MXPA06010108A

MXPA06010108A - Protocolos de diagnostico.

Info

Publication number: MXPA06010108A
Authority: MX
Inventors: Kelly Fiona Windmill; Gregory Royce Collier; Kenneth Russel Walder; David Harry Segal; Kristy Ann Bolton
Original assignee: Autogen Res Pty Ltd
Priority date: 2006-09-04
Filing date: 2006-09-04
Publication date: 2008-10-10

Abstract

La presente invención se refiere en general al campo de protocolos de diagnóstico. E tema objeto de la invención se refiere particularmente a métodos para detectar la presencia de biomarcadores únicos, tales como decorin y CXS-744, los cuales son indicativos de un sujeto que tiene o está desarrollando diabetes, o está desarrollando una condición asociada con diabetes, o que tiene o está desarrollando obesidad.

Description

PROTOCOLOS DE DIAGNOSTICO ANTECEDENTES DE LA INVENCION CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere de manera general al campo de protocolos de diagnóstico. La presente invención se refiere en particular a métodos para detector la presencia de biomarcadores únicos, los cuales son indicativos de un sujeto que tiene o está desarrollando diabetes, o que desarrolla una condición asociada con la diabetes, o que tiene o está desarrollando obesidad.

DESCRIPCION DE LA TECNICA ANTERIOR Los detalles bibliográficos de referencias provistas en la presente especificación son listados al final de la especificación. La referencia a cualquier técnica en esta especificación no es, y no debería ser tomada como, un reconocimiento o cualquier forma de sugerencia de que esta técnica anterior forma parte del conocimiento general común en cualquier país. La creciente sofisticación de tecnología de DNA recombinante está facilitando enormemente la investigación y desarrollo en los campos de veterinaria y salud animal y humana relacionados. Este es en particular el caso en la investigación de las bases genéticas involucradas en la etiología de ciertas condiciones de enfermedad. Las enfermedades de preocupación particular incluyen desórdenes asociados con diabetes, complicaciones asociadas con diabetes, tales como ceguera, nefropatía y/o enfermedad cardiovascular, y disfunción mitocondrial así como miopatías, desórdenes genéticos y cánceres y para modular apoptosis, transduccion de señales y/o enfoque nuclear. La diabetes representa una enfermedad significativa y debilitadora. La incidencia de diabetes está aumentando rápidamente. Se ha estimado que hubo aproximadamente 700,000 personas con diabetes en Australia en 1995, mientras que en US , la frecuencia de diabetes aumentó desde 4.9% en 1990 hasta 6.9% en 1 999 (Mokdad Diabetes Care 24(2):412,2001 ). Existen dos tipos principales de diabetes referidas como diabetes Tipo 1 y Tipo 2. La diabetes Tipo 1 , también conocida como diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM), resulta de una incapacidad para producer insulina. Puede desarrollarse en cualquier edad, aunque usualmente se desarrolla en niños y adultos jóvenes y también es referida como diabetes de ataque juvenile. Una vez que se ha desarrollado, la diabetes Tipo 1 es una condición de por vida. La diabetes Tipo 2 ocurre más tarde en la vida y algunas veces es conocida como diabetes de ataque tardío o diabetes mellitus no dependiente de insulina (NIDDM), debido a que el tratamiento con insulina no siempre es necesario. La diabetes Tipo 2 se desarrolla cuando el cuerpo se vuelve resistente a la insulina. Esto sucede cuando los tejidos corporales, tales como músculo, no responden completamente a las acciones de insulina, de manera que no pueden hacer uso de la glucosa en la sangre. El páncreas responde al producir más insulina. Además, el hígado, donde se almacena la glucosa, libera más glucosa para tratar de aumentar la cantidad de glucosa disponible. Eventualmente, el páncreas se vuelve menos capaz de producir suficiente insulina y los tejidos se vuelven más resistentes a la insulina. Como resultado, los niveles de glucosa en sangre comienzan lentamente a elevarse. Debido a la incidencia siempre creciente de obesidad y diabetes en la sociedad, existe una necesidad siempre más urgente de desarrollar un método diagnóstico el cual sea capaz no solo de diagnosticar diabetes u obesidad, sino también de predecir la probabilidad de desarrollar diabetes u obesidad o la probabilidad de desarrollar una condición asociada con la diabetes, tales como ceguera, nefropatía y/o enfermedad cardiovascular.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION A lo largo de esta especificación, a menos de que el contexto lo requiera de otra manera, la palabra "comprender" o variaciones tales como "comprende" o "comprendiendo", sera entendida para implicar la inclusión de un elemento o entero o grupo de elementos o enteros declarados, pero no la exclusión de cualquier otro elemento o entero o grupo de elementos o enteros. Un resumen de genes identificados de acuerdo con la presente invención es provisto en la Tabla 1 . Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos son referidas mediante un número identificador de secuencia (SEQ I D NO:). El SEQ ID NO: corresponde numéricamente a los identificadores de secuencia <400>1 (SEQ ID NO: 1 ), <400>2 (SEQ I D NO:2), etc. Un resumen de los identificadores de secuencia es provisto en la Tabla 2. Se proporciona un listado de secuencias después de las reivindicaciones. Todas las citas científicas, patentes, solicitudes de patentes y especificaciones técnicas del fabricante referidas más adelante en la presente son incorporadas por referencia en su totalidad. La presente invención proporciona biomarcadores únicos que son útiles para diagnosticar o identificar un sujeto con diabetes, ? una predisposición a desarrollar diabetes o la probabilidad de un sujeto que esté desarrollando una condición asociada con la diabetes, tales como ceguera, nefropatía y/o enfermedad cardiovascular o que tenga obesidad o esté desarrollando obesidad. En un aspecto, los biomarcadores de la presente invención son expresados de manera diferente en no diabéticos comparado con sujetos con una predisposición a desarrollar diabetes, sujetos con diabetes o sujetos en riesgo de desarrollar condiciones secundarias asociadas con la diabetes. En un aspecto adicional, los biomarcadores son expresados diferencialmente en un sujeto que es obeso, o un sujeto con una predisposición de volverse obeso. El diagnóstico de diabetes, una predisposición para diabetes o una probabilidad de desarrollar una condición asociada con la diabetes u obesidad puede incluir, pero no está limitado a, la medición de biomarcadores específicos en una muestra biológica, tal como sangre, suero, orina o saliva. La capacidad para diagnosticar diabetes, una pre-disposición para diabetes o una probabilidad de desarrollar una condición asociada con la diabetes u obesidad, tiene importantes implicaciones para el tratamiento y/o manejo de una condición del sujeto. En una modalidad, dos secuencias expresadas son identificadas como biomarcadores y son designadas en la presente como "decorin" previamente llamadas CXS-741 (ver PCT/AU2006/000659, la cual es incorporada en la presente) y CXS-744. Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de decorin se describen en SEQ ID NOs: 1 y 2, respectivamente. Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de CXS-744 se describen en SEQ ID NOs: 3 y 4, respectivamente. Un resumen de estas secuencias es provisto en la Tabla 1 . La presente invención contempla el uso de estas secuencias u homólogos o equivalents de mamífero, incluyendo homólogos humanos de los mismos o sus productos de expresión en la fabricación de agentes diagnósticos para diabetes, una pre-disposición para diabetes o una probabilidad para desarrollar una condición asociada con la diabetes, obesidad o una predisposición a desarrollar diabetes. La referencia a biomarcador incluye un marcador de diabetes, una pre-disposición para diabetes o una probabilidad para desarrollar una condición asociada con diabetes, obesidad o una predisposición a desarrollar diabetes. De acuerdo con esto, un aspecto de la presente invención contempla un método para el pronóstico de diabetes o una complicación que surge a partir de la diabetes en un sujeto, o la probabilidad de un sujeto que está desarrollando diabetes o el pronósitico de obesidad o una persona que está desarrollando obesidad, comprendiendo dicho método clasificar niveles elevados de un biomarcador de diabetes/obesdiad decorina y/o proteína de CXS-744 o mRNA que codifica la proteína o un homólogo de la misma en una muestra biológica del sujeto, en donde el nivel elevado es indicativo de diabetes o una complicación que surge de la misma o una predisposición de desarrollo del mismo o es indicativo de obesidad o la predisposición de desarrollar obesidad. La referencia a "homólogo" incluye otros homólogos de mamífero, tal como, de un humano. Un aspecto adicional de la presente invención se dirige a un agente diagnóstico para usarse para monitorear o diagnosticar diabetes o una condición asociada con la diabetes o para predecir la probablidad de que un sujeto desarrolle diabetes, o para diagnosticar obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad, el agente diagnóstico seleccionado de un anticuerpo para uno o más de decorin y/o CXS-744 o sus derivados, homólogos, análogos o imiadores y una secuencia genética comprendiendo o capaz de templar un filamento de nucleótido asociado con decorin, y/o CXS-744 útil inter alia en PCR, hibridación, análisis de RFLP o análisis de AFLP. Un resumen de identificadores de secuencia usados a lo largo de la presente especificación es provisto en la Tabla 1 .

TABLA 1 Resumen de identificadores de secuencia DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION A menos que se indique de otra manera, la presente invención no está limitada a componentes terapéuticos específicos, métodos de fabricación, regímenes de dosificación o similares, ya que tales pueden variar. También se entenderá que la terminología usada en la presente es con el fin de describir modalidades particulares solamente y no pretende ser limitante. También debe notarse que, como se usa en la presente especificación, las formas singulares "un", "una" y "el", "la" incluyen los aspectos plurales a menos que el contexto lo dicte claramente de otra manera. Así, por ejemplo, la referencia a "un gene" incluye un solo gene, así como dos o más genes; la referencia a "un agente" incluye un solo agente, así como dos o más agentes; la referencia a "un ensayo" incluye uno o más ensayos; y así sucesivamente. Una "muestra biológica" incluye una muestra de fluido biológico, tal como, pero no limitado a, sangre entera, plasma de sangre, suero, moco, orina, semen, fluido respiratorio, fluido linfático, saliva y otras secreciones de tejido o fluido. El fluido preferido es sangre entera, plasma de sangre y suero. La presente invención es predicada en parte sobre la identificación de biomarcadores asociados inter alia con diabetes, complicaciones asociadas con diabetes, tales como ceguera, nefropatía y/o enfermedad cardiovascular o la probabilidad de desarrollar diabetes, obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad. De ahí, la presente invención proporciona un método para valorar la presencia o ausencia de diabetes u obesidad, complicaciones asociadas con la diabetes, tales como ceguera, nefropatía y/o enfermedad cardiovascular o la probabilidad de desarrollar diabetes u obesidad al determinar el nivel de expresión de una molécula de ácido nucleico, comprendiendo una secuencia de nucieótidos que codifica o es complementaria a una secuencia que codifica un producto de expresión o un derivado, homólogo o imitador del mismo, en donde dicha secuencia de nucieótidos es como se expone substancialmente en SEQ ID NO: 1 (decorin) o SEQ ID NO:3 (CXS-744) o una secuencia de nucieótidos que tiene al menos aproximadamnete 90% de similitud con toda o parte de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3 después de alineación y/o es capaz de hibridar a uno o más de SEQ ID ??.? o SEQ ID NO:3 o sus formas complementarias bajo condiciones de alta severidad a una temperatura especificada y en donde los niveles elevados o reducidos de expresión de una o más de estas secuencias es indicativo de una o más de diabetes o complicaciones de la misma, o la probabilidad de desarrollar diabetes u obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad. La referencia en la presente a similitud o identidad generalmente es a un nivel de comparación de al menos 15 nucleótidos consecutivos o substancialmente consecutivos (o aminoácidos correspondientes), tales como, al menos 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301 , 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 31 0, 31 1 , 312, 313, 314, 315, 31 6, 317, 318, 31 9, 320, 321 , 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331 , 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341 , 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351 , 352, 353, 354, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361 , 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371 , 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381 , 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391 , 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399 o 400 nucleótidos consecutivos o substancialmente consecutivos (o aminoácidos). Las similitudes o identidades de porcentaje preferidas tienen al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 90% o al menos aproximadamente 95%. Los ejemplos incluyen, 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 y 1 00%. El término "similitud" como se usa en la presente, incluye identidad exacta entre secuencias comparadas en el nivel de nucleótidos o aminoácidos. Donde no existe identidad en el nivel de nucleótidos, "similitud" incluye diferencias entre secuencias, las cuales resultan en diferentes aminoácidos que están relacionados no obstante unos a otros en los niveles estructural, funcional, bioquímico y/o conformacional. Donode no existe identidad en el nivel de aminoácidos, "similitud" incluye aminoácidos que están relacionados no obstante unos a otros en los niveles estructural, funcional, bioquímico y/o conformacional. En una modalidad particularmente preferida, las comparaciones de nucleótidos y secuencias se hacen al nivel de identidad en lugar de similitud.

Los términos usados para describir relaciones de secuencias entre dos o más polinucleótidos o polipéptidos incluyen "secuencia de referencia", "ventana de comparación", "similitud de secuencia", "identidad de secuencia", "substancialmente similar" e "identidad substancial". Una "secuencia de referencia" es al menos 12, pero frecuentemente 15 hasta 18 y frecuentemente al menos 25 o por arriba, tal como unidades de 30 monómeros, incluso de residuos de nucleótidos y aminoácidos, en longitud, ejemplos incluyen 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24 y 25. Debido a que dos polinucleótidos pueden comprender cada uno (1 ) una secuencia (es decir, solo una porción de la secuencia de polinucleótidos completa) que es similar entre los dos polinucleótidos, y (2) una secuencia que es divergente entre los dos polinucleótidos, las comparaciones de secuencia entre dos (o más) polinucleótidos son realizadas normalmente al comparar secuencias de los dos polinucléotidos sobre una "ventana de comparación" para identificar y comparar regiones locales de similitud de secuencia. Una "ventana de comparación" se refiere a un segmento conceptual normalmente de 12 residuos contiguos que se compara con una secuencia de referencia. La ventana de comparación puede comprender adiciones o supresiones (es decir, aberturas) de aproxmadamente 20% o menos como se compara con la secuencia de referencia (la cual no comprende adiciones o supresiones) para alineación ópticma de las dos secuencias. La alineación óptima de secuencias para alinear una ventana de comparación puede ser conducida mediante implementaciones computarizadas de algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA en el Wisconsin Genetics Software Package Reléase 7.0, Genetics Computer Group, 575 Science Drive Madison, Wl, US) o mediante inspección y la mejor alineación (es decir, que resulta en el porcentaje más alto de homología sobre la ventana de comparación), generada por cualquiera de los diversos métodos seleccionados. También se hace referencia a la familia de programas BLAST, como se describe, por ejemplo, por Altschul et al. (Nucí Acids Res 25:3389, 1997). Una discusión detallada de análisis de secuencia puede encontrarse en la Unidad 19.3 de Ausubel et al. ("Current Protocols in Molecular Biology" (Protocolos actuales en biología molecular), John Wiley & Sons Inc. , capítulo 15, 1994-1998). Por "condiciones de alta severidad", se quiere decir condiciones bajo las cuales la sonda híbrida específicamente a una secuencia objetivo en una cantidad que es detectablemente más fuerte que la hibridación no específica. Condiciones de alta severidad serían entonces, condiciones las cuales distinguirían un polinucleótido con una secuencia complementaria exacta, o una conteniendo solo unas cuantas desigualdades dispersas de una secuencia aleatoria que parece tener unas cuantas regiones pequeñas (3-10 bases, por ejemplo) que igualaron la sonda. Tales pequeñas regiones de complementaridad, son fusionadas más fácilmente que un complemento de longitud completa de 14-17 o más bases y la hibridación de alta severidad las hace fácilmente distinguibles. Las condiciones de relativamente alta severidad incluirían, por ejemplo, condiciones de baja sal y/o alta temperatura, tal como se proporciona por aproximadamente 0.02 M hasta aproximadamente 0.10 M NaCI o el equivalente, a temperaturas de aproximadamente 50°C hasta aproximadamente 70°C. Tales condiciones de alta severidad toleran poca desigualdad, si acaso, entre la sonda y la plantilla o filamento objetivo, y serían particularmente adecuadas para detectar expresión de marcadores de enfermedad de próstata metastática específicos. Generalmente se aprecia que las condiciones pueden hacerse más severas mediante la adición de cantidades crecientes de formamida. La referencia en la presente a alta severidad incluye y abarca desde al menos aproximadamente 0 hasta al menos aproximadamente 15% v/v de formamida y desde al menos aproximadamente sal 1 M hasta al menos aproximadamente 2 M para hibridación, y al menos aproximadamente 31 % v/v hasta al menos aproximadamente 50% v/v de formamida, tal como 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 y 50% v/v de formamida y desde al menos aproximadamente sal 0.01 M hasta al menos aproximadamente 0.15 , tal como 0.01 , 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.1 1 , 0.12, 0.13, 0.14 y 0.15 M para hibridación, y al menos aproximadamente sal 0.01 M hasta al menos aproximadamente 0.015 M, tal como 0.01 , 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.1 1 , 0.12, 0.13, 0.14 y 0.15 M para condiciones de lavado. En general, el lavado es realizado Tm = 69.3 + 0.41 (G+C)% (Marmur y Doty, J. Mol. Biol. 5: 109, 1962). Sin embargo, la Tm de un DNA duplo disminuye por 1 °C con cada aumento de 1 % en el número de pares de bases desigual (Bonner y Laskey, Eur J Biochem 46:83, 1974). La formamida es opcional en estas condiciones de hibridación. De acuerdo con esto, la alta severidad es definida como 0.1 x amortiguador SSC, 0.1 % p/v SDS a una temperatura de al menos 65°C. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para el pronóstico de diabetes o una complicación que surge de diabetes en un sujeto o la probabilidad de que un sujeto desarrolle diabetes u obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad, comprendiendo dicho método clasificar niveles elevados de decorin (SEQ ID NO: 1 ) y/o proteína CXS-744 (SEQ ID NO:3) o mRNA que codifica dicha proteína o un homólogo del mismo en una muestra biológica de dicho sujeto, en donde un nivel elevado de decorin o CXS-744 comparada con un control normal es indicativo de diabetes o una complicación que surge de la misma o una predisposición a desarrollar la misma. Como se usa en la presente, un "control" es definido como un sujeto que tiene una o más de las siguientes características: delgado, joven, sin predisposición genética para diabetes Tipo II (es decir, sin historial familiar de diabetes Tipo II), normoglicémico y/o normoinsulinémico. En la práctica de esta modalidad, uno puede usar un segmento de ácido nucleico que es complementario a la longitud completa del mRNA que codifica decorin o CXS-744, o uno puede usar un segmento más pequeño que es complementario a una porción del RNA. Tales segmentos más pequeños pueden ser desde aproximadamente 14, hasta aproximadamente 15, aproximadamente 16, aproximadamente 17, aproximadamente 18, aproximadamente 19, aproximadamente 20, aproximadamente 21 , aproximadamente 22, aproximadamente 23, aproximadamente 24, aproximadamente 25, aproximadamente 25, aproxmadamente 30, aproximadamente 50, aproximadamente 75, aproximadamente 100 o incluso varios cientos de bases de longitud y pueden estar contenidos en segmentos más grandes que proporcionan otras funciones, tales como, promotores, sitios de reconicimiento de enzimas de restricción, u otras funciones de replicación o procesamiento de mensaje o expresión. En modalidades preferidas, tales sondas son diseñadas para hibridar selectivamente a un decorin o CXS-744 o producto de los mismos. Un producto de los mismos incluiría un filamento de DNA o RNA que sea complementario al mRNA y así, una sonda útil incluiría tanto las orientaciones de sentido y antisentido de una secuencia particular. También se prefiere el uso de sondas o iniciadores que son diseñados para hibridar selectivamente a un segmento de ácido nucleico teniendo una secuencia de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3 o los complementos de los mismos. Los métodos de la presente invención también pueden incluir determinar la cantidad de producto hibridado. Tal determinación puede ser mediante detección directa de una sonda hibridada etiquetada, tal como mediante el uso de una etiqueta radioactiva, fluorescente u otra etiqueta en la sonda, o puede ser mediante el uso de una amplificación de una secuencia objetivo, y cuantificación del producto amplificado. Un método preferido de amplificación es una reacción en cadena de polimerasa de transcriptasa inversa (RT-PCR) como se describe en la presente. RT-PCR es un método preferido de detección, diagnóstico y/o pronóstico de enfermedad o cáncer de próstata. En ia práctica de tal método, la amplificación puede comprender contactar los ácidos ribonucleicos objetivo con un par de iniciadores de amplificación diseñados para amplificar mRNA de decorn o CXS-744, o incluso contactar los ácidos ribonucleicos con un par de iniciadores de amplificación diseñados para amplificar un segmento de ácido nucleico comprendiendo la secuencia de ácidos nucleicos o complementos de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3. Los métodos diagnósticos pueden basarse en los pasos para obtener una muestra biológica de un sujeto o paciente, contactar ácidos nucleicos muestra de la muestra biológica con un segmento de ácido nucleico de CXS 744 o decorin aislado bajo condiciones efectivas para permitir la hibridación de ácidos nucleicos substancialmente complementarios, y detectar, y caracterizar además opcionalmente, los ácidos nucleicos complementarios hibridados así formados. Los métodos pueden involucrar detección in situ de ácidos nucleicos de muestra ubicados dentro de las células de la muestra. Los ácidos nucleicos de muestra también pueden ser separados de la célula antes del contacto. Los ácidos nucleicos de muestra pueden ser DNA o RNA. Los métodos pueden involucrar el uso de segmentos de ácido nucleico de decorin o CXS-744 aislados que comprenden una etiqueta radio, enzimática o fluorescente detectable, en donde los ácidos nucleicos complementarios hibridados son detectados al detectar la etiqueta. En modalidades preferidas, tales sondas son diseñadas para hibridar selectivamente a mRNA de decorin o CXS-744 o producto del mismo. Un producto del mismo incluiría un filamento de DNA o RNA que sea complementario al mRNA y así una sonda útil incluiría tanto las orientaciones de sentido como antisentido de una secuencia particular. También se prefiere el uso de sondas o iniciadores que son diseñados para hibridar selectivamente a un segmento de ácido nucleico teniendo una secuencia de SEQ ID NO: 1 , SEQ ID NO:3 o los complementos de las mismas. En la práctica de la presente invención, algunos métodos pueden involucrar la detección de expresión de un producto de polipéptido y en particular, el producto de expresión codificado por SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3. Tal detección puede ser mediante cualquier medio conocido en la técnica y puede incluir un inmunoensayo, una purificación o detección por inmunoafinidad, un ELISA, o un radioinmunoensayo, por ejemplo. El patrón de expresión de decorin y/o CXS-744 ha sido determinado, inter alia, para indicar una inclusión en la regulación de uno o más procesos asociados con una o más de diabetes, o las complicaciones asociadas con diabetes o probabilidad de desarrollar diabetes u obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad. Se considera que un homólgo es un gene de decorin y CSX-744 de otra especie animal. La presente invención se extiende al gene homólogo, como es determinado por secuencia de nucleótidos y/o secuencias de aminoácidos y/o función, de primates, incluyendo humanos, titís, orangutanes y gorilas, animales de ganado (por ejemplo, vacas, borregos, cerdos, caballos, burros) , animales de prueba de laboratorio (por ejemplo, ratones, ratas, conejillos de I ndias, hámsters, conejos) , animales de compañína (por ejemplo, gatos, perros) y animales salvajes capturados (por ejemplo, roedores, zorros, venados, canguros). La presente invención también contempla formas desinmunizadas de los productos de expresión de una especie en relación a otra especie. En una modalidad preferida, la forma desinmunizada del producto de expresión es una forma mamiferizada en relación a un animal objetivo particular. En una modalidad más preferida, donde el mamífero objetivo es un humano, la presente invención contempla el uso de una forma humanizada de un producto de expresión no humano. El decorin y CXS-744 y sus derivados y homólogos pueden estar en forma aislada o purificada y/o puede ligarse a un vector, tal como, un vector de expresión . La expresión puede ser en una línea de células eucarióticas (por ejemplo, células de mamífero, insecto o levadura) o en células microbianas (por ejemplo, E. coli) o ambas. La molécula de ácido nucleico puede ligarse a un vector de expresión capaz de expresión en una célula procariótica (por ejemplo, E. coli) o una célula eucariótica (por ejemplo, células de levadura, células fúngales, células de insectos, células de mamífero o células vegetales) . La molécula de ácido nucleico puede ligarse o fusionarse o asociarse de otra manera a una molécula de ácido nucleico que codifica otra entidad, tal como, por ejemplo, un péptido de señal . También puede comprender información de secuencia de nucleótidos adicional fusionada, enlazada o asociada de otra manera con ella en las porciones terminales 3' o 5' o en ambas porciones terminales 3' y 5'. La molécula de ácido nucleico también puede ser parte de un vector, tal como un vector de expresión. Los derivados de la molécula de ácido nucleico de la presente invención incluyen oligonucleótidos, iniciadores de PCR, moléculas de antisentido, moléculas adecuadas para usarse en co-supresión (por ejemplo, RNAi) y moléculas de ácido nucleico de fusión. Ribozimas y enzimas de DNA también son contempladas por la presente invención dirigidas a decorin y CXS-744 o su mRNA. Los derivados y homólogos de decorin y CXS-744 son abarcados convenientemente por aquéllas secuencias de nucleótidos capaces de hibridar a SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3 o SEQ I D NO:3 o su forma complementara bajo condiciones de alta severidad. La presente invención se extiende a productos de expresión de CXS-741 y CXS-744. Los productos de expresión preferidos son proteínas o mutantes, derivados, homólogos o análogos de los mismos así como un rango de moléculas de RNA. Un producto de expresión incluye una molécula de RNA, tal como un transcripto de mRNA así como una proteína. Algunos genes son genes que no codifican proteína y producen mRNA u otras moléculas tipo RNA y están involucrados en la regulación por interacción RNA: DNA, RNA: RNA o RNA:proteína. El RNA (por ejemplo, mRNA) puede actuar directamente o vía la inducción de otras moléculas, tales como RNAi o vía productos mediados a partir de eventos de empalme (por ejemplo, exones o intrones). Otros genes codifican transcripciones de mRNA, las cuales son traducidas entonces a proteínas. Una proteína incluye un polipéptido. Las moléculas de ácido nucleico diferencialmente expresadas, por lo tanto, pueden codificar mRNAs solamente o, además, proteínas. Tanto mRNAs como proteínas son formas de "productos de expresión". Los derivados incluyen fragmentos, partes, porciones, mutantes, variantes e imitadores de fuentes naturales, sintéticas o recombinantes, incluyendo proteínas de fusión. Las partes o fragmentos incluyen, por ejemplo, regiones activas de decorin y CXS-744. Los derivados pueden ser derivados de inserción, supresión o substitución de aminoácidos. Los derivados de inserción de aminoácidos incluyen fusiones terminales de amino y/o carboxílico, así como inserciones intrasecuencia de aminoácidos simples o múltiples. Las variantes de secuencia de aminoácidos de inserción son aquéllas, en las cuales uno o más residos de aminoácidos son introducidos en un sitio predeterminado en la proteína, aunque la inserción aleatoria también es posible con clasificación adecuada del producto resultante. Las variantes de supresión son caracterizadas por la remoción de uno o más aminoácidos de la secuencia. Las variantes de aminoácidos de substitución son aquéllas en las cuales al menos un residuo en la secuencia ha sido removida y un residuo diferente es insertado en su lugar. Un ejemplo de variantes de aminoácidos substitucionales son substituciones de aminoácidos conservadoras. Las substituciones de aminoácidos conservadoras normalmente incluyen substituciones dentro de los siguientes grupos: glicina y alanina; valina, isoleucina y leucina; ácido aspártico y ácido glutámico; asparagina y glutamina; serina y treonina; lisina y arginina; y fenilalanina y tirosina. Las adiciones a secuencias de aminoácidos incluyen fusiones con otros péptidos, polipéptidos o proteínas. Los equivalentes químicos y funcionales de decorin y CXS-744 deberían entenderse como moléculas que exhiben una o más de las actividades funcionales de estas moléculas y pueden derivarsde de cualquier fuente, tal como, que sean químicamente sintetizadas o identificadas vía procesos de clasificación tal como clasificación de producto natural. Los derivados incluyen fragmentos que tienen epitopes particulares o partes de la proteína entera fusionados a péptidos, polipéptidos u otras moléculas proteicas o no proteicas. Otro aspecto de la presente invención proporciona una proteína aislada u otro producto de expresión o un derivado, homólogo, análogo o imitador del mismo, el cual esté asociado con una o más de diabetes, complicaciones asociadas con la diabetes, una predisposición a desarrollar diabetes, obesidad o una predisposicón para desarrollar obesidad. En un aspecto preferido de la presente invención, se proporciona una proteína aislada o derivado, homólogo, análogo, fragmento o imitador del mismo en los métodos diagnósticos de la presente invención, en donde dicha proteína o polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos codificada por SEQ ID NO: 1 (decorin o CXS-741 ) o una secuencia de aminoácidos teniendo al menos 90% de similitud a toda o parte de la misma, y en donde dicha proteína o producto de expresión está asociado con una más de diabetes, complicaciones asociadas con la diabetes, tales como, ceguera, nefropatía y/o enfermedad cardiovascular, y/o la probabilidad de desarrollar diabetes. En otro aspecto preferido de la presente invención, se proporciona una proteína aislada o derivado, homólogo, análogo, fragmento o imitador del mismo, para usarse en los métodos diagnósticos de la presente invención, en donde dicha proteína o polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos codificada por SEQ ID NO:2 (CXS-744) o una secuencia de aminoácidos teniendo al menos 90% de similitud con toda o parte de la misma, y en donde dicha proteína o producto de expresión está asociado con una o más de diabetes, complicaciones asociadas con diabetes, tales como ceguera, nefropatía y/o enfermedad cardiovascular y/o la probabilidad de desarrollar diabetes. La referencia en la presente a decorin y CXS-744 incluye la referencia a decorin que ocurre de manera natural aislado o purificado, y proteína CXS-744 o moléculas de producto de expresión así como cualquier derivado, homólogo, análogo e imitador de los mismos. Los derivados incluyen partes, fragmentos y porciones de decorin y CXS-744 así como substituciones, supresiones y/o adiciones de aminoácidos simples y múltiples a decorin y CXS-744. Un derivado de decorin y CXS-744 es abarcado convenientemente por moléculas codificadas por una secuencia de nucleótidos capaz de hibridar SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3, respectivamente bajo condiciones de alta severidad a una temperatura especificada. Otros derivados de decorin y CXS-744 incluyen análogos químicos. Los análogos de decorin y CXS-744 contemplados en la pesenteincluyen, pero o están limitados a, modificaciones a cadenas laterales, incorporación de aminoácidos no naturales y/o sus derivados durante síntesis de péptidos, polipéptidos o proteínas y el uso de reticuladores y otros métodos, los cuales imponen restricciones conformacionales sobre la molécula proteica o sus análogos. Ejemplos de modificaciones de cadena lateral contempladas por la presente invención incluyen modificaciones de grupos amino, tales como, mediante alquilación reductora mediante reacción con un aldehido, seguido por reducción con NaBH4; amidación con metilacetimidato; acilación con anhídrido acético; carbamoilación de grupos amino con cianato; trinitrobencilación de grupos amino con ácido 2,4,6-trinotrobencen sulfónico (TNBS); acilación de grupos amino con anhídrido succínico y anhídrido tetrahidroftálico; y piridoxilación de lisina con piridoxaI-5-fosfato, seguido por reducción con NaBH4. El grupo guanidina de residuos de arginina pueden ser modificados por la formación de productos de condensación heterocíclicos con reactivos, tales como, 2,3-butanodiona, fenilglioxal y glioxal. El grupo carboxilo puede ser modificado por activación de carbodiimida vía formación de O-acilisourea, seguido por derivación subsecuente, por ejemplo, a una amida correspondiente. Los grupos sulfidrilo pueden ser modificados mediante métodos, tales como carboximetilación con ácido yodoacético o yodoacetamida; oxidación de ácido perfórmico a ácido cisteico; formación de un disulfuro mezclado con otros compuestos de tiol; reacción con maleimida, anhídrido maleico u otra maleimida substituida; formación de derivados mercúricos usando 4-cloromercuribenzoato, ácido 4-clorometercurifenilsulfónico, cloruro fenilmercúrico, 2-cloromercuri-4-nitrofenol y otros mercuriales; carbamoilación con cianato a pH alcalino. Los residuos de triptófano pueden ser modificados mediante, por ejemplo, oxidación con N-bromosuccinimida o alquilación del anillo indol con bromuro de 2-hirxoi-5-nitrobencilo o haluros de sulfenilo. Por otra parte, los residuos de tirosina pueden ser alterados mediante nitración con tetranitrometano para formar un derivado de 3-nitrotirosina. La modificación del anillo imidazol de un residuo de histidina puede lograrse mediante alquilación con derivados de ácido yodoacético o N-carbetoxilación con dietilpirocarbonato. Ejemplos de incorporar aminoácidos no naturales y derivados durante la síntesis de péptidos incluyen, pero no están limitados a, el uso de norleucina, ácido 4-amino butírico, ácido 4-amino-3-hidroxi-5-fenilpentanoico, ácido 6-aminohexanoico, t-butilglicna, norvalina, fenilglicina, ornitina, sarcosina, ácido 4-amino-3-hidrox¡-6-metilheptanoico, 2-tienil alanina y/o D-isómeros de aminoácidos. Una lista de aminoácido no natural, contemplada en la presente es mostrada en la Tabla 2.

TABLA 2 Códigos para aminoácidos no convencionales Aminoácido no Código Aminoácido no Código convencional convencional Acido a-aminobutírico Abu L-N-metilalanina Nmala a-amino-a-metilbutirato Mgabu L-N-metilarginina Nmarg Aminociclopropano- Cpro L-N-metilasparagina Nmasn carboxilato Acido L-N-metilaspártico Nmasp Acido aminoisobutírico Aib L-N-metilcisteína Nmcys Aminonorbornilo- Norb L-N-metilglutamina Nmgln carboxilato Acido L-N-metilglutámico Nmglu Ciclohexilalanina Chexa L-N-metilhistidina Nmhis Ciclopentilalanina Cpen L-N-metilisoleucina Nmile D-alanina Dal L-N-metilleucina Nmleu D-arginina Darg L-N-metillisina Nmlys Acido D-aspártico Dasp L-N-metilmetionina Nmmet D-cisteína Dcys L-N-metilnorleucina Nmnle D-glutamina Dgln L-N-metilnorvalina Nmnva Acido D-glutámico Dglu L-N-metilornitina Nmorn Dhistidina Dhis L-N-metilfenilalanina Nmphe D-isoleucina Dile L-N-metilprolina Nmpro D-leucina Dleu L-N-metilserina Nmser D-lisina Dlys L-N-metiltreonina Nmthr D-metionina Dmet L-N-metiltriptófano Nmtrp Aminoácido no Código Aminoácido no Código convencional convencional D-ornitina Dorn L- N-metiltirosina Nmtyr D-fenilalanina Dphe L- N-metilvalina Nmval D-prolina Dpro L- N-metiletilglicina metg D-serina Dser L- N-metil-t-butilglicina Nmtbug D-treonina Dthr L- norleucina Nle D-triptófano Dtrp L- norvalina Nva D-tirosina Dtyr a- metil-aminoisobutirato Maib D-valina Dval a- ¦metil-y-aminobutirato Mgabu D-a-metilalanina Dmala a- metilciclohexilalanina Mchexa D-a-metilarginina Dmarg a- metilciclopentilalanina Mcpen D-a-metilasparagina Dmasn a- metil-a-naftilalanina Manap D-a-metilcisteína Dmasp a- metilpenicilamina Mpen D-a-metilglutamina Dmcys N -(4-aminobutil)gücina Nglu D-a-metilhistidina Dmgln N -(2-aminoetil)glicina Naeg D-a-metilisoleucina Dmhis N- -(3-aminopropil)glicina Norn D- -metilleucina Dmile N- -amino-a-metilbutirato Nmaabu D-a-metillisina Dmleu a- naftilalanina Anap D-a-metilmetionina Dmly N- -bencilglicina Nphe D-a-metilorniti na Dmmet N- -(2-carbamiletiI)glicina Ngln D-a-metilfenilalanina Dmorn N- ¦(carbamilmetil)glicina Nasn D-a-metilprolina Dmphe N- ¦(2-carboxietil)gIicina Nglu D-a-metilserina Dmpro N- ¦(carboximetil)glicina Nasp Aminoácido no Código Aminoácido no Código convencional convencional D-a-metiltreonina Dmser N-ciclobutilglicina Ncbut D-a-metiltriptófano Dmthr N-cicloheptilgl¡cina Nchep D-a-metiltirosina Dmtrp N-ciclohexilglicinaglicina Nchex D-a-metilvalina Dmty N-ciclodecilglicina Ncdec D-a-metilalanina Dnval N-ciclododecilglicina Ncdod D-N-metilalanina Dnmala N-ciclooctilglicina Ncoct D-N-metilarginina Dnmarg N-ciclopropilglicina Ncpro D-N-metilasparagina Dnmasn N-cicloundecilglicina Ncund D-N-metilaspartato Dnmasp N-(2,2-difeniletil)glicina Nbhm D-N-metilcisteína Dnmcys N-(3,3- Nbhe difenilpropil)glicina D-N-metilglutamina Dnmgln N-(3- Narg guanidinopropil)glicina D-N-metilglutamato Dnmglu N-(1 -hidroxietil)glicina Nthr D-N-metilhistidina Dnmhis N-(hidroxietil))glicina Nser D-N-metilisoleucina Dnmile N-(imidazoliletil))giicina Nhis D-N-metilleucina Dnmleu N-(3-indoliletil)glicina Nhtrp D-N-metillisina Dnmlys N-metil-y-aminobutirato Nmgabu N-metilciclohexilalanina Nmchexa D-N-metilmetionina Dnmmet D-N-metilornitina Dnmorn N-metilciclopentilalanina Nmcpen N-metilglicina Nala D-N-metilfenilalanina Dnmphe N-metilaminoisobutirato Nmaib D-N-metilprolina Dnmpro Aminoácido no Código Aminoácido no Código convencional convencional N-(1 -metilpropil)glicina Nile D-N-metilserina Dnmser N-(2-metilpropil)gIicina Nleu D-N-metiltreonina Dnmthr D-N-metiltriptófano Dnmtrp N-(1 -metiIetil)glicina Nval D-N-metiltirosina Dnmtyr N-metila-naftilalanina Nmanap D-N-metilvalina Dnmval N-metilpenicilamina Nmpen Acido ?-aminobutírico Gabu N-(p-hidroxifenil)glicina Nhtyr L-t-butilgiicina Tbug N-(tiometil)glicina Ncys L-etilglicina Etg Penicilamina Pen L-homofenilalanina Hphe L-a-metilalanina Mala L-a-metilarginina Marg L-a-metilasparagina Masn L-a-metilaspartato Masp L-a-metil-t-butilglicina Mtbug L-a-metilcisteína Mcys L-metiletilglicina Metg L-a-metilglutamina Mgln L- -metilglutamato Mglu L-a-metilhistidina Mhis L-a- Mhphe metilhomofenilalanina L-a-metilisoleucina Mile N-(2-metiltioetil)gl icina Nmeí L-a-metilleucina Mleu L-a-metillisina Mlys L-a-metilmetionina Mmet L-a-metilnorleucina Nmle L-a-metilnorvalina Mnva L-a-metilornitina Morn L-a-metilfenilalanina Mphe L-oc-metilprolina Mpro L-a-metilserina Mser L-a-metiltreonina Mthr L-a-metiltriptófano Mtrp L-a-metiltirosina Mtyr Aminoácido no Código Aminoácido no Código convencional convencional L-a-metilvalina Mval L-N- Nmhphe metilhomofenilalanina N-(n-(2,2-difeniletil) Nnbhm N-(N-(3,3-difenilpropil) Nnbhe carbamilmetil)glicina carbamilmetil)glicina 1 -carboxi-1 -(2,2-difenil- Nmbc etilamino)ciclopropano Los reticuladores pueden ser usados, por ejemplo, para estabilizar conformaciones tridimensionales, usando reticuladores homo-bifuncionales, tales como los imido ésteres bifuncionales teniendo grupos separadores (CH2)n con n=1 a n=6, glutaraldehído, N-hidroxisuccinimida ésteres y reactivos hetero-bifuncionales, los cuales usualmente contienen una porción amino-reactiva, tal como N-hidroxisuccinimida y otra porción reactiva de grupo específico, tal como porción maleimido o ditio (SH) o carbodiimida (COOH). Además, los péptidos pueden ser restringidos conformacionalmente mediante, por ejemplo, incorporación de Ca y Na-metilaminoácidos, introducción de dobles enlaces entre átomos Ca y Cp de aminoácidos y la formación de péptidos cíclicos o análogos al introducir enlaces covalentes, tales como que forman un enlace amida entre los extremos N y C, entre dos cadenas laterales o entre una cadena lateral y el extremo N o C. Todas estas modificaciones también pueden ser útiles para estabilizar los fines diagnósticos de las moléculas de decorin y CXS- 744. Como se declara antes, el producto de expresión puede ser un RNA o proteína. El término "proteína" debería ser entendido para abarcar péptidos, polipéptidos y proteínas. La proteína puede ser glicosilada o no glicosilada y/o puede contener un rango de otras moléculas fusionadas, enlazadas, unidas o asociadas de otra manera a la proteína, tales como, aminoácidos, lípidos, carbohidratos u otros péptidos, polipéptidos o proteínas. La referencia de aquí en adelante a una "proteína" incluye una proteína comprendiendo una secuencia de aminoácidos así como una proteína asociada con otras moléculas, tales como aminoácidos, lípidos, carbohidratos u otros péptidos, polipéptidos o proteínas. En una modalidad particularmente preferida, el producto de expresión es codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO: 1 o un derivado, homólogo o análogo del mismo, incluyendo una secuencia de nucleótidos teniendo al menos aproximadamente 90% de identidad a SEQ ID NO: 1 . En otra modalidad particularmente preferida, el producto de expresión es codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:3 o un derivado, homólogo o análogo del mismo, incluyendo una secuencia de nucleótidos teniendo al menos aproximadamente 90% de identidad a SEQ ID NO:3. También se contemplan mayores similitudes por la presente invención, tales como, más de 80% o 90%, o 95%, o 96%, o 97%, o 98%, o 99% o mayor. Ejemplos adicionales incluyen 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 y 100%. Las proteínas usadas en los métodos diagnósticos de la presente invención pueden estar en forma aislada. Por "aislada" se quiere decir una proteína habiendo experimentado al menos un paso de purificación y esto es definido convenientemente, por ejemplo, por una composición comprendiendo al menos aproximadamente 1 0% de proteína objetivo, de preferencia al menos aproximadamente 20%, más preferiblemente al menos aproximadamente 30%, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 40-50%, todavía aún más preferiblemente al menos aproximadamente 60-70%, todavía aún más preferiblemente 80-90% o mayor, tal como 10, 1 1 , 12, 13, 1 ,4, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 2,4, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 3,6, 37, 38, 39, 40, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61 , 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 , 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 91 , 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 y 100% de proteína objetivo en relación a otros componentes como se determina mediante peso molecular, secuencia de aminoácidos u otro medio conveniente. La proteína de la presente invención también puede ser considerada, en una modalidad preferida, por ser biológicamente pura. Los términos "similitud de secuencia" e "identidad de secuencia", como se usa en la presente se refiere al grado en que las secuencias son idénticas o funcional o estructuralmente similares en una base de nucleótido-por nucleótido, o una base de aminoácido-por-aminoácido sobre una ventana de comparación. De esta manera, un "porcentaje de identidad de secuencia", por ejemplo, es calculado al comparar dos secuencias alineadas de manera óptica sobre la ventana de comparación, determinando el número de posiciones en los cuales la base de ácido nucleico idéntica (por ejemplo, A, T, C; G, I) o el residuo de aminoácido idéntico (por ejemplo, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, lie, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys y Met) ocurre en ambas secuencias para producir el número de posiciones igualadas, dividiendo el número de posiciones igualadas por el número total de posiciones en la ventana de comparación (es decir, el tamaño de ventana) y multiplicar el resultado por 100 para producir el porcentaje de identidad de secuencia. Para los fines de la presente invención, "identidad de secuencia" será entendida por significar el "porcentaje de igualación" calculado mediante el programa de computadora DNASIS (Versión 2.5 para Windows; disponible de Hitachi Software Engineering Co. , Ltd, South San Francisco, California, US) usando fallas estándares como se usa en el manual de referencia que acompaña el programa de cómputo. Comentarios similares aplican en relación a la similitud de secuencia. La secuencia de nucleótidos o secuencia de aminoácidos de la presente invención puede corresponder a exactamente la misma secuencia del gene que ocurre de manera natural (o cDNA correspondiente) o proteína o puede llevar una o más substituciones, adiciones y/o supresiones de nucleótidos o aminoácidos. Las secuencias de nucleótidos expuestas en SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3 corresponden a los genes referidos en la presente como decorin y CXS- 744, respectivamente. Los productos de expresión correspondientes son decorin y CXS-744 y se exponen en SEQ ID Nos:2 y 4, respectivamente. La referencia en la presente a decorin y CXS-744 incluye, donde es apropiado, la referencia al gene genómico o cDNA, así como cualquier derivado que ocurre de manera natural o inducido. Además de las substituciones, supresiones y/o adiciones a la secuencia de nucleótidos, la presente invención abarca adicionalmente mutantes, fragmentos, partes y porciones de la secuencia de nucleótidos que corresponden a decorin y CXS-744. Todavía otro aspecto de la presente invención se dirige a los anticuerpos decorin y CXS-744 y sus derivados y homólogos. Tales anticuerpos pueden ser monoclonales o policlonales y pueden ser seleccionados de anticuerpos que ocurren de manera natural para decorin y CXS-744 o pueden ser cultivados específicamente para decorin y CXS-744 o derivados u homólogos de los mismos. En caso de lo último, decorin y CXS-744 o sus derivados u homólogos pueden necesitarse primero que se asocien a una molécula portadora. Los anticuerpos y/o decorin y CXS-744 recombinantes o sus derivados de la presente invención son particularmente útiles como agentes diagnósticos. Por ejemplo, decorin y CXS-744 y sus derivados pueden ser usados para clasificar anticuerpos que ocurren de manera natural para decorin y CXS-744, la presencia de los cuales es indicativa de un sujeto que tiene diabetes o enfermedades asociadas con ella o la probabilidad de desarrollar diabetes u obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad. Las técnicas para clasificar la presencia de decorin o CXS-744, tais ensayos son bien conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, ensayos de emparedado y ELISA. Los anticuerpos para decorin y CXS-744 de la presente invención pueden ser monoclonales o policlonales y pueden ser seleccionados de anticuerpos que ocurren de manera natural para decorin y CXS-744 o pueden cultivarse específicamente para el decorin y CXS-744 o sus derivados. En caso de lo último, puede necesitarse primero que el decorin y proteína CXS-744 se asocien con una molécula portadora. De manera alternativa, los fragmentos de anticuerpos pueden ser usados, tales como fragmentos Fab. Adicionalmente, la presente invención se extiende a anticuerpos recombinantes y sintéticos y a híbridos de anticuerpos. Un "anticuerpo sintético" es considerado en la presente para incluir fragmentos e híbridos de anticuerpos. Los anticuerpos de este aspecto de la presente invención son particularmente úiltes como un decorin y CXS-744 de herramienta de diagnóstico. Por ejemplo, pueden usarse anticuerpos específicos para clasificar proteínas de decorin y CXS-744. Lo último es importante, por ejemplo, como un medio para clasificar niveles de decorin y CXS-744 en un extracto celular u otro fluido biológico, tal como suero, sangre, orina o saliva. Las técnicas para los ensayos contemplados en la presente son conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, ensayos de emparedado y ELISA. Los inmunoensayos, en su sentido más simple y directo, son ensayos de unión. Ciertos inmunoensayos preferidos son los diversos tipos de ensayos inmunoabsorbentes enlazados a enzima (ELISAs) y radioinmunoensayos (RIA) conocidos en la técnica. La detección inmunohistoquímica usando secciones de tejido también es particularmente útil. Sin embargo, se apreciará fácilmente que la detección no está limitada a tales técnicas y Western blotting, dot blotting, análisis FACS y similares también pueden usarse. En un ELISA ejemplar, los anticuerpos que se unen a las proteínas codificadas de la invención son inmovilizados sobe una superficie seleccionada que exhibe afinidad de proteína, tal como una cavidad en una placa de microtítulo de poliestireno. Entonces, una composición de prueba que se sospecha que contiene el antígeno marcador de enfermedad de próstata, tal como una muestra clínica, es adicionada a las cavidades. Después de unir y lavar para remover inmucomplejos unidos de manera no específica, el antígeno unido puede ser detectado. La detección generalmente es lograda mendiante la adición de un segundo anticuerpo específico para la proteína objetivo, que está enlazada a una etiqueta detectable. Este tipo de ELISA es un "ELISA de emparedado" simple. La detección también puede lograrse mediante la adición de un segundo anticuerpo, seguido por la adición de un tercer anticuerpo que tiene afinidad de unión para el segundo anticuerpo, con el tercer anticuerpo siendo enlazado a una etiqueta detectable. En otro ELISA ejemplar, las muestras que se sospecha que contienen el antígeno marcador de enfermedad de próstata son inmovilizados sobre la superficie de cavidad y entonces son contactadas con los anticuerpos de la invención. Después de unir y lavar para remover inmunocomplejos unidos de manera no específica, el antígeno unido es detectado. Donde los anticuerpos iniciales están enlazados a una etiqueta detectable, los inmunocomplejos pueden ser detectados directamente. Nuevamente, los inmunocomplejos pueden ser detectados usando un segundo anticuerpo que tiene afinidad de unión por el primer anticuerpo, con el segundo anticuerpo estando enlazado a una etiqueta detectable. Otro ELISA, en el cual las proteínas o péptidos son inmovilizados, involucra el uso de competencia de anticuerpos en la detección. En este ELISA, los anticuerpos etiquetados son adicionados a las cavidades, se permite que se unan a la proteína marcadora de enfermedad de próstata, y se detectan por medio de su etiqueta. La cantidad de antígeno marcador en una muestra desconocida es determinada entonces al mezclar la muestra con los anticuerpos etiquetados antes o durante la incubación con cavidades recubiertas. La presencia de antígeno marcador en la muestra actúa para reducir la cantidad de anticuerpo disponible para unirse a la cavidad y de esta manera reduce la última señal. Esto es apropiado para detectar anticuerpos en una muestra desconocida, donde los anticuerpos no etiquetados se unen a las cavidades recubiertas con antígeno y también reduce la cantidad de antígeno disponible para ligarse a los anticuerpos etiquetados. Sin importar el formato empleado, los ELISAs tienen ciertas características en común, tales como recubrir, incubar o unir, lavar para remover la especie no unida de manera específica y detectar losinmunocomplejos unidos. Estas se describen como sigue: Para recubrir una placa con ya sea antígeno o anticuerpo, uno generalmente incubará las cavidades de la placa con una solución del antígeno o anticuerpo, ya sea durante la noche o durante un periodo de horas especificado. Las cavidades de la placa serán lavadas entonces para remover de manera incompleta el material adsorbido. Cualquier superficie disponible restante de las cavidades son "recubiertas" entonces con una proteína no específica que es antigénicamente neutral con respecto a los antisueros de prueba. Estos incluyen albúmina de suero bovino (BSA), caseína y soluciones de leche en plovo. El recubrimiento permite bloquear los sitios de adsorción no específica en la superficie inmovilizada y así reduce el soporte provocado por unión no específica de antisueros sobre la superficie. En ELISAs, es probablemente más acostumbrado usar un medio de detección secundario o terciario en lugar de un procedimiento directo. De esta manera, después de la unión de una proteína o anticuerpo a la cavidad, recubrir con un material no reactivo para reducir el soporte, y lavar para remover el material no unido, la superficie inmovilizadora es contactada con la muestra de control y/o muestra clínica o biológica a ser probada bajo condiciones efectivas para permitir la formación de inmunocomplejo (antígeno/anticuerpo). La detección del inmunocomplejo requiere entonces un ligando o anticuerpo de unión secundario etiquetado, o un ligando o anticuerpo de unión secundario en conjunción con un anticuerpo terciario etiquetado o tercer ligando de unión. "Bajo condiciones efectivas para permitir la formación de inmunocomplejo (antígeno/anticuerpo)", significa que las condiciones de preferencia incluyen diluir los antígenos y anticuerpos con soluciones tales como BSA, gamma globulina bovina (BGG) y solución salina amortiguada con fosfato (PBS)/Tween. Estos agentes adicionados también tienden a ayudar en la reducción de soporte no específico. Las condiciones "adecuadas" también significan que la incubación es a una temperatura y durante un periodo de tiempo suficiente, para permitir la unión efectiva. Los pasos de incubación son normalmente desde aproximadamente 1 a 2 hasta 4 horas, a temperaturas de preferencia en el orden de 25°C hasta 27°C, o pueden ser durante la noche a aproximadamente 4°C más o menos. Siguiendo todos los pasos de incubación en un ELISA, la superficie contactada es lavada con el fin de remover el material que no está en complejo. Un procedimiento de lavado preferido incluye lavar con una solución, tal como PBS/Tween, o amortiguador de borato. Siguiendo la formación de inmunocomplejos específicos entre la muestra de prueba y el material originalmente unido, y lavado subsecuente, la ocurrencia de incluso cantidades diminutas de inmunocomplejos puede ser determinada. Para proporcionar un medio de detección, el segundo o tercer anticuerpo tendrá una etiqueta asociada para permitir la detección. De preferencia, esta será una enzima que generará desarrollo de color al incubar con un substrato cromogénico apropiado. De esta manera, por ejemplo, uno deseará contactar e incubar el primer o segundo inmunocomplejo con un anticuerpo conjugado con ureasa, glucosa oxidasa, fosfatasa alcalina o hidrógeno peroxidasa durante un periodo de tiempo y bajo condiciones que favorezcan el desarrollo de formación de inmunocomplejo adicional (por ejemplo, incubación durante 2 horas a temperatura ambiente en una solución conteniendo PBS, tal como PBS-Tween). Después de la incubación con el anticuerpo etiquetado, y subsecuente a lavar para remover material no unido, la cantidad de etiqueta es cuantificada, por ejemplo, mediante incubación con un substrato cromogénico, tal como urea y bromocresol morado o ácido 2,2'-azido-di-3-etil-benztiazolin-6-sulfónico [ABTS] y H202, en el caso de peroxidasa como la etiqueta de enzima. La cuantificación es lograda entonces al medir el grado de generación de color, por ejemplo, usando un espectrofotómetro de espectro visible. Los anticuerpos de esta invención serán usados para cuantificar y localizar la expresión de las proteínas marcadoras codificadas. El anticuerpo, por ejemplo, será etiquetado por cualquiera de una variedad de métodos usados para visualizar la concentración localizada de las células que producen la proteína codificada. La invención también se refiere a un método in vivo para formar imágenes de una condición patológica de próstata usando los anticuerpos monoclonales antes descritos. De manera específica, este método involucra administrar a un sujeto una cantidad efectiva para formación de imágenes de un anticuerpo monoclonal específico de enfermedad de próstata, etiquetado de manera detectable o fragmento del mismo y un portador farmacéuticamente efectivo, y detectar la unión del anticuerpo monocional etiquetado al tejido enfermo, o en el caso de genes marcadores sub-regulados, tejido saludable. El término "formación de imágenes in vivo" se refiere a cualquier método que permita la detección de un anticuerpo monclonal etiquetado de la presente invención o fragmento del mismo que se une de manera específica a un tejido enfermo ubicado en el cuerpo del sujeto. Un "sujeto" es un mamífero, de preferencia un humano. Una "cantidad efectiva para formación de imágenes" significa que la cantidad del anticuerpo monocional etiquetado de manera detectable, o fragmento del mismo, administrada es suficiente para permitir la detección de unión del anticuerpo monocional o fragmento del mismo al tejido enfermo, o la unión del anticuerpo monocional o fragmento del mismo en mayor proporción a tejido saludable en relación al tejido enfermo. Un factor a considerar para seleccionar un radionúclido para diagnóstico in vivo es que la vida media de un núclido sea suficientemente larga, de manera que todavía sea detectable en el momento de captación máxima por el objetivo, pero suficientemente corta de manera que se minimice la radiación perjudicial sobre el huésped, así como soporte. De manera ideal, un radionúclido usado para formación de imágenes in vivo carecerá de emisión particulada, pero producirá una gran cantidad de fotones en un rango de 140-2000 keV, la cual puede ser detectada fácilmente mediante cámaras gamma convencionales.

Un radionúclido puede estar unido a un anticuerpo ya sea de manera directa o indirecta al usar un grupo funcional intermediario. Los grupos funcionales intermediarios, los cuales son usados frecuentemente para unir radioisótopos, los cuales existen como iones metálicos a anticuerpo son ácido dietilentriaminopentaacético (DTPA) y ácido etilen diaminotetracético (EDTA). Ejemplos de iones metálicos adecuados para usarse en esta invención son 99mTc, 23l , 13 l, 111 ln, 131 l, 97Ru, 67Cu, 67Ga, 125l, 65Ga, 72As, 89Zr y 201TI. De acuerdo con la presente invención, el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo puede ser etiquetado mediante cualquiera de varias técnicas conocidas en la técnica. Los métodos de la presente invención también pueden usar isótopos paramagnéticos para fines de detección in vivo. Los elementos particularmente útiles en Imagenología de resonancia magnética (" RI") incluyen 157Gd, 55Mn, 162Dy, 52Cr y 56Fe. La administración del anticuerpo etiquetado puede ser local o sistémica y lograrse de manera intravenosa, intraarterial, vía el fluido espinal o similares. La administracioón también puede ser intradérmica o ¡ntracavitaria, dependiendo del sitio corporal bajo examen. Después de que ha transcurrido tiempo suficiente, por ejemplo 30 minutos a 48 horas, para el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo para unirse con el tejido objetivo, ya sea tejido enfermo y/o saludable, el área del sujeto bajo investigación es examinada mediante técnicas de imagenología de rutina, tales como MRI, SPECT, imagenología de centelleo plano y también técnicas de imagenología emergente. El protocolo exacto necesariamente variará dependiendo de factores específicos para el paciente, como se nota antes, y dependiendo del sitio corporal bajo examen, método de administración y tipo de etiqueta usada; la determinación de procedimientos específicos sería rutina para el técnico experto. La distribución del isótopo radioactivo unido y su aumento o disminución con el tiempo es monitoreada entonces y registrada. Al comparar los resultados con los datos obtenidos de los estudios de individuos clínicamente normales, la presencia y grado del tejido enfermo puede determinarse. Será evidente para aquéllos de habilidad en la técnica, que puede usarse una aproximación similar para radio-formar imágenes de la producción de las proteínas marcadoras de enfermedad de próstata codificadas en pacientes humanos. La presente invención proporciona métodos para el diagnóstico in vivo de enfermedad de próstata en un paciente. Tales métodos generalmente comprenden administrar a un paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo específico de enfermedad de próstata, dicho anticuerpo es conjugado con un marcador, tal como un isótopo radioactivo o una molécula etiquetada con giro, que sea detectable mediante métodos no invasivos. Se permite que el conjugado anticuerpo-marcador entre en contacto el tiempo suficiente con los antígenos reactivos que pueden estar presentes dentro de los tejidos del paciente, y el paciente sea expuesto a un dispositivo dedetección para identificar el marcador detectable. Está dentro del alcance de esta invención incluir cualquier anticuerpo secundario (monoclonal, policlonal o fragmentos de anticuerpos) dirigidos a los primeros anticuerpos mencionados discutidos antes. Tanto los primero como segundos anticuerpos pueden usarse en ensayos de detección o un primer anticuerpo puede ser usado con un anticuerpo de anti-inmunoglobulina comercialmente disponible. Un anticuerpo como se contempla en la presente incluye cualquier anticuerpo específico para cualquier región de decorin y CXS/744. Ambos anticuerpos policlonales y monoclonales son obtenibles mediante inmunización con la enzima o proteína y ya sea los Tipo I utilizables para inmunoensayos. Los métodos para obtener ambos tipos de sueros son bien conocidos en la técnica. Los sueros policlonales son menos preferidos pero son preparados relativamente de manera fácil mediante inyección de un animal de laboratorio adecuado con una cantidad efectiva de decorin y CXS-744, o partes antigénicas de los mismos, recolectando suero del animal y aislando sueros específicos mediante cualquiera de las técnicas inmunoadsorbentes conocidas. Aunque los anticuerpos producidos mediante este método son utilizables virtualmente en cualquier tipo de inmunoensayo, generalmente son menos favorecidos debido a la heterogeneidad potencial del producto. El uso de anticuerpos monoclonales en un inmunoesnayo es particularmente preferido debido a la capacidad para producirlos en grandes cantidades y la homogeneidad del producto. La preparación de líneas de células de hibridoma para producción de anticuerpos monoclonales derivada al fusionar una línea de células inmortales y linfocitos sensibilizados contra la preparación inmunogénica puede hacerse mediante técnicas, las cuales son bien concidas para aquéllos que son expertos en la técnica. (Ver, por ejemplo, Douillard y Hoffman Compendium of Immunoiogy (Compendio de inmunología) Vol. II, ed. Por Schwartz, 1 981 ; Kohler y Milstein Nature 256:495-499, 1 975; Kohler y Milstein European Journal of Immunoiogy 6:51 1 -519, 1976). Otro aspecto de la presente invención contempla un método para detectar decorin y CXS-744 o un derivado u homólogo del mismo en una muestra biolóica de un sujeto, comprendiendo dicho método contactar dicha muestra biológica con un anticuerpo específico de decorin y CXS-744 o sus derivados antigénicos u homólogos durante un tiempo y bajo condiciones suficientes para formar un complejo y entonces detectar dicho complejo. La presencia del complejo es indicativa de la presencia de decorin y CXS-744. Este ensayo puede ser cuantificado o semi-cuantificado para determinar una propensión a desarrollar diabetes o para monitorear un régimen terapéutico para tratar diabetes. La presencia de decorin y CXS-744 puede detectarse en una variedad de formas, tales como, mediante procedimientos de Western blotting y ELISA. Un amplio rango de técnicas de inmunoensayo están disponibles como se puede ver por referencia a las patentes estadounidenses nos. 4,016,043, 4,424,279 y 4,018,653. Por supuesto, éstas incluyen tanto ensayos de un solo sitio y dos sitios o de "emparedado" de los tipos no competitivos, así como en los ensayos de unión competitiva tradicionales. Estos ensayos también incluyen unión directa de un anticuerpo etiquetado a unobjetio. Los ensayos de emparedade se encuentran entre los ensayos más útiles y comúnmente usados. Existe un número de variaciones de la técnica de ensayo de emparedado, y todas pretenden estar abarcadas por la presente invención. Brevemente, en un ensayo más adelante típico, un anticuerpo no etiquetado es inmovilizado sobre un substrato sólido y la muestra a ser probada es llevada a contacto con la molécula unida. Después de un periodo de incubación adecuado, durante un periodo suficiente para permitir la formación de un complejo de anticuerpo-decorin y/o anticuerpo-CXS-744, un segundo anticuerpo específico del decorin y/o CXS-44, etiquetado con una molécula reportadora capaz de producir una señal detectable, es adicionada entonces e incubada, permitiendo tiempo suficiente para la formación de otro complejo de anticuerpo-decorin y anticuerpo-CSX-744-anticuerpo etiquetado. Cualquier material sin reaccionar es lavado y la presencia de decorin y CXS-44 es determinada mediante observación de una señal producida por la molécula reportadora. Los resultados pueden ser ya sea cualitativos, mediante observación simple de la señal visible, o puede ser cuantificada al comparar con una muestra de control conteniendo cantidades conocidas de hapteno. Las variaciones en el ensayo más adelante incluyen un ensayo simultáneo, en el cual tanto el anticuerpo de muestra como etiquetado se adicionan simultáneamente al anticuerpo unido. Estas técnicas son bien conocidas para aquéllos expertos en la técnica, incluyendo cualquier variación menor como será fácilmente evidente. De acuerdo con la presente invención, la muestra es una que pudiera contener decorin y CXS-744 incluyendo extracto celular, biopsia de tejido o posiblemente suero, saliva, secreciones de mucosa, linfa, fluido de tejido y fludio respiratorio. Por lo tanto, la muestra es generalmente una muestra biológica comprendiendo fluido biológico, pero también se extiende a fluido de fermentación y fluido sobrenadante, tal como de un cultivo celular. La superficie sólida generalmente es vidrio o un polímero, siendo los polímeros más comúnmente usados celulosa, poliacrilamida, nylon, poliestireno, cloruro de polivinilo o polipropileno. Los soportes sólidos pueden estar en la forma de tubos, perlas, discos de microplacas o cualquier otra superficie adecuada para conducir un inmunoensayo. Los procesos de unión son bien conocidos en la téncia y generalmente consisten en unir covalentemente reticulante o adsorber físicamente, el complejo polímero-anticuerpo se lava en preparación para la muestra de prueba. Una alícuota de la muestra a ser probada es adicionada entonces al complejo de fase sólida y se incubó durante un periodo suficiente (por ejemplo, 2-40 minutos o durante la noche si es más conveniente) y bajo condiciones adecuadas (por ejemplo, a partir de tempeatura ambiente hasta aproximadamente 37°C) para permitir la unión de cualquier subunidad presente en el anticuerpo. Siguiendo el periodo de incubación, la fase sólida de subunidad de anticuerpo se lava, se seca y se incuba con un segundo anticuerpo específico para una porción de decorin y CXS-744. El segundo anticuerpo es enlazado a una molécula reportadora, la cual es usada para indicar la unión del segundo anticuerpo a decorin y CXS-744. Un método alternativo involucra Inmovilizar las moléculas objetivo en la muestra biológica y entonces exponer el objetivo inmovilizado al anticuerpo específico, el cual puede o no ser etiquetado con una molécula reportadora. Dependiendo de la cantidad de objetivo y la fuerza de la señal de molécula reportadora, un objetivo unido puede ser detectable mediante etiquetado directo con el anticuerpo. De manera alternativa, un segundo anticuerpo etiquetado, específico para el primer anticuerpo es expuesto al complejo objetivo-primer anticuerpo para formar un complejo terciario objetivo-primer anticuerpo-segundo anticuerpo. El complejo es detectado mediante la señal emitida por la molécula reportadora. Por "molécula reportadora", como se usa en la presente especificación, se quiere decir una molécula la cual, por su naturaleza química, proporciona una señal analíticamente identificable, lo cual permite la detección de antígeno-anticuerpo unido. La detección puede ser ya sea cualitativa o cuantitativa. Las moléculas reportadoras más comúnmente usadas en este tipo de ensayo son ya sea enzimas, fluoróforos o moléculas conteniendo radionúclidos (es decir, radioisótopos) y moléculas quimioluminiscentes. En el caso de un inmunoensayo de enzimas, una enzima es conjugada al segundo anticuerpo generalmente por medio de glutaraldehído o periodato. Sin embargo, como se reconocerá fácilmente, existe una amplia variedad de técnicas de conjugación diferentes, las cuales están fácilmente disponibles al técnico experto. Las enzimas comúnmente usadas incluyen peroxidasa de rábano picante, glucosa oxidasa, ß-galactosidasa y fosfatasa alcalina, entre otras. Los substratos a ser usados con las enzimas específicas generalmente son elegidos para la producción, sobre hidrólisis por la enzima correspondiente, de un cambio de color detectable. Ejemplos de enzimas adecuadas incluyen fosfatasa alcalina y peroxidasa. También es posible emplear substratos fluorogénicos, los cuales producen un producto fluorescente en lugar de los substratos cromogénicos notados antes. En todos los casos, el anticuerpo etiquetado con enzimas es adicionado al complejo de primer anticuerpo-hapteno, se permite que se una y entonces el exceso de reactivo es lavado. Una solución conteniendo el substrato apropiado es adicionado entonces al complejo de anticuerpo-antígeno-anticuerpo. El substrato reaccionará con la enzima enlazada al segundo anticuerpo, dando una señal visual cualitativa, lo cual puede ser cuantificado adicionalmente, usualmente de manera espectrofotométrica, para dar una indicación de la cantidad de hapteno, la cual estuvo presente en la muestra. Una "molécula reportadora" también extiende al uso de aglutinación celular o inhibición de aglutinación, tal como glóbulos rojos en perlas de látex y similares. De manera alterna, compuestos fluoescentes, tales como fluoreceína y rodamina, pueden ser acomlados químicamente a anticuerpos sin alterar su capacidad de unión. Cuando se activan mediante iluminación con luz de una longitud de onda particular, el anticuerpo etiquetado con fluorocromo adsorbe la energía luminosa, induciendo un estado de excitabilidad en la molécula, seguido por emisión de la luz a un color característico visualmente detectable con un microscopio de luz. Como en el EIA, se permite que el anticuerpo etiquetado fluorescente se una al complejo primer anticuerpo-hapteno.

Después de lavar el reactivo no unido, el complejo terciario restante es expuesto entonces a la luz de la longitud de onda apropiada, la fluorescencia observada indica la presencia del hapteno de interés. Las técnicas de inmunofluorescencia y E1A son abmas bien establecidas en la técnica y son particularmente preferidas para el presente método. Sin embargo, otras moléculas reportadoras, tales como radioisótopo, moléculas quimioluminiscentes o bioluminiscentes, también pueden emplearse. La presente invención también contempla ensayos genéticos, tales como los que involucran análisis de PCR para detectar decorin y CXS-744 o sus derivados. Los ensayos de la presente invención también pueden extenderse para medir decorin y CXS-744 o decorin y CXS-744 en asociación con otro gene o molécula. La presente invención también puede describirse en ciertas modalidades como un conjunto para usarse para detectar diabetes o una condición asociada con ella o la probalidad de desarrollar diabetes a través de prueba de una muestra biológfica. Un conjunto representativo puede comprender uno o más segmentos de ácido nucleico como se describe antes, que hibriden selectivamente decorin o CXS-744 y un recipiente para cada uno del o los segmentos de ácido nucleico. En ciertas modalidades, los segmentos de ácido nucleico pueden combinarse en un solo tubo. En ciertas modalidades, los segmentos de ácido nucleico serían diseñados para hibridar selectivamente un segmento de ácido nucleico que incluye la secuencia o complemento de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3. En modalidades adicionales, los segmentos de ácido nucleico también pueden incluir además un par de iniciadores para amplificar el mRNA objetivo. Tales conjuntos también puedenincluir cualquier amortiguador, solución, solvente, enzima, nucleótido u otros componentes para hibridación, amplificación o reacciones de detección. Los componentes de conjunto preferidos incluyen reactivos para RT-PCR, hibridación in situ, análisis Northern y/o RPA. En ciertas modalidades, el conjunto para usarse para detectar diabetes o una condición asociada con ella o la probabilidad de desarrollar diabetes u obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad en una muestra biológica puede comprender un anticuerpo que inmunoreacciona con un polipéptido de decorin o CXS-744 y un recipiente para el anticuerpo. Tal anticuerpo puede ser un anticuerpo policlonal o monoclonal y puede incluirse en un conjunto con reactivos, anticuerpos secundarios, medios de etiquetado, u otros componentes para la detección de polipéptido incluyendo, pero no limitando a un conjunto de ELISA. La presente invención comprende además el pronóstico y/o diagnóstico de diabetes o una condición asociada con ella, o al probabilidad de desarrollar diabets al medir las cantidades de productos de amplificación de ácido nucleico formados como antes. Las cantidades de productos de amplificación de ácido nucleico identificados en un paciente individual pueden ser comparadas con grupos de individuos normales o individuos con un estado de enfermedad identificado. El diagnóstico puede ser logrado al hallar que los niveles del paciente de decorin y CXS-744 caen dentro del rango normal, o dentro del rango observado en individuos con el estado de enfermedad. Una comparación adicional con grupos de individuos de progresión de estado de enfermedad variante, pueden proporcionar un pronóstico para el paciente individual. La presente invención comprende además ampliamente conjuntos para realizar los procedimientos antes mencionados, conteniendo iniciadores de amplificación y/o sondas de hibridación. Otro aspecto de la presente invención comprende la detección y diagnósitico de diabetes o una condición asociada con ella o la probabilidad de desarrollar diabetes. Una modalidad de la invención comprende combinar la medición de SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO:3 con otros marcadores asociados con diabetes o una condición asociada con ella o la probabilidad de desarrollar diabetes, tal como BM1, peso, proporción de cintura a cadera, ayuno de glucosa, ayuno de insulina y porcentaje de grasa corporal. Todavía otro aspecto de la presente invención comprende conjuntos para la detección y medición de los niveles de dos o más marcadores de estado de enfermedad en las muestras biológicas. El practicante experto se dará cuenta que tales conjuntos pueden incorporar una variedad de metodologías para la detección y medición de marcadores de estado de enfermedad, incluyendo pero no limitando a sondas de oligonucleótidos, iniciadores para amplificación de ácido nucleico, anticuerpos que se unen de manera específica a productos de proteína de genes marcadores de estado de enfermedd, y otras proteínas o péptidos que se unen de manera específica a productos de genes marcadores de estado de enfermedad. Todavía en otras modalidades, la presente invención concierne a conjuntos de inmunodetección para usarse con los métodos de inmunodetección descritos antes. Como las proteínas o péptidos marcadores codificados pueden ser empleados para detectar anticuerpos y los anticuerpos correspondientes pueden ser empleados para detectar proteínas o péptidos codificados, cualquiera o ambos de tales componentes pueden ser provistos en el conjunto. Los conjuntos de inmunodetección comprenden así, en un medio de recipiente adecuado, una proteína o péptido codificado y/o un primer anticuerpo que se une a una proteína o péptido codificado, y un reactivo de inmunodetección. En ciertas modalidades, la proteína o péptido codificado, o el primer anticuerpo que se une a la proteína o péptido codificado, puede unirse a un soporte sólido, tal como una matriz de columna o cavidad de una placa de microtítulo. Los reactivos de inmunodetección del conjunto pueden tomar cualquiera de una variedad de formas, incluyendo aquéllas etiquetas detectables que son asociadas con o enlazadas al anticuerpo o antígeno dado, y las etiquetas detectables que están asociadas con o unidas a un ligando de unión secundario. Ligandos secundarios ejemplares son aquellos anticuerpos secundarios que tienen afinidad de unión por el primer anticuerpo o antígeno y los anticuerpos secundarios que tienen afinidad de unión por un anticuerpo humano. Reactivos de inmunodetección adecuados adicionales para usarse en los presentes conjuntos incluyen el reactivo de dos componentes que comprende un anticuerpo secundario que tiene afinidad de unión por el primer anticuerpo o antígeno, junto con un tercer anticuerpo que tiene afinidad de unión por el segundo anticuerpo, estando enlazado el tercer anticuerpo a una etiqueta detectable. Los conjuntos pueden comprender además una composición dividida en alícuotas de manera adecuada del antígeno de poüpéptido o proteína codificado, ya sea etiquetado o no etiquetado, como puede ser usado para preparar una curva estándar para un ensayo de detección. Los conjuntos pueden contener conjugados de anticuerpo-etiqueta ya sea en forma completamente conjugada, en la forma de intermediarios, o como porciones separadas para ser conjugadas por el usuario del conjunto. Los componentes de los conjuntos pueden ser empacados ya sea en medios acuosos o en forma liofilizada. El medio de recipiente de los conjuntos generalmente incluirán al menos un vial, tubo de prueba, matraz, botella, jeringa u otros medios de recipiente, en los cuales el anticuerpo o antígeno pueden ser colocados, y de preferencia, dividido en alícuotas. Donde se proporciona un segundo o tercer ligando de unión o componente adicional, el conjunto también contendrá generalmente un segundo, tercer u otro recipiente adicional en el cual este ligando o componente pueda ser colocado. Los conjuntos de la presente invención también incluirán normalmente un medio para contener el anticuerpo, antígeno y cualquier otro recipiente de reactivo en estrecho confinamiento para venta comercial. Tales recipientes pueden incluir recipientes de plásticos moldeados por soplado o inyección en los cuales se retiene los viales deseados. La presente invención es descrita adicionalmente mediante los siguientes Ejemplos no limitantes.

EJEMPLO 1 Extracción de RNA El RNA total fue extraído de tejido en un proceso de dos pasos utilizando los protocolos Trizol (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, US) y RNeasy (Qiagen, Hilden, Alemania). Las muestras de tejido fueron homogeneizadas en Trizol (Invitrogen Life Technologies) y se adicionó 1/5 de volumen de cloroformo al homogenizado, el cual fue mezclado e incubado entonces a temperatura ambiente durante 3 min. los homogenizados fueron separados entonces mediante centrifugación a 13000xg durante 15 min (4°C). Siguiendo la centrifugación, el sobrenadante acuoso fue removido y adicionado a un volumen igual de 70% v/v etanol. La solución se mezcó y el RNA se extrajo usando columnas de giro de conjunto RNeasy (Qiagen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El RNA fue levigado usando agua libre de RNAasa y se valoró la integridad, cantidad y concentración de RNA total usando el RNA 6000 Nano Assay (Agilent Technologies, Palo Alto, US) con el Agilent 2100 Bioanalyser (Agilent Technologies) siguiendo las instrucciones del fabricante. Este sistema utiliza electroforesis capilar para separar y detectar fragmentos de ácido nucleico por tamaño a través de los micro canales interconectados en un Nano chip (Agilent Technologies). Un RNA de buena calidad fue significado por un electroferograma exhibiendo un pico de marcador, y dos picos ribosomales de loscuales la banda 18s está a una proporción aproximada de 1 :2 a la banda 28s.

EJEMPLO 2 Análisis estadístico Todos los datos son expresados como promedio ± S.E.M. Un análisis de varianza de una vía en combinación con prueba de Games-Howell o diferencia significativa de mínimos post hoc fueron usados para comparar promedios entre grupos y las pruebas t fueron usadas donde fue apropiado. Se realizó una correlación de Pearson de 2 colas para analizar relaciones entre expresión de genes y fenotipos. Las concentraciones de glucosa en sangre e insulina en plasma fueron transformadas con logaritmos antes de análisis para aproximarse a una distribución normal. Las diferencias fueron consideradas significativas a P<0.05.

EJEMPLO 3 Secuencia de decorin humano Previamente, se ha demostrado que la expresión de decorin (CXS-741 ) es elevada en músculo esquelético y tejido adiposo en animales con resistencia a insulina y diabetes tipo 2 comparados con animales saludables delgados. Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de decorin humano se muestran a continuación: 5'GAATCTACAATAAGACAAATTTCAAATCAAGTTGCTCCACTATACTGCATAA GCAGTTTAGAATCTTAAGCAGATGCAAAAAGAATAAAGCAAATGGGAGGAAA AAAAAGGCCGATAAAGTTTCTGGCTACAATACAAGAGACATATCATTACCATA TGATCTAATGTGGGTGTCAGCCGGAT GTGTTCATTGAGGGAAACCTTATTTTT TAACTGTGCTATGGAGTAGAAGCAGGAGGTTTTCAACCTAGTCACAGAGCAGC ACCTACCCCCTCCTCCTTTCCACACCTGCAAACTCTTTTACTTGGGCTGAATATT TAGTGTAATTACATCTCAGCTTTGAGGGCTCCTGTGGCAAATTCCCGGATTAAA AGGTTCCCTGGTTGTGAAAATACATGAGATAAATCATGAAGGCCACTATCATC CTCCTTCTGCTTGCACAAGTTTCCTGGGCTGGACCGTTTCAACAGAGAGGCTTA TTTGACTTTATGCTAGAAGATGAGGCTTCTGGGATAGGCCCAGAAGTTCCTGA TGACCGCGACTTCGAGCCCTCCCTAGGCCCAGTGTGCCCCTTCCGCTGTCAATG CCATCTTCGAGTGGTCCAGTGTTCTGATTTGGGTCTGGACAAAGTGCCAAAGG ATCTTCCCCCTGACACAACTCTGCTAGACCTGCAAAACAACAAAATAACCGAA ATCAAAGATGGAGACTTTAAGAACCTGAAGAACCTTCACGCATTGATTCTTGT CAACAATAAAATTAGCAAAGTTAGTCCTGGAGCATTTACACCTTTGGTGAAGT TGGAACGACTTTATCTGTCCAAGAATCAGCTGAAGGAATTGCCAGAAAAAATG CCCAAAACTCTTCAGGAGCTGCGTGCCCATGAGAATGAGATCACCAAAGTGCG AAAAGTTACTTTCAATGGACTGAACCAGATGATTGTCATAGAACTGGGCACCA ATCCGCTGAAGAGCTCAGGAATTGAAAATGGGGCTTTCCAGGGAATGAAGAA GCTCTCCTACATCCGCATTGCTGATACCAATATCACCAGCATTCCTCAAGGTCT TCCTCCTTCCCTTACGGAATTACATCTTGATGGCAACAAAATCAGCAGAGTTGA TGCAGCTAGCCTGAAAGGACTGAATAATTTGGCTAAGTTGGGATTGAGTTTCA ACAGCATCTCTGCTGTTGACAATGGCTCTCTGGCCAACACGCCTCATCTGAGG GAGCTTCACTTGGACAACAACAAGCTTACCAGAGTACCTGGTGGGCTGGCAGA GCATAAGTACATCCAGGTTGTCTACCTTCATAACAACAATATCTCTGTAGTTGG ATCAAGTGACTTCTGCCCACCTGGACACAACACCAAAAAGGCTTCTTATTCGG GTGTGAGTCTTTTCAGCAACCCGGTCCAGTACTGGGAGATACAGCCATCCACC TTCAGATGTGTCTACGTGCGCTCTGCCATTCAACTCGGAAACTATAAGTAATTC TCAAGAAAGCCCTCATTTTTATAACCTGGCAAAATCTTGTTAATGTCATTGCTA AAAAATAAATAAAAGCTAGATACTGGAAACCTAACTGCAATGTGGATGTTTTA CCCACATGACTTATTATGCATAAAGCCAAATTTCCAGTTTAAGTAATTGCCTAC AATAAAAAGAAATTTTGCCTGCCATTTTCAGAATCATCTTTTGAAGCTTTCTGT TGATGTTAACTGAGCTACTAGAGATATTCTTATTTCACTAAATGTAAAATrrGG AGTAAATATATATGTCAATATT AGTAAAGCTTTTCTTTTTTAATTTCCAGGAA AAAATAAAAAGAGTATGAGTCTTCTGTAATTCATTGAGCAGTTAGCTCATTTG AGATAAAGTCAAATGCCAAACACTAGCTCTGTATTAATCCCCATCATTACTGG TAAAGCCTCATTTGAATGTGTGAATTCAATACAGGCTATGTAAAATTTTTACTA ATGTCA^ATTTTGAAAAAATAAATTrAAAAATACATTCAAAAlTACTATTGTA TACAAGCI AAT GTTAATATTCCCTAAACACAATTTTATGAAGGAGAAGACA TTGGTTTGTIOACAATAACAGTACATCTTTTCAAGTTCTCAGCTATTTCTTCTAC CTCTCCCTATCTTACATTTGAGTATGGTAACTTATGTCATCTATGTTGAATGTA AGCTTATAAAGCACAAAGCATACATTTCCTGACTGGTCTAGAGAACTGATGTT TCAATTTACCCCTCTGCTAAATAAATATTAAAACTATCATGTG 3'(SEQ TD NO:l) MKATIILLLLAQVSWAGPFQQRGLFDFMLEDEASGIGPEVPDDRDFEPSLGPVCPF RCQCHLRVVQCSDLGLD VPKDLPPDTTLLDLQNNmTEIKDGDF LiaviLHALIL VNNKISKVSPGAFTPLV LERLYLSEKQLKELPEmP TLQELRAHE EITKVRKV TFNGLNQMIVIELGTNPLKSSGIENGAFQGM KXSYIRrADT ITSIPQGLPPSLTEL HLDG KISRVDAASLKGL NLAKLGLSFNSISAVDNGSLANTPHLRELHLDNN L TRWGGLAEHEYIQVWLHN NISWGSSDFCPPGH TKKASYSGVSLFSNPVQY WEIQPSTFRCVYVRSAIQLGNY (SEQ ID N0:2) EJEMPLO 4 Desarrollo de ensayo inmunoabsorbente enlazado a enzima (ELISA) Los niveles que circulan de decorin en plasma humano fueron determinados usando un ELISA. El decorin anti-humano de cabra policlonal (^µg/m ) fue recubierto en una placa de 96 cavidades (Nunc MaxiSorp) en amortiguador de recubrimiento de bicarbonato de sodio, pH 9.5 y se incubó a 4°C durante la noche. El siguiente día, la placa fue lavada cinco veces con 200^l/cavidad de solución salina amortiguada con fosfato (PBS) conteniendo 0.02% p/v Tween-20 (PBST). Los sitios de unión de proteína no específicos en cada cavidad fueron bloqueados vía la adición de 200 l cavidad de PBST conteniendo 3% p/v de albúmina de suero bovino (BSA) e incubación a temperatura ambiente durante una hora. La placa se lavó cinco veces con 200µl/cavidad de PBST y decorin humano recombinante (300ng/ml) se diluyó serialmente 1:3 y se usó como un estándar (1 ??µ?/cavidad) o plasma humano puro se adicionó a las cavidades. La placa se incubó a temperatura ambiente durante dos horas. La placa se lavó cinco veces con 200 l/cavidad de PBST y 10?µ? de decorin anti-humano policlonal de cabra biotiniiado (^µg/m en PBST, 3% p/v BSA) se adicionó a cada cavidad. La placa se incubó a temperatura ambiente durante 1.5 horas. La placa se lavó cinco veces con 200 l/cav¡dad de PBST y 100ul de peroxidasa de rábano picante-avidina extra (HRP) se diluyeron 1:2500 en PBST conteniendo 3% BSA se adicionaron a cada cavidad. La placa se incubó a temperatura ambiente durante 1.5 horas. La placa se lavó cinco veces con 200 l cavidad de PBST y solución de substrato de HRP (NaP04 0.2M, ácido cítrico 0.1 , pH 5.0) se adicionaron a cavidades (???µ?/cavidad) y la placa se dejó desarrollar a temperatura ambiente durante seis minutos. La adición de 50µ? de solución de paro (H3P04 1M) detuvo la reacción. La placa se leyó subsecuentemente en un lector de micropiaca a longitud de onda de 450 nm con una correción de soporte a 630 nm.

EJEMPLO 5 Muestras de plasma humano para clasificación de ELISA Los niveles de decorin fueron medidos en plasma a partir de gente que eran humanos delgados, normoglicémicos y normoinsulinémicos (NGT, n=145) o humanos obesos, hiperglicémicos e hiperinsulinémicos (diabéticos tipo 2) (T2D, n=142). Las características de cada grupo son señaladas en la Tabla 3.

TABLA 3 Características fenotípicas de sujetos humanos en análisis de ELISA de decorin en muestras de plasma EJEMPLO 6 Muestras de tejido adiposo humano para análisis de RT-PCR Los sujetos fueron humanos delgados, normoglicémicos y normoinsulinémicos (NGT, n=18), con tolerancia a glucosa deteriorada (IGT, n=14) y humanos obesos, hiperglicémicos e hiperinsulinémicos (diabéticos tipo 2) (T2D, n=8). Las características de cada grupo son señaladas en la Tabla 4.

TABLA 4 Características fenotípicas de sujetos humanos en análisis de RT-PCR de decorin en muestras de tejido adiposo Ejemplo 7 Bioinformática de decorin El decorin es una proteína de 359 aminoácidos con un péptido de señal. El gene decorin humano está ubicado en el cromosoma 12, se extiende más de 38kb, contiene 8 exones e intrones muy grandes (Danielson et al. Genomics 15(1 ): 146-160, 1993). Existen múltiples variantes de transcripción empalmadas de manera alternativa conocidas para este gene. El decorin es un proteoglicano de matriz ceular o pericelular pequeño que está estrechamente relacionado en estructura a una proteína de biglicano. Se piensa que la proteína codificada y biglicano serán el resultado de una duplicación de gene. Esta proteína es uncomponente de tejido conectivo, se une a fibrillas de colágeno Tipo I, interactúa con factores de crecimiento y juega un papel en elmontaje de matriz (Danielson et al. 1993 supra). Contiene una cadena de glicosaminoglicano unida. Esta proteína es capaz de suprimir el crecimiento de varias líneas de células de tumor. Este gene es un gene candidato para síndrome de Marfan. El decorin es un potente regulador de actividad de TGF-ß (Olguin et al. Dev Biol 259(2):209-224, 2003), jugando un papel funcional para regular señalización de TGF-ß a través de señalización de Ca2+ e inhibición de la ruta Smad (Abdel-Wahab et al. Biochem J 362(3):643-649, 2002). El decorin regular la actividad y expresión de TGF-ß? . detiene la unión de TGFp al receptor de TGFp. Schonherr et al. J Biol Chem 280: 15767-72, 2005, han mostrado que el decorin está involucrado en la señalización de factor de crecimiento similar a insulina-l (IGF-I) (Schonherr et al, 2005 supra). Se une al receptor IGF-I sobre células endoteliales, con una afinidad comparable a IGF-I, y activa su actividad de tirosina cinasa. La adición de decorin provoca que la fosforilación de receptor IGF-I y activación, la cual es seguida por sub-regulación de receptor. IGF-IR es una proteína sinasa de tirsona activada con ligando altamente homologa al receptor de insulina. El decorin también puede interactuar con IGF-I por sí mismo, regulando señalización de IGF. La proteína de decorin contiene repeticiones ricas en leucina (LRRs). Las proteínas conteniendo LRRs están asociadas con funciones ampliamente diferentes, una propiedad común involucra interacción proteína-proteína y adhesión celular. Otras funciones de proteínas conteniendo LRR incluyen, por ejemplo, unión a enzimas y reparación vascular. Las LRRs forman estructuras no globulares alargadas y frecuentemente están flanqueadas por dominios ricos en cisteína. El decorin contiene un dominio rico en cisteína N-terminal para las LRRs. El decorin pertenece a los proteoglicanos ricos en leucina pequeños clase I (SLRPs), conteniendo un pro-péptido. Ameye y Young (2002) revisaron la investigación sobre ratones deficientes en SLRP, declarando que los ratones deficientes en decorin introducen variaciones específicas de tejido en el tamaño de fibrilla de colágeno, provocando que los ratones tengan una piel frágil con fuerza de tensión reducida y una dermis delgada, imitando los defectos observados en el síndrome de Ehlers-Danlos (Ameye y Young Glycobiology 12(9):107R-1 16R, 1999). Las enfermedades tales como osteoporosis, osteoartritis, distrofia muscular, síndrome de Ehlers-Danlos y enfermedades de córnea también son desarrolladas por ratones deficientes en SLRP (Ameye y Young 1999 Supra). Estudios in vitro con células 3T3-L1 han resaltado el papel principal de los proteoglicanos en el crecimiento y diferenciación de adipocitos (Calvo et al. J Biol Chem 266(1 7): 1 1237-1 1244, 1991 ). Musil et al. J Cell Biol 1 14(4):821 -826, 1991 han investigado la acumulación de proteoglicanos durante el proceso de diferenciación 3T3-L1 , con adipocitos maduros que acumulan 50-70% menos decorin comparados con fibroblastos no diferenciados (Musil et al 1991 Supra). Musil et al 1991 supra, formulan la hipótesis de que una vez que la diferenciación está completa, las células solo producen componentes de matriz extracelular suficiente para mantener buen adhesión célula-substrato y célula-célula. Knoll et al. Physiol Genomics 21 (2):222-229, 2005, experimentaron con alteraciones moleculares específicas de tejido en diabetes, comparando cuatro tejidos objetivo diabéticos importantes en ratas con dos semanas de diabetes inducida por estreptozotocina. Encontraron que el decorin que sobre-regulado en varios tejidos (Knoll et al. 2005 supra). Schaefer et al. Faseb J 15(3):559-561 , 2001 mostraron decorin sobre-expresado en tejido renal a partir de pacientes con nefropatía diabética (Schaefer et al. 2001 supra). Mogyorosi y Ziyadeh Nephrol Dial Transpíant 14(5): 1 078-1 081 , 1 999, concluyeron que la abundancia de decorin es incrementada tanto en modelos ¡n vitro como in vivo de enfermedad de riñon diabético (Mogyorosi y Ziyadeh et al. 1999 supra). Olsson et al Diabetes 48(3):616-622, 1999 investigaron el efecto de ácidos grasos no esterificados (NEFA) sobre la expresión de genes para proteoglicanos de matriz extracelular y se encontró que en células de músculo suave, pueden verse alteraciones de morfología celular y un aumento en la expresión de decorin. Además, los NEFAs aumentaron el tamaño de la porción de glicosaminoglicano de decorin por sí mismo (Olsson et al. 1999 supra). El decorin es expresado al hacer brotar células endoteliales (Ees) durante angiogénesis inducida por inflamación in vivo y por células endoteliales humanas co-cultivadas con fibroblastos en un látex de colágeno. Interleucin (IL)-6 e IL-10, dos citocinas liberadas durante la inflamación, inducen mRNA de decorin en células endoteliales, pero la interacción con colágeno fibrilar es esencial para su traducción (Strazynski et al. J Biol Chem 279(20:21266-21270, 2004).

EJEMPLO 8 Expresión de gene de decorin como se mide mediante RT-PCR de verde de H. sapiens La expresión de gene de decorin en tejido adiposo subcutáneo y visceral de H. sapiens 18 NGT, 14 IGT y 6 T2D fue analizada mediante PCR de tiempo real. La expresió de gene de decorin fue significativamente mayor sobre todo en tejido visceral comparado con tejido adiposo subcutáneo (p=0.001 1 ). La expresión de gene de decorin fue significativamente mayor en tejido adiposo visceral T2D comparado con tejido adiposo visceral de NGT (p=0.0201 ), significativamente mayor en IGT subcutáneo comparado con NGT subcutáneo (p=0.048). Además, la expresión de gene de decorin fue significativamente mayor en NGT visceral comparado con NGT subcutáneo (p=0.0138) y significativamente mayor en T2D visceral comparado con T2D subcutáneo (p=0.0034). Estos datos identifican el decorin como un nuevo producto secretado de tejido adiposo que es producido preferencialmente por grasa visceral abdominal, la acumulación de la cual ha sido enlazada a riesgo incrementado de resistencia a insulina y diabetes tipo 2. Más aún, la mayor expresión de decorin en tejido adiposo visceral de H. sapiens IGT y T2D comparado con NGT, eleva la posibilidad de que el decorin puede contribuir al desarrollo de resistencia a insulina y disregulación de homeostasis de glucosa asociada con diabetes tipo 2.

TABLA 5 Expresión de gene de decorin en tejido visceral y adiposo subcutáneo de H. sapiens EJEMPLO 9 Expresión de gene de CXS-741 como se mide mediante ELISA en muestras de plasma humano Se desarrolló un ELISA de decorin para medir los niveles de decorin en plasma humano a partir de 145 sujetos humanos de NGT y 142 de T2D (Tabla 6). El decorin de plasma medido mediante ELISA fue eonctrado significativamente elevado por 14% en sujetos T2D (p=0.043). Adicionalmente, en los niveles de decorin de plasma de sujetos masculinos correlacionados con circunferencia de cintura (p=0.007) y tanto niveles de ayuno como de 2 horas de glucosa en un OGTT (p=0.024 y p=0.001 , respectivamente). Estos hallazgos indican que el decorin de plasma circulante se correlaciona con la resistencia a insulina y agentes terapéuticos diseñados para alterar los niveles de decorin o que modulan la actividad de decorin, pueden ser terapias úitles en el tratamiento de diabetes tipo 2 y trastornos relacionados. Además, los niveles circulantes elevados de decorin también pueden ser usados para predecir el inicio de diabetes tipo 2 y condiciones asociadas con ella, tales como ceguera, nefropatía y/o enfermedad cardiovascular.

TABLA 6 Decorin de plasma en muestras de plasma humano de NGT y T2D Aquéllos expertos en la técnica apreciarán que la invención descrita en la presente es susceptible a variaciones y modificaciones diferentes a aquéllas descritas de manera específica. Se entenderá que la invención incluye todas esas variaciones y modificaciones. La invención también incluye todos los pasos, características, composiciones y compuestos referidos a o indicados en esta especificación, de manera individual o colectiva, y cualquiera y todas las combinaciones de dos o más de dichos pasos o características.

BIBLIOGRAFIA Abdel-Wahab et al. Biochem J 362(3):643-649, 2002 Ameye y Yong Glycobiology 12(9): 107R-1 16R, 1 999 Altschul et al. Nucí Acids Res 25:33989, 1997 Ausubel et al. "Current Protocols in Molecular Biology" (Protocolos actuales en biología molecular), John Wiley & Sons Inc. , capítulo 15, 1994-1998 Bonner y Laskey, Eur J Biochem 46:83, 1974 Calvo et al J Biol Chem 266(17): 1 1237-1 1244, 1 991 Danielson et al. Genomics 15(1 ): 146-160, 1993 Doullard y Hoffman Compendium of Immunology (Compendio de inmunología) Vol. II, ed. Por Schwartz, 1 981 Knoll et al. Physiol Genomics 21 (2):222-229, 2005 Kohler y Milstein Nature 256:495-499, 1975 Mogyorosi y Ziyadeh Nephrol Dial Transplant 14(5): 1 078-1081 , 1999 Mokdad Diabetes Care 24(2):412, 2001 Musuil et al. J Cell Biol 14(4):821 -826, 1991 Olguin et al. Dev Biol 259(2):209-224, 2003 Olsson et al. Diabetes 48(3):616-622, 1999 Schaefer et al. Faseb J 15(3):559-561 , 2001 Schonherr et al. J Biol Chem 280: 15767-72, 2005 Strazynski et al. J Biol Chem 279(20:21266-21270, 2004 Patente estadounidense no. 4,016,043 Patente estadounidense no. 4,018,653 Patente estadounidense no. 4,424,279

Claims

REIVINDICACIO ES 1. Un método para diagnosticar diabetes o una complicación que surge de la diabetes o una predisposición a desarrollar diabetes en un sujeto, que comprende los pasos de: (a) obtener una o más muestras biológicas de dicho sujeto; y (b) medir los niveles de un biomarcador específico de diabetes, en donde una diferencia en el nivel de dicho biomarcador específico de diabetes en dicha(s) muestra(s) biológica(s) comparado con una muestra de control es indicativa de que dicho sujeto tiene diabetes o una complicación que surge de la diabetes o una predisposición a desarrollar diabetes. 2. El método de la reivindicación 1 , en donde un nivel elevado de dicho biomarcador específico de diabetes en dicho sujeto comparado con un control, es indicativo de que dicho sujeto tiene diabetes o una complicación que surge de la diabetes o una predisposición a desarrollar diabetes. 3. El método de la reivindicación 1 o 2, en el cual dicho biomarcador específico de diabetes es decorin. 4. El método de la reivindicación 1 o 2, en el cual dicho biomarcador específico de diabetes es CXS-744. 5. El método de la reivindicación 3, en donde dicha secuencia de ácido nucleico específica de decorin es descrita en SEQ ID NO: 1 o su complemento. 6. El método de la reivindicación 4, en donde dicha secuencia de ácido nucleico de CXS-744 es descrita en SEQ ID NO:3 o su complemento. 7. El método de la reivindicación 1 , en donde la muestra biológica es seleccionada de sangre entera, plasma de sangre, suero, moco, orina, semen, fluido respiratorio, fluido linfático y saliva. 8. El método de la reivindicación 1 , en donde dicho biomarcador de diabetes es un ácido ribonucleico. 9. El método de la reivindicación 8, en donde dicha detección es definida adicionalmente como contactar dichos ácidos ribonucleicos con una sonda de oligonucleótido que hibride a los mismos bajo condiciones de alta severidad y entonces detectar la hibridación. 10. El método de la reivindicación 9, en donde dicha hibridación es detectada por hibridación Northern o hibridación in situ. 1 1. El método de la reivindicación 9, que comprende además determinar la cantidad de ácido ribonucleico a la cual híbrida la sonda. 12. El método de la reivindicación 9, en el cual la secuencia de dicha sonda es seleccionada para unirse de manera específica a un mRNA de decorin o un fragmento del mismo o un cDNA del mismo. 13. El método de la reivindicación 10, en el cual la secuencia de dicha sonda es seleccionada para unirse de manera específica a un mRNA de CXS/744 o un fragmento del mismo o un cDNA del mismo. 14. El método de la reivindicación 12, en donde dicha sonda de oligonucleótido es seleccionada para unirse de manera específica a un ácido nucleico aislado teniendo una secuencia o su complemento como se describe en SEQ ID NO: 1 . 15. El método de la reivindicación 1 3, en donde dicha sonda de oligonucleótido es seleccionada para unirse de manera específica a un ácido nucleico aislado teniendo una secuencia o su complemento como se describe en SEQ ID NO:3. 16. El método de la reivindicación 9, en donde dichos ácidos ribonucleicos son amplificados para formar productos de amplificación de ácidos nucleicos. 17. El método de la reivindicación 16, en donde dicha amplificación es mediante RT-PCR. 18. El método de la reivindicación 17, en donde dicha amplificación comprende contactar dichos ácidos ribonucleicos con un par de iniciadores de amplificación diseñados para amplificar un mRNA de decorin o CXS-744. 19. El método de la reivindicación 18, en donde dicha amplificación comprende contactar dichos ácidos ribonucleicos con un par de iniciadores de amplificación diseñados para amplificar un segmento de ácido nucleico comprendiendo un segmento detectable de un ácido nucleico teniendo la secuencia o complemento de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3. 20. El método de la reivindicación 19, en donde dicho segmento detectable es desde aproximadamente 1 00 bases de longitud, hasta aproximadamente la longitud de las secuencias de codificación de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3. 21 . El método de la reivindicación 1 , definido además como que detecta la diferencia en cantidad de expresión de un polipéptido biomarcador específico de diabetes. 22. El método de la reivindicación 21 , en donde el biomarcador específico de diabetes es decorin. 23. El método de la reivindicación 21 , en donde el biomarcador específico de diabetes es CXS-744. 24. El método de la reivindicación 21 , en donde dicha detección es por inmunoensayo. 25. El método de la reivindicación 24, en donde dicho inmunoensayo es un ELISA. 26. El método de la reivindicación 24, en donde dicho inmunoensayo es un radioinmunoensayo. 27. El método de la reivindicación 22, en donde la secuencia de aminoácidos específica de decorin es descrita en SEQ ID NO:2. 28. El método de la reivindicación 23, en donde la secuencia de aminoácidos específica de CXS-744 es descrita en SEQ ID NO:4. 29. El método de la reivindicación 22, en donde dicho polipéptido de decorin es codificado por SEQ ID NO: 1 . 30. El método de la reivindicación 23, en donde dicho polipéptido de CXS-744 es codificado por SEQ ID NO:3. 31 . Un método para diagnosticar diabetes o una complicación que surge de diabetes o una predisposición a desarrollar diabetes en un sujeto, que comprende: (a) obtener una muestra de suero de dicho sujeto; (b) contactar dicha muestra de suero con un anticuerpo inmunoreactivo con decorin o CXS-744 para formar un inmunocomplejo; (c) detectar dicho inmunocomplejo; y (d) comparar la cantidad de dicho inmunocomplejo a la cantidad de inmunocomplejo formada bajo condiciones idénticas con el mismo anticuerpo y un suero de control de uno o más controles, en donde un aumento en la cantidad de dicho inmunocomplejo en el suero de dicho sujeto en relación con dicho suero de control, es indicativo de diabetes o una complicación que surge de diabetes o una predisposición a desarrollar diabetes. 32. El método de la reivindicación 31 , en donde dicho inmunocomplejo es detectado en un ensayo de Western blot. 33. El método de la reivindicación 31 , en donde dicho inmunocomplejo es detectado en un ELISA. 34. Un conjunto para usarse para diagnosticar diabetes o una complicación que surge de la diabetes o una predisposición a desarrollar diabetes en una muestra biológica, que comprende: (a) uno o más segmentos de ácido nucleico que hibridan selectivamente un mRNA de decorin o CXS-744; y (b) un recipiente para cada uno de dicho uno o más segmentos de ácido nucleico. 35. El conjunto de la reivindicación 34, en donde dicho uno o más segmentos de ácido nucleico hibridan selectivamente un segmento de ácido nucleico que incluye la secuencia o complemento de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3. 36. El conjunto de la reivindicación 35, en donde dicho uno o más segmentos de ácido nucleico es un par de iniciadores para amplificar dicho mRNA. 37. Un conjunto para usarse para diagnosticar diabetes o una complicación que surge de diabetes o una predisposición a desarrollar diabetes en una muestra biológica, que comprende: (a) uno o más anticuerpos que inmunoreaccionan con una proteína o péptido de decorin o CXS-744; y (b) un recipiente para dichos anticuerpos. 38. Un método para diagnosticar obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad en un sujeto, que comprende los pasos de: (a) obtener una o más muestras biológicas de dicho sujeto; y (b) medir los niveles de un biomarcador específico de obesidad, en donde una diferencia en el nivel de dicho biomarcador específico de diabetes en dicha o dichas muestras biológicas comparado con una muestra de control es indicativo de que dicho sujeto tiene obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad. 39. El método de la reivindicación 38, en donde un nivel elevado de dicho biomarcador específico de obesidad en dicho sujeto comparado con un control, es indicativo de que dicho sujeto tiene obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad. 40. El método de la reivindicación 38 o 39, en el cual dicho biomarcador específico de obesidad es decorin. 41. El método de la reivindicación 38 o 39, en el cual dicho biomarcador específico de obesidad es CXS-744. 42. El método de la reivindicación 38, en donde dicha secuencia de ácido nucleico específica de decorin es descrita en SEQ ID NO: 1 o su complemento. 43. El método de la reivindicación 41 , en donde dicha secuencia de ácido nucleico de CXS-744 es descrita en SEQ ID NO:3 o su complemento. 44. El método de la reivindicación 38, en donde la muestra biológica es seleccionada de sangre entera, plasma de sangre, suero, moco, orina, semen, fluido respiratorio, fluido linfático y saliva. 45. El método de la reivindicación 38, en donde el biomarcador de obesidad es un ácido ribonucleico. 46. El método de la reivindicación 45, en donde dicha detección es definida adicionalmente como contactar dichos ácidos ribonucleicos con una sonda de oligonucleótido que híbrida a los mismos bajo condiciones de alta severidad y entonces detectar la hibridación. 47. El método de la reivindicación 46, en donde dicha hibridación es detectada por hibridación Northern o hibridación in situ. 48. El método de la reivindicación 46, que comprende además determinar la cantidad de ácido ribonucleico a la cual híbrida la sonda. 49. El método de la reivindicación 46, en el cual la secuencia de dicha sonda es seleccionada para unirse específicamente a un mRNA de decorin o un fragmento del mismo o cDNA del mismo. 50. El método de la reivindicación 47, en el cual la secuencia de dicha sonda es seleccionada para unirse específicamente a un mRNA de CXS-744 o fragmento del mismo o cDNA del mismo. 51. El método de la reivindicación 49, en donde dicha sonda de oligonucleótido es seleccionada para unirse de manera específica a un ácido nucleico aislado teniendo una secuencia o su complemento como se describe en SEQ ID NO: 1 . 52. El método de la reivindicación 50, en donde dicha sonda de oligonucleótido es seleccionada para unirse específicamente a un ácido nucleico aislado teniendo una secuencia o su complemento como se describe en SEQ ID NO:3. 53. El método de la reivindicación 46, en donde dichos ácidos ribonucleicos son amplificados para formar productos de amplificación de ácido nucleico. 54. El método de la reivindicación 53, en donde dicha amplificación es mediante RT-PCR. 55. El método de la reivindicación 54, en donde dicha amplificación comprende contactar dichos ácidos ribonucleicos con un par de iniciadores de amplificación diseñados para amplificar un mRNA de decorin o CXS-744. 56. El método de la reivindicación 55, en donde dicha amplificación comprende contactar dichos ácidos ribonucleicos con un par de iniciadores de amplificación diseñados para amplificar un segmento de ácido nucleico comprendiendo un segmento detectable de un ácido nucleico teniendo la secuencia o complemento de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3. 57. El método de la reivindicación 56, en donde dicho segmento detectable es desde aproximadamente 100 bases de longitud hasta aproximadamente la longitud de las secuencias de codificación de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO:3. 58. El método de la reivindicación 38, definido además como que detecta la diferencia en cantidad de expresión de un polipéptido biomarcador específico de obesidad. 59. El método de la reivindicación 58, en donde el biomarcador específico de diabetes es decorin. 60. El método de la reivindicación 58, en donde el biomarcador específico de obesidad es CXS-744. 61. El método de la reivindicación 58, en donde dicha detección es por inmunoensayo. 62. El método de la reivindicación 61 , en donde dicho inmunoensayo es un ELISA. 63. El método de la reivindicación 61 , en donde dicho inmunoensayo es un radioinmunoensayo. 64. El método de la reivindicación 59, en donde la secuencia de aminoácidos específica de decorin es descrita en SEQ ID NO:2. 65. El método de la reivindicación 60, en donde la secuencia de aminoácidos específica de CXS-744 es descrita en SEQ ID NO:4. 66. El método de la reivindicación 59, en donde dicho polipéptido de decorin es codificado por SEQ ID NO: 1 . 67. El método de la reivindicación 60, en donde dicho polipéptido de CXS-744 es codificado por SEQ ID NO:3. 68. Un método para diagnosticar obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad en un sujeto, que comprende: (a) obtener una muestra de suero de dicho sujeto; (b) contactar dicha muestra de suero con un anticuerpo inmunoreactivo con decorin o CXS-744 para formar un inmunocomplejo; (c) detectar dicho inmunocomplejo; y (d) comparar la cantidad de dicho inmunocomplejo con la cantidad de inmunocomplejo formada bajo condiciones idénticas con el mismo anticuerpo y un suero de control de uno o más controles, en donde un aumento en la cantidad de dicho inmunocomplejo en suero de dicho sujeto en relación a dicho suero de control es indicativo de obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad. 69. El método de la reivindicación 68, en donde dicho inmunocomplejo es detectado en un ensayo de Western blot. 70. El método de la reivindicación 68, en donde dicho inmunocomplejo es detectado en un ELISA. 71 . Un conjunto para usarse para diagnosticar obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad en una muestra biológica, que comprende: (a) uno o más segmentos de ácido nucleico que hibridan de manera selectiva un mRNA de decorin o CXS-744; y (b) un recipiente para cada uno de dichos uno o más segmentos de ácido nucleico. 72. El conjunto de la reivindicación 71 , en donde dicho uno o más segmentos de ácido nucleico hibridan de manera selectiva un segmento de ácido nucleico que incluye la secuencia o complemento de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3. 73. El conjunto de la reivindicación 72, en donde dicho uno o más segmentos de ácido nucleico son parte de un par de iniciadores para amplificar dicho mRNA. 74. Un conjunto para usarse para diagnosticar obesidad o una predisposición a desarrollar obesidad en una muestra biológica, que comprende: (a) uno o más anticuerpos, los cuales inmunoreaccionan con una proteína o péptido de decorin o CXS-744; y (b) un recipiente para dichos anticuerpos.