[go: up one dir, main page]

NL8302324A - New escherichia coli strain contg. hybrid plasmid - coding for insulin-like growth factor in form of new precursor - Google Patents

New escherichia coli strain contg. hybrid plasmid - coding for insulin-like growth factor in form of new precursor Download PDF

Info

Publication number
NL8302324A
NL8302324A NL8302324A NL8302324A NL8302324A NL 8302324 A NL8302324 A NL 8302324A NL 8302324 A NL8302324 A NL 8302324A NL 8302324 A NL8302324 A NL 8302324A NL 8302324 A NL8302324 A NL 8302324A
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
igf
new
plasmid
pigf
coli
Prior art date
Application number
NL8302324A
Other languages
Dutch (nl)
Original Assignee
Rijksuniversiteit Utrecht De
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rijksuniversiteit Utrecht De filed Critical Rijksuniversiteit Utrecht De
Priority to NL8302324A priority Critical patent/NL8302324A/en
Publication of NL8302324A publication Critical patent/NL8302324A/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575Hormones
    • C07K14/65Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

The following are new. (A) E. coli strain pIGF-I (CBS 45383); (B) plasmid pIGF-I, coding for IGF-I (i.e. an insulin-like growth factor) and its precursors and (C) pre-IGF-I, a precursor of IGF-I produced by E.coli pIGF-I and including the amino acid sequence of IGF-I. The E.coli strain is pref. obtd. by transforming E.coli K12Mc1061 with a plasmid produced by converting mRNA from adult human liver cells into cDNA by treatment with reverse transcriptase and inserting the cDNA into plasmid pKT218 by dG-dC tailing.

Description

£ - _ . Λ % $£ - _. Λ% $

Als uitvinders zijn genoemd Drs. M. Jansen,Drs. M. Jansen,

Prof. Dr. J.L. van den Brande, Prof. Dr. Ir.Prof. Dr. J.L. van den Brande, Prof. dr. Dr. Ir.

J.S. Sussenbach.J.S. Sussenbach.

Escherichia coli stam, een voor deze stam karakteristiek plasmide, een werkwijze ter bereiding van dit plasmide, een precursor van een somatomedine, alsmede een groeibevor-5 derend preparaat.Escherichia coli strain, a plasmid characteristic of this strain, a method of preparing this plasmid, a precursor of a somatomedin, as well as a growth promoting preparation.

De uitvinding betreft een Escherichia coli stam, waaraan de naam E. coli pIGF-I werd gegeven, met een 10 plasmide, welke het mogelijk maakt via de recombinant-DNA- technieken de groeifaktor IGF-I op grote schaal te produceren.The invention relates to an Escherichia coli strain, which was given the name E. coli pIGF-I, with a plasmid which makes it possible to produce the growth factor IGF-I on a large scale via the recombinant DNA techniques.

Somatomedines of insulineachtige groeifak-toren (IGF) vormen een heterogene groep peptiden met sterke groei bevorderende effekten, zowel in vitro (zie Clemmons, D.Somatomedins or insulin-like growth factors (IGF) form a heterogeneous group of peptides with strong growth promoting effects both in vitro (see Clemmons, D.

15 R. & Van Wijk, J.J., J. Cell Phys. 106, 361-367 (1981)), als in vivo (zie Schoenle, E c.s., Nature 296, 252-253 (1982)).R. & Van Wijk, J.J., J. Cell Phys. 106, 361-367 (1981)), as in vivo (see Schoenle, E et al., Nature 296, 252-253 (1982)).

Van een van deze faktoren, namelijk het IGF-I is de aminozuurvolgorde volledig bekend (zie Rinderknecht, E & Humbel, R.E., FEBS Lett. 89, 283-286 (1978).The amino acid sequence of one of these factors, namely the IGF-I, is fully known (see Rinderknecht, E & Humbel, R.E., FEBS Lett. 89, 283-286 (1978).

20 In figuur 1 is de aminozuurvolgorde van het IGF-I molekuul terug te vinden in het onderstreepte gedeelte.Figure 1 shows the amino acid sequence of the IGF-I molecule in the underlined section.

Daaruit blijkt dat IGF-I is opgebouwd uit 70 aminozuren in de aangegeven volgorde te beginnen met Glycine (Gly) en eindigende met alanine (Ala). Aangezien het aantal aminozuurbouwstenen 25 zo groot is, is het nagenoeg uitgesloten, IGF-I organisch- synthetisch op een economisch verantwoorde wijze te bereiden.This shows that IGF-I is made up of 70 amino acids in the order given, starting with Glycine (Gly) and ending with alanine (Ala). Since the number of amino acid building blocks is so great, it is practically impossible to prepare IGF-I organosynthetically in an economically responsible manner.

De uitvinding opent nu de mogelijkheid IGF-I op grote schaal te produceren via recombinant-DNA-technieken.The invention now opens the possibility of producing IGF-I on a large scale via recombinant DNA techniques.

______' ^ 8302324 - 2 -______ '^ 8302324 - 2 -

Gevonden werd namelijk een.E. coli stam (E. coli pIGF-I), die een plasmide pIGF-I bezit, waarvan een deel van de nucleotidesequentie is weergegeven in figuur 1.A E. was found. coli strain (E. coli pIGF-I), which has a plasmid pIGF-I, part of the nucleotide sequence of which is shown in Figure 1.

Het onderstreepte gedeelte van deze nucleotidevolgorde corres-5 pondeert met de volledige aminozuurvolgorde van IGF-I. De nucleotidevolgorde weergegeven in figuur 1 toont verder, dat IGF-I in de humane cel als precursor wordt gemaakt (verderop aangeduid als pre IGF-I).The underlined portion of this nucleotide sequence corresponds to the full amino acid sequence of IGF-I. The nucleotide sequence shown in Figure 1 further shows that IGF-I is made as a precursor in the human cell (hereinafter referred to as pre IGF-I).

De vondst van de stam van E. coli pIGF-I 10 betekent een belangrijke stap voorwaarts naar een economisch verantwoorde bereiding van de groei bevorderende faktor IGF-I. Daaraan bestaat behoefte zowel voor geneeskundige doeleinden als ter vervanging van het dure kalverserum, dat thans wordt gebruikt voor weefselkweekdoeleinden.The discovery of the strain of E. coli pIGF-I 10 represents an important step forward towards an economically responsible preparation of the growth promoting factor IGF-I. There is a need for both medical purposes and to replace the expensive calf serum currently used for tissue culture purposes.

15 De bovengenoemde E. coli pIGF-I, gedeponeerd onder nr. CBS 45383 bij het Centraal Bureau voor Schimmelcultures te Baarn (Nederland) werd als volgt verkregen.The above-mentioned E. coli pIGF-I, deposited under no. CBS 45383 at the Central Bureau of Mold Cultures in Baarn (Netherlands), was obtained as follows.

Uitgegaan werd van een zogenaamde complementaire DNA-bibliotheek (kort aangeduid als cDNA; zie Woods, 20 D.E. et al. Proc. natn. Acac. Sci. USA 79, 5661-5665 (1982)), die als volgt tot stand kwam:A so-called complementary DNA library (briefly referred to as cDNA; see Woods, 20 D.E. et al. Proc. Natn. Acac. Sci. USA 79, 5661-5665 (1982)) was started as follows:

Een mengsel van zgn. "messenger" RNA’s uit de levercellen van een volwassen mens werd met behulp van het enzym reversed transcriptase omgezet in een mengsel van cDNA's. Met behulp van 25 "dG-dC tailing" werden deze cDNA's in het plasmide p KT 218 gezet. Hierna werd de bacterie E. coli K12Mc1061 met de cDNA bevattende plasmiden getransformeerd. Daardoor ontstond een verzameling van ca. 230.000 verschillende transformanten van de uitgangs E. coli, welke genetische informatie bevatten, 30 corresponderend met de verschillende "messenger" RNA's afkomstig uit menselijke levercellen.A mixture of so-called "messenger" RNAs from the liver cells of an adult human was converted into a mixture of cDNAs using the enzyme reversed transcriptase. These cDNAs were put into the plasmid p KT 218 using "dG-dC tailing". After this, the bacterium E. coli K12Mc1061 was transformed with the cDNA containing plasmids. This resulted in a collection of approximately 230,000 different transformants of the starting E. coli containing genetic information corresponding to the different "messenger" RNAs from human liver cells.

Ca. 60.000. van deze transformanten werden gescreend met synthetische oligonucleotiden. Daartoe werden uit de aminozurenvolgorde van IGF-I de reeks aminozuren op 35 de plaatsen 58 tot en met 62 (Glu-Met-Tyr-Cys-Ala) uitgekozen 8302324 ‘ < _ -s - 3 - « voor de synthese van. de overeenkomstige nucleotidevolgorde.Approx. 60,000. of these transformants were screened with synthetic oligonucleotides. To this end, from the amino acid sequence of IGF-I, the amino acid sequence at positions 58 to 62 (Glu-Met-Tyr-Cys-Ala) was selected 8302324 "<_ -s - 3 -" for the synthesis of. the corresponding nucleotide sequence.

Een mengsel van alle 8 mogelijke tetradecamere oligonucleo- tiden (5 T-G-A- ^ -A-T-G-T-A- § -T-G- § -G-C-3’) werd langs chemische weg gesynthetiseerd onder gebruikmaking van de 5 "solid phase" fosfaattriestermethode (zie Beaucage, S.L., &A mixture of all 8 possible tetradecamere oligonucleotides (5 TGA- ^ -ATGTA-§-TG-§-GC-3 ') was synthesized chemically using the 5 solid phase phosphate triester method (see Beaucage, SL, &

Caruthers, M.H., Tetrahedron Letters 22, 1859-1862 (1981)).Caruthers, M.H., Tetrahedron Letters 22, 1859-1862 (1981)).

De oligonucleotiden van het verkregen mengsel werden op de S’-plaats van een radioaktieve label voorzien met behulp van 32 polynucleotidekinase en P-adenosinetrifosfaat, waarna 10 ze werden gebruikt voor het screenen van de cDNA-bibliotheek volgens de koloniehybridisatiemethode van Grunstein en Hogness (Proc. natn. Acad. Sci. USA 72, 3961-3965 (1975). Twintig kolonies vertoonden hybridisatie met de gelabelde oligonucleotiden. Deze werden opnieuw met hetzelfde oligonuclectide-15 mengsel gescreend, waardoor 5 kolonies met ondubbelzinnige hybridisatie uiteindelijk geïsoleerd konden worden. Bij een analyse van de nucleotidevolgorde van het cDNA van een dezer kolonies volgens Maxam en Gilbert (Proc. natn. Acad. Sci. USA 74, 560-564 (1977)) bleek deze een stuk cDNA te bevatten van 20 777 nucleotiden waarvan de volledige volgorde is weergegeven in figuur 1.The oligonucleotides of the resulting mixture were radiolabeled at the S 'site using 32 polynucleotide kinase and β-adenosine triphosphate and used to screen the cDNA library by the colony hybridization method of Grunstein and Hogness (Proc Natn Acad Sci USA 72, 3961-3965 (1975) Twenty colonies showed hybridization with the labeled oligonucleotides, which were screened again with the same oligonuclectide mixture, ultimately allowing 5 colonies with unambiguous hybridization to be isolated. analysis of the nucleotide sequence of the cDNA from one of these colonies according to Maxam and Gilbert (Proc. natn. Acad. Sci. USA 74, 560-564 (1977)) it was found to contain a piece of cDNA of 20 777 nucleotides of which the complete sequence is shown in figure 1.

Deze nucleotidevolgorde geeft aan, dat IGF-I als precursor wordt gemaakt. ïïit deze precursor kan desgewenst IGF-I op een op zichzelf bekende wijze worden af-25 gesplitst. Voor de groeibevordering kunnen zowel de precursor als vrij IGF-I worden benut.This nucleotide sequence indicates that IGF-I is made as a precursor. If desired, IGF-I can be cleaved from this precursor in a manner known per se. Both precursor and free IGF-I can be used for growth promotion.

Door de vondst van de stam E. coli pIGF-I kan men door vermenigvuldiging van deze stam door deze te laten groeien op een daartoe geschikt medium de voor verder 30 onderzoek gewenste hoeveelheden cDNA coderend voor IGF-I en zijn precursor bereiden.By finding the strain E. coli pIGF-I, by multiplying this strain by growing it on an appropriate medium, it is possible to prepare the amounts of cDNA encoding IGF-I and its precursor desired for further investigation.

Een geschikt medium voor deze kweek is Lr Broth medium, bestaande uit per 1: 10 g bacto-trypton, 5 g bacto gistextrakt, 10 g NaCl, pH 7,5. De bakterien kunnen bij 33 -20°C worden bewaard in L-Browth/glycerol 1:1.A suitable medium for this culture is Lr Broth medium, consisting of 1: 10 g bacto-tryptone, 5 g bacto yeast extract, 10 g NaCl, pH 7.5. The bacteria can be stored at 33 -20 ° C in L-Browth / glycerol 1: 1.

8302324 . - 4 - 08302324. - 4 - 0

Uit de bacteriën kan men het plasmide op een gebruikelijke wijze isoleren (zie bijvoorbeeld het boek: Molecular Cloning, Ed.: T. Maniatis et al, 1982: Cold Spring Harbor Laboraty).The plasmid can be isolated from the bacteria in a conventional manner (see, for example, the book: Molecular Cloning, Ed .: T. Maniatis et al, 1982: Cold Spring Harbor Laboraty).

5 83023245 8302324

Claims (5)

1. E. coli pIGF-I, gedeponeerd onder nr. CBS 45383.1. E. coli pIGF-I deposited under No. CBS 45383. 2. Plasmide pIGF-I coderend voor IGF-I en zijn precursor.2. Plasmid pIGF-I encoding IGF-I and its precursor. 3. Werkwijze ter bereiding van het plasmide volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat men E. coli pIGF-I kweekt in een geschikte voedingsbodem, waarna men het plasmide uit de bacteriën isoleert.Process for preparing the plasmid according to claim 2, characterized in that E. coli pIGF-I is grown in a suitable culture medium, after which the plasmid is isolated from the bacteria. 4. Pre IGF-I zoals gedefinieerd in de be- 10 schrijving.4. Pre IGF-I as defined in the description. 5. Groeibevorderend preparaat, gekenmerkt door de aanwezigheid van pre IGF-I als aktieve stof. 15 _ - —- 8302324Growth promoting preparation, characterized by the presence of pre IGF-I as an active substance. 8302324
NL8302324A 1983-06-30 1983-06-30 New escherichia coli strain contg. hybrid plasmid - coding for insulin-like growth factor in form of new precursor NL8302324A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8302324A NL8302324A (en) 1983-06-30 1983-06-30 New escherichia coli strain contg. hybrid plasmid - coding for insulin-like growth factor in form of new precursor

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8302324 1983-06-30
NL8302324A NL8302324A (en) 1983-06-30 1983-06-30 New escherichia coli strain contg. hybrid plasmid - coding for insulin-like growth factor in form of new precursor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NL8302324A true NL8302324A (en) 1985-01-16

Family

ID=19842092

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL8302324A NL8302324A (en) 1983-06-30 1983-06-30 New escherichia coli strain contg. hybrid plasmid - coding for insulin-like growth factor in form of new precursor

Country Status (1)

Country Link
NL (1) NL8302324A (en)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0189481A4 (en) * 1984-07-13 1987-01-10 Chiron Corp Insulin-like Growth factor II.
EP0406913A1 (en) * 1983-08-10 1991-01-09 Amgen Inc. Microbial expression of insulin-like growth factor
US5070075A (en) * 1986-01-07 1991-12-03 Washington University Human preproinsulin-like growth factor I
US6331609B1 (en) 1983-06-06 2001-12-18 Genentech, Inc. Preparation of human IGF via recombinant DNA technology

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6331609B1 (en) 1983-06-06 2001-12-18 Genentech, Inc. Preparation of human IGF via recombinant DNA technology
US6331414B1 (en) 1983-06-06 2001-12-18 Genentech, Inc. Preparation of human IGF via recombinant DNA technology
USRE39355E1 (en) * 1983-06-06 2006-10-17 Genetech, Inc. Preparation of human IGF via recombinant DNA technology
EP0406913A1 (en) * 1983-08-10 1991-01-09 Amgen Inc. Microbial expression of insulin-like growth factor
EP0189481A4 (en) * 1984-07-13 1987-01-10 Chiron Corp Insulin-like Growth factor II.
US5070075A (en) * 1986-01-07 1991-12-03 Washington University Human preproinsulin-like growth factor I

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5324641A (en) DNA sequences encoding insulin precursors and methods of production
US4876242A (en) Human insulin-like growth factor analoges with reduced binding to serum carrier proteins and their production in yeast
Sussenbach The gene structure of the insulin-like growth factor family
KR101608131B1 (en) Cosmetic composition for skin care comprising fusion protein with hGH
Brazel et al. Completion of the amino acid sequence of the α1 chain of human basement membrane collagen (type IV) reveals 21 non‐triplet interruptions located within the collagenous domain
FI102182B (en) Process for the preparation of human insulin analogues
HU205172B (en) Process for producing new insulin derivatives and pharmaceutical compositions comprising same
JP2002507410A5 (en)
GB2241703A (en) Preparation of IGF-1 and plasmids for use therein
JP2003520580A (en) Enzymes and genes for producing vanillin
NL8302324A (en) New escherichia coli strain contg. hybrid plasmid - coding for insulin-like growth factor in form of new precursor
AU757275B2 (en) Novel insulin analogs with enhanced zinc binding
JPH0788398B2 (en) Novel bioactive polypeptide and method for producing the same
Hartl et al. The N terminus of laminin A chain is homologous to the B chains
JPH0816120B2 (en) Hybrid polypeptide containing growth hormone releasing factor
CA2226570A1 (en) Enamel matrix related polypeptide
US5045471A (en) Cloned DNA for P450scc and expression thereof
JP3014159B2 (en) DNA sequence encoding human epidermal transglutaminase
US5316919A (en) Method of producing 2 KD to 10 KD peptides having no L-methionine residue
JP4221075B2 (en) Cytochrome c and its gene
JPS6181790A (en) Cloned cardionatorin cdna
JPH04305598A (en) Growth hormon-releasing factor homologue
DE69123242T2 (en) Physiologically active peptides, their use and a method for producing said peptides
JPH0223884A (en) Flatfish growth hormone, structural gene thereof, recombinant plasmid for production of said hormone, flatfish pregrowth hormone, structural gene thereof, recombinant plasmid containing said gene and production of flatfish growth hormone and pregrowth hormone
DE3220333A1 (en) 27-Deamidosecretin and process for preparing it by recombinant DNA technology