MXPA06003861A

MXPA06003861A - Composiciones de vacuna que comprenden una interleucina 18 y sistema de adyuvante de saponina

Info

Publication number: MXPA06003861A
Application number: MXPA/A/2006/003861A
Authority: MX
Inventors: Elvire Marie Bruck Claudine; Marie Ghislaine Gerard Catherine; Ludmila Jonak Zdenka
Original assignee: Glaxosmithkline Biologicals Sa
Priority date: 2003-10-13
Filing date: 2006-04-06
Publication date: 2007-04-10

Abstract

La presente invención se refiere a una terapia de combinación que tiene utilizad en el tratamiento o profilaxis de enfermedades infecciosas, cánceres, enfermedades autoinmunes y condiciones relacionadas.

Description

COMPOSICIONES DE VACUNA QUE COMPRENDEN UNA INTERLEUCINA 18 Y SISTEMA DE ADYUVANTE DE SAPONINA Campo del Invento La presente invención se refiere a una terapia de combinación que tiene utilidad en el tratamiento o profilaxis de enfermedades infecciosas, cánceres, enfermedades autoinmune y condiciones relacionadas. En particular, la terapia de combinación comprende la administración de una citocina TH-1, en particular IL-18, y una composición inmunogénica, en particular una vacuna, que comprende un antígeno y un adyuvante de saponina. En particular, la presente invención se refiere al uso de IL-18 ó variante bioactivo del mismo y a una composición inmunogénica que comprende un antígeno asociado con tumor y un adyuvante de saponina, para el tratamiento de lesiones preneoplásicas o cáncer. La presente invención se refiere además a preparaciones combinadas y equipos farmacéuticos adecuados para utilizarse de acuerdo con la presente invención. Estos métodos de tratamiento y preparaciones farmacéuticas son especialmente útiles para el estímulo de una respuesta inmune adecuada para aplicaciones profilácticas e inmunoterapéuticas, especialmente para la prevención y/o tratamientos de tumores.

Antecedentes del Invento El cáncer es una enfermedad que se desarrolla a partir de una sola célula debido a cambios genéticos. A pesar de enormes investigaciones con recursos financieros y humanos, el cáncer permanece como una de las principales causas de muerte. La detección clínica de estos tumores ocurre en su mayor parte en una etapa de la enfermedad relativamente tardía, cuando el tumor primario puede ser eliminado mediante cirugía, y la existencia de micrometástasis depositadas en diferentes órganos ya ha ocurrido. A pesar de avances considerables en la comprensión de los mecanismos que conducen al cáncer, ha habido menos progreso en la terapia de cánceres metastáticos y en la prevención del progreso de tumores de etapas tempranas hacia más lesiones malignas y metastáticas. La quimioterapia con frecuencia no elimina completamente estas células, las cuales posteriormente permanecen como una fuente de enfermedad recurrente. Las citocinas tipo TH-1, por ejemplo IFN-?, TNFa, I L-2, IL-12, IL-18, etc., tienden a favorecer la inducción de las respuestas inmune transmitidas por la célula a un antígeno administrado. En contraste, los altos niveles de citocinas tipo Th-2 (por ejemplo, IL-4, IL-5, IL-6, e I L-10) tiende a favorecer la inducción de respuestas inmune humorales. La interleucina-18 (IL-18) también conocida como factor de inducción de interferón-gamma (lFNg), ha sido descrita como uña citocina pleotrópica con efectos inmunomoduladores que estimulan el propio sistema inmune del paciente contra la enfermedad (por ejemplo cáncer). IL- 18 se expresa en forma temprana en la respuesta inmune y actúa en respuestas inmune tanto humorales como celulares y conduce la respuesta hacia un mejor perfil tipo TH-1. Se produce mediante células que presentan antígeno activado y ha sido reportado por tener diversas bioactividades, específicamente por promover la diferenciación de células CD4 T na?ve en células Th1, para estimular las células exterminadoras naturales (NK), células exterminadoras naturales T (NKT) y por inducir la proliferación de células T activadas, predominantemente células T citotóxicas (fenotipo CD8 + ) que segregan interferón gamma (IFN-gamma) (Okamura H. y Asociados, 1998, Adv. Immunol. 70:281-312). IL-18 también transmite muerte de tumor inducida por Fas, promueve la producción de IL-1a y GMCSF, y tiene actividad anti-angiogénica. IL-18 tiene la capacidad de estimular inmunidad innata y respuestas transmitidas tanto por Th1 como Th2. En la presencia de IL-12, IL-18 puede actuar en células Th1, células T no polarizadas, células NK, células B y células dendríticas que producen IFNg. Sin la ayuda de IL-12, IL-18 tiene potencial para inducir la producción I L-4 e IL-13 en células T, células NK, células mástil y basófilos. IL-18 ha demostrado inducir regresión de tumor, a través de la producción de IFN-gamma, el cual es un componente importante de las respuestas inmune antitumor endógenas e inducidas por citocina. Se ha demostrado eficacia en diferentes modelos de animal con tumor (Jonak Z. y Asociados, 2002, J. Immunother. 25, S20-S27; Akamatsu S. y Asociados, 2002, J. immunother. 25, S28-S34). Se han descrito composiciones que comprenden IL-18 combinado con otros agentes, en particular IL-18 en combinación con agentes quimioterapéuticos (Patente Norteamericana No. 6,582,689). También se ha descrito IL-18 como actuando como un adyuvante para vacunas (Publicaciones WO 99/56775 y WO 03/031569). Las saponinas se consideran en: Lacaille-Dubois, M. y Wagner H. (1996. Una revisión de las actividades biológicas y farmacológicas de las saponinas. Phytomedicine Volumen 2, páginas 363-386). Las saponinas son esteroides o glucósidos de triterpeno ampliamente distribuidos en los reinos de las plantas y animales marinos. Las saponinas se observan en la formación de soluciones coloidales en agua, las cuales hacen espuma al momento de agitarse, y precipitan el colesterol. Cuando las saponinas están cerca de las membranas celulares, crean estructuras tipo poro en la membrana lo cual origina que la membrana explote. La hemolisis de los eritrocitos es un ejemplo de este fenómeno, lo cual es una propiedad de ciertas, pero no todas las saponinas. Las saponinas son conocidas como adyuvantes en vacunas para administración sistémica. El adyuvante y la actividad hemolítica de saponinas individuales ha sido estudiada ampliamente en la técnica (Lacaille-Dubois y Wagner, supra). Por ejemplo, Quil A. (derivado de la corteza del árbol de Quillaka Saponaria Molina de América del Sur) y fracciones del mismo se describen en la Patente Norteamericana No. 5,057,540, y en "Saponins as vaccine adyuvante", Kensil, C. R., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 1996, 12 (1-2):1-55; y en la Patente EP 0,362,279 B1. Las estructuras de particulado, denominadas Complejos de Estimulación Inmune (ISCOMS), que comprenden Quil A. ó fracciones del mismo, han sido utilizadas en la fabricación de vacunas (Morein, B., Patente 0,109,942 B1). Estas estructuras han sido reportadas por tener actividad adyuvante (Patente EP 0,109,942 B1; Publicación WO 96/11711). Las saponinas hemolíticas QS21 y QS17 (fracciones purificadas de Quil A purificadas por HPLC) han sido descritas como adyuvantes sistémicos potentes, y el método para su producción se describe en la Patente Norteamericana No. 5,057,540 y en la Patente EP 0,362,279 B1. También se describe en estas referencias el uso de QS7 (una fracción no hemolítica de Quil-A) la cual actúa como un adyuvante potente para vacunas sistémicas. El uso de QS21 se describe en forma adicional en la Publicación de Kensil y Asociados (1991, J. Immunology, volumen 146, 431-437). Las combinaciones de QS21 y polisorbato o ciclodextrina también son conocidas (WO 99/10008). Los sistemas de adyuvante de particulado que comprenden fracciones de QuilA, tal como QS21 y QS7 se describen en la Publicación WO 96/33739 y WO 96/11711. Otras saponinas que han sido utilizadas en estudios de vacunación sistémica incluyen las derivadas de otras especies de plantas tales como Gypsophila y Saponaria (Bomford y Asociados, Vaccine, 10(9):572-577, 1992). Las saponinas también son conocidas por haber sido utilizadas en estudios de vacunas aplicadas en la mucosa, las cuales han tenido un éxito variado en la inducción de respuestas inmune. La saponina Quil-A ha mostrado previamente no tener efecto en la inducción de una respuesta inmune cuando el antígeno se administra en forma intranasal (Gizurarson y Asociados, 1994, Vaccine Research, 3, 23-29). Entre tanto, otros autores han utilizado este adyuvante con éxito (Maharaj y Asociados, Can. J. Microbiol. 1986, 32(5):414-20; Chavali y Campbell, Immunology, 174(3):347-59). Los ISCOMs que comprenden la saponina Quil A, han sido utilizados en formulaciones de vacunas intragástricas e intranasales y han exhibido actividad adyuvante (Mcl Mowat y Asociados, 1991, Immunology, 72, 317-322; Mcl Mowat y Donachie, Immunology Today, 12, 383-385). QA21, la fracción no tóxica de Quil A, también ha sido descrita como un adyuvante oral o intranasal (Sumino y Asociados, J. Virol., 1998, 72(6):4931-9; Publicación WO 98/56415). La presente invención se refiere al sorprendente descubrimiento de que la administración combinada de una citocina TH-1, tal como IL-18 y de una composición inmunogénica que comprende un antígeno y un adyuvante de saponina tal como, pero sin limitarse a, QS-21 es extremadamente potente y proporciona una profilaxis o tratamiento eficiente y bien tolerado de enfermedades infecciosas, enfermedades neoplásicas primarias y metastáticas (por ejemplo, cánceres), enfermedades autoinmune y condiciones relacionadas, y es particularmente efectiva para inhibir el crecimiento de células de cáncer humano que expresan un antígeno asociado con tumor. Sumario del Invento Por consiguiente se proporciona un método para elicitar una respuesta inmune mejorada a un antígeno en un paciente, en donde el método comprende administrar al paciente una cantidad segura y efectiva de i) una composición inmunogénica, en particular una vacuna, que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina, e ii) un polipéptido IL-18 o fragmento o variante bioactivo del mismo. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para reducir la severidad de un cáncer en un paciente, en donde el método incluye tratar tumores establecidos previamente (tumores primarios y tumores metastáticos) o prevenir recurrencias de cáncer, en donde el método comprende administrar al paciente que necesita del mismo, una cantidad segura y efectiva de i) un polipéptido IL-18 ó un fragmento o variante bioactiva del mismo e ii) una composición inmunogénica, en particular una vacuna, que comprende un antígeno asociado con tumor o un derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina. En una modalidad, el polipéptido IL-18 es un polipéptido IL-18 de múrido o humano o un fragmento o variante inmunogénico del mismo. En otra modalidad el antígeno es un antígeno asociado con tumor. Aún en otra modalidad, la saponina es una fracción no tóxica de Quil A, por ejemplo QS-17 ó QS-21. En un ejemplo, la saponina es Qs-21. Por consiguiente, en una modalidad, la presente invención se refiere a un método para reducir la severidad de un cáncer en un paciente, ¡ncluyendo tratar tumores establecidos previamente (tumores primarios o tumores metastáticos) o prevenir las recurrencias de cáncer, particularmente carcinoma de seno, de pulmón (particularmente carcinoma de pulmón de célula no pequeña), melanoma, colorrectal, de ovarios, próstata, vejiga, carcinoma escamoso de cabeza y cuello, gástrico y otros Gl (gastrointestinales), en particular cáncer de esófago, en donde el método comprende administrar al mamífero, i) una composición inmunogénica, en particular una vacuna, que comprende un antígeno asociado con el tumor o un derivado inmunogénico del mismo y QS-21, e ii) polipéptido IL-18 y fragmento bioactivo o variante del mismo. La presente invención también se refiere a una preparación combinada que comprende en la forma de ingredientes activos los siguientes componentes individuales: (1) un polipéptido IL-18 ó un fragmento o variante bioactivo del mismo, y (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno o un adyuvante de saponina, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, por separado o en secuencias para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, cánceres, incluyendo tumores primarios y tumores metastáticos, enfermedades autoinmunes y condiciones relacionadas. En una modalidad, la composición inmunogénica dentro de la preparación combinada contiene un químico inmunoestimulante adicional seleccionado del grupo que comprende: colesterol, 3D-MPL, un oligonucleótido inmunoestimulador, hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, tocoferol y una emulsión de aceite en agua o una combinación de dos o más de dichos adyuvantes. Por ejemplo, el adyuvante adicional puede ser un oligonucleótido inmunoestimulador. En un aspecto relacionado, la presente invención también proporciona un equipo farmacéutico que comprende en la forma de ingredientes activos los siguientes componentes individuales: (1) un polipéptido I L-18 ó un fragmento o variante bioactivo del mismo, y (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, por separado o en secuencias para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, cánceres, incluyendo tumores primarios y tumores metastáticos, y enfermedades autoinmunes. La presente invención se refiere además al uso de (1) un polipéptido IL-18 ó un fragmento o variante bioactivo del mismo, y (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno o un derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina, en la fabricación de un medicamento para lograr una respuesta inmune protectora o reducir la severidad de una enfermedad en un paciente, administrando al paciente una cantidad segura y efectiva de ambos componentes. La presente invención se refiere además a procesos para elaborar dichas composiciones inmunogénicas, al uso de dichas composiciones para la prevención y/o tratamiento de enfermedades, en particular cáncer, y al uso de dichas composiciones para inhibir el crecimiento de tumores o células cancerígenas en mamíferos, incluyendo humanos. Descripción Detallada del Invento En una forma de la presente ¡nvención, el adyuvante de saponina dentro de las composiciones inmunogénicas es una fracción no tóxica de Quil A, por ejemplo QS-17 ó QS-21, por ejemplo QS-21. El antígeno puede ser un antígeno derivado de un organismo infeccioso, por ejemplo un antígeno asociado con tumor o derivado ¡nmunogénico o derivado del mismo. En una modalidad, la citocina TH-1 es un fragmento bioactivo de múrido o de humano I L-18 del mismo. La composición inmunogénica e IL-18, pueden actuar en forma sinérgica en la inducción del anticuerpo específico del antígeno, y pueden ser potentes para inducir o mejorar las respuestas inmune celulares y/o humorales asociadas normalmente con el sistema inmune tipo TH-1. Por la frase "aumento de respuesta inmune" se entiende el incremento total en la respuesta inmune, tal como se determina mediante la respuesta inmune humoral y/o transmitida por células, o por la inducción del tamaño y/o carga del tumor. Por el término "sinergia" se entiende que el polipéptido IL-18 ó el fragmento o variante inmunogénico del mismo tiene la capacidad de inducir una respuesta inmune cuando se administra en una terapia combinada con la composición inmunogénica de la presente invención, y la presencia de dicha composición inmunogénica puede aumentar la eficacia el polipéptido IL-18 ó fragmento inmunogénico o variante del mismo. El resultado de la inducción de la respuesta inmune puede ser profilaxis, reducción de la severidad de la enfermedad (incluyendo, en el caso de cáncer, reducción de tumores establecidos previamente, primarios o metástasis, o prevención de recurrencias de cáncer), y/o terapia. Por consiguiente, en una modalidad, se proporciona un método para generar una respuesta inmune a un antígeno en un mamífero, en donde el método comprende administrar a un mamífero i) una cantidad efectiva de una composición inmunogénica que comprende un antígeno derivado de un organismo infeccioso, o un antígeno asociado con tumor y QS-21, e ii) un polipéptido IL-18 ó fragmento o variante bioactivo del mismo. En una modalidad, ambos de los componentes del tratamiento se proporcionan en secuencias. Esto es que la composición inmunogénica se utiliza para reforzar una respuesta inmune humoral y/o celular imprimada por la administración de IL-18. Como alternativa, en otra modalidad, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención se utiliza para imprimar una respuesta inmune humoral y/o celular en un individuo el cual recibirá posteriormente IL-18. Aún en otra modalidad ambos componentes del tratamiento se administran en forma simultánea, ya sea mediante coadministración en dos diferentes sitios o mezclados en adiciones dentro de la misma preparación. Los expertos en la técnica comprenderán que tanto la composición inmunogénica como el polipéptido IL-18 o fragmento o variante inmunogénico del mismo, se pueden administrar una vez o en forma repetida. La terapia de combinación tal como se contempla dentro del alcance de la presente invención, es al menos tan efectiva, por ejemplo con eficacia incrementada, comparada con cualquier componente usado solo. Especialmente en el campo del cáncer, el tratamiento combinado es conveniente debido a que combina dos agentes anti-cáncer, operando cada uno en un modo aditivo, por ejemplo en forma sinérgica, a través de un mecanismo de acción diferente para producir una respuesta citotóxica mejorada contra células de tumor humano. En una modalidad relacionada, se proporciona una preparación combinada (por ejemplo, un empaque de frasco múltiple farmacéutico) que comprende en la forma de ingredientes activos (1) un polipéptido IL-18 ó un fragmento o variante bioactivo del mismo, y (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno y un adyuvante de saponina, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, por separado o en secuencias para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, y cáncer. Por el término "preparación combinada", se entiende una preparación farmacéutica, o un paquete farmacéutico (de frascos múltiples) o aparato de suministro el cual puede contener una o más formas de dosificación por unidad que contienen los ingredientes activos. El paquete puede comprender por ejemplo lámina de metal o plástico, tal como un empaque de burbuja. El paquete o aparato de suministro puede estar acompañado por instrucciones para administración. Cuando el polipéptido IL-18 ó fragmento o variante bioactivo del mismo y la composición inmunogénica están proyectados para administración en la forma de dos composiciones separadas, se pueden presentar en la forma de, por ejemplo, un paquete de frascos múltiples. Los ingredientes activos que se administran ya sea al mismo tiempo, o por separado, en secuencias, de acuerdo con la presente invención, no representan un mero agregado de agentes conocidos, aunque una nueva combinación con la propiedad sorprendentemente valiosa de que el uso de un polipéptido IL-18 o fragmento o variante inmunogénico del mismo, permite la simulación de ambos de los componentes innatos y adaptivos del sistema inmune, incluyendo activación de célula NK, así como respuestas inmune transmitidas por célula T y producción de citocinas, incrementando de este modo la eficacia de la composición inmunogénica. Esto da como resultado un tratamiento nuevo y efectivo. Quedará entendido que la preparación combinada, también designada como equipo de partes, significa que los componentes de la preparación combinada no se encuentran necesariamente como una unión, por ejemplo, en composición, con el objeto de estar disponibles para aplicación por separado o en secuencias. Por lo tanto, la expresión equipo de partes, significa que no es necesariamente una combinación real, en virtud de la separación física de los componentes. La preparación combinada puede ser utilizada ya sea para el tratamiento o profilaxis de cáncer, en particular para reducción de la severidad de cáncer o la prevención de recurrencias de cáncer. Los cánceres que pueden beneficiarse de la terapia combinada tal como se describe en la presente invención, impiden cualquier enfermedad caracterizada por crecimiento de célula no controlado y proliferación, lesiones preneoplásticas, tumores primarios y lesiones neoplásticas metastáticas, e incluyen, pero no se limitan a, carcinoma de seno, pulmón (particularmente de pulmón de célula no pequeña - NSCLC - carcinoma), melanoma, colorrectal, de ovarios, próstata, vejiga, carcinoma escamoso de cabeza y cuello, gástrico, y otros Gl (gastrointestinales), en particular cáncer de esófago, leucemia, linfoma, mieloma y plasmacitoma. Los antígenos de ejemplo o derivados y fragmentos de los mismos, incluyendo péptidos (por ejemplo menores a aproximadamente 50 aminoácidos), incluyen los antígenos codificados por la familia de MAGE (genes que codifican antígeno de melanoma) los cuales son conocidos como antígenos de cáncer (-testículos) (Gaugler B. y Asociados, J. Exp. Med., 1994, 179:921; Weynants P. y Asociados, Int. J. Cáncer, 1994, 56:826; Patard J. J. y Asociados, Int. J. Cáncer, 1995, 64:60). Los cánceres que expresan proteínas MAGE son conocidos como tumores asociados con MAGE. Los genes MAGE pertenecen a una familia de genes relacionados en forma cercana, incluyendo por ejemplo, MAGE 1, MAGE 2, MAGE 3 (gen-3 que codifica antígeno de melanoma) MAGE 4, MAGE 5, MAGE 6, MAGE 7, MAGE 8, MAGE 9, MAGE 10, MAGE 11, MAGE 12, localizado en el cromosoma X y comparten entre sí del 64 al 85% de homología en su secuencia de codificación (De Plaen E. y Asociados, Immunogenetics, 1994, 40, 360-369). Algunas veces son conocidos como MAGE A1, MAGE A2, MAGE A3, MAGE A4, MAGE A5, MAGE A6, MAGE A7, MAGE A8, MAGE A9, MAGE A10, MAGE A11, MAGE A12 (la familia MAGE A). Dos de los otros grupos de proteína también son parte de la familia MAGE aunque en forma relacionada más distante. Existe el grupo MAGE B y MAGE C. La familia MAGE B incluye MAGE B1 (también conocida como MAGE Xp1, DAM 10), MAGE B2 (también conocido como MAGE Xp2 y DAM 6) MAGE B3 y MAGE B4 - la familia MAGE C incluye normalmente MAGE C1 y MAGE C2. En términos generales, se puede definir una proteína MAGE como conteniendo una signatura de secuencia de núcleo hacia el extremo de terminal-C de la proteína (por ejemplo con respecto a MAGE A1, una proteína de 309 aminoácidos, en donde la signatura del núcleo corresponde al aminoácido 195 a 279). El patrón de consenso de la signatura de núcleo se describe por lo tanto como se indica a continuación, en donde X representa cualquier aminoácido, se conservan los residuos del cuadro ¡nferior (variantes conservadoras permitidas) y los residuos del cuadro superior se conservan perfectamente. Signatura de secuencia de núcleo: LixvL(2x)I(3x)g(2x)apEExiWexl(2x)m(3-4x)Gxe(3-4x)gxp(2x)llt(3x)VqexYLxYxqVPxsxP(2x)yeFLWGprA(2x)Et(3 x)kv Las substituciones conservadoras son bien conocidas y generalmente se establecen como las matrices de marcación por default en programas por computadora de alineación de secuencias. Estos programas incluyen PAM250 (Dayhoft M. O. y Asociados, 1978, "A model of evolutionary changes in proteins", en "Atlas of Protein sequence and structure" 5(3) M. O. Dayhoft (ed.), 345-352), National Biomedical Research Foundation, Washington, y Blosum 62 (Steven Henikoft & Jorja G. Henikoft (1992), "Amino acid substitution matricles from protein blocks"), Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 89 (Biochemistry): 10915-10919.

En términos generales, la substitución dentro de los siguientes grupos son substituciones conservadoras, aunque las substituciones entre los grupos se consideran como no conservadas. Los grupos son: i) aspartato/asparagina/glutamato/glutamina, ii) serina/treonina, iii) lisina/arginina, iv) fenilalanina/tirosina/triptófano, v) leucina/isoleucina/valina/metionina, vi) glicina/alanina. En general, y dentro del contexto de la presente invención, una proteína MAGE será aproximadamente el 50% idéntica en esta región del núcleo a los aminoácidos 195 a 279 de MAGE A1.

MAGE-3 se expresa en el 69% de los melanomas (Gaugler B. y Asociados, J. Exp. Med., 1994, 179:921), y también se puede detectar en el 44% de NSCLC (Yoshimatsu T. J. Surg. Oncol., 1998, 67, 126-129), 75% de los cánceres de pulmón de célula pequeña (SCLC) (Traversari C. y Asociados, Gene Ther. 1997, 4:1029-1035), 48% de los carcinomas de célula escamosa de cabeza y cuello, el 34% de los carcinomas de célula de transición de vejiga, el 50% de los carcinomas de esófago, el 32% de los cánceres de colon y el 24% de los cánceres de seno (Van Peí A. y Asociados, Immunol. Rev. 1995, 145:229; Inoue H. y Asociados, Int. J. Cáncer, 1995, 63:523; Nishimura S. y Asociados, Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi 1997, Apr, 20 (2): 95-101). Se han identificado diversos epítopes CTL en la proteína MAGE-3, ya sea para los alelos de molécula MHC clase 1 HLA.A1, ó HLA.A2 (Van der Bruggen P. y Asociados, Eur. J. Immunol. 1994, 24, 3038-3043), y HLA.B44 (Hermán, J. y Asociados, Immunogenetics, 1996, 43, 377-383), respectivamente. Aunque se ha detectado MAGE-3 en melanomas, cánceres de pulmón y de esófago, el nivel de expresión de estos antígenos en pacientes con tumores asociados con MAGE parece ser limitado y debajo del valor de umbral del reconocimiento inmune (Weisser T. S. y Asociados, Ann. Thorac. Surg. 2001, 71:295-302).

Otros antígenos de ejemplo o derivados o fragmentos de los mismos incluyen antígenos MAGE tales como los que se describen en la Publicación WO 99/40188, PRAME (WO 96/10577), BAGE, RAGE, LAGE 1 (Publicación WO 98/32855), LAGE 2 (también conocido como NY-ESO-1, Publicación WO 98/14464), XAGE (Liu y Asociados, Cáncer Res, 2000, 60:4752-4755; WO 02/18584) SAGE, y HAGE (WO 99/53061) ó GAGE (Robbins and Kawakami, 1996, Current Opinions in Immunology 8, páginas 628-636; Van den Eynde y Asociados, International Journal of Clinical & Laboratory Research (presentado 1997); Corréale y Asociados (1997), Revista del Instituto Nacional de Cáncer 89, p293. De hecho estos antígenos se expresan en un amplio rango de tipos de tumor tales como melanoma, carcinoma de pulmón, sarcoma y carcinoma de vejiga. En una modalidad se utilizan antígenos de próstata, tales como antígenos de cáncer de próstata o antígeno de diferenciación específica de próstata (PSA), PAP, PSCA (PNAS 95(4) 1735-1740, 1998), PSMA ó el antígeno conocido como prostasa. En otra modalidad, el antígeno de próstata es P501S o un fragmento del mismo. P501S también denominado como prosterna (Xu y Asociados, Cáncer Res. 61, 2001, 1563-1568), es conocido como la SEQ ID NO:113 de la Publicación No. WO 98/37814 y es una proteína de 553 aminoácidos. Los fragmentos y proteínas inmunogénicas del mismo, comprenden 20 ó al menos 20, 50 ó al menos 50 ó 100 ó al menos 100 aminoácidos contiguos, tal como se describe en la Solicitud de Patente referenciada anteriormente y se contemplan de manera específica en la presente invención. Los fragmentos que pueden ser utilizados se describen en la Publicación No. WO 98/50567 (antígeno PS108) y en la forma de una proteína asociada con cáncer de próstata (SEQ ID NO:9 de la Publicación WO 99/67384). Otros fragmentos que pueden ser utilizados son los aminoácidos 51 a 553, 34 a 553, ó 55 a 553 de la proteína P501S de longitud total. Particular, se puede contemplar la construcción 1, 2, y 3 (ver figura 2, secuencias 27 a 32) y se pueden expresar en sistemas de levadura, por ejemplo secuencias de ADN que codifican dichos polipéptidos se pueden expresar en un sistema de levadura. La prostasa es una proteasa de serina específica de la próstata (tipo tripsina), con 254 aminoácidos de longitud, con una triada catalítica de proteasa de serina conservada H-D-S y una secuencia de pre-propéptido de terminal amino que indica una función de segregación potencial (P. Nelson, Lu Gan, C. Ferguson, P. Moss, R. Linas, L. Hood y K. Wand, "Molecular cloning and characterisation of prostase, an androgen-regulated serine protease with prostate restricted expression, en Proc. Nati. Acad. Sci. EUA (1999) 96, 3114-3119). Se ha descrito un sitio de glucosilación putativa. La estructura anticipada es muy similar a otras proteasas de serina conocidas, mostrando que el polipéptido maduro se dobla en un solo dominio. La proteína madura tiene 224 aminoácidos de longitud, con al menos un epítope A2 mostrado como procesado en forma natural. La secuencia de nucleótidos de prostasa y la secuencia de polipéptidos deducidos y homólogos se describen en la Publicación de Ferguson y Asociados (Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 1999, 96, 3114-3119) y en las Solicitudes de Patente Internacional Nos. WO 98/12302 (y también en la Patente otorgada correspondiente No. US 5,955,306), WO 98/20117 (y también en las Patentes otorgadas correspondientes Nos. US 5,840,871 y US 5,786,148) (calicreína específica de próstata) y WO 00/04149 (P703P). Otros antígenos específicos de la próstata son conocidos a partir de las Publicaciones WO 98/37418, y WO/004149. Otro es STEAP (PNAS 96 14523 14528 7 - 12 1999). Otros antígenos asociados con tumor útiles dentro del contexto de la presente invención incluyen: Plu -1 J. Biol. Chem. 274 (22) 15633-15645, 1999, HASH -1, HASH-2 (Alders, M. y Asociados, Hum. Mol. Genet. 1997, 6, 859-867), Cripto (Salomón y Asociados, Bioessays 199, 21 61 - 70, Patente 5654140), CASB616 (WO 00/53216), Criptin (US 5,981,215). Además, los antígenos particularmente relevantes para vacunas en la terapia de cáncer también comprenden tirosinasa, telomerasa, P53, NY-BM.1 (WO 01/47959), y fragmentos de los mismos tal como se describe en las Publicaciones 00/43420, B726 (WO 00/60076, SEQ ID NOs: 469 y 463; WO 01/79286, SEQ ID NOs:474 y 475), P510 (WO 01/34802 SEQ ID NOs:537 y 538), y survivina. La presente invención también es útil en combinación con antígenos de cáncer de seno tales como Her-2/neu, mamaglobina (Patente Norteamericana No. 5,668,267), B305D (WO00/61753 SEQ ID NOs:299, 304, 305, y 315), o aquellas que se describen en las Publicaciones WO00/52165, WO99/33869, WO99/19479, WO 98/45328. Los antígenos Her-2/neu se describen inter alia, en la Patente Norteamericana No. 5,801,005. El Her-2/neu puede comprender todo el dominio extracelular (que comprende aproximadamente los aminoácidos 1 a 645) o fragmentos de los mismos y al menos una parte inmunogénica de, o todo el dominio extracelular aproximadamente los 580 aminoácidos de terminal-C. En particular, la porción ¡ntracelular puede comprender el dominio de fosforilación o fragmentos del mismo. Dichas construcciones se describen en la Publicación WO00/44899. Una construcción que se puede utilizar es conocida como ECD-PhD, una segunda es conocida como ECD deltaPhD (ver Publicación WO00/44899) también denominada dHer2. El Her-2/neu tal como se utiliza en la presente invención, puede derivarse de, por ejemplo, rata, ratón, o humano. Ciertos antígenos de tumor son antígenos de péptido pequeños (es decir con menos de aproximadamente 50 aminoácidos). Los péptidos de ejemplo incluyen péptidos derivados de mucina tales como MUC-1 (ver por ejemplo la Patente Norteamericana No. US 5,744,144; Patente Norteamericana No. US 5,827,666; Publicación WO88/05054, Patente Norteamericana No. US 4,963,484). Específicamente contemplados son los péptidos derivados de MUC-1 que comprenden al menos una unidad de repetición del péptido MUC-1, o al menos dos de dichas repeticiones y que son reconocidos por el anticuerpo SM3 (Patente Norteamericana No. US 6,054,438). Otros péptidos derivados de mucina incluyen péptido de MUC-5. Como alternativa, el antígeno puede ser una interleucina tal como IL-13 e I L-14. El antígeno puede ser una hormona de auto-péptido tal como la hormona que libera hormona de gonadotropina de longitud total (GnRH, WO95/20600), un péptido largo de 10 aminoácidos cortos, útil en el tratamiento de muchos cánceres, o en inmunocastración. Otros antígenos específicos de tumor incluyen, pero no están restringidos a gangliósidos específicos de tumor tales como GM2 y GM3. El antígeno también puede ser derivado de fuentes que son patogénicas para humanos, tales como virus de inmunodeficiencia humana VIH-1 (tal como tat, nef, transcriptasa inversa, gag, gp120 y gp160), virus de herpes simple de humano, tal como gD ó derivados de los mismos o proteína temprana inmediata tal como 1CP27 de HSV1 ó HSV2, citomegalovirus ((especie humana)(tal como gB ó derivados del mismo), rotavirus (incluyendo virus atenuados vivos) virus de Epstein Barr (tal como gp350 ó derivados del mismo), virus de varicela Zoster (tal como gpl, II y IE63) ó de virus de hepatitis tal como virus de hepatitis B (por ejemplo antígeno de superficie de hepatitis B ó un derivado del mismo), virus de hepatitis A, virus de hepatitis C y virus de hepatitis E, o de otros patógenos virales tales como paramixovirus: virus sincitial respiratorio (tal como proteína F y G o derivados de los mismos), virus de parainfluenza, virus de sarampión, virus de paperas, virus de papiloma humano (por ejemplo, HPV6, 11, 16, 18, ...), flavivirus (por ejemplo, Virus de fiebre amarilla, virus de dengue, virus de encefalitis por nacimiento de garrapatas, virus de encefalitis japonesa) o virus de influenza (virus completo vivo o inactivado, virus de influenza dividido, crecimiento en huevos o células MDCK, o virusomas flu completos (tal como se describe en la Publicación de R. Gluck, Vaccine, 1992, 10, 915-920) o proteínas purificadas o recombinantes de los mismos, tal como proteínas HA, NP, NA, ó M, o combinaciones de los mismos) o derivadas de patógenos bacterianos tales como Neisseria spp., incluyendo N. gonorrhea, y N. meningitidis (por ejemplo polisacáridos capsulares y conjugados de los mismos, proteínas de enlace de transferina, proteínas de enlace de lactoferrina, PIIC, adhesinas); S. pirógenos (por ejemplo, proteínas M ó fragmentos de los mismos, proteasa C5A, ácido lipoteicoicos), S. agalactiae, S. mutans; H. ducreyl; Moraxelia spp, incluyendo M. catarrhalis, también conocido como Branhamella catarrhalis (por ejemplo adhesinas e invasinas de alto y bajo peso molecular), Bordetella spp., incluyendo ß. pertussis (por ejemplo pertactina, toxina de pertussis o derivados de los mismos, hemaglutinina filamentosa, ciclasa de adenilato, fimbriae), B. parapertussis y B. bronchiseptica; Mycobacterium spp., incluyendo M. tuberculosis (por ejemplo, ESAT6, Antígeno 85A, -C, ó -C), M. bovis, M. leprae, M. avium, M. paratuberculosis, M. smegmatis; Legionella spp., incluyendo L. pneumophila; Escherichia spp, incluyendo E. coli enterotóxico (por ejemplo factores de colonización, toxina débil con calor o derivados de los mismos, toxina estable con calor o derivados de los mismos), E. coli enterohemorrágico, E. coli enterohepatogénico (por ejemplo, toxina tipo toxina shiga o derivados de los mismos); Vibrio spp., incluyendo V. cholera (por ejemplo toxina de cólera o derivados de los mismos); Shigella spp., incluyendo S. sonnei, S. dysenteriae, S. flexnerii; Yersinia spp., incluyendo Y. enterocolitica (por ejemplo, una proteína Yop), Y. pestis, Y. pseudotuberculosis; Campylobacter spp., incluyendo C. jejuni (por ejemplo, toxinas, adhesinas, e invasinas), y C. coli; Salmonella spp, incluyendo S. typhi, S. paratyphi, S. choleraesuis, S. enteritidis; Listeria spp., incluyendo L. monocytogenes; Helicobacter spp., incluyendo H. pylori (por ejemplo, ureasa, catalasa, toxina de vacuolación); Pseudomonas spp., incluyendo P. aeruginosa; Staphylococcus spp., incluyendo S. aureus, S. epidermidis; Enterococcus spp., incluyendo E. faecalis, E. faecium; Clostridium spp., ¡ncluyendo C. tetani (por ejemplo toxina de tétanos y derivados de los mismos), C. botulinum (por ejemplo, toxina de botulino y derivados de los mismos), C. difficile (por ejemplo, toxinas de clostridio A ó B, y derivados de los mismos); Bacillus spp., ¡ncluyendo B. anthracis (por ejemplo, toxina de botulino y derivados de los mismos); Corynebacterium spp., incluyendo C. diphtheriae (por ejemplo, toxina de difteria y derivados de los mismos); Borrelia spp., ¡ncluyendo B. burgdorferi (por ejemplo, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. garinli (por ejemplo, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. afzelii (por ejemplo, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. andersonii (por ejemplo, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. hermsii; Ehrlichia spp., incluyendo E. equi y el agente del Ehrlichiosis granulocítico humano; Rickettsia spp., incluyendo R. rickettsii; Chlamydia spp., incluyendo C. trachomatis (por ejemplo, MOMP, proteínas de enlace de heparina); C. pneumoniae (por ejemplo, MOMP, proteínas de enlace de heparina), C. psittaci; Leptospira spp., incluyendo L. interrogans; Treponema spp., incluyendo T. pallidum (por ejemplo, las proteínas de membrana externa raras), T. denticola, T. hyodysenteriae; o derivados de parásitos tales como Plasmodium spp., ¡ncluyendo P. falciparum; Toxoplasma spp., ¡ncluyendo T. gondii (por ejemplo, SAG2, SAG3, Tg34); Entamoeba spp., incluyendo E. histolytica; Babesia spp., incluyendo B. microti; Trypanosoma spp., incluyendo T. cruzi; Giardia spp., incluyendo G. lamblia; Leshmania spp., incluyendo L. major; Pneumocystis spp., incluyendo P. carinii; Trichomonas spp., incluyendo T. vaginalis; Schisostoma spp., ¡ncluyendo S. mansoni, ó derivados de levadura tales como Candida spp., incluyendo C. albicans; Cryptococcus spp., ¡ncluyendo C. neoformans. Otros antígenos para M. tuberculosis son por ejemplo Tb Ra12, Tb H9, Tb Ra35, Tb38-1, Erd 14, DPV, MTI, MSL, mTTC2, y hTCC1 (Publicación WO 99/51748). Las proteínas para M. tuberculosis también proteínas de fusión y variantes de los mismos en donde al menos dos o al menos tres polipéptidos de M. tuberculosis están fusionados en una proteína más grande. Los ejemplos de fusiones incluye Ra12-TbH9-Ra35, Erd 14-DPV-MTI, DPV-MTI-MSL, Erd14-DPV-MTI-MSL-mTCC2, Erd 14-DPV-MTI-MSL, DPV-MTI-MSL-mTCC2, TbH9-DPV-MTI (Publicación WO 99/51748). Los antígenos de Chlamydla incluyen por ejemplo la Proteína de Alto Peso Molecular (HWMP) (Publicación WO 99/17741); ORF3 (Patente EP 366,412), y las proteínas de membrana putativa (Pmps). Otros antígenos de Chlamydia de la formulación de vacunas pueden ser seleccionados del grupo que se describe en la Publicación WO 99/28475. Los antígenos bacterianos pueden derivarse de Streptococcus spp., ¡ncluyendo S. pneumoniae (por ejemplo, polisacáridos capsulares y conjugados de los mismos, PsaA, PspA, estreptolisina, proteína de enlace de colina) y el antígeno de proteína Pneumolysin (Biochem. Biophys. Acta, 1989, 67, 1007; Rubins y Asociados, Microbial Pathogenesis, 25, 337-342), y derivados destoxificados mutantes de los mismos (Publicaciones WO 90/06951 y WO 99/03884). Otros antígenos bacterianos se derivan de Haemophilus spp., incluyendo H. influenzae tipo B (por ejemplo PRP y conjugados de los mismos), H. influenzae sin tipo, por ejemplo OMP26, adhesinas de alto peso molecular, P5, P6, proteína D, y lipoproteínas D, y fimbrina y péptidos derivados de fimbrina (Patente Norteamericana No. 5,843,464), o variantes de copias múltiples o proteínas de fusión de los mismos. Los derivados del antígeno de superficie de hepatitis B son conocidos en la técnica e incluyen, inter alia, los antígenos PreS1, PreS2 S, descritos en la Solicitudes de Patente Europea No. EP-A-414,374; EP-A-0304-578, y EP-198-474. En una modalidad el antígeno HBV es polimerasa HBV (Ji Hoon Jeong y Asociados, 1996, BBRC 223, 264-271; Lee H. J. y Asociados, Biotechnol. Lett. 15, 821-826). Los antígenos derivados de VIH también están contemplados, tales como antígeno de VIH-1 gp120, especialmente cuando se expresan en células CHO. La composición inmunogénica de la presente invención, puede comprender un antígeno derivado del virus de papiloma humano (HPV 6a, 6b, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 y 68), en particular los serotipos HPV considerados como responsables de verrugas genitales (HPV 6 ó HPV 11 y otros), y los virus HPV responsables de cáncer cervical (HPV16, HPV18 y otros). Los antígenos HPV adecuados son E1, E2, E4, E5, E6, E7, L1 y L2. Los ejemplos de formas de fusiones profilácticas o terapéuticas para verrugas genitales comprenden partículas L1 ó capsómeros, y proteínas de fusión que comprenden uno o más antígenos seleccionados de las proteínas HPV 6 y HPV 11, E6, E7, L1 y L2. Los ejemplos de proteínas de fusión son: L2E7 que se describen en la Publicación WO96/26277, y la proteína D(1/3)-E7 que se describe en la Publicación WO99/10375. Una composición de vacuna terapéutica o para profilaxis infección o cáncer cervical HPV puede comprender antígenos HPV 16 ó 18. Por ejemplo, los monómeros L1 ó L2, o los antígenos L1 ó L2 presentados juntos como un virus tipo partícula (VLP) o la proteína L1 sola presentada sola en una estructura VLP o de capsómero. Dichos antígenos, partículas tipo virus y capsómeros son conocidos por sí mismos. Ver por ejemplo las Publicaciones Nos. WO94/00152, WO94/20137, WO94/05792, y WO93/02184. Las proteínas tempranas adicionales pueden incluirse solas o como proteínas de fusión tales como E7, E2 ó E5, por ejemplo; otras modalidades incluyen un VLP que comprende proteínas de fusión L1E7 (Publicación WO96/11272). Los antígenos HPV 16 pueden comprender las proteínas tempranas E6 ó E7 en fusión con un vehículo de proteína D para formar proteína D - fusiones E6 ó E7 de HPV 16 o combinaciones de las mismas; o combinaciones de E6 ó E7 con L2 (Publicación WO96/26277). Como alternativa las proteínas tempranas E6 y E7 de HPV 16 ó 18 pueden presentarse en una sola molécula, por ejemplo, una fusión de proteína D E6/E7. Otras fusiones contienen opcionalmente ya sea una o ambas de las proteínas E6 ó E7 de HPV 18, por ejemplo en la forma de una proteína de fusión de proteína D - E6 ó proteína D - E7 ó una proteína de fusión o proteína D E6/E7. Las fusiones pueden comprender antígenos de otras cepas HPV, por ejemplo de las cepas HPV 31 ó 33. Los antígenos derivados de parásitos que originan malaria también están contemplados. Por ejemplo, los antígenos de Plasmodia falciparum incluyen RTS,S y TRAP. RTS es una proteína híbrida que contiene substancialmente toda la porción de terminal-C de la proteína de circumsporozoite (CS) de P. falciparum enlazada a través de cuatro aminoácidos de la porción preS2 del antígeno de superficie de Hepatitis B al antígeno de superficie (S) del virus de hepatitis B. Su estructura total se describe en la Publicación WO93/10152. Cuando se expresa en RTS de levadura se produce como una partícula de lipoproteína, y cuando se expresa en conjunto con el antígeno S de HVB produce una partícula mezclada conocida como RTS.S. Los antígenos TRAP se describen en la Publicación WO90/01496. Una modalidad de la presente invención, es una fusión en donde la preparación antigénica comprende una combinación de los antígenos RTS.S y TRAP. Otros antígenos de plasmodia que son igualmente candidatos para ser componentes de la fusión, son P. falciparum MSP1, AMA1, MSP3, EBA, GLURP, RAP1, RAP2, Sequestrin; PfEMPI, Pf332, LSA1, LSA3, STARP, SALSA, PfEXPI, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Psf16, Psf48/45, Pfs230 y sus análogos en Plasmodium spp. Tal como se utiliza en la presente invención, el término "composición inmunogénica" se utiliza en su sentido más amplio para significar una composición que, al momento de la administración a un paciente, afecta de manera positiva la respuesta inmune del paciente. Una composición inmunogénica que se proporciona al paciente con una respuesta inmune local o sistémica mejorada, ya sea respuestas inmunes celulares tales como respuestas inmunes CTL ó humorales, tal como la generación de anticuerpos. En particular, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención puede referirse a una formulación que comprende una cantidad efectiva de un polipéptido/proteína de antígeno, por ejemplo un antígeno asociado con tumor, y un derivado inmunogénico del mismo, por ejemplo fragmentos de los mismos, o el polinucleótido de codificación y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Por el término "cantidad segura y efectiva" se entiende una dosis de proteína que, si es necesario en asociación con un adyuvante, cuando se administra a un humano, produce una respuesta inmune detectable tal como una respuesta humoral (anticuerpos) o una respuesta celular, tiene la capacidad de inmunomodular el sistema inmune, sin efectos secundarios significativamente adversos en vacunas típicas. Dicha cantidad variará dependiendo de qué inmunogén específico sea empleado y de cómo se presente. Generalmente, se espera que cada dosis comprenda de 1 a 5,000 µg de proteína, por ejemplo de 1 a 1,000 µg de proteína, por ejemplo de 1 a 500 µg, por ejemplo de 1 a 100 µg, por ejemplo de 1 a 50 µg. Una cantidad óptima de una vacuna en particular puede determinarse a través de estudios estándar que comprenden observación de las respuestas inmune adecuadas en sujetos. Después de una vacunación inicial, los sujetos pueden recibir una o varias inmunizaciones de refuerzo espaciadas en forma adecuada. La preparación de vacunas se describe generalmente en la Publicación Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach" (eds. Powell M. F. & Newman M. J.) (1995) Plenum Press Nueva York). La encapsulación dentro de liposomas se describe en la Publicación de Fullerton, la Patente Norteamericana No. 4,235,877. Los polipéptidos de antígeno inmunogénico se refieren a polipéptidos que reaccionan en forma detectable dentro de un inmunoensayo (tal como un ensayo de estimulación de célula-T ó ELISA) con antisuero y/o células-T de un paciente que expresa el polipéptido. La clasificación de actividad inmunogénica puede llevarse a cabo utilizando técnicas conocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, dichas clasificaciones se pueden llevar a cabo utilizando métodos tales como los que se describen en la Publicación de Harlow y Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. En un ejemplo ilustrativo, se puede inmovilizar un polipéptido en un soporte sólido y contactarse con el suero del paciente para permitir el enlace de anticuerpos dentro del suero al polipéptido inmovilizado. El suero no enlazado se puede eliminar posteriormente y los anticuerpos enlazados se detectan utilizando, por ejemplo, proteína A etiquetada 125l.

Los antígenos de polipéptido de la presente invención se proporcionan, por ejemplo, al menos el 80% puros, por ejemplo el 90% puros tal como se visualiza mediante SDS PAGE. Los antígenos de polipéptido pueden aparecer como una sola banda mediante SDS PAGE. Los derivados inmunogénicos tales como fragmentos o porciones inmunogénicas de antígenos, por ejemplo de antígenos asociados con tumor o específicos de tumor también están comprendidos en la presente invención. Un "fragmento inmunogénico" tal como se utiliza en la presente invención, es un fragmento que por sí mismo es inmunológicamente reactivo (por ejemplo, enlace en forma específica) con los receptores de antígeno de superficie de célula-B y/o célula-T que reconocen el polipéptido. Las porciones inmunogénicas pueden ser identificadas generalmente utilizando técnicas bien conocidas, tales como las que se resumen en la Publicación de Paul, Fundamental Immunology, 3a edición, 243-247 (Raven Press, 1993) y las referencias ahí mencionadas. Dichas técnicas incluyen clasificación de polipéptidos que tengan la capacidad de reaccionar con anticuerpos específicos de antígenos, antisueros y/o líneas o clones de célula-T. Tal como se utiliza en la presente ¡nvención los antisueros y anticuerpos son "específicos-antígenos" si se enlazan en forma específica a un antígeno (por ejemplo reaccionan con la proteína en el ELISA u otro inmunoensayo, y no reaccionan en forma detectable con proteínas no relacionadas. Dichos antisueros y anticuerpos se pueden preparar tal como se describe en la presente invención, utilizando técnicas bien conocidas. En una modalidad, la porción inmunogénica de un polipéptido es una porción que reacciona con un antisuero y células-T en un nivel que no es sustancialmente menor a la reactividad del polipéptido de longitud total (por ejemplo, en un ensayo ELISA y/o de reactividad de célula-T. El nivel de actividad inmunogénica de la porción inmunogénica puede tener al menos aproximadamente el 50%, al menos aproximadamente el 70%, o mayor a aproximadamente 90% de inmunogenicidad del polipéptido de longitud total. En algunos casos, las porciones inmunogénicas serán identificadas por tener un nivel de actividad inmunogénica mayor al del polipéptido de longitud total correspondientes, por ejemplo, que tienen más de aproximadamente 100% o 150% o más de actividad inmunogénica. En otras ciertas modalidades, las porciones inmunogénicas ilustrativas pueden incluir péptidos en los cuales se ha eliminado la secuencia líder de terminal-N y/o el dominio de transmembrana. Otras partes inmunogénicas ilustrativas contendrán una pequeña eliminación de terminal-N y/o -C(por ejemplo, aproximadamente de 1 a 50 aminoácidos, aproximadamente 1 a 30 aminoácidos, aproximadamente 5 a 15 aminoácidos), en forma relativa a la proteína madura. En otra modalidad, las composiciones inmunogénicas ilustrativas, tales como por ejemplo composiciones de vacuna de la presente invención, comprenden un polinucleótido que codifica uno o más de los polipéptidos tal como se describe anteriormente, de modo que el polipéptido se genere in situ. El polinucleótido puede administrarse dentro de cualquiera de una variedad de sistemas de suministro conocidos. De hecho, en el arte se conocen numerosas técnicas de suministro de genes, tales como las que se describen en la publicación de Rolland, Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Systems 15:143-198, 1998 y las referencias ahí mencionadas. Por supuesto los sistemas de expresión de polinucleótidos adecuados contendrán las secuencias reguladoras de ADN necesarias para la expresión en un paciente (tal como un promotor y una señal de terminación adecuados). Como alternativa, los sistemas de suministro bacteriano pueden comprender la administración de una bacteria (tal como Bacillus-Calmette-Guerrin) que expresa una porción inmunogénica del polipéptido en su superficie celular o segrega un epítope. ~ En una modalidad de la presente invención, se administra/suministra un polinucleótido en la forma de ADN "descubierto, por ejemplo tal como se describe en la publicación de Ulmer y asociados., Science 259:1745-1749, 1993 y revisado por Cohén, Science 259:1691-1692. La captación de ADN desprotegido puede incrementarse recubriendo el ADN en cuentas biodegradables las cuales se transportan de manera eficiente en las células. En una modalidad, la composición se administra en forma intradérmica. En particular, la composición se administra por medio de técnicas de administración de pistola de genes (particularmente bombardeo de partículas) las cuales comprenden recubrir el vector en una cuenta (por ejemplo oro), la cual posteriormente se administra bajo alta presión dentro de la epidermis; tal como, por ejemplo, como se describe en la publicación de Haynes y asociados., J Biotechnology 44:37-42 (1996). En un ejemplo ilustrativo, se puede lograr la aceleración de partículas operada por gas con aparatos tales como los fabricados por PowderJect Pharmaceuticals PCL (Oxford, UK) y PowderJect Vaccines Inc. (Madison, Wl), algunos ejemplos de los cuales se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,846,796; 6,010,478; 5,865,796; 5,584,807; y Patente EP No. 0500 799. El método ofrece una estrategia de suministro libre de agujas en donde la formulación en polvo seco de partículas microscópicas, tales como polinucleótido, son aceleradas a alta velocidad dentro de un chorro de gas helio generado por un aparato portátil, que impulsa las partículas en un tejido objetivo de interés, normalmente la piel. Las partículas pueden ser cuentas de oro con un diámetro de 0.4 - 4.0 µm, 0.6-2.0 µm y el conjugado de ADN se recubre en estas y posteriormente se guarda en un cartucho o cinta para colocarse en la "pistola genética". En una modalidad relacionada, otros aparatos y métodos que pueden ser útiles para la inyección sin aguja operada por gas de composiciones de la presente ¡nvención, incluyen los proporcionados por Bioject, Inc. (Portland, OR), algunos de los ejemplos de dichos aparatos se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,790,824; 5,064,413; 5,312,335; 5,383,851; 5,399,163; 5,520,639 y 5,993,412.

Por consiguiente, en ciertas modalidades, los polinucleótidos que codifican los polipéptidos inmunogénicos aquí descritos, son introducidos en células huésped de mamífero adecuadas para expresión utilizando cualquiera de un número de sistemas a base de virales conocidos. En una modalidad ilustrativa, los retrovirus proporcionan una plataforma conveniente y efectiva para sistemas de suministro de genes. Una secuencia de nucleótidos seleccionada que codifica un polipéptido de la presente invención, se puede insertar en un vector y empacarse en partículas retrovirales utilizando las técnicas conocidas en el arte. El virus recombinante posteriormente puede ser aislado y suministrado a un sujeto. Se ha descrito un número de sistemas retrovirales ilustrativos (por ejemplo, Patente Norteamericana No. 5,219,740; Miller y Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa y asociados (1991) Virology 180:849-852; Burns y asociados (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 90:8033-8037; y Boris-Lawrie y Temin (1993) Cur. Opin, Genet. Develop. 3:102-109. Además, también se ha descrito un número de sistemas a base de adenovirus ilustrativos. A diferencia de los retrovirus, los cuales se integran en el genoma huésped, los adenovirus persisten en forma extracromosomal, minimizando de esta forma los riesgos asociados con mutagénesis de inserción (Haj-Ahmad and Graham (1986) J. Virol. 57:267-274; Bett y asociados (1993) J. Virol. 67:5911-5921; Mittereder y asociados (1994) Human Gene Therapy 5:717-729; Seth y asociados (1994) J. Virol. 68:933,940; Barr y asociados (1994) Gene Therapy 1:51-58; Berkner, K. L. (1988) BioTechniques 6:616-629; y Rich y asociados (1993) Human Gene Therapy 4:461-476). Ya que los humanos algunas veces son infectados por serotipos de adenovirus humanos comunes tales como AdHud, una proporción significativa de la población tiene una respuesta de anticuerpos de neutralización a los adenovirus, lo cual es probablemente para llevar a cabo la respuesta inmune a un antígeno heterólogo en un sistema base de vacuna recombinante. Los vectores adenovirales de primates no humanos, tales como adenovirus de chimpancé 68 (AdC68, Fitzgerald y asociados (2003) J. Immunol 170 (3): 1416-22)) pueden ofrecer un sistema adenoviral alternativos en la desventaja de la respuesta de neutralización de anticuerpos existente previamente. También se han desarrollado diversos sistemas de vector de virus adeno-asociados (AAV), para el suministro de polinucleótidos. Los vectores AAV pueden ser construidos fácilmente utilizando técnicas bien conocidas en le arte. Por ejemplo ver las Patentes Norteamericanas Nos. 5,173,414 y 5,139,941; las Publicaciones Internacionales Nos. WO 92/01070 y WO 93/03769; la publicación de Lebkowski y asociados (1988) Molec. Cell. Biol.. 8:3988-3996; Vincent y asociados (1990) Vacunas 90 (Cold Spring Harbor Laboratory Press); Cárter, B. J. (1992) Current Opinión in Biotechnology 3:533-539; Muzyczka, N. (1992) Current Topics in Microbiol. And Immunol. 158:97-129; Kotin, R. M. (1994) Human Gene Therapy 5:793-801; Shelling and Smith (1994) Gene Therapy 1:165-169; and Zhou y asociados (1994) J. Exp. Med. 179:1867-1875. Los vectores virales adicionales útiles para administrar las moléculas de ácido nucleico que codifican los polipéptidos de la presente invención mediante transferencia de genes, incluyen los derivados de la familia de virus pox tales como vacunas de virus y virus pox avian. A manera de ejemplo, las vacunas de virus recombinantes que expresan las moléculas novedosas, pueden ser construidas tal como se indica a continuación. El ADN que codifica un polipéptido se inserta primero en un vector adecuado de modo que quede adyacente a un promotor de vacunas y flanquee las secuencias de ADN de la vacuna, tales como las secuencias que codifican cinasa de timidina (TK). Posteriormente este vector se utiliza para transfectar células las cuales se infectan en forma simultánea con vacunas. La recombinación homologa sirve para insertar el promotor de vacuna más el gen que codifica el polipéptido de interés en el genoma viral. El TK.sup.(-) recombinante resultante, puede seleccionarse cultivando las células en la presencia de 5-bromodesoxiuridina y levantando las placas virales resistentes al mismo. Se puede utilizar de manera conveniente un sistema de infección/transfección a base de vacunas para proporcionar una expresión o co-expresión inducible temporal, de uno o más polipéptidos descritos en la presente invención en células huésped de un organismo. En este sistema en particular, las células se infectan primero in vitro con un virus de vacuna recombinante que codifica la polimerasa de ARN de bacteriófago T7. Esta polimerasa despliega una especificidad exquisita en cuanto que únicamente transcribe plantillas que contienen los promotores T7. Después de la infección las células se transfectan con el polinucleótido o polinucleótidos de interés conducidos por un promotor T7. La polimerasa expresada en el citoplasma del virus de vacuna recombinante, transcribe el ADN transfectado en ARN, el cual posteriormente se traduce en el polipéptido a través de la maquinaria de traducción de huésped. El método proporciona una producción citoplásmica, temporal, de alto nivel de grandes cantidades de ARN y sus productos. Ver por ejemplo la publicación de EIroy-Stein y Moss, Proc. Nati. Acad. Sci EUA (1990) 87:6743-6747; Fuerst y asociados. Proc. Nati. Acad. Sci. EUA (1986) 83:8122-8126. Como alternativa, los avipoxvirus, tales como los virus de aves de corral y canario, también pueden utilizarse para suministrar las secuencias de codificación de interés. Los virus de avipox recombinantes, que expresan inmunogenes de patógenos mamíferos, son conocidos por conferir inmunidad protectora cuando se administran a especies no avian. El uso de un vector Avipox es particularmente deseable en humanos y otras especies de mamíferos, ya que los miembros de los géneros avipox únicamente pueden replicarse de manera productiva en especies avian susceptibles y por consiguiente no infectan las células de mamíferos. Los métodos para producir Avipoxvirus recombinantes son conocidos en la técnica y emplean recombinación genética, tal como se describió anteriormente con respecto a la producción de virus de vacunas. Ver por ejemplo las publicaciones WO 91/12882; WO 89/03429; y WO 92/03545. También se pueden utilizar cualquiera de un número de vectores de alfavirus para suministrar composiciones de polinucleótidos de la presente invención, tal como los vectores que se describen en las Patente Norteamericanas Nos. 5,843,723; 6,015,686; 6,008,035 y 6,015,694. También se pueden utilizar ciertos vectores basados en Encefalitis de Equino de Venezuela (VEE), los ejemplos ilustrativos se pueden encontrar en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,505,947; y 5,643,576. Los vectores que comprenden las secuencias de nucleótidos que codifican los péptidos antigénicos se administran en una cantidad tal que será profiláctica o terapéuticamente efectiva. La cantidad que será administrada puede estar dentro del rango de un programa a 16 miligramos, 1 picograma a 10 microgramos para el suministro transmitido por partículas, y 10 microgramos a 16 miligramos para otras rutas de nucleótidos por dosis. La cantidad exacta puede variar de manera considerable dependiendo del peso del paciente que esté siendo inmunizado y la ruta de administración. Las técnicas adecuadas para introducir el polinucleótido o vector desprotegido en un paciente, también incluye en la aplicación tópica con un vehículo adecuado. El ácido nucleico puede administrarse en forma tópica a la piel, o a superficie mucosas, por ejemplo mediante administración intranasal, oral, intravaginal o intrarectal. El polinucleótido o vector descubierto puede encontrarse junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable tal como solución salina regulada por fosfato (PBS). La captación de ADN se puede facilitar en forma adicional a través del uso de agentes de facilitación tales como bupivacaína, ya sea en forma separada o incluida en la formulación de ADN. Otros métodos de administración del ácido nucleico directamente a un receptor, incluyen ultrasonido, estimulación eléctrica, electroporación y microsembrado, el cual se describe en la Patente Norteamericana No. 5,697,901. La captación de construcciones de ácido nucleico se puede aumentar a través de diversas técnicas de transfección conocidas, por ejemplo las que incluyen el uso de agentes de transfección. Los ejemplos de estos agentes incluyen agentes catiónicos, por ejemplo, fosfato de calcio y DEAE-Dextrano y lipofectantes, por ejemplo, lipofectam y transfectam. La dosis del ácido nucleico que será administrada puede ser alterada. Aún en otra modalidad, las composiciones inmunogénicas de la presente invención, comprenden un anticuerpo, o un suero, o un dominio de un anticuerpo tal como Fab y fragmento F(ab')2. El anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo. La dosis efectiva normalmente es de 100 µg a 500 µg, por ejemplo 1 mg a 50 mg por kilo de peso corporal del paciente. Por consiguiente, los métodos de la presente invención incluyen inmunoterapia o inmunoprofilaxis pasiva. Las composiciones inmunogénicas y el polipéptido IL-18 de la presente invención, pueden suministrarse a través de un número de rutas tales como intramuscular, subcutánea, ¡ntraperitoneal o intravenosa. El polipéptido IL-18 o fragmento bioactivo del mismo de acuerdo con la presente invención, es uno que induce una respuesta inmune predominantemente del tipo Th1. Los altos niveles de citocinas tipo Th1 (por ejemplo, IFN-?, TNFa, IL-2, IL-12, IL-18, etc.) tienden a favorecer la inducción de las respuestas inmunes transmitidas por células a un antígeno administrado. En contraste, los altos niveles de citocinas tipo Th2 (por ejemplo, I L-4, IL-5, IL-6 e I L- 10) tienen a favorecer la inducción de respuestas inmunohumorales. Para una revisión de las familias de citocinas, ver la publicación de Mosmann y Coffman, Ann. Rev. Immunol. 7:145-173, 1989. Por los términos "IL-18" ó "polipéptido IL-18" se entiende un polipéptido IL-18 tal como se describe en las Patentes EP 0692536, EP 0712931, EP 0767178 y WO 97/2441. Los derivados de polipéptidos IL-18 o variantes incluyen polipéptidos aislados que comprenden una secuencia de aminoácidos la cual tiene al menos el 70% de identidad, al menos el 80% de identidad, al menos el 90% de identidad, al menos el 95% de identidad, al menos del 97 al 99% de identidad a la de la secuencia SEQ ID NO:6 (l L-18 humano) o SEQ ID NO:7 (IL-18 de múrido) tal como se ilustra en la figura 1, con respecto a la longitud total de la SEQ ID NO:6 y la SEQ ID NO:7, respectivamente. El polipéptido IL-18 puede se la secuencia de aminoácidos que se establecen en la SEQ ID NO:6 y SEQ ID NO:7, respectivamente. Los fragmentos IL-18 también están contemplados, esto es un fragmento de IL-18 que tiene la capacidad de exhibir una actividad biológica (antigénica o inmunogénica) de IL-18 tal como la inducción de IFN-?. Se pueden utilizar fragmentos bioactivos IL-18, se pueden utilizar fragmentos inmunogénicos IL-18. El polipéptido IL-18 puede estar en la forma de una proteína madura o puede ser una parte de una proteína mayor tal como una proteína de fusión. También se contemplan variantes IL-18, esto es polipéptidos que pueden variar mediante las sustituciones de aminoácido conservadoras, mediante lo cual se sustituye un residuo por otro con características similares. Las sustituciones típicas están entre Ala, Val, Leu e lie; entre Ser y Thr; entre los residuos ácidos Asp y Glu; entre Asn y Gln; entre los residuos básicos Lys y Arg; o residuos aromáticos Fe y Tyr. Por ejemplo, variantes en donde se sustituyen diversos aminoácidos 5 a 10, 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2 ó 1 , se eliminan o agregan en cualquier combinación. Los fragmentos bioactivos IL-18 también están contemplados. Por el término "fragmento bioactivo" se entiende un fragmento de IL-18 el cual tiene retenida sustancialmente la misma bioactividad del IL-18 de longitud total. Por el término "bioactividad" se entiende cualquiera de las siguientes propiedades: aumento de la actividad de célula activadora natural (NK) y respuesta de célula Th1 (activación de NK, células NKT, inducción de la proliferación de células T activadas), actividad anti-angiogénica, aumento de la expresión del ligando Fas en células NK, NKT y células T activadas, producción incrementada de IFNg, GM-CSF y otras citocinas por ejemplo tipo TH1, capacidad para estimular la inmunidad innata y respuestas transmitidas tanto por Th1 y Th2. En particular, un fragmento bioactivo de l L-18 es un fragmento que tiene retenida la capacidad de incrementar la producción de IFNg tal como se mide, in vitro, a través del sistema de ensayo KG-1. La línea de célula mielomonocítica humana (KG-1) que expresa el receptor IL-18 humano, responderá al tratamiento con IL-18 incrementando la producción (secreción) de IFNg (medido mediante ELISA) y la activación de NfKB (Matsuko Taniguchi y asociados J. Immunological Methods, 1998, 217, 97-102). Los polipéptidos IL-18 de acuerdo con la presente invención, se pueden preparar en cualquier forma adecuada. El aislamiento de polipéptidos que ocurren en forma natural, que producen en forma recombinante o sintética los polipéptidos, etc. Los medios de preparación son bien conocidos en la técnica.

Las composiciones inmunogénicas de acuerdo con la presente invención pueden incluir de manera conveniente un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Una molécula transportadora puede comprender varias formas, incluyendo un organismo transportador tal como un vector bacteriano vivo o una cepa de vehículo bacteriano, agua, solución salina o un químico inmunoestimulante. Un vehículo puede ser agua, solución salina u otras soluciones reguladas. Una molécula transportadora también puede incluir una partícula polimérica tal como una microcuenta o una nanopartícula, y una partícula de sal metálica tal como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio o fosfato de calcio, o fosfato de magnesio, fosfato de hierro, carbonato de calcio, carbonato de magnesio, sulfato de calcio, hidróxido de magnesio, o sales dobles tipo fosfato de hierro-amonio, fosfato de potasio-hierro, fosfato de calcio-hierro, carbonato de calcio-magnesio, o una mezcla de cualesquiera de dichas sales. Al momento de administrar la composición combinada tal como se proporciona en la presente invención, un paciente soportará una respuesta inmune que incluye respuestas tipo Th1 y Th2. Las composiciones inmunogénicas y el polipéptido IL-18 o fragmento bioactivo o variante del mismo de acuerdo con la presente invención, se pueden suministrar a través de un número de rutas tal como intramuscular, subcutánea, intraperitoneal o intravenosa. Los vectores que comprenden las secuencias de nucleótidos que codifican los péptidos antigénicos, se administran en una cantidad tal que será profiláctica o terapéuticamente efectiva. La cantidad que será administrada, generalmente está dentro del rango de un picogramo a 16 miligramos, por ejemplo 1 picogramo a 10 microgramos para el suministro transmitido por partículas, y 10 microgramos a 16 miligramos de otras rutas de nucleótidos por dosis. La cantidad exacta puede variar considerablemente dependiendo del peso del paciente que esté siendo inmunizado y la ruta de administración. Las técnicas adecuadas para introducir el polinucleótido o vector descubierto en un paciente también incluyen en aplicación tópica con un vehículo adecuado. El ácido nucleico puede administrarse en forma tópica a la piel, o a las superficies mucosas, por ejemplo mediante administración ¡ntranasal, oral, intravaginal o intrarectal. El polinucleótido o vector descubierto puede presentarse juntos con un excipiente farmacéuticamente aceptable, tal como solución salina regulada por fosfato (PBS). La captación de ADN se puede facilitar en forma adicional a través del uso de agentes de facilitación tal como bupivacaina, ya sea en forma separada o incluida en la formulación de ADN. Otros métodos para administrar el ácido nucleico directamente a un receptor incluyen ultrasonido, estimulación eléctrica, electroporación y microsembrado el cual se describe en la Patente Norteamericana No. 5,697,901. La captación de construcciones de ácido nucleico puede mejorarse a través de diversas técnicas de transfección conocidas, por ejemplo aquellas que incluyen el uso de agentes de transfección. Los ejemplos de estos agentes incluyen agentes catiónicos, por ejemplo fosfato de calcio y DEAE-Dextrano y lipofectantes, por ejemplo, lipofectam y transfectam. La dosis del ácido nucleico que será administrada también puede ser alterada. El polipéptido IL-18 o fragmento bioactivo de acuerdo con la presente invención, es uno que induce una respuesta inmune predominantemente del tipo Th1. Los altos niveles de citocinas tipo Th1 (por ejemplo IFN-?, TNFa, IL-2, IL-12, IL-18, etc) tienden a favorecer la inducción de las respuestas inmunes transmitidas por células a un antígeno administrado. En contraste, los altos niveles de citocinas tipo Th2 (por ejemplo, I L-4, IL-5, IL-6 e IL-10) tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunohumorales. Para una revisión de las familias de citocinas, ver la publicación de Mosmann y Coffman, Ann. Rev. Immunol. 7:145-173, 1989. Los niveles de estas citocinas pueden ser evaluadas fácilmente utilizando ensayos estándar. Por el término "IL-18" se entiende un polipéptido IL-18 tal como se describe en las Patentes EP 0692536, EP 0712931, EP 0767178 y la publicación WO 97/2441. Los polipéptidos IL-18 incluyen polipéptidos aislados que comprenden una secuencia de aminoácidos la cual tiene al menos el 70% de identidad, al menos el 80% de identidad, al menos el 90% de identidad, al menos el 95% de identidad, al menos del 97 al 99% de identidad a la de la secuencia SEQ ID NO:1 (IL-18 humano) o SEQ ID NO:2 (I L-18 de múrido) tal como se ilustra en la figura 1, con respecto a la longitud total de la SEQ ID NO:1 y la SEQ ID NO:2, respectivamente. Dichos polipéptidos incluyen los que comprenden el aminoácido de la SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO:2, respectivamente. El polipéptido IL-18 puede tener la secuencia de aminoácidos que se establecen en la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2. También se contemplan fragmentos IL-18, esto es un fragmento de IL-18 que tiene la capacidad de exhibir una actividad biológica (antigénica o inmunogénica) de l L-18 tal como la inducción de IFN-?. El polipéptido IL-18 puede estar en la forma de una proteína madura o puede ser una parte de una proteína mayor tal como una proteína de fusión. También se contemplan variantes IL-18, esto es polipéptidos que pueden variar mediante las sustituciones de aminoácido conservadoras, mediante lo cual se sustituye un residuo por otro con características similares. Normalmente dichas sustituciones están entre Ala, Val, Leu e lie; entre Ser y Thr; entre los residuos de ácido Asp y Glu; entre Asn y GIn; entre los residuos básicos Lys y Arg; o residuos aromáticos Phe y Tyr. Por ejemplo, variantes en donde se sustituyen diversos aminoácidos 5 a 10, 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2 ó 1 , se eliminan o agregan en cualquier combinación. Los polipéptidos IL-18 de acuerdo con la presente invención, se pueden preparar en cualquier forma adecuada. Incluye el aislamiento de polipéptidos que ocurren en forma natural, que producen en forma recombinante o sintética los polipéptidos, etc. Los medios de preparación son bien conocidos en la técnica. AI momento de administrar la composición combinada tal como se proporciona en la presente invención, un paciente soportará una respuesta inmune que incluye respuestas tipo Th1 y Th2. Dentro de las modalidades de la presente invención, la composición inmunogénica comprende además otro adyuvante, por ejemplo uno que induce una respuesta inmune predominantemente del tipo Th1. Los adyuvantes que inducen TH-1 pueden ser seleccionados del grupo de adyuvantes que comprenden: adyuvante derivado de lipopolisacáridos tal como lipopolisacárido enterobacteriano (LPS), ED-MPL, colesterol y oligonucleótido CpG o una mezcla de dos o más de dichos adyuvantes. Los adyuvantes para generar una respuesta predominante tipo Th1, pueden ¡ncluir, por ejemplo, una combinación del lípido A de monofosforilo, por ejemplo lípido A de monofosforilo acilado 3-de-O-, junto con una sal de aluminio. Los adyuvantes MPL® están disponibles en Corixa Corporation (Seattle, WA; ver por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos: 4,436,727; 4,877,611; 4,866,034 y 4,912,094). En una modalidad, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención comprende además un oligonucléotido CpG inmunoestimulador. Los oligonucleótidos que contienen CpG (en donde el dinucleótido CpG está no metilado también inducen una respuesta predominantemente Th1. Dichos oligonucleótidos son bien conocidos y se describen en las publicaciones WO 96/02555, WO 99/33488 y Patentes Norteamericanas Nos. 6,008,200 y 5,856,462. También se describen secuencias de ADN de inmunoestimulación, por ejemplo ver la publicación de Sato y asociados., Science 273:352, 1996. Los CpG's son bien conocidos en la técnica como adyuvantes cuando se administran a través de rutas tanto sistémicas como mucosas (publicación WO96/02555, Patente No. EP 468520, Davis y asociados., J. Immunol, 1998, 160(2):870-876; McCIuskie y Davis, J.lmmunol,, 1998, 161 (9):4463-6). CpG es una abreviatura de motivos de dinucleótidos de citosina-guanosina que se encuentran en el ADN. Históricamente se observó que la fracción de ADN de BCG podría ejercer un efecto anti-tumor. En estudios adicionales, los oligonucleótidos sintéticos derivados de las secuencias de gen BCG se mostraron como capaces de inducir efectos inmunoestimuladores (tanto in vitro como in vivo). Los autores de estos estudios concluyeron que ciertas secuencias palindrómicas, incluyendo un motivo CG central, llevan esta actividad. El papel central del motivo CG en la inmunoestimulación, fue explicado posteriormente en una publicación de Krieg, Nature 374, p546, 1995. El análisis detallado ha demostrado que el motivo CG tiene que estar dentro de cierto contexto de secuencia, y que dichas secuencias son comunes en ADN bacteriano pero son raras en ADN de vertebrados. La secuencia inmunoestimuladora con frecuencia es: Purina, Purina, C, G, pirimidina, pirimidina; en donde el motivo CG de dinucleótido no esta metilado, aunque otras secuencias CpG no metiladas son conocidas por ser inmunoestimuladores y pueden ser utilizadas en la presente invención. En ciertas combinaciones de los seis nucleótidos se encuentra una secuencia palindrómica. Varios de estos motivos, ya sea en la forma de repeticiones de un motivo o una combinación de diferentes motivos, se puede encontrar en el mismo oligonucleótido. La presencia de uno o más de estas secuencias inmunoestimuladoras que contienen oligonucleótidos, puede activar varios subgrupos inmune, incluyendo células exterminadoras naturales (que producen ¡nterferón ? y tienen actividad citólica) y macrófagos (Wooldridge y asociados Vol 89 (no. 8), 1977). Aunque otras secuencias que contienen CpG no metilado no tienen esta secuencia de consenso, ahora han demostrado ser inmunomoduladores. Los oligonucleótidos para utilizarse de acuerdo con la presente invención, pueden contener dos o más motivos CpG de dinucleótidos separados, por lo menos tres, al menos seis o más nucleótidos. Los oligonucleótidos de la presente invención, pueden ser desoxinucleótidos. En una modalidad, el internucleótido en el oligonucleótido es fosforoditioato, o un enlace de fosforotioato, aunque el fosfodiéster y otros enlaces de ¡nternucleótidos están dentro del alcance de la presente invención, incluyendo oligonucleótidos con ligaduras de internucleótidos mezcladas. Los métodos para producir oligonucleótidos de fósforo tioato o fósforo ditioato se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,666,153, 5,278,302 y la publicación WO95/26204. Los ejemplos de oligonucleótidos tienen las siguientes secuencias. Las secuencias pueden contener ligaduras de internucleótidos modificadas por fosforotioato. OLIGO 1(SEQ ID NO:3): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826) OLIGO 2(SEQ ID NO:4): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758) OLIGO 3(SEQ ID NO:5): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG OLIGO 4(SEQ ID NO:6): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006 también conocido como CpG 7909) OLIGO 5(SEQ ID NO:7): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668) Los oligonucleótidos CpG alternativos pueden comprender la secuencia anterior, ya que tienen eliminaciones y adiciones irrelevantes en la misma. Los oligonucleótidos CpG utilizados en la presente invención pueden ser sintetizados a través de cualquier método conocido en la técnica (por ejemplo patente EP 468520). En forma conveniente, los oligonucleótidos pueden ser sintetizados utilizando un sintetizador automático. Los oligonucleótidos utilizados en la presente invención pueden ser desoxinucleótidos. En una modalidad el enlace de internucleótido el oligonucleótido es fosforoditioato, o enlace de fosforoditioato, aunque los fosfodiésteres están dentro del alcance de la presente invención. El oligonucleótido que comprende diferentes ligaduras de internucleótido esta contemplado, por ejemplo, fosforotioato, fosforodiésteres. Se pueden utilizar otros enlaces de internucleótidos que estabilizan el oligonucleótido. CpG cuando se formula en vacunas, generalmente se administra en una solución libre junto con el antígeno libre (publicación WO 96/02555; McCIuskie y Davis, supra) o se conjuga en forma covalente a un antígeno (Publicación PCT No. WO 98/16247), o se formula con un vehículo tal como hidróxido de aluminio (antígeno de superficie de hepatitis) Davis y asociados, supra; Brazolot-Millan y asociados., Proc. Nati. Acad. Sci., EUA, 1998, 95(26), 15553-8). Una formulación mejorada puede comprender la combinación de oligonucléotido que contiene CpG con un derivado de saponina, particularmente la combinación de CpG y QS21 tal como se describe en la publicación WO00/09159 y en la publicación WO00/62800. Dicha formulación puede comprender además una emulsión de aceite en agua y tocoferol. Por consiguiente, en una modalidad, aún adicional la composición inmunogénica de la presente invención comprende una combinación de un oligonucleótido CpG y una saponina, por ejemplo QS21, formulada opcionalmente en una emulsión de aceite en agua. La formulación puede comprender además de manera opcional el adyuvante ED-MPL®. QS-21 puede proporcionarse en su composición menos reactogénica cuando se extingue con colesterol, tal como se describe en la publicación WO 96/33739. En otra modalidad, la composición inmunogénica de la presente invención comprende además un adyuvante derivado de lipopolisacárido enterobacteriano por ejemplo lípido A de monofosforilo, por ejemplo lípido A de monofosforilo acilado 3-de-O-. Se ha sabido durante mucho tiempo que el lipopolisacárido enterobacteriano (LPS) es un potente estimulador del sistema inmune aunque su uso en adyuvantes ha sido restringido por sus efectos tóxicos. Un derivado no tóxico de LPS, lípido A de monofosforilo (MPL), producido mediante la eliminación del grupo de carbohidrato del núcleo y el fosfato de la glucosamina con término de reducción, ha sido descrito por Ribi y asociados (1986, Immunoloy and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp. NY, p407-419) y tiene la siguiente estructura: Una versión destoxificada adicional de MPL, resulta de la eliminación de la cadena de acilo de la posición-3 del esqueleto de disacárido, y se denomina lípido A de monofosforilo Desacilado-O-3 (3D-MPL). Se puede purificar y preparar a través de los métodos considerados en la Patente GB 2122204B, cuya referencia también describe la preparación del lípido A de difosforilo, y variantes desaciladas 3- O de los mismos. 3D-MPL puede estar en la forma de una emulsión que tiene un tamaño de partícula pequeño menor a 0.2 µm de diámetro, y su método de fabricación se describe en la publicación WO94/21292. En la publicación No. WO98/43670A2 se describen formulaciones acuosas que comprenden el lípido A de monofosforilo y un tensioactivo. Los adyuvantes derivados de lipopolisacárido bacteriano que serán formulados en las combinaciones de adyuvante de la presente invención, pueden ser purificados y procesados de fuentes bacterianas, o como alternativa pueden ser sintéticos. Por ejemplo, el lípido A de monofosforilo se describe en la publicación de Ribi y asociados 1986 (supra), y monofosforilo Desacilado-3-O- y el lípido A de difosforilo derivado de la especie Salmonella sp. se describe en la patente GB 2220211 y en la Patente Norteamericana No. 4912094. Otros lipopoüsacáridos sintéticos y purificados han sido descritos (publicación WO 98/01139; Patente Norteamericana NO. 6,005,099 y la Patente EP 0 729473 B1; Hilgers y asociados., 1986, Int. Arch.Allergy.lmmuno!., 79(4):392-6; Hilgers y asociados., 1987, Immunology, 60(1):141-6; y patente EP 0 549 074 B1). Los adyuvantes de lipopolisacárido bacterianos pueden incluir 3D-MPL y los disacáridos de glucosamina ß(1-6) descritos en la Patente Norteamericana No. 6,005,099 y patente EP 0 729 473 B1. Por consiguiente, los derivados LPS que se pueden utilizar en la presente invención son aquellos inmunoestimulantes que son similares en la estructura a la de LPS ó MPL ó 3D-MPL. En otro aspecto de la presente invención, los derivados de LPS pueden ser un monosacárido acilado, el cual es una sub-porción de la estructura anterior de MPL. Un ejemplo de un adyuvante de disacárido es un lípido A purificado o sintético de la siguiente fórmula: en donde R2 puede ser H ó PO3H2; R3 puede ser una cadena de acilo o ß-hidroximiristoilo o un residuo de 3-aciloxiacilo que tiene la fórmula: O ti en donde K* - — C— (CHtfr—CHj. y en donde X y Y tienen un valor de desde 0 hasta aproximadamente 20. Las combinaciones de 3D-MPL y adyuvantes de saponina derivados de la corteza de Quillaja Saponaria molina han sido descritas en la Patente EP 0 761 231B. La publicación WO 95/17210 describe una emulsión adyuvante con base en escualeno, a-tocoferol y monooleato de sorbitano de polioxietileno (TWEEN80), formulado con el inmunoestimulador QS21 opcionalmente con 3D-MPL. De acuerdo con otra modalidad, la composición ¡nmunogénica de acuerdo con la presente invención comprende (1) un antígeno o fragmento inmunogénico del mismo y (2) una combinación de saponina, por ejemplo QS21, por ejemplo en su forma extinguida con colesterol, con uno o más de los siguientes adyuvantes seleccionados de la lista que comprende por ejemplo un oligonucleótido inmunoestimulador CpG, 3D-MPL, y una emulsión de aceite en agua. En una modalidad, la composición inmunogénica incluye la combinación de un lípido A de monofosforilo para el adyuvante de saponina tal como el adyuvante 3D-MPL® con QS21, tal como se describe en la publicación WO94/00153, o una composición menos reactogéníca en donde QS21 se extingue con colesterol, tal como se describe en la publicación WO96/33739. Otras formulaciones pueden comprender una emulsión de aceite en agua y tocoferol además de QS21. Otra formulación que emplea una formulación de QS21, adyuvante 3D-MPL® y tocoferol en una emulsión de aceite en agua se describe en la publicación WO95/17210. Por consiguiente, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención, comprende un antígeno, por ejemplo un antígeno asociado con tumor, un adyuvante de saponina, por ejemplo QS-21, junto con adyuvante 3D-MPL®, que comprende opcionalmente una emulsión de aceite en agua y tocoferol además de QS-21. Por ejemplo QS21 se extingue con colesterol. Otra formulación comprende la combinación de un oligonucleótido que contiene CpG con el derivado de saponina, por ejemplo la combinación de CpG y QS21 tal como se describe en la publicación WO00/09159 y en la publicación WO00/62800. Dicha formulación puede comprender además una emulsión de aceite en agua y tocoferol. Por consiguiente, aún en otra modalidad adicional la composición inmunogénica de la presente invención comprende una combinación de una saponina, por ejemplo QS21 y un oligonucleótido CpG, formulado opcionalmente en una emulsión de aceite en agua. La formulación puede comprender además opcionalmente un adyuvante 3D-MPL®. QS-21 puede proporcionarse en su composición menos reactogénica, en donde se extingue con colesterol, tal como se describe en la publicación WO96/33739. Como alternativa el adyuvante de saponina dentro de la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención, puede combinarse con vehículos de vacuna compuestos de quitosán u otros polímeros policatiónicos, partículas de poliláctido y poliláctido-co-glucólido, matriz de polímero a base de glucosamina de poli-N-acetilo, partículas compuestas de polisacáridos o polisacáridos químicamente modificados, liposomas y partículas a base de lípidos, partículas compuestas de monoésteres a base de glicerol, etc. Las saponinas también se pueden formular en la presencia de colesterol para formar estructuras de particulado tales como liposomas o ISCOMs. Además, las saponinas pueden formarse junto con un éter o éster de polioxietileno, ya sea en una solución o suspensión no particulada, o en una estructura particulada tal como liposoma paucilamelar ISCOM. Las saponinas también pueden ser formuladas con excipientes tales como CarbopolR para incrementar la viscosidad, o pueden ser formuladas en una forma de polvo seco con un excipiente en polvo tal como lactosa. Las composiciones de vacunas y composiciones inmunogénicas pueden presentarse en contenedores por dosis de unidad o dosis múltiples, tales como ampolletas o frascos sellados, dichos contenedores pueden estar herméticamente sellados para conservar la esterilidad de la formulación hasta su uso. En general, las formulaciones pueden almacenarse en la forma de suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos. Como alternativa, una composición de vacuna o composición inmunogénica puede almacenarse en una condición seca por congelación que requiere únicamente la adición de un vehículo o líquido estéril inmediatamente antes de utilizarse. Cualquiera de una variedad de vehículos de suministro pueden ser empleados dentro de las composiciones inmunogénicas y vacunas para facilitar la producción de una respuesta inmune específica de antígenos que se dirige a las células de tumor. De acuerdo con una modalidad de la presente invención, la composición inmunogénica aquí descrita se suministra a un huésped a través de células que presentan antígenos (APCs), tal como células dendríticas,. macrófagos, células B, monocitos y otras células que pueden ser construidas para ser APCs eficiente. Las células APCs pueden, pero no necesitan, ser modificadas genéticamente para incrementar la capacidad para presentar el antígeno para mejorar la activación y/o mantener la respuesta de célula T para tener efectos antitumor por sí mismos y/o para ser inmunológicamente compatibles con el receptor (por ejemplo, haplotipo HLA cotejado). Los APCs pueden ser aislados generalmente de cualquiera de una variedad de fluidos y órganos biológicos, incluyendo tejidos de tumor y peri-tumorales, y pueden ser células autólogas, halogenéicas, singeneícas o xenogeneícas. Ciertas modalidades de la presente invención, utilizan células dendríticas o progenitorAs de los mismos en la forma de células que presentan antígenos. Las células dendríticas son APCs altamente potentes (Banchereau J. & Steinman R.M. Nature, 1998, 392:245-251) y han mostrado ser efectivas como un adyuvante fisiológico para generar inmunidad antitumor profiláctica o terapéutica (ver la publicación de Timmerman J.M. y Levy R., Ann. Rev. Med. 1999, 50:507-529). En general, las células dendríticas pueden ser identificadas con base en su forma típica (estrellado in situ, con procesos citoplásmicos marcados (dendritos) visibles in vitro), su capacidad para tomarse, proceso y presentación de antígenos con alta eficiencia y su capacidad para activarse respuesta de células T na?ve. Por supuesto las células dendríticas pueden construirse para expresar receptores de superficie de célula específica o ligandos que no se encuentran comúnmente en células dendríticas in vivo o ex vivo, y dichas células dendríticas modificadas están contempladas en la presente invención. Como una alternativa para las células dendríticas, las células dendríticas cargadas con antígeno de vesículas segregadas (denominadas exosomas) se pueden utilizar dentro de una vacuna (ver la publicación de Zitvogel L. y asociados., Nature Med., 1998, 4:594-600). Por consiguiente, se proporciona una formulación inmunoestimulante, por ejemplo una vacuna que comprende una cantidad efectiva de células dendríticas o células que presentan antígenos, modificados por carga in vitro con un. polipéptido tal como se describe en la presente invención y un vehículo farmacéuticamente efectivo. Las células y progenitores dendríticos pueden obtenerse de sangre periférica, médula ósea, células de infiltración en tumores, células de infiltración en tejidos peritumorales, nodos linfáticos, bazo, piel, sangre de cordón umbilical o cualquier otro fluido adecuado. Pon ejemplo, las células dendríticas pueden diferenciarse ex vivo agregando una combinación de citocinas tales como. GM-CSF, IL-4, I L-13 y/o TNFa a cultivos de mocitos recolectados de sangre periférica. Como alternativa, las células positivas CD34 de sangre periférica, sangre de cordón umbilical o médula ósea pueden ser diferenciadas en células dendríticas agregando al medio de cultivo combinaciones de GM-CSF, I L-3, TNFa, ligando CD40, lipopolisacáridos LPS, ligando flt3 y/o otros compuestos que' inducen la diferenciación, maduración y proliferación de células dendríticas. Las células dendríticas se categorizar en forma conveniente como células "inmaduras" y "maduras" lo cual permite una simple forma para discriminar entre dos fenotipos bien caracterizados. Sin embargo, esta nomenclatura no debe ser construida para excluir todas las posibles etapas intermedias de diferenciación. Las células dendríticas inmaduras están caracterizadas como APC con una alta capacidad para captación de antígenos y procesamiento, que se correlaciona con la alta expresión del receptor Fc? y el receptor de mañosa. El fenotipo maduro normalmente está caracterizado por una menor expresión de estos marcadores, aunque una alta expresión de moléculas de superficie celular responsables de la activación de célula T, tal como MHC clase 1 y clase 11, moléculas de adhesión (por ejemplo, CD54 y CD11) y moléculas co-estimuladoras (por ejemplo, CD40, CD80, CD86 y 4-1BB). Los APCs generalmente pueden ser transfectados con un polinucleótido que codifica la proteína de tumor (por ejemplo, MAGE-3, Her2/neu, o derivados del mismo) de modo que el polipéptido de tumor, o una porción inmunogénica del mismo se exprese en la superficie celular. Dicha transfección puede tener lugar ex vivo, y posteriormente se puede utilizar una composición o vacuna que comprende dichas células transfectadas para propósitos terapéuticos, tal como se describe en la presente invención. Como alternativa, se puede administrar a un paciente un vehículo de suministro de genes que dirige una célula dendrítica u otra célula que presenta antígenos, dando como resultado la transfeccíón que ocurre in vivo. La transfección in vivo y ex vivo de células dendríticas, por ejemplo, generalmente se pueden llevar a cabo utilizando cualesquiera método conocidos en la técnica tales como los que se describen en la publicación WO 97/244447, o el método de pistola genética descrito por Mahvi D. M. y asociados., Immunology and Cell Biology, 1997, 75:456-460. La carga de antígenos de células dendríticas se puede lograr incubando células dendríticas o células progenitoras con el polipéptido de tumor, ADN (descubierto dentro de un vector de plásmido) o ARN; o con bacterias o virus recombinantes que expresan antígenos (por ejemplo o vacunas, virus de aves de corral, adenovirus o vectores de lentivirus). Otros sistemas de suministro adecuados incluyen microesferas en donde el material antigénico se incorpora en, o se conjuga con polímeros/microesferas biodegradables de modo que el material antigénico puede ser mezclado con un vehículo farmacéutico adecuado y puede ser utilizado en la forma de una vacuna. El término "microesferas" se emplea generalmente para describir partículas coloidales que son sustancialmente esféricas y tienen un diámetro dentro del rango de 10 nm a 2 mm. Las microesferas elaboradas de un rango muy amplio de polímero naturales y sintéticos han encontrado uso en una variedad de aplicaciones biomédicas. Este sistema de suministro es especialmente conveniente para proteínas que tienen vidas medias cortas in vivo, que requieren múltiples tratamientos para proporcionar eficacia, o que son inestables en fluidos biológicos o no son completamente absorbidos del tracto gastrointestinal debido a sus pesos moleculares relativamente altos. Varios polímeros han sido descritos como una matriz para la liberación de proteína. Los polímeros adecuados incluyen gelatina, colágeno, alginatos, dextrano. Los sistemas de suministro pueden incluir poli(DL-ácido láctico) biodegradable (PLA), poli(láctido-co-glucólido) (PLG), poli(ácido glucólico) (PGA), poli(e-caprolactona) (PCL), y copolímeros poli(ácido DL-láctico-co-glucólico) (PLGA). Otros sistemas pueden incluir hidrogeles heterogéneos tales como multibloque de poli(éter éster) que contiene bloques de repetición con base en poli-(etilénglicol) hidrofílico (PEG) y poli(butileno tereftalato) hidrofóbico (PBT), o poli(etiqueno glicol)-tereftalato/poli(-butileno tereftalato) (PEGT/PBT) (Sohier y asociados., Eur. J. Pharm and Biopharm, 2003, 55, 221-228). Los sistemas que pueden proporcionar liberación sostenida durante 1 a 3 meses son PLGA, PLA y PEGT/PBT. El régimen de tratamiento se variará de manera significativa dependiendo del tamaño y especie del paciente respectivo, la cantidad de vacuna de ácido nucleico y/o composición de proteína administrada, la ruta de administración, la potencia y dosis de cualesquiera de los compuestos adyuvantes utilizados y otros factores que podrán ser apreciados por los expertos en la técnica. La presente invención se describirá en forma adicional haciendo referencia a los siguientes ejemplos no limitativos: Ejemplo I Preparación de vacuna utilizando composiciones inmunogénicas basadas en QS-21. I.1.- Preparación inmunogénica que contiene QS21 y 3 de lípido A de monofosforilo acilado-O- (3D-MPL) en una emulsión de aceite en agua (formulación AS02): Este sistema de adyuvante AS02, ha sido descrito previamente en la publicación WO95/17210. 3D-MPL: es un inmunoestimulante derivado de lipopolisacárido (LPS) de la bacteria Gram-negativa Salmonella minnesota. MPL ha sido desacilado y carece de un grupo de fosfato en la porción de lípido A. Este tratamiento químico reduce en forma dramática la toxicidad y al mismo tiempo conserva las propiedades inmunoestimulantes (Ribi, 1986). Ribi Inmunochemistry produce y suministra MPL a SB-Biologicals. Q S 21 : es una molécula de saponina natural extraída de la corteza del árbol de Molina saponaria Quillaja de América del Sur. Una técnica de purificación desarrollada para separar las saponinas individuales de los extractos crudos de la corteza, permitió el aislamiento de la saponina particular, QS21, la cual es un glucósido de triterpeno que demuestra actividad adyuvante más fuerte y menor toxicidad en comparación con el componente de origen. QS21 ha demostrado activar los CTLs restringidos por MHC clase I para diversas sub-unidades Ags, así como para estimular la proliferación linfocítica específica de Ag (Kensil, 1992). Aquila (formalmente Cambridge Biotech Corporation) produce y suministra QS21 a SB-Biologicals. La emulsión de aceite/agua está compuesta de una fase orgánica elaborada de 2 aceites (un tocoferol y un escualeno), y una fase acuosa de PBS que contiene Tween 80 como el emulsificante. La emulsión comprendió escualeno al 5%, tocoferol al 5%, Tween 80 al 0.4% y tuvo un tamaño partícula promedio de 180 nm y es conocido como SB62 (ver publicación WO95/17210). Preparación de emulsión SB62 (concentrado de 2 dobleces): Se disolvió Tween 80 en solución salina regulada por fosfato (PBS) para proporcionar una solución al 2% en el PBS. Para proporcionar 100ml de emulsión de concentrado de 2 dobleces 5g de tocoferol alfa DL y 5ml de escualeno se vortizaron para mezclarse profundamente. Se agregó una solución de 90ml de PBS/Tween y se mezcló profundamente. La emulsión resultante se pasó posteriormente a través de una jeringa y finalmente se micro-fluidizó utilizando una máquina de microfluidos M110S. Las gotas de aceite resultantes tienen un tamaño de aproximadamente 180 nm. Formulaciones: Se llevó a cabo una formulación típica que contiene 3D-MPL y QS21 en una emulsión de aceite/agua tal como se indica a continuación. Se diluyeron 20µg - 25µg C-LytA P2-P501S en un concentrado de 10 dobleces de PBS con pH 6.8 y H2O, antes de la adición consecutiva de SB62 (50µl), MPL, (20µg), QS21 (20µg), comprendiendo opcionalmente los oilgonucleótidos CpG (100µg) y 1µg/ml de tiomersal como conservador. La cantidad de cada componente puede variar según sea necesario. Todas las incubaciones se llevaron a cabo a una temperatura ambiente con agitación. I.2.- Preparación inmunogénica que contiene QS21 y CpG en una formulación liposomal (adyuvante AS15): Este sistema de adyuvante AS15 se ha descrito previamente en la publicación WO00/62800. AS15 es una combinación novedosa de los dos sistemas de adyuvante, AS01B y AS07A. AS01B está compuesto de liposomas que contienen 3D-MPL y QS21 y AS07A están compuestos de CpG 7909 (también conocido como CpG 2006) en solución salina regulada por fosfato.

QS-21 es tal como se describió anteriormente. CpG: CpG ODN 7909 es un oligodesoxi-nucleótido de fosforotioato de una solo hebra sintético (ODN) de 24 bases de longitud. Su secuencia base, la cual es 5'-TCGTCGTTTTG-TCGTTTTGTCGTT-3', ha sido optimizada para estimulación dei sistema inmune humano. El ADN CpG u ODN sintético que contiene motivos CpG, son conocidos por activar células dendríticas, monocitos y macrófagos que segregan citosinas tipo-TH1 y por inducir respuestas de célula T TH1 incluyendo la generación de células T citolíticas, estimular células NK que segregan IFNg e incrementar su actividad lítica, también activan células B para proliferación (Krieg A y asociados 1995 Nature 374: 546, Chu R y asociados 1997 J. Exp. Med. 186: 1623). CpG 7909 no es antisentido para cualquier secuencia conocida del genoma humano. CpG 7909 es un adyuvante propietario desarrollado por y producido a nombre de Coley Pharmaceutical Group, Inc. MA, US. Formulaciones con CpG: Las formulaciones se llevaron a cabo los días de las inyecciones. El volumen de inyección de un ratón fue 50 ó 100µl. Una formulación típica que contiene CpG, 3D-MPL y QS21 en liposomas se llevó a cabo tal como se indica a continuación: se diluyó 20µg-25µg de antígeno con H2O y PBS, pH 7.4 para isotonicidad. Después de 5 minutos, se mezcló QS21 (0.5 µg) con liposoma en una proporción de peso QS21/colesterol de 1/5 (referido como DQ) y se agregó a la formulación. 30 minutos después, se agregaron 10µg de CpG (ODN2006) 30 minutos antes de la adición de 1µg/ml de tiomersal como conservador. Todas las incubaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente con agitación. Ejemplo ll Efecto de mlL 18 en combinación con vacuna de proteínaD-E7 HPV16 adyuvantada con AS02 en el modelo terapéutico TC1 en ratones E7-Tg y en ratones sin E7-Tg: 11.1.- Diseño experimental. 7 grupos de 5 ratones hembra E7 Tg (C. Ledent y asociados PNAS (EUA) 1990, 87; 6176-6180) ó C57BI/6 sin Tg (lffa Credo) recibieron un estímulo de tumor de células TC1 10e6 (SC) en 200µl el día 0. Ratones transgénicos que expresan proteína E7 HPV16: La cepa de ratón transgénico ha sido generada por M. Parmentier y C. Ledent at the IRIBHN (ULB). (Ref: PNAS (EUA) 1990, 87; 6176-6180). Ya que los ratones transgénicos viven con el gen E7 HPV16 desde el nacimiento, son considerados como "tolerantes" para este gen: E7 de HPV16, en esta situación se considera como un "auto antígeno". La expresión del transgén es conducida por el promotor de tiroglobulina. Ya que la tiroglobulina se expresa en forma constitutiva únicamente en la tiroides, E7 se expresa en la tiroides. Como consecuencia de esta expresión, proliferan las células de tiroides, los ratones desarrollan bocio y nodulos que después de seis meses a un año pueden evolucionar en cáncer invasivo. Línea de célula de tumor TC1: Las células epiteliales de pulmón primario de ratones C57BL/6 fueron inmortalizadas mediante HPV 16 E6 y E7 y posteriormente fueron transformadas con un oncogén ras activado, produciendo una línea celular tumorígena que expresa E6 y E7 (Lin KY y asociados, 1995). La expresión de E7 ha sido verificada mediante análisis FACS de células TC1 fijas y permeabilizadas utilizando el Mab anti-HPV 16 E7 de ratón (Tritón Corp. Alameda, CA) Vacunas: Con 5µg de PD1/3E7 (lote PDE7 02/025) preparado tal como se describe en la publicación WO99/10375, adyuvantado en el QS21 que contiene el adyuvante AS02B (1/5° de una dosis humana (MPL20µg/ QS21 20µg/ SB62 50µl) se administró en forma intramuscular (IM) los días 7 y 14. IL18-mlL-18 de múrido (lote _SB-528775 lot MJG-288800-176 en 1 mg/ml) se administró S. C. En 10Oµl diariamente durante tres semanas (comenzando en el día 7)- II.2. Crecimiento de tumor in vivo: Las células TC1 que crecen en cultivo in vitro fueron tripsinizadas, lavadas dos veces en medio libre de suero y se inyectaron S. C. en el flanco derecho de los ratones. Para evaluar el tratamiento de los tumores establecidos, se inyectaron células TC1 en dosis de 1 x 10e6 células/ratón. Una y dos semanas después de la inyección de células de tumor, los ratones fueron vacunados IM con 5µg en 1 OOµl de His protD 1/3 E7 preparado tal como se describe en la publicación WO99/10375 y adyuvantado en el QS-21 que contiene el adyuvante AS02 ó con PBS solo. Se utilizaron 5 ratones en cada grupo. Grupos de ratones - gr1: PBS - gr2: PDE7 AS02B - gr3: PDE7 AS02B + 100µg mlL-18 - gr4: PDE7 AS02B + 1 µg mlL-18 - grd: PDE7 AS02B + 0.1µg mlL-18 - gr6: 1 µg mlL18 - gr7: 0.1 µg mlL18 Los ratones fueron monitoreados dos veces a la semana para crecimiento de tumor in vivo durante 5 semanas (hasta el día 35). Se analizó la serología (Ig tot e isotipos) en el día 35. La masa/grupo de tumor promedio (expresada en mm2 por cada grupo de 5 animales) se muestra en la figura 2 (ratones de control sin Tg) y en la figura 3 (ratones E7 Tg). La figura 2A muestra los resultados obtenidos con 1µg de IL-18 y la figura 2B muestra los resultados obtenidos con 100µg de IL-18. La figura 3A muestra los resultados obtenidos con 1µg de IL-18 y la figura 3B muestra los resultados obtenidos con 100µg de IL-18. La tabla 1 que se encuentra a continuación, resume el porcentaje de ratones que rechazaron completamente su tumor al momento de la vacuna en combinación o sin inyecciones repetidas de IL-18 y también muestra claramente el beneficio de combinar la vacuna y una alta dosis de IL18.

Tabla 1 II.3. Conclusión Los datos obtenidos en este experimento demuestran que: Existe un claro beneficio en la combinación de IL-18 con la vacuna E7 adyuvantada con QS21 que contiene AS02B en regresión de tumor tanto en ratones de control no transgénicos así como en ratones E7Tg. - Los únicos grupos de ratones que permanecieron libres de tumor después del estímulo, son los que recibieron tanto la vacuna como el IL 18. - El beneficio de la combinación también depende de la dosis. II.4. Serología-lecturas inmunológicas. La respuesta de anticuerpos y el perfil isotípico (en suero reunido) se midieron mediante Elisa utilizando PD1/3E7-16 (02/025) en la forma de un antígeno de recubrimiento tal como se describe a continuación. Se tomaron sueros individuales al mismo tiempo que se tomaron los órganos y se presentaron para ELlSAs indirectos. Se utilizaron 2µg/ml de proteína E7 purificada en la forma de antígeno recubierto. Después de la saturación en PBS 0.1% Tween 20 0.1% BSA 1 hora a 37°C, los sueros se diluyeron en serie (comenzando en 1/100) en el regulador de saturación y se incubaron 90 minutos a una temperatura de 37°C. Después de lavar en PBS Tween 20 0.1%, se utilizó Ig anti ratón de becerro biotinilado (1/5000) o anti sueros de subclase Ig anti ratón de becerro (total IgG, lgG1, lgG2a, lgG2b) (1/5000) como segundos anticuerpos, después de incubación durante 90 minutos a una temperatura de 37°C, se agregó estreptavidina acoplada a peroxidasa y se utilizó TMB (tetra-metilo-benzidina/peróxido) como el substrato. Después de 10 minutos, se detuvo la reacción con H2SO4 0.5 M y se determinó el O.D.450. La figura 4 muestra los resultados obtenidos con ratones de control sin Tg, aunque la figura 5 muestra los resultados obtenidos con ratones E7Tg. 11.5 Conclusión En ratones de control que reciben el IL-18 solo, no se detectaron anticuerpos específicos de E7 tal como se esperó. No se observó una diferencia importante en la respuesta Ig total en cualquier grupo. La adición de IL-18 tiende a mejorar el perfil isotípico TH1 especialmente en dosis altas en combinación con la vacuna. En ratones E7Tg parece haber una relación inversa entre la dosis de IL-18 y el nivel de anticuerpos para E7. No existe un impacto importante por la adición de IL-18 en el perfil isotípico. 11.6 Conclusión general. • IL-18 impacta por sí mismo el crecimiento de tumor TC1 en una forma dependiente de la dosis; • Hay un claro beneficio en el crecimiento de tumor TC1 por combinar la inyección especialmente cuando se combinan altas dosis de mlL-18 (100µg) con vacunación E7 + AS02B, en ratones tanto de control como E7Tg; • IL-18 afecta ligeramente la respuesta de anticuerpos inducida por vacunación (mejor perfil ¡sotípico TH1 en ratones de control y mejores tituladores en ratones E7Tg) Ejemplo lll Efecto de mlL18 en combinación con vacuna Her2/neu adyuvantada con AS15 en el modelo terapéutico TC1 Her2. 111.1. Designio experimental. Vacuna. La vacuna Her-2/neu es ECD-PhD y comprende todo el dominio extracelular (que comprende aminoácido 1-645) y una parte inmunogénica del dominio intracelular comprende el dominio de fosforilación. Dicha construcción de vacuna se describe en una publicación WO00/44899 y se denomina dHER2. La proteína dHER2 fue co-liofilizada con CpG, diluyendo el antígeno en una mezcla de H2O, sacarosa y NaH2PO4/K2HPO4. Después de 5 minutos, se agregó CpG ODN 7909 para obtener un volumen final que contiene 625µg/ml de Her2/neu, 1250 µg/ml de CpG, 3.15% de sacarosa y 5 mM PO4, pH 7, antes de secarse por congelación. El volumen final se liofilizó de acuerdo con un ciclo de 3 días. Para la formulación extemporánea, la pasta liofilizada que contiene CpG y el antígeno fueron suspendidos nuevamente con 625µl de diluyente AS01B que contiene 100µg/ml de MPL y DQ. Los animales fueron inyectados con 50 µl que contiene 25µg de Her2/neu, 50µg de CpG y 5 µg de MPL y DQ. Modelo de tumor gue expresa Her-2/neu El modelo de tumor utilizado en este experimento: TC1HER2 fue generado mediante transducción retroviral de las células TC1 (proporcionada por el doctor T. C. Wu John's Hopkins University Baltimore) con retrovirus recombinantes que codifican Her-2/neu). Los clones individuales han sido aislados, amplificados y se confirmó la estabilidad de Her-2/neu y la expresión MHC clase I mediante citometría de flujo. Grupos de ratones: 4 grupos de 5 ratones CB5F1 hembra han recibido en el día 0 un estímulo sub cutáneo (SC) con 2 x 10E6 de células TC1 Her2 c18 seguido de vacunación con cualesquiera de: - gr1 : PBS - gr2: inyección diaria de 100µg de mlL 18 (múrido) a partir del día 7 hasta el día 27 (SC) - gr3: 25µg de proteína dHER2 en AS15 los días 7 y 14 (IM) - gr4: la combinación de la vacuna y el mlL18. II.2. Crecimiento del tumor y mortalidad in vivo: Los resultados se muestran en la figura 6 y en la tabla Tabla 2: porcentaje de ratones que permanecieron libres de tumor, 27 días después del estímulo con tumor TC1HER2.

II.3. Conclusión Una estrategia de vacunación basada en el uso de una proteína HER-2/neu purificada recombinante (dHER2) formulada en un adyuvante (AS15) combinada con inyección repetida de IL-18 recombinante de múrido, proporcionó resultados mejorados en tumores establecidos previamente, que expresan el antígeno HER2/neu, en comparación con una estrategia de vacunación ya sea con la composición de vacunas o el IL-18 solo. La vacunación basada en el uso de proteína dHER recombinante formulada en el adyuvante AS15 había mostrado previamente proteger en forma muy eficiente a los ratones contra un estímulo con estas células de tumor que expresan el antígeno HER2/neu. Esta protección es específica del antígeno HER2/neu y está asociada con la inducción de memoria inmune a largo plazo. En este modelo terapéutico más estricto, en donde había tumores establecidos previamente, las vacunaciones han mostrado ser menos efectivas teniendo únicamente un impacto limitado en el crecimiento de tumor (no hubo ratones que rechazaran completamente los tumores en estas condiciones). Sin embargo sorprendentemente cuando ambos tratamientos se administraron en forma concomitante, se observó una sinergia y el 60% de los ratones permanecieron completamente libres de tumor, en tanto que el 40% únicamente desarrolló un tumor pequeño. En conclusión, hay un claro beneficio en combinar mlL-18 y las vacunas tal como se muestra en la tabla 2. Esto podría significar que tanto la inducción de respuesta de célula T específica de HER2/neu a través de la vacuna como la activación del sistema inmune mediante inyección repetida de IL-18 son cruciales para obtener la regresión del tumor. Ejemplo IV Efecto de mlL18 en combinación con vacuna MAGE-3 adyuvantada con ?? en el modo terapéutico Mage3 TC1. 111.1. Designio experimental Vacuna. Se ha generado un modelo de tumor que expresa el antígeno de tumor Mage3 (TC1 Mage3) mediante modificación genética de las células de origen TC1 mediante transfección clásica de un plásmido de ADN que codifica Mage3 (PcADN3 Mage3). Este modelo de tumor fue generado transfectando las células TC1 de origen (proporcionadas por el doctor T. C. Wu John's Hopkins University Baltimore) con un plásmido PcADN3 que codifica Mage3. La transfección ha sido llevada a cabo utilizando lipofectamina de acuerdo con la recomendación del proveedor del equipo (Gibco BRL Life Technologies, cat no 18324-012). Estas células son tumorígénas y el 100% de los ratones estimulados con 2x10e6 de células TC1 Mage3 desarrollaron un tumor. 4 grupos de 5 ratones C57BL/6 hembra recibirán en el día 0 un estímulo sub cutáneo (SC) con 2x10e6 de células TC1 Mage3 seguido de la vacunación con cualesquiera de - gr1: PBS - gr2: inyección diaria de 100µg de mlL 18 (múrido) del día 7 hasta el día 27 (SC) - gr3: 10µg de proteína Mage3 en AS15 los días 7 y 14 (IM) - gr4: la combinación de vacunas y mlL18. Se evaluó la capacidad de Mage3 en vacunación AS15, inyecciones IL18 y tratamiento combinado para inducir la regresión de tumor. El impacto de la vacunación y/o tratamiento 1L18 en el parámetro inmune, también fue medido (linfo-proliferación, producción de citosinas).

Claims

R E I V I DI C A C I O N E S 1. Un método para aumentar la respuesta inmune a un antígeno en un mamífero, en donde el método comprende administrar al mamífero una cantidad segura y efectiva de 1) un polipéptido IL-18 ó un fragmento o variante bioactivo del mismo, y 2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina.
2. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el antígeno o derivado inmunogénico del mismo, se deriva de un organismo seleccionado del siguiente grupo: virus de inmunodeficiencia humana VIH- , virus de herpes simple de humano, citomegalovirus, rotavirus, virus de Epstein Barr, virus de varicela Zoster, de virus de hepatitis tal como virus de hepatitis B, virus de hepatitis A, virus de hepatitis C y virus de hepatitis E, virus sincitial respiratorio, virus de parainfluenza, virus de sarampión, virus de paperas, virus de papiloma humano, flavivirus o virus de influenza, de Neisseria spp., Moraxelia spp, Bordetella spp., Mycobacterium spp., incluyendo M. tuberculosis; Escherichia spp, ¡ncluyendo E. coli enterotóxico; Salmonella spp,; Listeria spp.; Helicobacter spp.; Staphylococcus spp., ¡ncluyendo S. aureus, S. epidermidis; Borrelia spp,; Chlamydia spp., ¡ncluyendo C. trachomatis; C. pneumoniae; Plasmodium spp., incluyendo P. falciparum; Toxoplasma spp., Candida spp.
3. Un método para reducir la severidad de un cáncer en un paciente, en donde el método comprende administrar al paciente que necesita del mismo, una cantidad segura y efectiva de 1) un polipéptido IL-18 ó un fragmento o variante bioactivo del mismo, y 2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno asociado con tumor o un derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina.
4. Un método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el antígeno asociado con tumor o el derivado inmunogénico del mismo es seleccionado del grupo que comprende: un antígeno de la familia MAGE, PRAME, BAGE, LAGE 1, LAGE 2, SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, prosteína, P501S, HASH2, Cripto, B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, Prostase, STEAP, tirosinasa, telomerasa, survivina, CASB616, P53, ó Her2/neu.
5. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 4, caracterizado porque el polipéptido IL-18 ó el fragmento variante bioactivo del mismo, y la composición inmunogénica se administran en forma simultánea, por separado o en secuencias en cualquier orden.
6. Un método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la citosina TH-1 y la composición inmunogénica se administran en forma simultánea en la forma de una preparación farmacéutica combinada.
7. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 6, caracterizado porque el polipéptido IL-18 ó el fragmento ,o variante bioactivo del mismo, es de origen humano o de múrido.
8. Un método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque IL-18 es el polipéptido de la SEQ ID No. 6 ó de la SEQ ID No. 7 o el fragmento derivado bioactivo del mismo.
9. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 8, caracterizado porque el adyuvante de saponina es QS-21 ó QS-17.
10. Una preparación combinada que comprende en la forma de ingredientes activos los siguientes componentes individuales: (1) polipéptido IL-18 ó fragmento variante bioactivo del mismo y (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno y un adyuvante de saponina, siendo los ingredientes activos, para el uso simultáneo, por separado o en secuencias para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, cáncer, enfermedades autoinmunes y condiciones relacionadas.
11. Una preparación combinada de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque los componentes (1) y (2) se mezclan en adiciones en una composición.
12. Una preparación combinada de conformidad con las reivindicaciones 10 ó 11, caracterizada porque la composición inmunogénica comprende un antígeno asociado con tumor o un derivado inmunogénico del mismo y es profiláctica o terapéuticamente activo contra cáncer.
13. Una preparación combinada de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque el antígeno asociado con tumor o derivado inmunogénico del mismo se selecciona del grupo que comprende: un antígeno de la familia MAGE, PRAME, BAGE, LAGE 1 , LAGE 2 SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, prosteína, P501S, HASH2, Cripto, B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, Prostase, STEAP, » tirosinasa, telomerasa, survivina, CASB616, P53, ó Her2/neu.
14. Una preparación combinada de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 13, caracterizada porque el polipéptido IL-18 ó el fragmento variante bioactivo del mismo es de origen humano o de múrido.
15. Una preparación combinada de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque IL-18 es el polipéptido de la SEQ ID No.6 ó la SEQ ID No. 7 ó un fragmento derivado bioactivo del mismo.
16. Una preparación combinada de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 15, caracterizada porque el adyuvante de saponina es QS-21 ó QS-
17. 17. Una preparación combinada de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 16, caracterizada porque la composición inmunogénica comprende además un químico inmunoestimulante seleccionado del grupo que comprende: 3D-MPL, colesterol, oligonucleótido CpG que contiene al menos un dinucleótido CG inmuno-estimulador, hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, tocoferol y una emulsión de aceite en agua o una combinación de 2 ó más de dichos adyuvantes.
18. Una preparación combinada de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque el adyuvante de la composición inmunogénica comprende 3D-MPL, QS21, colesterol o una emulsión de aceite en agua.
19. Una preparación combinada de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada porque la emulsión de aceite en agua comprende escualeno, tocoferol y monooleato de polioxietilenosorbitano (Tween 80).
20. Una preparación combinada de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque la composición inmunogénica comprende QS21, colesterol y un oligonucleótido CpG que contiene al menos un dinucleótido CG inmuno-estimulador.
21. Una preparación combinada de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 20, caracterizada porque ambos componentes activos están en la forma soluciones inyectables.
22. Un equipo farmacéutico que comprende en la forma de ingredientes activos los siguientes componentes individuales: (1) un polipéptido IL-18 ó un fragmento bioactivo del mismo y (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, por separado o en secuencias para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, cáncer y enfermedades auto inmune.
23. Un equipo farmacéutico de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la composición inmunogénica comprende un antígeno asociado con tumor o un derivado inmunogénico del mismo, y es profiláctica o terapéuticamente activo contra cáncer.
24. Un equipo farmacéutico de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el antígeno asociado con tumor o derivado inmunogénico del mismo es seleccionado del grupo que comprende: un antígeno de la familia MAGE, PRAME, BAGE, LAGE 1, LAGE 2, SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, prosteína, P501S, HASH2, Cripto, B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, Prostase, STEAP, tirosinasa, telomerasa, survivina, CASB616, P53, o Her2/neu.
25. Una preparación combinada de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 20, para utilizarse en medicina.
26. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9, caracterizado porque comprende el uso de una preparación combinada de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 20.
27. El uso de un polipéptido IL-18 ó un fragmento o variante bioactivo del mismo en la fabricación de un medicamento para profilaxis y/o tratamiento de pacientes que padecen de o que son susceptibles a enfermedades infecciosas, cáncer, enfermedades autoinmunes y condiciones relacionadas, y que ya están imprimados con una composición inmunogénica que comprende un antígeno o derivado ¡nmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina.
28. El uso de una composición inmunogénica que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante de saponina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de pacientes que padecen de o que son susceptibles a enfermedades infecciosas, cáncer, enfermedades autoinmunes y condiciones relacionadas, y que ya están imprimadas con un polipéptido IL-18 ó fragmento o variante inmunogénico del mismo.
29. El uso de conformidad con las reivindicaciones 27 ó 28, caracterizado porque el antígeno es un antígeno asociado con tumor y el cáncer es seleccionado del grupo que comprende: cáncer de seno, cáncer de pulmón, NSCLC, cáncer de colon, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de vejiga, carcinoma escamoso de cabeza y cuello y cáncer de esófago.
30. El uso de conformidad con las reivindicaciones de la 27 a la 29, caracterizado porque el polipéptido IL-18 ó fragmento o variante bioactivo del mismo es de origen humano o de múrido.
31. El uso de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque IL-18 es el polipéptido de la SEQ ID No. 6 ó SEQ ID No. 7 ó el fragmento o derivado bioactivo del mismo.
32. El uso de conformidad con las reivindicaciones de la 27 a la 31, caracterizado porque el adyuvante de saponina es QS-21 ó QS-17. R E S U M E N La presente invención se refiere a una terapia de combinación que tiene utilidad en el tratamiento o profilaxis de enfermedades infecciosas, cánceres, enfermedades autoinmunes y condiciones relacionadas.