-6 <SEP> M <SEP> 2, <SEP> 10 <SEP> 850
<tb> 5. <SEP> 10-5 <SEP> M <SEP> 0, <SEP> 75 <SEP> 390
<tb> 5. <SEP> 10-4 <SEP> M <SEP> 0, <SEP> 68 <SEP> 65
<tb>
Activité pharmacologique in vivo
Le comportement in vitro a été confirmé par le résultat d'essais in vivo sur le lapin. A titre d'exemple significatif, le composé G-555 a été administré par voie orale à la dose de 20 mg/kg dans une suspension de gomme arabique, comme cela sera exposé dans le tableau IV.
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Pour l'obtention des résultats, on a effectué les essais suivants : - agglutination des plaquettes par l'acide arachidonique ; - dosage du MDA (méthode de Smith modifiée par la deman- deresse) après activation des plaquettes par l'acide arachidonique ; - dosage du TX B2 sérique, avant et après l'administra- tion.
TABLEAU IV Lapin : composé G-555 ; 20 mg/kg, administrés per os I-Agglutination plaquettaire ex vivo selon Born ; acide 1 mM ; comparaison avant et après traitement
EMI11.1
<tb>
<tb> "Lag <SEP> time""Slope"Amplitude <SEP> max.
<tb>
211 <SEP> : <SEP> ! <SEP> : <SEP> 63 <SEP> 284 <SEP> ¯ <SEP> 35 <SEP> 12 <SEP> 1,5 <SEP> 11¯ <SEP> 0,8 <SEP> 46¯ <SEP> 6,3 <SEP> 29 <SEP> ¯ <SEP> 2,8
<tb> (+ <SEP> 34, <SEP> 6 <SEP> %) <SEP> (-9, <SEP> 1%) <SEP> (-37,0 <SEP> %)
<tb> II-Production <SEP> de <SEP> MDA <SEP> plaquettaire <SEP> (nanomoles/10e <SEP> plaquettes) <SEP> ; <SEP> comparaison <SEP> avant <SEP> et <SEP> après <SEP> traitement
<tb> Valeur <SEP> Valeur <SEP> après <SEP> Pourcentage <SEP> de
<tb> initiale <SEP> traitement <SEP> variation <SEP>
<tb> 5, <SEP> 8 <SEP> 1, <SEP> 22 <SEP> 4, <SEP> 72 <SEP> 1, <SEP> 17-18, <SEP> 6 <SEP>
<tb> III-Thromboxane <SEP> sérique <SEP> (TX <SEP> B, <SEP> nanogrammes/ml) <SEP> ;
<SEP>
<tb> comparaison <SEP> avant <SEP> et <SEP> après <SEP> traitement
<tb> Valeur <SEP> Valeur <SEP> après <SEP> Pourcentage <SEP> de
<tb> initiale <SEP> traitement <SEP> variation
<tb> 450,0 <SEP> ¯ <SEP> 81, <SEP> 2 <SEP> 312, <SEP> 5 <SEP> + <SEP> 27, <SEP> 1-30, <SEP> 6
<tb>
Les résultats obtenus indiquent donc que le composé G-555 et, de façon analogue, les autres composés de la présente invention révèlent un net effet d'inhibition de la fonction plaquettaire intervenant au niveau du métabolisme endo-plaquettaire des prostaglandines (activité maximale avec activation par l'acide arachidonique, avec réduction de la production de MDA), et en particulier au niveau de la synthèse du thromboxane ou au niveau des
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récepteurs du thromboxane sur les plaquettes, selon un mécanisme bien connu des spécialistes,
mais cette action n'était pas prévisible sur la base des caractéristiques structurelles des composés décrits dans la présente invention, en se rapportant aux caractéristiques des composés déjà connus et actifs dans un sens analogue.
L'hypothèse surprenante d'un tel mécanisme se trouve confirmée par le fait qu'en employant in vitro les composés de la présente invention à des concentrations plus basses, l'effet de réduction de la production de malonodialdéhyde tend à se minimiser mais persiste, de préférence la diminution de la production de thromboxane.
De tels résultats fournissent donc la preuve d'une action sélective sur la thromboxane-synthétase plutôt qu'un effet global ou précoce sur la voie de la biosynthèse prostaglandinique. Ceci permet de prévoir l'emploi des composés de la présente invention dans tous les cas cliniques dans lesquels il est nécessaire, de façon urgente, d'influer, avec des dosages convenables, sur une diminution rapide de l'agglutinabilité des plaquettes dans le sang.
Analyse toxicologique
Les composés de la présente invention ont été soumis à des épreuves de toxicité aiguë qui s'est révélée assez basse par rapport à l'activité pharmacologique énoncée ciavant, en mettant en évidence une symptomatologie surtout dépressive.
On a obtenu les résultats suivants : - DL50 i. p. chez la souris = 1500 mg/kg - DL50 i. p. chez le rat = 1400 mg/kg - du50 per os chez le rat = 3000 mg/kg.
Emploi pharmaceutique
Les nouveaux médicaments décrits dans la présente invention peuvent donc être employés dans l'usage clinique pour l'administration orale sous forme de comprimés, de
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pilules, de granules, de capsules, de gouttes, de sirop ou d'autres formes médicamenteuses convenant dans ce domaine.
Ils peuvent être employés pour l'administration rectale sous forme de suppositoires et pour l'administration parentérale sous forme de solutions injectables. Dans tous les cas, ils seront associés à des véhicules et à des excipients évidemment connus des spécialistes.
La posologie journalière du principe actif antiagglutinant des plaquettes à action rapide, par administration dans l'usage clinique sous l'une ou plusieurs des formes pharmaceutiques susdites, correspond de préférence, mais sans limitation, aux gammes ci-après : a) 500-1500 mg/jour par voie orale ; b) 50-500 mg/jour par voie intramusculaire ; c) 10-150 mg/jour par voie intraveineuse ; d) 300-1250 mg/jour par voie rectale.
Les quantités les plus convenables du principe actif pour une dose orale unique sont de 250 mg et de 500 mg, toujours en association avec des excipients pharmaceutiques usuels, la voie orale étant considérée comme la mieux adaptée pour l'administration du médicament dans la majorité des cas.