AT509266A1 - Substituierte pyridine und pyrimidine - Google Patents

Abstract

Verbindung der Formel worin die Reste verschiedene Bedeutung haben und deren pharmazeutische Verwendung zur Produktion von cardiomyocytenähnlichen Zellen aus omnipotenten-, pluripotenten- oder Zellinien vorbestimmten Säugetierzellen; und die Verwendung von derart produzierten cardiomyocytenähnlichen Zellen für die Behandlung von Krankheiten im Zusammenhang mit beeinträchtigter Herzfunktion.

Description

T13545 1 Α 2044/2009

Substituierte Pyridine und Pyrimidine

Die vorliegende Erfindung beinhaltet substituierte Pyridine und Pyrimidine, die als pharmazeutisch nützliche Substanzen identifiziert wurden. Im speziellen haben solche Substanzen einen cardiomyogenen Effekt auf omnipotente, pluripotente und auf bestimmte Zelllinien vorgeprägte Säugetierzellen die für die intra-cardiale (intra cardiac) Transplantation zur Behandlung von Herzkrankheiten benutzt werden können.

Die Bildung von Herzmuskelzellen (cardiac myocytes) (Cardiomyocyten), oder cardiomyocytenähnlichen Zellen von transplantierten Säugetierzellen in das Herz eines Patienten ist eine sehr wichtige Aufgabe. Zum Beispiel kann es dadurch zu einer signifikanten Verbesserung der Herzfunktion nach einem Myokardinfarkt kommen.

Gemäß vorliegender Erfindung wurde überaschenderweise gefunden, dass cardiomyocytenähnliche Zellen nicht nur von omnipotenten oder pluripotenten Säugetierzellen sondern auch von Zelllinien vorgeprägte Säugetierzellen wie zum Beispiel Vorläuferzellen von Skelettmuskelzellen (skeletal muscle-committed cells) (Skelett Myoblasten) (skeletal myoblasts) erhalten werden können, wenn sie mit bestimmten neuen Verbindungen behandelt werden, wie sie durch dieserErfindung bereitgestellt werden. ln einer Hinsicht stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel R,

zur Verfügung, worin X CH oder N ist,

Ri und R2 unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, R3 und R4 unabhängig voneinander H oder NRsRi sind,

Rs und Ri unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, oder

NACHGEREICHT 2 • ·· · ·· ··· · Φ · · 4 t ·*·« * · • · · · « | · · · φ

Ri und R2 zusammen mit dem Stickstoffatom an, das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Ring bilden, oder

Ri zusammen mit dem Stickstoffatom an das es gebunden ist und zusammen mit einem C-Atom des Pyrimidin- oder Pyridin-Rings einen heterocyclischen Ring bildet, oder Rs und R$ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Ring bilden, oder wenn X CH ist, Rs zusammen mit dem Stickstoffatom an das es gebunden ist und zusammen mit einem C-Atom des X-enthaltenden Rings einen Heterocyclus bildet, mit der Massgabe, dass R4 ungleich NR5R6 ist wenn X gleich N ist; zum Beispiel

Xist CH oderN,

Ri und R2 sind unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl, R3 ist NR5R6, und R4 ist H; oder X ist CH,

Ri und R2 sind unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl, R3 ist H, und R4 istNRsR*.

In einer Verbindung der Formel I gilt bevorzugt

Ri ist Wasserstoff, Alkyl; wie Ci^Alkyl; z.B. inklusive C 1.2Alkyl substituiert mit Aryl, Cycloalkyl, wie C3.K Cycloalkyl, oder Aryl, wie Q.12 Aryl; wobei Alkyl, Cycloalkyl oder Aryl unsubstituiert oder mit 0-2 Gruppen Ria substituiert sind, wobei die Rja Gruppen unabhängig von einander ausgewählt sind aus Halogen, Alkyl, z.B. Cm Alkyl, Alkoxy, z.B. Ci^Alkoxy, -OH, -N(Ru>,R2b)* -S02N(Rib,R2bX -C(0)N(Rib,R2b), Heterocyclyl und -O-Aryl, oder

NACHGERE1CHT 3 • ♦ ♦ · · · * « · 4 · · · · · · « · · wenn R|a Gruppen an benachbarte Atome gebunden sind, bilden die Ria Gruppen gegebenenfalls zusammen eine Gruppe -0-(0¾) 1.2-Ο-, -OC(CH3)2CH2- oder -(CH2)3-4-Gruppe, oder

Ri und R2 bilden zusammen mit dem Stickstoff, an den sie gebunden sind, einen heterocyclischen Ring, welcher gegebenenfalls mit Alkyl, wie Cm Alkyl, Cycloalkyl, wie C3-gCycloalkyl, Hydroxyalkyl, wie HydroxyCi^alkyl, Alkylaryl oder Aryl, wie Co-2Alkylaryl substituiert ist; oder

Ri bildet zusammen mit dem Stickstoff, an den es gebunden ist und zusammen mit einem C-Atom des Pyrimidin- oder Pyridin-Ringes einen Ring, welcher gegebenenfalls durch Alkyl, wie Cm Alkyl, Cycloalkyl, wie C3.8Cycloalkyl, Hydroxyalkyl, wie HydroxyCi. aalkyl, Alkylaryl oder Aryl, wie Co^Alkylaryl substituiert ist; und jede Gruppe Rib oder R2b ist unabhängig voneinander ausgewählt aus Wasserstoff und Alkyl, wie CMAlkyl, oder Rib oder R2b zusammen mit dem Stickstoff an den sie gebunden sind bilden Heterocyclyl.

In einer Verbindung der Formel I gilt bevorzugt R2 ist Wasserstoff, Alkyl, wie CMAlkyl; z.B. inklusive C|.2Alkyl substituiert mit Aryl, Cycloalkyl wie C3.8 Cycloalkyl, oder Aryl, wie Ce-uAryl; wobei Alkyl, Cycloalkyl oder Aryl gegebenenfalls mit 0-2 Gruppen Rfa.substituiert sind, wobei Ria wie oben beschrieben definiert ist.

In einer Verbindung der Formel I gilt bevorzugt R3 ist Wasserstoff, z.B. wenn X gleich CH ist; oder ist NR5R6, z.B. wenn X CH oder N ist. In einer Verbindung der Formel I gilt bevorzugt R4 ist Wasserstoff wenn X gleich N oder CH ist; oder NRsR$, wenn X gleich CH ist.

In einer Verbindung der Formel I gilt bevorzugt R5 und Rb haben die Bedeutung wie hier für R[ bzw. R2 beschrieben ist. ln einer Verbindung der Formel I gilt noch mehr bevorzugt - X ist N oder CH, und/oder

NACHGEREICHT - Ri ist Cj.sCycloalkyl oder C 1.3Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, z.B- C 1.3Alkyl ist unsubstituiert oder substituiert mit Hydroxy und C3.gCycloalkyl ist unsubstituiert, z.B. R| ist Methyl, Ethyl, Propyl, wie n-Propyl, Isopropyl, Hydroxyethyl, wie 2-Hydroxyethyl, Hydroxypropyl, wie 3-Hydroxypropyl, Cyclohexyl; und/oder - R2 ist H; und/oder - R3 ist H, wenn X gleich CH; oder, R3 ist NR5R6, wenn X gleich N oder CH; - R4 ist H, wenn X gleich N oder CH; oder, R4 ist NRsR<>, wenn X gleich CH; und/oder -Rs ist Methoxyphenyl, wie 3-Methoxyphenyl, 4-Methoxyphenyl; Morpholinylphenyl, wie 4-Morpholin-l -yl-phenyl, Phenylaminophenyl, wie 4-Phenylamino-phenyl, Phenoxyphenyl, wie 4-Phenoxy-phenyl; und/oder - R* ist H. ln einer Verbindung der Formel I kann jede definierte Gruppe von Substituenten eine bevorzugte Gruppe von Substituenten sein, z.B. unabhängig von jeder anderen definierten Gruppe von Substituenten oder definierten Einzelsubstituenten. In einer Verbindung der Formel 1 kann jeder definierte Einzelsubstituent ein bevorzugter Substituent sein z.B. unabhängig von jeder anderen definierten Gruppe von Substituenten oder definierten Einzelsubstituenten.

Ein einem anderen Aspekt stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung zur Verfuging, ausgewählt aus 3-(6-(4-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-l-ol, 3-(6-(4-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-l-ol, JV4-Cyclohexyl-V6-(4-methoxyphenyI)pyrimidin-4,6-diamin, 2- (6-(4-Morpholinophenylamino) pyrimidm-4-yIamino) ethanol, /V4-Cyclohexyl-7V6-(4-morpholinophenyl)pyrimidin-4,6-diamin, 3- (6-(4-Morpholinophenylamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-1 -ol, 2-(6-(4-(Phenylamino)phenylamino)pyrimidin-4-yiamino)ethanol, 2-(6-(4- Pheno xypheny lamino)py rimidin-4-y lami nojethanol, A/4-(4-Methoxyphenyl)-J’V6-propylpyrimidin-4,6-diamin, A'4-Ethyl-A6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin,

NACHGEREICHT • · • · « · * 9 • ·* « · * * It · * ·· * *4#·» · # * * · · · * · | ♦ *4 · * a «* ··· 5 N4-(4-Methoxyphenyl)-N6-methylpyrimidin-4,6-diamin, N4-Isopropyl-N6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin, 2-(6-(3 - Methoxypheny lamino)pyrim id i n -4- y lami no)ethanol, 2-(4-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-yIamino)ethanol, 2-(4-(4-Phenoxyphcnylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol, 2- (6-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanoI, 3- (6-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)propan-1 -ol, 2- (6-(4-Phenoxyphenylamino)pyridi n-2-ylamino)ethanol, und 3- (6-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)propan-1 -ol; z.B. eine Verbindung wie in Beispielen 1 bis 19 dargelegt.

Falls hier nicht speziell anders definiert, umfasst jede Gruppe (Substituent) 1 bis 18 C-Atomen, zum Beispiel - Alkyl schließt z.B. (Cm)Alkyl ein, - Cycloalkyl schließt z.B. (C3.g)Cycloalkyl ein, - Alkoxy schließt z.B. (C|.4)Alkoxy ein, - Aryl schließt (Q.igJAryl, z.B. Phenyl ein, - Arylalkyl schließt z.B. (C6.ig)Aryl(Ci.2)alkyl ein, - Heterocyclyl und heterocyclische Ringe schließen z.B. mit ein - Aliphatisches und aromatisches Heterocycl, - 4- bis 8-gliedriges Heterocyclyl, - Heterocyclyl, gegebenenfalls anelliert mit einem anderen Ring (System), z.B. anelliert mit Aryl; z.B. oder anelliert mit einem heterocyclischen Ring (System); - Heterocyclyl mit 1 bis 4 Heteroatomen ausgewählt aus N, O, S; z.B. inklusive Morpholinyl; - Halogen schließt F, CI, Br, I ein.

Jede hier definierte Gruppe kann unsubstituiert oder substituiert sein, z.B. einfach oder mehrfach, z.B. mit Substituenten gebräuchlich in der organischen Chemie, z.B. wie oben beschrieben.

NACHGERSICHT 6 6

Verbindungen, die durch die vorliegende Erfindung zur Verfügung gestellt werden, werden hier auch „Verbindung(en) gemäß (nach) vorliegender Erfindung“ genannt.

Eine Verbindung gemäß vorliegender Erfindung beinhaltet eine Verbindung in jeglicher Form, z.B. in freier Form und in der Form von Co-Kristallen, in der Form von Salzen, in der Form von Solvaten und in der Form eines Salzes und eines Solvates.

In einem anderen Aspekt stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung gemäß vorliegender Erfindung in der Form eines Salzes zur Verfügung.

Derartige Salze umfassen bevorzugt pharmazetisch annehmbare Salze, obwohl pharmazeutisch nicht annehmbare Salze miteingeschlossen sind, z.B. zum Zweck der Herstellung / Isolation / Reinigung.

Ein Salz einer Verbindung der vorliegenden Erfindung inkludiert ein Metallsalz oder ein Säureadditionssalz. Metallsalze umfassen zum Beispiel Alkali- oder Erdalkalisalze; Säureadditionssalze inkludieren Salze einer Verbindung der Formel I mit einer Säure.

Eine Verbindug gemäß vorliegender Erfindung in freier Form kann in die entsprechende Verbindung in der From eines Salzes umgewandelt werden und umgekehrt. Eine Verbindug gemäß vorliegender Erfindung in freier Form oder in der From eines Salzes und in der From eines Solvates kann in die entsprechende Verbindung in freier Form oder in Salzform in nicht solvatisierter Form umgewandelt werden; und umgekehrt.

Eine Verbindung gemäß vorliegender Erfindung kann gegebenenfalls in der Form von Isomeren oder Mischungen von Isomeren vorliegen; z.B. optische Isomere, Diastereoisomere, cis/trans Konformere. Eine Verbindung gemäß vorliegender Erfindung kann z.B. asymmetrische Kohlenstoffatome enthalten und kann daher in der Form von Enantiomeren oder Diastereoisomeren und Mischungen davon vorliegen, z.B. Racemate. Eine Verbindung gemäß vorliegender Erfindung kann in der (R)-, (S)- oder (R,S)-Konfiguration vorliegen, vorzugsweise in der der (R)- oder (S)-Konfiguration bezüglich jeden der Substituenten an einem derartigen asymmetrische Kohlenstoffatom in einer

NACHGEREICHT • * • * • · * « t ι » ι · » » · * · 4 * · · ·«··· * 4 • · * * « · p · » « * · «· V* *4 ** »ft 7

Verbindung gemäß vorliegender Erfindung, z.B, fUr den fall, dass eine Cycloalkylgruppe vorhanden ist.

Isomerengemische können in geeigneter Weise getrennt werden, z.B. gemäß bzw. analog einer konventionellen Methode, um reine Isomere zu erhalten. Die vorliegende Erfindung beinhaltet eine Verbindung der vorliegenden Erfindung in jedweder isomeren Form und jedweder isomeren Mischung.

Die vorliegende Erfindung beinhaltet Tautomere einer Verbindung der vorliegenden Erfindung, wo immer Tautomere vorliegen können.

In einem weitereren Aspekt stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung, z.B. der Formel I, zur Verfügung, umfassend die Schritte

Umsetzungen einer Verbindung der Formel

worin X, Rj und R4 wie oben definiert sind und L eine Abgangsgruppe ist, z.B. Halogen, mit einer Verbindung der Formel: NHRlR2 worin R| und R2 wie oben definiert sind, und

Isolieren einer Verbindung der Formel I, worin X, Ri, R2, R3 und R4 wie oben definiert sind, aus der Reaktionsmischung.

In einem lntermediat der Formel II (Ausgangsmaterial), können funktionelle Gruppen, wenn vorhanden, optional in geschützter Form oder in der Form eines Salzes vorliegen, wenn eine salzbildende Gruppe vorhanden ist. Gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen können zu einem passenden Zeitpunkt entfernt werden unter Verwendung oder in Analogie zu konventionellen Methoden. NACHGEREICHT | ·· »t ftft · « t* ft « ft * · ft * * ft · · · · · ♦ •ftft * » IM ft ft *· * ««««ft · ft ft *« ft« · ft· ft « 8

Eine so erhaltene Verbindung der Formel I kann z.B. in eine andere Verbindung der Formel 1 umgewandelt werden, oder eine in freier Form erhaltene Verbindung der Formel I kann in eine Verbindung der Formel I in Form eines Salzes umgewandelt werden und vice versa.

Die obige Reaktion ist eine Substitutionsreaktion und kann in geeigneter Weise durchgeflihrt werden, z.B. analog einer konventionellen Methode, oder z.B. wie hier dargelegt.

Intermediate (Ausgangsmaterialien) der Formel II sind bekannt, oder können gemäß oder in Analogie zu etablierten Methoden hergestellt werden, oder wie hier spezifiziert.

Jeder hier beschriebene Verbindung, z.B. eine Verbindung der vorliegenden Erfindung und Intermediate der Formel 11, können in geeigneter Weise hergestellt werden, z.B. gemäß oder in Analogie zu konventionellen Methoden oder z.B. wie hierin dargelegt.

Es wurde gefunden, dass cardiomyocytenähnliche Zellen von Skelett Myoblasten ausgehend erhalten werden können, wenn sie in der Gegenwart einer Verbindung gemäß vorliegender Erfindung kultiviert werden; und somit wurde gefunden, dass Verbindungen gemäß vorliegender Erfindung, z.B. umfassend eine Verbindung der Formel I, einen cardiomyogenen Effekt generieren könnenn und daher als Pharmazeutika verwendbar sein können.

Die Aktivität der Verbindungen gemäß vorliegender Erfindung kann mit der folgenden BIOLOGISCHEN TESTMETHODE gezeigt werden: BIOLOGISCHEN TESTMETHODE (Methodische Ansätze für die biologische Testung)

Zelltvpen C2C12 Myoblasten aus dem Skelettmuskel (American Type Culture Collection, ATCC), P19 embryonale Karzinomzellen (ATCC)

NACHGEREICHT • · < · « * « * * · • · * · * * # · * * · * · · * * « # # * · · a · a m Λ » 9

Zellkultur C2C12 Zellen werden in einem Wachstumsmedium kultiviert, das aus gern. Dulbecco modifiziertem Eagle-Medium (DMEM), 4.5 g/1 Glucose, 4 mM L-Glutamin, 50 U/ml Penicillin, 50 g/ml Streptomycin, und 20% fötalem Kälberserum besteht. Die Zellen werden bei 37°C und 5% CO2 inkubiert; sobald ca. 50-70% Zellkonfluenz erreicht ist wird mittels Serum Reduktion die Differenzierung der unreifen Skelettmuskelzellen (Myoblasten) ausgelöst. Zu diesem Zweck werden die Myoblasten in Differenzierungsmedium inkubiert; dieses ist identisch zum Wachstumsmedium, außer dass es 2% Pferdeserum statt 20% Kälberserum enthält, Zu testende Wirkstoffe werden immer zum Differenzierungsbeginn appliziert. DMSO, das als Lösungsmittel für die „kleinen Moleküle“ verwendet wird, wird in den entsprechenden Konzentrationen den Kontrollzellmedien beigemengt. Die Kulturmedien werden dreimal pro Woche gewechselt. P19-Zellen werden in Monoschichten in MEM-alpha Medium mit 7,5% Kälberserum neugeborener Kälber und 2,5% FBS bei 37°C in 5% CO2 kultiviert. Bei ca. 60% Zellkunfluenz werden die zu testenden „kleinen Moleküle“ appliziert. DMSO, das als Lösungsmittel für die „kleinen Moleküle“ verwendet wird, wird in den entsprechenden Konzentrationen den Kontrollzellmedien beigemengt. Die Kulturmedien werden dreimal pro Woche gewechselt.

Bewertung der kardiomvosenen Aktivität der „ kleinen Moleküle “ 1) Um in der Lage zu sein, in kurzer Zeit eine große Anzahl von „kleinen Molekülen“ auf ihre kardiomyogene Aktivität überprüfen zu können {high throughput screert\ verwenden wir einen ANF- Promotor- Reporter Assay. ln diesem Testverfahren wird eine Aufregulation der Expression von ANF durch eine erhöhte Luziferaseaktivität angezeigt. ANF (atrialer natriuretischer Faktor) ist ein Polypeptidhormon, das vor allem in Kardiomyozyten synthetisiert wird. Es gilt als Markergen spezifisch für Kardiomyozyten. Für den Test wurde ein Fragment, das die Ratten ANF-Promotor-Region enthält, vermehrt und dann in das PGL3-BV Luziferase- Reporter- Plasmid subkloniert. C2C12 und P19 Zellen, die vorher transient mit diesem Plasmid transfeziert wurden, werden für die Screening-Experimente ausgewählt, ln diesen Experimenten werden Zellen in 48 oder 96-Well-Platten entweder in normalem Medium (Kontrollzellen) oder in Medien mit

NACHGEREICHT V * · Ψ t » · * # · · • * · · · · · *» · « · · · · Ml I · * * · · * * * * · · * 10 verschiedenen einzelnen „kleinen Molekülen“ (Versuchsgruppen) in einer Konzentration von 1 μΜ für 8 Tage behandelt. Danach wird die Luziferase- Aktivität gemessen. Eine signifikante Aufregulierung der ANF- Expression (angezeigt durch ein erhöhtes Luziferase-Sigtial) durch ein „kleines Molekül“, die mittels dieses Tests aufgedeckt werden kann, ist der erste Indikator für die kardiomyogene Aktivität eines „kleinen Moleküls“. 2) Nur wenn ein “kleines Molekül“ ANF im genannten Reporter- Assay signifikant aufreguliert, wird auch die Expression von ANF und anderen klassischen kardialen Markern mittels RT-PCR-Experimenten zu verschiedenen Zeitpunkten (1-12 Tage der Behandlung) getestet. Die folgenden Herzmarker werden verwendet: ANF, GATA4, Nkx2.5, a- schwere Myosinkette, leichte Myosinketten 2a und 2v, 3) Elektrophysiologische Experimente: Um zu testen, ob „kleine Moleküle“ neben der Induktion von kardialen Markern auch „kardiomyogene Funktion“ induzieren können, werden ihre Auswirkungen auf die elektrophysiologi sehen Eigenschaften der Zellen getestet. Dazu werden nur jene „kleinen Moleküle“, die ihre kardiomyogene Aktivität in den oben beschriebenen Experimenten (1 und 2) bewiesen haben, in Ganzzell- Ableitungen mittels der Patch-Clamp-Technik untersucht. Ionenströme in unbehandelten und mit „kleinen Molekülen“ behandelten Zellen werden zu unterschiedlichen Zeitpunkten (1-12 Tage Behandlungsdauer) verglichen.

Na Ströme werden bei Raumtemperatur (22 ± 1,5°C) mit einem Axoclamp 200B Patch-Clamp-Verstärker aufgenommen. Pipetten werden aus Aluminiumsilikat- Glas (AF150-100-10; Science Products) mit einem P-97 horizontalen Puller (Sutter Instruments) gezogen, und zeigen Widerstände zwischen 1 und 2 Mega-Ohm, wenn sie mit der Pipettenlösung (105 mM CsF, 10 raM NaCI, 10 mM EGTA und 10 mM HEPES; pH 7,3) gefüllt sind. Die Voltage- Clamp Protokolle und die Datenerfassung werden mit einer pCLAMP 6.0 Software (Axon Instruments) über eine 12-Bit A/D-D/A-Schnittstelle durchgeführt (Digidata 1200; Axon Instruments). Eine Bad-Lösung, bestehend aus 140 mM NaCI, 2.5 mM KCl, 1 mM CaCb, I mM MgC^ und 10 mM HEPES; pH 7,4 wird verwendet, um Aufnahmen zu erhalten. Wenn Na Ströme durch die Behandlung mit „kleinen Molekülen“ induziert werden, wird ihre kardiale Natur überprüft. Dazu wird die Expression der

NACHGEREICHT ι· · * ···· * · ·· * • · * · * * r * · · · • ι · · · · · t · · • I t · « f « 4 i · * » · t · · · « « · « 11 kardialen Na-Kanal Isoform Nav1.5 in Skelettmuskelzellen bestätigt durch a) den Nachweis seiner charakteristischen Eigenschaften (z. B. langsame Eintrittskinetik in den schnellinaktivierten Zustand und eine große Resistenz gegenüber dem langsam- inaktivierten Zustand im Vergleich zu adulten Navl .4 Skelettmuskel- Natriumkanälen oder Navl. I und Nav1.2 Natriumkanälen aus dem Gehirn), b) Tetrodotoxin (TTX) Experimente (Nav1.5 ist TTX-resistent!) und c) RT-PCR-Analysen. Ca Ströme werden von einem Haltepotential von -80 mV durch depolarisierende Spannungsschritte zwischen -50 und +80 mV in 10 mV-Intervallen ausgelöst. Ein 1-s Präpuls zu -50 mV unmittelbar vor dem Testpuls kann angewandt werden, um T-Typ Ca-Kanäle zu inaktivieren. Dies erzeugt reine L-Typ Ca Ströme, was mit Nitrendipin (10 μΜ), einem selektiven L-Typ- Ca Kanalblocker, überprüft werden kann. Steady- State- Inaktivierung wird durch Pulse auf -10 mV, von verschiedenen Haltepotentialen (HPs) ausgehend, getestet. Neben Ca, wird auch Ba als Ladungsträger verwendet, um zu zwischen der Ca- und Spannungs- abhängigen Inaktivierung zu unterscheiden. Die externe Badlösung enthält (in mM): 10 CaCl2, 145 Tetraethylammoniumchlorid (TEA-CI), 10 HEPES (pH 7,4 mit TEA-OH). 10 CaCl2 wird durch 10 BaCl2 substituiert, wenn Ba der gewünschte Ladungsträger ist. Die interne Lösung enthält 145 Cäsium-Aspartat. 2 MgCl2, 10 HEPES, 0,1 Cs-EGTA, 2 Mg-ATP (pH 7,4 mit CsOH). Bei Ca Strömen kann die wesentliche kardiale I .-Typ- Ca Kanalisoform Cavl .2 leicht durch ihre schnelle Aktivierungskinetik im Vergleich zum Skelettmuskel CavLl Kanal identifiziert werden. Neben der spannungsabhängigen Inaktivierung zeigt Cav1.2 (aber nicht Cavl .1) zusätzlich eine Ca-abhängige Inaktivierung. Schließlich können PCR-Experimente eindeutig klären, welche Ca Kanal Isoformen zu den jeweils gemessenen Strömen beitragen. Aktionspotential- Registrierungen: Aktionspotentiale werden in der Stromklemme- Konfiguration der Patch Clamp Technik in Standard- Lösungen und mittels Standard- Protokollen aufgezeichnet. In Kürze, nach Etablierung einer Ganzzellableitung im Spannungsklemme- Modus, und nach Kompensation für die Pipettenkapazität, wird der Strom zu einem Ruhemembranpotential von -80 mV geklemmt. Aktionspotentiale werden dann durch 2-ms depolarisierende Impulse bei einer Frequenz von 1 Hz ausgelöst. Herz-versus Skelettmuskel- oder neuronale Aktionspotentiale können leicht durch ihre längere Dauer identifiziert werden.

NACHGEREICHT 12

Ergebnisse aus den Experimenten tu C2C12 Zellen ANF Reporter Assav

Verbindungen gemäß vorliegender Erfindung zeigen Aktivität in diesem Test, z. B. die nach Beispiel 1 erhaltene Verbindung (1 μΜ für 8 Tage) erzeugt eine 3-fache Erhöhung des Luciferase-Signals im ANF-Reporter-Assay. Dies bedeutet eine Aufregulation der Expression von ANF in C2C12 Zellen, die mit dieser Substanz behandelt wurden, und deutet somit auf eine kardiomyogene Wirkung dieser Verbindung hin. Unseres Wissens ist dies der erste Bericht über eine kardiomyogene Wirkung eines „kleinen Moleküls“ auf Skelettmuskel- Vorläuferzellen. Die Verbindungen, die gemäß den Beispielen 2 und 3 erlangt wurden, zeigen eine ähnliche Aktivität wie die nach Beispiel 1 erhaltene Verbindung. Diese ist jedoch weniger ausgeprägt. z.B. in einem einzelnen Experiment erhöhte die Verbindung des Beispiels 3 mäßig das Luciferase-Signal im ANF-Reporter-Assay.

Elektrophvsiologische Testung

Die Verbindungen, die gemäß den Beispielen 1 und 2 erhalten wurden (1 μΜ für 8 Tage), erhöhen mäßig die Tetrodotoxin (TTX)- Resistenz der Na-Ströme in den C2C12 Zellen.

Dies weist auf eine Aufregulation der Expression der Herz Na Kanal Isoform Nav1.5 hin. Darüber hinaus beschleunigt die Verbindung erhalten nach Beispiel 1 erheblich die Kinetik der Aktivierung von Ca Strömen in C2C12 Zellen. Dieser Effekt ist besonders interessant, weil Herz Ca Kanäle, verglichen mit den Skelettmuskel Ca-Kanälen, wesentlich schneller aktivieren. Folglich erzeugt die Behandlung mit einer Verbindung erhalten nach Beispiel 1 Herz- ähnlichere Na und Ca Ströme in C2C12 Zellen. Diese Daten unterstützen die Hypothese, dass eine Verbindung, erhalten nach Beispiel 1, kardiomyogene Funktion durch Aufregulation von kardialen lonenkanälen in C2C12 Myoblasten induziert. b. P19 Zellen

NACHGEREICHT ·* * * ft« ft · ft* «ft • ft * · «ft ft« «ft • ft« · «ft · * * • ft · « « * ft « * • * · · · · * « * 13 ANF Reporter Assay

Retinsäure (1 μΜ für 8 Tage), ein bekannter Induktor von Kardiogenese, erhöht das Luziferase-Signal in unserem ANF Reporter Assay stark, was auf eine Aufregulation der Expression von ANF in Retinsäure- behandelten P19 Zellen hinweist. Auch die Verbindungen, die gemäß den Beispielen 1, 2, 3 und 10 erhalten wurden, erhöhten das Luziferase-Signal im ANF- Reporter Assay. Dies weist auf eine Aufregulation der Expression von ANF in den mit diesen Verbindungen behandelten P19 Zellen hin.

Zusammenfassend kann gesagt werden, dass Verbindungen gemäß vorliegender Erfindung kardiomyogene Effekte in C2C12 Skelettmuskel- Myoblasten und/oder P19 embryonalen Karzinom Zellen generieren. Die Verbindung, die gemäß Beispiel 1 erhalten wurde, ist eine bevorzugte Verbindung; z.B. wirkt sie an beiden Zelltypen. Folglich ist der kardiomyogene Effekt dieser Verbindung bemerkenswerterweise nicht auf pluripotente Stammzellen (PI 9) beschränkt, sondern trifft auch auf Vorläuferzellen des Skelettmuskels (C2C12 Myoblasten) zu. Darüber hinaus induziert die Verbindung, die gemäß Beispiel 1 erhalten wurde, neben der Aufregulation des kardialen Markers ANF, auch mehr Herz- ähnliche Ionenströme in C2C12 Zellen, und induziert somit kardiomyogene Funktion.

Verbindungen gemäß vorliegender Erfindung zeigen Aktivität in der oben beschriebenen BIOLOGISCHEN TESTMETHODE und sind daher potentielle Kandidaten, um für die Behandlung von Hcrzfehlfunktionen (Krankheiten) verwendet zu werden, die mit einer verminderter Herzfunktion einhergehen.

Insbesondere, können Verbindungen gemäß vorliegender Erfindung zur Produktion von cardiomyocytenähnlichen Zellen aus omnipotenten-, pluripotenten- oder vorprogrammierten Säugetierzellen (lineage committed mammalian cells) verwendet werden. Dies gilt nicht nur für Stammzellmodelle (z.B. PI9 Zellen oder C2C12 Zellen), sondern auch für Zellen, die von einem Herzpatienten vor einer Zelltransplantation isoliert wurden, z.B. Skelettmyoblasten (skeletal myoblasts).

So eine Behandlung kann z.B. durch eine intra-cardiale Injektion von cardiomyocytenähnlichen Zellen erfolgen, die durch die Behandlung von omnipotenten-,

NACHGEREICHT • * · · « » · · · « · * · · · « · « *« « • · * · · « « · * * 4 • * · * * ·* * * 14 pluripotenten- oder vorprogrammierten Säugetierzellen mit einer Verbindung gemäß vorliegender Erfindung erhalten werden. So eine Behandlung kann die Regeneration von beschädigtem Herzregionen z.B. nach einem Myokardinfarkt zur Folge haben und kann die Herzfunktion verbessern.

Insbesondere, Verbindungen gemäß vorliegender Erfindung können zur Herstellung von cardiomyocytenähnlichen Zellen aus omnipotenten-, pluripotenten- oder vorprogrammierten Zellen verwendet werden, z.B. solche die aus dem eigenen Körper stammen, und diese cardiomyocytenähnlichen Zellen können in weiterer Folge für die Behandlung von Funktionsstörungen im Zusammenhang mit dem Herz verwendet werden. So eine Behandlung kann z.B. durch eine Injektion von cardiomyocytenähnlichen Zellen die durch die Behandlung von omnipotenten-, pluripotenten- oder vorprogrammierten Säugetierzellen mit einer Verbindung gemäß vorliegender Erfindung erhalten wurden. So eine Behandlung kann eine Verbesserung von beschädigten Herzregionen hervorrufen und kann eine eine Verbesserung der Regeneration von beschädigten Regionen induzieren die z.B. durch einen Herzinfarkt beschädigt wurden.

In einem weiteren Aspekt stellt die vorliegende Erfindung - eine Verbindung gemäß vorliegender Erfindung zur pharmazeutischen Verwendung, - die pharmazeutische Verwendung einer Verbindung gemäß vorliegender Erfindung, z.B. für die Behandlung von omnipotenten-, pluripotenten- oder vorprogrammierten Säugetierzellen, um cardiomyocytenähnliche Zellen zu produzieren; zur Verfügung.

So hergestellte cardiomyocytenähnliche Zellen können in einer therapeutisch wirksamen Menge, z.B. parenteral, einem Subjekt das so eine Behandlung nötig hat appliziert werden.

In einem weiteren Aspekt stellt die vorliegende Erfindung eine Methode für die Behandlung von Herzfehlfunktionen (cardiac disorders), z.B. Fehlfunktionen die mit einer verminderten Herzleistung assoziiert sind, zur Verfügung, umfassend die Schritten (i) zur Verfügungstellen von omnipotenten-, pluripotenten- oder vorprogrammierten Zellen, z.B, Skelettmyoblasten, eines Subjektes welches eine derartige Behandlung

NACHGEREICHT • · * * *« · t ft* ftft * · * · t t » · »ft * · * · «ft « · * · · · f « · « ft

* * · «ft * « · I 15 nötig hat, (ii) Kultivieren der besagten Zellen in der Gegenwart einer Verbindung gemäß vorliegender Erfindung, um cardiomyocytenähnlichen Zellen zu produzieren, und (iii) Verabreichung von im Schritt (ii) hergestellten cardiomyocytenähnlichen Zellen in einer therapeutisch wirksamen Menge an ein Subjekt welches eine derartige Behandlung nötig hat.

Die Behandlung mit cardiomyocytenähnlichen Zellen, hergestellt durch eine Methode die gemäß vorliegender Erfindung zur Verfügung gestellt wird, kann mit anderen Strategien zur Behandlung von Herzkrankheiten kombiniert werden.

In den folgenden Beispielen sind alle Temperaturen in Grad Celsius angegeben (°C) und nicht korrigiert.

Die folgenden Abkürzungen werden verwendet:

NACHGEREICHT BINAP 2,2'-Bis(diphenylphosphino)-1,1 ’-binaphthyl DIPEA Diisopropylethylamin EtOH Ethanol EtOAc Ethylacetat HR-MS hoch auflösende Massenspektroskopie i-PrOH 2-Propanol M.p. Schmelzpunkt MPLC Mitteldruckflüssigchromatographie n-BuOH n-Butanol PE Petrolether r.t. Raumtemperatur TLC Dünnschichtchromatographie • · ·· ·» · « * · ♦ · • · · · « « ·« « · • ·· ♦ ·» · ·· • · · · · «·* · • · · · · · · « t 16

Beispiel 1 2-(6~(4-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-yIamino)ethan-l-ol 1 .a 6-Chlor-Af-(4-methoxvphenvl')pvrimidin-4-amin OCH,

CI

CI +

CI

r^r\^OCH3

HCl nh2 1.57 g 4,6-Dichlorpyrimidin und 1 g p-Methoxyanilin wurden in 15 mL i-PrOH gelöst und die erhaltene Mischung wurden mit 1.5 mL 37% HCl versetzt. Die erhaltene Mischung wurde für 2.5 Stunden unter Stickstoffatmosphäre auf Rückfluss erhitzt. Ein farbloser Niederschlag wurde gebildet und durch Filtration isoliert. 6-Chlor-A-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4-amin wurde in Form des Hydrochlorids als farblose Kristalle erhalten.

Ausbeute: 56% der Theorie. M.p.; 121-123°C. *H NMR (DMSO-D6, 200MHz): 6 = 3.75 (s, 3H), 3.72 (s, 1H), 6.95 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.49 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.38 (s, 1H), 9.89 (s, 1H). ,3C NMR (DMSO-D<j, 50MHz): 6 - 55.3 (q), 104.1 (d), 114.1 (d), 122.6 (d), 131.6 (s), 155.7 (s), 157.1 (s), 158.1 (d), 161.3 (s). 1 b. 2T6-(4-Methoxvphenvlaminolpvrimidin-4-vlamino)ethan-l-ol

H

N H 250 mg 6-Chlor-.V-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4-amin in Form des Hydrochlorids, 62 mg Ethanolamin und 296 mg DIPEA wurden in 2 mL n-BuOH gelöst und die erhaltene Mischung in ein Mikrowellengefäß übergefuhrt und für 45 Minuten auf200°C unter Mikrowellenbedingungen erhitzt. Der Reaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert. Der so erhaltene Rückstand wurde aus einer Mischung von n-BuOH/EtOH umkristallisiert.

NACHGEREICHT

17 3~(6-{4-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-1-ol wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 77% der Theorie. M.p.: 173°C. 'H NMR (DMSO-Dö, 200MHz): δ = 3.21 (q, J - 5.5 Hz, 2H), 3.45 (q, J = 5.7 Hz, 2H), 3.70 (s, 3H), 4.71 (t, J - 5.38 Hz, 1H), 5.66 (s, 1H), 6.74(s, 1H), 6.87 (d, J = 8.99 Hz, 2H), 7.32 (d, J=9.19 Hz, 2H), 8.00 (s, 1H), 8.63 (s, 1H). ,3C NMR (DMSO-D6, 50MHz): Ö = 42.9 (t), 55.1 (q), 59.9 (t), 113.9 (s), 121.8 (d), 133.4 (d), 154.3 (s), 157.5 (d), 160.3 (d) 162.7 (s).

Elementaranalyse: Berechnet C 59.99, H 6.20, N 21.52: Gefunden C 59.68, H 6.00, N 21.11;

Beispiel 2 3'(6-(4-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-l-ol

Wurde analog der Methode in Beispiel 1b hergestellt, aber unter Einsatz von 75 mg Propanolamin anstelle von 62 mg Ethanolamin. 3-(6-(4-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-l-ol wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 85% der Theorie. M.p.: 151-152°C. *H NMR (DMSO-Dfi, 200MHz): δ = 1.62 (m, 2H), 3.19 (q, J = 6.1 Hz, 2H), 3.44 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H,), 4.48 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.62 (s, 1H), 6.72 (t, J = 5.37 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 211), 8.11 (s, 1H), 8.69 (s, 1H). 13C NMR (DMSO-D6, 200MHz): δ = 32.6 (t), 37.5(t), 55.3 (q), 58.5 (t), 114.1 (4), 122.0 (d), 133.4 (s), 154.5(s), 157.5 (d), 160.5 (s), 162.7 (s).

Elementaranalyse: Berechnet C 61.30, H 6.61, N 19.42: Gefunden C 61.17, H 6.67, N 19.39;

Beispiel 3 i\4-Cyclohexyl-i'V6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin

NACHGEREICHT

CI

N H HCl + σ

NHS

^.OCH3 200 mg 6-Chlor-jV-(4-methoxyphenyl)pyrimidm-4-amin in Form des Hydrochlorids, 80 mg Cyclohexylamin und 109 mg DIPEA wurden in 2 mL n-BuOH (2 mL) gelöst und die so erhaltene Mischung in ein Mikro wellengefaß übergeführt und für 90 Minuten unter Mikrowellenbedingungen aul'200°C erhitzt. Der Reaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert. Der so erhaltene Rückstand wurde mittels MPLC (silica, PE:EtOAc = 1:3) gereinigt. JV4-Cyclohexyl-A6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 70% der Theorie. M.p.: 218-219°C. !H NMR (CDC13, 200MHz): δ = 1.05-2.01 (m, 11H), 3.42 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 4.69 (d, 1H, J = 6.5 Hz), 5.49 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.93 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 8.13 (s, 1H). 13C NMR (CDC13,50MHz): δ = 24.7 (t), 25.7 (t), 33.0 (t), 49.6 (q/d), 55.6 (q/d), 114.8 (d), 125.3(d), 131.7 (s), 156.9 (s), 158.4 (d), 161.8 (S), 162.2(s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 299.1866; Gemessen [Mll]+= 299.1878.

Beispiel 4 2-(6-(4-Morpholinophenylammo)pyrimidm-4-ylamino)ethanol 4a. 6-Chlor-A-(4-morpholinophenvl)pyrimidin-4-amin

h2n 100 mg 4,6-Dichlorpyrimidine und 92 mg p-Morpholinoanilin wurden in 5 mL i-PrOII gelöst. Die so erhaltene Mischung wurde für 6 Stunden unter Stickstoffatmosphäre auf Rückfluss 84°C erhitzt. Es bildete sich ein farbloser Niederschlag der durch Filtration gewonnen winde.

NACHGEREICHT 19 «· # ♦ *»·» · ♦ t* • · i i « *· « < • · · · * *#· • * i # . « · · a 6-Chlor-^/-(4-morpholinophenyl)pyrimidia-4-amin wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 46% der Theorie. M.p.: 165-166°C. ’H NMR (CIIjOD, 200MHz): δ = 3.59 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.99 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 6.75 (s, 1H), 7.53 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.81 (d, J = 9.19 Hz, 2H), 8.38 (s, 1H). ,3C NMR (CH3OD, 50MHz): δ = 53.5 (t), 63.1 (t), 104.6 (d), 119.8 (d), 120.3 (d), 156.4 (s), 156.9 (s), 160.3(d). 4b. 2-(6-(4-Morpholinophenylamino)pvrimidin-4-vlaminofethanol

78 mg 6-Chlor-Ar-(4-morpholinophenyl)pyrimidin-4-amin, 33 mg Ethanolamin und 70 mg DIPEA wurden in 2 mL n-BuOH gelöst und die so erhaltene Mischung in ein Mikrowellengefaß übergeflihrt und für 60 Minuten unter Mikrowellenbedingungen auf 200°C erhitzt. Der Reaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert und der so erhaltene Rückstand wurde aus einer Mischung von n-BuOH-EtOH umkristallisiert. 2-(6-(4-Morpholinophenylamino) pyrimidin-4-ylamino) ethanol woirde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 77% der Theorie. M.p.: 204-207°C. 'H NMR (CH3OD, 200MHz): δ = 3.11 (t, J= 4.69 Hz, 4H), 3.36 (m, 2H), 3.66 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 5.69 (s, IH), 6.97 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.9 Hz, 2H) 7.89 (s, 1H). 13C NMR (CH3OD, 50MHz): δ = 44.5 (t), 51.0 (t), 61.8 (t), 68.9 (t), 82.9 (d), 117.9 (d), 125.4 (d), 133.3 (s), 137.7 (s), 149.9 (s), 158.4 (d), 164.2 (s). HR-MS: Berechnet [MH]*= 316.1768; Gemessen [MH]+= 316.1760.

Beispiel 5 A^-Cyclohexyl-A^-^-morpholinophenylJpyrimidin^ö-diamin

NACHGEREICHT 20 • ♦ • ♦ • ♦ * * * *

78 mg 6-Chlor-Ar-(4-morpho1inophenyl)pyrimidin-4-amin, 55 mg Cyclohexylamin und 72 mg DIPEA wurden in 2 mL n-BuOH gelöst und die so erhaltene Mischung ein Mikrowellengefaß übergeführt und für 90 Minuten unter Mikrowellenbedingungen auf 200°C erhitzt. Beim Abrotieren von n-BuOH bildete sich ein Niederschlag der aus einer Mischung von n-BuOH-EtOH umkristallisiert wurde. A'4-Cyctohexyl-A^-(4-morpholinophenyl)pyrimidin-4,6-diarnin wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 44% der Theorie. M.p.: 239-240°C. 'H NMR (DMSO-D6,200MHz): δ = 0.98-1.90 (m, 1IH), 3.01 (t, J= 4.5 Hz 4H), 3.72 (t, J= 4.2 Hz, 4H), 5.61 (s, 1H), 6.61 (d, J= 8.0 Hz, IH), 6.87 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.27 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.98 (s, 1H), 8.51 (s, IH). 13C NMR (CH3OD, 50MHz): δ = 24.8 (t), 25.2 (t), 32.8 (t), 48.5 (d), 49.3 (t), 66.5 (t), 82.6 (d), 115.8 (d), 121.9 (d), 132.8 (s), 146.6 (s), 157.6 (d), 160.5 (s), 161.9 (s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 354.2288; Gemessen [MTI]+= 354.2288.

Beispiel 6 3-(6-(4*Morpholinophenylamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-l-ol

165 mg 6-Chlor-A-(4-morpholinophenyl)pyrimidin-4-amin, 86 mg Propanolamin und 147 mg DIPEA worden in 2 mL n-BuOH gelöst, Die so erhaltene Mischung in ein Mikrowellengefaß übergeführt und für 60 Minuten unter Mikrowellenbedingungen auf 200°C erhitzt. n-BuOH wurde abrotiert und der so erhaltene Rückstand wurde aus einer Mischung von n-BuOH-EtOH umkristallisiert.

NACHGEREICHT 21 • » • · « ♦ • · • * • 14 • * 3-(6-(4-Morpholinophenyiamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-l-ol wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 40% der Theorie. M.p.: 198-199°C. lH NMR (DMSO-Ö6, 200MHz): δ = 1.56-1.71 (m, 2H), 3.01 (t, J= 4.2 Hz, 4H), 3.19 (s, 2H), 3.43 (t, J= 5.3 Hz, 2H), 3.72 (t, J= 4.1 Hz, 4H), 4.47 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 5.62 (s, 1H), 6.71 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.29 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.99 (s, 1H), 8.57 (s, 1H). ,3C NMR (CH3OD, 50MHz): 6 = 32.2 (q), 37.4 (t), 49.3 (t), 58.3 (t), 66.3 (t), 82.2 (d), 115.9 (d), 121.9 (d), 132.8 (d), 146.4 (s), 157.7 (d), 160.5 (s), 162.7 (s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 330.1925; Gemessen [MH]+= 330.1937.

Beispiel 7

2-(6-(4-(Phenylamino)phenylamino)pyriniidin-4-ylamino)ethanoI 7a. 'Vl-('6-Chlorpvrimidin-4-vlV7V4-phenvlbenzene-l .4-diamin

200 mg 4,6-Dichloropyrimidin und 190 mg 4-aminodiphenyamin wurden in 5 mL i-PrOH gelöst und der so erhaltene Mischung wurden 0.3 mL 37% HCl hinzugefugt. Diese Mischung wurde für 4 Stunden unter Stickstoffatmosphäre auf Rückfluss (84°C) erhitzt. Ein leicht gelber Niederschlag wurde gebildet der durch Filtration gewonnen wurde. Nl-(6-Chloropyrimidin-4-yl)-jV4-phenylbenzene-l,4-diamin in Form des Hydrochlorids wurde in Form eines leicht gelben Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 45% der Theorie. *H NMR (DMSO-D6,200MHz): δ = 3.8 (s, 1H), 6.8 (s, 2H), 7.1 (t, J=8.99Hz, 4H), 7.3 (t, J=7.43Hz, 2H), 7.5 (d, J=7.62Hz, 2H), 7.9 (s, 1H), 8.5(s, 1H), 10.0 (s, 1H). ,3C NMR (DMSO-D6, 50MHz): δ = 104.1 (d), 116.1 (d), 117.9 (d), 119.1 (d), 122.4 (d), 129.2 (d), 133.2 (s), 143.9 (s), 150.1 (s), 157.3 (s), 158.9 (d), 161.l(s). 7b. 2-(6-f4-(Thenvlaminofphenvlamino)pvrimidin-4-ylamino)ethanol

NACHGEREICHT 22 • » I · ·Μ· * * ·· » * * » · · ·· · » • # * · # * · * · * · · · t · < φ «

176 mg ^'-(ö-Chlorpyrimidin^-yO-A^-phenylbenzene-l^-diamin in Form des Hydrochlorids, 72 mg Ethanolamin und 153 mg DIPEA wurden in 2 mL n-BuOH gelöst und die so erhaltene Mischung in ein Mikrowellengefaß übergefiihrt und unter Mikrowellenbedingungen für 60 Minuten auf 200°C erhitzt. Der Reaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert und der so erhaltene Rückstand wurde mittels MPLC (EtOAc als Eluent) gereinigt. 2-(6-(4-(Phenylamino)phenylamino)pyrimidin-4-ylamino)ethanol wurde in Form eines Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 32% der Theorie. M.p.: 154-155°C. ’H NMR (CD3OD, 200MHz): θ = 3.24-3.27 (m, 4H), 3.61 (l, J= 5.6 Hz, 2H), 5.64 (s, 1H), 6.95-7.07 (m, 4H), 7.08-7.21 (m, 4H), 7.92 (s, 1H). I3C NMR (CDjOD, 50MHz): δ - 43.8 (t), 60.9 (t), 82.3 (d), 117.4 (d), 118.6 (d) 120.4 (d), 124.9 (d), 129.3 (d), 132.1 (s), 141.5 (s), 144.7 (s), 157.8 (d), 162.0 (s), 163.6 (s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 322.1662; Gemessen [MH]+= 322.1674.

Beispiel 8 2-(6-(4-Phenoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylaraino)ethanol 8a. 6-Chlor-JV-t4-phenoxvphenvBmTimidin-4-amin

200 mg 4,6-DichIorpyrimidin und 191 mg 4-Aminodiphenylamin wurden in 5 mL i-PrOH gelöst und to der so erhaltene Mischung wurden 0.3 mL 37% HCl hinzugefugt. Diese Mischung wurde für 4 Stunden unter Stickstoffatmosphäre auf Rückfluss (84°C) erhitzt wobei sich ein braun-roter Niederschlag bildete der durch Filtration gewonnen wurde. 6-Chlor-jV-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-4-amin wurde in Form des Hydrochlorids als braun-roter Feststoff erhalten.

NACHGEREICHT

23

Ausbeute: 50% der Theorie. *H NMR (DMSO-D*, 200MHz): δ = 6.9 (s, 2H), 7.0 (m, 5H)S 7.4 (t, J=7.7 Hz, 2H), 7.6 (d, J=8.9 Hz, 2H), 8.4 (s, 1H), 10.3(s, 1H), 10.8 (s, 1H). ,3C NMR (DMSO-De, 50MHz): δ = 104.9(d), 117.9 (d) 119,4 (d) 122.2 (d), 122.8 (d), 130.0 (d), 134.8 (s), 144.8 (s), 151.9 (s), 157.1 (s), 158.3 (d), 161.3 (s). 8b. 2-f6-i4-Phenoxvphenvlamino)pvrimidin-4-vlamino')ethanol

225 mg 6-Chlor-/V-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-4-amin, 82 mg Ethanolamin und 173 mg DIPEA wurden in 2 mL n-BuOH gelöst und die so erhaltene Mischung in ein Mikrowellenvial übergeführt und für 60 Minuten unter Mikrowellenbedingungen auf 200°C erhitzt. Der Reaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert und der so erhaltene Rückstand wurde mittels MPLC (EtOAc:EtOH = 10:1) gereinigt. 2-(6-(4-Phenoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)ethanol wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 60% der Theorie. M.p.: 154-156°C. ’H NMR (DMSO-D6, 200MHz): δ= 3.19-3.30 (m, 2H), 3.49 (q, J= 5.7 Hz, 2H), 4.73 (t, J= 5.2 Hz, t), 5.77 (s, 1H), 6.73-7.13 (m, 6H), 7.35 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 7.53 (d, J=8.7 Hz, 2H), 8.07 (s, 1H), 8.90 (s,lH).

l3C NMR (DMSO-Dc, 50MHz): δ= 42.9 (t), 60.7 (t), 83.0 (d), 117.4 (d), 119.9 (d) 121.2 (d), 122.7 (d), 130.03 (d), 131.9 (s), 141.2 (s), 144.2 (s), 157.3 (d), 161.9 (s), 163.8(s). Elementaranalyse: Berechnet C 67.07, H 5.63, N 17.38: Gefunden C 67.11, H 5.48, N 17.00;

Beispiel 9 jV4-(4-Methoxyphenyl)-A6-propylpyrimidin-4,6-diamin

NACHGEREICHT 24 ci

NH HCl

OCH. 100 mg 6-Chlor-jV-(4-mcthoxyphenyl)pyrimidin-4-amin in Form des Hydrochlorids, 66 mg Propylamin und 120 mg DIPEA wurden in 1 mL n-BuOH gelöst und die so erhaltene Mischung in ein Mikrowellengefäß übergeführt und für 60 Minuten unter Mikrowellenbedingungen auf 200°C erhitzt. Der Reaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert und der so erhaltene Rückstand wurde aus einer Mischung von n-BuOH-EtOH umkristallisiert. JY4-(4-Methoxyphenyl)-V’-propylpyrimidin-4,6-diamin wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 82% der Theorie. M.p.: 194-196°C. ’H NMR CDCla, 200MHz): δ = 0.95 (t, J= 7.7 Hz, 3H), 1.51-1.67 (m, 2H), 3.09 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 4.81 (s, 1H), 5.49 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.90 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.19 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 8.13 (s, 1H). 13C NMR (CDCI3, 50MHz): 5=115 (q), 22.5 (d), 43.3 (d), 55.6 (q), 80.3 (d), 114.8 (d), 125.8 (d), 131.3 (s), 157.0 (s), 158.2 (d), 162.0 (s), 163.2 (s).

Elementaranalyse: Berechnet C 65.09, H 7.02, N 21.69: Gefunden C 65.14, H 6.79, N 21.43;

Beispiel 10 7V4-EthyI-A'6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin

A4-Ethyl-A^-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin wurde analog der Methode in Beispiel 9 erhalten, allerdings wurden 83 mg Ethylamin anstelle von 66 mg Propylamin und 45 Minuten anstelle von 60 Minuten Mikrowellenbestrahlung verwendet. A/4-EthyI-.\'6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten. Ausbeute: 71% der Theorie. M.p.: 190-193°C.

NACHGEREiCMT 25 25

*H NMR CDCI3, 200MHz): δ = 1.20 (t, J= 6.8 Hz, 3H), 3.07-3.3.25 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 4.87 (s, 1H), 5.49 (s, 1H), 6.91 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.19 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 8.12 (s, 1H). l3C 13C NMR (CDCI3, 50MHz): δ = 14.3 (q), 36.3 (t), 55.4 (q), 80.3 (d), 114.6 (d), 125.5 (d), 131.3 (s), 157.0 (s), 158.2 (d), 162.0 (s), 163.0 (s).

Elementaranalyse: Berechnet C 63.91, H 6.60, N 22.93: Gefunden C 63.68, H 6.43, N 22.59;

Beispiel 11 N4-(4-Methoxyphenyl)-N6-methylpyrimidin-4,6-diamin

100 mg 6-Chlor-iV-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4-amin in Form des Hydrochlorids, 57 mg Methylamin und 238 mg DIPEA wurden in einem verschraubbaren Gefäß in 1 mL n-BuOH gelöst und die so erhaltene Mischung für 1 Stunde auf 120°C erhitzt. Der Reaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert und der so erhaltene Rückstand wurde aus einer Mischung von n-BuOH/EtOH umkristallisiert. N4-(4-Methoxyphenyl)-N6-methylpyrimidin-4,6-diamin wurde in Form eines leicht gelben Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 91% der Theorie. M.p.: 174-182°C. ’H NMR (DMSO-D6, 200MHz): δ = 2.70 (d, J= 4.7 Hz, 3H), 3.72 (s, 3H), 5.58 (s, 1H), 6.71 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.37 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 8.02 (s, 1H), 8.67 (s, 1H). ,3C NMR (DMSO-D6, 50MHz): δ = 27.4 (q), 55.1 (q), 81.9 (d), 113.8 (d), 121.8 (d), 133.6 (s), 154.3 (s), 157.5 (d), 160.5 (s), 163.1 (s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 231.1240; Gemessen [MH]+= 231.1242.

Beispiel 12 N4-(2-PropyI)-N6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin

NACHGEREICHT 26

100 mg 6-Chlor-A'-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4-amin in Form des Hydrochlorids, 44 mg Isopropylamin und 95 mg DIPEA wurden in 1 mL n-BuOH in in einem verschraubbaren Vial gelöst und für 1 Stunde auf 120°C erhitzt. Der Reaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert und der so erhaltene Rückstand mittels Säulenchromatographie (PE: EtOAc 1:1) gereinigt. N4-Isopropyl-N6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 73% der Theorie. M.p.: 180-182°C ‘H NMR (DMSO-D6, 200MHz): δ = 1.08-1.11 (d, J= 6.5 Hz, 7H), 3.70 (s, 3H), 5.60 (s, III), 6.61 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.85 (d, J= 8.8 Hz, 2H) 7.34 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 8.01 (s, 1H), 8.59 (s, 1H). 13C NMR (DMSO-D*, 50MHz): δ = 22.6 (q), 41.3 (d), 55.3 (q), 82.8 (d), 114.1 (d), 122.3 (d), 133.6 (s), 154.5 (s), 157.7 (d), 160.5 (s), 161.9 (s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 259.1553; Gemessen [MH]+= 259.1552.

Beispiel 13 2-(6-(3-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-yIamino)ethanol 13a. 6-Chlor-N-(3-methoxvphenvnpvrimidin-4-amin

HCl 250 mg 4,6-Dichlorpyrimidin und 158 mg m-Methoxyanilin wurden in 3 mL i-PrOH gelöst. Zu der so erhaltenen Mischung wurden 0.25mL 37% HCl hinzugefugt. Die so erhaltene Mischung wurde für 2.5 Stunden unter Stickstoffatmosphäre auf Rückfluss (84°C) erhitzt. Es bildete sich ein farbloser Niederschlag der durch Filtration gewonnen wurde. 6-Chlor-N-(3-methoxyphenyl)pyrimidin-4-amin in Form des Hydrochlorids wurde in Form eines farblosen Feststoffes erhalten.

NACHGEREICHT 27 • * · * * ♦ * *· • · · · · ·»» * · · # · * · ·

Ausbeute: 33% der Theorie. ’H NMR (DMSO-D6, 200MHz): δ - 3.74 (s, 3H), 6.65 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 7.12-7.37 (m, 3H), 8.49 (s, 1H), 10.02 (s, 1H). 13C NMR (DMSO-D6, 50MHz): δ = 55.1 (q), 105.1 (d), 106.3 (d), 108.5 (d), 112.5 (d), 129.4 (d), 140.2 (s), 157.7 (s), 158.5 (d), 159.7 (s), 161.3 (s). 13b. 2-(6-(3-Methoxvphenvlamino')pvrimidin-4-ylaminolethanol och3

3

OCH

100 mg 6-Ch!or-N-(3-methoxyphenyl)pyrimidin-4-amin, 27 mg Ethanolamin und 119 mg DIPEA wurden in 2 mL n-BuOH gelöst und die so erhaltene Mischung in ein Mikrowellengefaß übergeführt und für 45 Minuten unter Mikrowellenbedingungen auf 200°C erhitzt. Der Rcaktionsfortschritt wurde mittels TLC verfolgt. Nach Abbruch der Reaktion wurde n-BuOH abrotiert und zum so erhaltenen Rückstand wurden 5 mL Wasser hinzu ge fügt. Die so erhaltene Mischung wurde mit EtOAc extrahiert, die Phasen getrennt und die organische Phase getrocknet und einrotiert. 2-(6-(3-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)ethanol wurde in Form eines gelben Öls erhalten.

Ausbeute: 84% der Theorie. 'H NMR (DMSO-Dfi, 200MHz): δ = 3.21 -3.27 (m, 2H), 3.48 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 4.73 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 5.82 (s, 1H), 6.49 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 7.01-7.21 (m, 3H), 8.07 (s, 1H), 8.87 (s, 1H). ,3C NMR (DMSO-D*, 50MHz): δ = 42.9 (t), 54.8 (q), 59.7 (t), 81.8 (d), 105.1 (d), 106.5 (d), 111.5 (d), 129.4 (d), 141.9 (s), 157.3 (d), 159.3 (s), 159.7 (s), 162.9 (s). HR-MS: Berechnet [MH]"= 261.1346; Gemessen [MH]+= 261.1349.

Beispiel 14 2-(4-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylaniino)ethanol 14a, f2-Fluor-N-(4-methoxyphenyl)pyridin-4-amin

NACHGEREICHT 28

50 mg 2-Fluor-4-iodopyridin, 33 mg p-Anisidin, 108 mg K2CO3, 1 mg Pd(OAc)2 und 6 mg BINAP wurden in ein Mikrowellengefaß gewogen und 2 mL trockenes Toluol hinzugefügt. Das Vial wurde verschlossen, evakuiert und mit Argon gespült. Diese Mischung wurde unter rühren in einem CEM Explorer™ Mikrowellengerät für 30 Minuten auf 180°C erhitzt und die so erhaltene Mischung auf r.t. gekühlt. Der dabei gebildete Feststoff wurde abfiltriert und mit 10 mL CH2CI2 gewaschen. Das Lösungsmittel des Waschens und des Filtrates wurde vereinigt und einrotiert. Der so erhaltene Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie gereinigt. (2-Fluor-N-(4-methoxyphenyl)pyridin-4-amin wurde in Form gelber Kristalle erhalten.

Ausbeute: 63% der Theorie. M.p.: 150°C 'H NMR (CDCI3, 200MHz): δ = 3.83 (s, 3H) 6.20 (d, J = 1.7 Hz, 1H) 6.31 (s, 1H) 6.49 -6.54 (m, 1H) 6.95 (d, J = 8.9 Hz, 2H) 7.14 (d, J = 8.8 Hz, 2H) 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1H). l3C NMR (CDCI3, 50MHz): δ = 55.5 (t) 91.6 (q, JC-f= 42.4 Hz), 107.5 (q, JC-r= 2.8 Hz), 114.9 (d), 125.8 (d), 131.4 (s), 147.4 (q, J= 18.7 Hz), 156.5 (d, JC-f= 11.6Hz), 157.6 (s), 165.5 (d, JC-f~ 232.7 Hz).

Elementaranalyse: Berechnet C 66.05% H 5.08% N 12.84%, Gefunden: C 65.76% H 4.84% N 12.62%. 14b. 2-(4-(4-Methoxvnhenvlamino)pvridin-2-vlainino)ethanol

NACHGEREICHT

29 36 mg (2-F]uor-N-(4-methoxyphenyl)pyridin-4-amin wurden mit 80.6 mg Ethanolamin gemischt und die so erhaltene Mischung in einem verschraubbaren Vial unter Argon für 3 Tage auf 150°C erhitzt. Die so erhaltene Mischung wurde auf r.t. gekühlt und 5 mL 2N NaOH wurden hinzugefügt. Die Mischung wurde 3x mit EtOAc extrahiert und die organische Phasen vereinigt und abrotiert. 2-(4-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol wurde in Form eines braunen Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 89% der Theorie. M.p.: 164-165°C. 'H NMR (DMSO-D6, 200MHz): δ = 3.22 (m, 2H), 3.45 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 5.89 (s, 1H), 6.05 (m, 2H), 6.89 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.07 (s, J-8.8 Hz, 2H), 7.59 (s, J=5.7 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H). 13C NMR (DMSO-Ö6,50MHz): δ = 43.8 (t), 55.2 (q), 60.7 (t), 89.3 (d), 114.4 (d), 122.9 (d), 133.9 (s), 147.4 (d), 151.9 (s), 154.9 (s), 159.9 (s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 260.1394; Gemessen [MH]+= 260.1400.

Beispiel 15 2-(4-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-yIamino)ethanol 15a. 2-Fluor-N-('4-phenoxyphenyPpvridin-4-amin

100 mg 2-Fluor-4-iodopyridin, 100 mg 4-Phenoxyanilin, 218 mg K2CO3, 2 mg Pd(OAc)2 und 6 mg BINAP wurden in ein Mikrowellengefäß eingewogen und 2 mL trockenes Toluol hinzugefugt. Das Vial wurde verschlossen, evakuiert und mit Argon gespült. Die Mischung wurde unter rühren in einem CEM Explorer™ Mikrowellengerät für 30 Minuten auf 180°C erhitzt. Die so erhaltene Mischung wurde auf r.t. abgekühlt. Der dabei gebildete Feststoff wurde abfiltriert und mit 10 mL CH2CI2 gewaschen. Das Lösungsmittel des Waschens und des Filtrates wurde vereinigt und einrotiert. Der so erhaltene Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie gereinigt. 2-Fluor-N-(4-phenoxyphenyl)pyridin-4-amin wurde in Form brauner Kristalle erhalten.

NACHCEREICHT 30 • · · · * · * * • · · · t ·*· * * a ··#· *

Ausbeute: 75% der Theorie. M.p.: 149°C. lH NMR (CDCI3, 200MHz): S = 6.51 (d, J - 1.9 Hz, 1H) 6.61 (s, 1H) 6.81 (d, J = 5.8 Hz, II-T) 7.23 (d, J = 2.1 Hz, 2H) 7.37 (m, 3H) 7.48 (s, 1H) 7.57(t, J - 7.9 Hz, 3H) 8.80 (d, J = 5.8 Hz, 1H) liC NMR (CDCb, 50MHz): ό = 92.0 (q, JC-f = 39.5 Hz), 107.8 (q, JC-k= 3.2 Hz), 118.9 (d), 119.9 (d), 123.5 (d), 125.0 (d), 129.9 (d), 133.9 (s), 147.9 (q, JC-f = 22.9 Hz), 154.8 (s), 155.8 (d, JC-f= 11.9 Hz) 157.0 (s), 165.6 (d, JC.F= 233.0Hz). 15b. 2-(4-(4-Phenoxvphenvlamino)pvridin-2-vlamino)ethanol

53 mg 2-Fluor-N-(4-phenoxyphenyl)pyridin-4-amin in 80.6 mg Ethanolamin wurden in einem verschraubbaren Gefäß unter Argon flir 3 Tage auf 150°C erhitzt. Die so erhaltene Mischung wurde auf r.t. gekühlt und 5 mL 2N NaOH wurden hinzugefügt. Die Mischung wurde 3x mit 15 mL EtOAc extrahiert und die organische Phasen vereinigt und abrotiert und 2-(4-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol isoliert.

Ausbeute: 89% der Theorie. JH NMR (CD3OD, 200MHz): S = 3.33-3.37 (m, 2H), 3.68 (t, J=5.5 Hz, 2H), 6.05 (d, J=1.9 Hz, 1H), 6.20 (dd, J,=6.1 Hz, J2=2.2 Hz, 1H), 6.95 (s, 2H), 6.97-7.02 (m, 2H), 7.08 (t, J=7.3 Hz, IH), 7.14-7.23 (m, 2H), 7.26-7.39 (m, 2H), 7.61 (d, J=6.1 Hz, 1H). I3C NMR (CD3OD, 50MHz): <5 = 45.5 (t), 62.4 (t), 90.9 (d), 102.8 (d), 119.3 (d), 121.1 (d), 124.1 (d), 124.4 (d), 130.8 (d), 137.8 (s), 147.9 (d), 154.2 (s), 154.5 (s), 159.3 (s), 161.5 (s).

Beispiel 16 2-(6-(4-MethoxyphenyIamino)pyridin-2-ylamino)ethanoI 16a. 6-Chloro-N-(4-methoxvphenvl)pyridin-2-amin

NACHGEREICHT « 31 r Μ · · · » ·· * · * · * * · a * * * » · » « · « · • *

100 mg 2,6-Dichlorpyridin, 100 mg p-anisidin, 329 mg K2CO3, 3 mg Pd(OAc)2 und 9 mg BLNAP wurden in ein Mikrowellengefäß 1 gewogen und 2.5 mL trockenes Toluol hinzugefügt. Das Gefäß wurde verschlossen, evakuiert und mit Argon gespült. Die Mischung wurde unter rühren in einem CEM Explorer1 M Mikrowellengerät für 30 Minuten auf 180°C erhitzt. Die so erhaltene Mischung wurde auf r.t. abgekühlt. Der dabei gebildete Feststoff wurde abflltriert und mit 10 mL CH2CI2 gewaschen. Das Lösungsmittel des Waschens und des Filtrates wurde vereinigt und einrotiert. Der so erhaltene Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie gereinigt. 6-Chlor-N-(4-methoxyphenyI)pyridin~2-amin wurde in Form eines gelben Feststoffes erhalten.

Ausbeute: 72% der Theorie. M.p: 74-76°C. lH NMR (CDCh, 200MHz): 8- 3.8 (s, 3H), 6.52 (d, 8.2 Hz, 1H,) 6.65 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.89 (d, J=9.4 Hz, 2H), 7.19 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.34 9t, J= 7.9 Hz, 1H). 13C NMR(CDCb, 50MHz): 6= 54.6 (q), 103.8 (d), 112.4 (d), 113.8 (d), 123.7 (d), 131.1 (s), 139.1 (d), 148.5 (s), 155.9 (s), 156.4 (s).

Elementaranalyse: Berechnet C 68.81, H 4.42, N 11.95: Gefunden C 68.60, H 4.22, N 8.92; 16b. 2-(6-(4-MethoxvphenvI am ino)pvridi n-2-vlaminolethanol

190 mg 6-Chlor-N-(4-methoxyphenyl)pyridin-2-amin wurden mit 397 mg Ethanolamin vermischt und die so erhaltene Mischung in einem verschraubbaren Gefäß unter Argon für 3 Tage auf 150°C erhitzt. Die so erhaltene Mischung wurde auf r.t. abgekühlt und 5 mL EtOAc wurden hinzugefügt. Die Mischung wurde 3x mit 5 mL EtOAc extrahiert und die organische Phasen vereinigt und abrotiert. Der so erhaltene Rückstand wurde mittels

NACHGEREICHT * ♦ · · · ···« ♦ · ·* · • * f * « » ·« · »· ( ft · · · · · *· » • · · * · *« # 4 « • * · *· · I · · « M * · ·· ♦ * *# · · » 32 Säulenchromatographie gereinigt (EtOAc:PE 3:1). 2-(6-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol wurde in Form eines braunen Öls isoliert.

Ausbeute: 73% der Theorie. ’H NMR (CDCI3,200MHz): δ= 3.35 (t, J=4.8 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.84 (t, J=4.6 Hz, 2H), 5.80 (d, J=7.8 Hz, 1H), 5.92 (d, J=9.4 Hz, 2H), 6.89 (d, J=8.9 Hz, 2H), 7.17 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.32 (t, J= 7.6 Hz, 1H). 13C NMR (CDCI3,50MHz): 5= 54.6 (q), 103.8 (d), 112.4 (d), 113.8 (d), 123.7 (d), 131.1 (s), 139.1 (d), 148.5 (s), 155.9 (s), 156.4 (s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 260.1394; Gemessen [MH]+= 260.1389.

Beispiel 17 3~(6-(4-Methoxyphenylaniino)pyridin-2-ylamino)propan-l-ol

OH

95 mg 6-Chlor-N-(4-methoxyphenyl)pyridin-2-amin wurden mit 244 mg n-Propanolamin gemischt und diese Mischung analog der Methode in Beispiel 16b behandelt. 3-(6-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)propan-l-ol wurde in Form eines braunen Öls isoliert.

Ausbeute: 64% der Theorie. 'H NMR (CDCb, 200MHz): δ = 1.6-1.8 (m, 2H), 3.3 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.6 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.7 (s, 3H), 5.7 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.8 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.8 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.1 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.2 (t, J= 8.2 Hz, 1H). ,3C NMR (CDCI3, 50MHz): δ = 22.9 (t), 38.8 (t), 55.5 (q), 59.2 (t), 94.1 (d), 114.6 (d), 125.3 (d), 131.6 (s), 142.3 (d), 153.9 (s), 155.2 (d), 156.9 (s), 178.4(s). HR-MS: Berechnet [MH]+= 274.1550; Gemessen [MH]+= 274.1555.

Beispiel 18 2-(6-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-yIamino)ethanol 18a. 6-Chlor-N-i4-phenoxvphenvl)pyridin-2-amin

NACHGEREICHT 33 • · • · • ·

100 mg 2,6-Dichlorpyridin, 150 mg 4-Phenoxyanilin, 329 mg K2CO3, 3 mg Pd(OAc)2 und 9 mg BINAP wurden in ein Mikrowellenvial eingewogen und 2.5 mL trockenes Toluol hinzugefugt. Die so erhaltene Mischung wurde analog der Methode in Beispiel 16a behandelt. Für die Säulenchromatrographie wurde eine Mischung von EtOAc:PE =1:10 verwendet. 6-Chloro-N-(4-phenoxyphenyl)pyridin-2-amin wurde in Form gelber Kristalle erhalten.

Ausbeute: 77% der Theorie. M.p.: 69-73°C. ‘H NMR (CDCI3,200MHz): δ = 6.58-6.75 (q, J = 7.2 Hz, 3H), 6.95-7.06 (m, 4H), 7.10 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.21-7.31 (m, 3H), 7.32-7.36 (m, 1H), 7.37-7.44 (m, 1H). ,3C NMR (CDCb, 50MHz): 6 = 105.3 (d), 113.9 (d), 118.5 (d), 120.0 (d), 123.2 (d), 123.6(d), 129.8 (d), 134.8 (s), 140.0 (d), 149.7 (s), 153.5 (s), 156.7 (s), 157.5 (s).

Elcmcntaranalyse: Berechnet C 68.81%, H 4.42%, N 11.95%: Gefunden: C 68.60%, H 4.225%, N 8.92%. 18b. 2-('6-('4-Phenoxvphenvlamino)pyridin-2-vlamino)ethanol

Eine Mischung von 130 mg 6-Chlor-N-(4-phenoxyphenyl)pyridin-2-amin in 214 mg Ethanolamin wurde in ein verschraubbares Gefäß gefüllt und analog der Methode in Beispiel 16b behandelt. Für die Säulenchromatrographie wurde eine Mischung von EtOAc:PE =1:1 (anstelle von EtOAc:PE = 3:1) verwendet. 2-(6-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol wurde in Form eines braunen Öls erhalten. Ausbeute: 73% der Theorie. ‘H NMR (CDCI3, 200MHz): δ = 3.30 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.8 (t, J= 5.3 Hz, 2H), 5.8 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.9 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.8-7.4 (m, 11H). 13C NMR (CDC13> 50MHz): δ = 45.2, 53.4, 60.4, 94.5, 118.7, 119.8, 123.4, 125.3, 129.8, 133.2, 143.8, 152.2, 153.7, 154.6, 157.2, 177.5.

NACHGEREICHT 34 34

Beispiel 19 3-(6-(4-Phcnoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)propait-l-ol

Eine Mischung von 150 mg 6-Chlor-N-(4-phenoxyphenyl)pyridin-2-amin in 304 mg n-Propanolamin in einem verschraubbaren Gefäß unter Argon wurde analog der Methode in Beispiel 16b behandelt. 3-(6-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)propan-l-ol wurde in Form eines braunen Öls erhalten.

Ausbeute: 73% der Theorie. 'H NMR (CDCI3,200MHz): 5 - 1.8-1.9 (m, 2H), 3.4 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.7 (t, J= 5.3 Hz, 2H). 5.9 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.0 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.9-7.4 (m, 11H).

NACHGEREICHT

Claims (11)

1. • » · * Μ·Ι Ι· ·· · • * * > · * · * « ·· • II» · I f »t · • · · I I »* I » « * • I I t · · f t · * « « 4· Μ I · ·»· 35 Patentansprüche I. Verbindung der Formel

   worin X CH oder N ist, Ri und R2 unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, R3 und R4 unabhängig voneinander H oder NRsRe sind, R5 und Re unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, oder Ri und R2 zusammen mit dem StickstofFatom an, das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Ring bilden, oder Ri zusammen mit dem StickstofFatom an das es gebunden ist und zusammen mit einem C-Atom des Pyrimidin- oder Pyridin-Rings einen heterocyclischen Ring bildet, oder R5 und R^ zusammen mit dem StickstofFatom an das sie gebunden sind einen heterocyclischen Ring bilden, oder, wenn X CH ist, R5 zusammen mit dem Stickstoffatom, an das es gebunden ist und zusammen mit einem C-Atom des X-enthaltenden Rings einen Heterocyclus bildet, mit der Massgabe, dass R4 ungleich NRsR$ ist, wenn X gleich N ist.
2. 2. Verbindung der Formel I nach Anspruch t, worin entweder X CH oder N ist, Ri und R2 unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, R3 NR5R6 ist, und R4 Hist; oder X CH ist, NACHGEnHiCHT • ♦ * · * » ·· ··· * f » · ·· * * * · • *· · *·.*♦» * « • · · *a · «a 9 rn 36 Ri und R2 unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, R3 H ist, und R4 NR5R6 ist.
3. 3. Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 oder 2, worin X N oder CH ist, Ri Ci-sCycloalkyl oder Ci^Alkyl, gegebenenfalls substituiert durch Hydroxy ist, R2 H ist, R3 H ist, wenn X CH ist; oder R3 NR5R6 ist, wenn X CH oder N ist; R4 H ist, wenn X N oder CH ist; oder R4 NRsRf, ist, wenn X CH ist; R5 Methoxyphenyl, Morpholinylphenyl, Phenylaminophenyl oder Phenoxyphenyl, ist und Rö H ist. NACHGEREICHT *« * · · · * * · · »· ft t * * ft * * »ft · «· • · ft · ·* ft * ft * • · · ♦ · · ft « · f »•«•ft« ft·· ft 37 2~(6-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol, 3~(6-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)propan-1 -ol, 2- (6-(4-Phenoxypheny]amino)pyridin-2-ylamino)ethanol, and 3- (6-(4-PhenoxyphenyIamino)pyridin-2-ylamino)propan-1 -ol.
4. 5. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in Form eines Salzes.
5. 6. Verbindung aus einem vorhergehenden Anspruch zur pharmazeutischen Verwendung.
6. 7. Methode zur Behandlung von Herzkrankheiten (cardiac disorders), dadurch gekennzeichnet, dass die Methode die Verabreichung einer therapeutisch effektiven Menge von cardiomyocytenähnlichen Zellen an ein Subjekt dass so eine Behandlung braucht, umfasst, wobei die cardiomyocytenähnlichen Zellen aus omnipotenten-, pluripotenten- oder Zellinien vorbestimmten Säugetierzellen durch Behandlung mit einer Verbindung aus einem der Ansprüche 1 bis 4 gewonnen werden.
7. 8. Methode zur Behandlung von Krankheiten die in Zusammenhang mit einer beeinträchtigten Funktion des Herzens stehen, umfassend die Schritte (i) zur Verfügungstellen von omnipotenten-, pluripotenten- oder Zellinien vorbestimmten Säugetierzellen, z.B. Skelett Myoblasten, eines Subjektes dass so eine Behandlung braucht, (ii) Kultivierung besagter Zellen in Gegenwart einer Verbindung der vorliegenden Erfindung um cardiomyocytenähnlichen Zellen zu produzieren, und (iii) Verabreichung einer therapeutisch effective Menge cardiomyocytenähnlichen Zellen, wie in (ii) hergestellt, an ein Subjekt, das so eine Behandlung nötig hat.
8. 9. Eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Produktion von cardiomyocytenähnlichen Zellen, wobei die Produktion aus der Behandlung von omnipotenten-, pluripotenten- oder Zellinien vorbestimmten Säugetierzellen mit einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4 umfasst. NACHGEREICHT T13545 Α 2044/2009 Patentansprüche 1. Verfahren zur Produktion von cardiomyocytcnähnlichen Zellen, umfassend die Kultivierung von omnipotenten-, pluripotenten- oder Zellinien vorbestimmten Säugetierzellen, insbesondere Skelett Myoblasten, in Gegenwart einer Verbindung der Formel

   worin X CH oder N ist, Ri und R2 unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, R3 und R4 unabhängig voneinander H oder NR5R4 sind, R5 und Rfi unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, oder Ri und R2 zusammen mit dem Stickstoffatom an, das sie gebunden sind, einen heterocyclischen Ring bilden, oder Ri zusammen mit dem Stickstoffatom an das es gebunden ist und zusammen mit einem C-Atom des Pyrimidin- oder Pyridin-Rings einen heterocyclischen Ring bildet, oder R? und R* zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind einen hetcrocyclischen Ring bilden, oder, wenn X CH ist, R5 zusammen mit dem Stickstoffatom, an das es gebunden ist und zusammen mit einem C-Atom des X-enthaltenden Rings einen Heterocyclus bildet, mit der Massgabe, dass R4 ungleich NR5R6 ist, wenn X gleich N ist. 2. Verfahren nach Anspruch 1, worin in einer Verbindung der Formel I, entweder X CII oder N ist, Ri und R2 unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, R3 NR5R6 ist, und NACHGEREICHT 2 T 13545 Η ist; oder X CH ist, Ri und R2 unabhängig voneinander H, Alkyl, Aryl oder Cycloalkyl sind, R3 H ist, und R4 NR5R4 ist. 3. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 oder 2, worin in einer Verbindung der Formel I, entweder X N oder CH ist, Ri C3-8Cycloalkyl oder C 1.4Alkyl, gegebenenfalls substituiert durch Hydroxy ist, R2 H ist, R3 H ist, wenn X CH ist; oder R3 NRsR^ ist, wenn X CH oder N ist; R4 H ist, wenn X N oder CH ist; oder R4 NR^R^ ist, wenn X CH ist; R5 Methoxyphenyl, Morpholinylpheny], Phenylaminophenyl oder Phenoxyphenyl, ist und R<$ H ist. 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin in einer Verbindung der Formel I, in der Form eines Salzes verwendet wird. 5. Verbindung der Formel I gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, wrorin X ist N oder CH, Ri ist C3.gCycioalkyl oder C 1.3Alkyl, gegebenenfalls substituiert durch Hydroxy, • insbsondere Methyl, Elhyl, Propyl, Hydroxyethyl, Hydroxypropyl, Cyclohexyl; R2 ist H; R3 ist H, wenn X gleich CH; oder, R3 ist NR5R6, wenn X gleich N oder CH; R4 ist H, wenn X gleich N oder CH; oder R4 ist NR5R$, wenn X gleich CH; R5 ist Methoxyphenyl, insbesondere 3-Methoxyphenyl, 4~Methoxyphenyl; Morpholinylphenyl, insbesondere 4-Morpholin-l-yl-phenyl, NACHGEREICHT • ψ 545 3 Phenylaminophenyl, insbesondere 4-Phenylamino-phenyI, Phenoxypheny], insbesondere 4-Phenoxy-phenyl; und R<i ist H. 6. Verbindung der Formel I gemäß Anspruch 5, worin X ist N oder CH, Ri ist Methyl, Ethyl, Propyl, Hydroxvethyl, Hydroxypropyl, Cyclohexyl; R2, R3, R4 und Rö wie im Ansrpuch 5 definiert sind, und R5 ist 3-Methoxyphenyl, 4-Methoxyphenyl: 4-Morpholin-l-yl-phenyl, 4-Phenylamino-phenyl oder 4-Phenoxy-phenyl. 7. Verbindung nach einem der Ansprüche 5 oder 6, die ausgewählt ist aus 3-(6-(4~Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)ethan-1 -ol, 3-(6-(4-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)propan-1 -ol, Vl-cyclohcxyl-/V6-(4-mcthoxyphenyl)pyri]nidin-4,6-diamin, 2- (6-(4-Morpholinophenylamino)pyrimidin-4-ylamino)ethanol, A^-Cyclohexy 1 - A/6- (4 -morpholinopheny I )pyrimidi n-4,6-diamin, 3- (6-(4-Morpholinophenylamino)pyrimidin-4-vlamino)propan-l-ol, 2-(6-(4-(Phenylamino)phenylamino)pyrimidin-4-ylamino)ethanol, 2-(6-(4-Phenoxyphenylamino)pyrimidin-4-ylamino)ethanol, Arl-(4-Methoxyphenyl)-JV6-propylpyrimidin-4,6-diamin, A,4-Ethy]-V6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin, N4-(4-Methoxyphenyl)-N6-methylpyrimidin-4,6-diamin, N4-lsopropyl-N6-(4-methoxyphenyl)pyrimidin-4,6-diamin, 2-(6-(3-Methoxyphenylamino)pyrimidin-4-vlamino)ethanol, 2-(4-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol, 2-(4-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-yIamino)cthanol, 2- (6-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol, 3- (6-(4-Methoxyphenylamino)pyridin-2-ylaniino)propan-1 -ol, 2- (6-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)ethanol, und 3- (6-(4-Phenoxyphenylamino)pyridin-2-ylamino)propan-l-ol. NACHGEREICHT • ·

   • · T13545 4
9. 8. Verbindung nach einem der Ansprüche 5 bis 7 in Form eines Salzes.
10. 9. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 5 bis 8 zur pharmazeutischen Verwendung, insbesondere zur Herstellung von cardiomyocytenähnliehen Zellen, die zur Verabreichung an einen Patienten, mit einer Krankheit, die in Zusammenhang mit einer beeinträchtigten Funktion des Herzens steht, bestimmt sind, aus omnipotenten-, pluripotenten- oder Zellinicn vorbestimmten Säugetierzcllen insbesondere Skelett Myoblasten, durch Behandlung mit einer Verbindung aus einem der Ansprüche 6 bis 9.
11. 10. Methode zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krankheiten, die in Zusammenhang mit einer beeinträchtigten Funktion des Herzens stehen, umfassend die Schritte (i) zur Verfiigungstellen von omnipotenten-, pluripotenten- oder Zellinien vorbestimmten Säugetierzellen, insbesondere Skelett Myoblasten, eines Subjektes, das so eine Behandlung braucht, (ii) Kultivierung besagter Zellen in Gegenwart einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei cardiomyocytenähnlichc Zellen produziert werden, die als Medikament zur Verabreichung in einer therapeutisch effektiven Menge an ein Subjekt, das so eine Behandlung braucht, bestimmt sind. NACHGEREICHT