BE1031361B1

BE1031361B1 - Utilisation d'une composition comprenant une matrice extracellulaire neo-synthetisee pour le traitement du cancer, en particulier pour l'inhibition de la viabilite, de la migration et de la proliferation du cancer

Info

Publication number: BE1031361B1
Application number: BE20235127A
Authority: BE
Inventors: Denis Dufrane; Hara Episkopou
Original assignee: Novadip Biosciences
Priority date: 2023-02-20
Filing date: 2023-02-20
Publication date: 2024-09-23
Also published as: AU2024224059A1; BE1031361A1; CN120569204A; WO2024175520A1

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'une composition comprenant une matrice extracellulaire néo-synthétisée pour le traitement du cancer, en particulier pour l'inhibition de la viabilité, de la migration et de la prolifération du cancer.

Description

UTILISATION DUNE COMPOSITION COMPRENANT UNE = MATRICE

EXTRACELLULAIRE NEO-SYNTHETSEE POUR LE TRAITEMENT DU

CANCER, EN PARTICULIER POUR LINHISITION DE LA VIABILITE, DE LA

MIGRATION ET DE LA PROLIFERATION DU CANCER

DOMAINE DE L'INVENTION

Laprésente invention concerne l'utilisation du matrisome pour le traitement du cancer, en particulier pour l'inhibition de la viabilité, de la migration et de la prolifération des cellules tumorales. La présente invention concerne également l'implantation locale et les injections locales de matrisome pour le traitement du cancer.

CONTEXTE

Wo2021105404A1 à Novadip Biosciences divulgue des biomatériaux stériles et desséchés comprenant des cellules différenciées dévitalisées ayant des propriétés de régénération et/ou de réparation des tissus. Les biomatériaux comprennent également un matériau particulaire. Les cellules et le matériau particulaire sont incorporés dans une matrice extracellulaire néo-synthétisée. Le matériau particulaire est de préférence de la gélatine, un matériau céramique ou une matrice osseuse déminéralisée (DBM). Parmi une longue liste de troubles, le cancer est également décrit, y compris le cancer du sein, le cancer de la peau et le cancer des os. Toutefois, l'inhibition du cancer n'est illustrée qu'en ce qui concerne l'exosome. Par conséquent, seule l'utilisation anticancéreuse de l'extrait extracellulaire, c'est-à-dire des vésicules extracellulaires, a été illustrée.

VL20221125:5A1 à Novadip Biosciences divulgue des extraits cellulaires et/ou extracellulaires obtenus à partir d'une culture tridimensionnelle sans échafaudage de cellules matures et d'un matériau particulaire pour prévenir et/ou traiter le cancer. Les cellules matures sécrètent la matrice extracellulaire néo-synthétisée. Les cellules matures et le matériau particulaire sont noyés dans la matrice extracellulaire néo-synthétisée. Les _ extraits comprennent en outre un support pharmaceutiquement acceptable. Cependant, l'inhibition du cancer n'est illustrée que par rapport aux vésicules extracellulaires isolées, c'est-à-dire le surnageant, également appelé exosome. Par conséquent, seule l'utilisation anticancéreuse de l'extrait extracellulaire, c'est-à-dire des vésicules extracellulaires, a été illustrée.

COURTE DESCRIPTION DE L'INVENTION

Les inventeurs actuels ont découvert de manière surprenante que l'administration de matrice extracellulaire néo-synthétisée desséchée et dévitalisée inhibe sensiblement la viabilité, la migration et la prolifération des cellules cancéreuses. Les présents inventeurs ont également découvert que la matrice extracellulaire néo-synthétisée peut agir comme un support pour les protéines et les miARN qui inhibent la viabilité, la migration et la prolifération des cellules cancéreuses.

Enconséquence, un premier aspect de l'invention est une composition comprenant : = des cellules différenciées dévitalisées ; = Matrice extracellulaire tridimensionnelle néo-synthétisée comme véhicule de composants bioactifs choisis dans le groupe constitué par les protéines, les ARNm, les ARNm, les lipides, les vésicules extracellulaires ; = un matériau particulaire ; pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du cancer ; caractérisé en cela : = les cellules différenciées ont sécrété la matrice extracellulaire néo-synthétisée tridimensionnelle avant la dévitalisation ; et = les cellules différenciées et le matériau particulaire sont incorporés dans la matrice extracellulaire tridimensionnelle néo-synthétisée.

Dans un autre aspect, la composition est utilisée pour : = inhiber la viabilité des cellules cancéreuses, = inhiber la prolifération des cellules cancéreuses ; = inhiber la migration des cellules cancéreuses ; = _inhiber la formation de colonies de cellules cancéreuses ; = Ou toute combinaison de ceux-ci.

Dans un autre aspect, la composition est : = déshydraté, de préférence par lyophilisation, = réduit en taille, de préférence par broyage jusqu'à une distribution volumétrique de la taille des particules comprise entre 100 et 5000 micromètres, telle que mesurée par granulométrie par diffraction laser ; et « stérilisé, de préférence par irradiation gamma.

Dans un autre aspect, la composition est exempte d'échafaudages externes.

Dans un autre aspect, les cellules différenciées dévitalisées sont dérivées de cellules souches, en particulier de cellules souches mésenchymateuses, de préférence de cellules souches dérivées du tissu adipeux.

Dans un autre aspect, les cellules différenciées sont choisies dans le groupe comprenant ou constitué d'ostéoblastes, d'ostéocytes, de chondroblastes, de chondrocytes, de kératinocytes, de myofibroblastes, de cellules épithéliales, de cellules endothéliales, d'adipocytes, de cellules neurales et de leurs précurseurs, et de préférence, ce sont des cellules de tissus mous, des chondroblastes ou des ostéoblastes.

Dans un autre aspect, la composition comprend la matrice extracellulaire néo-synthétisée dans une teneur de 0,001 % en poids à 10 % en poids, de préférence de 0,01 % en poids à 7,5% en poids, encore plus préférablement de 0, 1 % en poids à 5 % en poids par rapport au poids total de la composition.

Dans un autre aspect, les cellules différenciées dévitalisées sont dérivées de cellules souches.

Dans un autre aspect, les cellules différenciées dévitalisées sont dérivées de cellules souches choisies dans le groupe constitué par : = les cellules souches pluripotentes (CSP) telles que les cellules souches embryonnaires (CSE) ou les cellules souches pluripotentes induites (CSP) ; = des cellules souches adultes telles que les cellules souches hématopoiétiques (CSH), les cellules souches cutanées (CSS), les cellules souches neurales (CSN) ‘et = des cellules souches mésenchymateuses (CSM), de préférence dérivées de tissu adipeux, de sang périphérique ou de placenta, et de préférence sont des cellules souches mésenchymateuses.

Dans un autre aspect, la composition est sans échafaudage.

Dans un autre aspect, le matériau particulaire est choisi dans le groupe constitué par = un matériau organique, y compris la matrice osseuse déminéralisée (DBM), la gélatine, l'agar/agarose, les alginates, le chitosan, le sulfate de chondroitine, le collagène, l'élastine ou les peptides de type élastine (ELP), le fibrinogène, la fibrine, la fibronectine, les protéoglycanes, les protéoglycanes de type héparane sulfate,

l'acide hyaluronique, les polysaccharides, les laminines et les dérivés de la cellulose ; = composé de calcium ; = un polymère, y compris les polyanhydrides, l'acide polylactique (PLA), le poly(acide lactique-co-glycolique) (PLGA), [oxyde de polyéthylène/polyéthylène glycol (PEO/PEG), le poly(alcool vinylique) (PVA), les polymères à base de fumarate tels que, par exemple le fumarate de polypropylène) (PPF) ou le fumarate de polypropylène-co-éthylène glycol) (P(PF-co-EG)), le fumarate d'oligopolypthylène glycol) (OPF), le poly(aldéhyde guluronate) (PAG), la polyp- vinyl pyrrolidone) (PNVP), ou des combinaisons de ceux-ci ; =» un gel, y compris un gel oligopeptidique auto-assemblable, un microgel, un nanogel, un gel particulaire, un hydrogel, un gel thixotrope, un xérogel, un gel réactif, ou des combinaisons de ceux-ci ; =" un cremier ; et = Toute combinaison de ces elements.

Dans un autre aspect, le materiau particulaire est de la gelatine, et encore plus preferablement des perles de gelatine.

Dans un autre aspect, la composition comprend en outre un support pharmaceutiquement acceptable.

Dans un autre aspect, le cancer est un cancer solide choisi dans le groupe comprenant, ou consistant en, un cancer des os, un cancer du cerveau, un cancer de la peau, un cancer du sein, un cancer du système nerveux central, un cancer du col de l'utérus, un cancer du tractus aérodigestif supérieur, un cancer colorectal, un cancer de l'endomètre, un cancer des cellules germinales, un cancer de la vessie, un cancer du rein, un cancer du larynx, un cancer du foie, un cancer du poumon, un neuroblastome, un cancer de l'oesophage, un cancer de l'ovaire, un cancer du pancréas, un cancer de la plèvre, un cancer de la prostate, un rétinoblastome, un cancer de l'intestin grêle, un sarcome des tissus mous, un cancer de l'estomac, un cancer des testicules et un cancer de la thyroïde, et de préférence un cancer des os ou toute métastase de celui-ci ou un cancer de la peau.

Dans un autre aspect, la composition est administrée 2 comme un implant local ; = par voie topique, de préférence sous forme de patch transdermique ; ou

° BE2023/5127 =» par injection, de préférence sous la forme d'une suspension injectable.

Un autre aspect de l'invention est un implant local, un patch transdermique ou une suspension injectable comprenant la composition de l'invention pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du cancer, en particulier pour une utilisation dans l'inhibition de la viabilité, de la migration et de la prolifération des cellules cancéreuses.

DETAHLED DESCRIPTION OF THE INVENTION

L'invention est maintenant décrite plus en détail.

Cellules différenciées dévitalisées

Les cellules différenciées dévitalisées sont intégrées dans la matrice extracellulaire tridimensionnelle néo-synthétisée.

Dans un mode de réalisation, les cellules différenciées sont des cellules ostéo- différenciées, des cellules différenciées de la peau ou des cellules différenciées de la chondro. Cela signifie que les cellules différenciées ont la capacité de favoriser la formation d'os, de peau et/ou de cartilage, et/ou de maintenir les os, la peau et/ou le cartilage existants dans un état physiologique sain.

Dans un mode de réalisation, les cellules différenciées dévitalisées sont dérivées de cellules souches, telles que des cellules souches pluripotentes (PSC), par exemple des cellules souches embryonnaires (ESC) et des cellules souches pluripotentes induites (IPSC) ou des cellules souches adultes telles que des cellules souches hématopoiïétiques (HSC), des cellules souches cutanées (SSC), des cellules souches neurales (NSC) et des cellules souches mésenchymateuses (MSC). Les MSC sont présentes dans de multiples tissus, notamment le BM, le tissu adipeux, le sang périphérique et le placenta. Dans un mode de réalisation préféré, les cellules différenciées dévitalisées sont dérivées de cellules souches mésenchymateuses, de préférence de cellules souches dérivées du tissu adipeux.

Dans un mode de réalisation, les cellules différenciées sont choisies dans le groupe comprenant ou constitué d'ostéoblastes, d'ostéocytes, de chondroblastes, de — chondrocytes, de kératinocytes, de myofibroblastes, de cellules épithéliales, de cellules endothéliales, d'adipocytes, de cellules neurales et de leurs précurseurs, et de préférence sont des cellules de tissus mous, des chondroblastes ou des ostéoblastes.

Dans un mode de réalisation, le milieu de différenciation ostéogénique comprend ou consiste en un DMEM complété par de la L-alanyl-L-glutamine (Ala-Gin, également appelée 'Glutamax® ou 'Ultraglutamine®"), de la hPL, de la dexaméthasone, de l'acide ascorbique et du phosphate de sodium. Dans un mode de réalisation, le milieu de différenciation ostéogénique comprend ou consiste en du DMEM complété par de la L- alanyl-L-glutamine, du hPL, de la dexaméthasone, de l'acide ascorbique et du phosphate de sodium, et des antibiotiques, de préférence de la pénicilline, de la streptomycine, de la gentamycine et/ou de l'amphotéricine B.

Dans certains modes de réalisation, lesdites cellules sont choisies dans un groupe comprenant des cellules primaires, des cellules souches, des cellules génétiquement modifiées, et une combinaison de celles-ci.

Après dévitalisation, généralement, au plus 1% desdites cellules sont viables, de préférence au plus 0,1%, encore plus préférablement au plus 0,01%, encore plus préférablement au plus 0,001% des cellules sont viables.

Les cellules souches (exemples : cellules souches pluripotentes (PSC) telles que les cellules souches embryonnaires (ESC) et les cellules souches pluripotentes induites (IPSC) ou cellules souches adultes telles que les cellules souches hématopoïétiques (HSC), les cellules souches cutanées (SSC), les cellules souches neurales (NSC) et les cellules souches mésenchymateuses (MSC)) sont de préférence des cellules stromales mésenchymateuses. Les cellules stromales mésenchymateuses peuvent être obtenues à partir de moelle osseuse, de tissu adipeux, de placenta et de sang. Les cellules stromales mésenchymateuses sont capables de se différencier en différents types de cellules mésenchymateuses matures en fonction des conditions de différenciation.

Dans un mode de réalisation, les cellules différenciées sont des cellules souches dérivées du tissu adipeux (ASC) différenciées, de préférence des ASC différenciées en cellules choisies dans le groupe comprenant ou consistant en ostéoblastes, chondrocytes, kératinocytes, myofibroblastes, cellules épithéliales, endothéliales, conjonctives ou — neurales et adipocytes.

Dans certains modes de réalisation, les ASC sont des ASC différenciées ostéogènes, c'est-à-dire différenciées en cellules ostéogènes, en particulier en ostéoblastes.

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Dans un mode de réalisation, les CSA sont différenciées en cellules chondrogènes. Dans un mode de réalisation particulier, les CSA sont différenciées en chondrocytes. Dans un autre mode de réalisation, les ASC sont des ASC différenciées kératiniques. En d'autres termes, dans un mode de réalisation, les ASC sont différenciés en cellules kératiniques.

Dans un mode de réalisation particulier, les CSA sont différenciés en kératinocytes.

Dans un autre mode de réalisation, les ASC sont des ASC différenciées en cellules myofibroblastiques. En d'autres termes, dans un mode de réalisation, les ASC sont différenciés en cellules myofibroblastiques. Dans un mode de réalisation particulier, les

ASC sont différenciés en myofibroblastes.

Dans un autre mode de réalisation, les ASC sont des ASC différenciées en cellules endothéliales. En d'autres termes, dans un mode de réalisation, les ASC sont différenciés en cellules endothéliales. Dans un mode de réalisation particulier, les CSA sont différenciés en cellules endothéliales.

Dans un autre mode de réalisation, les ASC sont des ASC différenciées en cellules épithéliales. En d'autres termes, dans un mode de réalisation, les ASC sont différenciés en cellules épithéliales. Dans un mode de réalisation particulier, les CSA sont différenciés en cellules épithéliales.

Dans un autre mode de réalisation, les ASC sont des ASC différenciées adipogènes. En d'autres termes, dans un mode de réalisation, les CSA sont différenciés en cellules adipogènes. Dans un mode de réalisation particulier, les CSA sont différenciés en adipocytes. Dans une autre forme de réalisation, les CSA sont des CSA différenciés en cellules neurales. En d'autres termes, dans un mode de réalisation, les CSA sont différenciés en cellules neurales.

Lyophilisation

Dans un mode de réalisation, la composition est desséchée, de préférence par lyophilisation.

Réduction de la taille

Après lyophilisation, selon l'application, la taille des particules de la composition lyophilisée peut être réduite, par exemple par broyage.

Distribution des tailles

La distribution granulométrique après réduction de la taille peut être déterminée par granulométrie. La granulométrie permet de mesurer la taille des diamètres des particules.

Mesure de la taille des particules par laser

Une méthode de mesure privilégiée est la mesure de la taille des particules par laser. La mesure de la taille des particules par laser permet de mesurer des tailles comprises entre 0,05 et 900 um.

L'échantillon peut être analysé en solution (voie liquide) ou directement après lyophilisation et éventuellement réduction de taille (voie sèche).

La mesure de la taille des particules par laser en milieu humide permet de caractériser les dispersions (taille des particules élémentaires après dispersion chimique) ou les solides en suspension (taille des particules "agrégées").

Lamesure de la taille des particules par laser sec permet de caractériser les poudres dont l'agrégation initiale n'est pas détruite.

De préférence, la taille des particules est mesurée en appliquant la méthode humide, en utilisant un équipement Mastersizer, qui détermine la taille des particules par diffraction laser. Cette technique est basée sur la mesure des variations d'intensité angulaire lorsque le faisceau laser traverse l'échantillon. Parmi les paramètres statistiques les plus importants générés par une analyse de la distribution des particules figurent les percentiles. Ceux-ci indiquent dans chaque cas la taille x en dessous de laquelle se trouve une certaine quantité de l'échantillon (10% pour Dx(10), 50% pour Dx(50) et 90% pour

Dx(90)) en volume.

Dans un mode de réalisation, la taille des particules est la Dx(50) en volume.

Par exemple, une taille de particule typique peut être mesurée en appliquant des mesures de leaser humide à l'aide du Mastersizer de Malvern. Le Dx (10) (um) indique la taille x en dessous de laquelle se trouvent 10 % du total des particules analysées.

Une distribution exemplaire de la taille des particules selon l'invention est :

Granulométrie-route liquide: Dx (10) (um) 365 Ecart-type : 38

Dx (50) (um) 752 Ecart-type : 39

Dx (90) (um) 1434 Ecart-type : 144

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Stérilisation

Dans un autre mode de réalisation, la composition est stérilisée, de préférence par irradiation gamma.

Dans certains modes de réalisation, la lyophilisation du biomatériau est effectuée à une temperature d'environ 80°C, de préférence d'environ -50°C sous vide.

En pratique, la stérilisation peut être effectuée par toute méthode appropriée connue dans l'état de la technique, ou par une méthode adaptée. Des exemples non limitatifs de méthodes appropriées comprennent l'iradiation, telle que l'iradiation par faisceau d'électrons, l'irradiation par rayons X, l'irradiation par rayons gamma ou l'irradiation par rayons ultraviolets.

Dans certains modes de réalisation, ledit biomatériau stérile est obtenu par irradiation gamma, de préférence à une dose d'environ 7 kGy à environ 45 kGy, plus préférablement à température ambiante. Dans le cadre de l'invention, l'expression "environ 7 kGy à environ 45 kGy" englobe 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 265,26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 et 45 kGy.

Dans certains modes de réalisation, le biomatériau est obtenu par irradiation gamma à une dose d'environ 10 kGy à environ 40 kGy. Dans le cadre de l'invention, le terme ‘température ambiante” est destiné à désigner une température comprise entre environ 15°C et 25°C, de préférence entre 18°C et environ 22°C, ce qui englobe 18°C, 19°C, 20°C, 21°C et 22°C. Dans certains modes de réalisation, la température ambiante est une température d'environ 20°C. Les inventeurs ont observé que, malgré le fait que les échantillons soumis à une irradiation gamma ont une tendance générale à la surchauffe et à la destruction potentielle d'ingrédients précieux, l'irradiation gamma du biomatériau de l'invention peut être réalisée à température ambiante sans être affectée de manière substantielle par la surchauffe.

Dans certains modes de réalisation, l'iradiation gamma peut être effectuée à une température inférieure à environ 10°C, de préférence sur de la glace (environ 0°C). Dans le cadre de l'invention, une température inférieure à environ 10°C englobe 9,5°C, 8°C, 8,5°C, 8°C, 7,5°C, 7°C, 6,5°C, 6°C, 5°C, 4°C, 3°C, 2°C, 1°C, 0°C, -1°C, -2°C, -3°C, 4°C, -5°C, -10°C, -20°C, -30°C, -40°C, -50°C, -60°C, -70°C et -80°C.

En pratique, l'iradiation gamma peut être effectuée pendant une durée qui dépend de la taille (par exemple exprimée en mm3 ou cm3) et/ou de la quantité (par exemple exprimée en mg ou g) de biomatériau à stériliser et/ou de la dose à administrer.

Dans certains modes de réalisation, l'irradiation gamma peut être effectuée d'environ 10 secondes à environ 24 heures, de préférence d'environ 5 minutes (300 secondes) à environ 12 heures, plus préférablement, d'environ 10 minutes (600 secondes) à environ 3 heures (10 800 secondes). Dans le cadre de l'invention, l'expression "d'environ 10 sec à environ 24 h" englobe 10 sec, 12 sec, 14 sec, 16 sec, 18 sec 20 sec, 25 sec, 30 sec, 35 sec, 40 sec, 45 sec, 50 sec, 55 sec, 1 min, 1 min 30, 2 min, 2 min 30, 3 min, 3 min 30, 4 min, 4 min 30, 5 min, 6 min, 7 min, 8 min, 9 min, 10 min, 12 min, 14 min, 16 min, 18 min, 20 min, 22 min, 24 min, 26 min, 28 min, 30 min, 35 min, 40 min, 45 min, 50 min, 55 min, 1 h, 1h30, 2h, 2h30, 3h, 3h30, 4h, 4h30,5h,5h30,6h, 7h,8h, 9h, 10h, 11 h, 12 h, 13h, 14h, 15h,16h, 17 h, 18h, 19h, 20 h, 21 h, 22h, 23h et 24h.

Matrice extracellulaire (ECM) néo-synthétisée en 3 dimensions (3D)

Lamatrice extracellulaire néo-synthétisée tridimensionnelle est une matrice extracellulaire que les cellules différenciées sécrètent de manière surprenante lorsque le matériau particulaire est ajouté.

La matrice extracellulaire tridimensionnelle néo-synthétisée sert d'échafaudage. Par conséquent, aucun échafaudage externe ne doit être ajouté.

Dans un mode de réalisation, en raison de la matrice extracellulaire néo-synthétisée tridimensionnelle, les cellules différenciées - avant la dévitalisation - sont différentes des agrégats cellulaires bidimensionnels…

Ainsi, les cellules différenciées sont intégrées dans la matrice extracellulaire tridimensionnelle néo-synthétisée.

Lescellules intégrées dans l'ECM néo-synthétisé en trois dimensions sécrètent certaines protéines et miARN ayant une activité anticancéreuse.

Après dévitalisation et éventuellement réduction de taille, la matrice extracellulaire néo- synthétisée tridimensionnelle sert de support à des protéines et des miARN ayant une activité anticancéreuse.

En conséquence, dans certains modes de réalisation, la matrice extracellulaire néo- synthétisée tridimensionnelle comprend une ou plusieurs protéines matrisomales spécifiques des tissus mous ou des tissus calcifiés.

Dans un autre mode de réalisation, la matrice extracellulaire néo-synthétisée tridimensionnelle comprend une ou plusieurs protéines matrisomales et des molécules de

MIARN ayant une activité anticancéreuse.

En conséquence, la matrice extracellulaire néo-synthétisée tridimensionnelle peut être utilisée pour le traitement ou la prévention du cancer, en particulier pour l'inhibition de la viabilité, de la migration ou de la prolifération des cellules cancéreuses.

Protéines sécrétées ayant une activité anticancéreuse

Parmi les exemples de protéines à activité anticancéreuse sécrétées par les cellules différenciées présentes dans la matrice extracellulaire néo-synthétisée et impliquées dans la régulation positive des voies de mort cellulaire dans le traitement de l'ostéosarcome (OS) telles que l'apoptose, l'autophagie et la nécroptose, on peut citer :

Nom de la protéine Nom de l'entrée Voies de mort cellulaire impliquées dans le traitement de l'OS (Gene

Ontology) : régulation positive de la phase

Thrombospondine-1 TSP1_HUMAN a d'exécution de l'apoptose a régulation positive de la phase

Décorine PGS2_HUMAN a d'exécution de l'apoptose régulation positive de l'activité endopeptidase de type cystéine

Caveolin-1 CAV1_HUMAN | PSP ve 7 impliquée dans la phase d'exécution de l'apoptose

Protéine disulfure- régulation positive de la voie de ; PDIA3_HUMAN EE | a isomerase A3 signalisation apoptotique extrinsèque

Déglyaseur de ; u _ régulation positive de la voie de protéines/acides PARK/7_HUMAN 1 a u signalisation apoptotique extrinsèque nucléiques DJ-1

Ontology) :

Protéine ribosomique régulation positive de la voie de

RS3_HUMAN 40S S3 signalisation apoptotique extrinsèque

Protéine 1 du canal 11 © régulation positive de la voie de sélectif anionique VDAC1_HUMAN 1 signalisation apoptotique extrinsèque dépendant du voltage

Prolyl endopeptidase régulation positive de la voie de

SEPR_HUMAN

FAP signalisation apoptotique extrinsèque

Protéine du groupe à régulation positive de la voie de u HMGB1_ HUMAN 2 haute mobilité B1 signalisation apoptotique extrinsèque régulation positive de la voie de

Protéine PML PML_HUMAN signalisation apoptotique extrinsèque régulation positive de la voie de

ADP/ATP translocase 2 | ADT2 HUMAN signalisation apoptotique extrinsèque

Phosphoprotéine régulation positive de la voie de

PEA15 HUMAN De astrocytaire PEA-15 signalisation apoptotique extrinsèque

Sous-unité réglementaire

A alpha de la ; _ == u régulation positive de la voie de sérine/thréonine-protéine | 2AAA HUMAN 12 © a signalisation apoptotique extrinsèque phosphatase 2A 65 kDa isoforme

Protéine kinase à

PAK2_HUMAN régulation positive de l'autophagie sérine/thréonine PAK 2

Prostacycline synthase | PTGIS_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Cible de la protéine Myb ; u ; TOM1_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Angiotensinogène ANGT_ HUMAN régulation positive de l'autophagie

Ontology) :

Caténine alpha-1 CTNA1_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Protéine LYRIC LYRIC_ HUMAN régulation positive de l'autophagie

Protéine kinase 3 activée par des agents MKO3_HUMAN régulation positive de l'autophagie mitogènes

Tri de la nexin-18 SNX18_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Régulateur de chaperons moléculaires | BAG3 HUMAN régulation positive de l'autophagie de la famille BAG 3

Sous-unité catalytique de la sérine/thréonine- u

N PP1A_HUMAN régulation positive de l'autophagie protéine phosphatase

PP1-alpha

Sous-unité bêta de l'acétylnydrolase IB du ; u a PA1B2_HUMAN régulation positive de l'autophagie facteur d'activation des plaquettes sanguines

Sous-unité alpha de la protéine de liaison aux N

GNAI3_ HUMAN régulation positive de l'autophagie nucléotides de la guanine G(k)

Poly [ADP-ribose] ; _ ; PARP1_HUMAN régulation positive de l'autophagie polymérase 1

Endophiline-B1 SHLB1_HUMAN régulation positive de l'autophagie

E3 UFM1-protéine ligase ; u ; UFL1_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Ontology) :

Protéine kinase 1

ROCK1_HUMAN régulation positive de l'autophagie associée à Rho

Hème oxygénase 1 HMOX1_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Protéine 1 liée à la La LARP1_HUMAN régulation positive de l'autophagie

OPTN_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Tri de la nexine-4 SNX4_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Cyclin-Y CCNY_HUMAN régulation positive de l'autophagie

Facteur d'élongation de régulation positive du processus

SPT5H_HUMAN la transcription SPT5 nécroptotique

En conséquence, dans un autre aspect, la composition de la présente invention comprend une ou plusieurs des protéines mentionnées dans le tableau ci-dessus.

MiRNA sécrétés ayant une activité anticancéreuse

Des exemples de miARN à activité anticancéreuse sécrétés par les cellules différenciées et présents dans la matrice extracellulaire néo-synthétisée sont : hsa-miR-210-3p, hsa- miR-409-3p, hsa-let-/a-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-30e-3p, hsa-let-7b-5p, hsa-miR- 3184-3p, hsa-miR-92a-3p, hsa-miR-320a, hsa-miR-24-3p, hsa-let-7d-5p, hsa-miR-193b-

Sp, hsa-miR-361-3p, hsa-miR-199a-5p, hsa-miR-25-3p, hsa-miR-181a-5p, hsa-miR- 151a-3p, hsa-miR-214-3p, hsa-miR-193a-5p, hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-154-5p, hsa-let- 7f-5p, hsa-miR-199a-3p, hsa-miR-664b-3p, hsa-miR-664a-5p, hsa-miR-3607-5p, hsa- miR-29a-3p, hsa-miR-27a-3p, hsa-miR-92b-3p, hsa-miR-199b-3p, hsa-miR-342-3p, hsa- miR-320b, hsa-miR-1291, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-130a-3p, hsa-miR-3651, hsa-miR- 103b, hsa-miR-1273g-3p, hsa-miR-30a-3p, hsa-miR-664b-5p, hsa-miR-34a-3p, hsa-miR- 125a-5p, hsa-miR-145-5p, hsa-miR-664a-3p, hsa-miR-140-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR- 28-3p, hsa-miR-98-5p, hsa-miR-3609, hsa-let-7i-5p, hsa-MIR-93-5p, hsa-miR-146b-5p, hsa-miR-374c-3p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-34a-5p, hsa-miR-337-3p, hsa-miR-10a-5p, hsa-let-7g-5p, hsa-miR-222-3p, hsa-miR-4449, hsa-miR-22-3p, hsa-miR-191-5p, hsa-

miR-3074-5p, hsa-miR-6516-3p, hsa-miR-4668-5p, hsa-miR-574-3p, hsa-miR-424-5p, hsa-let-7i-3p, hsa-miR-24-2-5p, hsa-miR-199b-5p, hsa-miR-424-3p, hsa-miR-103a-3p, hsa-miR-29b-1-5p, hsa-miR-423-5p, hsa-miR-328-3p, hsa-miR-324-5p, hsa-miR-335-5p, hsa-miR-574-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-MmiR-660-5p, hsa-miR-425-5p, hsa-miR-23b-3p, hsa-miR-23a-3p, hsa-miR-185-5p, hsa-miR-4461, hsa-miR-196a-5p, hsa-let-7d-3p, hsa- miR-374b-5p, hsa-miR-127-3p, hsa-let-7c-5p, hsa-miR-423-3p, hsa-miR-196b-5p, hsa- miR-221-3p, hsa-miR-382-5p, hsa-miR-619-5p, hsa-miR-3613-5p, hsa-miR-3653-5p, hsa-miR-19b-3p, hsa-miR-99b-5p, hsa-miR-376c-3p, hsa-miR-99b-3p, hsa-miR-663b, hsa-miR-495-3p, hsa-miR-454-3p, et une combinaison de ceux-ci.

Enconséquence, dans un autre aspect, la composition de la présente invention comprend un ou plusieurs des miRNA mentionnés ci-dessus, choisis dans un groupe constitué de.

De préférence, la composition de la présente invention comprend un ou plusieurs

MIRNA(s) choisi(s) dans un groupe constitué de : MIRNA choisi dans le groupe constitué de MiR-140, MIR-199a, miR-34a, MIR-335 et MIR-505.

Les critères et conventions pour l'identification et la nomenclature des miRNA ont été décrits dans Ambros et al. (A uniform system for microRNA annotation. RNA 2003 9(3):277-279). Les séquences de miRNAs peuvent être récupérées dans la base de données miRbase (http:/\www.mirbase.org/) ou la base de données miRDB (http:/\www.mirdb.org/).

En pratique, le profil d'ARN du peut être évalué par toute méthode appropriée connue dans l'art, ou toute méthode adaptée de celle-ci. À titre d'exemple, l'ARN peut être extrait, par exemple au moyen d'un kit commercial (tel que le kit miRNeasy de Qiagen®) ; et séquencé, par exemple au moyen d'un système de séquençage à haut débit (tel que le système NextSeq 500 d'Ilumina®). À titre d'exemple, on peut utiliser le réactif de lyse

Qiazol (Qiagen®, Hilden, Allemagne) et un homogénéisateur Precellys (Bertin® instruments, Montigny-le-Bretonneux, France). Les ARNs peuvent être purifiés en utilisant le Rneasy mini kit (Qiagen®, Hilden, Allemagne) avec une digestion DNase supplémentaire sur colonne selon les instructions du fabricant.

La qualité et la quantité d'ARN peuvent être déterminées à l'aide d'un spectrophotomètre (Spectramax® 190, Molecular Devices®, Californie, USA). L'ADNc peut être synthétisé à partir de 0,5 ug d'ARN total à l'aide du kit RT? RNA first strand (Qiagen®, Hilden,

Allemagne) pour les profils d'expression des gènes par le biais de matrices PCR

16 BE2023/5127 personnalisées (Customized Human Osteogenic and angiogenic RT? Profiler Assay -

Qiagen®, Hilden, Allemagne). Le système ABI Quantstudio 5 (Applied Biosystems®) et le mastermix SYBR Green ROX (Qiagen®, Hilden, Allemagne) peuvent être utilisés pour la détection du produit d'amplification. La quantification peut être obtenue selon la méthode

AACT. Le résultat final de chaque échantillon peut être normalisé par rapport aux moyennes du niveau d'expression des gènes d'entretien (par exemple ACTB, B2M et

GAPDH).

Sans échafaudage

Par conséquent, la composition de la présente invention est sans échafaudage. Cela signifie qu'aucun échafaudage tridimensionnel exteme n'est utilisé pendant la différenciation.

Matière particulaire

Le terme "matériau particulaire" tel qu'il est utilisé ici fait référence à un matériau solide sous forme de particules. Dans le cadre de l'invention, le "matériau particulaire” comprend des matériaux organiques, tels que, par exemple, la matrice osseuse déminéralisée (DBM) et la gélatine ; des matériaux céramiques ; des polymères, tels que, par exemple, les polyanhydrides ; des gels, tels que, par exemple, les hydrogels ; et toute combinaison de ceux-ci.

Le matériau particulaire est de préférence choisi dans le groupe constitué par : = un matériau organique, y compris la matrice osseuse déminéralisée (DBM), la gélatine, l'agar/agarose, les alginates, le chitosan, le sulfate de chondroitine, le collagène, l'élastine ou les peptides de type élastine (ELP), le fibrnogène, la fibrine, la fibronectine, les protéoglycanes, les protéoglycanes de type héparane sulfate, l'acide hyaluronique, les polysaccharides, les laminines et les dérivés de la cellulose ; = composé de calcium ; =" un polymère, y compris les polyanhydrides, l'acide polylactique (PLA), le poly(acide lactique-co-glycolique) (PLGA), l'oxyde de polyéthylène/polyéthylène glycol (PEO/PEG), le poly(alcoo! vinylique) (PVA), les polymères à base de fumarate tels que, par exemple le fumarate de polypropylène) (PPF) ou le fumarate de polypropylène-co-éthylène

17 BE2023/5127 glycol) (P(PF-co-EG)), le fumarate d'oligopolypthylène glycol) (OPF), le poly(aldéhyde guluronate) (PAG), la polyp- vinyl pyrrolidone) (PNVP), ou des combinaisons de ceux-ci ; =» ungel y compris un gel oligopeptidique auto-assemblable, un microgel, un nanogel, un gel particulaire, un hydrogel, un gel thixotrope, un xérogel, un gel réactif, ou des combinaisons de ceux-ci ; ou =" -uncrémier; et = Toute combinaison de ces éléments.

Le matériau particulaire est de préférence de la gélatine, et plus encore des perles de gélatine.

Dans un mode de réalisation, la gélatine de l'invention est une gélatine animale, de préférence une gélatine de mammifère, plus préférablement une gélatine porcine.

Dans le présent document, le terme "gélatine porcine" peut être remplacé par "gélatine de porc” ou "gélatine de porc". Un exemple disponible dans le commerce est Cultispher. Dans un mode de réalisation, la gélatine est de la gélatine de peau porcine.

Dans certains modes de réalisation, ladite gélatine se présente sous la forme de particules.

De préférence, les particules de gélatine ont un diamètre moyen volumétrique compris entre environ 50 micromètres et environ 1 000 micromètres, tel que mesuré par granulométrie par diffraction laser, de préférence avec un Malvem Mastersizer. Dans le cadre de l'invention, l'expression "d'environ 50 micromètres à environ 1 000 micromètres" englobe 50 micromètres, 60 micromètres, 70 micromètres, 80 micromètres, 90 micromètres, 100 micromètres, 150 micromètres, 200 micromètres, 250 micromètres, 300 micromètres, 350 micromètres, 400 micromètres, 450 micromètres, 500 micromètres, 550 micromètres, 600 micromètres, 650 micromètres, 700 micromètres, 750 micromètres, 800 — micromètres, 850 micromètres, 900 micromètres, 950 micromètres et 1 000 micromètres.

Dans un mode de réalisation, la gélatine est ajoutée à une concentration comprise entre environ 0,1 cm3 et environ 5 cm3 pour un récipient de 150 cm2, de préférence entre environ 0,5 cm3 et environ 4 cm3, plus préférablement entre environ 0,75 cm3 et environ 3 cm3. Dans un mode de réalisation, la gélatine est ajoutée à une concentration allant d'environ 1 cm3 à environ 2 cm3 pour un récipient de 150 cm2. Dans un mode de réalisation, la gélatine est ajoutée à une concentration d'environ 1 cm3, 1,5 cm3 ou 2 cm3 pour un récipient de 150 cm2. Dans le cadre de l'invention, l'expression "0,1 cm3 à environ

18 BE2023/5127 cm3” englobe 0,1 cm3, 0,2 cm3, 0,3 cm3, 0,4 cm3, 0.5 cm3, 0,6 cm3, 0,7 cm3, 0,8 cm3, 0,9 cm3, 1,0 cm3, 1,5 cm3, 2,0 cm3, 2,5 cm3, 3,0 cm3, 3,5 cm3, 4,0 cm3, 4,5 cm3 et 5,0 cm3.

Dans un mode de réalisation, le matériau particulaire est incorporé dans la matrice 5 extracellulaire néo-synthétisée sécrétée.

Matière particulaire à base de calcium

Dans un mode de réalisation, les matériaux particulaires sont des particules de céramique.

Dans un mode de réalisation, les particules céramiques peuvent être des perles, de la poudre, des sphères ou des microsphères.

Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention sont des particules de phosphate de calcium (CaP), de carbonate de calcium (CaCO3), de sulfate de calcium ou d'hydroxyde de calcium (Ca[OH]2), ou des combinaisons de ceux-ci.

Des exemples de particules de phosphate de calcium comprennent, sans s'y limiter, l'hydroxyapatite (HA, Ca10(PO4)6(OH)2), le phosphate tricalcique (TCP, Ca3[PO4]2), phosphate a-tricalcique (a-TCP, (a-Ca3(PO4)2), phosphate B-tricalcique (B-TCP, B-

Ca3(PO4)2), phosphate tétracalcique (TTCP, Ca4(PO4)20), phosphate octacalcique (Ca8H2(PO4)6.5H20), phosphate de calcium amorphe (Ca3(PO4) 2), hydroxyapatite/B- phosphate tricalcique (HA/B-TCP), hydroxyapatite/phosphate tétracalcique (HA/T TCP), et autres.

Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention comprennent ou sont constituées d'hydroxyapatite (HA), de phosphate tricalcique (TCP), d'hydroxyapatite/B-phosphate tricalcique (HA/B-TCP), de sulfate de calcium, ou de combinaisons de ceux-ci. Dans un mode de réalisation, le matériau céramique de l'invention comprend ou est constitué d'hydroxyapatite (HA), de B-phosphate tricalcique (B-TCP), d'hydroxyapatite/B-phosphate tricalcique (HA/B-TCP), de phosphate a- tricalcique (a-TCP), de sulfate de calcium, ou de combinaisons de ceux-ci.

Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention sont des particules d'hydroxyapatite (HA). Dans un autre mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention sont des particules de B-phosphate tricalcique (B-TCP). Dans un autre mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention sont des particules d'hydroxyapatite/B- phosphate tricalcique (HA/B-TCP). En d'autres termes, dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention sont un mélange de particules d'hydroxyapatite et de phosphate B-tricalcique (appelées particules HA/B-TCP). Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention sont constituées de particules d'hydroxyapatite et de particules de phosphate B-tricalcique (appelées particules HA/B-TCP).

Dans un mode de réalisation, les particules céramiques, de préférence des particules HA,

B-TCP et/ou HA/B-TCP, ne sont pas structurées pour former une forme 3D prédéfinie ou un échafaudage, comme par exemple un cube.

Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention, de préférence les particules HA, B-TCP et/ou HA/B-TCP, sont plus grandes qu'environ 50 um, de préférence plus grandes qu'environ 100 um . Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention, de préférence les particules HA, B-TCP et/ou HA/B-TCP, ont un diamètre moyen supérieur à environ 50 um, de préférence supérieur à environ 100 um.

Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention, de préférence des particules HA, B-TCP et/ou HA/B-TCP, ont un diamètre moyen d'au moins environ 50 um, de préférence d'au moins environ 100 um, plus préférablement d'au moins environ 150 yum. Dans un autre mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention, de préférence les particules HA, TCP et/ou HA/B-TCP, ont un diamètre moyen d'au moins environ 200 um, de préférence d'au moins environ 250 um, plus préférablement d'au moins environ 300 um.

Dans un autre mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention, de préférence les particules HA, B-TCP et/ou HA/B-TCP, ont un diamètre moyen d'au plus environ 2500 um, de préférence d'au plus environ 2000 um, plus préférablement d'au plus environ 1500 um. Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention, de préférence les particules HA, B-TCP et/ou HA/B-TCP, ont un diamètre moyen d'au plus environ 1000 um, 900 um, 800 um, 700 um ou 600 um.

Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention, de préférence les particules HA, B-TCP et/ou HA/B-TCP, ont un diamètre moyen allant d'environ 50 um à environ 1500 um, de préférence d'environ 50 um à environ 1250 um, plus préférablement d'environ 100 um à environ 1000 um. Dans un mode de réalisation, les particules céramiques de l'invention, de préférence les particules HA, B-TCP et/ou HA/B-TCP, ont un diamètre moyen allant d'environ 100 um à environ 800 um, de préférence d'environ 150 um à environ 700 um, plus préférentiellement d'environ 200 um à environ 600 um.

Dans un mode de réalisation, les particules HA/B-TCP ont un diamètre moyen volumétrique allant d'environ 50 um à environ 1500 um, de préférence d'environ 50 um à environ 1250 um, plus préférablement d'environ 100 um à environ 1000 um. Dans un mode de réalisation, les particules HA et B-TCP ont un diamètre moyen allant d'environ 100 um à environ 800 um, de préférence d'environ 150 um à environ 700 um, plus préférablement d'environ 200 um à environ 600 um, tel que mesuré par granulométrie par diffraction laser, de préférence avec un Malvern Mastersizer.

Dans un mode de réalisation, le rapport entre HA et B-TCP (rapport HA/B-TCP) dans les particules est compris entre environ 0/100 et environ 100/0, de préférence entre environ 10/90 et environ 90/10, plus préférablement entre environ 20/80 et environ 80/20. Dans un mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules va d'environ 30/70 à environ 70/30, d'environ 35/65 à environ 65/35, ou d'environ 40/60 à environ 60/40.

Dans un mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est de 0/100, c'est- à-dire que les particules sont des particules de phosphate B-tricalcique. Dans un autre mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est de 100/0, c'est-à-dire que les particules sont des particules d'hydroxyapatite. Dans un mode de réalisation, le rapport

HA/B-TCP dans les particules est d'environ 10/90. Dans un autre mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 90/10. Dans un mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 20/80. Dans un autre mode de — réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 80/20. Dans un mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 30/70. Dans un autre mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 70/30. Dans un autre mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 35/65.

Dans un autre mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 65/35. Dans un mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 40/60. Dans un autre mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 60/40. Dans un autre mode de réalisation, le rapport HA/B-TCP dans les particules est d'environ 50/50.

Matrisome "Matrisome" est utilisé pour décrire la composition comprenant, de préférence constituée de : = des cellules différenciées dévitalisées ;

= Matrice extracellulaire tridimensionnelle néo-synthétisée comme support de composés bioactifs (protéines, ARNm, miARN, lipides, vésicules extracellulaires) ; =» un matériau particulaire pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du cancer ; caractérisé en cela : = les cellules différenciées ont sécrété la matrice extracellulaire néo-synthétisée avant la dévitalisation ; et = les cellules et le matériau particulaire sont incorporés dans la matrice extracellulaire néo-synthétisée.

Vésicules extracellulaires

Dans un mode de réalisation, la composition de la présente invention ou le matrisome sont sensiblement exempts de vésicules extracellulaires. Dans un mode de réalisation, le matrisome comprend moins de 30 % en poids, de préférence moins de 20 % en poids, et encore plus préférablement moins de 10 % en poids des vésicules extracellulaires par rapport au poids sec total de la composition.

Dans un mode de réalisation, la composition comprend des vésicules extracellulaires dans une teneur de 0,001 % en poids à 10 % en poids, de préférence de 0,01 % en poids à 7,5 % en poids, encore plus préférablement de 0,1 % en poids à 5 % en poids par rapport au poids sec total de la composition.

Support pharmaceutiquement acceptable

Dans un autre aspect, la composition de la présente invention comprend un véhicule ou support pharmaceutiquement acceptable. Tel qu'utilisé ici, "véhicule pharmaceutiquement acceptable" se réfère à tout solvant, milieu de dispersion, enrobage, agent antibactérien et/ou antifongique, agent isotonique et retardateur d'absorption et similaire.

Le support pharmaceutiquement acceptable peut comprendre un ou plusieurs ingrédients choisis dans un groupe d'additifs : polypeptides ; acides aminés ; lipides ; et hydrates de carbone. Parmi les hydrates de carbone, on peut citer les sucres, y compris les monosaccharides, les di-, tri-, tétra- et oligosaccharides ; les sucres dérivés tels que les alditols, les acides aldoniques, les sucres estérifiés et similaires ; et les polysaccharides ou polymères de sucre.

Des exemples de véhicules pharmaceutiquement acceptables appropriés peuvent inclure des polypeptides tels que, par exemple, la gélatine, la caséine et autres.

Traitement ou prévention du cancer pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du cancer, en particulier pour une utilisation dans [inhibition de la viabilité, de la migration et de la prolifération des cellules cancéreuses

Les termes ‘traitement’, "traiter" ou "atténuation" font référence à des traitements thérapeutiques dont l'objectif est de prévenir ou de ralentir (diminuer) un cancer. Un sujet est "traité" avec succès si, après avoir reçu une quantité thérapeutique d'une composition selon la présente invention, l'individu présente une réduction observable et/ou mesurable du cancer, ou son absence.

Le traitement ou l'utilisation peuvent être allogéniques, xénogéniques ou autologues. De préférence, le traitement ou l'utilisation de la présente invention est allogène.

La thérapie "allogénique" ou "allogène" signifie que le donneur et le receveur sont des individus différents de la même espèce. "Autologue" signifie que le donneur et le receveur sont le même individu. "Xénogénique" signifie que le donneur est issu d'un animal d'une espèce différente de celle du receveur.

Le terme "prévention" fait référence à la prévention ou à l'évitement de l'apparition d'un — symptôme d'un trouble tissulaire, y compris un trouble de la peau, un trouble osseux et/ou un trouble du cartilage. Dans la présente invention, le terme "prévention" peut se référer à une prévention secondaire, c'est-à-dire à la prévention de la réapparition d'un symptôme ou d'une rechute d'un trouble tissulaire, y compris un trouble de la peau, un trouble osseux et/ou un trouble du cartilage. Il peut également s'agir, lorsque la maladie est un cancer, tel due, par exemple, un cancer des os, de l'apparition de métastases après le traitement et/ou l'ablation d'une tumeur. Le terme "quantité efficace" fait référence à une quantité suffisante pour obtenir des résultats bénéfiques ou souhaités, y compris des résultats cliniques. Une quantité efficace peut être administrée en une ou plusieurs fois.

Cancer

Les compositions des présentes inventions sont utiles dans le traitement ou la prévention du cancer. Dans un mode de réalisation, les compositions de la présente invention sont utiles dans un ou plusieurs des traitements suivants : = _inhiber la viabilité des cellules cancéreuses, = inhiber la prolifération des cellules cancéreuses ; = inhiber la migration des cellules cancéreuses ; = inhiber la formation de colonies cellulaires de cellules cancéreuses ; ou = toute combinaison de ceux-ci.

Dans un mode de réalisation, le cancer est un cancer solide choisi dans le groupe comprenant, ou consistant en, un cancer des os, un cancer du cerveau, un cancer de la peau, un cancer du sein, un cancer du système nerveux central, un cancer du col de l'utérus, un cancer du tractus aérodigestif supérieur, un cancer colorectal, un cancer de l'endomètre, un cancer des cellules germinales, un cancer de la vessie, un cancer du rein, un cancer du larynx, un cancer du foie, un cancer du poumon, un neuroblastome, un cancer de l'oesophage, un cancer de l'ovaire, un cancer du pancréas, un cancer de la plèvre, un cancer de la prostate, un rétinoblastome, un cancer de l'intestin grêle, un sarcome des tissus mous, un cancer de l'estomac, un cancer des testicules et un cancer de la thyroïde, et de préférence un cancer des os ou toute métastase de celui-ci ou un cancer de la peau.

Implantation locale

Dans un mode de réalisation, la composition de la présente invention est administrée sous la forme d'un implant local. En conséquence, un autre aspect de l'invention est un implant local comprenant la composition de la présente invention.

Patch

Un autre aspect de l'invention est un patch, de préférence un patch transdermique comprenant les compositions de la présente invention pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du cancer, en particulier pour une utilisation dans l'inhibition de la viabilité des cellules cancéreuses.

Un autre aspect de l'invention conceme un dispositif médical comprenant une composition selon l'invention.

Dans certains modes de réalisation, le dispositif médical est un pansement pour application locale. Dans certains modes de réalisation, le pansement peut comprendre des tissus tissés ou non tissés.

Dans certains modes de réalisation, le dispositif médical est enrobé par ou avec la composition selon la présente invention. Dans certains modes de réalisation, le dispositif médical selon l'invention est configuré pour permettre la libération contrôlée de la composition pharmaceutique. Dans certains modes de réalisation, le dispositif médical se présente sous la forme d'un patch.

Injection de liquide

Dans un autre mode de réalisation préféré, la composition est administrée sous forme d'injection ou sous la forme d'un liquide injectable ou d'une suspension injectable.

En conséquence, un autre aspect de l'invention est un liquide injectable, dans lequel la composition de l'invention est en suspension.

En conséquence, dans ce mode de réalisation, la taille de la composition comprenant la matrice extracellulaire néo-synthétisée est réduite, par exemple par broyage ou par toute autre méthode de réduction de taille appropriée.

Habituellement, à des fins d'injection, la taille volumétrique des particules de la composition est comprise entre 100 micromètres et 5000 micromètres, de préférence, entre 100 micromètres et 1000 micromètres, encore plus préférablement entre 100 micromètres et 500 micromètres, telle que mesurée par granulométrie par diffraction laser, de préférence avec le Mastersizer de Malvem .

Dans d'autres modes de réalisation, la taille volumétrique des particules de la composition injectable est comprise entre 10 micromètres et 100 micromètres, de préférence entre 25 micromètres et 75 micromètres, telle que mesurée par granulométrie par diffraction laser, de préférence avec le Malvern Mastersizer.

Méthode de traitement

Un autre aspect de la présente invention est une méthode de traitement ou de prévention du cancer comprenant l'administration d'une composition comprenant : = des cellules différenciées dévitalisées ;

= Matrice extracellulaire tridimensionnelle néo-synthétisée comme véhicule de composés bioactifs, tels que protéines, ARNm, ARNm, lipides, vésicules extracellulaires ; =» un matériau particulaire, de préférence de la gélatine pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du cancer ; caractérisé en cela : = les cellules différenciées ont sécrété la matrice extracellulaire néo-synthétisée avant la dévitalisation ; et = les cellules et le matériau particulaire sont incorporés dans la matrice extracellulaire néo-synthétisée.

Processus de fabrication

Les compositions de l'invention peuvent être fabriquées selon un procédé sans échafaudage tel qu'illustré à la figure 1 comprenant : = Collecte de cellules souches ; = Prolifération des cellules souches ; = Différenciation ostéogénique ; = L'aspersion de particules ; et = Formation de structures en 3D.

Dans un mode de réalisation, le milieu de différenciation ostéogénique comprend ou consiste en du DMEM complété par de la L-alanyl-L-glutamine, du PL, de la dexaméthasone, de l'acide ascorbique et du phosphate de sodium.

Dans un mode de réalisation, le milieu de différenciation ostéogénique comprend ou consiste en du DMEM complété par de la L-alanyl-L-glutamine, de l'hHPL, de la dexaméthasone, du phosphate ascorbique et du phosphate de sodium, et des antibiotiques, de préférence de la pénicilline, de la streptomycine, de la gentamycine et/ou de l'amphotéricine B.

Dans un mode de réalisation, le milieu de différenciation ostéogénique comprend ou consiste en du DMEM complété par de la L-alanyl-L-glutamine, du hPL (environ 5%, v/v), de la dexaméthasone (environ 1 mM), de l'acide ascorbique (environ 0,25 mM) et du — phosphate de sodium (environ 2,93 mM). Dans un mode de réalisation, le milieu de

3 BE2023/5127 différenciation ostéogénique comprend ou consiste en du DMEM complété par de la L- alanyl-L-glutamine, du hPL (environ 5%, v/v), de la dexaméthasone (environ 1 pM), de l'acide ascorbique (environ 0,25 mM) et du phosphate de sodium (environ 2,93 MM), de la pénicilline (environ 100 U/mL) et de la streptomycine (environ 100 pg/mL). Dans un mode de réalisation, le milieu de différenciation ostéogénique comprend en outre de l'amphotéricine B (environ 0,1 %).

Dans un mode de réalisation, le milieu de différenciation ostéogénique est constitué de

DMEM complété par de la L-alanyl-L-glutamine, du hPL (environ 5%, v/v), de la dexaméthasone (environ 1 pM), de l'acide ascorbique (environ 0,25 mM) et du phosphate de sodium (environ 2,93 mM). Dans un mode de réalisation, le milieu de différenciation ostéogénique comprend ou consiste en du DMEM complété par de la L-alanyl-L- glutamine, du hPL (environ 5%, v/v), de la dexaméthasone (environ 1 mM), de l'acide ascorbique (environ 0,25 mM) et du phosphate de sodium (environ 2,93 mM), de la pénicilline (environ 100 U/mL), de la streptomycine (environ 100 pg/mL) et de l'amphotéricine B (environ 0,1%).

Dans un autre mode de réalisation, les cellules, en particulier les ASC, sont différenciées en cellules chondrogéniques. En d'autres termes, dans un mode de réalisation préféré, les cellules, en particulier les ASC, sont différenciées en cellules chondrogéniques. En d'autres termes, dans un mode de réalisation préféré, les cellules, en particulier les ASC, sontdifférenciées dans un milieu chondrogénique. Dans un mode de réalisation particulier, les cellules, en particulier les ASC, sont différenciées en chondrocytes.

Dans un mode de réalisation, les structures 3D obtenues sont ensuite desséchées, de préférence par lyophilisation ("matrisome”).

Dans un mode de réalisation, la composition desséchée est ensuite stérilisée, de préférence par irradiation gamma.

COURTE DESCRIPTION DES DESSINS

La figure 1 est une représentation schématique du procédé de fabrication de la composition de la présente invention (matrisome). — Lafigure 2 montre l'effet des compositions de la présente invention (matrisome, NVDM2, exemple 2) sur la viabilité de trois lignées cellulaires OS : 143B (Figure 2A), SAOS2 (Figure

27 BE2023/5127 2B), U2OS (Figure 2C) en comparaison avec les MSC de moelle osseuse humaine (BM-

MSCs) (Figure 2D). La doxorubicine (0,1uM) a été utilisée comme traitement témoin positif et les billes de gélatine seules ont été utilisées pour la comparaison avec le traitement par

NVDM2. Tous les traitements ont été réalisés dans des plaques de 96 puits dans des transpuits. Les compositions de l'invention (NVDM2) ont été administrées à deux doses différentes : 7mg et 15mg par puits. La viabilité a été mesurée en utilisant le test de viabilité cellulaire RealTime-Glo"M MT à quatre points temporels différents à O, 24, 48, 72 heures après l'administration. Les compositions de la présente invention (matrisome, NVDM2) ont montré un impact inhibiteur dose-dépendant sur la viabilité des cellules tumorales testées qui était significativement plus fort que les billes de gélatine seules . En revanche, l'effet inhibiteur observé sur la viabilité des BM-MSCs lors du traitement avec le matrisome était significativement plus faible que dans le cas des cellules OS et similaire à l'impact observé par les billes de gélatine seules. Les données représentent les valeurs moyennes + l'écart- type du % de viabilité cellulaire après traitement, normalisées par rapport à l'échantillon non traité respectif, provenant d'un nombre n de lots différents testés pour chaque type de traitement.

La figure 3 montre l'effet des compositions de la présente invention (matrisome, NVDM2, exemple 2) sur la viabilité des lignées cellulaires d'ostéosarcome 143B. La doxorubicine (0,01uM et 0,1uM) a été utilisée comme traitement témoin positif et les billes de gélatine seules ont été utilisées pour la comparaison avec le traitement par NVDM2. Tous les traitements ont été effectués dans des plaques de 96 puits dans des transpuits. Les compositions de l'invention (NVDM2) ont été administrées à deux doses différentes : 7mg et 15mg par puits. La viabilité a été mesurée en utilisant le test biologique de viabilité CCK- 872 heures après l'administration. Les compositions de la présente invention (matrisome,

NVDM2) ont montré un fort impact inhibiteur dose-dépendant sur la viabilité des cellules tumorales confirmant les résultats présentés dans la Figure 2A. Aucun impact sur la viabilité des cellules 143B n'a été observé en présence de billes de gélatine (15mg) seules.

Les données représentent les valeurs moyennes + s.d. du % de viabilité cellulaire après — traitement, normalisées par rapport à l'échantillon non traité respectif, et proviennent d'un nombre n de lots différents testés pour chaque type de traitement.

La figure 4 montre l'effet des compositions de la présente invention sur la capacité de formation de colonies de cellules OS (matrisome, NVDM2, exemple 4). La doxorubicine

28 BE2023/5127 (0,05 uM) a été utilisée comme traitement témoin positif et les billes de gélatine seules ont été utilisées pour la comparaison avec le traitement NVDM2. Tous les traitements ont été réalisés dans des plaques de 24 puits en transpuits. Les compositions de l'invention (NVDM2) ont été administrées à deux doses différentes : 10mg et 50mg par puits. Les compositions de la présente invention (matrisome, NVDM2) ont montré un impact inhibiteur dose-dépendant sur la capacité de formation de colonies de l'OS, qui était beaucoup plus fort qu'en présence de billes de gélatine (50mg) seules. Les données représentent les valeurs moyennes + s.d. du % CFU (unités formant des colonies) après traitement, normalisées par rapport à l'échantillon non traité respectif, et ont été obtenues àpartir d'un nombre n de lots différents testés pour chaque type de traitement.

Les figures 5C et 5D montrent des images représentatives des colonies formées par les cellules 143B après 6 jours d'incubation avec ou sans traitement (matrisome, NVDM2, exemple 4). La figure 5A montre les cellules 143B non traitées. La figure 5B montre le traitement comparatif avec la Doxorubicine à 0,05 uM. La figure 5C montre l'effet du matrisome (NVDM2) à 10 mg. La figure 5D montre l'effet du matrisome (NVDM2, exemple 3) à 50 mo. La figure 5D montre le traitement comparatif avec des billes de gélatine à 50 mo.

La figure 6 montre des images représentatives de la capacité de migration des cellules d'ostéosarcome 143B en l'absence/présence de billes de gélatine par le biais d'un test biologique de grattage selon l'exemple 3. La vitesse de migration des cellules 143B n'a pas été affectée en présence des billes seules (15mg). La Figure GA montre des cellules 143B non traitées à Oh et à la Figure 6B à 24 h. La Figure 6C montre des cellules 143B traitées avec 15 mg de billes de gélatine à Oh et à la Figure 6D à 24 h.

La figure 7 montre des images représentatives de la capacité de migration des cellules d'ostéosarcome 143B en présence des compositions de la présente invention à deux doses différentes par le biais d'un essai biologique de grattage selon l'exemple 3. La migration des cellules 143B a été significativement inhibée par le NVDM2 de manière dose-dépendante. La Figure 7A montre des cellules 143B non traitées à Oh et la Figure 7Bà24htraitées avec 7mg de la composition de la présente invention (NVDM2). La figure 7C montre des cellules 143B traitées avec 15 mg de la composition de la présente invention (NVDM2) à Oh et à la figure 6B à 24 h.

La figure 8 montre la viabilité cellulaire dans le DS (poudre lyophilisée) de matrisome en comparaison avec différentes quantités du produit cellulaire 3D intermédiaire respectif (CP), en utilisant le test de viabilité cellulaire luminescent Cell Titer-Glo®. a) Corrélation entre le contenu cellulaire attendu dans l'échantillon DS testé et dans les différentes biopsies de CP (échantillons de contrôle positif). Sur la base du schéma présenté dans le graphique, le contenu cellulaire dans les biopsies de PC testées (29,1 mg-299,8 mg) correspond à 0,5-6% du nombre total attendu de cellules contenues dans la quantité testée de DS, puisque 1990 mg de DS ont été dérivés de la lyophilisation d'une biopsie de

PC pesant 4975 mg. (b) Valeurs de luminescence mesurées dans 1990mg de DS en comparaison avec les différentes biopsies de CP (RLU moyenne pour 1990mg-DS:-328.8 alors que RLU moyenne pour 29.1mg-CP DS : 1487.5). RLU : Unités de luminescence relative.

EXEMPLES

Exemple 1 : Fabrication de la composition de l'invention

NVDM2 est un produit allogène/off-the shelf, actuellement développé par Novadip

Biosciences : et est dérivé du processus du produit autologue NVD002. Le NVD-002 est produit à partir de cellules souches dérivées de l'adipose humain (hASCs) différenciées en cellules ostéogéniques combinées à des particules de gélatine dérivées de la peau de porc (Cultispher) pour produire des greffons 3D " sans échafaudage ". 1.1 Processus en amont :

Le processus de fabrication de la substance active commence après l'obtention du tissu, comme le montre la figure 1 comprenant : = Collecte de cellules souches ; = Prolifération des cellules souches ; = Différenciation ostéogénique ; =» L'aspersion de particules ; et = Formation de structures 3D

Le processus en amont comprend les 3 phases suivantes : 1.1.1 Processus en amont - phase 1 :

Isolement des cellules de la fraction vasculaire stromale (SVF) du tissu adipeux et expansion ultérieure des cellules souches dérivées de l'adipose humain (nASC) jusqu'au passage p3/p4 dans un milieu prolifératif (MP). Le stock cellulaire est cryoconservé. 1.1.2 Processus amont - phase 2 : Fabrication du produit cellulaire tridimensionnel qui comprend les étapes suivantes :

Décongélation des ASCs : La première étape du processus de fabrication des produits cellulaires NVDM2 est la décongélation des cellules à P4 à partir du stock de cellules. Les cellules sont décongelées et inoculées dans des flacons de 150 cm? dans un milieu de prolifération et rincées le jour suivant.

Phase de prolifération : Ensuite, les cellules prolifèrent jusqu'à atteindre une confluence =70% et <100%, avant d'effectuer le passage P4/P5.

Passage P4/P5 et phase d'induction ostéogénique : Au passage P4/P5, les cellules recueillies dans tous les flacons sont regroupées puis ensemencées dans

31 BE2023/5127 des flacons T150cm? avec couvercle refermable (flacon "TPP") dans un milieu de différenciation ostéogénique (MD) à une densité d'ensemencement cellulaire comprise entre 0,5x104 cellules/cm? et 0,8x104 cellules/cm”.

Lorsque les cellules atteignent une confluence et qu'au moins un nodule ostéoïde (partie organique non minéralisée de la matrice osseuse qui se forme avant la maturation du tissu osseux) est observé dans chaque flacon, l'ajout de billes de gélatine peut être lancé.

Ajout de particules de cultisphère : Après avoir été exposés au milieu de différenciation ostéogénique (MD), les récipients de culture contenant la monocouche confluente de cellules ostéogéniques adhérentes sont saupoudrés de billes de gélatine. 1.1.3 Phase d'induction tridimensionnelle :

Quelques jours après l'ajout des billes de gélatine, les cellules différenciées et les particules dispersées s'enfoncent progressivement dans la minéralisation de la matrice extracellulaire néo-synthétisée. À ce stade, les cellules différenciées et les particules de billes de gélatine commencent à former un grand patch tridimensionnel (ou quelques patchs plus petits) de mastic moulable jaune brunâtre partiellement minéralisé se détachant de chaque récipient de culture.

La formation du produit cellulaire tridimensionnel final est obtenue à la fin d'une période de maturation. Ce produit cellulaire (CP) est congelé avant d'être traité en aval. 1.2 Processus en aval : Fabrication du produit final contenant des cellules non viables.

Au cours de cette phase de fabrication, la lyophilisation de toutes les structures 3D, le broyage et le mélange sont effectués pour produire le lot de substance médicamenteuse (DS). Le produit est stérilisé en phase terminale par irradiation gamma afin d'obtenir le produit pharmaceutique (DP).

Exemple 2 : Essais biologiques de puissance pour évaluer l'activité antitumorale du produit sur des lignées cellulaires d'ostéosarcome.

L'activité anti-tumorale du matrisome a été testée sur trois lignées cellulaires stables d'ostéosarcomes : 143B, U20S et SaOS-2. Des cellules mésenchymateuses de moelle osseuse humaine (hBM-MSCs) ont également été utilisées dans l'étude afin de déterminer si l'effet anti-prolifératif potentiel du matrisome est ciblé uniquement sur les cellules OS.

Culture cellulaire

Lescellules 143B ont été maintenues dans un milieu MEM contenant 10% de sérum bovin foetal (FBS), avec de la pénicilline, de la streptomycine et de l'amphotéricine B. U20S,

SaOS-2 et hBM-MSC ont été maintenues dans un milieu DMEM contenant 10% de sérum bovin fostal (FBS), avec de la pénicilline, de la streptomycine et de l'amphotéricine B.

Tests biologiques de viabilité

La viabilité des cellules a été mesurée à l'aide des deux tests suivants :

Test de viabilité cellulaire par bioluminescence

Nous avons utilisé le kit de test de viabilité cellulaire (RealTime-GloTM MT Cell Viability

Assay) fourni par Promega, qui utilise le potentiel de réduction des cellules viables.

Les cellules ont été ensemencées dans une plaque de 96 puits et laissées se fixer pendant 24h.

Après une incubation O/N, le milieu a été retiré, et les cellules ont été incubées pendant 72hen présence des différentes doses de l'élément testé. Un traitement à la doxorubicine a également été appliqué à chaque lignée cellulaire comme composé de référence afin de démontrer que le système est capable de détecter l'inhibition de la viabilité.

Les traitements ont été réalisés dans des transwells, en triplicatas. La bioluminescence a été mesurée à Oh, 24h, 48h et 72h après le début du traitement pour observer la cytotoxicité dépendante du temps.

Test CCK-8

Pour ce test, le kit de comptage de cellules-8 a été utilisé (Sigma-Aldrich). Ce test de viabilité est basé sur la réduction du sel de tétrazolium (WST-8) par les déshydrogénases à l'intérieur des cellules, ce qui donne un produit orange soluble dans le milieu de culture cellulaire. Ce produit coloré (formazan) est mesuré à l'aide d'un spectrophotomètre. Le formazan est directement proportionnel au nombre de cellules vivantes présentes dans la culture cellulaire.

Les cellules ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits et laissées se fixer pendant 24 heures.

Après une incubation O/N, le milieu a été retiré, et les cellules ont été incubées pendant 72h en présence des différentes doses de l'élément testé. Un traitement à la doxorubicine a également été appliqué à chaque lignée cellulaire comme composé de référence afin de démontrer que le système est capable de détecter l'inhibition de la viabilité. Les traitements ont été réalisés dans des transwells, en triplicatas. Après 72h d'incubation, la plaque de % puits a été retirée de l'incubateur, lavée avec du PBS 2X et 200! de milieu contenant 20ul de réactif CCK8 ont été ajoutés dans chaque puits. La plaque a été incubée à 37°C pendant 2 heures, puis l'absorbance à 450 nm a été mesurée.

Exemple 3 : Essais biologiques de cicatrisation des plaies (test de grattage)

Les cellules 143B, U20S, SAOS-2 et hBM-MSC ont été ensemencées dans des plaques de 96 puits et cultivées jusqu'à confluence.

La monocouche de cellules a été rayée avec l'Incucyte® WoundMaker (dispositif mécanique à 96 broches) et après deux lavages avec du PBS, la monocouche cellulaire blessée a été exposée à 300ul/puits de milieu avec/sans les doses testées de l'élément à tester. Un traitement à la doxorubicine a également été appliqué à chaque lignée cellulaire comme composé de référence pour démontrer que le système est capable de détecter inhibition de la migration. Tous les traitements ont été effectués en double. Des photos des bords centraux de la plaie par condition ont été prises au point de temps O h, au point de temps 2h, au point de temps 4h, au point de temps 6h, au point de temps 24h après le début du traitement en utilisant Incucyte® à un grossissement de 10x.

Exemple 4 : Tests biologiques de formation de colonies cellulaires

Les cellules 143B, U20S, SAOS-2 ont été cultivées dans des plaques de 24 puits et après 24 heures de culture, des traitements au matrisome ont été appliqués sur les cellules pendant 3 à 6 jours dans des transpuits, en fonction du taux de formation de colonies de chaque lignée cellulaire testée. Tous les traitements ont été effectués en double. Un traitement à la doxorubicine a également été appliqué à chaque lignée cellulaire comme composé de référence pour démontrer que le système est capable de détecter l'inhibition de la formation de colonies.

Alafin des traitements, le milieu a été retiré de tous les puits et les colonies prolifératives ont été incubées avec une solution fixative (acide acétique 10%/10% méthanol dans de l'eau DI) pendant 15 minutes. La solution fixative a été retirée, et chaque puits a été incubé avec 500 ul de cristal violet 1% pendant 1 heure.

À la fin du temps d'incubation, la solution de coloration a été retirée, et la plaque a été doucement rincée 3 fois dans un bain d'eau déminéralisée. Lorsque la plaque était complètement sèche, des photos de chaque puits ont été prises au microscope. 500 HL de méthanol ont été ajoutés à chaque puits et incubés pendant 1h pour une dissolution suffisante du colorant de coloration et la densité optique a été mesurée à 570nm.

Exemple 5 : viabilité des cellules dans le matrisome

Apres lyophilisation et stérilisation terminale par irradiation, le matrisome est censé être exempt de cellules viables. Une quantification en culture de l'ATP présent à l'intérieur des cellules, reflétant l'activité métabolique cellulaire, a été mise en place. Les données ont été rapportées aux poids des échantillons respectifs de produits cellulaires autologues dont on sait qu'ils contiennent des cellules métaboliquement actives (Figure 8). — Contrairement à toutes les biopsies de PC testées, aucune valeur détectable d'activité métabolique n'a été obtenue pour tous les échantillons de DS testés. De plus, la mesure de l'activité métabolique cellulaire dans les DS, basée sur la quantification du contenu cellulaire en ATP, a révélé des valeurs de viabilité cellulaire inférieures à la limite de détection de la méthode, ce qui correspond à la valeur détectée dans une biopsie de CP contenant un nombre de cellules égal à 0,5-0,6% du contenu cellulaire attendu dans les

DS testées.

Ce résultat montre l'absence de cellules viables dans la forme lyophilisée du matrisome.

Les résultats ont été confirmés par des tests supplémentaires effectués pour évaluer la présence de cellules prolifératives dans le produit ou une libération ou consommation potentielle de métabolites cellulaires clés par le produit (comme la consommation de glucose ou la production de lactate) (données non présentées).

En conclusion, aucune cellule viable ou métaboliquement active n'a été détectée dans le matrisome.

Traduction des expressions anglaises dans les dessins te me % of Cellular content expected in 1990 % du contenu cellulaire attendu dans

Claims

REVENDICATIONS

1. Une composition comprenant : = des cellules différenciées dévitalisées ; = matrice extracellulaire néo-synthétisée tridimensionnelle comme véhicule de composés bioactifs choisis dans le groupe constitué par les protéines, les ARNm, les ARNm, les lipides, les vésicules extracellulaires protéines, ARNm, ARNm, lipides, vésicules extracellulaires ; et =» un matériau particulaire ; pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du cancer ; caractérisé en cela : = les cellules différenciées ont sécrété la matrice extracellulaire néo-synthétisée tridimensionnelle avant la dévitalisation ; et =» les cellules et le matériau particulaire sont incorporés dans la matrice extracellulaire tridimensionnelle néo-synthétisée.

2. Composition à utiliser selon la revendication 1, dans laquelle la composition est utilisée pour : = _inhiber la viabilité des cellules cancéreuses, = inhiber la prolifération des cellules cancéreuses ; = inhiber la migration des cellules cancéreuses ; = _inhiber la formation de colonies de cellules cancéreuses ; = Ou toute combinaison de ceux-ci.

3. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la composition est : = déshydraté, de préférence par lyophilisation ; = réduit en taille, de préférence par broyage, pour obtenir une distribution volumétrique de la taille des particules dans une plage de 100 à 5000 micromètres, telle que mesurée par granulométrie par diffraction laser ; et/ou « stérilisé, de préférence par irradiation gamma.

4. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la composition est exempte d'échafaudages externes.

5. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les cellules différenciées sont choisies dans le groupe comprenant ou constitué par les ostéoblastes, les ostéocytes, les chondroblastes, les chondrocytes, les kératinocytes, les myofibroblastes, les cellules épithéliales, les cellules endothéliales, les adipocytes, les cellules neurales, et leurs précurseurs, et de préférence sont des cellules de tissus mous, des chondroblastes ou des ostéoblastes.

6. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la composition comprend la matrice extracellulaire néo-synthétisée à une teneur de 0,001 % en poids à 10 % en poids, de préférence de 0,01 % en poids à 7,5 % en poids, encore plus préférentiellement de 0,1 % en poids à 5 % en poids par rapport au poids total de la composition.

7. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les cellules différenciées dévitalisées sont dérivées de cellules souches choisies dans le groupe constitué par : les cellules souches pluripotentes (CSP) telles que les cellules souches embryonnaires (CSE) ou les cellules souches pluripotentes induites (CSP) ; des cellules souches adultes telles que les cellules souches hématopoiétiques (CSH), les cellules souches cutanées (CSS), les cellules souches neurales (CSN) et des cellules souches mésenchymateuses (CSM), de préférence dérivées de tissu adipeux, de sang périphérique ou de placenta, et de préférence sont des cellules souches mésenchymateuses.

8. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les cellules souches sont dérivées de cellules stromales mésenchymateuses, pouvant de préférence être obtenues à partir de moelle osseuse, de tissu adipeux, de placenta ou de sang.

9. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle le matériau particulaire est choisi dans le groupe constitué par = un matériau organique, y compris la matrice osseuse déminéralisée (DBM), la gélatine, l'agar/agarose, les alginates, le chitosan, le sulfate de chondroitine, le collagène, l'élastine ou les peptides de type élastine (ELP), le fibrnogène, la fibrine, la fibronectine, les protéoglycanes, les protéoglycanes de type héparane sulfate, l'acide hyaluronique, les polysaccharides, les laminines et les dérivés de la cellulose ; =" un composé de calcium ; =" un polymère, y compris les polyanhydrides, l'acide polylactique (PLA), le poly(acide lactique-co-glycolique) (PLGA), l'oxyde de polyéthylène/polyéthylène glycol (PEO/PEG), le poly(alcoo! vinylique) (PVA), les polymères à base de fumarate tels que, par exemple le fumarate de polypropylène) (PPF) ou le fumarate de polypropylène-co-éthylène glycol) (P(PF-co-EG)), le fumarate d'oligopolypthylène glycol) (OPF), le poly(aldéhyde guluronate) (PAG), la polyp- vinyl pyrrolidone) (PNVP), ou des combinaisons de ceux-ci ; =» ungel y compris un gel oligopeptidique auto-assemblable, un microgel, un nanogel, un gel particulaire, un hydrogel, un gel thixotrope, un xérogel, un gel réactif, ou des combinaisons de ceux-ci ; et =" un cremier ; et = Toute combinaison de ces elements.

10. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle le matériau particulaire est de la gélatine, et encore plus préférentiellement des billes de gélatine.

11. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la composition comprend en outre un support pharmaceutiquement acceptable.

12. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle le cancer est un cancer solide choisi dans le groupe comprenant, ou consistant en, un cancer des os, un cancer du cerveau, un cancer de la peau, un cancer du sein, un cancer du système nerveux central, un cancer du col de l'utérus, un cancer du tractus aérodigestif supérieur, un cancer colorectal, un cancer de l'endomètre, un cancer des cellules germinales, un cancer de la vessie, un cancer du rein, un cancer du larynx, un cancer du foie, un cancer du poumon, un neuroblastome, un cancer de l'oesophage, un cancer de l'ovaire, un cancer du pancréas, un cancer de la plèvre, un cancer de la prostate, un rétinoblastome, un cancer de l'intestin grêle, un sarcome des tissus mous, un cancer de l'estomac, un cancer des testicules et un cancer de la thyroïde, et de préférence un cancer des os ou toute métastase de celui-ci ou un cancer de la peau.

13. Composition à utiliser selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la composition est administrée. 2 comme un implant local ; = par voie topique, de préférence sous forme de patch transdermique ; ou =» par injection, de préférence sous la forme d'une suspension injectable.

14. Implant, patch transdermique ou suspension injectable comprenant la composition selon l'une quelconque des revendications précédentes pour une utilisation dans le traitement ou la prévention du cancer, en particulier pour une utilisation dans l'inhibiton de la viabilité, de la prolifération et de la migration des cellules cancéreuses.