MXPA06012388A - Espinosins para cicatrizacion de heridas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a un espinosin o derivado o sal del mismo fisiologicamente aceptable, para promover o acelerar la cicatrizacion de heridas en seres humanos.

Description

etapas: inflamación, formación de tejido (proliferación) y regeneración de tejido (remodelación). La cicatrización comienza muy rápidamente después de que ocurre la lesión; por ejemplo, la re-epitelialización de heridas cutáneas comienza dentro de horas (Singer and Clark, New Eng. J. Med. 341(10): 738-746 (1999)). El proceso de cicatrización de heridas es iniciado por los nervios sensores aferentes mielinados, los cuales en cambio, median las respuestas inmunológicas, inflamación neurogénica (Eglezos et al., Adv. Exp. Biol. Med. 273: 499-503(1989); Immunol. Cell Biol. 69: 285-294 (1991)) y tono vascular (Khalil & Helme, Brain Res. 500: 256-262 (1989); Brain Res. 527: 292-298 (1990)), los cuales son todos componentes esenciales de la cicatrización. Después de la iniciación de la cicatrización por nervios sensores, el proceso de cicatrización es regulado por los factores de crecimiento y citocinas que afectan la migración celular, proliferación y producción de proteína. En la hemostasis, las proteínas tales como fibrina y fibronectina, interactúan para coagular la sangre, y las citocinas y factores de crecimiento son sobre regulados. Después de la lesión, comienza la inflamación. Las respuestas inflamatorias ocurren en tres fases temporales aguadas, cada una aparentemente mediada por diferentes mecanismos: (1) una fase temporal aguda, caracterizada por vasodilatación local y permeabilidad capilar incrementada; (2) una fase subaguda, retardada, más prominentemente caracterizada por infiltración de leucocitos y células de fagocitos; y (3) una fase proliferativa crónica, en la cual, ocurre la degeneración del tejido y fibrosis. Muchos mecanismos diferentes están involucrados en el proceso de inflamación. La capacidad para montar una respuesta inflamatoria es esencial para la supervivencia en la cara de los patógenos ambientales y lesión, aunque en algunas situaciones y enfermedades, la respuesta inflamatoria puede ser exagerada y sostenida por razones benéficas no aparentes. Durante la inflamación, los neutrófilos (leucocitos polimorfonucleares, PMNs), monocitos y macrófagos infiltran la herida. Estas células fagocíticas liberan factores de crecimiento para la fase proliferativa, mediadores enzimáticos (proteasas) que degradan las proteínas, y bacterias fagocitosas, mueren y eliminan células de este modo, desbridando la herida. En la siguiente fase, comienza la proliferación. El colágeno se deposita, formando tejido cicatrizante. Los fibroblastos producen proteoglicanos, los cuales se enlazan a las fibras de colágeno en conjunto. Con el tiempo, el colágeno es degradado por proteasas y remodelados en una estructura cicatrizante más fuerte. Los espinosins (también conocidos como factores A83453), son pesticidas para animales de compañía y ganado, agrícolas, que han mostrado actividad contra 1) insectos en el orden Lepidóptera, 2) miembros del orden Homóptera, 3) miembros del orden de insectos Dípteros, 4) miembros del orden Coleóptera, y 5) elementos del orden Anoplura. Las formulaciones adecuadas para administración a animales de compañía y ganado, agrícola, incluyen varias suspensiones, soluciones, tabletas, cápsulas, líquidos y convites.

El espinosad (un producto comprendido principalmente de espinosin A, 8% y espinosin D, 15%), está actualmente aprobado en Australia y Nueva Zelanda para el tratamiento de piojos en ovejas y el tratamiento y prevención de picadura de mosca azul en ovejas. En Brasil, el espinosad es aprobado para el tratamiento tópico y control de ciertas garrapatas, moscas y piojos y como un antiséptico y repelente cicatrizante para el tratamiento de miasis de estro y cicatrización de la piel en vacas, ovejas, cabras, caballos, cerdos, aves y perros. Los espinosins son conocidos por ser útiles para controlar las infestaciones de piojos en un ser humano. Patente Estadounidense 6,063,771 y EP 1 252 820. Las formulaciones adecuadas para tales usos contra los piojos en seres humanos, también se describe en estas patentes. Debido a que se sabe con respecto a la actividad ectoparasiticídica de los espinosins y las aprobaciones comerciales, se ha descubierto ahora que un espinosin o un derivado fisiológicamente aceptable o sal del mismo, tiene actividad de cicatrización de heridas, independientemente de una formulación que contiene un agente antiséptico/desinfectante.

BREVE DESCCRIPCION DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a métodos para tratar heridas en seres humanos para promover o acelerar la cicatrización de heridas, que incluye, escasa cicatrización o heridas crónicas, enfermedades de la piel y enfermedades alérgicas, particularmente aquellos trastornos asociados con la piel, y condiciones y síntomas relacionados a estos, administrando un espinosin o un derivado fisiológicamente aceptable o sal del mismo, a un ser humano en necesidad del mismo. Preferiblemente, estos métodos son practicados administrando espinosad o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona métodos para promover o acelerar la cicatrización de heridas en un ser humano, que comprende administrar un espinosin o un derivado fisiológicamente aceptable o sal del mismo, a un ser humano en necesidad del mismo. En otro aspecto, esta invención proporciona el uso de un espinosin, o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable, o una formulación que contiene ya sea un espinosin o derivado o sal del mismo, para la manufactura de un medicamento para promover o acelerar la cicatrización de heridas en un ser humano. Los espinosins son productos de fermentación naturalmente derivados. Son macrólidos producidos por cultivación de Saccharopolyspora spinosa. La fermentación produce varios factores, que incluyen espinosin A y espinosin D (también llamado A83543A y A83543D). El espinosin A y espinosin D, son los dos espinosins que son más activos como insecticidas. Un producto agrícola que comprende principalmente estos dos espinosins (aproximadamente 85% de A y 15% de D), está comercialmente disponible de Dow AgroSciences bajo el nombre de espinosad. Un producto de ectoparásito que comprende espinosad es comercialmente disponible de Eli Lilly and Company. El nombre "espinosad" llega de una contracción de espinosins "A" y "D". Cada espinosin tiene un anillo macrocíclico de 12 miembros, que es parte de un sistema de anillo tetracíclico, al cual están unidos dos azúcares diferentes, el amino-azúcar forosamina y el azúcar neutral 2N,3N,4N-tri-0-metilrhamnosa. Esta estructura única establece los espinosins aparte de otros compuestos macrocíclicos. El espinosin A (A83543A), fue el primer espinosin aislado e identificado del caldo de fermentación de Saccharopolyspora spinosa. La examinación subsecuente del caldo de fermentación, reveló que la cepa original de S. spinosa, produce un número de espinosins que han sido etiquetados A hasta J (A83543A hasta J). Comparado con espinosin A, los espinosins B-J son caracterizados por diferencias en los patrones de sustitución en el grupo amino de la forosamina, en sitios seleccionados del sistema de anillo tetracíclico y en 2N,3N,4N-tri-0-metilrhamnosa. Las cepas de S. spinosa actualmente en uso, producen una mezcla de espinosins de los cuales, los componentes primarios son espinosin A (~ 85%) y espinosin D (~ 15%). Los espinosins adicionales, indicados con letras de K hasta W, han sido identificados de cepas mutantes de S. spinosa. El término "espinosin o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable" como se usa en este documento, se refiere a un factor espinosin individual (A, B, C, D, E, F, G, H, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, V, W o Y), un derivado N-demetilo de un factor espinosin individual, una combinación del mismo o una sal fisiológicamente aceptable. Por conveniencia, el término "espinosin" también se usará en este documento, por significar un espinosin individual, o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable, o una combinación del mismo. Más preferido para cicatrización de heridas en seres humanos es el espinosad, o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable. El documento EP 375 316, describe espinosins A-H y J (los cuales son llamados A83543 factores A, B, C, D, E, F, G, H y J), y sales de los mismos. Mynderse, et al., describe espinosins L-N (los cuales son llamados A83543 factores L, y N), sus derivados N-demetilo y sales de los mismos, en la Patente Estadounidense No. 5,202,242; y Turner et al., describe describe espinosins Q-T (los cuales son llamados A83543 factores Q, R, S y T), sus derivados N-demetilo y sales de los mismos, en la Patente Estadounidense No. 5,591,606; y Patente Estadounidense No. 5,631,155. Estas patentes están incorporadas en este documento por referencia. Los espinosins K, O, P, U, V, W y Y, son descritos por ejemplo, por Cari V. DeAmicis, James E. Dripps, Chris J. Hatton and Laura I. Karr en American Chemical Society's Symposium Series: Phytochemicals for Pest Control, Chapter 11, "Physical and Biological Properties of Spinosyns: Novel Macrolide Pest-Control Agents from Fermentation," páginas 146-154 (1997). En la Patente Estadounidense No. 6,001,981, se describen varios derivados sintéticos, los cuales están ambos incorporados por referencia en este documento. Los detalles con respecto a la fermentación y aislamiento de los espinosins y procedimientos para preparar derivados sintéticos, se proporcionan en estas referencias. Cada una de la Patente Estadounidense y solicitud de Patente Estadounidense, describe varios tipos de formulación, actividad parasiticídica y opciones de administración en animales y en la agricultura, para los espinosins y derivados o sales de los mismos fisiológicamente aceptables. En las Patentes Estadounidenses Nos. 6,063,771, y 6,342,482, y en EP 1 252 820, se describen formulaciones y uso de espinosins o un derivado fisiológicamente aceptable o sal del mismo para controlar piojos en seres humanos, y procesos para preparar estas formulaciones. Como se declaró anteriormente, las formulaciones de espinosad, son comercialmente disponibles de Dow AgroSciences, 9330 Zionsville Road, Indianapolis, Indiana, 46268-1054, EUA, y Elanco Animal Health, a División of Eli Lilly and Company, P.O. Box 708, 2001 W. Main Street, Greenfield, Indiana, 46140, EUA. Además, la S. spinosa y cepas mutantes, han sido depositadas en el Agricultural Research Service Patent Culture Collection (NRRL) National Center for Agricultural Utilization Research, ARS, USDA, 1815 North University Street, Peoría, Illinois, 61604, EUA. (NRRL 18395, 18537, 18538, 18539, 18719, 18720, 18743, 18823 y 30141 (Patente Estadounidense 6,455,504). Los espinosins pueden reaccionar para formar sales. Las sales que son fisiológicamente aceptables son también empleadas en los métodos de esta invención. Las sales son preparadas usando procedimientos estándares para la preparación de sal. Por ejemplo, el espinosin A puede ser neutralizado con un ácido apropiado para formar una sal de adición de ácido. Las sales de adición de ácido de espinosins, son particularmente empleadas. Las sales de adición de ácido adecuadas representativas, incluyen sales formadas por reacción con ya sea un ácido orgánico o inorgánico, tal como por ejemplo, ácido sulfúrico, clorhídrico, fosfórico, acético, succínico, cítrico, láctico, maleico, fumárico, cólico, pamoico, múcico, glutámico, canfórmico, glutárico, glicólico, itálico, tartárico, fórmico, láuríco, esteárico, salicílico, metansulfónico, bencensulfónico, sórbico, pícrico, benzoico, cinámico y similares. Todas las relaciones, porcentajes y partes discutidas en este documento, están "en peso" a menos que se especifique de otro modo. "Herida", significa una lesión a un ser humano en el cual el tejido es cortado, rasgado, roto, quemado o de otro modo, traumatizado, o resulta de un trastorno o enfermedad lo cual resulta en tal lesión.

"Cicatrización", lo cual se proporciona por la presente invención, es una promoción o aceleración del tiempo cuando ocurren las heridas (se administra un espinosin) hasta el cierre de la herida (contracción de herida completa). El término "tejido", se refiere a una masa de células en el cuerpo ser humano, en el cual el grupo en conjunto, forma una función específica. El tejido incluye, pero no se limita a, hueso, piel, conectivo, y nervio tal como la médula espinal. Los términos "tratar", "tratamiento" y "terapia, como se usan en este documento, se refieren a terapia curativa. Aquellos en necesidad del tratamiento, incluyen aquellos seres humanos que tienen la herida, trastorno o enfermedad. La administración "en combinación con" uno o más agentes terapéuticos, incluye administración simultánea (concurrente) y consecutiva en cualquier orden a los seres humanos. Una "cantidad terapéuticamente efectiva", es la cantidad mínima del agente activo (por ejemplo, un espinosin y más preferiblemente espinosad), la cual es necesaria para impartir el beneficio terapéutico a un ser humano. Por ejemplo, una "cantidad terapéuticamente efectiva" a un ser humano que sufre de una herida, es tal cantidad la cual induce, promueve o acelera o de otro modo, ocasiona un mejoramiento en los síntomas patológicos, progreso de cicatrización, condiciones fisiológicas asociadas con o mejoran la resistencia a la cicatrización. "Portadores" como se usa en este documento, incluyen portadores, excipientes o estabilizadores, farmacéuticamente aceptables, los cuales no son tóxicos a los seres humanos a que son expuestos a estos a las dosificaciones y concentraciones empleadas. A menudo, el portador fisiológicamente aceptable es una solución amortiguada de pH, acuosa. Ejemplos de portadores fisiológicamente aceptables incluyen reguladores de pH tales como, fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o Usina; monosacáridos, disacáridos, y otros carbohidratos que incluyen glucosa, mañosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; alcoholes de azúcar tales como manitol o sorbitol; counteriones que forman sal tales como sodio; y/o tensoactivos no iónicos, tales como ásteres de ácido graso de polioxietilen sorbitan (TWEEN®), polietilenglicol (PEG) y copolímeros de bloque de polioxietileno/polioxipropileno (PLURONIC®). Los espinosins de la presente invención, y más particularmente espinosad, estimulan la activación neurogénica de la cicatrización, y subsecuente actividad inflamatoria involucrada en el crecimiento y proliferación celular. Por consiguiente, las composiciones de la presente invención pueden ser empleadas para estimular la proliferación celular epitelial y queratinocitos básales con propósitos de cicatrización de heridas, particularmente heridas dérmicas. Estas heridas pueden ser de naturaleza superficial o pueden ser profundas e involucrar daños de la dermis y la epidermis de la piel. Los espinosins son empleados para tratar un número de heridas y condiciones. Por ejemplo, los espinosins son activos in vivo, en varios modelos de cicatrización de heridas. El ser humano al cual se administra los espinosins, puede cicatrizar la herida a una velocidad normal o puede ser de mala cicatrización. Cuando se administra a un individuo quien no es de mala cicatrización, los espinosins son administrados para acelerar el proceso normal de cicatrización. Cuando se administra a un individuo quien es de mala cicatrización, los espinosins son administrados para facilitar la cicatrización de heridas, lo cual de otro modo, podría curar lentamente o no en todo. Un número de aflicciones y condiciones puede resultar en la mala cicatrización. Estas aflicciones y condiciones incluyen diabetes (por ejemplo, diabetes mellitus Tipo II), tratamiento con agentes farmacológicos tanto esteroideos como no esteroideos, y bloqueo o lesión isquémica. Se ha mostrado un número de factores de crecimiento, por promover la cicatrización de heridas en individuos de mala cicatrización. Estos factores de crecimiento incluyen el factor de liberación de la hormona de crecimiento, factor de crecimiento derivado de plaquetas y factores de crecimiento de fibroblasto básico. De este modo, la presente invención también contempla la administración de al menos un espinosin en conjunto con uno o más factores de crecimiento u otros agentes, los cuales promueven la cicatrización de heridas.

Los espinosins de la presente invención, promueven la cicatrización de heridas anastomóticas y otras, ocasionadas por procedimientos quirúrgicos en seres humanos que curan heridas a una velocidad normal o son de mala cicatrización. Los espinosins de la presente invención y particularmente espinosad, son clínicamente empleados en la estimulación de cicatrización de heridas de heridas que incluyen heridas quirúrgicas, heridas excisionales, heridas profundas que involucran daño de la dermis y epidermis, lesiones de tejido blando tales como rasgados musculares, heridas de tejido ocular, heridas de tejido dental, heridas de la cavidad oral, heridas y úlceras de la mucosa gastro-intestinal, úlceras diabéticas, úlceras dérmicas, úlceras de cubito, úlceras arteriales, úlceras de estasis venosa, y quemaduras que resultan del calor, exposición a temperaturas extremas de calor o frío, o exposición a químicos, en individuos normales y aquellos sometidos a condiciones las cuales inducen cicatrización anormal de heridas tales como uremia, desnutrición, deficiencias de vitamina, obesidad, infección, inmunosupresión y complicaciones asociadas con tratamiento sistémico con esteroides, terapia por radiación, y fármacos antineoplásicos y antimetabolitos. Las composiciones son también empleadas para promover la cicatrización de heridas asociadas con isquemia y lesión isquémica, por ejemplo, úlceras venosas de la pierna crónicas, causadas por un deterioro de regreso y/o insuficiencia del sistema circulatorio venoso; para promover el reestablecimiento dérmico subsecuente a la pérdida dérmica; incremento de la resistencia a la tensión de la epidermis y espesor epidérmico; e incremento de la adherencia de injertos de la piel a una base de la herida y para estimular la re-epitelialización de la base de la herida. Como se usa en este documento, por "individuo", se pretende un ser humano. Las formulaciones de espinosin pueden emplear diluyentes farmacéuticos adecuados que se conocen por ser útiles en las composiciones farmacéuticas. Tales diluyentes incluyen, pero no se limitan a, salino, salino amortiguado, dextrosa, agua, glicerol, etanol y combinaciones de los mismos. La formulación debe adecuarse al modo de administración. Preferiblemente, las composiciones farmacéuticas serán formuladas para tal administración. Los espinosin pueden ser administrados en composiciones farmacéuticas en combinación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Se entenderá que, cuando se administra a un paciente ser humano, el empleo diario total de las composiciones farmacéuticas de la presente invención, será decidido por el especialista que atiende, dentro del alcance del juicio médico sano. El nivel de dosis terapéuticamente efectivo específico para cualquier paciente particular, dependerá de una variedad de factores que incluyen, el tipo y grado de la respuesta a ser lograda; la composición específica, que incluye si otro agente, si lo hay, sea empleado; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración, ruta de administración y velocidad de excreción de la composición; la duración del tratamiento; fármacos (tales como un agente quimioterapéutico) usados en combinación o coincidentemente con la composición específica; y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas. Formulaciones adecuadas conocidas en la técnica se pueden encontrar en Remington's Pharmaceutical Sciences (última edición), Mach Publishing Company, Easton, PA. La "cantidad efectiva" de espinosins para propósitos en este documento (que incluyen una cantidad efectiva de espinosin), es de este modo, determinada por tales consideraciones. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención, pueden ser administradas en una manera conveniente tal como por la ruta oral, rectal, tópica, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intraarticular, subcutánea, intranasal, inhalación, intraocular o intradérmica. El suministro parenteral y tópico son de las rutas preferidas de administración. El término "parenteral", como se usa en este documento, se refiere a modos de administración, los cuales incluyen intravenoso, intramuscular, intraperitoneal, intrasternal, subcutáneo e inyección intraarticular e infusión. Las composiciones farmacéuticas son administradas en una cantidad la cual es efectiva para tratar la indicación específica. En muchos casos, la dosificación de espinosin es desde aproximadamente 0.5 µg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal diariamente, tomando en cuenta las rutas de administración, síntomas, etc. Sin embargo, la dosificación puede ser tan baja como 0.05 µg kg de peso corporal. Por ejemplo, en el caso específico de dosificaciones de administración tópica, son preferiblemente administradas desde aproximadamente 0.2 µg hasta 2 µg por cm2. En el caso de administración intranasal e infraocular, las dosificaciones son preferiblemente administradas desde aproximadamente 0.05 µg/kg hasta aproximadamente 50 µg/kg de peso corporal, y más preferiblemente, desde aproximadamente 0.5 µg kg hasta aproximadamente 5 µg/kg de peso corporal. Como una proposición general, la cantidad farmacéuticamente efectiva total del espinosin administrada parenteralmente, estará en el intervalo de aproximadamente 0.5 µg/kg/día hasta 5 mg/kg/día de peso corporal del paciente, aunque, como se notó anteriormente, este será sometido a discreción terapéutica. Si se da continuamente, el espinosin es típicamente administrado a una velocidad de dosis de aproximadamente 10 µg kg/hora hasta aproximadamente 100 µg kg/hora, ya sea por 1-4 inyecciones por día o por infusiones subcutáneas continuas, por ejemplo, usando una mini-bomba. También se puede emplear una solución intravenosa en bolsa o solución en botella. Un curso de tratamiento con espinosin parece ser óptimo si se continua prolongadamente por un cierto mínimo de días, 1 a 5 días para seres humanos. La longitud del tratamiento necesaria para observar cambios y el intervalo de seguimiento de tratamiento para respuestas para que ocurran, variará dependiendo del efecto deseado.

Para administración parenteral, en una modalidad, el espinosin es formulado de manera general por mezclado en el grado deseado de pureza, en una forma inyectable de dosificación unitaria (solución, suspensión, o emulsión), con un portador farmacéuticamente aceptable, es decir, uno que no es tóxico a los recipientes en las dosificaciones y concentraciones empleadas y es compatible con otros ingredientes de la formulación. De manera general, las formulaciones son preparadas poniendo en contacto el espinosin uniformemente e íntimamente con portadores líquidos o portadores sólidos finamente divididos o ambos. Entonces, si es necesario, el producto es formado en la formulación deseada. En el caso de un portador parenteral, preferiblemente se emplea una solución que es isotónica con la sangre del recipiente. Ejemplos de tales vehículos portadores incluyen agua, salina, solución Ringer y solución de dextrosa. Vehículos no acuosos tales como aceites fijos y oleato de etilo, también son empleados en este documento, así como también liposomas. Las formulaciones adecuadas, conocidas en la técnica, se pueden encontrar en Remington's Pharmaceutical Sciences (última edición), Mach Publishing Company, Easton, PA. Para administración tópica, formulaciones tales como ungüentos, cremas y geles, se pueden usar en las dosificaciones descritas anteriormente para composiciones. Las formulaciones adecuadas, conocidas en la técnica, se pueden encontrar en Remington's Pharmaceutical Sciences (última edición), Mach Publishing Company, Easton, PA. Los ungüentos se preparan de manera general, usando ya sea (1) una base oleaginosa, es decir, una que consiste de aceites fijos o hidrocarburos, tales como petrolato blanco o aceite mineral, o (2) una base absórbante, es decir, una que consiste de cualquier sustancia o sustancias anhidras, las cuales pueden absorber agua, por ejemplo, lanolina anhidra. Habitualmente, después de la formación de la base, sea oleaginosa o absorbente, el ingrediente activo (espinosins) es agregado en una cantidad que proporciona la concentración deseada. Las cremas son emulsiones aceite/agua. Consisten de una fase aceitosa (fase interna), que comprenden típicamente aceites fijos, hidrocarburos y similares, tales como ceras, petrolato, aceite mineral y similares, y una fase acuosa (fase continua), que comprende agua y cualquiera de las sustancias solubles en agua, tales como sales agregadas. Las dos fases son estabilizadas por el uso de un agente emulsificante, por ejemplo, un agente activo de la superficie, tal como laurilsulfato de sodio; coloides hidrof ílicos, tale como arcillas coloidales de acacia, Veegum y similares. Después de la formación de la emulsión, el ingrediente activo (espinosins) habitualmente es agregado en una cantidad para lograr la concentración deseada. Los geles comprenden una base seleccionada de una base oleaginosa, agua o una base de emulsión-suspensión, tal como se describe anteriormente. A la base, se agrega un agente gelificante el cual forma una matriz en la base, incrementando su viscosidad.

Ejemplos de agentes gelificantes son hidroxipropilcelulosa, polímeros de ácido acrílico y similares. Habitualmente, los ingredientes activos (espinosins) son agregados a la formulación a la concentración deseada en un punto de adición precedente del agente gelificante. Las formulaciones farmacéuticas orales son preparadas por procedimientos conocidos usando ingredientes fácilmente disponibles y bien conocidos. En la elaboración de las composiciones, el ingrediente activo usualmente será mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable, o diluido por un portador, o adjuntado dentro de un portador, el cual puede estar en la forma de una cápsula, saquillo, papel u otro contenedor. Cuando el portador sirve como un diluyente, puede ser un material sólido, semisólido o líquido, el cual actúa como un vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. De este modo, las composiciones pueden estar en la forma de tabletas, pildoras, polvos, grageas, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, cápsulas de gelatina suave y dura, y similares. Además del ingrediente activo o terapéutico en las dosificaciones descritas anteriormente para composiciones, las tabletas contienen un número de materiales inertes conocidos como aditivos o excipientes. Estos materiales ayudan a impartir características de compresión y procedimiento, satisfactorias a la formulación que incluyen, aglutinantes, deslizantes y lubricantes. Un grupo adicional de sustancias agregadas, ayuda a dar características físicas deseables adicionales a la tableta terminada. Incluido en este grupo están desintegrantes, colores y en el caso de tabletas masticables, agentes saborizantes y endulzantes, y en el caso de tabletas de liberación controlada, polímeros o ceras u otros materiales que retardan la solubilidad. Por "farmacéuticamente aceptable", significa que el portador, diluyente o excipiente, deben ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no ser deletéreos al recipiente del mismo. Detalles adicionales, que incluyen formulaciones representativas, se pueden encontrar en Remington's Pharmaceutical Sciences (última edición) ach Publishing Company, Easton, PA. Las presentes composiciones también contemplan preparaciones para el cuidado de heridas o vendajes que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un espinosin o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable. El vendaje o preparación para cuidado de heridas comprende un soporte de tela externa, preferiblemente un soporte de tela elastomérico; y una almohadilla interna, en donde la almohadilla interna incluye una superficie de membrana externa, preferiblemente fabricada de un material que forma película, e incorpora una cantidad terapéuticamente efectiva de un espinosin o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable, a las dosificaciones descritas anteriormente para composiciones en la matriz. La almohadilla puede ser integral con o separada del soporte de tela externa. El espinosin es idealmente incorporado en la matriz de membrana, pero puede también ser incorporado en el material de la almohadilla interna contenida por la membrana. El agente terapéuticamente activo es mantenido en la matriz polimérica, de manera que se inhibe la migración, y permite la liberación gradual con el tiempo, de espinosin. En otro aspecto, el vendaje para heridas comprende una almohadilla absorbente que tiene un revestimiento lateral al cuerpo previo líquido, una hoja de cubierta externa separada, opcionalmente líquido impermeable, y un cuerpo absorbente dispuesto entre estos. El cuerpo interno y/o absorbente, es fabricado de materiales los cuales incorporan una cantidad terapéuticamente efectiva de un espinosin en la matriz o espacios intersticiales para asegurar que el espinosin está en proximidad cercana próxima a la herida. La superficie o almohadilla interna del vendaje, es preferiblemente fabricada de una membrana natural o sintética o material que forma espuma de ya sea origen animal o vegetal, orgánico o inorgánico, o de materiales plásticos. Por ejemplo, de gelatinas o de gomas vegetales o de materiales plásticos que forman películas hidrofílicos o hidrofóbicas, tales como poliacetatos de polivinilcloruros o poliamidas, los cuales son troquelados o revestidos como una película o membrana en la forma usual. Los materiales poliméricos adecuados incluyen, pero no se limitan a, materiales a base de silicona, silásticos u otros, tereftalato de polietileno (PET), Dacrón, Dacrón de punto, Dacrón de velour, poliglacina, nylon, seda, polietileno (PE), poliuretano, elastómeros silásticos de cloruros de polívinilo, silicona, caucho, PMMA (poli- (metilmetacriiato)), látex, polipropileno (PP), poliolefina, celulosa, alcohol polivinílico (PVA), poli(hidroxietilmetacrilato (PHEMA), poli(ácido glicólico), poli(acrilonitrilo)(PAN), fluoroetilen-cohexa-fluoropropileno (FEP), Teflón (PTFE), copolímeros de los mismos y mezclas de los mismos. El método más simple para incorporar los compuestos terapéuticamente activos en el material polimérico, es por formación de compuestos directos de la sustancia terapéuticamente activa en la resina plástica, antes de troquelarlo o similares. La película o membrana es idealmente fabricada de un polímero hidrofóbico el cual es tanto líquido como gas permeable, pero impermeable al paso de micro-organismos. La hidrofobicidad de la película o membrana es una característica útil en que reduce la tendencia de la película o membrana para llegar a unirse al sitio de la herida. La cantidad de espinosin incorporada en la formulación no es crítica; la concentración debe solamente estar en un intervalo suficiente para permitir la fácil aplicación de la formulación al área de la herida en una cantidad la cual, suministrará la cantidad deseada de espinosins. La cantidad habitual de formulación a ser aplicada a una herida, dependerá del tamaño de la herida y concentración de espinosins en la formulación. De manera general, la formulación será aplicada a la herida en una cantidad proporcionada desde aproximadamente 0.1 µg hasta aproximadamente 5 µg de espinosins por cm2 de herida. Preferiblemente, la cantidad aplicada de espinosins variará desde aproximadamente 0.2 µ? hasta aproximadamente 2 µ?/?p?2, y, más preferiblemente, desde aproximadamente 0.25 hasta aproximadamente 0.5 µ9/???2. Los espinosins pueden también ser administrados al ojo para tratar lesiones, trastornos y patologías de la glándula lagrimal en seres humanos, tales como líquido, gota o líquido espeso, o un gel. Los espinosins pueden también ser administrados intranasalmente a la mucosa nasal para tratar trastornos, lesiones y patologías de la mucosa nasal y el epitelio del seno en seres humanos, tales como gotas líquidas o en forma de rocío. Los espinosins son típicamente formulados en vehículos a una concentración de aproximadamente 0.01 µg/ml hasta 50 mg/ml, preferiblemente 0.01 µ9/?t?? hasta 10 mg/ml, a un pH de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 8, preferiblemente aproximadamente 6 hasta aproximadamente 7, más preferiblemente aproximadamente pH 6.2. Se entenderá que el uso de ciertos excipientes, portadores o estabilizadores extraños, puede resultar en la formación de sales de espinosin. Los espinosins ordinariamente se almacenarán en contenedores de dosis unitarias o múltiples, por ejemplo, ampolletas o viales sellados, como una solución acuosa o como una formulación liofilizada para reconstitución. Como un ejemplo de una formulación liofilizada, se llenaron viales de 3 mi con 1 mi de solución de espinosin acuoso filtrada estéril al 1% (p/v), y la mezcla resultante es liofilizada. La solución de infusión se prepara reconstituyendo el espinosin liofilizado usando agua para inyección, la cual puede opcionalmente incluir uno o más antioxidantes. Las dosificaciones pueden también ser arregladas de una manera específica al paciente, para proporcionar una concentración predeterminada de una actividad de espinosin en la sangre, como se determina por ejemplo, por una técnica RIA. De este modo, la dosificación del paciente se puede ajustar para lograr curso regular a través de los niveles de sangre, medidos por RIA, en el orden desde 50 hasta 1000 ng/ml, preferiblemente 150 hasta 500 ng/ml.

Ejemplo 1 Aplicación tópica de espinosad mejora la cicatrización de heridas de operaciones de ulesing en ovejas (Número de estudio T9CAL0205) Carneros Merinos cortados de la cola y castrados, son sometidos a Mulesing (mulesing involucra remoción quirúrgica de piel que lleva la lana del área de la entrepierna, y cuando cicatriza reduce la susceptibilidad de la oveja a la picadura de mosca). Cincuenta ovejas se dejan sin tratamiento y un grupo de 381 son tratadas con 7.1 g de 4 mg/g de aerosol de espinosad (referido en el Cuadro 1 por formulación). El aerosol de espinosad es aplicado tópicamente a la herida hasta que se humedece con producto, tomando con cuidado para separarlos.

Cuadro 1 Formulación en aerosol de espinosad Las heridas por mulesing de 18 carneros por grupo son estrechamente examinados y valorados para determinar la evidencia de la cicatrización de heridas a 7 y 17 días después del tratamiento (Cuadro 1). La formación de costra y contracción de heridas se registra de 0 (cicatrización completa o normal) a 3 (equivalente a no cicatrización). La efusión hemorrágica/serosa y mala cicatrización, son visualmente registrados de 0 (ausencia de hemorragia/efusión y cicatrización normal) hasta 3 (hemorragia severa o mala cicatrización).

Cuadro 2 Efecto de aplicación tópica de espinosad en la cicatrización de heridas en ovejas después de la operación de mulesing "Medias geométricas. Registros bajos indican mejor cicatrización. ®Número de ovejas afectadas de 18 Al día 7 después del mulesing, las ovejas tratadas con espinosad tienen mayor contracción de heridas por mulesing que los controles no tratados, como se determina por los registros medios inferiores para la contracción de heridas. Por los 17 días después del mulesing, las ovejas tratadas con espinosad han mejorado la formación de costra, la contracción de heridas y reducido la hemorragia y efusión cerosa, indicando la cicatrización de herida mejorada, comparada con la oveja de control no tratada. La aplicación total de espinosad a las heridas de las ovejas por mulesing, resultará en la cicatrización de heridas mejorada 17 días después del tratamiento, comparada con animales no tratados. Este mejoramiento en la cicatrización de heridas ocurre en la ausencia de factores de confusión, tales como picadura de la mosca azul. Sin embargo, la formulación usada en este ejemplo, también incluye un compuesto antibacteriano, clorhexidina. La capacidad de la clorhexidina para inhibir la infección bacterial, puede también tener un efecto positivo en la cicatrización de heridas en este ejemplo.

Ejemplo 2 Aplicación tópica de espinosad mejora la cicatrización de heridas de operación de Mulesing en ovejas (Número de estudio T9CAL0206) Corderos Merino sostenidos y cortados de la cola, son sometidos a Mulesing. Aproximadamente 46 mi de Extinosad diluido (125 ppm) (referido en el Cuadro 3 para formulación), se aplica a las heridas por mulesing de 150 carneros usando un aplicador de rocío manual presurizado pequeño para jardín (2 ó 5 litros), disponible en almacenes minoristas que tienen suministros para jardinería. El contenedor o reservorio es de forma cónica y presurizado por bombeo manual. El rocío es suministrado de una boquilla de cono. El aerosol de espinosad de 4 mg/g (referido en el Cuadro 1 para la formulación) se aplica a la herida usando un rocío de aerosol hasta que la herida y lana circundante es humedecida con el producto. Cincuenta ovejas permanecen sin tratar después de someterlas a mulesing (control).

Cuadro 3 Formulación de Extinosad (25 g/l de espinosad) Cuarenta días después del tratamiento, los carneros son sometidos a mulesing y mantenidos en corrales. Durante un periodo de 15 minutos, los carneros son observados y se identifica cualquiera de los signos de picadura de mosca, tales como dolor agudo de la cola, mordiéndose el área o estampando un pie. Veinticinco carneros de cada grupo son seleccionados aleatoriamente y colocados sobre un riel y sus heridas por mulesing valoradas para determinar la evidencia de picadura de mosca y cicatrización de heridas (Cuadro 4). La formación de costra y contracción de herida se registran de 0 (cicatrización completa a normal) hasta 3 (equivalente a no cicatrización). La hemorragia/efusión serosa y mala cicatrización, son visualmente registradas de 0 (ausencia de hemorragia/efusión y cicatrización normal) a 3 (hemorragia severa o mala cicatrización).

Cuadro 4 Efecto de aplicación tópica de espinosad, suministrado en 2 diferentes formulaciones, o cicatrización de heridas, y la presencia de picadura de mosca e infección en ovejas, 14 días después de la operación de mulesing y tratamiento.

"Medias geométricas. Registros bajos indican mejor cicatrización. ®Número de ovejas afectadas 25.

Ovejas tratadas con espinosad, ya sea como una formulación de aerosol (4 mg/l) o como un rocío manual (125 mg/l), muestran cicatrización de heridas mejorada, como evidencia por un registro reducido para formación de costra, contracción de heridas y la presencia de hemorragia y efusión serosa en el sitio de la herida. Además, de las 25 ovejas examinadas en cada grupo de tratamiento, ninguno de los animales son de mala cicatrización, comparados con 4 animales de mala cicatrización notados en el grupo de control no tratado. Las larvas de Lucilia cuprina están presentes en 4 de 25 ovejas de control no tratadas, comparadas con una oveja del grupo tratado con Extinosad, y no en ovejas del grupo tratado con aerosol de espinosad. La infección en el sitio de la herida está presente en 6 de 25 ovejas en el grupo no tratado, pero ausente en los grupos tratados con espinosad. El tratamiento tópico de heridas por mulesing con espinosad, resulta en cicatrización de heridas mejorada, comparada con nos animales de control no tratados como se observa en el Ejemplo 1 anterior. Este mejoramiento en la cicatrización de heridas está acompañado por las proporciones de infección reducida y presencia reducida de larvas Lucilia cuprina. El mejoramiento en la cicatrización de heridas ocurre con respecto a la formulación o dosis de espinosad, aplicado a las heridas en el mulesing. Además, el espinosad, en la ausencia de clorhexidina (Extinosad), es capaz de mejorar la cicatrización de heridas. Estos datos sugieren que la cicatrización de heridas mejorada vista en los Ejemplos 1 y 2, puede ser el efecto del espinosad mismo, preferentemente las propiedades de inhibición de infección de clorhexidina.

Ejemplo 3 Espinosad mejora la cicatrización de heridas en ratas usando un modelo de lesión térmica a) Efecto de espinosad en la cicatrización de heridas inducidas por láser en ratas jóvenes, normales.

Ratas Sprague-Dawley macho consanguíneas jóvenes de 3 meses de edad y de aproximadamente 300 g, tienen su pelo removido de la región interscapsular 24 horas antes de la inducción de herida. Las ratas son anestesiadas y se induce una quemadura termal usando un láser de C02 (cuatro periodos de estimulación consecutiva cada uno a 25 watts de potencia, 0.5 seg de pulso con al diámetro de mancha de haz establecido a 10 mm), resultando en un área de herida circular de 2 cm2. Grupos de 12 ratas son tratados con salina, ácido cítrico (5%) o espinosad (0.5% en 5% de ácido cítrico). Los tratamientos son suministrados dos veces diariamente por 5 días después de la inducción de heridas, vía 2 inyecciones intradermales de 100 µ? en lados opuestos de la herida. La formación de costra ocasiona un decremento temporal en la relación de contracción de herida (Snowden et al., Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 60: 73-82 (1982)). Por lo tanto, la costra y costra negra ligeramente adherente, son suavemente removidas después de la detección, para mantener todas las heridas comparables y permitir el trazo exacto del área herida. Las heridas son medidas diariamente por 6 días consecutivos después de la inducción de herida y cada 48 horas posteriormente, hasta que ha ocurrido el cierre completo de la herida/re-epitelialización. El área de quemadura (diámetro máximo de la herida), se trazó bajo un estero microscopio par exactitud y después se midió con un planímetro digital. El punto final de la cicatrización es el tiempo cuando ha ocurrido la contracción completa de herida (Cuadro 5).

Cuadro 5 Efecto de espinosad (0.5%) en la relación de cicatrización de heridas en ratas expuestas a lesión de quemadura térmica, comparada con controles de ácido cítricos y salinos.

El efecto de espinosad en cicatrización de heridas es notable por el día 2 después de la inducción de herida, de donde las ratas tratadas con espinosad tienen 30% de heridas más pequeñas que aquellas de controles tratados con ácido cítrico y salina. Las ratas tratadas con espinosad muestran resolución completa de la herida por el día 12, el cual es 4 días más pronto que sus contrapartes tratadas con salina o ácido cítrico.

Estos datos muestran que una solución acuosa simple de espinosad, puede apresurar la cicatrización de heridas en ratas saludables jóvenes. b) Efecto de espinosad en la cicatrización de heridas inducidas por láser en ratas diabéticas (mala cicatrización) Inducción de diabetes usando Estreptozotocina Se indujo diabetes en ratas Sprague-Dawley macho consanguíneas de 3 meses de edad, usando estreptozotocina (STZ). La estreptozotocina (75 mg/kg), se disolvió en 0.1M de regulador de pH de citrato de sodio frío (pH 4) y se mantuvo en hielo para evitar la descomposición. Después de 24 horas de ayuno, las ratas son inyectadas intraperitonealmente con una dosis única de la STZ recientemente preparada (fría) (Rakienten ef al., Cáncer Chemotherapy Report 29: 73-82 (1963)). Los síntomas de diabetes llegaron a ser aparentes en estas ratas dentro de 2-3 días y su condición diabética se confirmó por pruebas de glucosa urinaria. Se usó tratamiento de insulina para dar plazos regulares del dominio catabólico de la condición, mientras se permite la hiperglicemia severa y regular (Willars ef al., J. Neurol. Sci. 91: 153-164 (1989)). Una de las dos inyecciones de insulina (Protofano 21U/100g), se dan subcutáneamente a las ratas recientemente diabéticas, dependiendo de la severidad de su condición física (por ejemplo, poca alimentación o bebida, pérdida de peso a aproximadamente 115 g, inactividad extrema). Las ratas que han fallado al mejorar o pierden más de 15% de su peso corporal, son sacrificadas. Ratas diabéticas de aproximadamente 200 g, tienen removido el peso de la región interscapular 24 horas previo a la inducción de herida. Las ratas son anestesiadas y se induce una quemadura térmica usando un láser de C02 (cuatro periodos de estimulación consecutivos, cada uno a 25 watts de potencia, 0.5 seg de pulso con el diámetro de mancha de haz establecido a 10 mm), resultando en un área de herida circular de 2 cm2. Se trataron grupos de 12 ratas con ya sea salina o espinosad (0.5% en 5% de ácido cítrico). Los tratamientos son suministrados tópicamente dos veces diariamente por 5 días, después de la inducción de herida, goteando 100 µ? de solución directamente en el sitio de herida. La costra y costra negra ligeramente adherente, son suavemente removidas después de la detección, para mantener todas las heridas comparables y permitir el trazo exacto del área herida. Las heridas son medidas como se describe anteriormente (Ejemplo 3a), hasta que el cierre de la herida es aparente (Cuadro 6).

Cuadro 6 Efecto de espinosad (0.5%) en la relación de cicatrización de heridas en ratas diabéticas expuestas a lesión por quemadura térmica, comparado con controles de salina Las ratas diabéticas tratadas tópicamente con espinosad, muestran cicatrización mejorada de herida, comparada con controles de salina, 3 días después de la inducción de herida, como se ilustra por el área de herida reducida. El tamaño de la herida continua contrayéndose más rápidamente en ratas tratadas con espinosad, resultando en resolución de herida al día 13, la resolución de la herida ocurre 4 días más pronto que en los controles tratados con salina. c) Efecto de espinosad en la cicatrización de heridas inducidas por láser en ratas envejecidas (mala cicatrización) Ratas Sprague-Dawley macho, consanguíneas de 24 meses de edad y de aproximadamente 600 g, tienen removido su pelo de la región interscapular 24 horas previo a la inducción de herida. Las ratas son anestesiadas y se induce una quemadura térmica usando un láser de CO2 (cuatro periodos de estimulación consecutivos, cada uno a 25 watts de potencia, 0.5 seg de pulso con el diámetro de mancha de haz establecido a 10 mm), resultando en un área de herida circular de 2 cm2. Se trataron grupos de 12 ratas con ya sea salina o espinosad (0.5% en 5% de ácido cítrico). Los tratamientos son suministrados tópicamente dos veces diariamente por 5 días, después de la inducción de herida, goteando 100 µ? de solución directamente en el sitio de herida. La costra y costra negra ligeramente adherente, son suavemente removidas después de la detección, para mantener todas las heridas comparables y permitir el trazo exacto del área herida. Las heridas son medidas como se describe anteriormente (Ejemplo 3a), hasta que el cierre de la herida es aparente (Cuadro 7).

Cuadro 7 Efecto de espinosad (0.5%) en la relación de cicatrización de heridas en ratas envejecidas expuestas a lesión por quemadura térmica, comparado con controles de salina Las ratas envejecidas tratadas tópicamente con espinosad, muestran cicatrización de heridas mejorada comparada con los controles de salina, 3 días después de la inducción de heridas, como se ilustra por el área de herida reducida. El tamaño de herida continua contrayéndose en ratas tratadas con espinosad, hasta el día 6, durante tal tiempo, el tamaño de la herida se incrementa en ratas tratadas con salina. Las ratas tratadas con espinosad continúan teniendo un tamaño reducido de herida comparado con los controles salinos, resultando en la resolución de herida al día 15, la resolución de herida ocurre 6 días más pronto que en los controles tratados con salina. El espinosad mejora la relación de la cicatrización de heridas si se aplican tópicamente o intradérmicamente. El espinosad mejora la cicatrización de heridas en ratas envejecidas, la cual tiene deficiencias de nervio sensor crónico. Tales datos sugieren que el espinosad puede estar mejorando la cicatrización de heridas vía un mecanismo independiente del nervio sensor y dependiente del nervio sensor. El espinosad puede por lo tanto, curar la ulceración crónica asociada con el envejecimiento. El espinosad mejora la cicatrización de heridas en ratas con diabetes inducida, otra forma de deficiencia del nervio sensor. Estos datos también sugieren que las propiedades de cicatrización de heridas del espinosad, se pueden modular vía tanto trayectorias dependientes como independientes del nervio sensor. El espinosad puede por lo tanto, curar ulceraciones crónicas y otras heridas asociadas con escasa cicatrización en heridas. El espinosad mejora la cicatrización de heridas en ratas saludables, jóvenes normales, con nervios sensores intactos. Tales hallazgos sugieren que el espinosad puede estar ya sea, operando a través de un mecanismo independiente del nervio sensor, o pueden estar mejorando el funcionamiento de los nervios sensores. El espinosad puede por lo tanto, mejorar heridas en pacientes seres humanos saludables, tales como aquellos que ocurren con la lesión o cirugía. Los resultados del Ejemplo 3, indican que el espinosad puede estimular la cicatrización de heridas, vía un número de mecanismos y podrían ser efectivos en seres humanos tanto normales como de mala cicatrización. Las ratas diabéticas y envejecidas, muestran de manera general, un periodo de retraso en cualquier respuesta a la lesión (Cuadros 6 y 7), comparadas con ratas jóvenes saludables (Cuadro 5). Este periodo de retraso ha sido atribuido a un decline general en la actividad de neuronas sensorias aferentes de ratas diabéticas (Gibran et al., J. Surg. Res. 108: 122:128 (2002)) y envejecidas (Khalil & Helme, J. Gerontol. Biol. Sci. 51A(5): B354-B361 (1996)), evidentes durante la fase inflamatoria de cicatrización de heridas. Tal espinosad que es capaz de generar un efecto de cicatrización de heridas en ratas diabéticas, puede ser debido a la estimulación de los nervios sensores aferentes locales o al uso de mecanismos independientes de mecanismos independientes de activación del nervio sensor aferente. El efecto de espinosad es más pronunciado en animales de control con nervios sensores intactos (Cuadro 5). Este efecto es particularmente obvio durante la fase inflamatoria temprana (días 2-5), el componente temprano de la fase proliferativa (días 2-6), con efecto positivo adicional durante el componente tardío de la fase proliferativa (días 6-8) y la fase de remodelación (días 9-12). El espinosad también parece tener efecto durante la fase de remodelación de reparación de cicatrización, lo cual involucra la infiltración y proliferación celular. La dermis responde a lesión durante esta fase, produciendo proteínas de matriz y colágeno, lo cual resulta en contracción y resolución de heridas. El espinosad puede por lo tanto, tener un efecto en los mediadores que influencian la infiltración y activación celular, tal como citocinas, quimiocinas y otros señaladores celulares, o puede directamente, mejorar la producción de matriz y la remodelación de la piel en el sitio de la herida. El ejemplo 3 muestra que el espinosad mejora la cicatrización de heridas a través de las 3 fases de cicatrización. Los datos del Ejemplo 3, confirman los resultados de los Ejemplos 1 y 2, tal espinosad ayuda en la cicatrización de heridas, induciendo ya sea quirúrgicamente o por quemadura. El espinosad mejora la cicatrización de heridas en 2 especies.

Ejemplo 4 Investigaciones en el modo de acción de espinosad en mejoramiento de cicatrización de heridas en ratas usando un modelo de ampollas de inflamación neurogénica a) Efecto de dosis de espinosad en flujo vascular Se valoraron respuestas inflamatorias neurogénicas usando un método bien establecido (Khalil & Helme, Brain Res. 527: 292-298 (1990)). Se indujo anestesia en ratas Sprague-Dawley macho consanguíneas, con pentobarbitona sódica (60 mg/kg i.p.). La anestesia general se mantiene por inyecciones suplementarias de 15 mg/kg. Este método de anestesia se ha mostrado por no alterar las respuestas vasodilatadoras básales en microvasculatura periférica (Khalil & Helme, Brain Res. 500: 256-262 (1989)). La vena yugular izquierda se canuló con entubado de polietileno para la administración intravenosa de solución de heparina/salina o fármacos. La temperatura corporal se mantiene a 37°C. En la terminación del experimento, los animales son sacrificados por sobredosis de barbiturato. Se indujeron ampollas en la región media de la pata trasera en ratas anestesiadas usando presión de vacío de -40 kPa, aplicado por 30 minutos vía una tapa de succión metálica calentado a 40°C. Una vez que se establece la ampolla, la epidermis (epitelio de superficie) se remueve y una cámara perpex con puertos de entrada y salida, se asegura sobre la base de la ampolla. Se perfunde solución Ringer sobre la superficie de la ampolla y se mantiene por una bomba peristáltica a 4 ml/hora para establecer las mediciones de línea base. Se monitorea el flujo sanguíneo relativo con el tiempo, por un medidor de flujo Doppler láser, vía una sonda colocada inmediatamente arriba de la base de la ampolla y se monitorea el flujo sanguíneo relativo (voltios) continuamente en un grabador de diagramas. El espinosad es diluido en ácido cítrico al 5% en solución de Ringer y es perfundido sobre la base de la ampolla por hasta 30 minutos.

Cuadro 8 Efecto de concentraciones diferentes de espinosad en el flujo sanguíneo sobre la base de la ampolla, comparado con la solución ringer El espinosad perfundido a través de la herida de ampolla a una concentración de 0.5%, tiene el efecto más grande en el flujo vascular, en términos de tanto la altura de la respuesta como la duración de la respuesta. Una solución de espinosad al 0.05%, tiene un efecto positivo en el flujo sanguíneo, aunque la magnitud de la respuesta se reduce, comparada con espinosad al 0.5%. El espinosad a una concentración de 5%, produce una respuesta intermedia con un pico de duración reducida y magnitud, comparado con la respuesta obtenida con espinosad al 0.5%. La magnitud mantenida de respuesta observada con espinosad al 0.5%, es sugestiva de la interacción con las trayectorias del nervio peptídico relacionadas con el gen de calcitonina (CGRP), mientras la desensibilización vista con la concentración elevada de espinosad, está a menudo asociada con las trayectorias medidas por la sustancia P. Estos datos muestran que el espinosad tiene un efecto positivo en el flujo vascular, un requerimiento esencial para la cicatrización de heridas. Esta acción puede ser debido a la acción directa en los vasos sanguíneos o vía la liberación de péptidos tales como CGRP y sustancia P a partir de nervios sensores, los cuales en cambio, median una respuesta vascular. b) Efecto de antagonistas peptídicos del nervio sensor e inhibidor de sintasa del óxido nítrico en la respuesta vascular de ratas con espinosad al 0.5% Se valoraron respuestas inflamatorias neurogénicas usando un método bien establecido (Khalil & Helme, Brain Res. 527: 292-298 (1990)). Se induce anestesia en ratas macho Sprague-Dawley consanguíneas, con pentobarbitona sódica (60 mg/kg i.p.). La anestesia general se mantiene por inyecciones suplementarias de 15 mg/kg. Este método de anestesia se ha mostrado por no alterar las respuestas vasodilatadoras básales en la microvasculatura periférica (Khalil & Helme, Brain Res. 500: 256-262 (1989)). La vena yugular izquierda es canutada con entubado de polietileno para administración intravenosa de solución de heparina/salina o fármacos. La temperatura corporal se mantiene a 37°C. En la terminación del experimento, los animales son sacrificados por sobredosis de barbiturato. Las ampollas son inducidas en la región media de la pata trasera en ratas anestesiadas usando presión a vacío de -40 kPa aplicado por 30 minutos vía una tapa de succión metálica a 40°C. Una vez que se establece la ampolla, la epidermis (epitelio de superficie), es removida y una cámara perpex con puertos de entrada y salida se asegura sobre la base de la ampolla. Se perfunde solución Ringer sobre la superficie de la ampolla y se mantiene por una bomba peristáltica a 4 ml/hora para establecer las mediciones de línea base. Se monitorea el flujo sanguíneo relativo con el tiempo, por un medidor de flujo Doppler láser, vía una sonda colocada inmediatamente arriba de la base de la ampolla y se monitorea el flujo sanguíneo relativo (voltios) continuamente en un grabador de diagramas. El espinosad es diluido en ácido cítrico al 5% en solución de Ringer y es perfundido sobre la base de la ampolla por hasta 30 minutos. Una almohadilla de la pata de cada rata es perfundida con espinosad al 0.5%, mientras la otra almohadilla de la pata de cada rata es primero perfundida con un antagonista o inhibidor por 10 minutos, seguida por co-perfusión con espinosad al 0.5% por 30 minutos. CGRP8-37 (antagonista CGRP; Auspep, VIC, Australia), es perfundida a 1 µ? de éster metílico de L-arginina N-nitro (L-NAME, un inhibidor de la sintasa de óxido nítrico endotelial; Cayman Chemical Co., MI, USA) es perfundido a 100 µ?, y espantido II (antagonista II de la sustancia P; Auspep, VIC, Australia), es perfundido a 10 µ?.

Cuadro 9 Efecto de antagonistas peptídicos del nervio sensor e inhibidor eNOS en la respuesta vascular de ampollas de la almohadilla de la pata de rata a perfusión con espinosad al 0.5%, y contribución relativa de los efectores en la actividad de espinosad El flujo sanguíneo en respuesta a la estimulación por espinosad, es disminuido en la presencia de antagonistas peptídicos CGRP y SP y un inhibidor NOS (Cuadro 9). Estos datos indican que el efecto de espinosad en el flujo sanguíneo vascular es mediado a través de CGRP, sustancia P y trayectorias de óxido nítrico. La contribución de CGRP, sustancia P y eNO al efecto de espinosad, es 27%, 34% y 24%, respectivamente (Cuadro 9). El perfil de la respuesta vascular en la presencia de un antagonista CFRP, tiene una magnitud similar de respuesta a través de la perfusión, sugiriendo que la mediación del efecto de espinosad por CGRP es constante con el tiempo. Los perfiles de respuesta vascular en la presencia del agonista de la sustancia P (espantido) o el inhibidor eNOS (L-NOMBRE), muestra que la respuesta disminuye con el tiempo. Esto sugiere que la sustancia P y eNOS tiene mayor implicación en la mediación del efecto de espinosad durante las últimas etapas de la respuesta. Estos datos muestran colectivamente, que el efecto de espinosad en el flujo vascular es mediado a través de la sustancia P de péptidos del nervio sensor y CGRP, y a través del óxido nítrico endotelial. La implicación de eNO en este proceso, sugiere que el espinosad puede actuar directamente en el epitelio de los vasos sanguíneos, así como también, a través de la innervación de los nervios sensores de los bazos sanguíneos en heridas. Además, el efecto de espinosad es de larga duración y mediado a través de diferentes efectores en diferentes etapas de la respuesta. Tales hallazgos pueden explicar las diferencias en los perfiles de cicatrización de heridas entre ratas tratadas con espinosad y ratas de control, en el modelo de lesión térmica (Ejemplo 3), particularmente, la resolución temprana de heridas en ratas de mala cicatrización (envejecidas o diabéticas). La capacidad de los inhibidores del neuropéptido y antagonistas para inhibir la acción del espinosad en el flujo vascular, sugiere que la cicatrización de heridas tempranamente propiedad del espinosad, está actuando a través de trayectorias del nervio sensor, e involucra una combinación de neuropéptidos. Tal actividad podría mejorar la etapa inflamatoria temprana del proceso de cicatrización de heridas, el cual es ampliamente iniciado por la actividad del nervio sensor (Steinhoff et al., Arch. Dermatol. 139: 1479-1488 (2003)). Sin embargo, datos del Ejemplo 3, muestran que en ratas jóvenes normales y ratas de mala cicatrización, el efecto de espinosad en la contracción de heridas, es pronunciado durante los primeros 5 días de cicatrización. c) Efecto de espinosad en la respuesta vascular durante las fases temprana y tardía de inflamación aguda Se valoraron respuestas inflamatorias neurogénicas usando un método bien establecido (Khalil & Helme, Brain Res. 527: 292-298 (1990)). Se induce anestesia en ratas macho Sprague-Dawley consanguíneas, con pentobarbitona sódica (60 mg/kg i.p.). La anestesia general se mantiene por inyecciones suplementarias de 15 mg/kg. Este método de anestesia se ha mostrado por no alterar las respuestas vasodilatadoras básales en la microvasculatura periférica (Khalil & Helme, Brain Res. 500: 256-262 (1989)). La vena yugular izquierda es canulada con entubado de polietileno para administración intravenosa de solución de heparina/salina o fármacos. La temperatura corporal se mantiene a 37°C. En la terminación del experimento, los animales son sacrificados por sobredosis de barbiturato. Las ampollas son inducidas en la región media de la pata trasera en ratas anestesiadas usando presión a vacío de -40 kPa aplicado por 30 minutos vía una tapa de succión metálica a 40°C. Una vez que se establece la ampolla, la epidermis (epitelio de superficie), es removida y una cámara perpex con puertos de entrada y salida se asegura sobre la base de la ampolla. Se perfunde solución Ringer sobre la superficie de la ampolla y se mantiene por una bomba peristáltica a 4 ml/hora para establecer las mediciones de línea base. Se monitorea el flujo sanguíneo relativo con el tiempo, por un medidor de flujo Doppler láser, vía una sonda colocada inmediatamente arriba de la base de la ampolla y se monitorea el flujo sanguíneo relativo (voltios) continuamente en un grabador de diagramas. El espinosad (0.5%) es diluido en ácido cítrico al 5% en solución de Ringer y es perfundido sobre la base de la ampolla por hasta 30 minutos. Una ampolla en la almohadilla de la pata de cada rata es perfundida con espinosad (fase temprana), mientras la ampolla en la otra almohadilla de la pata es perfundida 5 horas después de la inducción de la ampolla (fase tardía).

Cuadro 10 Efecto de espinosad al 0.5% en la respuesta vascular de ampollas de la almohadilla de la pata, durante las fases temprana (inmediatamente después de la lesión) y tardía (5h posteriores a la lesión) de inflamación aguda Los efectores neurogénicos están predominantemente involucrados en la fase temprana de la respuesta inflamatoria, mientras la fase tardía de la respuesta inflamatoria involucra componentes del sistema inmune, tales como neutrófilos y monocitos. Tal espinosad tiene casi efecto igual en las fases tardía y temprana de la respuesta inflamatoria (Cuadro 10), sugiriendo que el espinosad no solamente actúa en los mediadores neurogénicos de inflamación (también mostrado en el Ejemplo 4b), sino también tiene un efecto significante en los mediadores inmunológicos de la respuesta inflamatoria. Este resultado es significante debido a la implicación de los mediadores inmunes en el reclutamiento y activación de células durante las fases proliferativas y de remodelación de cicatrización de heridas (días 6-12). Como se notó previamente en el Ejemplo 3, el efecto de espinosad en la cicatrización de heridas, es visto en las fases inflamatorias, proliferativas y de remodelación. Los datos del ejemplo actual, proporcionan evidencia de que el espinosad es estimulante tanto de las trayectorias neurogénicas como inmunológicas, para mediar sus efectos de cicatrización de heridas.

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar una herida en un ser humano para promover o acelerar la cicatrización, que comprende administrar a un ser humano que tiene una herida, una cantidad terapéuticamente efectiva de un espinosin o un derivado o sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho ser humano no es de mala cicatrización.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho ser humano es de mala cicatrización.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho espinosin es espinosad o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho espinosin es tópicamente aplicado a dicha herida.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho espinosin es administrado oralmente.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho espinosin es administrado parenteralmente.

8. Un método para tratar una enfermedad o trastorno médico en un ser humano que requiere proliferación y regeneración de tejido, que comprende la administración a un ser humano en necesidad del mismo, de una cantidad efectiva para la proliferación y regeneración del tejido, de un espinosin o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable.

9. El uso de espinosin o un derivado o sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para ser ser humano para promover o acelerar la cicatrización de heridas en un ser humano.

10. El uso de conformidad con la reivindicación 9, en donde dicho espinosin es espinosad o un derivado o sal del mismo fisiológicamente aceptable.