MXPA06006928A - Derivados de 1-[(3-indol-3-il)carbonil] piperazina ciclica como agonistas del receptor canabinoide cb1. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere a un derivado de 1-[(3-indol-3-il)carbonil] piperazina triciclica que tiene la Formula (I) general en donde X es CH2, O o S; R representa sustituyentes 1 a 3 seleccionados independientemente de H, alquilo de 1 a 4 atomos de carbono, alquiloxi de 1 a 4 atomos de carbono y halogeno; R1 es cicloalquilo de 5 a 8 atomos de carbono; R2 es H o alquilo de 1 a 4 atomos de carbono; R3, R3', R4, R4', R5, R5' y R6' son, independientemente, hidrogeno o alquilo de 1 a 4 atomos de carbono, sustituidos opcionalmente con alquiloxi de 1 a 4 atomos de carbono, OH o halogeno; R6 es hidrogeno o alquilo de 1 a 4 atomos de carbono, sustituido opcionalmente con alquiloxi de 1 a 4 atomos de carbono, OH o halogeno; o R6 forma junto con R7 un anillo heterociclico saturado de 4 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de O y S; R7 forma junto con R6 un anillo heterociclico saturado de 4 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de O y S; o R7 es H, alquilo de 1 a 4 atomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 5 atomos de carbono, los grupos alquilo que estan sustituidos opcionalmente con OH, halogeno o alquiloxi de 1 a 4 atomos de carbono,; o una sal de los mismos farmaceuticamente aceptable. La presente invenciones refiere ademas a composiciones farmaceuticas que comprenden dichos derivados de 1-[(3-indol-3-il)carbonil] piperazina triciclica y al uso de dichos derivados en el tratamiento del dolor, tal como dolor peri-operatorio, dolor cronico, dolor neuropatico, dolor de cancer y dolor y espasticidad asociados con esclerosis multiple.

Description

DERIVADOS DE 1 -[(3-INDOL-3-IL)CARBONIL]PIPERAZINA CÍCLICA COMO AGONISTAS DEL RECEPTOR CANABINOIDE CB1 La presente invención se refiere a derivados de 1 -[(indol-3-if)carbom'[] piperazina cíclica, a composiciones farmacéuticas que comprenden los mismos y al uso de estos derivados tricí clicos de 1 - [(indo(-3-il)carbonil] piperazina en terapia, especialmente en el tratamiento del dolor. Ef tratamiento del dofor está (imitado con frecuencia por los efectos colaterales de la medicación corrientemente disponible. Para dofores moderados a severos, se usan ampliamente los opiodes. Estos agentes son económicos y efectivos, pero tienen efectos colaterales serios y potencialmente peligrosos para la vida, principalmente depresión respiratoria y rigidez muscular. Además, las dosis de opiodes que pueden ser administradas están limitadas por náusea, emesis, constipación, prurito y retención urinaria, resultando con frecuencia en pacientes que se eligen para recibir control del dolor sub-óptimo en lugar de sufrir estos efectos colaterales angustiantes. Además, estos efecíos colaterales resultan con frecuencia en pacientes que requieren hospitalización prolongada. Los opiodes son altamente aditivos y son fármacos programados en muchos territorios. Existe por lo tanto una demanda de nuevos analgésicos que tengan un perfil mejorado de efectos colaterales en comparación con los productos usados actualmente, en dosis analgésico-equivalentes . Se está acumulando evidencia de que los agonistas de canabinoide tienen potencia? como agentes analgésicos y antiinflamatorios. Están implicados dos tipos de receptores de canabinoid , receptor de canabinoide CB1 , el cual está ubicado principalmente en el sistema nervioso central, pero el cual es expresado también por neuronas periféricas y, en un grado menor, en otros tejidos periféricos, y el receptor de canabinoide CB2, el cual está ubicado principalmente en células inmunes (HowJJet, A. C. y colaboradores: International Union of Pharmacology. XXVII.

Clasificación de Receptores de Canabinoide. PharmacoJ. Rev. 54, 161 -202, 2002). Aunque el receptor CB2 ha sido implicado en la modulación de la respuesta inmune y aniiinflamatoria de canabinoides, los agonistas de receptor de canabinoide, especialmente aquellos que actúan en el receptor CB1 han sido sugeridos recientemente como útiles en el tratamiento del dolor (ver Iversen, L y Chapman, V. Current Opinión in Pharmacology, 2, 50-55, 2002 y referenciasen la misma). La WIN 55, 212-2, la sal de mesilato de (R)-(+)-[2,3-dihidro-5-met?l-f(morfolinil) metil] pirrólo [I ^S-deJ-l ^-benzoxazinilHI -naftalenil) metanona se describe en la patente de E. U. No. 4,939, 138 (Steriing Drug Inc.) como un agentes analgésico. El compuesto es el prototipo de aminoalquilindoles (Eissenstat y colaboradores, J . Med. Chem. 38., 3094-3105, 1995), los cuales son agonistas de receptor canabinoide CB 1 potentes que pueden producir antinocicepción con eficacia equivalente a la morfina en modelos animales de dolor agudo, dolor inflamatorio persistente y dolor neuropático.

W1N55212-2 (sai de mesilato) Los derivados de pirrólo [1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina carboxamida estructuralmente relacionados de manera muy estrecha se han descrito en WO 2001 /58869 (Bristol-Myers Squibb Comp .) Como moduladores de receptor de canabinoide útiles para el tratamiento de enfermedades respiratorias. Los derivados de 3-carboxamido-indol tricíclico similares han sido descritos como agonistas deJ receptor 5-HT en EP 0 393 766 (Duphar ínter. Res. B.V. ). Los agonistas de canabínoide conocidos son en general altamente lipofílicos e insolubles en agua. Así, existe una necesidad de agonistas de canabinoide con propiedades mejoradas para uso como agentes terapéuticos. Para este fin, la presente invención proporciona derivados de 1 -[(indol-3-il) carbonil] piperazina tricíclica que tienen la fórmula general í: Fórmula I en donde: X es CH2, O o S; R representa sustituyentes 1 -3 seleccionados independientemente de H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono y halógeno; Ri es cicloalquilo de 5 a 8 átomos de carbono; R2 es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; 3, R3', 4, R? Rs, Rs' y Re' son, independientemente, hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, sustituidos opcionalmente con alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono, OH o halógeno; R6 es hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, sustituido opcionalmente con alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono, OH o halógeno; o R6 forma junto con R7 un anillo heterocíclico saturado de 4 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de O y S; R7 forma junto con Re un anillo heterocíclico saturado de 4 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de O y S; o R7 es H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloaíquilo de 3 a 5 átomos de carbono, los grupos alquilo que están sustituidos opcionalmente con alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono, OH o halógeno; o una sal de los mismos farmacéuticamente aceptable, como agonistas del receptor de canabinoide CB1 , que pueden ser usado en el tratamiento de dolor, tal como por ejemplo, dolor peri-operatorio, dolor crónico, dolor neuropático, dolor de cáncer y dolor y espasticidad asociados con esclerosis múltiple. Las estructuras tricíclicas de núcleo de los derivados de 1 -[(indol- 3-il) carbonil] piperazina de la invención son 2,3-dihidro-pirrolo [3,2, 1 -ij] quinolina, donde X es CH2; 2,3-dihidro-pirrolo-[1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina, donde X es oxígeno y 2,3-dihidro-pirrolo [1 ,2,3-de]-1 ,4-benzotiazina, donde X es azufre. Los compuestos de la invención donde X es oxígeno, se describen genéricamente en WO 2001 /58869 (supra) como moduladores de receptor de canabinoide para tratar enfermedades respiratorias. Estos moduladores se identifican de preferencia ahí como moduladores de receptor CB2. Los derivados de la 2,3-dihidro-pirrolo [1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina descritos en la WO 2001/58869 se caracterizan por la presencia de una cadena lateral de (4-morfolinii) metilo unida en la posición 3 del anillo de benzoxazina. Los derivados de la 1 -[(indol-3-ii) carbonil] piperazina tricíclica de la invención se distinguen de aquellos de la WO 2001 /58869 por tener una cadena lateral de cicloalquilo de 5 a 8 átomos de carbono en la posición correspondiente, un aspecto que proporciona compuestos que tienen actividad agonistas de CB1. El término alquilo de 1 a 4 átomos de carbono como se usa en la definición de la fórmula I significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, como butilo, isobutilo, butilo terciario, propilo, isopropilo, etilo y metilo. En el término aiquiioxi de 1 a 4 átomos de carbono, el alquilo de 1 a 4 átomos de carbono tiene el significado que se definió antes. El término cicloalquilo de 5 a 8 átomos de carbono significa un grupo alquilo cíclico saturado que tiene de 5 a 8 átomos de carbono y, así, puede representar ciclopentilo, ciciohexilo , cicioheptilo o ciclooctilo. El término halógeno significa F, Cl, Br o l. En la definición de Ja fórmula I, R6 puede formar junto con R7 un anillo heterocíclico saturado de 4 a 7 miembros, lo que significa que R junto con el átomo de carbono al cual está unido y R7 junto con el átomo de nitrógeno al cual está unido completan un anillo saturado de 4 a 7 miembros, tal como un anillo de azetidina, una pirrolidina, una piperidina o una 1 H-azepina . Tales anillos pueden contener un heteroátomo adicional de O o S para formar anillos tales como un anillo de una morfolina, una tiomorfolina, un tetrahidrotiazol-o isotiazol. Existe una preferencia por los derivados de 1 -[(indol-3-il) carbonil] piperazina tricíclica de la fórmula I en donde R es H y R-¡ es ciclopentilo o ciciohexilo. Los derivados de 1-[(indol-3-il) carbonil] piperazina tricíclica de la fórmula I en donde R-, , R2, R3 l R3', R ', R5, Rs' y R6' son H; R , R6 y R7 son, independientemente, H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; o R6 forma junto con R7 un anillo heterocíclico saturado de 5 o 6 miembros y R4 es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono se prefieren especialmente. En el caso donde X es O, existe una preferencia adicional para aquellos isómeros en los cuales la estereoquímica en la posición 3 del anillo de benzoxazina es (R). Los derivados de 1-[(indol-3-il) carbonil] piperazina tricíclica de la invención pueden prepararse mediante métodos conocidos en la técnica de la química orgánica en general. Las 1 -[(indol-3-il) carbonil] piperazinas tricíclicas de la fórmula I se pueden preparar, por ejemplo, a partir de la condensación de un compuesto de la fórmula II, en donde R, R?, R2 y X tienen el significado que se definió previamente y C(O)Y representa un ácido carboxílico o un derivado activado del mismo, tal como un éster de ácido carboxílico o un haluro de ácido carboxílico, de preferencia un cloruro o un bromuro, con un compuesto de la fórmula lll donde R3 a R7 tienen el significado que se definió previamente. Cuando R7 en los compuestos de la fórmula lll representa hidrógeno, el átomo de nitrógeno al cual está unido puede tener que ser protegido temporalmente durante la reacción de condensación. Los grupos protectores adecuados para los grupos funcionales que van a ser protegidos temporalmente durante las síntesis se conocen en la técnica, por ejemplo de Wuts, P.G.M. y Greene, T.W. : Grupos Protectores en Sintesis Orgánica, tercera edición, Wiley, New York, 1999. Cuando C(O)Y representa un ácido carboxílico (es decir, Y es hidroxi) la reacción de condensación puede ser efectuada con la ayuda de un reactivo de acoplamiento, tal como, por ejemplo, carbonil diimidazol, diciclohexilcarbodiimida y los similares, en un solvente tal como dimetilformamida o diclorometano. Cuando C(0)Y represenía un haluro de ácido carboxílico (es decir, Y es haluro) la condensación con el derivado de amina de la fórmula III puede ser llevada a cabo en ¡a presencia de una base, por ejemplo, trietilamina, en un solvente tal como diclorometano. Cuando C(O)Y representa un éster de ácido carboxílico, se puede llevar a cabo una condensación directa con el derivados de amina de la fórmula lll a una temperatura elevada.

Fórmula II Fórmula lll Los compuestos de la fórmula lll se pueden obtener de fuentes comerciales, se pueden preparar mediante procedimientos de la literatura o modificaciones de procedimientos de la literatura conocidos por aquellas personas expertas la técnica. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula lll se pueden preparar mediante la reducción de una dicetopiperazina, usando un agente de reducción tal como hidruro de litio aluminio o complejo de borano-tetrahidrofurano como se describe por M. E. Jung y J. C. Rohloff (J. Org. Chem. 50, 4909-4913, 1985). Las dicetopiperazinas se pueden preparar mediante una variedad de rutas, como se describe por C. J . Dinsmore y D. C. Bershore (Tetrahedron 58, 3297-3312, 2002). Los compuestos de ia fórmula il se pueden preparar mediante procedimientos de la literatura o modificaciones de procedimientos de la literatura conocidos por aquellas personas expertas la técnica. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula II donde C(0)Y representa un ácido carboxílico y R2 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono se pueden preparar mediante la alquilación de compuestos de la fórmula ll donde C(0)Y representa un ácido carboxílico y R2 es hidrógeno, mediante tratamiento con por lo menos dos equivaleníes de una base fuerte, tal como n-butil líquido, seguido por tratamiento con un agente de alquilación, tal como un haJuro de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono. Los compuestos de la fórmula ll se pueden preparar mediante acilación de un compuesto de la fórmula IV, usando un reactivo de aci?ación. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula II donde Y es hidroxi pueden ser accedidos a partir de compuestos de la fórmula IV mediante tratamiento con anhídrido trifluoroacético en un solvente tal como dimetilformamida, seguido por hidrólisis usando hidróxido de sodio acuoso a una temperatura elevada. Los compuestos de la fórmula II donde Y es cloruro se pueden preparar mediante reacción de un compuesto de la fórmula IV con cloruro de oxalilo en un solvente tal como 1 , 1 ,2 ,2-tetracloroetano seguido por rearreglo a temperatura elevada. Los compuestos de la fórmula IV se pueden preparar a partir de compuestos de la fórmula V usando la síntesis de indol de Fischer (Chem. Rev. 69, 227-250, 1969).

Fórmula IV Fórmula V Fórmula VI Alternativamente, los compuestos de la fórmula II se pueden preparar a partir de compuestos de la fórmula V usando procedimientos descritos por Wijngaarden y colaboradores (J . Med. Chem. 36, 3693- 3699, 1993) o Hwu y colaboradores (J. Org. Chem. 59, 1577-1582 , 1994) o modificaciones de estos procedimientos. Los compuestos de la fórmula V se pueden preparar mediante procedimientos de la literatura o modificaciones de los procedimientos de la literatura conocidos por aquellas personas expertas en la técnica.

Por ejemplo, los compuestos de la fórmula V donde X es CH2 se pueden preparar a partir de compuestos de la fórmula VI mediante reducción, usando un agente de reducción tal como borohidruro de sodio en la presencia de un catalizador tal como cloruro de níquel (ll). Los compuestos de la fórmula VI se pueden preparar, por ejemplo, mediante de una reacción de acoplamiento, tal como la reacción de una 2-cloroquinolina con un reactivo de Grignard de cicloalquilo de 5 a 8 átomos de carbono, en la presencia de un catalizador tal como cloruro de níquel (II). Los compuestos de la fórmula V donde X es O o S se pueden preparar mediante reacción de un compuesto de fa fórmula Vf l para formar un éter o tioéter, seguido por la reducción del grupo nitro a una amina y ciclización reductora. La reacción de eterificación se puede realizar, por ejemplo, en la presencia de una base, tal como carbonato de potasio, con un catalizador tai como yoduro de potasio. La reducción y ciclización se pueden llevar a cabo, por ejemplo , usando gas hidrógeno en la presencia de un catalizador tal como paladio o carbón .

Fórmula VII Fórmula VIII Fórmula IX Los compuestos de la fórmula Vil y los compuestos de la fórmula VIII se pueden obtener de fuentes comerciales, se pueden preparar mediante procedimientos de la literatura o modificaciones de los procedimientos de la literatura conocidos por aquellas personas expertas en la técnica. Por ejemplo, los compuestos de la fórmu la VI I I se pueden preparar a partir de compuestos de la fórmula IX usando un agente de bromación tal como bromo en un solvente tal como metanol. La persona experta apreciará igualmente que se pueden obtener varios derivados de 1 -[(indol-3-il)-carbonil] piperazina tricíclica de la fórmula I mediante reacciones de conversión apropiadas de grupos funcionales q ue corresponden a ciertos de los sustituyentes R y R3 a R . Por ejemplo, los compuestos de la fórmula I en donde R7 3 alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 5 átomos de carbono, los grupos alquilo que pueden ser sustituidos con OH, halógeno o alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono, se pueden preparar mediante la reacción de un compuesto de la fórmula I en donde R7 es halógeno con un haluro de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o un haluro de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono funcionalizado, en ia presencia de una base tal como carbonato de potasio. Los derivados de 1 -[(ind í-3-il) carbonil] piperazina tricíclica de la fórmula I y sus sales contienen por lo menos un centro de quiralidad, y existen, por lo tanto, como estereoisómeros, incluyendo enantiómeros y diastereómeros. La presente invención incluye los estereoisómeros antes mencionados dentro de su alcance y cada uno de los enantiómeros R y S individuales de los compuestos la fórmula l y sus sales, sustancialmente libres, es decir asociados con menos de 5%, de preferencia menos de 2%, en particular menos de 1 % del otro enantiómero, y mezclas de tales enantiómeros en cualesquiera proporciones incluyendo las mezclas racémicas que contienen sustanciaímente cantidades iguales de los dos enantiómeros. Los métodos para síntesis asimétrica o separación quiral mediante los cuales se obtienen los estereoisómeros puros son bien conocidos en la técnica, por ejemplo, síntesis con inducción o punto de partida quiral de sustratos quirales disponibles comercialmente, o separación de estereoisómeros, por ejemplo usando cromatografía en medio quiral o mediante cristalización con un contra-ión quiral. Las sales farmacéuticamente aceptables se pueden obtene mediante tratamiento de una base libre de un compuesto de la fórmula I con un ácido mineral tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico y ácido sulfúrico, o un ácido orgánico tal como, por ejemplo, ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido maleico, ácido malónico, ácido fumárico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido propiónico, ácido acético, ácido metansulfónico, y los similares. Los compuestos de la invención pueden existir en formas no solvadas así como también en solvatadas con solventes farmacéuíicameníe acepfables tales como agua, etanol y Jos similares. En general, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas no solvatadas para el propósito de la invención. La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que comprenden un derivado de 1 -[(indol-3-il) carbonil] piperazina tricíclica que tiene la fórmula general I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en mezcla con auxiliares farmacéuticamente aceptables, y opcionalmente otros agentes terapéuticos. El término "aceptable" significa que es compatible con los otros ingredientes de la composición y no prejudicial para los recipientes del mismo. Las composiciones incluyen, por ejemplo, aquellas adecuadas para administración oral, sublingual, subcutánea, intravenosa, epidural, intratecal, intramuscular, transdérmica, pulmonar, local o rectal y la similares, todas en formas de dosificación unitaria para administración. Para la administración oral, el ingrediente activo puede presentarse como unidades discretas, tales como tabletas, cápsulas, polvos, granulados, soluciones, suspensiones y las similares. Para administración parenteral, la composición farmacéutica de la invención puede presentarse en contenedores de dosis unitaria o de dosis múltiples, por ejemplo, líquidos para inyección en cantidades predeterminadas, por ejemplo en ampolletas y frascos sellados, y se pueden almacenar también en una condición seca (liofilizada) congelada que requiere solamente la adición de un poríador líquido estéril , por ejemplo agua, antes de usarse. Mezclado con tales auxiliares farmacéuticamente aceptables, por ejemplo como se describe en la referencia estándar, Gennaro , A. R. y colaboradores, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20a edición, Lippincott Williams & Wilkins, 2000, ver especialmente la parte 5: Pharmaceutical Manufacturing), el agente activo pueden ser comprimido en unidades sólidas de dosificación , tales como pildoras, tabletas, o ser procesado en cápsulas, supositorios o parches. Por medio de líquidos farmacéutica mente aceptables, el agente activo puede aplicarse como una composición fluida, por ejemplo, como una preparación para inyección, en la forma de una solución, suspensión , emulsión o como un rocío, por ejemplo, un rocío nasal . Para hacer las unidades sólidas de dosificación, se contempla el uso de aditivos convencionales tales como cargas, colorantes, aglutinantes poliméricos y los similares. En general , se puede usar cualquier aditivo farmacéuticamente aceptable que no interfiera con la función de los compuestos activos . Los portadores adecuados con los cuales se puede administrar el agente activo de la invención como composiciones sólidas, incluyen lacíosa, almidón, derivados de la celulosa y los similares, o mezclas de los mismos, usados en cantidades adecuadas. Para administración parenteraf, se pueden usar suspensiones acuosas, soluciones salinas isotónicas y soluciones inyectables estériles, que contengan agentes de dispersión farmacéuticamente aceptables y/o agentes de humectación, tales como propilén glicol o butilén glicol. La invención incluye una composición farmacéutica, como se describe en la presente anteriormente, en combinación con maíerial de empaque adecuado para dicha composición, dicho material de empaque que incluye instrucciones para el uso de la composición para el uso como se describe en la presente anteriormente. Se encontró que los derivados de 1 -[(indol-3-il)carbonil]piperazina tricíclica de la invención es antagonista del receptor CB 1 , como se determinó en un ensayo de reporte de CB1 humano que usó células CHO. Los métodos para determinar receptores de aglutinamiento así como también actividad biológica in vitro de moduladores del receptor canabinoide son bien conocidos en la técnica. En general, el receptor expresado se pone en contacto con los compuestos para ser probados y se miden, aglutinan o estimulan o inhiben como una respuesta funcional. Para medir un ADN aislado de respuesta funcional que codifica el gen receptor CB1 , de preferencia el receptor humano, se expresa en células huésped adecuadas. Tal célula puede ser la célula dei Ovario de un Hámster Chino, pero otras células son también adecuadas. De preferencia las células son de origen de mamífero. Los métodos para construir líneas de células que expresen CB 1 recombinante son bien conocidos en la técnica (Sambrook y colaboradores, Molecular Cloning: a Laboraíory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, última edición). La expresión del receptor se obíiene mediante la expresión del ADN que codifica la proteína deseada. Las técnicas para la ligación de secuencias adicionales y construcción de sistemas de expresión adecuada son todas, por ahora, bien conocidas en la técnica. Porciones o todo el ADN que codifica la proteína deseada se puede construir sintéticamente usando técnicas de fase sólida estándar, de preferencia para incluir sitios de restricción para facilidad de ligación. Elementos de control adecuados para trascripción y traducción de la secuencia de codificación incluida se pueden proporcionar a las secuencias de codificación de ADN. Como es bien conocido, ahora están disponibles sistemas de expresión que son compatibles con una amplia variedad de huéspedes, que incluyen huéspedes procari?ticos tales como bacterias y huéspedes eucarióticos tales como levaduras, células de plantas, células de insectos, células de mamíferos, células de aves y las similares. Las células que expresan el receptor se ponen en contacto con el compuesto de prueba para observar la aglutinación, o estimulación o inhibición de una respuesta funcional. Alternativamente se pueden usar membranas de células aisladas que contienen el receptor CB1 (o CB2) expresado para medir la unión o aglutinación del compuesto. Se pueden usar compuestos etiquetados radiactivamente o con fluorescencia para medir la aglutinación. La sonda de canabinoide radioetiquetada más ampliamente utilizada es [3H]CP55940, la cual tiene aproximadamente igual afinidad para sitios de aglutinación CB1 y CB2. Otro ensayo involucra clasificar compuestos agonistas de canabinoide CB1 mediante la determinación de la respuesta del segundo mensajero, tal como por ejemplo la medición de los cambios mediados por el receptor en Jas trayecíorias de cAMP o MAPcinasa. Así, tal método involucra la expresión dei receptor CB1 en la superficie de la célula de una célula huésped y exponer la célula al compuesto de prueba. Se mide entonces la respuesta del segundo mensajero. El nivel del segundo mensajero se reducirá o incrementará, dependiendo del efecto del compuesto de prueba al aglutinarse al receptor. Además de la medición directa de los niveles de cAMP en la célula expuesta, se pueden usar células que además de la transfecc?ón con ADN que codifica ei receptor están transfectados también con un segundo ADN que codifica un gen reportero, cuya expresión se correlaciona con la activación del receptor. En general, la expresión del gen reportero podría ser controlada mediante cualquier elemento de respuesta que reaccione a los niveles cambiantes del segundo mensajero. Los genes reportero adecuados son, por ejemplo, LacZ, fosfatasa alcalina, luciferasa de luciérnaga y proteína fluorescente verde. Los principios de tales ensayos de transactivación son bien conocidos en la técnica y se describen en, por ejemplo, Sfratowa, Ch , Himmler, A. y Czernilofsky, A. P . , Curr. Opin. Biotechnol. 6, 574 (1 995). Para seleccionar compuestos agonistas acíivos en el recepfor CB 1 el valor de EC5o debe ser < 1 Q~5 N , de preferencia < 10"' M. Los compuesíos se pueden usar en el fraíamienío de dolor fai como, por ejemplo , dolor peri-operatorio, dolor crónico, dolor neuropático, dolor de cáncer y dolor y espasíicidad asociados con esclerosis múltiple. Los agonistas de canabinoide de la invención potencialmenie serían útiles también en el tratamiento de otros desórdenes incluyendo esclerosis múltiple, espasticidad, inflamación, glaucoma, náusea y emesis, pérdida del apetito, trastornos del sueño , insuficiencia respiratoria, alergias, epilepsia, migraña, insuficiencias cardiovascu lares, insuficiencias neurodegenerativas, ansiedad, daño y derrame cerebral traumático. Los compuestos se podrían usar también en conjunto con otros fármacos, por ejemplo, fármacos analgésicos tales como fármacos opiodes y no esteroidales, anti-inflamatorios (NSAI Ds), incluyendo inhibidores selectivos de COX-2. Los compuestos de la invención se pueden administrar a seres humanos en una cantidad suficiente y durante un lapso suficiente para aliviar los síntomas. De manera ilustrativa , los niveles de dosificación para seres humanos pueden estar en el rango de 0.001 a 50 mg por kilogramo de peso corporal, de preferencia en una dosificación de 0.01 a 20 mg por kilogramo de peso corporal.

La invención se ilustra por fos siguientes ejemplos. Eiemplo 1 Sal de hidrocloruro de fR)-3-cicJohexii-2, 3-dihidro-6-(4-eíiJpiperazin-1 -il carboniDpirrolo f 1 ,2,3-de1-1 ,4-benzoxazina A una solución de D-? -Boc-c?clohexilglicina (25.0 g, 291 .6 mmol) en dimetilformamida (200 ml), se agregaron bicarbonato de sodio (24.5 g, 291 .6 mmol) y yoduro de meíilo (6.66 mi, 106.9 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 64 horas bajo nitrógeno. La mezcla resultante se dividió entre dicloromeíano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron . Los cristales obtenidos se lavaron con n-heptano para dar el éster metílico de D-?/-Boc-ciclohexilgIicina (25.65 g, 94.5 mmol).

A una solución de éster metílico de D-?/-Boc-cicIohexiIgIicina (25.65 g, 94.5 mmol) en metanol (200 ml) y tetrahidrofurano ( 1 00 ml), se agregaron cloruro de calcio (21 .0 g , 189 mmol) y boroh?druro de sodio (14.3 g, 378 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos bajo nitrógeno. La mezcla resultante se vertió en agua helada, se neutralizo con ácido clorhídrico 5 N , y se dividió entre diclorometano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución saturada de carbonato de sodio y salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron . El residuo se cristalizó a partir de heptano para dar ( ?)-?/-Boc-2-ciclohexiiefanolamina sin refinar (29.38 g, 94.5 mmol). A una mezcla de ( )-?/-Boc-2-ciclohexiletanolamina (29.38 g, 94.5 mmol) y trifenilfosfina (37.2 g, 141 .8 mmol) en tolueno (150 ml) a 0o C se agregó azodicarboxilato de diisopropilo (19.5 g, 99.2 mmol). Después de agitar durante 1 hora, se agregó 2-bromofenol (12.1 ml, 104.0 mmol) a la mezcla a 0o C. La mezcla de reacción se agitó durante dos horas a 0o C y durante 20 horas a temperaíura ambienfe. La mezcla resultante se dividió entre diclorometano y agua. La capa acuosa se extrajo con dicloromeíano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución de hidróxido de sodio 2 N y salmuera, se secó en sulfato de sodio y se conceniró. El residuo se purificó mediante cromatografía flash y se eluyó con acetato de etilo 0-10% (v/v) en heptano para dar (R)-2-(2-ter-butoxjcarbonilamino-2-cicJohexiletoxi)-bromobenceno (12.80 g, 32.1 mmol). Una mezcla de (f?)-2-(2-ter-butoxicarbonilamino-2-ciclohexiletoxi)-bromobenceno (500 mg, 1.26 mmol), tetraquis (trifenilfosfina) paladio (0) (146 mg, 0.126 mmol) y ter-butóxido de sodio (181 mg, 1 .88 mmol) en tolueno (4.0 ml) se expuso a radiación de microondas durante diez minutos a 120° C. La mezcla resultante se dividió entre diclorometano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con acetato de etilo 0 a 17% (v/v) en heptano para dar ( :?)-4-ter-butoxicarbonil-3-ciclohexiI-3,4-dihidro-2H-1 ,4-benzoxazina (270 mg, 0.85 mmol). Esta reacción se repitió 13 veces en la misma escala para dar el mismo intermedio (un total de 3.98 g, 12.5 mmol).

Una mezcla de (/?)-4-ter-buíoxicarbonil-3-ciclohexil-3,4-dihidro- 2H-1 ,4-benzoxazina (3.98 g, 12.5 mmol), ácido clorhídrico 5 N (10 ml) y efanol (10 ml) se agifó a 70° C duranfe 50 minutos. El etanol se removió al vacío y el residuo se dividió entre diclorometano y solución de hidróxido de sodio 2 N. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfaío de sodio y se concenfraron para dar (R)-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1 ,4-benzoxazina (2.72 g, 12.5 mmol). Se disolvió (R)-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1 , 4-benzoxazina (2.72 g, 12.5 mmol) en N , N-dimetilf ormamida (20 ml) y se agregó una solución de nitrito de sodio (949 mg, 13.8 mmol) en agua (3.0 ml) a 0o C. Después, se agregó ácido clorhídrico 5 N (6.0 ml) a 0o C. La mezcla de reacción se agitó a 0o C durante una hora, después se dividió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. El residuo obtenido se disolvió en éter dietílico (50 ml) y se agregó hidruro de litio aluminio en tetrahidrofurano (1 .0 M; 9.51 ml, 9.51 mmol) a 0o C. La mezcla de reacción se agitó a 0o C durante una hora, después se apagó con agua helada. Se agregó acetato de etilo a la mezcla y la mezcla se filtró a través de un tapón de Celite y la torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se dividió y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. Ef residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con acetato de etilo O a 17% (v/v) en heptano para dar (/?)-4-amipo-3-cicfohexf"f-3,4-dihidro- 2H-1 ,4-benzoxazina (1 .47 g, 6.33 mmol). Se agregó piruvaío de eíifo (882 mg, 7.59 mmol) a una solución de (R)-4-amino-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H- ,4-benzoxazina (1 .47 g, 6.33 mmol) en eíanol (40 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se agregó a la mezcla de reacción ácido sulfúrico (10% v/v en etanol; 8.0 ml). La mezcla de reacción se puso a reflujo durante dos horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambienfe y se dividió entre acefafo de efilo y solución de carbonato de sodio. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con acetato de etilo de 0 a 10% (v/v) en heptano para dar (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirroIo [1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina-5-carboxilato de etilo (1 .49 g, 4.76 mmol). A una solución de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo [1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina-5-carboxilato de etilo (1 .49 g, 4.76 mmol) en etanol (50 ml) se agregó hidróxido de sodio 4 N (5.94 g, 23.8 mmol). La mezcla se agitó a 70° C durante 40 minutos. El etanol se removió al vacío, y el residuo se neutralizó con ácido clorhídrico 2 N y se dividió entre d?clorometano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. El residuo se disolvió en quinolina (20 ml), después se agregó polvo de cobre (453 mg, 7.13 mmol). La mezcla se agitó a 210° C durante una hora. Se agregaron acetato de etilo y agua a la mezcla a temperatura ambiente y la mezcla se filtró a través de un tapón de Celite y la torta del filtro se lavó con acetato de efilo. El filtrado se aciduló con ácido clorhídrico 5 N y se dividió. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con ácido clorhídrico 1 N y salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía flash, se eluyó con 0 a 10% (v/v) de acetato de etilo en heptano para dar (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo [1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina (984 mg, 4.08 mmol). A una solución de (f?)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo [1 ,2,3-de]- 1 ,4-benzoxazina (80 mg, 0.33 mmol) en 1 , 1 ,2,2-tetracloroetano (2.0 ml), se agregó cloruro de oxalilo (46 mg, 0.36 mmol) con agitación bajo una corriente de nitrógeno. La mezcla se calentó a 120° C durante una hora. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron trietilamina (36 mg, 0.36 mmol) y N-etilpiperazina (45 mg, 0.40 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 8 horas después se dividió entre diclorometano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. En el aceite café resultante se purificó mediante cromatografía flash usando metanol 5% (v/v) en diclorometano como eluyente para dar el compuesto del título como la base libre. Se logró la formación de la sal de hidrocloruro mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución en éter dietílico 2 M , 0.5 ml) a una solución de la base libre en éter dietílico (2 ml) y etanol (1 ml). El solvente se removió al vacío y el precipitado se secó para dar el compuesto del fítulo (sal de hidrocloruro 1 :1 ) como un sólido (70 mg, 0.17 mmol). 1H RMN (400MHz, CD3OD) d 1.00-1.40 (6H, m), 1.38 (3H, t, J 7.3), 1 .58 (1 H , d, J 12.4), 1 .62-1 .70 (1 H, m), 1 .70-1 .80 (2H, m), 1 .80-1 .90 (1 H, m), 3.10-3.70 (6H, m), 3.25 (2H, q, J 7.3), 4.20-4.60 (4H, m), 4.71 (1 H, dd, J 3.0, 12.6), 6.66 (1 H, d, J 7.8), 7.08 (1 H, t, J 7.8), 7.22 (1 H, d, J 7.8), 7.74 (1 H, s); EslMS: m/z = 382.2 [M + H]+, 268.2; [a]D22 - 18.5 (c = 1 .4 mg/ml en metanol). Ejemplo 2 Sal de hidrocloruro de (R -3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-f(S -octahidro-2H-pirido Í1 , 2-al pirazin-2-ifcarbonif?-pirrofo f ,2, 3-del- ,4-benzoxazina A una solución de ácido (S)-(+)-1 -(ter-butoxicarbonil)-2-piperidin carboxílico (2.00 g, 8.72 mmol) en dicloromeíano (30 ml) se agregaron hidrocloruro de ésíer metílico de glicina (1 .09 g, 8.72 mmol), hidrocloruro de 1 -[3-(dimetiIamino)propil]-3-eiil carbodiimida (2.01 g, 10.46 mmol), 1 -hidroxibenzotriazol (1 .22 g, 9.04 mmol) y trietilamina (2.43 g, 17.4 mmol). La mezcla se agitó bajo una corriente de nitrógeno durante 18 horas. La mezcla resultante se lavó con ácido clorhídrico 0.5 M (20 mi), agua (2 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se secó en sulfato de sodio y se concentró para dar éster metílico de (S)-1 -(ter-bufoxicarbonil)piperidin-2-carboxiglicina como un aceite incoloro (2.47 g, 8.23 mmol). El éster metílico de (S)-1 -(ter-butoxicarbonil)piperidin-2-carboxiglicina (2.46 g, 8.20 mmol) se disolvió en ácido trifiuoroacético (1 0 ml) y Ja solución resultante se agitó durante una hora. El ácido trifluoroacético se removió después para dar un aceite incoloro, el cual se disolvió en metanol (85 ml) y se agregó trietilamina (9.0 ml, 64.6 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 4 horas. Después, la solución se concentró para dar un aceite anaranjado pálido el cual fue recristalizado a partir de heptano 48%, éter 48%, 2-propanol 4%, para dar (S)-octahidro- ,4-dioxo-2H-pirido [1 ,2-a] pirazin como cristales blancos (0.66 g, 3.90 mmol). Se agregó (S)-octahidro-l ,4-dioxo-2H-pirido [1 ,2-a] pirazin (0.5 g, 2.98 mmol) en porciones a una solución agitada de hidruro de litio aluminio (1 M en tetrahidrofurano; 1 1 .9 mmol). La mezcla resultante se calentó bajo reflujo durante 0.5 hora. La solución se enfrió después hasta 0o C y se trató con agua (1.35 ml) gota a gota, solución de hidróxido de sodio 1 M (0.45 ml), después agua (1.35 mJ). Se agregó tetrahidrofurano (10 ml) y la solución se agitó durante 0.5 hora. La torta del filtro se lavó con tetrahidrofurano (2 x 5 ml) y el filtrado y lavados combinados se concentraron para dar (S)-octahidro-2H-p?rido [1 ,2-a] pirazin como un aceite amarillo (0.2 g, 2.07 mmol). A una solución de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo [1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina (100 mg , 0.41 mmol) en 1 , 1 ,2,2-tetracloroetano (2.0 ml), se agregó cloruro de oxalilo (58 mg, 0.46 mmo!) con agitación bajo una corriente de nitrógeno. La mezcla se calentó a 120° C durante 1 .5 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron trietilamina (46 mg, 0.46 mmol) y (S)-octahidro-2H-pirido [1 ,2-a] pirazin (70 mg, 0.50 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 19 horas y después se dividió entre diclorometano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometans y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. El aceite café resultaníe se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con acetato de etilo 50% (v/v) en n-heptano, después metanol en acetafo de etilo 0-17% (v/v) para dar el compuesto del título como la base libre. Se logró la formación de la sal de hidrocloruro mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 1 ml) a una solución de la base libre en éter dietílico (2 ml) y etanol (2 ml). El solvente se removió al vacío y el precipitado se secó para dar el compuesto del titulo (sal de hidrocloruro 1:1) como un sólido (78 mg, 0.18 moJ). ^H RMN (400MHz, CD3OD) d 1.00-1.35 (6H, m), 1.50-2.05 (11H, m), 3.00-3.10 (1H, m), 3.10-3.30 (3H, ), 3.40-3.55 (3H, ,), 4.20-4.30 (2H, m), 4.50-4.70 (2H, m), 4.71 (1H, dd, J 3.0, 12.6), 6.67 (1H, d, J 7.2), 7.08 (1H, t, J 7.8), 7.21 (1H, d, J 7.2), 7.74 (1H, s); EslMS: m/z = 408.2 [M+H]+, 268.2; [ ]D22 - 27.5° (c = 5.8 mg/ml en metanol). Eiemplo 3 Sal de hidrocloruro de (S)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-r(S)-octahidro-2H-pirido p.2-a] pirazin-2-ilcarbon¡p-pirrolo [1 ,2,3-de1-1,4-benzoxazina El compuesto del título se preparó usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 2, usando (S)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina, la cual se preparó a partir de L-?/-Boc-ciclohexilglicina de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1. nH RMN (400MHz, CD3OD) d 1.00-1.35 (6H, m), 1.50-2.05 (11H, m i), 3.05 (1 H, t, J 10.4), 3.10-3.30 (3H, m), 3.40-3.55 (3H, m,), 4.20- 4.30 (2H, m), 4.30-4.60 (2H , m), 4.71 (1 H , dd, J 3.0, 12.6), 6.66 (1 H, d, J 8.0), 7.08 (1 H, í, J 8.0), 7.22 (1 H, d, J 8.0), 7.73 (1 H, s); EslMS: m/z = 408.2 [M + H]+, 268.2; [a]D22 + 14.4° (c = 1 .3 mg/ml en metanol). Eiemplo 4 Sal de hidrocloruro de (R -3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-KS)-3,4-dimetilpiperazin-1 -ilcarbonippirrolo H ,2,3-deí- ,4- benzoxazina A una solución de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo [ ,2,3-de]- 1 ,4-benzoxazina (600 mg, 2.49 mmol) en N, N-dimetilformamida (5.0 ml) a 0° C se agregó anhídrido trifluoroacético (0.31 1 ml,2.73 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante cinco horas, después se dividió entre diclorometano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía flash eJuyendo con 0 - 25% de acetato de etilo (v/v) en heptano para dar (R)-3-cicIohexil-6-trífIuorometiIcarbonil-2,3-dihidropirroJo[1 ,2,3-deJ-1 ,4-benzoxazina (628 mg, 1 .86 mmol). A una solución de (R)-3-ciclohexil-6-trifluorometilcarbonil-2,3-dihidropirrolo[1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina (628 mg, 1.86 mmol) en 1 ,4-dioxano (20 ml) se agregó NaOH 4 N (5.0 ml). La mezcla se puso a reflujo durante 42 horas, después se aciduló hasta pH 1 usando ácido clorhídrico 5 N y se dividió entre diclorometano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron para dar ácido (/c?)-3-ciclohexif-2,3-dihidropirrolo[1 ,2,3- de]-1 ,4-benzoxazina-6-carboxílico (572 mg). A una solución de ácido (/c?)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1 ,2,3- de]-1,4-benzoxazina-6-carboxílico (120 mg, 0.421 mmol) y (S)-1,2- dimetifpiperazina (62 mg, 0.547 mmol) en ,N-dimetilformamida (3.0 ml) se agregó 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (97 mg, 0.505 mmol) y 1-hidroxi benzotriazol (68 mg, 0.505 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, después se dividió entre dicforometano y agua. La capa acuosa se extrajo con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con 0 - 20% de acetato de etilo (v/v) en heptano para dar el compuesto del título como la base libre. Se logró la formación de la sal de hidrocloruro mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 0.5 ml) a una solución de la base libre en éter dietílico (2 mi) y etanoi (1 ml). El solvente se removió al vacío y el precipitado se secó para dar el compuesto del título (sal de hidrocloruro 1:1) como un sólido (84 mg, 0.20 mmol). "? RMN (400MHz, CD3OD) d 1.00-1.35 (5H, m), 1.39 (3H, d, J 4.8), 1.58 (1H, d, J 12.0), 1.60-1.70 (1H, m), 1.70-1.82 (3H, m), 1.82-1.90 (1H, m), 2.96 (3H, s), 3.20-3.70 (5H, m), 4.20-4.30 (2H, m), 4.40-4.70 (2H, m), 4.71 (1H, d, J 10.0), 6.67 (1H, d, J 8.2), 7.08 (1H, t, J 8.2), 7.21 (1H, d, J 8.2), 7.74 (1H, s); EslMS: m/z = 382.1 [M+H]\ 268.1.

Eiemplo 5 El método del Ejemplo 4 se usó además para preparar los siguientes compuesto: 5A: Se preparó sal de hidrocloruro de (ff)-3-ciclohexil-2.3-dihidro-6- r(S)-3-metilpiperazin-1 -ilcarbonillpirrolo-p ,2.3-del- ,4-benzoxazina usando (S)-2-metil-piperazina en lugar de (S)-1 ,2-dimetilpiperazina.

Esl MS: m/z = 368 [M+HJ+, 267.8; [ ]D22 - 44.4° (c = 2.3 mg/ml en mefanol). 5B: Se preparó sal de hidrocloruro de (f?)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-f(c¡s)-3.5-dimetilpiperazin-1 -ilcarbonippirrolop ,2,3-del-1 ,4-benzoxazina usando cis-2, 6-dometilpiperazina en lugar de (S)-1 ,2-dimetilpiperazina.

EslMS: m/z = 382.1 [M + H]+, 267.6; fa]D22 + 19.6° (c = 2.8 mg/ml en metanol). 5C: Se preparó sal de hidrocloruro de (,/:?)-3-ciclohex¡l-2,3-d¡hidro-6-['4-metilpiperazin-l-ilcarbonillpirrolofl ,2.3-de]-1 ,4-benzoxazina usando N-mefilpiperazina en lugar de (S)- ,2-dimefilpiperazina. EslMS-. m/z = 368 [M+ H]\ 268; [ ]D22 - 20.3° (c = 3.0 mg/ml en metanol). Eiemplo 6 Sal de hidrocloruro de C/:?)-3-ciclohexil-2.3-dihidro-6-r(c/g)-2.6-dimetilpiperazin-1 -ilcarbonil]pirrolo[ ,2.3-de]- ,4-benzoxazina A una solución de (o/s)-2,6-dimetilpiperazina (900 mg, 8.49 mmol) y bicarbonato de sodio (0.2 ml de solución saturada) en THF (5 ml) se agregó bromuro de bencilo (1.02 ml, 8.49 mmol). La mezcla se expuso a radiación de microondas a 80° C durante 15 minutos. El solvente se removió ai vacío y el residuo se lavó con solución de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano. El residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con 5 - 10% (v/v) de metanol en diclorometano para dar 1-N-bencil-(cis)-3,5-dimetilpiperazina como un aceite claro (900 mg, 4.40 mmol). A una solución de ácido (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirrolo[1 ,2,3- de]-1 ,4-benzoxazina-6-carboxílico (362 mg, 1.23 mmol) en diclorometano (20 ml) se agregó cloruro de oxalilo (0.215 ml, 2.46 mmol). La mezcla azul oscuro se agitó a temperatura ambiente durante dos horas y después se eliminó el solvente al vacío para dar cloruro del ácido (f?)-3-ciclohexil-2,3-dihidropirroJo[1 ,2, 3-de]-1 ,4-benzoxazina-d-carboxílico (380 mg, 1.23 mmol) como un sólido azul. A una solución de cloruro del ácido (R)-3-ciclohexil-2,3-díhidropirrolo[1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina-6-carboxílico (380 mg, 1.23 mmol) y N,N-diisopropil etilamina (0.2 ml, 1 .3 mmol) en diclorometano (20 ml) se agregó 1 -N-bencil-(cis)-3,5-dimetilpiperazina (250 mg , 1.2 mmol) en d?clorometano (5 ml) y la mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla se dividió entre solución de bicarbonato de sodio y diclorometano. La capa acuosa se separó y se removió el solvente al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con 0 - 5% (v/v) de metanol en diclorometano. Se logró la formación de la sal de hidrocloruro mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 2 ml) a la base libre en diclorometano (1 ml). El precipitado se filtró y se secó para dar la sal de hidrocloruro de (R)-3-ciclohexil- 2,3-d¡hidro-6-[(o/s)-4-bencil-2,6-dimetifpiperazin-1 -ifcarbonil]pirrolo[1 :2, 3-de]-1 ,4-benzoxazina como un polvo azul claro (240 mg, 0.51 mmol).

A una solución de sal de hidrocloruro de (/c?)-3-ciclohexil-2,3- dihidro-6-[(cís)-4-benciI-2,6-dimetilpiperazin-1 -ilcarbonil]pirrolo[ ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina (200 ml, 0.42 mmol) en etanol (5 ml) se agregó paladio (10%) en carbón (10 mg). La mezcla se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno duraníe 16 horas a femperafura ambieníe. La mezcla se filtró y el solvente se removió al vacío para dar el compuesto del título como un sólido blanco (100 mg, 0.26 mmol). 1 H RMN (400MHz, CD3OD) d 1 .03-1.39 (5H, m), 1 .49 (6H, d, J 7.2), 1 .55-1.87 (6H, m), 3.47 (4H, m), 4.29 (2H, ), 4.72 (1 H, d, J 9.8), 4.80 (2H, m), 6.66 (1 H, d , J 7.5), 7.09 (1 H, m, J 7.7), 7.19 (1 H, d, J 8.9), 7.66 (1 H, s); EslMS: miz = 382.3 [M + H]+, 268; [ ]D22 - 17.0° (c = 2.4 mg/ml en metanol). Eiemplo 7 Sal de hidrocloruro de ( ?)-3-ciclohexil-2.3-dihidro-ß-r(c/g)-3.4,5-trime ti piperazin- 1 -i lea rbonillpirrolofl , 2, 3-d el- ,4-benzoxazina A una solución de sal de hidrocloruro de (/?)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-[(c/s)-3,5-trimetilpiperazin-1-ilcarbonil pirrolo[1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina (100 mg, 0.26 mmol) en etanol (10 J) se agregó formaldehído (37% en agua, 1 ml, 12.5 mmol) y triacetoxiborohídruro de sodio (200 mg, 0.93 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El solvente se removió al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con 1 - 10% (v/v) de metanol en diclorometano para dar el compuesto del título como la base libre. Se logró la formación de la sal de hidrocloruro mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 2 ml) a la base libre en diclorometano (1 ml). El precipitado se filtró y se secó para dar el compuesto del título (sal de hidrocloruro 1 : 1 ). Esl MS-. m/z = 396. 1 [M + H]+, 268; [a]D22 - 1 9.6° (c = 2. 1 mg/ml en metanol) . Eiemplo 8 Sal de hidrocloruro de (/?)-3-cicíohexif-2, 3-dihidro-ß-f(c/s)-3, 5-dimetil-4-etilpiperazin-1 -ilcarbonil]pirrolo[1 ,2 ,3-de]-1 ,4-benzoxazina El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 7 usando acetaldehído en lugar de formaldehído. EslMS: m/z = 410.3 [M+H]+, 268; [cc]D22 - 1 7.8° (c = 2.0 mg/ml en metanol). Eiemplo 9 Sal de hidrocloruro de (R)-3-ciclohexil-2,3-dihidro-6-f(c/s)-3.5-dimet¡l-4-(2-hidroxietil)piperazin-1-ilcarbonippirrolo[1 ,2,3-de]-1 ,4-benzoxazina A una solución de sal de hidrocloruro de (/?)~3-cicIohexil-2,3-dihidro-6-[(o/s)-3,5-dimetilpiperazin-1 -ilcarbonil]pirrolo[1 ,2 ,3-de]-1 ,4-benzoxazina (120 mg, 0.31 mmol) en acetonitrilo (3 ml) se agregó 2-bromoetanol (0.024 ml, 0.34 mmol). La mezcla se expuso a radiación de microondas durante 30 minutos a 150° C. La mezcla se filtró y el solvente se removió al vacío . El residuo se purificó usando H PLC (Waters Xterra [RP1 8, 5 µ ] columna de 30 mm x 1 0 mm, aceíonitrilo 1 0 - 1 00% (v/v) en agua sobre un gradiente de 25 minutos, amortiguador de ácido trifluoroacético al 0. 1 %, detectado mediante UV a 254 nm) para dar el compuesto del título como una sal del ácido trifluoroacético (TFA). Se logró la formación de la sal de hidrocloruro mediante la adición de cloruro de hidrógeno (solución 2 M en éter dietílico, 2 mi) a la sal de TFA en dic/oromeíano (1 ml). El precipitado se filtró y se secó para dar el compuesto del título (20 mg, 0.04 mmol). 1H RMN (400MHz, CD3OD) d 1.01-1.39 (5H, m), 1.44 (6H, d, J 5.3), 1.56-1.85 (6H, m), 3.32 (2H, d,J 14.2), 3.54 (2H, s), 3.72 (2H, m), 3.82 (0.5H, m), 3.93 (1.5H, d, J 4.5), 4.24-4.28 (3H, ), 4.36-4.40 (0.5H, d, J 11.6), 4.52 (1.5H, d, J 13.1), 4.69 (1H, d, J 10.1), 6.66 (1H, d, J 7.5), 7.06-7.10 (1H, m), 7.20 (1H, d, J 8.0) 7.75 (1H, s); EslMS: m/z = 426.1 [M + H]+, 268; [ ]D22 - 18.3° (c = 2.2 mg/ml en metanol). Eiemplo 10 Sal de hidrocloruro de (R)-3-cic!ohexil-2,3-dihidro-6-f(c/s)-3,5-dimetil-4-(2-metoxie til) piperazin- l-ilcarbonillpirrolofl ,2, 3-d el- ,4-benzoxazina El compuesto del título se preparó usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 8 usando éter metílico de 2-bromoetilo en lugar de 2-bromoetanoi. EslMS: m/z = 440 [M+H]+, 268; [a]D22 - 20.8° (c = 2.5 mg/ml en metanol). Eiemplo 11 Sal de hidrocloruro de (rac)-4-ciclopentil-5.6-dihidro-1-(4-etilpiperazin-1-ilcarbonil -4H-pirrolo 3.2.1-iilquinolina A una solución de 2-cloroquinoIina (8.2 g, 50 mmol) y [1,2-bis(difenilfosfino)-etano]dicloroníquel(ll) (200 g, 0.38 mmol) en éter dietílico (20 ml) enfriado en un baño de hielo/metanol se agregó bromuro de ciclopeníilmagnesio (solución 2 M en éter dietílico, 25.5 ml, 51 mmol) en un periodo de 1 5 minutos. La sofución café resultante se agitó entonces durante 30 minutos, el baño ele hielo se suspendió y la mezcla se agitó durante 10 minufos adicionales. La mezcla de reacción se re-enfrió entonces hasta 0° C y se agregó lentamente una solución saturada de cloruro de amonio (40 ml). La mezcla de reacción resultante se vertió en un embudo de separación y se diluyó adicionalmente con éter dietílico (60 ml) y solución saturada de cloruro de amonio (60 ml). Los compuestos orgánicos se separaron y la capa acuosa se lavó con éter dietílico (2 x 1 00 ml). Los compuestos orgánicos combinados se secaron (MgS04), se filtraron y se removió el solvente para dejar 2-cicJopentilquinolina (9.98 g, 50.4 mmol) como un aceite. A una solución de 2-cloropentilquinolina (7.95 g, 40.3 mmol) y cloru ro de níq uel (II) hexahidratado (1 .63 g, 6.85 mmol) en metanol (1 20 ml) enfriado en un baño de hielo/metanol se agregó borohidruro de sodio (6.1 g, 161 .2 mmol) en porciones en 1 .5 horas. El baño de enfriamiento se suspendió y la reacción se agitó durante 30 minutos adicionales. El metanol se removió entonces por vacío. Al precipitado negro resultante se agregó ácido clorhídrico 2 M (1 00 ml) y se basificó después con hid róxido de potas io 1 0 M . La mezcla se vertió en un embudo de separación y se extrajo con éter (4 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se removió el solvente para dar 2-ciclopentil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolina (7.45 g, 39.1 mmol) como un aceite café claro. A una solución de 2-ciclopentil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolina (4.0 g , 20 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml) se agregó bromo piruvato de etilo (-90% pureza; 1.38 ml, 9.9 mmol) y la reacción se agitó durante 15 horas. El precipiíado resulíante se filtró y se lavó con fefrahidrofurano (20 ml). El filfrado se evaporó al vacío. El residuo resultante se disolvió en tetrahidrofurano (10 ml) y 2-metoxieíanol (10 ml) y la solución se agregó gota a gota a una solución en reflujo de cloruro de magnesio (II) (1.05 g, 1 1 mmol) en 2-metoxieíanol (10 ml). La mezcla de reacción se hizo reflujar durante dos horas y después se agregó una porción más de cloruro de magnesio (II) (1 .05 g, 1 1 mmol) y se continuó con el reflujo durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió y el solvente se removió al vacío. El aceite café resultante se disolvió en diclorometano (150 ml) y se lavó con HCl 2 M (50 ml), carbonato de potasio saturado (50 ml) y salmuera (50 ml). Los compuestos orgánicos se secaron (MgSO ), se filtraron y el solvente se removió al vacío. El aceite resultante se purificó mediante cromatografía flash usando 33-67% (v/v) de diclorometano en heptano para dar el éster del ácido 4-ciclopentil-5,6-dihidro-4H-pirroIo [3,2, 1 -ij] quinolin-1 -carboxílico (1.45 g, 4.9 mmol). A una solución del éster del ácido 4-ciclopentil-5,6-dihidro-4H-pirrólo [3,2, 1 -ij] quinolin-1 -carboxílico (1 .45 g , 4.9 mmol) en agua (10 mí) y etanol (15 ml) se agregó hidróxido de sodio (1 .96 g, 49 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante una noche (~14 horas). La reacción se enfrió y se aciduló con HCl 5 M. El precipitado blanco resultante se filtró y se seco al vacío para dar 4-cic!opentií-5,6-dihidro-4H-pirrolo [3,2, 1 -ij] quinolin-1 -carboxílico (1 .13 g, 4.2 mmol) como un sólido blanco. A una solución de ácido 4-ciclopentil-5,6-dihidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-1-carb?xílico (342 mg, 1.27 mmol) en diclorometano (20 ml) se agregó cloruro de oxalilo (218 µL, 3.18 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante una hora. Una porción más de cloruro de oxalilo (436 µL, 6.36 mmol) se agregó después y la reacción se agitó durante una noche. Se removieron entonces ios reactivos y el solvente en exceso al vacío para dejar un sólido verde. El sólido verde se disolvió en diclorometano (20 ml) y se agregó gota a gota N-eíifpiperazina (323 µL, 2.54 mmol) goía a goía. La mezcla de reacción resultante se agitó durante una hora y después se vació en un embudo de separación. La capa orgánica se lavó con solución de bicarbonato de potasio saturada (20 ml) y salmuera (20 ml), se secó (MgS0 ) y el solvente se removió al vacío para dejar un aceite café. El aceite se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con 0 a 5% (v/v) de metanol en diclorometano para dar el compuesto def título (400 mg, 1.09 mmol). ? RMN (400MHz, CD3OD) dH 1.31-1.43 (4H, m), 1.45-1.79 (6H, ), 1.87-1.96 (1H, m), 2.05-2.24 (2H, ), 2.30-2.37 (1H, m), 2.90 (1H, dt, J 16.6, 3.9), 3.03-3.20 (3H, m), 3.26 (2H, q, J 7.5) 3.45-3.65 (4H, m), 4.16-4.23 (1H, ), 4.57 (2H, d, J 14.7), 6.99 (1H, d, J 7.1), 7.12 (1H, t, J 8.0), 7.48 (1H, d, J 8.0), 7.76 (1H, s); EslMS: m/z = 366.3 [M+HJT, 252.1. Ejemplo 12 El producto obtenido en el Ejemplo 11 se sujetó a separación de HPLC quiral en una columna Chiracef(R) OD (2 cm x 25 cm), eluyendo con isohexano/isopropanol 92/8 (v/v) a un régimen de flujo de 15 ml/min . Los productos se detectaron usando un detector de UV a una longitud de onda de 240 nm para dar el Enantiómero 1 ; tiempo de retención 24.18 minutos, exceso enantiomérico >89%, y Enaníiómero 2; tiempo de refención 33.6 minutos, exceso enantíomérico >92%. 12A: Sal de hidrocloruro de (+)-4-ciclopeníil-5.6-dihidro-1 -(4-etilpiperazin-1 -ilcarbonil)-4H-pirrolo [3,2.1 -i¡] quinolina. A una solución de Enantiómero 1 (147 mg, 0.38 mmol) en diclorometano (5 ml) se agregó ácido clorhídrico (solución 2 M en éter dietílico; 0.5 ml). Se removieron los reactivos y el solvente en exceso al vacío para dejar el compuesto del título como un sólido blanco. EslMS.- m/z = 366.1 [M + H]+, 252.1 ; [a]D22 + 25.8° (c = 2.6 mg/ml en metanol). 12B: Sal de hidrocloruro de (-)-4-ciclopentil-5,6-dihidro-1 -(4-etilpiperazin-1 -tlcarbonil)-4H-pirrolo [3,2, 1 -ül quinolina. A una solución de Enantiómero 2 (143 mg, 0.38 mmol) en diclorometano (5 ml) se agregó ácido clorhídrico (solución 2 M en éter dietílico; 0.5 ml). Se removieron los reactivos y el solvente en exceso al vacío para dejar el compuesto del título como un sólido blanco. EslMS; m/z = 366.0 [M+H]\ 252.1 ; [a]D22 - 21 .3° (c = 2.4 mg/ml en metanol). Eiemplo 13 Sal de hidrocloruro de (+)-4-ciclopentil-5.6-dihidro-1 -(4-etilpiperazin-1 -ilcarb?nil)-4H-pirrolo f3,2, 1 -i¡] quinolina.

A una solución de quinolina (1 1 .84 ml, 100 mmol) en diclorometano (300 ml) se agregaron de manera secuencial agua (300 ml), ácido ciclohexancarboxílico (35.88 g , 280 mmol), nitrato de plata (1 .36 g, 8.0 mmol), persulfato de amonio (22.82 g, 100 mmol) y ácido trifluoroacético (7.67 g, 100 mmol). La mezcla se calentó hasta 140° C con agitación durante tres horas. La mezcla se enfrió después a temperafura ambiente, se basificó con hidróxido de sodio sólido y el solvente se removió al vacío. El residuo se sujetó entonces a una extracción confinua con isohexano durante 18 horas, el solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con 20% (v/v) de acetaío de eíilo en isohexano para dar 2-ciclohexilquinolina como un aceite amarillo (2.66 g, 12.61 mmol). Una solución de 2-ciclohexilquinolina (2.66 g, 12.61 mmoí) en ácido acético glacial (25 ml) se trató con cianoborohidruro de sodio (2.38 g, 37.82 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante cuatro horas y después a 40° C durante 18 horas. La mezcla se trató después con hidróxido de sodio 2 M (200 ml), se agitó durante 30 minutos y se extrajo en acetato de etilo (3 x 100 mi), se secó con sulfato de sodio, se evaporó bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía flash eluyendo con acetato de etilo en isohexano 0 a 3% (v/v) para dar 2-ciclohexil-1 ,2,3,4-tetrah?droquinoiina como un aceite amarillo (1 .61 g, 7.49 mmol). 2-CícIohexiI-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolina (2.61 g, 12.14 mmol) en etanol (75 ml) se trató con (R)(-)-2-hidroxi-5,5-dimetil-4-feniI-1 ,3,2- dioxafosforinan-2-óxido (2.94 g, 12.14 mmol) y la mezcla se agitó a 50° C hasta que fue completa la disolución. La mezcla se evaporó después bajo presión reducida hasta que el volumen total fue de 30 ml y se dejó cristalizar durante tres horas. La suspensión se filtró y el precipitado incoloro se re-cristalizó a partir de etanol para dar un sólido cristalino incoloro (2.1 g). Este se trató con solución saturada de carbonato de sodio (50 ml) y se extrajo en diclorometano (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron después con sulfato de sodio y se evaporaron bajo presión reducida para dar 2-ciclohexil-1 ,2,3,4-íetrahidroquinolina no racémica como un aceite incoloro (0.98 g, 4.56 mmol). Se determinó el exceso enantiomérico como 94% mediante HPLC quiral en una columna Chiralcel®OJ , eluyendo con isohexano/etanol 97:3 (v/v) a un régimen de flujo de 1 ml/minuto. Los enantiómeros se detectaron usando un detector de UV a una longitud de onda de 230 nm. Los enantiómeros se eluyeron en tiempos de retención de 8.4 min (95%) y 9.4 min (3%). Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 1 , usando la 2-ciclohexil-1 ,2,3,4-fefrahidroquinolina no racémica en lugar de (/?)-3-ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1 ,4-benzoxazina, se obtuvo el compuesto del título como un sólido incoloro (0.05 g, 0.12 mmol). ? RM N (400MHz, CD3OD) dH 1 .05-1 .26 (5H, m), 1.48-1 .87 (9H, m), 2.01 -2.1 1 (1 H, m), 2.30-2.39 (1 H, m), 2.70-3.12 (6H, m), 3.44-3.52 (2H, m), 3.96-4.13 (3H, m), 4.53 (2H, d, br, J 14.1 ), 7.00 (1 H, d, J 7.5), 7.16 (1 H , t, J 7.4), 7.44 (1 H , d, J 8.1 ), 7.59 (1 H, s); EslMS: m/z = 380 [M + H]+, 266; [ ]D22 + 42.6° (c = 2.7 mg/ml en metanol).

Eiemplo 14 Sal de hidrocloruro de (+W4-ciclohexil-5.6-dihidro-1 -(4- metilpiperazin-1 -ilcarbonil)-4H-pirrolo [3,2, 1 -ij] quinolina. El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 13, usando N-metil piperazina en lugar de N-etilpiperazina. 1 H RMN (400MHz, CDCI3) dH 1 .05-1 .28 (6H, m), 1 .51-1 .87 (5H, m), 2.02-2.1 1 (1 H, ), 2.31-2.39 (1 H, m), 2.76-3.10 (7H, m), 3.41 -3.50 (2H, m), 3.92-4.10 (3H, m), 4.55 (2H, d, br, J 13.8), 7.00 (1 H, d, J 7.1 ), 7.16 (1 H, t, J 7.1 ), 7.44 (1 H, d, J 8.1 ), 7.59 (1 H, s); EslMS.- m/z = 366 [M+H]+, 266; [ ]D22 + 19.3° (c = 1.5 mg/ml en metanol). Eiemplo 15 Sal de hidrocloruro de (-)-(4-ciclohexil-5.6-dihidro-1 -(4-eíilp¡perazin-1 -ilcarbonil)-4H-pirrolo f3,2, 1 -ij] quinolina. Se preparó 2-ciclohexil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolina no racémica siguiendo el procedimiento descriío en el Ejemplo 13, usando (S)(+)-2-hidroxi-5,5-dimetil-4-fenil-1 ,3,2-dioxafosforinan-2-óxido en lugar de (R)(-)-2-hidroxi-5,5-dimetil-4-fenil-1 ,3,2-dioxa osforinan-2-óxido. Se determinó el exceso enantiomérico del intermedio 2-ciclohexil-1 ,2,3,4-teírahidroquinolina como 86% medianfe HPLC quiral en una columna Chiralcel®OJ , eluyendo con isohexano/etanol 97:3 (v/v) a un régimen de flujo de 1 ml/minuto. Los enantiómeros se detectaron usando un detector de UV a una longitud de onda de 230 nm, en tiempos de retención de 8.4 min (7%) y 9.4 min (93%). El compuesto del título se preparó siguiendo el procedimiento del Ejemplo 1 , usando esta 2-ciclohexil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinoIina en lugar de (R)-3- ciclohexil-3,4-dihidro-2H-1 ,4-benzoxazina. 1H RMN (400MHz, CDCI3) dH 1.05-1.26 (5H, m), 1.48-1.87 (9H, m), 2.02-2.11 (1H, m), 2.31-2.39 (1H, ), 2.76-3.10 (7H, m), 3.41-3.50 (2H, m), 3.92-4.10 (3H, m), 4.55 (2H, d, br, J 13.8), 7.00 (1H, d, J 7.1), 7.16 (1H, t, J 7.0), 7.44 (1H, d, J 8.1), 7.59 (1H, s); EslMS: m/z = 366 [M+H]+, 266; [a]D22 + 19.3° (c = 1.5 mg/ml en mefanol). Eiemplo 16 Sal de hidrocíoruro de (-)-(4-ciclohexií-5.6-dihidro-1-(4-metilpiperazin-1-ilcarbonil)-4H-pirrolo f3,2,1-i¡] quinolina. El compuesto del fífulo se preparó siguiendo ef procedimiento descrito en el Ejemplo 15, usando N-metil piperazina en lugar de N-efilpiperazina. ? RMN (400MHz, CDCI3) dH 1.05-1.28 (6H, m), 1.51-1.87 (5H, m), 2.02-2.11 (1H, m), 2.31-2.39 (1H, m), 2.76-3.10 (7H, m), 3.41-3.50 (2H, m), 3.92-4.10 (3H, m), 4.55 (2H, d, br, J 13.8), 7.00 (1H, d, J 7.1), 7.16 (1H, í, J 7.0), 7.44 (1H, d, J 8.1), 7.59 (1H, s); EslMS: m/z = 366 [M + H]+, 266; [a]D22 - 46.2° (c = 2.1 mg/ml en metanol). Eiemplo 17 Determinación in vitro de la eficacia y la potencia en el receptor CB1 humano expresado en células CHO Se suspendieron células de Ovario de Hámster Chino que expresan el receptor CB1 humano y un gen reportero de luciferasa en mezcla de nuez DMEM/F-12 libre de fenol rojo/suero conteniendo penicilina/estreptomicina (50U/50 µg/ml) y fungizona (1 µg/ml) y se sembraron en placas de 96 pozos a una densidad de 3 x 104 células por pozo (100 µl de volumen final). Las células se incubaron durante una noche (aproximadamente 18 horas a 37° C, C02 5%/aire 95%) antes del ensayo. El compuesto de prueba (solución 10 mM en dimetilsulfóxido) se diluyó en Mezcla de Nuez F12 para dar un rango de soluciones de reserva desde 0.1 1 mM hasta 0.1 1 nM. Las soluciones de reserva (10 µi) se agregaron directamente a los pozos relevantes. Las placas se incubaron a 37° C durante cinco horas para permitir la expresión de agonista inducida de la enzima luciferasa. Bajo luz indebida, se agregó a cada pozo sustrato LucLite (Packard; reconstituido de acuerdo con las instrucciones del fabricante; 100 µl). Las placas se cubrieron con Top Seal y se incubaron a temperatura ambiente durante cinco minutos antes del conteo en el Packard TopCount (conteo de fotón sencillo, tiempo de conteo 0.01 minuto, retraso de conteo 5 minutos). Se adaptó una curva de "mejor ajuste" mediante de un método de suma de cuadrados mínimos a la gráfica de conteos por segundo (CPS) contra la concentración (M) del compuesto para obtener un valor de EC50. La Tabla 1 muesíra los valores de pEC50 obfenidos para algunos compuestos representativos de la invención.

Eiemplo 18: Latencia de Coletazo de Cola en Ratones Los ratones fueron entrenados para reposar quietos en un aparato de coletazo de cola (Ugo Basile, Italia) mientras se midió la latencia de coletazo de cola. La cola se expuso a un haz enfocado de calor radiante en un punto aproximadamente 2.5 cm desde la punta. La latencia de colefazo de cola se definió como el iníervalo entre la aplicación del estímulo térmico y el retiro de la cola. Se empleó un corte de 12 segundos para evitar daño al tejido. Se trataron cuatro grupos de ocho ratones con vehículo o una de tres dosis del compuesto de prueba, se administró de manera intravenosa (vehículo: salina 9 g/l; volumen de inyección 10 ml/kg). La latencia de coletazo de cola se midió antes de la administración del compuesío de prueba y en intervalos regulares (típicamente 20, 40 y 60 minutos) después de la administración del compuesto. El ED5o se calculó en Tmax. Los compuestos de los ejemplos 2 , 4 , 14, 1 5 y 16 aumentaron significativamente la latencia de coletazo de cola con un ED50 <5 umol/kg.

Claims (7)

1. REIVINDICACIONES 1 . Un derivado de 1 -[(indol-3-il) carbonil] piperazina tricíclica que tiene la Fórmula I general:
2. Fórmula l en donde: X es CH2, O o S; R representa 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono y halógeno; Ri es cicloalquilo de 5 a 8 átomos de carbono ; R2 es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R3, R31, R , R ', Rs , Rs' y Re' son , independientemente, hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, sustituido opcionalmente con alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono, OH o halógeno; R6 es hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, sustituido opcionalmente con alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono, OH o halógeno ; o Re forma junto con R un anillo heterocíclico saturado de 4 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de O y S; R7 forma junto con Re un anillo heterocíclico saturado de 4 a 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de O y S; o R7 es H , alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 5 átomos de carbono, los grupos alquilo que están sustiíuidos opcionalmente con O H , halógeno o alquiloxi de 1 a 4 átomos de carbono; o una sal de los mismos farmacéuticamente aceptable. 2. El derivado de 1 -[(indol-3-il) carbonil] piperazina tricíclica de la reivindicación 1 , en don de R es H y R-, es ciclopentilo o ciciohexilo.
3. 3. El derivado de 1 -[(indol-3-il) carbonil] piperazina tric?cl?ca de la reivindicación 1 o 2, en donde X es CH2 u O.
4. 4. El derivado de 1 -[(indol-3-il) carbonil] piperazina tricíclica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 , en donde R-i , R2, R3, R3', R4' , R5, R5' y Re' son H ; R l R6 y R7 son independientemeníe H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; o R6 forma junto con R? un anillo heterocíclico saturado de 5 o 6 miembros y R4 es H o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono.
5. 5. El d erivado de 1 -[(indoI-3-M) carbonil] piperaz?na tr?ciclíca de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para uso en terapia .
6. 6. Una composición farmacéutica que comprende un derivado de 1 -[(indoJ-3-ií) carbonil] piperazina tricíclica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 junto con un portador del mismo farmacéuticamente aceptable.
7. 7. El uso de un derivado de 1 -[(indoI-3-il) carbonif] piperazina tricíclica de la Fórmula I como se define en la reivindicación 1 , en la preparación de un medicamento para el tratamiento del dolor.