NO970152L - Askorbylfosforylkolesterol - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører syntese og anvendelse av et nytt derivat av L-askorbinsyre som er stabilt, lett å inkorporere i kosmetisk akseptable bærere og enzymatisk bioreversibelt til dets bestanddelkomponenter. Eksempler på derivater innbefatter 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol og 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol og salter derav.

Anvendelsen av L-askorbinsyre som et antioksidasjonsmiddel i matvareprodukter er kjent. For eksempel beskriver Steinhart, Pro- and Antioxidative Effect of Ascorbic Acid on L- Tryptophan in the System Fe3+/ Ascorbic Acid/ Cb. J. Agric. Food Chem., vol. 41, sider 2275-2277 (1993), anvendelsen av L-askorbinsyre som et antioksidasjonsmiddel som utøver sin funksjon i mat ved å fjerne frie radikaler og selv gjennomgår hurtig oksidasjon.

Likeledes utviser fri L-askorbinsyre i topiske preparater dårlig stabilitet og har tilbøyelighet til å nedbrytes på grunn av delvis oksidativ og ikke-oksidativ nedbrytning. Den nedbrutte askorbinsyren mister aktivitet og vertproduktet taper estetisk appell ved å utvise en brun farge som er uakseptabel for kommersielle kosmetika.

Selv om kolesterol, spesielt i den inntatte form, anses som usunt, er nyttevirkningene av kolesterol uforenet med L-askorbinsyre for hudbarriereheling kjent. For eksempel beskriver Menon, Structural Basis for the Barrier Abnormality Following Inhibition of HMG CoA Reductase in Murine Epidermis. J. Invest. Dermatol., vol. 98, sider 209-219

(1992), mangler som oppdages i hudbarrierehelingsmekanismen når kolesterolsyntese inhiberes av nedregulering av HMG CoA reductase.

Mekanisk blanding av L-askorbinsyre og kolesterol ifølge tilgjengelige eksisterende metoder resulterer i et produkt som også er ustabilt på grunn av det altoverveiende problemet med L-askorbinsyre-ustabilitet. For eksempel beskriver US-patent 4.939.128, i kolonne 3, linjene 21-22, askorbinsyre i forbindelse med en kolestanylgruppe. Det tydelige fravær av kolesterol og den spesifikke nevning av en kolestanylgruppe reflekterer en erkjennelse, forut for foreliggende beskrivelse, at konjugater av L-askorbinsyre og kolesterol ikke var praktisk eller ønsket.

Det har også vært foretatt forsøk på å konjugere askorbinsyre med en glycyrretisk gruppe som beskrevet i EP-patentsøknad 92104149.7; og med et tokoferylgruppe som angitt i US-patent 3.151.127. US-patenter 4.564.686 og 5.306.713 beskriver også tokoferylaskorbylfosfat som et antioksidasjonsmiddel som har følgende struktur: Sakamoto, Measurement Method of Efficacv of Antidandruff Cosmetics and Development of the New Active Commercial Product. IFSCC, Yokohama, vol. B206. sider 823-864 (1993), beskriver anvendelsen av tokoferyl koblet til L-askorbinsyre. Den koblede tokoferyl er et antioksidasjonsmiddelpreservativ for askorbylgruppen, men bruken av askorbyl-tokoferyl som et hudterapeutikum er tvilsom fordi tokoferyl, til forskjell fra kolesterol, ikke er et naturlig substrat for huden.

Teknikken trenger en metode for kovalent og bioreversibel kobling av kolesterol til L-askorbinsyre. Det koblede molekylet bør være stabilt slik at full funksjonell aktivitet bibeholdes selv etter avkobling ved hjelp av naturlig forekommende sure fosfataser i huden. Nytteegenskapene til L-askorbinsyre ville bli oppnådd, innbefattet forøket kollagenproduksjon og lysgjøring av hud, kombinert med nyttevirkningene av frigjort kolesterol for forbedret elastisitet, resistens, farge og fuktighetsretensjon når det gjelder huden.

Et formål med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en fremgangsmåte for kovalent og bioreversibel kobling av kolesterol til L-askorbinsyre for stabilisering av det resulterende molekyl.

Et annet formål med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe et stabilt preparat med en rekke hudpleienyttevirkninger.

Et ytterligere formål med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe et derivat av L-askorbinsyre som er stabilt, som lett lar seg bringe inn i kosmetiske bærere og som er enzymatisk bioreversibelt til fri askorbinsyre og en sikker kolesterolkomponent.

Nok et annet formål med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe stabile kosmetiske formuleringer som viser lang holdbarhet.

Disse og andre formål vil fremgå fra det nedenstående.

Foreliggende oppfinnelse innbefatter en fremgangsmåte for kobling av et molekyl av L-askorbinsyre til et molekyl av kolesterol gjennom en bioreversibel fosfatbinding ved stilling 2 eller 3 på askorbylgruppen og stilling 3' på kolestervIdelen. Resulterende preparater er også aktuelle ved foreliggende oppfinnelse. Eksempler på forbindelser inkluderer funksjonelle eller strukturelle homologer av 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol (formel I) slik som 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol (formel II). Begge formler er illustrert i det nedenstående.

Den konjugerte 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol (formel I) ble fremstilt ved oppløsning av kolesterol ved -10°C i. tørr dietyleter (tørket med 4A molekylsikter) inneholdende 1,0 ekvivalent av trietylamin som en base. Fosforoksyklorid (1,0 ekvivalent) ble tilsatt for å tilveiebringe kolesterylfosforodikloridat. Smeltepunktet til kolesterylfosforodikloridat ble målt som 121-122°C og infrarød (KBr-pellet) analyse viste P=0 absorpsjon ved 1298 bølgelengder og P-O-C absorpsjon ved 1019 bølgelengder, uten noen hydroksylabsorpsjon. Kolesterylfosforodikloridat ble deretter omsatt i 3 timer ved romtemperatur med 5,6-isopropyliden-L-askorbinsyre i tetrahydrofuran inneholdende 1,0 ekvivalent av trietylamin. Denne reaksjonen ga en blanding av kolesteryl 5,6-isopropyliden-2-fosforokloridat L-askorbinsyre og dens isomer kolesteryl 5,6-isopropyliden-3-fosforokloridat L-askorbinsyre.

Den isomere blandingen ble hydrolysert i en vandig oppløsning av THF og omrørt i flere timer ved romtemperatur med Amberlyst-15, en sterkt sur sulfonsyreionevekslerharpiks. THF og vann ble deretter fjernet og sluttproduktet, 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol, ble ekstrahert med etylacetat og nøytralisert med en KOH-ekvivalent. Den resulterende oppløsning ble lyofilisert hvilket ga monokaliumsaltformen.

Den nye fremgangsmåten gir anledning til kovalent og bioreversibel kobling av kolesterol med L-askorbinsyre hvilket resulterer i stabiliseringen av askorbinsyre samt forøket biotilgjengelighet for askorbinsyre og kolesterol. I askorbyl-fosforyl-kolesterol-forbindelsene ifølge oppfinnelsen blir den konjugerte askorbinsyren resistent overfor nedbrytning. Kolesterylgruppen tjener som en bærerdel og letter avlevering av polar askorbinsyre gjennom det ikke-polare ytterste hudbeskyttelseslaget (dvs. stratum corneum) og øker biotilgjengeligheten til askorbinsyren i den topiske påføringen.

Naturlige enzymer, slik som fosfataser som befinner seg i huden, forårsaker gradvis spaltning av fosfatbindingen mellom kolesterol og askorbinsyre, hvilket resulterer i vedvarende frigjøring av fri L-askorbinsyre og kolesterol i stratum corneum. Den frigjorte kolesterolen er et naturlig substrat for hud og supplerer det som ellers produseres i kroppen. Topisk påført kolesterol forbedrer elastisitet, fargetone og resistens overfor tørking. En topisk formulering ifølge foreliggende oppfinnelse kan omfatte enten 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol eller 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol. I tillegg lar ammonium-, kalsium-, litium-, kalium- eller natriumsalter av disse forbindelsene seg lett inkorporere i kosmetisk akseptable bærere. Et salt med et organisk amin slik som etanolamin vil også gi de nyttevirkninger som tilsiktes gjennom foreliggende oppfinnelse.

Egnede bærere innbefatter konvensjonelle lotioner, kremer eller geler. En lotion-utførelse kan omfatte fra ca. 0,1 til ca. 20,0% 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol eller 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol, fra ca. 0,5 til ca. 6,0% glycerin, fra ca. 2,0 til ca. 8,0% propylenglykoldikaprylat/dikaprat, fra ca. 1,8 til ca. 4,0% Peg 40 Stearat, fra ca. 1,0 til ca. 2,5% Steareth-2, fra ca. 0,25 til ca. 0,7% xantangummi, fra ca. 0,25 til ca. 0,7% hydroksyetylcellulose, fra ca. 0,15 til ca. 0,2% dinatrium EDTA og fra ca. 0,20 til ca. 0,25% metylparaben, idet alle områder er uttrykt som vekt-%.

En kremutførelse kan omfatte fra ca. 0,1 til ca. 20,0% 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol eller 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol, fra ca. 0,5 til ca. 4,0% glycerin, fra ca. 2,0 til ca. 6,0% propylenglykoldikaprylat/dikaprat, fra ca. 1,8 til ca. 3,0% Steareth-20, fra ca. 0,8 til ca. 2,0% Steareth-2, fra ca. 0,25 til ca. 0,6% xantangummi, fra ca. 0,25 til ca. 0,6% hydroksyetylcellulose, fra ca. 1,0 til ca. 2,5% cetylalkohol, fra ca. 0,9 til ca. 3,5% glycerolmonostearat og fra ca. 0,15 til ca. 0,2% dinatrium EDTA.

En gelutførelse kan omfatte fra ca. 0,1 til ca. 20,0% 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol eller 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol, fra ca. 0,15 til ca. 0,2% dinatrium EDTA, fra ca. 2,0 til ca. 6,0% propylenglykol, fra ca. 0,4 til ca. 1,5% hydroksyetylcellulose og fra ca. 0,20 til ca. 0,25% metylparaben.

pH-verdien til disse formuleringene kan justeres til fysiologisk akseptable nivåer med tilstrekkelige mengder av ammoniumhydroksid, kalsiumhydroksid, litiumhydroksid, kaliumhydroksid, natriumhydroksid, etanolamin, dietanolamin eller urea.

Foreliggende forbindelser blir generelt syntetisert ved (i) omsetning av kolesterol med et halogenofosforileringsmiddel, (ii) kobling av det resulterende produkt med 5,6-hydroksylbeskyttet L-askorbinsyre, (iii) hydrolysering av produktet med vann, (iv) fjerning av beskyttelsesgruppen med en sur harpiks og (v) rensing av produktet ved lyofilisering og omkrystallisering. Derivatet er stabilt i oppløsning, utviser antioksiderende aktivitet og stimulerer produksjon av kollagen i fibroblaster.

EKSEMPEL 1

Fremstilling av fosfodiestersyre og dets monokaliumsalt

Kolesterylfosfodikloridat ble syntetisert ved bruk av følgende fremgangsmåte. En 250 ml to-halset 19/22 ST rundbunnet kolbe ble valgt for reaksjonen. Den innbefattet en serumhette (med nitrogeninngangsnål), en omrøringsstav og et 19/22 til 24/40 ST ekspansjonsadapter inneholdende en 24/40 ST 125 ml dråpetrakt utstyrt med en sidearm. Dette apparatet ble flammetørket og avkjølt under en nitrogenspyling. Dråpetrakten ble fylt med 4,64 g (12 mmol) Sigma 99+% kolesterol, 75 ml eter (tørket over aktiverte 4A molekylsikter) og 1,214 g (12 mmol, 1,672 ml) tørr (over KOH) trietylamin.

Kolben ble fylt med 28 ml tørr eter og 1,84 g (12 mmol, 1,118 ml) fosforoksyklorid og avkjølt i et is/metanol (-10°C) bad. Eter inneholdende kolesterol-trietylaminen ble tilsatt dråpevis på rask måte i løpet av en periode på 20-30 minutter. Oppløsningen ble oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 2,5 timer.

Utfelte faste stoffer ble frafiltrert på en Buchner-trakt og vasket tre ganger i vann med grundig omrøring. Luft ble innført gjennom Buchner-trakten inntil all eteren i filtratet var fordampet. Fast bunnfall ble deretter fjernet ved filtrering gjennom en annen Buchner-trakt og kolesterylfosfodikloridat ble tørket i en vakuumeksikkator over fosforpentoksid. Dette forsøket ga 3,90 g (65%) av en første faststoffporsjon, smp. 121-122°C og 1,74 g (29%) av en annen materialporsjon, smp. 117-118°C. IR-analyse (KBr-pellet) viste

(C-H) absorpsjon ved 2947 bølgelengder, (=C-H) absorpsjon ved 2878 bølgelengder, (C=C) absorpsjon ved 1466 bølgelengder, (P=0) absorpsjon ved 1298 bølgelengder og (P-O-C) absorpsjon ved 1019 bølgelengder.

<*><*><*>*

Askorbinkolesterylfosfodiesterkloridat ble syntetisert ved å følge den nedenfor angitte prosedyre.

En 50 ml tre-halset 19/22 ST rundbunnet kolbe utstyrt med en omrøringsstav, serumhette, nitrogeninnløpsnål og 50 ml dråpetrakt ble valgt for dette forsøket. Dette apparatet ble flammetørket og avkjølt under en nitrogenspyling. Dråpetrakten ble fylt med 503 mg (1 mmol) kolesterylfosforodikloridat (smp. 122°C) og 15 ml tørr THF; og blandingen ble avkjølt i et is/metanolbad (-10°C). Til den avkjølte blandingen ble det tilsatt 216 ml (1 mmol) Sigma 5,6-isopropyliden-L-askorbinsyre, 15 ml tørr THF og 0,14 ml (101 mg, 1 mmol) tørr (KOH) trietylamin. Etter tilsetning ble blandingen oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 3 timer.

En TLC (25% metanol/toluen) analyse viste at reaksjonen var fullstendig. Den antydet også at produktet var en blanding av 2-0- og 3-O-regioisomerer. Det utfelte trietylaminhydrokloridet ble fjernet ved filtrering gjennom et foldet papir. THF ble fjernet ved rotasjonsfordampning hvilket ga 0,66 g (97%) urent krystallinsk askorbinkolesteryl-fosfodiesterkloridat.

Askorbinkolesterylfosfodiestersyre ble fremstilt ved anvendelse av følgende prosedyre. Urent askorbinkolesterylfosfodiesterkloridat (6,76 g, 9,9 mmol) i 60 ml THF ble kombinert med 30 ml vann og 20 g våt Amberlyst-15 som hadde blitt skyllet i vann tre ganger. Den resulterende blandingen ble sterkt omrørt ved romtemperatur i 55 timer. Amberlyst-15 ble fjernet ved filtrering gjennom foldet papir og ble skyllet en gang med 20 ml av 1:1 THF/vann. Mesteparten av nevnte THF ble fjernet i en strøm av nitrogen hvilket ga 53 ml av en tykk, uklar vandig suspensjon. 53 ml THF ble tilsatt til suspensjonen hvilket ga 106 ml av en 1:1 THF/vann-oppløsning av uren fosfodiestersyre som var nesten klar. Fosfodiestersyre ble renset ved tilsetning av 1:1 THF/vann-oppløsningen til en kolonne av C-18 reversfase-silisiumdioksidgel (472 g) og eluering med 1:1 THF/vann. THF ble fjernet i en strøm av nitrogen og dette ga 215 ml renset fosfodiestersyre i vandig suspensjon. Det prosjekterte totale utbytte var 1,74 g (28%); og det aktuelle isolerte utbytte var 1,84 g (30%). Reversfase-HPLC analyse indikerte 90% renhet.

Askorbinkolesterylfosfodiesterdisyremonokaliumsalt ble fremstilt ved først å behandle en 1% vandig oppløsning av disyren med en ekvivalent av en standardisert kaliumhydroksid-oppløsning og etterfølgende lyofilisering. Fosfodiesterdisyren (579 mg, 0,927 mmol) ble oppløst i 57,9 ml vann og behandlet med 9,44 ml 0,0986 N kaliumhydroksidoppløsning (0,931 mmol). Den nøytraliserte oppløsningen ble deretter lyofilisert for å fjerne vann og utbyttet va 603 mg (98%) monokaliumsalt som et dunaktig, hvitt fast stoff.

EKSEMPEL 2

Rensing ved C- 18 reversfasekromatografi

C-18 reversfase-silisiumdioksidgel ble preparert i en målestokk av 1 kg ifølge Evans,

Chromatographia, vol. 13, sider 5-10 (1980). Rensing av fosfodiestersyren til et nivå av 90% ble oppnådd ved et 90:1 ladningsforhold ved bruk av 1:1 THF/vann, fulgt av THF-fjerning i en strøm av nitrogen og vannfjerning ved lyofilisering. Undersøkelse av andre oppløsningsmiddelsystemer ved reversfase-tynnsjiktskromatografi hadde godt potensiale med hensyn til å (i) forbedre renhetsnivået, (ii) identifisere et effektivt separeringsmedium som kunne fjernes ved rotasjonsfordampning og (iii) tillate bruk av et lavere ladningsforhold. Siden C-18 reversfase-silisiumdioksidgel kan brukes om igjen, har fremgangsmåten godt potensiale for rensing av opptil 1000 g.

Oppløsningsmiddelsystemer som er egnet innbefatter THF/metanol, THF/etanol, THF/isopropanol, dioksan/metanol, dioksan/etanol, dioksan/isopropanol, eter/metanol, eter/etanol, eter/isopropanol, etylacetat/metanol, etylacetat/etanol, etylacetat/isopropanol, metylenklorid/etanol, metylenklorid/metanol, metylenklorid/isopropanol, DME/metanol, DME/etanol og DME/isopropanol.

Konjugering med kolesterol omdanner den polare askorbinsyren til en ikke-polar, lipofil askorbylgruppe som lett absorberes gjennom stratum corneum. Når den først er forbi nevnte stratum corneum er den absorberte forbindelsen i stand til å påvirke underliggende fibroblaster. Nyttevirkningene av bioreversert askorbinsyre og kolesterol har tidligere blitt forklart. Selve den konjugerte forbindelsen gir imidlertid overraskende stimulering av kollagensyntese hvilket fremmer hudens integritet, elastisitet og spenstighet. Ytterligere detaljer er angitt i Eksempel 3.

EKSEMPEL 3

Fibroblaststudier

Dette eksemplet oppsummerer et studium ved hvilket 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterols evne til å stimulere kollagenproduksjon i dyrkede humanhudfibroblaster ble demonstrert. Det ble utført en innen teknikken anerkjent [^Hj-prolin-inkorporeringsanalyse med forskjellige doser av 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol. Juva, Anal. Biochem., vol. 15, sider 77-83 (1966); Booth, Biochim. Biophys. Acta, vol. 675, sider 117-122(1981).

Fibroblaster ble inkubert med 0 ug/ml, 11,3 ug/ml, 22,5 ug/ml og 45 ug/ml av 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol i et totale av 48 timer. Etter de første 24 timene ble [^H]-merket prolin tilsatt til kulturen. Etter den andre 24 timers perioden ble cellene innhøstet og preparert for kollagen-biosynteseanalysen.

Proteaseinhibitorer ble tilsatt å hindre nedbrytning av kollagen og andre proteiner. Cellelaget ble skrapet ned i en oppløsning inneholdende 0,4 M NaCl og 0,01 M Tris (pH 7,5). Ekstrakter ble sonikert for å bryte cellemembraner. Separate volumer av den celleholdige oppløsningen (1 ml hver) ble dialysen natten over mot flere skifter av deionisert vann. Retentatet ble fjernet fra dialyse og hydrolysen i 6 N saltsyre ved 120°C natten over. Analysen ble utført ved bruk av en oksidasjonsprosess med 2 M kloramin-T. Prøver ble analysert for radioaktive tellinger, hvilket representerer mengden av nysyntetisert [^Hj-hydroksyprolin -- en indeks for ny kollagensyntese.

Det ble oppdaget at 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol øket produksjonen av nytt kollagen av humanhudfibroblaster på en doseavhengig måte som illustrert i følgende skjema.

Claims (9)

1. Topisk formulering, karakterisert ved at den innbefatter en egnet topisk bærer og en forbindelse valgt fra gruppen bestående av 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol, 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol og salter derav.

2. Topisk formulering ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte salt er valgt fra gruppen bestående av salter av ammonium, kalsium, litium, kalium, natrium og et organisk amin.

3. Topisk formulering ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte bærer er valgt fra gruppen bestående av en lotion, krem og gel.4.

4. Topisk formulering, karakterisert ved at den innbefatter: (a) fra ca. 0,1 til ca. 20,0 % av en forbindelse valgt fra gruppen bestående av 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol og 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol; (b) fra ca. 0,5 til ca. 6,0 % glycerin; (c) fra ca. 2,0 til ca. 8,0 % propylenglykoldikaprylat/dikaprat; (d) fra ca. 1,8 til ca. 4,0 % Peg 40 Stearat; (e) fra ca. 1,0 til ca. 2,5 % Steareth-2; (f) fra ca. 0,25 til ca. 0,7 % xantangummi; (g) fra ca. 0,25 til ca. 0,7 % hydroksyetylcellulose; (h) fra ca. 0,15 til ca. 0,2 % dinatrium EDTA; og (i) fra ca. 0,20 til ca. 0,25 % metylparaben.

5. Topisk formulering ifølge krav 4, karakterisert ved formuleringens pH-verdi er justert til fysiologisk akseptable nivåer med tilstrekkelige mengder av en forbindelse valgt fra gruppen bestående av ammoniumhydroksid, kalsiumhydroksid, litiumhydroksid, kaliumhydroksid, natriumhydroksid, etanolamin, dietanolamin og urea.

6. Topisk formulering, karakterisert ved at den innbefatter: (a) fra ca. 0,1 til ca. 20,0 % av en forbindelse valgt fra gruppen bestående av 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol og 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol; (b) fra ca. 0,5 til ca. 4,0 % glycerin; (c) fra ca. 2,0 til ca. 6,0 % propylenglykoldikaprylat/dikaprat; (d) fra ca. 1,8 til ca. 3,0 % Steareth-20; (e) fra ca. 0,8 til ca. 2,0 % Steareth-2; (f) fra ca. 0,25 til ca. 0,6 % xantangummi; (g) fra ca. 0,25 til ca. 0,6 % hydroksyetylcellulose; (h) fra ca. 1,0 til ca. 2,5 % cetylalkohol; (i) fra ca. 0,9 til ca. 3,5 % glycerolmonostearat; og

0) fra ca. 0,15 til ca. 0,2 % dinatrium EDTA.

7. Topisk formulering ifølge krav 6, karakterisert ved at formuleringens pH-verdi er justert til fysiologisk akseptable nivåer med tilstrekkelige mengder av en forbindelse valgt fra gruppen bestående av ammoniumhydroksid, kalsiumhydroksid, litiumhydroksid, kaliumhydroksid, natriumhydroksid, etanolamin, dietanolamin og urea.

8. Topisk formulering, karakterisert ved at den innbefatter: (a) fra ca. 0,1 til ca. 20,0 % av en forbindelse valgt fra gruppen bestående av 3'-(L-askorbyl-2-fosforyl)-kolesterol og 3'-(L-askorbyl-3-fosforyl)-kolesterol; (b) fra ca. 0,15 til ca. 0,2 % dinatrium EDTA; (c) fra ca. 2,0 til ca. 6,0 % propylenglykol; (d) fra ca. 0,4 til ca. 1,5 % hydroksyetylcellulose; og (e) fra ca. 0,20 til ca. 0,25 % metylparaben.

9. Topisk formulering ifølge krav 8, karakterisert ved at formuleringens pH-verdi er justert til fysiologisk akseptable nivåer med tilstrekkelige mengder av en forbindelse valgt fra gruppen bestående av ammoniumhydroksid, kalsiumhydroksid, litiumhydroksid, kaliumhydroksid, natriumhydroksid og etanolamin.