BE1021755B1

BE1021755B1 - Formulations comporenant du plasma traite par solvant/detergent (plasma s/d) et utilisations de celles-ci

Info

Publication number: BE1021755B1
Application number: BE2013/0645A
Authority: BE
Inventors: Enrico Bastianelli; Valentina Albarani
Original assignee: Bone Therapeutics S.A.; Enrico Bastianelli S.P.R.L.
Priority date: 2012-09-26
Filing date: 2013-09-26
Publication date: 2016-01-15
Also published as: KR20150067209A; CA2882317C; HK1208157A1; KR101848830B1; EP2900247B1; NO2900247T3; EP2900247A1; WO2014049063A1; JP2018184425A; ES2664694T3; US11458166B2; JP2020050659A; SG11201502402VA; CA2882317A1; JP2015532919A; AU2013322604B2; PL2900247T3; DK2900247T3; CN112999245A; CN104703612B

Abstract

La présente invention concerne des formulations pharmaceutiques comprenant du plasma traité par solvant/détergent (S/D) et un glycosaminoglycane tel que l'acide hyaluronique, et leur utilisation pour traiter des maladies, en particulier des maladies musculo-squelettiques.

Description

Formulations comprenant du plasma traité par solvant/détergent (plasma S/D) et utilisations de celles-ci

Domaine L’invention concerne des formulations pharmaceutiques et leur utilisation pour traiter des maladies telles que des maladies musculo-squelettiques, et plus particulièrement des maladies osseuses ou articulaires.

Contexte

Les maladies ou troubles musculo-squelettiques peuvent affecter les os, les muscles, les articulations, le cartilage, les tendons, les ligaments, et d’autres tissus conjonctifs qui soutiennent et fixent les tissus et les organes conjointement. Ces maladies peuvent se développer au cours du temps ou peuvent résulter, par exemple, d’une utilisation excessive du système musculo-squelettique ou d’un traumatisme. Les maladies musculo-squelettiques peuvent être difficiles à diagnostiquer et/ou traiter en raison de la relation étroite du système musculo-squelettique avec d’autres systèmes internes.

Une approche possible et prometteuse pour le traitement de maladies musculo-squelettiques et en particulier de maladies osseuses et de maladies articulaires est la transplantation de cellules souches mésenchymateuses (MSC) capables de subir une différenciation ostéogène ou chondrogène ou de cellules qui sont engagées dans un lignage ostéoblastique ou chondroblastique.

Des MSC ont été utilisées précédemment pour traiter des troubles osseux (Gangji et al. Expert Opin Biol Ther, 2005, vol. 5, 437-42). Cependant, bien que de telles cellules souches relativement indifférenciées puissent être transplantées, elles ne sont pas engagées dans le lignage ostéoblastique ou chondroblastique et donc, une proportion considérable de cellules souches transplantées ainsi ne peuvent finalement pas contribuer à la formation du tissu souhaité. De plus, la quantité de telles cellules souches pouvant être obtenues à partir de tissus sources quelconques possibles est fréquemment insatisfaisante. L’administration locale de substances actives pharmaceutiques, et en particulier l’administration intra- ou péri-osseuse ou intra- ou péri-articulaire localisée de celles-ci, est d’un grand intérêt dans les maladies musculo-squelettiques, car elle contribue à augmenter la concentration locale et l’efficacité des composants et éviter les effets secondaires systémiques potentiels. Par exemple, l’injection intra-articulaire d’acide hyaluronique (HA) de poids moléculaire élevé est efficace pour restaurer l’intégrité mécanique d’articulations affectées par l’arthrose. Cependant, HA de poids moléculaire élevé présente l’inconvénient de ne pas produire un échafaudage totalement satisfaisant en raison de la gélification. Dans un autre exemple, l’implantation de moelle osseuse dans la zone ostéonécrotique présente des effets bénéfiques chez des patients souffrant d’ostéonécrose aseptique non traumatique de la tête fémorale (Gangji et al. 2005, supra).

Par conséquent, il existe un besoin continu de formulations pharmaceutiques nouvelles et/ou améliorées configurées pour l’administration localisée, par exemple pour administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire ou péri-articulaire, ou pour administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire. Des formulations particulièrement utiles peuvent présenter ou atteindre une consistance de gel après administration, de telle manière que les substances actives pharmaceutiques incluses dans les formulations soient retenues dans le gel in situ et soient progressivement libérées du gel, c’est-à-dire, une libération prolongée ou lente. De plus, lorsque les formulations contiennent des cellules thérapeutiques, la consistance de gel peut produire un environnement de support de cellules et peut assurer la proximité des cellules et de substances bénéfiques éventuelles, telles que des facteurs de croissance qui stimulent la survie, la prolifération (propagation) et/ou la différenciation des cellules.

Du plasma congelé frais (FFP) est préparé dans des banques de sang mondiales en tant que sous-produit de préparation de concentré d’érythrocytes. En vue d’améliorer la sécurité du FFP, un traitement par solvant/détergent (S/D) du plasma a été développé au cours des années 1980, et a conduit à un produit fabriqué en 1992. Le traitement S/D et le plasma traité par S/D sont décrits, entre autres, dans Horowitz et al. 1992 ; US 4 764 369 ; EP 0 322 786 ; et US 2002/018777. Le traitement S/D de plasma rompt les membranes des virus à enveloppe lipidique, des cellules, et de la plupart des protozoaires, en laissant les facteurs de coagulation labiles intacts. Le traitement a une efficacité variable contre les bactéries et est sensiblement inefficace contre les virus à enveloppe non lipidique. Comparé au FFP, le plasma traité par S/D présente une sécurité extrêmement élevée en ce qui concerne les lésions pulmonaires aiguës associées à la transfusion (TRALI), une probabilité significativement plus faible de provoquer des réactions allergiques, et une faible variation de lot à lot en termes de taux plasmatique de facteurs de coagulation. JP2011229508 (abrégé) concerne une composition de cellules comprenant des myoblastes de squelette incorporés dans du gel comprenant du plasma. WO 2009/016451 concerne l’utilisation d’une substance dérivée du sang homologue ou autologue seule ou en combinaison avec de l’acide hyaluronique pour traiter une maladie articulaire, une douleur articulaire ou la peau. Park et al. 2009 concerne la combinaison de fibrine et d’acide hyaluronique en tant que véhicule d’administration de cellules pour des chondrocytes de lapin avec des applications dans la réparation de cartilage. Résumé

Les présents inventeurs ont découvert des formulations pharmaceutiques résolvant un ou plusieurs des problèmes mentionnés ci-dessus dans l’art.

Un aspect de l’invention concerne une formulation pharmaceutique comprenant du plasma traité par solvant/détergent (plasma S/D) et un glycosaminoglycane.

Comme indiqué dans la section Exemples, des formulations appliquant les principes de la présente invention ont la propriété avantageuse de gélifier in vitro en contact avec les fluides corporels de sujets, tels que des sujets humains, en particulier du sérum ou des liquides synoviaux, par exemple de patients souffrant de l’arthrose du genou ou de maladies osseuses. Il est décrit que de telles formulations appliquant les principes de la présente invention gélifient in vitro en contact avec des fluides corporels tels que du sang total, et ont donc la propriété de gélifier in situ (coagulation in situ) lorsqu’elles sont mises en contact avec des fluides corporels tels que du sang total. Par exemple, la présente formulation peut avantageusement constituer un environnement naturel de facteurs de croissance autologues du sang total. Les formulations présentent un comportement de formation de gel particulièrement satisfaisant in situ (c’est-à-dire, lorsqu’elles sont administrées à un emplacement ou site donné (par exemple, un os, une articulation, un tendon ou un ligament) du corps d’un sujet), produisant des formulations avantageusement visqueuses. Par exemple, une fois injectées dans des défauts articulaires, les présentes formulations permettent une gélification in situ et restaurent les états physiologiques et rhéologiques d’une articulation arthritique telle qu’une articulation du genou arthritique. De plus, cette qualité visqueuse peut assurer une administration localisée et/ou libération prolongée de composants des formulations, à savoir du plasma S/D, qui peut comprendre des substances biologiques bénéfiques telles que des facteurs de croissance endogènes, et/ou du glycosaminoglycane. La qualité visqueuse peut également permettre d’incorporer une/des substance(s) active(s) pharmaceutique(s) additionnelle(s) (telles que, sans limitation, une composition de cellules, un composé actif pharmaceutique, une protéine, un peptide, et/ou une petite molécule organique) dans les formulations, et obtenir ainsi l’administration localisée et/ou la libération prolongée de tel(s) composant(s). Les inventeurs envisagent en outre que la qualité visqueuse peut protéger les composants des formulations et/ou la/les substance(s) active(s) pharmaceutique(s) additionnelle(s) incluses dans celles-ci contre l’environnement physique, de manière à améliorer la stabilité globale (par exemple, la stabilité contre la dégradation enzymatique) des composants et ingrédients in vivo. Les inventeurs postulent en outre que la qualité visqueuse peut permettre d’améliorer la fonction articulaire par une action lubrifiante prolongée sur l’articulation, de manière à mieux restaurer l’intégrité mécanique de l’articulation. Les inventeurs envisagent en outre que les formulations peuvent permettre d’améliorer la cicatrisation osseuse par une action ostéo-inductrice.

La formulation pharmaceutique peut typiquement comprendre un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables (par exemple, des solvants, des véhicules, des diluants, etc.), en particulier des excipients compatibles avec le mode d’administration prévu de la formulation, tel que, en particulier, l’administration parentéral et, de préférence, l’administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, ou péri-articulaire de la formulation, ou pour administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire de la formulation.

La formulation pharmaceutique peut être produite par un procédé comprenant la combinaison (par exemple, le mélange ou l’inclusion dans un kit de composants) du plasma S/D et du glycosaminoglycane ; de tels procédés sont présentement inclus. Par conséquent, le glycosaminoglycane peut être désigné de manière appropriée comme étant exogène, ou ajouté de façon exogène au plasma S/D, ou comme étant ajouté en outre au plasma S/D.

La formulation pharmaceutique peut être configurée pour l’administration séparée, simultanée ou séquentielle dans un ordre quelconque du plasma S/D et du glycosaminoglycane et, lorsqu’il est inclus, de la/les substance(s) active(s) pharmaceutique(s) additionnelle(s). En conséquence, la formulation pharmaceutique peut être un mélange de tous ses constituants individuels, ou peut être une combinaison, telle qu’un kit de composants, comprenant les constituants individuels séparément ou comprenant un/des mélange(s) de deux ou plus, mais pas de tous, parmi les constituants individuels. Par conséquent, la formulation peut être constituée d’un kit de composants comprenant du plasma S/D et un glycosaminoglycane.

La formulation pharmaceutique peut être fournie dans un dispositif médical. Un tel dispositif médical permet avantageusement l’administration parentérale, telle que l’administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, ou péri-articulaire, ou l’administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire, de la formulation à un sujet nécessitant celle-ci.

De préférence, le plasma S/D peut être du plasma humain S/D, de sorte que des formulations pharmaceutiques comprenant du plasma humain S/D soient particulièrement adaptées pour administration à des sujets humains.

Dans certains modes de réalisation, le glycosaminoglycane peut être choisi dans le groupe constitué de l’acide hyaluronique et des dérivés de celui-ci, un protéoglycane et des dérivés de celui-ci, un sulfate de chondroïtine, un sulfate de kératane, un chitosane et des dérivés de celui-ci, une chitine et des dérivés de celle-ci. La formulation peut comprendre un ou plusieurs glycosaminoglycanes. La . formulation peut donc comprendre un glycosaminoglycane ou un mélange de glycosaminoglycanes choisis dans le groupe constitué de l’acide hyaluronique et de dérivés de celui-ci, un protéoglycane et des dérivés de celui-ci, un sulfate de chondroïtine, un sulfate de kératane, un chitosane et des dérivés de celui-ci, une chitine et des dérivés de celle-ci.

Sans limitation, la formulation pharmaceutique peut comprendre le glycosaminoglycane à une concentration dans la plage d’environ 0,10 mg/ml à environ 200 mg/ml, de préférence d’environ 1,0 mg/ml à environ 100 mg/ml, plus préférablement d’environ 2,0 mg/ml à environ 50 mg/ml, par exemple, environ 10 mg/ml, environ 20 mg/ml, environ 30 mg/ml ou environ 40 mg/ml.

Typiquement, une injection intra- ou péri-osseuse ou une injection intra- ou péri-articulaire peut avoir un volume compris entre environ 2 ml et environ 4 ml.

Lorsque le glycosaminoglycane présente un bénéfice thérapeutique par lui-même, il peut être inclus en une quantité thérapeutiquement efficace, telle que les quantités exemplaires mentionnées dans ce paragraphe.

Dans des modes de réalisation particulièrement préférés, le glycosaminoglycane peut être l’acide hyaluronique ou un dérivé de celui-ci.

Sans limitation, des dérivés adaptés peuvent être des sels d’acide hyaluronique, tels que, de préférence, le hyaluronate de sodium. L’acide hyaluronique ou un dérivé de celui-ci peut avoir une masse moléculaire faible (< 900 kDa) ou élevée (> 900 kDa). Il peut être particulièrement préféré l’acide hyaluronique ou des dérivés de celui-ci ayant une masse moléculaire élevée (> 900 kDa). Par exemple, l’acide hyaluronique ou dérivé de celui-ci peut avoir une masse moléculaire dans la plage d’environ 1 x 106Da à environ 6x 106Da ou plus, par exemple dans la plage d’environ 1 x 106 Da à environ 4 x 106 Da, par exemple dans la plage d’environ 1,3 x 106 Da à environ 3x 106 Da.

Sans limitation, la formulation pharmaceutique peut comprendre l’acide hyaluronique ou dérivé de celui-ci à une concentration dans la plage d’environ 0,10 mg/ml à environ 200 mg/ml, de préférence d’environ 1,0 mg/ml à environ 100 mg/ml, plus préférablement d’environ 2,0 mg/ml à environ 50 mg/ml.

Dans certains modes de réalisation, la formulation pharmaceutique peut comprendre un ou plusieurs autres composants en plus du plasma S/D et du glycosaminoglycane. Dans d’autres modes de réalisation, le plasma S/D et le glycosaminoglycane peuvent être les seuls composants de la formulation ; par conséquent, dans de tels modes de réalisation, la formulation pharmaceutique peut être constituée de ou être essentiellement constituée du plasma S/D et du glycosaminoglycane. Dans d’autres modes de réalisation supplémentaires, la formulation pharmaceutique peut comprendre un ou plusieurs autres composants en plus du plasma S/D et du glycosaminoglycane, mais de tels composants additionnels ne sont pas des substances actives pharmaceutiques.

Dans certains modes de réalisation, la formulation pharmaceutique peut avantageusement comprendre en outre une ou plusieurs substances actives pharmaceutiques. L’applicabilité de la présente invention n’est pas limitée à une substance active pharmaceutique ou classe de substances actives pharmaceutiques quelconque. La substance active pharmaceutique peut être pharmacologiquement active elle-même, ou peut être convertie en espèce pharmacologiquement active par un processus chimique ou enzymatique dans le corps, c’est-à-dire que la substance active pharmaceutique peut être un promédicament. Les présentes formulations pharmaceutiques peuvent être particulièrement utiles pour les substances actives pharmaceutiques faiblement stables. Des exemples illustratifs non limitatifs de substances actives pharmaceutiques faiblement stables comprennent des peptides et des protéines tels que des facteurs de croissance, des substances actives peptidomimétiques, des anticorps et des vaccins, un petit ARN interférant (ARNsi), de l’ADN, des hormones, etc.

Le terme « substance active pharmaceutique » couvre également tous les sels, esters, N-oxydes ou promédicaments pharmacologiquement actifs du composé ou de la substance référencé(e).

De plus, une combinaison de deux substances actives pharmaceutiques ou plus ou des combinaisons de doses peuvent être incluses en tant que composant pharmaceutique. Dans ce cas, la libération de chaque substance active peut être identique ou différente, tel que, par exemple dans le cas d’une combinaison de deux substances actives dans laquelle la première est présentée dans une forme à libération immédiate et la deuxième dans une forme à libération contrôlée. De manière similaire, une combinaison de forme à libération immédiate et à libération contrôlée peut également être obtenue pour la même substance active, afin de produire un effet rapide et prolongé.

Dans certains modes de réalisation, la formulation pharmaceutique peut comprendre en outre du sérum. L’ajout de sérum à la présente formulation peut permettre à un certain degré d’améliorer la gélification de la formulation.

Par exemple, le sérum peut être allogénique ou autologue vis-à-vis du sujet recevant la formulation. De préférence, le sérum peut être du sérum humain, de sorte que des formulations pharmaceutiques comprenant en outre du sérum humain soient particulièrement adaptées pour administration à des sujets humains. Par exemple, la formulation peut contenir du sérum et du plasma S/D de sorte que la valeur calculée par (volume de sérum dans la formulation)/(volume de sérum dans la formulation + volume de plasma S/D dans la formulation) soit comprise entre environ 0,01 et environ 0,40, de préférence entre environ 0,05 et environ 0,15, plus préférablement d’environ 0,10.

Dans certains modes de réalisation, la formulation pharmaceutique peut comprendre en outre du sang total ou un composant fractionné de sang total. L’ajout de sang total ou dudit composant fractionné, de préférence de sang total, à la présente formulation peut permettre au moins partiellement d’améliorer la gélification de la formulation.

Les présentes formulations comprenant du sang total ou ledit composant fractionné de celui-ci comprennent avantageusement des facteurs de croissance dérivés des plaquettes utiles en médecine régénératrice, en particulier pour stimuler la réparation de défauts des os, du cartilage, d’un tendon ou des ligaments ou pour remplacer des os, cartilages, tendons ou ligaments endommagés (Gobbi et al., 2009 ; Grimaud et al., 2002 ; Cole et al., 2010).

Par exemple, le sang total peut être allogénique ou autologue vis-à-vis du sujet recevant la formulation. De préférence, le sang total peut être du sang total humain, de sorte que des formulations pharmaceutiques comprenant en outre du sang total humain soient particulièrement adaptées pour administration à des sujets humains. Par exemple, la formulation peut contenir du sang total et du plasma S/D de sorte que la valeur calculée par (volume de sang total dans la formulation)/(volume de sang total dans la formulation + volume de plasma S/D dans la formulation) soit comprise entre environ 0,01 et environ 0,40, de préférence entre environ 0,05 et environ 0,15, plus préférablement d’environ 0,10.

Dans des modes de réalisation préférés, la ou plusieurs des substances actives pharmaceutiques sont, chacune indépendamment, choisies dans le groupe constitué de : une composition de cellules, un composé actif pharmaceutique, une protéine, un peptide, et une petite molécule organique.

De préférence, la composition de cellules peut comprendre des cellules souches mésenchymateuses (MSC), des ostéoprogéniteurs, des cellules ostéoblastiques, des ostéocytes, des cellules chondroblastiques, et/ou des chondrocytes. La formulation pharmaceutique permet ainsi l’administration d’une telle composition de cellules. Cette qualité visqueuse des présentes formulations pharmaceutiques peut assurer leur administration localisée et un environnement de support adapté pour les cellules administrées.

De façon particulièrement préférable, les cellules de la composition de cellules peuvent être des cellules animales, de préférence d’un animal à sang chaud, plus préférablement des cellules de mammifère, telles que des cellules humaines ou des cellules de mammifère non humain, et de manière préférée entre toutes des cellules humaines.

Dans d’autres modes de réalisation, le composé actif pharmaceutique peut être une substance antiinflammatoire. Dans des modes de réalisation préférés, le composé actif pharmaceutique peut être un agoniste de récepteur alpha-2-adrénergique. De préférence, l’agoniste de récepteur alpha-2-adrénergique peut être choisi dans le groupe constitué de la clonidine et de dérivés de celle-ci.

Dans certains modes de réalisation, l’agoniste de récepteur alpha-2-adrénergique peut être choisi dans le groupe constitué de la clonidine et de dérivés de celle-ci, comprenant la 2,6-diméthylclonidine, la 4-azidoclonidine, la 4-carboxyclonidine-méthyl-3,5-dichlorotyrosine, la 4-hydroxyclonidine, la 4-iodoclonidine, l’alinidine, l’apraclonidine, la chloréthylclonidine, le 4-isothiocyanate de clonidine, le 4-méthylisothiocyanate de clonidine, le récepteur de clonidine, une substance déplaçant la clonidine, l’hydroxyphénacétyl-aminoclonidine, la N,N'-diméthylclonidine, la p-aminoclonidine, et la tiaménidine ; des imidazolidines, comprenant des imidazolines, l’impromidine, la détomidine, la médétomidine, la dexmédétomidine, le lévamisole, le losartane, la lofexidine, le miconazole, la naphazoline, le niridazole, des nitroimidazoles, l’ondansétron, l’oxymétazoline, la phentolamine, le tétramisole, le thiamazole, la tizanidine, la tolazoline, le trimétaphan ; des imidazoles, comprenant la 4-(3-butoxy-4-méthoxybenzyl) imidazolidin-2-one, l’acide urocanique, l’amino-imidazole-carboxamide, l’antazoline, la biotine, le bis (4-méthyl-l-homo-pipérazinylthiocarbonyl)disulfure, le carbimazole, la cimétidine, le clotrimazole, la créatinine, la dacarbazine, la dexmédétomidine, l’éconazole, l’énoximone, l’éthymizol, l’étomidate, le fadrozole, le fluspirilène, l’idazoxan, le mivazérol ; des guanidines, comprenant l’agmatine, la bétanidine, des biguanides, la cimétidine, la créatine, le gabexate, la guanéthidine, le sulfate de guanéthidine, la guanclofïne, la guanfacine, la guanidine, le guanoxabenz, l’impromidine, l’iodo-3-benzylguanidine, la méthylguanidine, la mitoguazone, des nitrosoguanidines, le pinacidil, la robénidine, la sulfaguanidine, le zanamivir ; l’alpha-méthylnoréphérine, l’azépexole, la 5-bromo-6-(2 imidazolidine-2-ylamino)quinoxaline, le fumarate de formotérol, l’indoramine, la 6-allyl-2-amino-5,6,7,8-tétrahydro-4H-thiazolo[4,5-d]azépine diHCl, la nicergoline, la rilménidine, et la xylazine.

Dans certains modes de réalisation, la formulation pharmaceutique peut comprendre en outre une ou plusieurs substances ayant des propriétés ostéogènes, ostéo-inductrices et/ou ostéo-conductrices. Dans des modes de réalisation préférés, une telle substance peut être choisie dans le groupe comprenant ou constitué d’un facteur de croissance des fibroblastes (FGF), de préférence FGF-2, un facteur de croissance de transformation bêta (TGFB), de préférence TGFB-1, un facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF), l’interleukine 8 (IL-8), une protéine morphogénétique osseuse (BMP), par exemple l’une ou plusieurs quelconques de BMP-2, BMP-4, BMP-6 et BMP-7, l’hormone parathyroïdienne (PTH), une protéine apparentée à l’hormone parathyroïdienne (PTHrp), et le facteur de cellule souche (SCF).

Par conséquent, dans certains modes de réalisation, la protéine ou le peptide pharmaceutique actif peut être un facteur de croissance, de préférence un facteur de croissance choisi dans le groupe constitué d’un FGF, un TGFB, PDGF, IL-8, un BMP, PTH, PTHrp, et SCF, plus préférablement un facteur de croissance choisi dans le groupe constitué de FGF-2, TGFB-1, PDGF, IL-8, BMP-2, BMP-4, BMP-6, BMP-7, PTH, PTHrp, et SCF.

De préférence, la formulation pharmaceutique peut être configurée pour administration parentérale, telle que l’injection parentérale, plus préférablement pour administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire ou péri-articulaire, telle que l’injection intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire ou péri-articulaire, ou pour administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire, telle que l’injection intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire.

Un aspect associé concerne la formulation pharmaceutique telle que décrite ci-dessus pour utilisation dans le traitement (comprenant, dans l’ensemble de la présente spécification, des mesures thérapeutiques et/ou préventives) d’une maladie musculo-squelettique. De préférence, ladite maladie musculo-squelettique peut être une maladie osseuse ou une maladie articulaire. En variante ou en outre, ladite maladie musculo-squelettique peut affecter les tendons et/ou les ligaments.

Il est également décrit l’utilisation de la formulation pharmaceutique telle que décrite ci-dessus pour la fabrication d’un médicament pour le traitement d’une maladie musculo-squelettique, de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire. En variante ou en outre, ladite maladie musculo-squelettique peut affecter les tendons et/ou les ligaments.

Il est également décrit un procédé pour traiter une maladie musculo-squelettique, de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments), chez un sujet nécessitant un tel traitement, comprenant l’administration audit sujet d’une quantité thérapeutiquement ou prophylactiquement efficace de la formulation pharmaceutique telle que décrite ci-dessus.

En se basant sur ces observations, les présents inventeurs ont réalisé l’utilisation des formulations mentionnées ci-dessus en tant qu’ excipient pharmaceutique, plus préférablement en tant qu'excipient pharmaceutique à libération prolongée ou libération lente. En conséquence, un aspect associé concerne l’utilisation d’une formulation comprenant du plasma S/D et un glycosaminoglycane en tant qu’excipient pharmaceutique, de préférence en tant qu’excipient pharmaceutique dans une formulation pharmaceutique configurée pour administration parentérale, plus préférablement pour administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, ou péri-articulaire, ou pour administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire.

Il est également décrit une formulation comprenant du plasma S/D et un glycosaminoglycane pour utilisation en tant qu’excipient pharmaceutique, plus préférablement pour utilisation en tant qu’excipient pharmaceutique à libération prolongée ou libération lente, de préférence pour utilisation en tant qu’excipient pharmaceutique pour le traitement d’une maladie musculo-squelettique, de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments). Il est décrit en outre Γutilisation d’une formulation comprenant du plasma S/D et un glycosaminoglycane pour la fabrication d’un excipient pharmaceutique, plus préférablement un excipient pharmaceutique à libération prolongée ou libération lente, de préférence pour la fabrication d’un excipient pharmaceutique pour le traitement d’une maladie musculo-squelettique, de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments). Il est décrit en outre un procédé pour traiter une maladie musculo-squelettique, de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments) chez un sujet nécessitant un tel traitement, comprenant l’administration audit sujet d’une formulation comprenant du plasma S/D et un glycosaminoglycane en tant qu’excipient pharmaceutique, plus préférablement en tant qu’excipient pharmaceutique à libération prolongée ou libération lente.

Il est présentement décrit en outre l’utilisation de plasma S/D en tant qu’excipient pharmaceutique, de préférence en tant qu’excipient pharmaceutique dans une formulation pharmaceutique configurée pour administration parentérale, plus préférablement pour administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, ou péri-articulaire, ou pour administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire.

Par conséquent, il est décrit en outre du plasma S/D pour utilisation en tant qu’excipient pharmaceutique, plus préférablement pour utilisation en tant qu’excipient pharmaceutique à libération prolongée ou libération lente, de préférence pour utilisation en tant qu’excipient pharmaceutique pour le traitement d’une maladie musculo-squelettique, de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments). Il est présentement décrit en outre l’utilisation de plasma S/D pour la fabrication d’un excipient pharmaceutique, plus préférablement un excipient pharmaceutique à libération prolongée ou libération lente, de préférence pour la fabrication d’un excipient pharmaceutique pour le traitement d’une maladie musculo-squelettique, de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments). Il est décrit en outre un procédé pour traiter une maladie musculo-squelettique, de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments) chez un sujet nécessitant un tel traitement, comprenant l’administration audit sujet du plasma S/D en tant qu’excipient pharmaceutique, plus préférablement en tant qu’excipient pharmaceutique à libération prolongée ou libération lente.

Il est présentement décrit en outre l’utilisation des formulations mentionnées ci-dessus en tant que supplément de milieu de culture de cellules. En conséquence, un aspect associé concerne l’utilisation d’une formulation comprenant du plasma S/D et un glycosaminoglycane en tant que supplément de milieu de culture de cellules. De telles formulations peuvent avantageusement permettre l’obtention de cellules ou cultures de cellules ayant des propriétés améliorées.

Dans l’ensemble de cet aspect de l’invention et l’un quelconque de ses modes de réalisation, le plasma S/D peut, de préférence, être du plasma de mammifère S/D, plus préférablement du plasma humain S/D. Également dans l’ensemble de cet aspect de l’invention et l’un quelconque de ses modes de réalisation, le sérum peut être du sérum de mammifère, plus préférablement du sérum humain. En outre, de préférence, le plasma S/D peut être du plasma de mammifère S/D et le sérum peut être du sérum de mammifère, ou le plasma S/D peut être du plasma humain S/D et le sérum peut être du sérum humain. Du plasma et/ou sérum humain peuvent être particulièrement avantageux pour administration à des sujets humains. Également dans l’ensemble de cet aspect de l’invention et l’un quelconque de ses modes de réalisation, le sang total peut être du sang total de mammifère, plus préférablement du sang total humain. En outre, de préférence, le plasma S/D peut être du plasma de mammifère S/D et le sang total peut être du sang total de mammifère, ou bien le plasma S/D peut être du plasma humain S/D et le sang total peut être du sang total humain. Du plasma et/ou du sang total humain peuvent être particulièrement avantageux pour administration à des sujets humains.

Il est présentement décrit en outre des formulations pharmaceutiques telles que décrites ci-dessus, et les utilisations correspondantes de celles-ci, dans lesquelles le glycosaminoglycane est omis des formulations. Par conséquent, de telles formulations peuvent comprendre, en particulier, du plasma S/D (de préférence du plasma humain S/D), et un ou plusieurs composants quelconques tels que décrits ci-dessus, en particulier, et un ou plusieurs quelconques de : sérum, sang total ou composant fractionné de celui-ci, une ou des substances actives pharmaceutiques (telles que, chacune indépendamment, choisies dans le groupe constitué de la composition de cellules, le composé actif pharmaceutique, la protéine, le peptide, et la petite molécule organique). De telles formulations peuvent également présenter un comportement de gélification satisfaisant.

Les aspects ci-dessus et autres et les modes de réalisation préférés de l’invention sont décrits dans les sections suivantes et dans les revendications annexées. L’objet des revendications annexées est spécifiquement incorporé présentement dans cette spécification.

Brève description des dessins

La figure 1 illustre une vue radiographique de la réparation / formation de tissu osseux 4 semaines après l’administration d’une formulation contenant du plasma S/D, IL-8 et CaCl2 à un site de défaut osseux dans un modèle d’ostéotomie de la calotte crânienne chez des souris immunocompétentes. La réparation osseuse peut être clairement observée (zones minéralisées) chez les souris traitées (B) comparées à un témoin sans IL-8 (A).

La figure 2 représente l’analyse microscopique du tissu nouvellement formé représenté sur la figure IB, à un grossissement 20 fois (A) et 40 fois. Quatre semaines après l’administration d’une formulation contenant du plasma S/D, IL-8 et CaCl2 à un site de défaut osseux dans un modèle d’ostéotomie de la calotte crânienne chez des souris immunocompétentes, la matrice de collagène vide présente de larges zones ostéoïdes minéralisées et non minéralisées et un grand nombre de vaisseaux.

Description de modes de réalisation

Dans le présent contexte, les formes au singulier « un », « une », et « le/la » comprennent à la fois le singulier et le pluriel sauf indication contraire claire dans le contexte.

Les termes « comprenant », « comprend » et « constitué de », dans le présent contexte, sont synonymes de « comprenant », « comprend » ou « contenant », « contient », et sont inclusifs ou ouverts et n’excluent pas des membres, éléments ou étapes de procédé additionnels, non mentionnés. Les termes couvrent en outre « constitué de » et « essentiellement constitué de ».

La mention de plages numériques par des limites comprend tous les nombres et fractions sous-inclus dans les plages respectives, ainsi que les limites mentionnées.

Le terme « environ », dans le présent contexte, lorsqu’il fait référence à une valeur mesurable telle qu’un paramètre, une quantité, une durée temporelle, et similaire, est destiné à couvrir des variations de et par rapport à la valeur spécifiée, en particulier des variations de +/-10 % ou moins, de préférence +/-5 % ou moins, plus préférablement +/-1 % ou moins, et encore plus préférablement +/-0,1 % ou moins de et par rapport à la valeur spécifiée, dans la mesure où de telles variations sont appropriées dans le contexte de l’objet de l’invention décrite. Il doit être noté que la valeur à laquelle le modificateur « environ » fait référence est également spécifiquement, et de préférence, décrit.

Alors que le terme « un ou plusieurs », tel qu’un ou plusieurs membres d’un groupe de membres, est clair en tant que tel, au moyen d’une exemplification supplémentaire, le terme couvre, entre autres, une référence à l’un quelconque desdits membres, ou à deux ou plus quelconques desdits membres, tel que, par exemple, > 3, > 4, > 5, > 6 ou > 7, etc., quelconques desdits membres, et jusqu’à tous lesdits membres.

Tous les documents cités dans la présente spécification sont présentement incorporés en référence dans leur intégralité.

Sauf indication contraire, tous les termes utilisés dans la description de l’invention, y compris les termes techniques et scientifiques, ont la signification couramment comprise par l’homme du métier auquel cette invention appartient. A titre d’indication supplémentaire, des définitions des termes peuvent être incluses pour mieux apprécier les enseignements de la présente invention.

Des techniques générales en culture de cellules et les utilisations de milieux sont décrites, entre autres, dans Large Scale Mammalian Cell Culture (Hu et al. 1997. Curr Opin Biotechnol 8: 148) ; Serum-free Media (K. Kitano. 1991. Biotechnology 17: 73); ou Large Scale Mammalian Cell Culture (Curr Opin Biotechnol 2: 375, 1991).

Les termes « formulation pharmaceutique », « composition pharmaceutique », ou « préparation pharmaceutique » peuvent être utilisés de manière interchangeable présentement. De manière similaire, les termes « formulation », « composition », ou « préparation » peuvent être utilisés de manière interchangeable présentement.

Le terme « plasma » est tel que conventionnellement défini. Le plasma est généralement obtenu à partir d’un échantillon de sang total, mélangé ou mis en contact avec un anticoagulant (par exemple, l’héparine, le citrate, l’oxalate ou l’EDTA). Ensuite, les composants cellulaires de l’échantillon de sang sont séparés du composant liquide (plasma) par une technique appropriée, typiquement par centrifugation. Par conséquent, le terme « plasma » désigne une composition qui ne fait pas partie d’un corps humain ou animal.

Les termes « plasma traité par solvant/détergent », « plasma traité par S/D », ou « plasma S/D » désignent généralement du plasma décellularisé pouvant être obtenu ou obtenu par un procédé comprenant les étapes de : (a) traitement du plasma avec un solvant et un détergent et (b) filtration du plasma traité par solvant/détergent.

Le plasma à traiter dans l’étape (a) peut être un plasma quelconque comme défini conventionnellement tel que du plasma frais, du plasma congelé frais, du plasma congelé décongelé, ou un cryoprécipité, des cryosumageants ou des concentrés de plasma congelé ainsi que des produits de dilution de ceux-ci. Le plasma est généralement obtenu à partir d’un échantillon de sang total, ou d’un échantillon obtenu par aphérèse.

Des solvants tels que des di- ou trialkylphosphates et des détergents sont décrits dans US 4 764 369. Le solvant utilisé pour préparer du plasma S/D est de préférence un dialkylphosphate ou un trialkylphosphate, tous deux ayant des groupes alkyle qui contiennent 1 à 10 atomes de carbone, en particulier 2 à 10 atomes de carbone. Des exemples illustratifs de solvants peuvent comprendre tri-(n-butyl)phosphate, tri-(t-butyl)phosphate, tri-(n-hexyl)phosphate, tri-(2-éthylhexyl)phosphate, ou tri-(n-décyl)phosphate. Un solvant préféré est tri-(n-butyl)phosphate. Des mélanges de différents trialkylphosphates peuvent également être utilisés ainsi que des phosphates ayant des groupes alkyle de différentes chaînes alkyle, par exemple, éthyle, di(n-butyl)phosphate. De manière similaire, les dialkylphosphates respectifs peuvent être utilisés comprenant ceux de différents mélanges de groupes alkyle de dialkylphosphate. De plus, des mélanges de di- et trialkylphosphates peuvent être utilisés.

Le solvant tel qu’un di- ou trialkylphosphate pour utilisation dans l’étape de traitement (a) est de préférence utilisé en une quantité dans la plage d’environ 0,01 mg/ml à environ 100 mg/ml, et de préférence d’environ 0,1 mg/ml à environ 10 mg/ml. Autrement dit, des di- ou trialkylphosphates pour utilisation dans l’étape de traitement (a) sont de préférence utilisés en une quantité dans la plage d’environ 0,001 % m/v à environ 10 % m/v, et de préférence d’environ 0,01 % m/v à environ 1 % m/v.

Le détergent utilisé pour préparer du plasma S/D est de préférence un détergent non toxique. Les détergents non ioniques envisagés comprennent ceux qui dispersent à température ambiante au moins 0,1 % en poids de la graisse dans une solution aqueuse contenant celle-ci lorsque 1 gramme de détergent par 100 ml de solution est introduit dans celle-ci. Des exemples illustratifs de détergents peuvent comprendre des dérivés de polyoxyéthylène d’acides gras, des esters partiels d’anhydrides de sorbitol, par exemple, les produits commercialisés sous le nom « Tween 80 », « Tween 20 » et « polysorbate 80 » et des détergents aqueux solubles dans l’huile non ioniques tels que celui commercialisé sous le nom de marque « Triton X 100 » (alkylphénol oxyéthylé). Il est également envisagé le désoxycholate de sodium ainsi que les « zwittergents » qui sont des détergents zwitterioniques synthétiques appelés « sulfobétaïnes » tels que le N-dodécyl-N,N-méthyl-2-ammonio-l-éthanesulfonate et ses congénères ou des détergents non ioniques tels que 1 ’ octyl-bêta-D-glucopyranoside.

La quantité de détergent peut être dans la plage d’environ 0,001 % v/v à environ 10 % v/v, de préférence d’environ 0,01 % v/v à 1,5 % v/v.

Le traitement avec un solvant et un détergent est de préférence effectué à une température comprise entre -5 °C et 70 °C, de préférence entre 0 °C et 60 °C. La durée d’un tel traitement (contact) est d’au moins 1 minute, de préférence au moins 1 heure et généralement de 4 à 24 heures. Le traitement est normalement efficace à pression atmosphérique, mais des pressions sous-atmosphériques et hyper-atmosphériques peuvent également être utilisées.

Normalement, après le traitement, le solvant tel qu’un trialkylphosphate et le détergent sont éliminés. Le solvant et le détergent peuvent être éliminés par une technique quelconque adaptée pour séparer le solvant et le détergent du plasma. Lorsqu’un détergent non ionique est utilisé avec le solvant tel qu’un trialkylphosphate, ceux-ci peuvent être éliminés par : (1) diafiltration en utilisant des membranes microporeuses telles que du TEFLON qui retiennent les protéines plasmatiques ; (2) absorption des composants plasmatiques souhaités sur des supports de chromatographie ou de chromatographie d’affinité ; (3) précipitation, par exemple, par dessalage des protéines plasmatiques ; (4) lyophilisation, etc.

Des solvants tels qu’un dialkylphosphate ou trialkylphosphate peuvent être éliminés comme suit : (a) l’élimination du facteur antihémophilique (AHF) peut être effectuée par précipitation de AHF avec 2,2 M de glycine et 2,0 M de chlorure de sodium (b) l’élimination de la fibronectine peut être effectuée par liaison de la fibronectine sur une colonne de gélatine insolubilisée et lavage de la fibronectine liée exempte de réactif. L’étape de filtration (b) est généralement effectuée avec un filtre à 1 pm pour éliminer les cellules et les débris, suivie par une filtration stérilisante en utilisant un filtre à 0,2 pm.

Selon un exemple préféré, comme décrit par Horowitz et al., 1992 (Blood, 3, 826-831), du plasma S/D peut être préparé comme suit : du FFP peut être rapidement décongelé et peut être traité sous agitation pendant 4 heures avec 1 % (v/v) tri-(N-butyl)-phosphate (TNBP) et 1 % (v/v) polyoxyéthylène-p-t-octylphénol (Triton X-100) à 30 °C. Après traitement, une huile comestible telle que l’huile de soja (5 % v/v) ou l’huile de ricin peut être ajoutée, doucement mélangée pendant 30 minutes, et peut être éliminée par centrifugation à 10 000 g pendant 20 minutes. Le plasma clarifié peut être appliqué à une colonne de résine Waters Prep C18 de sorte que le rapport de volume du plasma à la colonne soit de 6 et le temps de contact peut être de 3 minutes. L’éluat de colonne peut être filtré sur un filtre à 0,2 pm.

Par exemple, du plasma S/D est commercialisé par Octaplas® (Octapharma AG, Lachen, Suisse).

Le terme « plasma S/D » couvre du plasma comprenant une concentration ou activité réduite d’inhibiteur de plasmine, telle qu’un taux d’inhibiteur de plasmine inférieur ou égal à 0,60 Ul/ml ou inférieur ou égal à 0,50 Ul/ml, par exemple un taux d’inhibiteur de plasmine compris entre 0,20 et 0,30 Ul/ml, plus spécifiquement entre 0,22 et 0,25 Ul/ml.

Comparé à du plasma congelé frais (FFP), du plasma S/D peut comprendre une quantité et/ou activité réduite de l’un ou plusieurs de l’inhibiteur de plasmine, la protéine S, le facteur XI, le facteur V, le facteur VIII, le facteur X, l’antiplasmine α2, l’antitrypsine, le facteur de von

Willebrand (vWF), et la protéase clivant le facteur de von Willebrand (VWFCP) également appelée désintégrine et métalloprotéinase avec un motif de thrombospondine de type 1, membre 13 (ADAMTS-13), le facteur de nécrose tumorale alpha (TNFa), l’interleukine 8 (IL-8), l’interleukine 10 (IL-10) (Benjamin et McLaughlin, 2012, Svae et al, 2007 ; Beeck et Hellstem, 1998 ; Doyle et al., 2003 ; Mast et al, 1999, Theusinger et al., 2011) et/ou peut comprendre une quantité et/ou activité augmentée de facteur VII (Doyle et al., 2003).

Le plasma S/D peut être utilisé directement dans les présentes formulations pharmaceutiques. Il peut également être conservé de manière appropriée pour utilisation ultérieure (par exemple, pendant des durées plus courtes, par exemple, jusqu’à environ 1 à 2 semaines, à une température au-dessus des points de congélation respectifs du plasma ou du sérum, mais au-dessous de la température ambiante, cette température étant généralement d’environ 4 °C à 5 °C ; ou pendant des temps plus longs par conservation au congélateur, généralement entre environ -70 °C et environ -80 °C).

Le plasma S/D peut être inactivé par la chaleur comme il est connu dans l’art, en particulier pour éliminer le complément. Lorsque les présentes formulations pharmaceutiques utilisent du plasma S/D autologue vis-à-vis du sujet à traiter, il peut être inutile d’inactiver par la chaleur le plasma S/D. Lorsque le plasma S/D est au moins partiellement allogénique vis-à-vis du sujet à traiter, il peut être avantageux d’inactiver par la chaleur le plasma S/D.

Les formulations pharmaceutiques de la présente invention peuvent comprendre du plasma S/D qui est autologue vis-à-vis du sujet à traiter. Le terme « autologue » en référence à du plasma S/D indique que le plasma S/D est obtenu à partir du même sujet à mettre en contact ou traiter avec le plasma S/D. Les formulations pharmaceutiques de la présente invention peuvent comprendre du plasma S/D qui est « homologue » ou « allogénique » vis-à-vis du sujet à traiter, c’est-à-dire, obtenu à partir d’un ou plusieurs sujets (groupés) autres que le sujet à mettre en contact ou traiter avec le plasma S/D. Les formulations pharmaceutiques de la présente invention peuvent également comprendre un mélange de plasma S/D autologue et homologue (allogénique) tel que défini ci-dessus. De préférence, les formulations pharmaceutiques peuvent comprendre du plasma S/D qui est « allogénique » vis-à-vis du sujet à traiter. Avantageusement, le plasma S/D allogénique est commercialisé et par conséquent, est une source illimitée de plasma.

Le terme « sérum » est tel que conventionnellement défini. Du sérum peut généralement être obtenu à partir d’un échantillon de sang total, dans un premier temps en laissant la coagulation se produire dans l’échantillon et ensuite en séparant le caillot formé ainsi et les composants cellulaires de l’échantillon de sang du composant liquide (sérum) par une technique appropriée, typiquement par centrifugation. La coagulation peut être facilitée par un catalyseur inerte, par exemple, des billes ou de la poudre de verre. En variante, du sérum peut être obtenu à partir de plasma par élimination de l’anticoagulant et de la fibrine. Le terme « sérum », par conséquent, désigne une composition qui ne fait pas partie d’un corps humain ou animal.

Le sérum peut être utilisé directement dans les formulations pharmaceutiques comme présentement décrit. Il peut également être conservé de manière appropriée pour utilisation ultérieure (par exemple, pendant des durées plus courtes, par exemple, jusqu’à environ 1 à 2 semaines, à une température au-dessus des points de congélation respectifs du plasma ou du sérum, mais au-dessous de la température ambiante, cette température est généralement d’environ 4 °C à 5 °C ; ou pendant des temps plus longs par conservation au congélateur, généralement entre environ -70 °C et environ -80 °C).

Le sérum peut être inactivé par la chaleur comme il est connu dans l’art, en particulier pour éliminer le complément. Lorsque les présentes formulations pharmaceutiques utilisent un sérum autologue vis-à-vis des cellules cultivées en présence de celles-ci, il peut être inutile d’inactiver par la chaleur le sérum. Lorsque le sérum est au moins partiellement allogénique vis-à-vis du sujet à traiter, il peut être avantageux d’inactiver par la chaleur le sérum.

Facultativement, le sérum peut également être stérilisé avant conservation ou utilisation, en utilisant des filtres microbiologiques conventionnels, de préférence avec une taille de pore de 0,2 pm ou moins.

Dans certains modes de réalisation, les formulations pharmaceutiques peuvent utiliser du sérum qui est autologue vis-à-vis du sujet à traiter. Le terme « autologue » en référence à du sérum indique que le sérum est obtenu à partir du même sujet à mettre en contact avec le sérum. Dans certains modes de réalisation, les formulations pharmaceutiques peuvent utiliser du sérum qui est « homologue » ou « allogénique » vis-à-vis du sujet à traiter, c’est-à-dire, obtenu à partir d’un ou plusieurs sujets (groupés) autres que le sujet à mettre en contact avec le sérum. Dans certains modes de réalisation, les formulations pharmaceutiques peuvent utiliser un mélange de sérums autologue et homologue (allogénique) comme défini ci-dessus.

Le terme « sang total » est tel que conventionnellement défini. De préférence l’échantillon peut aisément être obtenu par des procédés mini-invasifs, permettant le retrait ou l’isolement du sang total du sujet. Le sang total est généralement mélangé ou mis en contact avec un anticoagulant (par exemple, l’héparine, le citrate, l’oxalate ou l’EDTA).

Le sang total peut être utilisé directement dans les formulations pharmaceutiques comme présentement décrit. Le sang total peut également être conservé de manière appropriée pour utilisation ultérieure (par exemple, pendant des durées plus courtes, par exemple, jusqu’à environ 1 à 4 semaines, à une température au-dessus du point de congélation du sang total, mais au-dessous de la température ambiante, cette température est généralement d’environ 4 °C à 5 °C ; ou pendant des temps plus longs par conservation au congélateur, généralement entre environ -70 °C et environ -160 °C, par exemple entre environ -70 °C et environ -80 °C, par exemple à environ -160 °C).

Dans certains modes de réalisation, les formulations pharmaceutiques peuvent utiliser du sang total qui est autologue vis-à-vis du sujet à traiter. Le terme « autologue » en référence à du sang total indique que le sang total est obtenu à partir du même sujet à mettre en contact avec le sang total. Dans certains modes de réalisation, les formulations pharmaceutiques peuvent utiliser du sang total qui est « homologue » ou « allogénique » vis-à-vis du sujet à traiter, c’est-à-dire, obtenu à partir d’un ou plusieurs sujets (groupés) autres que le sujet à mettre en contact avec le sang total. Dans certains modes de réalisation, les formulations pharmaceutiques peuvent utiliser un mélange de sang total autologue et homologue (allogénique) comme défini ci-dessus.

Dans certains modes de réalisation, le glycosaminoglycane peut être choisi dans le groupe constitué de l’acide hyaluronique et des dérivés de celui-ci, un protéoglycane et des dérivés de celui-ci, un sulfate de chondroïtine, un sulfate de kératane, un chitosane et des dérivés de celui-ci, une chitine et des dérivés de celle-ci.

Les termes « acide hyaluronique » ou « HA » peuvent être utilisés de manière interchangeable avec « hyaluronane » ou « hyaluronate ». Le terme « acide hyaluronique » désigne un polymère anionique, non sulfaté de disaccharides composé d’acide D-glucuronique et N-acétyl-D-glucosamine, liés via des liaisons glycosidiques β-1,4 et β-1,3 alternées. Les dérivés d’acide hyaluronique comprennent, mais ne sont pas limités à, des sels de hyaluronate tels que le hyaluronate de sodium ou un ester d’acide hyaluronique avec un alcool de la série aliphatique, hétérocyclique ou cycloaliphatique, ou une forme sulfatée d’acide hyaluronique ou une combinaison d’agents comprenant de l’acide hyaluronique.

Le terme « protéoglycane » désigne des protéines avec une ou plusieurs chaîne(s) de glycosaminoglycane (GAG) liées(s) de façon covalente. Le glycosaminoglycane peut être un protéoglycane choisi parmi la décorine, le biglycane, le testicane, la fibromoduline, le lumicane, le versicane, le perlécane, le neurocane ou l’aggrécane.

Le terme « sulfate de chondroïtine » désigne un polymère de disaccharides composé de N-acétylgalactosamine et d’acide glucuronique, dont chacun peut être sulfaté à des positions et dans des quantités variables. Le sulfate de chondroïtine peut être choisi parmi le 4-sulfate de chondroïtine, le 6-sulfate de chondroïtine, le 2,6-sulfate de chondroïtine, le 4,6-sulfate de chondroïtine.

Le terme « sulfate de kératane » peut être utilisé de manière interchangeable avec « kératosulfate » et désigne un polymère de disaccharides répétitifs -3Ga^ 1 -40ΙοΝΑςβ 1 - qui peuvent être sulfatés à la position de carbone 6 (C6) de l’un ou les deux monosaccharides Gai ou GlcNAc.

Le terme « chitosane » désigne un polymère linéaire composé de D-glucosamine (motif désacétylé) et N-acétyl-D-glucosamine (motif acétylé) à liaison β-( 1 -4) distribués de façon aléatoire.

Le terme « chitine » désigne un polymère composé de N-acétylglucosamine à liaison β-(1,4).

Dans certains modes de réalisation, la formulation pharmaceutique comprend en outre une ou plusieurs substances actives pharmaceutiques.

De telles substances actives pharmaceutiques peuvent couvrir, par exemple, des compositions de cellules.

Dans certains modes de réalisation, la composition de cellules peut comprendre des cellules souches mésenchymateuses (MSC), des ostéoprogéniteurs, des cellules ostéoblastiques, des ostéocytes, des cellules chondroblastiques, et/ou des chondrocytes.

Le terme « cellule souche mésenchymateuse » ou « MSC », dans le présent contexte, désigne une cellule souche dérivée du mésoderme adulte qui est capable de générer des cellules de lignages mésenchymateux, typiquement de deux lignages mésenchymateux ou plus, par exemple, le lignage ostéocytaire (os), chondrocytaire (cartilage), myocytaire (muscle), tendinocytaire (tendon), fibroblastique (tissu conjonctif), adipocytaire (graisse) et stromogène (stroma médullaire). MSC peut être isolé à partir de, par exemple, la moelle osseuse, l’os trabéculaire, le sang, le cordon ombilical, le placenta, le sac gestationnel fœtal, la peau (derme), spécifiquement la peau, le périoste et le tissu adipeux fœtal et adolescent. Les MSC humaines, leurs isolement, expansion in vitro, et différenciation, sont décrits dans, par exemple, le brevet U.S. n° 5 486 359 ; le brevet U.S. n° 5 811 094; le brevet U.S. n° 5 736 396 ; le brevet U.S. n° 5 837 539 ; ou le brevet U.S. n° 5 827 740. Des MSC quelconques décrites dans l’art et isolées par un procédé quelconque décrit dans l’art peuvent être adaptées dans les présentes formulations pharmaceutiques.

Le terme MSC couvre en outre la descendance de MSC, par exemple, la descendance obtenue par prolifération (propagation) in vitro ou ex vivo de MSC obtenues à partir d’un échantillon biologique d’un sujet animal ou humain.

Des MSC préférables ont le potentiel de générer des cellules d’au moins le lignage ostéogène (os), tel que, par exemple, des ostéoprogéniteurs et/ou des pré-ostéoblastes et/ou des ostéoblastes et/ou des ostéocytes, etc., ou d’au moins le lignage chondrogène (cartilage), telles que, par exemple, des cellules chondrogènes et/ou des chondroblastes et/ou des chondrocytes, etc.

Le terme « cellule souche » désigne généralement une cellule non spécialisée ou relativement moins spécialisée et compétente pour la prolifération, qui est capable d’autorenouvellement, c’est-à-dire qu’elle peut proliférer sans différenciation, et qui ou dont la descendance peut conduire à au moins un type de cellule relativement plus spécialisé. Le terme couvre des cellules souches capables d’autorenouvellement sensiblement illimité, c’est-à-dire que la descendance d’une cellule souche ou au moins une partie de celle-ci conserve le phénotype sensiblement non spécialisé ou relativement moins spécialisé, le potentiel de différenciation, et la capacité de prolifération de la cellule souche mère, ainsi que des cellules souches qui présentent un autorenouvellement limité, c’est-à-dire que la capacité de la descendance ou une partie de celle-ci pour prolifération et/ou différenciation ultérieure est visiblement réduite par rapport à la cellule mère. À titre d’exemple et non de limitation, une cellule souche peut conduire à des descendants qui peuvent se différencier selon un ou plusieurs lignages afin de produire des cellules de plus en plus spécialisées relativement, de tels descendants et/ou cellules de plus en plus spécialisées relativement peuvent eux-mêmes être des cellules souches telles que présentement définies, ou même produire des cellules à différenciation terminale, c’est-à-dire, des cellules totalement spécialisées, qui peuvent être post-mitotiques.

Le terme « cellule souche adulte », dans le présent contexte, désigne une cellule souche présente dans ou obtenue à partir (par exemple, isolée à partir) d’un organisme au stade fœtal ou après la naissance, tel que, par exemple, après avoir atteint l’âge adulte.

Dans le présent contexte, des « ostéoprogéniteurs » peuvent comprendre, en particulier, des ostéoprogéniteurs précoces et tardifs. Les « cellules ostéoblastiques » peuvent en particulier couvrir des pré-ostéoblastes, ostéoblastes et ostéocytes, et le terme peut plus préférablement désigner des pré-ostéoblastes et ostéoblastes. Tous ces termes sont connus en tant que tels et, dans le présent contexte, peuvent typiquement désigner des cellules ayant un phénotype ostéogène, et qui peut contribuer à, ou sont capables de développer des cellules qui peuvent contribuer à, la formation de matériau osseux ou de matrice osseuse. À titre d’indication supplémentaire et non de limitation, des ostéoprogéniteurs et ostéoblastiques, ainsi que des populations de cellules comprenant des ostéoprogéniteurs et/ou des cellules ostéoblastiques peuvent présenter les caractéristiques suivantes : a) les cellules comprennent l’expression de Runx2, un facteur de transcription multifonctionnel qui régule la différenciation d’ostéoblastes et l’expression de nombreux gènes de protéine de matrice extracellulaire pendant la différenciation d’ostéoblastes ; b) les cellules comprennent l’expression d’au moins un des suivants : phosphatase alcaline (ALP), plus spécifiquement ALP du type os-foie-rein ; et plus préférablement comprennent en outre l’expression d’un ou plusieurs marqueurs osseux additionnels tels que l’ostéocalcine (OCN), le propeptide aminoterminal de procollagène de type 1 (P1NP), l’ostéonectine (ON), l’ostéopontine (OP) et/ou la sialoprotéine osseuse (BSP), et/ou une ou plusieurs protéines de matrice osseuses additionnelles protéines telles que la décorine et/ou l’ostéoprotégérine (OPG) ; c) les cellules n’expriment sensiblement pas CD45 (par exemple, moins d’environ 10 %, de préférence moins d’environ 5 %, plus préférablement moins d’environ 2 % des cellules peuvent exprimer CD45) ; d) les cellules présentent une capacité avérée à minéraliser l’environnement externe, ou synthétiser une matrice extracellulaire contenant du calcium (par exemple, lorsqu’elles sont exposées à un milieu ostéogène ; voir Jaiswal et al. J Cell Biochem, 1997, vol. 64, 295-312). L’accumulation de calcium à l’intérieur des cellules et le dépôt dans des protéines de matrice peut être conventionnellement mesuré, par exemple, par culture dans 45Ca2+, lavage et re-culture, et ensuite détermination de la radioactivité éventuellement présente à l’intérieur de la cellule ou déposée dans la matrice extracellulaire (US 5 972 703), ou en utilisant un essai de minéralisation à base de rouge alizarine (voir, par exemple, Gregory et al. Analytical Biochemistry, 2004, vol. 329, 77-84) ; e) les cellules ne se différencient substantiellement pas en cellules de lignage adipocytaire (par exemple, des adipocytes) ou chondrocytaire (par exemple, des chondrocytes). L’absence de différenciation vers de tels lignages cellulaires peut être testée en utilisant des conditions d’induction de différenciation standard établies dans l’art (par exemple, voir Pittenger et al. Science, 1999, vol. 284, 143-7), et des procédés d’essai (par exemple, lorsqu’ils sont induits, des adipocytes sont typiquement colorés avec l’huile rouge O indiquant l’accumulation de lipides ; les chondrocytes sont typiquement colorés avec le bleu alcian ou la safranine O). L’absence substantielle de propension à une différenciation adipogène et/ou chondrogène peut typiquement signifier que moins de 20 %, ou moins de 10 %, ou moins de 5 %, ou moins de 1 % des cellules testées présentent des signes de différenciation adipogène ou chondrogène lorsqu’elles sont évaluées dans le test respectif.

Les cellules peuvent comprendre en outre l’expression d’un ou plusieurs facteurs de recrutement cellulaire tels que IL6 et/ou VEGF.

Dans le présent contexte, des « cellules chondroblastiques » peuvent comprendre en particulier des chondroblastes, c’est-à-dire, des cellules de cartilage jeunes (non matures, immatures) actives dans la sécrétion de matrice extracellulaire. Il est considéré que les chondroblastes se forment par différenciation à partir de cellules souches mésenchymateuses. Le terme « chondrocyte » désigne plus spécifiquement une cellule de cartilage mature nécessaire pour la maintenance de la matrice cartilagineuse. Ces termes sont connus en tant que tels et, dans le présent contexte, peuvent typiquement désigner des cellules ayant un phénotype chondrogène, et qui peuvent contribuer à, ou sont capables de se développer en cellules qui peuvent contribuer à, la formation de cartilage ou de matrice cartilagineuse. À titre d’indication supplémentaire et non de limitation, les chondrocytes articulaires humains peuvent présenter des caractéristiques d’expression cellulaire telles que résumées dans Diaz-Romero et al. 2005 (J Cell Physiol, vol. 202(3), 731-42), par exemple, ils peuvent exprimer des intégrines et d’autres molécules d’adhésion (CD49a, CD49b, CD49c, CD49e, CD49f, CD51/61, CD54, CD106, CD166, CD58, CD44), des tétraspanines (CD9, CD63, CD81, CD82, CD151), des récepteurs (CD105, CD119, CD130, CD140a, CD221, CD95, CD120a, CD71, CD14), des ecto-enzymes (CD10, CD26), et d’autres molécules de surface (CD90, CD99). Pendant une culture en monocouche, les chondrocytes peuvent réguler à hausse certains marqueurs considérés comme étant distinctifs pour des cellules souches mésenchymateuses (CD10, CD90, CD105, CD166). De tels marqueurs peuvent donc être également exprimés par les cellules chondroblastiques moins matures.

Lorsqu’une cellule est dite positive pour (ou exprime ou comprend l’expression de) un marqueur particulier, cela signifie que l’homme du métier conclura à la présence ou la mise en évidence d’un signal distinctif, par exemple, détectable par anticorps ou détection par réaction de polymérase en chaîne par transcription inverse, pour le marqueur en question lors de la conduite de la mesure appropriée, par rapport à des témoins adaptés. Lorsque le procédé permet l’évaluation quantitative du marqueur, les cellules positives peuvent générer en moyenne un signal qui est significativement différent du témoin, par exemple, mais sans limitation, au moins 1,5 fois plus élevé qu’un tel signal généré par des cellules témoins, par exemple, au moins 2 fois, au moins 4 fois, au moins 10 fois, au moins 20 fois, au moins 30 fois, au moins 40 fois, au moins 50 fois plus élevé ou même plus élevé. L’expression des marqueurs cellule-spécifiques ci-dessus peut être détectée en utilisant une technique immunologique adaptée quelconque connue dans l’art, telle que l’immunocytochimie ou l’adsorption d’affinité, l’analyse par transfert Western, FACS, ELISA, etc., ou par un dosage biochimique adapté quelconque d’une activité enzymatique (par exemple, pour ALP), ou par une technique adaptée quelconque de mesure de la quantité de l’ARNm marqueur, par exemple, un transfert Northern, la RT-PCR semi-quantitative ou quantitative, etc. Les données de séquence pour les marqueurs mentionnées dans la présente description sont connues et peuvent être obtenus à partir de bases de données publiques telles que GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).

La présente formulation pharmaceutique peut comprendre une ou plusieurs substances ayant des propriétés ostéogène, ostéo-inductrice et/ou ostéo-conductrice. Dans des modes de réalisation préférés, une telle substance peut être choisie dans le groupe comprenant ou constitué d’un facteur de croissance des fibroblastes (FGF), de préférence FGF-2, un facteur de croissance transformant bêta (TGFB), de préférence TGFB-1, un facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF), l’interleukine 8 (IL-8), une protéine morphogénétique osseuse (BMP), par exemple l’une ou plusieurs quelconques de BMP-2, BMP-4, BMP-6 et BMP-7, l’hormone parathyroïdienne (PTH), une protéine apparentée à l’hormone parathyroïdienne (PTHrp), et le facteur de cellule souche (SCF). L’une quelconque de telles substances peut être incluse dans une composition pharmaceutique à une concentration suffisante pour obtenir son/ses effet(s) ostéogène, ostéo-inducteur et/ou ostéo-conducteur souhaité(s) lorsqu’il(s) est/sont administré(s) à un sujet, tout en évitant des effets secondaires indésirables, dans la mesure du possible.

Typiquement, mais sans limitation, l’une quelconque de telles substances peut être comprise dans la formulation pharmaceutique à une concentration comprise entre 0,01 ng/ml et 1 mg/ml, par exemple de 0,1 ng/ml à 100 pg/ml, par exemple de 1 ng/ml à 50 pg/ml.

Le terme « ostéo-inducteur » désigne la capacité d’un composant tel qu’un facteur de croissance peptidique à recruter des cellules immatures telles que des cellules souches, des MSC et stimuler ces cellules pour qu’elles se différencient en pré-ostéoblastes et ostéoblastes matures, de manière à former du tissu osseux. Les présentes compositions pharmaceutiques peuvent comprendre en outre un composant ayant des propriétés ostéo-inductrices tel qu’une protéine ou un peptide ostéo-inducteur, par exemple une protéine morphogénétique osseuse, telle que BMP-2, BMP-7 ou BMP-4 ; un hydrogel ou un biopolymère tel que l’acide hyaluronique ou des dérivés de celui-ci, le collagène, le fibrinogène, l’ostéonectine, ou l’ostéocalcine. De préférence, les compositions pharmaceutiques peuvent comprendre en outre de l’acide hyaluronique ou des dérivés de celui-ci, du collagène ou du fibrinogène.

Le terme « ostéo-conducteur » désigne la capacité d’un composant à servir d’échafaudage sur lequel des cellules osseuses peuvent se fixer, migrer, croître et produire de l’os nouveau. Les compositions pharmaceutiques peuvent comprendre en outre un composant ayant des propriétés ostéo-conductrices, par exemple, un échafaudage ou une matrice ostéo-conducteurs ou une surface, telle que, sans limitation, le phosphate tricalcique, l’hydroxyapatite, une combinaison de particules d’hydroxyapatite/phosphate tricalcique (HA/TCP), la gélatine, le poly(acide lactique), le poly(acide lactique-glycolique), l’acide hyaluronique, le chitosane, la poly-L-lysine, ou le collagène.

Comme mentionné ci-dessus, les formulations pharmaceutiques selon la présente invention peuvent comprendre des composants utiles dans la réparation de lésions et défauts osseux. Les formulations pharmaceutiques peuvent comprendre un échafaudage ou une matrice ayant des propriétés ostéo-conductrices. Les formulations pharmaceutiques peuvent être combinées avec une matrice osseuse déminéralisée (DBM) ou d’autres matrices pour rendre le composite ostéogène ainsi qu’ostéo-conducteur et ostéo-inducteur. Des procédés similaires utilisant des cellules de moelle osseuse autologues avec une DBM allogénique ont donné de bons résultats (Connolly et al 1995. Clin Orthop 313: 8-18).

Les formulations pharmaceutiques selon la présente invention peuvent comprendre en outre ou être co-administrées avec un facteur bioactif complémentaire ou une protéine ostéo-inductrice telle qu’une protéine morphogénétique osseuse, telle que BMP-2, BMP-7 ou BMP-4, ou un autre facteur de croissance quelconque. D’autres composants auxiliaires potentiels comprennent des sources inorganiques de calcium ou de phosphate adaptées pour faciliter la régénération osseuse (WO 00/07639). Le cas échéant, la préparation de cellules peut être administrée sur une matrice ou un matériau de support pour permettre une régénération de tissu améliorée. Par exemple, le matériau peut être un hydrogel, ou un biopolymère tel que la gélatine, le collagène, l’acide hyaluronique ou des dérivés de celui-ci, l’ostéonectine, le fibrinogène, ou l’ostéocalcine. Des biomatériaux peuvent être synthétisés selon des techniques standard (par exemple, Mikos et al., Biomaterials 14:323, 1993 ; Mikos et al., Polymer 35:1068, 1994 ; Cook et al., J. Biomed. Mater. Res. 35:513, 1997).

Les formulations appliquant les principes de l’invention présentent avantageusement un comportement de formation de gel particulièrement satisfaisant, produisant des formulations avantageusement visqueuses. Dans certains modes de réalisation, les formulations sont des formulations gélifiantes.

Les termes « gélifiant », « à une phase » ou « monophase » peuvent être utilisés de manière interchangeable présentement. L’expression « formulation gélifiante » telle qu’utilisée dans l’ensemble de cette spécification désigne la capacité de la formulation à former un matériau solide, de type gelée (gel) par exemple, ayant un comportement pseudoplastique. Par exemple, les présentes formulations pharmaceutiques forment avantageusement un gel lorsque leurs composants sont combinés ou lorsque leurs composants sont combinés avec ou exposés à des matériaux et/ou conditions conduisant à la formation de gel, par exemple, mais sans limitation, lorsqu’elles sont dissoutes ou dispersées dans du liquide synovial, du sérum, ou une composition de cellules.

Le terme « viscosité » est généralement une mesure de la réduction d’un fluide qui est déformé par une contrainte de cisaillement ou une contrainte de traction. Les présentes formulations pharmaceutiques peuvent avoir une viscosité d’au moins 10 Pa.s, par exemple les présentes formulations pharmaceutiques peuvent avoir une viscosité dans la plage d’environ 30 Pa.s à environ 500 Pa.s, par exemple, d’environ 50 Pa.s à environ 250 Pa.s, à température ambiante en appliquant un taux de cisaillement de 0,560 s'1.

Les compositions mettant en œuvre les principes de l’invention peuvent acquérir leur consistance gélatineuse, en particulier en présence d’ions calcium divalents (Ca2+). Des tissus animaux, tels que, de préférence, des tissus de mammifère, tels que, plus préférablement, des tissus humains, comprenant des fluides corporels tels que du liquide synovial, contiennent Ca2+ extracellulaire, typiquement à une concentration comprise entre 1 mM et 3 mM. De plus, la concentration de Ca2+ est élevée dans les tissus osseux, où il est stocké principalement sous forme de cristaux de phosphate de calcium sous la forme d’hydroxyapatite.

Par conséquent, dans certains modes de réalisation, il n’est pas nécessaire d’ajouter Ca2+ aux présentes compositions pharmaceutiques, étant donné qu’après leur administration, par exemple dans du tissu osseux ou articulaire, le Ca2+ présent au site d’administration induit la coagulation / gélification des compositions.

Dans certains autres modes de réalisation, Ca2+ peut être ajouté aux présentes compositions pharmaceutiques, par exemple pour faciliter leur coagulation / gélification in situ (par exemple, lorsque la concentration de Ca2+ au site d’administration observée ou prévue est insuffisante pour induire à elle seule la coagulation / gélification des compositions), ou pour obtenir un certain degré de coagulation / gélification in vitro avant leur administration (par exemple, pour améliorer la capacité d’injection et/ou intégrité du produit). Dans de tels modes de réalisation, Ca2+ peut typiquement être ajouté dans les compositions pharmaceutiques à une concentration comprise entre environ 5 mM et environ 100 mM, de préférence entre environ 10 mM et environ 50 mM, plus préférablement entre environ 10 mM et environ 20 mM, ou entre environ 20 mM et environ 40 mM, par exemple, entre environ 20 mM et environ 30 mM ou entre environ 30 mM et environ 40 mM.

Dans certains modes de réalisation, les produits prévus pour administration intra-articulaire ou péri-articulaire peuvent comprendre entre environ 20 mM et environ 40 mM, par exemple entre environ 20 mM et environ 30 mM de Ca2+. Dans certains autre modes de réalisation, les produits prévus administration intra-osseuse ou péri-osseuse peuvent comprendre entre environ 10 mM et environ 20 mM de Ca2+.

Ca2+ peut être inclus de manière appropriée dans les compositions pharmaceutiques par ajout dans celles-ci d’une quantité adaptée de sel(s) de calcium pharmaceutiquement acceptable(s), de préférence des sel(s) de calcium soluble(s). De tels sels de Ca2+ peuvent être formés avec des acides inorganiques ou organiques. Des exemples de tels sels comprennent le chlorure de calcium (CaCl2), le glycérophosphate de calcium, le phosphate de calcium, l’hydrogénocarbonate de calcium, le citrate de calcium, le sulfate de calcium, le lactate de calcium, le gluconate de calcium, l’ascorbate de calcium, et des mélanges de ceux-ci. Il est particulièrement préféré CaCl2, qui présente avantageusement une bonne solubilité et est bien toléré dans des solutions injectables.

Les formulations pharmaceutiques présentement prévues peuvent comprendre entre environ 1 mg/ml et environ 10 mg/ml de CaCl2, de préférence entre environ 2 mg/ml et environ 4 mg/ml de CaCl2. Dans certains modes de réalisation, les produits prévus pour administration intra-articulaire ou péri-articulaire peuvent comprendre entre environ 1 mg/ml et environ 10 mg/ml de CaCl2, de préférence entre environ 2 mg/ml et environ 5 mg/ml, plus préférablement environ 4 mg/ml de CaCl2. Dans certains autres modes de réalisation, les produits prévus pour administration intra-osseuse ou péri-osseuse peuvent comprendre entre environ 1 mg/ml et environ 10 mg/ml de CaCl2, de préférence entre environ 2 mg/ml et environ 5 mg/ml, plus préférablement environ 2 mg/ml de CaCl2.

Dans certains modes de réalisation, les formulations pharmaceutiques peuvent être configurées pour administration parentérale, telle qu’une injection parentérale, plus préférablement pour administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, ou péri-articulaire, telle qu’une injection intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, ou péri-articulaire, ou pour administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire, telle qu’une injection intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire.

Les formulations pharmaceutiques ou kit de composants tels que présentement décrits peuvent être configurés pour administration locale. Les présentes formulations pharmaceutiques ou kits de composants peuvent être configurés pour administration parentérale, c’est-à-dire, comprenant l’une ou plusieurs des administrations intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, péri-articulaire, intramusculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intrastemale, intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire, par exemple comprenant l’une ou plusieurs des administrations intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, péri-articulaire, intramusculaire, sous-cutanée, intraveineuse, et intrastemale.

De préférence, les formulations pharmaceutiques ou kit de composants tels que présentement décrits sont configurés pour administration intra-osseuse ou péri-osseuse. L’administration ou délivrance intra-osseuse désigne généralement un procédé dans lequel un traitement est administré, directement ou indirectement, dans l’os (trabéculaire ou cortical). L’administration ou délivrance péri-osseuse désigne généralement un procédé dans lequel un traitement est administré autour d’un os (en particulier autour du site de fracture/lésion).

Il est particulièrement préféré que les formulations pharmaceutiques ou kit de composants tels que présentement décrits soient configurés pour administration intra-articulaire ou péri-articulaire. L’administration ou délivrance intra-articulaire désigne généralement un procédé dans lequel un traitement est administré, directement ou indirectement, dans la capsule synoviale d’une articulation. L’administration ou délivrance péri-articulaire désigne généralement un procédé dans lequel un traitement est administré autour de la capsule synoviale d’une articulation et/ou de l’os sous-chondral.

De plus, les formulations pharmaceutiques ou kit de composants tels que présentement décrits peuvent être configurés pour administration intra-tendineuse ou péri-tendineuse. De plus, les formulations pharmaceutiques ou kit de composants tels que présentement décrits peuvent être configurées pour administration intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire.

Un aspect associé concerne la formulation pharmaceutique telle que décrite ci-dessus pour utilisation dans le traitement (comprenant l’ensemble des mesures thérapeutiques et/ou préventives de la présente spécification) d’une maladie musculo-squelettique.

Le terme « maladie musculo-squelettique », dans le présent contexte, désigne un type quelconque de maladie osseuse, maladie musculaire, maladie articulaire, ou chondrodystrophie, dont le traitement peut tirer profit de l’administration de la présente formulation pharmaceutique à un sujet ayant la maladie. Le terme couvre en outre des maladies affectant les tendons et/ou les ligaments). En particulier, une telle maladie peut être caractérisée, par exemple, par la formation réduite d’os et/ou cartilage ou une résorption excessive d’os et/ou cartilage, par une diminution du nombre, de la viabilité ou de la fonction des ostéoblastes ou ostéocytes présents dans les os et/ou chondroblastes ou chondrocytes présents dans le cartilage, une diminution de la masse osseuse et/ou masse de cartilage chez un sujet, l’amincissement des os, une altération de la résistance ou l’élasticité des os, etc.

Des exemples non limitatifs de maladies musculo-squelettiques peuvent comprendre des troubles locaux ou systémiques, tels que, un type quelconque d’ostéoporose ou d’ostéopénie, par exemple, primitive, postménopause, sénile, induite par les corticoïdes, induite par les bisphosphonates, et induite par radiothérapie ; une ostéonécrose secondaire quelconque, mono- ou multisite ; un type de fracture quelconque, par exemple, des fractures non consolidées, mal consolidées, avec retard de consolidation ou une compression, des affections nécessitant une fusion osseuse (par exemple, des fusions et une reconstruction vertébrales), des fractures maxillo-faciales, un défaut osseux congénital, une reconstruction osseuse, par exemple, après une lésion traumatique ou une chirurgie d’un cancer, et une reconstruction osseuse crânio-faciale ; une arthrite traumatique, un défaut cartilagineux et/ou articulaire focal, une arthrite dégénérative focale ; l’arthrose, l’arthrite dégénérative, la gonarthrose, et la coxarthrose ; l’ostéogenèse imparfaite ; un cancer osseux ostéolytique ; la maladie de Paget, des troubles endocrines, l’hypophosphatémie, l’hypocalcémie, l’ostéodystrophie rénale, l’ostéomalacie, une maladie osseuse adynamique, l’hyperparathyroïdisme, l’hyperparathyroïdisme primaire, l’hyperparathyroïdisme secondaire ; une maladie parodontique ; la maladie de Gorham-Stout et le syndrome de McCune-Albright ; la polyarthrite rhumatoïde ; les spondyloarthropathies, comprenant la spondylarthrite ankylosante, le rhumatisme psoriasique, l’arthropathie entéropathique, et la spondylarthrite indifférenciée et l’arthrite réactive ; le lupus érythémateux disséminé et les syndromes associés ; la sclérodermie et les troubles associés ; le syndrome de Sjôgren ; une angéite systémique, comprenant l’artérite à cellules géantes (maladie de Horion), l’artérite de Takayasu, la polymyalgie rhumatismale, une angéite associée à ANCA (telle que la granulomatose de Wegener, la polyangéite microscopique, et le syndrome de Churg-Strauss), le syndrome de Behcet, et d’autres polyartérites et troubles associés (tels que la polyartérite noueuse, le syndrome de Cogan, et la maladie de Buerger) ; l’arthrite accompagnant d’autres maladies inflammatoires systémiques, comprenant l’amylose et la sarcoïdose ; les arthropathies cristallines, comprenant la goutte, la maladie du pyrophosphate de calcium dihydraté, des troubles ou syndromes associés à un dépôt articulaire de cristaux de phosphate de calcium ou d’oxalate de calcium ; la chondrocalcinose et l’arthropathie neuropathique ; le syndrome de Felty et le syndrome de Reiter ; la maladie de Lyme et la fièvre rhumatismale.

Le terme « quantité prophylactiquement efficace » désigne une quantité d’un composé actif ou une substance active pharmaceutique qui inhibe ou retarder chez un sujet l’apparition d’un trouble, comme souhaité par un chercheur, un vétérinaire, un médecin ou un autre clinicien. Le terme « quantité thérapeutiquement efficace », dans le présent contexte, désigne une quantité de composé actif ou d’agent pharmaceutique qui induit la réponse biologique ou médicinale chez un sujet qui est souhaitée par un chercheur, un vétérinaire, un médecin ou un autre clinicien, qui peut comprendre, entre autres, l’atténuation des symptômes de la maladie ou affection étant traitée. Des procédés sont connus dans l’art pour déterminer des doses thérapeutiquement et prophylactiquement efficaces pour les présentes formulations ou formulations pharmaceutiques.

Dans le contexte de la présente invention, une « dose thérapeutiquement efficace » désigne une quantité d’une substance active pharmaceutique ou formulation qui, lorsqu’elle est administrée, induit une réponse thérapeutique positive en ce qui concerne le traitement d’un patient avec une maladie musculo-squelettique telle qu’une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments).

Des doses thérapeutiquement efficaces appropriées d’un composé actif pharmaceutique ou d’une substance active pharmaceutique dans la présente formulation peuvent être déterminées par un médecin qualifié en tenant compte de la nature du composé actif pharmaceutique ou de la substance active pharmaceutique, l’état et la gravité de la maladie, et l’âge, la taille et l’état de santé du patient.

Sans limitation, une dose typique, par exemple, du glycosaminoglycane à administrer peut être dans la plage d’environ 2 mg à 400 mg du glycosaminoglycane par injection. Par exemple, la dose à administrer peut être dans la plage d’environ 4 mg à 300 mg du glycosaminoglycane par injection, par exemple, d’environ 8 mg à 200 mg du glycosaminoglycane par injection. De préférence, la dose à administrer est dans la plage d’environ 8 mg à 160 mg du glycosaminoglycane par injection.

Sans limitation, une dose typique de, par exemple, la composition de cellules à administrer, peut être dans la plage d’environ 0,05xl06 cellules à 5x 109 cellules par injection. Par exemple, la dose à administrer peut être dans la plage d’environ 0,5xl06 cellules to lxlO9 cellules par injection. De préférence, la dose à administrer est dans la plage d’environ 4x106 cellules à 250x106 cellules par injection.

Il est reconnu que les traitements de l’invention peuvent comprendre l’administration d’une dose thérapeutiquement efficace unique ou l’administration de doses thérapeutiquement efficaces multiples de formulations ou formulations pharmaceutiques.

Sauf indication contraire, « sujet » ou « patient » sont utilisés de manière interchangeable et désignent des animaux, de préférence des animaux à sang chaud, plus préférablement des vertébrés, encore plus préférablement des mammifères, encore plus préférablement des primates, et comprennent spécifiquement des patients humains et des mammifères et des primates non humains. Les patients préférés sont des sujets humains.

Dans le présent contexte, une phrase telle que « un sujet nécessitant un traitement » comprend des sujets qui bénéficieraient du traitement d’une affection donnée, en particulier d’une maladie musculo-squelettique telle qu’une maladie osseuse ou une maladie articulaire (en variante ou en outre, ladite maladie peut affecter les tendons et/ou les ligaments). De tels sujets peuvent comprendre, sans limitation, ceux qui ont été diagnostiqués avec ladite affection, ceux susceptibles de développer ladite affection et/ou ceux chez lesquels ladite affection doit être prévenue.

Les termes « traiter » ou « traitement » couvrent à la fois le traitement thérapeutique d’une maladie ou affection déjà développée, ainsi que des mesures prophylactiques ou préventives, l’objectif étant de prévenir ou diminuer les risques d’incidence d’une affection indésirable, par exemple pour prévenir les risques de progression de la maladie ou affection. Des résultats cliniques bénéfiques ou souhaités peuvent comprendre, sans limitation, l’atténuation d’un ou plusieurs symptômes ou un ou plusieurs marqueurs biologiques, la diminution du degré de la maladie, un état stabilisé (c’est-à-dire, sans aggravation) de la maladie, le retardement ou le ralentissement de la progression de la maladie, l’amélioration ou la palliation de l’état pathologique, et similaire. Le « traitement » peut également désigner la prolongation de la survie par rapport à la survie prévue sans recevoir un traitement.

Les présentes formulations pharmaceutiques peuvent comprendre en plus des composants particulièrement spécifiés présentement un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. Les excipients pharmaceutiques adaptés dépendent de la forme pharmaceutique et de l’identité des substances actives et peuvent être choisis par l’homme du métier (par exemple, en référence au Handbook of Pharmaceutical Excipients 6eme édition 2009, éd. Rowe et al.). Dans le présent contexte, « véhicule » ou « excipient » comprend l’un quelconque et tous les solvants, diluants, tampons (tels que, par exemple, du soluté tamponné neutre ou du soluté tamponné par les phosphates), solubilisants, colloïdes, milieux de dispersion, véhicules, charges, agents chélateurs (tels que, par exemple, l’EDTA ou le glutathion), acides aminés (tels que, par exemple, la glycine), protéines, délitants, liants, lubrifiants, agents mouillants, émulsifiants, édulcorants, colorants, agents aromatisants, arômes, épaississants, agents pour obtenir un effet de dépôt, enrobages, agents antifongiques, conservateurs, stabilisants, antioxydants, agents contrôlant la tonicité, agents retardant l’absorption, et similaire. L’utilisation de tels milieux et agents pour des substances actives pharmaceutiques est connue dans l’art. De tels matériaux doivent être non toxiques et ne doivent pas interférer avec l’activité des substances pharmaceutiquement actives.

La nature précise du véhicule ou autre matériau dépend de la voie d’administration. Par exemple, la formulation peut être sous la forme d’une solution aqueuse acceptable par voie parentérale, qui est apyrogène et a un pH, une isotonicité et une stabilité adaptées.

Les formulations peuvent comprendre des substances auxiliaires pharmaceutiquement acceptables comme requis pour se rapprocher des conditions physiologiques, telles que des agents d’ajustement et de tampon de pH, des conservateurs, des agents complexants, des agents d’ajustement de tonicité, des agents mouillants et similaire, par exemple, l’acétate de sodium, le lactate de sodium, le phosphate de sodium, l’hydroxyde de sodium, le chlorure d’hydrogène, l’alcool benzylique, des parabènes, l’EDTA, l’oléate de sodium, le chlorure de sodium, le chlorure de potassium, le chlorure de calcium, le monolaurate de sorbitane, l’oléate de triéthanolamine, etc. De préférence, la valeur de pH de la formulation est dans la plage de pH physiologique, par exemple, en particulier, le pH de la formulation est compris entre environ 5 et environ 9,5, plus préférablement entre environ 6 et environ 8,5, encore plus préférablement entre environ 7 et environ 7,5. La préparation de telles formulations pharmaceutiques est dans la portée de l’homme du métier.

Un autre aspect concerne l’utilisation des formulations mentionnées ci-dessus en tant qu’excipient pharmaceutique, plus préférablement en tant qu’excipient pharmaceutique à libération prolongée ou libération lente.

Les termes « libération prolongée », « libération lente » ou « libération prolongée », dans le présent contexte, désignent généralement la libération d’un composé à partir d’une formulation sur une durée étendue, prolongée ou augmentée par rapport à la libération dudit composé depuis une formulation de référence telle qu’une formulation connue dans l’art antérieur. Dans le présent contexte, la libération prolongée désigne la libération prolongée d’un ou plusieurs des composants des formulations, c’est-à-dire le plasma S/D, qui peut comprendre des substances biologiques bénéfiques telles que des facteurs de croissance endogènes, et un glycosaminoglycane, la composition de cellules, ou les un ou plusieurs composés actifs pharmaceutiques, et facultativement un ou plusieurs composant(s) pharmaceutique(s) actif(s) additionnel(s). Par exemple, il est connu dans l’art antérieur que la demi-vie d’acide hyaluronique de poids moléculaire élevé dans l’articulation est d’environ 6 à 8 heures. La libération prolongée, dans le présent contexte, désigne par conséquent la libération prolongée d’un glycosaminoglycane tel que l’acide hyaluronique à partir des présentes formulations, par exemple la libération pendant un ou plusieurs jours, par exemple pendant 2 jours, 3 jours, 4 jours, 5 jours, 6 jours, ou pendant une ou plusieurs semaines, par exemple pendant 1,5 semaine, 2 semaines, 3 semaines, ou pendant un ou plusieurs mois. Par conséquent, ces termes peuvent couvrir spécifiquement en outre une libération étendue, une libération retardée ou une libération contrôlée.

Exemples

Exemple 1: comparaison entre du plasma humain traité par solvant/détergent (plasma S/D) et du plasma congelé frais humain (FFP)

Caractéristiques de composition de formulations exemplaires

La monographie de produit du plasma S/D, à savoir Octaplas® d’Octapharma AG (Lachen, Suisse) présente une comparaison entre les caractéristiques de composition de plasma S/D et de plasma congelé frais (FFP) humain, comme décrit dans le tableau 1. Selon ces informations, les produits ont dans une large mesure des compositions de protéines plasmatiques comparables ; le plasma S/D peut présenter un taux significativement plus faible d’inhibiteur de plasmine.

Tableau 1 : caractéristiques de composition de plasma S/D, en particulier Octaplas®, et de plasma congelé frais (FFP) sur la base de la monographie de produit Octaplas®

L’examen de la composition de plasma S/D, en particulier Octaplas®, et de plasma congelé frais, Svae et al. 2007 a permis de conclure qu’il n’y a pas de réductions critiques des activités de facteurs de coagulation et inhibiteurs d’origine naturelle causées par le processus de fabrication, comprenant le traitement S/D, tandis que la protéine S et l’inhibiteur de plasmine peuvent présenter une diminution de 35 % et 76 %, respectivement (Beeck et Hellstem 1998). Doyle et al. 2003 décrivent des taux significativement plus faibles de protéine S (38 %), d’inhibiteur de plasmine (78 %), ainsi que de facteur XI (13 %) et de facteur V (13 %), et des taux significativement augmentés de facteur VII (15 %) dans le plasma S/D en comparant 16 lots d’Octaplas® à 48 unités de FFP non appariées.

Il est fait référence au tableau 1 de Svae et al. 2007 présentant les caractéristiques de composition de 12 lots consécutifs d’Octaplas® vs. 12 unités aléatoires de FFP mises en quarantaine. Bien que la plupart des composants ne soient pas significativement modifiés, le tableau 2 ci-dessous reproduit les composants du tableau 1 de Svae et al. 2007 qui présentent des différences significatives (valeur P < 0,05, test t non apparié).

Tableau 2 : différences de composition entre le plasma S/D, à savoir Octaplas®, et FFP, sur la base du tableau 1 de Svae et al. 2007

De plus, Theusinger et al. 2011 (Br. J. Anaesth., 106(4):505-11) ont étudié les concentrations relatives de facteurs hémostatiques et de cytokines dans du plasma S/D, à savoir Octaplas®, et du plasma congelé frais (n = 25). Ils ont observé que la teneur en facteur de coagulation est similaire pour le plasma S/D et FFP, mais le plasma S/D contient moins de facteur V, facteur de von

Willebrand (vWF), et protéase de clivage de facteur de von Willebrand (vWFCP, ADAMTS-13). Les concentrations de cytokine (TNFa, IL-8, et IL-10) sont significativement plus élevées dans FFP.

De plus, le processus S/D peut conduire à des pertes des activités du facteur V labile, du facteur VIII, d’inhibiteur de sérine protéase (serpine) de al-antitrypsine et a2-antiplasmine, mais pas de l’antithrombine (Benjamin et McLaughtin 2012 ; Mast et al. 1999). La perte de facteur VIII est associée à une diminution du facteur de von Willebrand (vWF) de poids moléculaire élevé. Dans une étude de Sachs et al. 2005 les échantillons de plasma S/D (n = 5) sont testés négatifs pour les anticorps spécifiques pour les granulocytes ainsi que HLA de classe I et de classe IL

Le tableau 3 présente une vue d’ensemble de distinctions démontrables entre le plasma S/D, à savoir Octaplas®, et le plasma congelé frais, telles que détectées dans les études mentionnées ci-dessus.

Tableau 3 : différences exemplaires entre le plasma S/D, à savoir Octaplas®, et le plasma congelé frais

En conclusion, de nombreuses différences de composition ont été documentées entre le plasma humain S/D et le plasma congelé frais. Une caractéristique particulièrement marquée du plasma S/D peut être un taux réduit d’inhibiteur de plasmine vs. FFP, tel qu’un taux d’inhibiteur de plasmine inférieur ou égal à 0,60 Ul/ml ou inférieur ou égal à 0,50 Ul/ml, par exemple un taux d’inhibiteur de plasmine compris entre 0,20 et 0,30 Ul/ml, plus spécifiquement entre 0,22 et 0,25 Ul/ml.

Comportement de coagulation

Les essais ci-après utilisent les types de plasma humain suivants : plasma S/D, à savoir Octaplas®, plasma traité dans un tube hépariné, plasma traité dans un tube contenant de l’EDTA, ou plasma traité dans un tube citraté. Le plasma est préparé comme suit : du sang est directement collecté dans des tubes correspondants, c’est-à-dire, des tubes héparinés, contenant de l’EDTA, ou citratés et les tubes sont centrifugés à 1500 g pendant 10 minutes à température ambiante afin de collecter le plasma sous la forme d’un surnageant. Étant donné que le plasma S/D est du plasma décellularisé par filtration, les autres types de plasma sont, comme indiqué, filtrés sur un filtre de 0,2 pm afin d’assurer l’absence de cellules, telles que des plaquettes, ou de débris. Le volume du mélange de réaction est de 250 μΐ ou 500 μΐ. Chaque constituant et le mélange sont maintenus à 37 °C. Le temps de coagulation est déterminé à 37 °C pour un mélange contenant le type de plasma respectif, 10 ou 20 % v/v de sérum, et 2,5 ou 5 % v/v CaCl2 (0,546 M). Le temps de coagulation est mesuré par observation visuelle, éventuellement pendant ou après l’agitation du tube. Cinq échantillons sont testés. Les résultats sont résumés dans le tableau 4. 11 n’y a pas de distinction dans les résultats obtenus entre 2,5 % et 5 % de CaCl2 et entre 10 ou 20 % de sérum.

Tableau 4 : comportement de coagulation de plasma S/D, à savoir Octaplas®, comparé à d’autres types de plasma

La formation de caillot n’est pas observée avec le plasma hépariné, non filtré ou filtré (décellularisé). La filtration de plasma S/D ne produit aucune différence significative de temps de coagulation (p = 0,7780, test t apparié) tandis qu’une augmentation significative est observée pour le plasma EDTA (p = 0,0053, test t apparié) et pour le plasma citraté (p = 0,0143, test t apparié). Cependant, la formation de caillot avec le plasma S/D est environ 50 % à plus de 100 % plus rapide, comparé au plasma citraté et au plasma EDTA, respectivement. Par conséquent, le plasma S/D, exemplifié par Octaplas®, diffère des autres types de plasma en termes de propriétés de coagulation.

Une caractéristique marquée du plasma S/D, en particulier le plasma S/D décellularisé, peut donc être un temps de coagulation réduit. Par exemple, le temps de coagulation peut être inférieur ou égal à 700 s, ou inférieur ou égal à 600 s, par exemple entre 500 et 700 s, ou entre 550 et 600 s, lorsqu’il est mesuré à 37 °C dans un mélange comprenant du plasma humain S/D décellularisé, 10 ou 20 % v/v de sérum et 2,5 ou 5 % m/v CaCl2 (0,546 M).

Exemple 2 : formation de gel par plasma humain traité par solvant/détergent (S/D) (Octaplas®) et acide hyaluronique (HA)

Formation de caillot / gel par Octaplas® et HA

Le comportement de plasma humain S/D, en particulier Octaplas®, est testé en combinaison avec du liquide synovial de patients arthritiques (n = 2). Le liquide synovial est mis en contact à un rapport 1:1 v/v avec une formulation selon un mode de réalisation de la présente invention comprenant Octaplas®, de l’acide hyaluronique (10 mg/ml de hyaluronate de sodium, poids moléculaire de 1,8 à 2.106Da, fourni par Contipro, République Tchèque) et CaCl2. Trois concentrations de CaCl2, à savoir 0, 2 et 4 mg/ml de CaCl2, sont testées. La formation de gel est évaluée visuellement après différents temps (20 à 30 min, 1 h, 2 h) en utilisant un minuteur. La viscosité est évaluée en mesurant le temps nécessaire pour que les solutions atteignent une échelle définie sur la paroi du récipient lorsque le tube de réaction est retourné. Le test est effectué deux fois sur du liquide synovial de deux patients arthritiques. L’incubation d’une formulation comprenant 4 mg/ml de CaCl2 avec du liquide synovial induit la formation d’un gel qui est plus visqueux comparé à un gel obtenu par mise en contact de liquide synovial avec une formulation comprenant 2 mg/ml de CaCl2. Après mise en contact d’une formulation sans CaCl2 avec du liquide synovial, aucune formation de caillot n’est observée.

Formation de caillot / gel par OctaplasLG AB® et HA en présence de liquide synovial

Le comportement de plasma humain S/D, en particulier OctaplasLG AB®, est testé en combinaison avec du liquide synovial de patients atteints d’arthrose (n = 5). Le liquide synovial de ces patients est mélangé à un rapport 1:2 (v/v) avec une formulation selon un mode de réalisation de la présente invention comprenant OctaplasLG AB®, HA (10 mg/ml de hyaluronate de sodium, poids moléculaire de 2 à 3.106 Da, fourni par HTL Biotechnology, France), du chlorhydrate de clonidine (HCl) (200 pg/ml, acheté à PC AS Laboratory, Finlande) et CaCL (4 mg/ml de Calciclo®, fourni par Sterop Group, Belgique) afin de mimer les conditions cliniques. La formation de caillot/gel est évaluée visuellement après 30 minutes à 37 °C (incubateur humidifié, 5 % C02).

Une fois en contact avec du liquide synovial, cette formulation forme un caillot en 30 minutes.

Dans un autre essai, trois concentrations de CaCl2 (c’est-à-dire, 0, 2 et 4 mg/ml de CaCl2) sont testées dans la formulation mentionnée ci-dessus. Le test est effectué deux fois sur du liquide synovial de patients atteints d’arthrose (n = 2). L’incubation d’une formulation comprenant 4 mg/ml ou 2 mg/ml de CaCl2 avec du liquide synovial induit la formation d’un gel de même viscosité. Cependant, après mélange d’une formulation sans CaCl2 avec du liquide synovial, aucune formation de caillot n’est observée. Par conséquent, la dose de 2 mg/ml de CaCl2 (14 mM) est choisie dans la formulation finale.

En conclusion, dans cet essai, Ca2+ est requis pour la formation de caillot en présence de liquide synovial. Il peut être nécessaire d’ajouter Ca2+ à une formulation illustrant la présente invention, en particulier lorsqu’il est observé ou attendu qu’il est présent à des taux suffisants dans les tissus articulaires.

Formation de caillot / gel par OctaplasLG AB® et HA en présence de sang total L’effet gélifiant d’OctaplasLG AB® avec HA en combinaison avec du sang total d’un donneur sain (n=l) est étudié afin d’évaluer son potentiel à former une matrice comprenant des facteurs de croissance dérivés des plaquettes. Dans cette étude, le comportement d’une formulation comprenant OctaplasLG AB®, HA (4 mg/ml de hyaluronate de sodium, poids moléculaire de 2 à 3.106 Da, fourni par HTL Biotechnology, France) et CaCl2 (2 mg/ml de Calciclo®, fourni par Sterop Group, Belgique) est testé en combinaison avec du sang total collecté dans des tubes citratés (n° VF054SBCS07, Venosafe, Terumo). Le temps de coagulation est mesuré par observation visuelle après agitation du tube/homogénéisation de solution.

Les résultats montrent qu’une fois en contact avec du sang citraté à un rapport 1:1 (v/v), cette formulation forme un caillot en 15 minutes à 37 °C (incubateur humidifié, 5 % CO2).

Formation de caillot / gel par Octaplas® et HA comparé à d’autres types de plasma

La consistance de plusieurs formulations est testée. Les formulations contiennent de l’acide hyaluronique (hyaluronate de sodium, poids moléculaire de 2 à 3.106 Da, fourni par HTL, France), CaCL et Octaplas® ou le même volume des types de plasma humain suivants (non filtré) : plasma traité dans un tube hépariné, plasma traité dans un tube contenant de l’EDTA, ou plasma traité dans un tube citraté (voir tableau 5 pour la composition des formulations).

Tableau 5 : composition des formulations

Du sérum humain préparé à partir de sang périphérique à un rapport 1:1 v/v est ajouté au produit et incubé à 37 °C sous agitation. La consistance est observée visuellement après 30 minutes, 1 h et 24 h.

Le tableau 6 présente une évaluation semi-quantitative de la gélification avec les différents types de plasma. Après 1 heure, la formulation contenant Octaplas® présente une consistance visqueuse, même une consistance gélifiée. La formulation contenant du plasma hépariné reste liquide après 1 heure (tableau 6). La formulation contenant Octaplas® est plus visqueuse que des formulations contenant du plasma traité dans un tube contenant de l’EDTA ou du plasma traité dans un tube citraté (tableau 6). Par conséquent, la formulation contenant Octaplas® est plus visqueuse que des formulations contenant les autres types de plasma.

Tableau 6 : gélification avec Octaplas® vs. autres types de plasma (non filtré) en présence de HA

*Octaplas® est du plasma filtré, c’est-à-dire, du plasma sans constituants/composants cellulaires. ** Résultats obtenus après agitation

Formation de caillot / gel par Octaplas® en présence ou en l’absence de HA

La consistance est comparée entre des formulations contenant Octaplas®, CaCl2 et du sérum, avec ou sans acide hyaluronique (hyaluronate de sodium, poids moléculaire de 2 à 3.106 Da, fourni par HTL, France). Une formulation sans acide hyaluronique est préparée à 37 °C par mélange des composants suivants : 2 ml d’Octaplas®, 222 μΐ de sérum, et 22 μΐ de 30 mg/ml de solution mère de CaCl2 (préparée à partir de sel CaCl2 de Sigma dans de l’eau). Une formulation avec de l’acide hyaluronique est préparée à 37 °C par mélange des composants suivants : 8 mg de HA précédemment dissous dans 2 ml d’Octaplas®, 222 μΐ de sérum, et 22 μΐ de solution mère à 30 mg/ml de CaCl2 (préparée à partir de sel CaCl2 de Sigma dans de l’eau). Le temps de coagulation est mesuré par observation visuelle et agitation du tube. Le test est effectué une fois.

Après inspection visuelle, un caillot ou une phase gélifiée s’est formée dans les deux formulations. La formulation avec HA, cependant, contient une quantité nettement inférieure de phase liquide et peut être manipulée sans changement. Au contraire, le caillot sans HA se rompt et libère du liquide après manipulation du caillot.

Formulation d’administration de cellules à base de plasma S/D et HA

Une formulation exemplaire, non limitative, adaptée pour l’administration intra-osseuse de cellules à un sujet mammifère comprend, est essentiellement constituée de, ou est constituée de plasma S/D, en particulier Octaplas®, 20 mg/ml HA, une composition de cellules comprenant des cellules souches mésenchymateuses (MSC) autologues ou allogéniques isolées à partir de moelle osseuse humaine ou une composition de cellules comprenant des cellules ostéoblastiques, et 20 mg/ml de CaCl2. La formulation est administrée à un site de défaut osseux chez le patient.

Exemple 3 : formation de gel par du plasma humain S/D tel qu’Octaplas® et une composition de cellules

Formation de caillot / gel par Octaplas® et un milieu de culture de cellules contenant Ca2+

La formation de caillot est testée pour plusieurs formulations sans cellules mais comprenant du plasma humain S/D, en particulier Octaplas®, un milieu de culture conventionnel (qui contient CaCl2) et du sérum humain. Différentes conditions sont testées afin de vérifier la formation de caillot à 37 °C telles qu’Octaplas® à différentes concentrations, par exemple, 5 %, v/v 7,5 % v/v, ou 10 % v/v ; différents milieux de culture conventionnels, par exemple, DMEM, MEM, PBS, ou PBS plus CaCl2 ; et l’absence ou la présence de 5 ou 10 % v/v de sérum. La formation d’un caillot est visuellement observée lorsque Octaplas®, un milieu de culture conventionnel (qui contient CaCl2) et du sérum sont combinés en l’absence de cellules.

Il peut être conclu que la présence de sérum ainsi que la présence de calcium dans le milieu de culture semble nécessaire pour la formation de caillot en l’absence de cellules.

Formation de caillot / gel par Octaplas® et une composition de cellules

Des MSC de moelle osseuse sont déposées à 57000 cellules/cm2 dans des fioles en plastique dans un milieu de culture conventionnel (DMEM) contenant 5 % v/v, 10 % v/v, ou 15 % v/v de plasma S/D, en particulier Octaplas®. Les fioles sont directement placées à 37 °C dans un incubateur à 5 % CO2. La gélification du milieu est observée en moins d’une heure à 37 °C. Le milieu de cellules contenant du plasma humain S/D, en particulier Octaplas®, change de consistance de liquide à gélifié (gel) en 30 minutes après contact.

Les données ci-dessus démontrent la capacité d’une formulation comprenant du plasma S/D et des cellules dans du milieu de culture de cellules contenant Ca2+ à gélifier en comparaison à une culture de cellules dans du milieu de culture de cellules contenant Ca2+ avec du sérum, c’est-à-dire, dans des conditions de culture de cellules conventionnelles, qui sont généralement connues pour rester liquides.

Formation de caillot / gel par Octaplas®, autres types de plasma, et composition de cellules

La consistance d’une composition de culture de cellules avec différents types de plasma humain -Octaplas®, plasma traité dans un tube hépariné, plasma traité dans un tube contenant de l’EDTA, ou plasma traité dans un tube citraté - est évaluée. 57000 cellules/cm2 de cellules ostéoprogénitrices cultivées à partir de cellules de moelle osseuse sont ensemencées dans une fiole en plastique T25 dans 6 ml de milieu de culture (85 % v/v) supplémenté avec 15% v/v du plasma respectif à 37 °C. Les résultats sont résumés dans le tableau 7. Le milieu reste liquide avec du plasma hépariné (tableau 7). Aucune différence n’est observée dans cet essai initial entre Octaplas®, plasma-EDTA et plasma citraté (tableau 7).

Tableau 7 : temps de gélification / coagulation pour les différents types de plasma testés en présence de cellules

*Octaplas® est du plasma filtré, c’est-à-dire, du plasma sans constituants / composants cellulaires. **Trois cultures de cellules sont testées pour chaque type de plasma

Formulation d’administration de cellules à base de plasma S/D

Une formulation exemplaire, non limitative, adaptée pour l’administration intra-osseuse de cellules à un sujet mammifère comprend, est essentiellement constituée de, ou est constituée de plasma S/D, en particulier Octaplas®, une composition de cellules comprenant des cellules souches mésenchymateuses (MSC) autologues ou allogéniques isolées à partir de moelle osseuse ou une composition de cellules comprenant des cellules ostéoblastiques, et 2 à 8 mg/ml de CaCl2. La formulation est administrée à un site de défaut osseux dans un modèle d’ostéotomie de la calotte crânienne chez des souris.

Exemple 4 : formation de gel par du plasma humain S/D tel qu’Octaplas®

Une formulation pharmaceutique exemplaire, non limitative, comprenant du plasma S/D et une substance active pharmaceutique, la formulation étant adaptée pour utilisation thérapeutique dans des défauts osseux, est essentiellement constituée de ou est constituée de plasma S/D, en particulier Octaplas®, un facteur de croissance (IL-8 à 30 pg/ml) et 2 à 8 mg/ml de CaCl2. La formulation est administrée à un site de défaut osseux dans un modèle d’ostéotomie de la calotte crânienne chez la souris nude. 4 semaines après l’administration de la formulation, la réparation osseuse peut être clairement observée chez les souris traitées comparées au témoin sans IL-8 (voir figures 1 et 2).

Liste des citations

Littérature non brevet

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Claims

Revendications

1. Formulation pharmaceutique comprenant du plasma traité par solvant/détergent (plasma S/D) et un glycosaminoglycane, dans laquelle la formulation pharmaceutique comprend le glycosaminoglycane à une concentration dans la plage d’environ 0,10 mg/ml à environ 200 mg/ml.
2. Formulation pharmaceutique selon la revendication 1, dans laquelle le plasma S/D est du plasma humain S/D.
3. Formulation pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 1 ou 2, dans laquelle le glycosaminoglycane est l’acide hyaluronique ou un dérivé de celui-ci.
4. Formulation pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, comprenant en outre une ou plusieurs substances actives pharmaceutiques.
5. Formulation pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, comprenant en outre du sérum, de préférence du sérum humain.
6. Formulation pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, comprenant en outre du sang total ou un composant fractionné de sang total, le sang total étant de préférence du sang total humain.
7. Formulation pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 4 à 6, dans laquelle une ou plusieurs substances actives pharmaceutiques sont, chacune indépendamment, choisies dans le groupe constitué de : une composition de cellules, un composé actif pharmaceutique, une protéine, un peptide, et une petite molécule organique.
8. Formulation pharmaceutique selon la revendication 7, dans laquelle la composition de cellules comprend des cellules souches mésenchymateuses (MSC), des ostéoprogéniteurs, des cellules ostéoblastiques, des ostéocytes, des cellules chondroblastiques, et/ou des chondrocytes.
9. Formulation pharmaceutique selon la revendication 7, dans laquelle le composé actif pharmaceutique est un agoniste de récepteur alpha-2-adrénergique, de préférence l’agoniste de récepteur alpha-2-adrénergique est choisi dans le groupe constitué de la clonidine et des dérivés de celle-ci.
10. Formulation pharmaceutique selon la revendication 7, dans laquelle la protéine ou le peptide pharmaceutique actif est un facteur de croissance, de préférence un facteur de croissance choisi dans le groupe constitué d’un facteur de croissance des fibroblastes (FGF), un facteur de croissance transformant bêta (TGFB), un facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF), l’interleukine 8 (IL-8), une protéine morphogénétique osseuse (BMP), l’hormone parathyroïdienne (PTH), une protéine apparentée à l’hormone parathyroïdienne (PTHrp), et le facteur de cellule souche (SCF) ; plus préférablement un facteur de croissance choisi dans le groupe constitué de FGF-2, TGFB-1, PDGF, IL-8, BMP-2, BMP-4, BMP-6, BMP-7, PTH, PTHrp, et SCF.
11. Formulation pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 1 à 10, qui est configurée pour administration parentérale, de préférence pour administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, ou péri-articulaire, ou pour administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire.
12. Formulation pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 1 à 11 pour utilisation dans le traitement d’une maladie musculo-squelettique, la maladie musculo-squelettique étant de préférence une maladie osseuse ou une maladie articulaire.
13. Utilisation d’une formulation comprenant du plasma S/D et un glycosaminoglycane en tant qu’excipient pharmaceutique.
14. Utilisation selon la revendication 13, dans laquelle le plasma S/D est du plasma humain S/D.
15. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 13 ou 14, dans laquelle la formulation pharmaceutique est configurée pour administration parentérale, de préférence pour administration intra-osseuse, péri-osseuse, intra-articulaire, ou péri-articulaire, ou pour administration intra-tendineuse, péri-tendineuse, intra-ligamentaire ou péri-ligamentaire.